杜鹃[1]（2021）在《CD26阳性外泌体与急性肾损伤的关系及机制的研究》文中研究表明1 研究背景急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）是以肾滤过功能快速丧失为特点的临床综合征,表现为尿素氮、肌酐等代谢产物的蓄积和/或尿量的减少,其病理特点主要为急性肾小管坏死。研究发现住院患者的发生率约为2-21%,其在社区医院发病率约为2%,而在大型医院发病率可达20%,重症监护病房（Intensive care unit,ICU）的发病率可达50%以上。AKI导致死亡率增加,住院时间延长,以及慢性肾病（Chronic kidney disease,CKD）的发病率增加。总之,AKI给公共卫生及社会资源带来巨大的压力,成为严重的健康问题。传统与新发现的肾病生物学标志物,如血尿素氮、血肌酐、尿NGAL、KIM-1及TIMP2-IGFBP7乘积等,可协助进行AKI的预测和诊断。但它们都仅仅指向预测肾功能降低或肾损伤的发生,缺乏预测肾功能恢复的能力。患者肾损伤的持续时间及肾功能转归可显着影响患者远期预后,因此,早期预测、识别患者的恢复表型,及早干预,促进肾功能早期恢复、改变恢复表型,或能显着改善AKI患者的预后。在预测肾功能恢复的生物学标志物方面,存在较大空白。目前临床亟需理想的生物标志物预测AKI肾功能的转归。外泌体是由细胞分泌的直径为30-150nm的微小囊泡,其中包含完整的膜蛋白（尤其是糖蛋白）、外周膜蛋白、胞质、核蛋白以及细胞内组分,如miRNA,mRNA和代谢产物。同时外泌体通过受体与配体的相互作用,与靶细胞膜的附着/融合或被受体细胞内化,来进行细胞间通讯以及蛋白质和核酸的细胞间交换,从而发挥细胞间信使的作用,参与增殖、凋亡、免疫、凝血等多种生理及病理过程。尿液外泌体主要起源于肾单位管腔和泌尿道内衬的细胞,循环外泌体难以穿过肾小球滤过膜。多项研究发现,尿液外泌体RNA,miRNA和蛋白质可以较尿液其他生化成分更早的反映肾脏疾病中基因表达的变化。尿液外泌体有望成为一种有效且非侵入性的肾脏疾病生物标记物。同时,临床前研究提示外源性外泌体可减轻AKI肾脏损伤,促进修复,提示外泌体可能直接参与肾脏损伤与修复过程。因此,较其他尿液中的分子,外泌体更及时、更直接地体现肾脏细胞的病理生理状态,在预测预后方面更具有优势。CD26,又称为二肽基肽酶 Ⅳ（Dipeptidyl-peptidase 4,DPP4）,是广泛表达于多种细胞表面的一种糖蛋白,可以裂解多种底物的N端二肽基,包括神经肽、肽激素、血管活性肽、趋化因子以及一些生长因子和细胞因子。另外CD26是多功能蛋白,除蛋白水解作用外,以多种方式发挥多种促增殖、免疫和炎症调节等作用。但CD26在AKI中的作用仍待阐明。最近的一项蛋白组学研究发现,与其他尿液及血清蛋白相比,尿CD26在AKI后发生显着变化,推荐尿CD26,尤其尿细胞外囊泡的CD26,为AKI候选生物标志物,值得进一步研究。多项尿液外泌体的组学研究也发现尿液外泌体富含CD26,主要由CD26表达极为丰富的远端肾小管上皮细胞及其他肾脏细胞所释放。尿液中外泌体结合CD26较尿液游离CD26更具有肾脏特异性,且已证实与外泌体结合是尿CD26的主要存在形式,因此,尿外泌体CD26可能对肾功能转归的预测更具有优势。综上,与AKI的早期预测相比,预测肾功能转归的生物标志物仍有较大空白,为临床所亟需。尿外泌体有可能成为新的肾损伤、肾功能转归预测的生物标志物,尿外泌体CD26能否作为AKI的预后标志物有待进一步研究。2目的（1）比较重症AKI患者与重症非AKI患者之间尿外泌体CD26水平的变化,探索尿外泌体CD26是否与AKI相关;（2）探讨尿外泌体CD26是否与AKI分期相关;（3）探讨尿外泌体CD26是否与90天内主要肾脏不良事件相关;（4）（4）探讨尿外泌体CD26是否与AKI肾功能恢复相关;（5）探讨尿外泌体CD26对AKI肾脏功能恢复的预测价值。3方法3.1研究设计该研究为单中心前瞻队列观察性研究。我们同时也收取了入住ICU的非AKI患者作为对照,首先比较两组间尿外泌体CD26表达的差异,以探讨尿外泌体CD26表达与AKI发生是否相关,并通过多元线性回归分析各临床因素对尿外泌体CD26表达有无影响。在AKI患者中按CD26+尿外泌体比率分为CD26高表达和低表达组,首先通过双向比较研究尿外泌体CD26与AKI分期、住院死亡率的关系,继而用生存分析的方法比较尿外泌体CD26表达的高/低与90天内主要肾脏不良事件（MAKE）的关系。其中MAKE包含3个成分,即死亡、接受肾脏替代治疗及肾功能持续恶化,对3个终点和组合终点分别进行分析及检验。应用同样的方法分析尿外泌体CD26表达水平与28天内肾功能恢复的关系,并进一步应用Cox回归分析进行多因素分析;进而在AKI存活者中对3个肾功能恢复终点（早期肾功能恢复、出院肾功能恢复及院内肾功能恢复）进行分析,通过单因素和多因素分析验证尿外泌体CD26与早期肾功能恢复、出院肾功能恢复和院内肾功能恢复之间的关系。最后,在AKI存活者中检验尿外泌体CD26对早期肾功能恢复,出院肾功能恢复和院内肾功能恢复的预测价值,并进行亚组分析。3.2研究对象研究连续纳入2017年1月至2018年1月入住山东大学齐鲁医院ICU,符合AKI诊断的成年患者,构成研究队列。AKI的诊断按照2012 KIDIGO指南推荐的诊断标准。排除标准为:（1）无尿;（2）严重的尿路感染;（3）泌尿系结石或肿瘤;（4）既往应用CD26/DPP4抑制剂;（5）患者或法定代表人拒绝。对照组的患者通过连续筛查2017年1月-2017年3月入住ICU的不符合AKI诊断标准的成年重症患者。排除标准同AKI组。入选患者均按照2012 KIDIGO指南的推荐进行治疗。3.3临床资料的采集采集患者的一般情况,包括:性别,年龄,身高、体重;采集患者的慢性病史及急性合并症;采集患者用药史;生命体征;采集入住ICU 24h内的Scr、尿量,及血常规、血生化、肝功能等数值。计算入住ICU第一天的APACHEII评分及非肾脏APACHE II。3.4临床终点的定义及随访本研究定义的主要终点是90天主要肾脏不良事件（MAKE）,包含:死亡、接受肾脏替代治疗（RRT）和持续肾功能恶化（较入组时肌酐≥200%）。次要终点为肾功能恢复。肾功能恢复的定义为不再符合AKI和CKD的任何一条诊断标准。肾功能恢复终点包含:早期肾功能恢复（7天内）,出院肾功能恢复（出院时处于肾功能恢复状态）和院内肾功能恢复（住院期间发生过肾功能恢复）。随访患者至90天,随访其存活与否,有无接受肾脏替代治疗（RRT）及肌酐数值等。若发生以上事件,记录事件发生的时间,以进行分析。3.5标本采集及保存入组患者在入住ICU的24小时内留取新鲜尿液15ml。常温下,以300g转速离心10min,弃沉渣,取上清,放入-80℃冰箱备用。3.6外泌体分离纯化通过差速超速离心法对尿液标本中的外泌体进行分离和纯化。3.7电镜观察外泌体显微结构样品前处理后,透射电镜观察AKI患者尿液外泌体的超微表征。3.8检测外泌体特征性蛋白利用Western blot及流式细胞术检测外泌体特征性蛋白。3.9乳胶微球辅助的流式细胞术检测尿液外泌体中CD26醛/硫酸盐乳胶微球吸附分离提纯的尿液外泌体,荧光素标记的流式抗体孵育结合的乳胶微球,流式细胞仪检测CD26阳性的尿液外泌体的阳性率。3.10统计学方法对采集的临床资料及检验数据,连续变量用中位数及四分位间距描述,分类变量的描述为病例数（n）和百分比（%）。对于连续变量,采用Student’s t-test检验用于呈正态分布的数据比较,Mann-Whitney检验和Kolmogorov-Smirnov检验用于呈非正态分布的数据比较。对于分类变量,用Pearson’s chi-squared检验进行数据间的比较。首先对AKI组和对照组间进行CD26+尿外泌体比率进行比较,探讨在AKI发生时尿外泌体CD26表达是否发生改变。进而纳入所有患者,以CD26+尿外泌体比率为因变量,纳入临床因素为自变量,进行相关及多元线性回归分析,来除外各临床因素对尿外泌体CD26表达的影响。为研究尿外泌体CD26与90天内MAKE及28天内肾功能恢复间的关系,我们应用类似生存分析KM曲线的方法,并对28天内肾功能恢复应用Cox进行多元回归分析,探讨其独立影响因素。在AKI存活者中进行双向比较,按临床终点分类（早期肾功能恢复/早期肾功能未恢复,出院肾功能恢复/出院肾功能未恢复,院内肾功能恢复/无院内肾功能恢复）,比较两个结局间CD26+尿外泌体比率;分别应用单因素和多因素的方法研究尿外泌体CD26与三个AKI肾功能恢复终点（早期肾功能恢复、出院肾功能恢复、院内肾功能恢复）的关系。单因素分析将尿外泌体CD26表达水平与三个肾功能恢复终点分别进行单因素chi-squared检验,多因素分析分别以三个肾功能恢复终点为因变量,自变量纳入尿外泌体CD26表达水平和各临床因素进行多元Logistic回归分析。最后进行敏感性分析,在AKI存活者中,通过制作ROC曲线,研究尿外泌体CD26对三个肾功能恢复终点的预测能力,并分亚组进行分析。以上分析,生存分析和ROC曲线应用GraphPad Prism 8进行分析,余统计过程均应用SPSS 17.0进行。4 结果4.1研究对象纳入研究对象为山东大学齐鲁医院重症医学科住院的成年患者,共入组AKI队列133人,非AKI对照组68人。4.2提取的外泌体形态与大小应用透射电镜和动态光散射测量结果显示提取的尿液外泌体形态与大小符合文献报道的经典外泌体特征,不含细胞碎片、微粒等其他细胞成分,可以用于下一步检测。4.3提取的外泌体生物标志物Western blot与流式细胞检测术显示 CD63,CD81,GRP94,Calnexin,CD61以及TSG101在所提取的外泌体中表达丰富。4.4 AKI队列与对照组临床特征及尿外泌体CD26的比较基线特征进行比较:两组间年龄、性别、非肾脏APACHEII评分匹配。AKI组住院死亡率显着增高。两组间住院时间和住ICU时间相比较,均无明显差异。AKI组CD26+尿外泌体比率显着低于对照组,6.4%（1.2%-22.0%）vs.23.9%,（6.6%-64.5%）;p<0.001。4.5尿外泌体CD26与临床指标的相关性分析CD26+尿外泌体比率与非肾脏APACHE II评分、糖尿病、慢性肾病（CKD）及AKI呈负相关,与外科术后呈正相关,与余临床指标不相关。多元线性相关分析显示,仅AKI与CD26+尿外泌体比率独立相关adjusted β=-15.95（-23.60,-8.29）,p<0.001。4.6尿外泌体CD26表达高/低两组间临床特点的比较以中位数为界值,定义CD26+尿外泌体比率≥6.4%为尿外泌体CD26高表达（n=67）,CD26+尿外泌体比率<6.4%为尿外泌体CD26低表达（n=66）。尿外泌体高表达和低表达组之间进行临床特点的比较,显示两组间年龄、性别、APACHEII评分及非肾脏APACHE II评分相匹配。比较两组间住院时间、住ICU时间及住院死亡率无显着性差异。高表达组院内接受RRT比率显着低表达组（p=0.016）,早期肾功能恢复、院内肾功能恢复显着高于低表达组（p<0.05）,而出院肾功能恢复率无显着性差异。4.7尿外泌体CD26表达与AKI分期之间的关系尿外泌体CD26表达高/低两组间比较AKI 3个分期的构成,结果显示无统计学差异（p=0.084）。将CD26+尿外泌体比率作为连续变量,在AKI 3个分期间进行比较,两两比较各组无差异。因此,尿外泌体CD26与AKI的分期无显着性关系。提示,尿外泌体CD26表达与肾损伤的严重程度无关。4.8尿外泌体CD26表达与AKI患者预后的关系4.8.1尿外泌体CD26与MAKE 90的关系针对复合终点MAKE的组成成分逐一进行分析。为分析尿外泌体CD26与死亡终点的关系,首先在出院存活与死亡患者间比较CD26+尿外泌体比率无显着性差异。尿外泌体CD26表达高/低两组间比较住院死亡率无显着差异。最后在高表达组和低表达组间比较90天死亡率,Kaplan-Meier分析显示CD26高表达组与CD26低表达组90天死亡率无显着差异（p=0.907）。以上结果提示,尿外泌体CD26与近期死亡无关。对MAKE的另一成分——接受RRT治疗,与尿外泌体CD26的关系进行分析。CD26高表达组较低表达组院内应用RRT的比率显着降低（p=0.016）。KM分析显示,CD26高表达组90天内接受RRT比率显着低于低水平组（p=0.013）。提示,CD26高表达预示90天内RRT应用风险较低。对MAKE的最后一个成分——持续肾功能恶化进行分析。KM分析显示,90天内持续肾功能恶化在两组间无统计学差异（p=0.717）。对复合终点MAKE进行分析,CD26高表达组90天内MAKE的发生率显着低于CD26低表达组,具有统计学差异（p=0.018）,主要是RRT应用这一结局的影响。提示,尿外泌体CD26高表达预示近期内MAKE发生风险较低,较好的肾脏相关预后。4.8.2尿外泌体CD26与肾功能恢复的关系4.8.2.1尿外泌体CD26与28天内肾功能恢复的关系Kaplan-Meier分析比较AKI患者尿外泌体CD26高/低表达组间28天内肾功能恢复发生率,结果显示高表达组28天内肾恢复率显着高于CD26低表达组（p<0.001）。进一步的多因素Cox回归分析,尿外泌体CD26 表达水平进入方程（HR,1.90;95%CI,1.15-3.14;p=0.012）。结果提示,尿外泌体CD26高表达可能促进AKI肾功能恢复。4.8.2.2 AKI存活者中尿外泌体CD26与肾功能恢复终点的关系AKI组81名存活者,依据3个肾功能结局进行分组,分别为早期肾功能恢复组/早期肾功能未恢复组、出院肾功能恢复组/出院肾功能未恢复组、院内恢复组/院内肾功能未恢复组,分别比较3组CD26+尿外泌体比率,显示各良好结局组CD26+尿外泌体比率均显着高于不良结局组（p<0.05）。在CD26表达高/低两组间比较肾功能早期恢复的差异,高表达组29（72.5%）例患者早期恢复,而低表达组仅有15（3 6.6%）例患者早期恢复,卡方检验显示两组间早期肾功能恢复存在显着差异（OR=4.57,p=0.001）。逐步多元Logistic回归分析显示,早期肾功能恢复与AKI分期及尿外泌体CD26表达水平独立相关（OR=4.67,p=0.007）。结果提示,尿外泌体CD26高表达可能是促进早期肾功能恢复的因素。在CD26高/低表达两组间比较肾功能出院恢复的差异,高表达组34（85.0%）名患者出院恢复,而低表达组有23（56.1%）名患者出院恢复,卡方检验显示两组间出院肾功能恢复存在显着差异（OR=4.44,p=0.004）。以出院肾功能恢复为因变量,进行逐步多元Logistic回归分析,显示心血管事件、AKI分期和尿外泌体CD26表达水平（OR=3.50,p=0.039）进入方程。结果提示,尿外泌体CD26高表达可能是促进出院肾功能恢复的因素。在CD26表达高/低两组间比较院内肾功能恢复,高表达组35（87.5%）例患者院内肾功能恢复,低表达组有23（56.1%）例患者在院期间肾功能恢复,存在显着差异（OR=5.48,p=0.002）。以院内肾功能恢复为因变量,进行逐步多元Logistic回归分析,显示心血管事件、AKI分期以及CD26表达水平（OR=4.66,p=0.019）进入方程。结果提示,尿外泌体CD26高表达可能促进院内肾功能恢复。4.8.3尿外泌体CD26对肾功能恢复终点的预测价值CD26+尿外泌体比率在AKI存活者中分别预测早期肾功能恢复、出院肾功能恢复及院内肾功能恢复,经ROC方法检测仅对早期肾功能恢复的预测具有统计学意义,曲线下面积（AUROC）为0.65（0.53-0.77）,p=0.021。对于出院肾功能恢复和院内肾功能恢复的预测不能达到统计学意义。利用预测早期肾功能恢复的ROC曲线选取曲线上最佳截断值,为6.8%。利用该值计算尿外泌体CD26对3个肾功能恢复终点的预测能力,显示其对出院肾功能恢复和院内肾功能恢复有较高的特异性和阳性预测值。分析显示,大于此截断值的患者其中90%的患者将在院期间发生肾功能恢复。提示,尿外泌体CD26对肾功能转归的预测具有一定的临床应用价值。进一步在亚组中检测尿外泌体对3个肾功能恢复终点的预测能力。因为脓毒症是AKI最重要的病因,按是否合并脓毒症分类后,显示在非脓毒症相关AKI的患者中尿外泌体CD26的预测价值显着提高,预测早期肾功能恢复:AUROC=0.71,p=0.046;预测出院肾功能恢复:AUROC=0.79,p=0.009;预测院内肾功能恢复:AUROC=0.83,p=0.003。提示,在非脓毒症相关AKI患者,尿外泌体CD26对肾功能恢复有较强的预测价值,值得进一步研究。5结论（1）尿外泌体CD26表达的降低与重症患者AKI的发生相关,但尿外泌体CD26表达水平与AKI肾损伤的严重程度不相关;（2）尿外泌体CD26与近期死亡率不相关,但尿外泌体CD26与90天内主要肾脏不良事件发生率相关,尿外泌体CD26高表达预示着较低的90天内主要肾脏不良事件发生风险;（3）尿外泌体CD26与肾功能恢复独立相关,尿外泌体CD26高表达可预测AKI早期肾功能恢复、出院肾功能恢复及院内肾功能恢复。利用尿外泌体CD26早期预测肾功能转归,实现个体化精准治疗,以期能改善患者的长期预后。1 研究背景急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是住院患者尤其重症患者的严重并发症,除导致住院死亡率显着升高外,会导致长期死亡率升高和慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）及终末期肾病的发病率增加,造成沉重的疾病负担。目前对于AKI尚无有效的预防或治疗措施,仍为支持治疗。外泌体是一种细胞外囊泡,广泛存在于各种体液中。其脂质双分子层携带来源细胞的蛋白及核酸的结构使其作为一种细胞间信使,通过与受体细胞结合,广泛参与各种生理及病理过程的调节。外泌体作为疾病诊断和预后标志物越来越受到重视,已发现数种外泌体蛋白及RNAs与AKI有关。晚近的几项研究发现,外源性的外泌体可减轻AKI肾脏损伤,促进肾功能恢复,但其作用机制及关键分子尚不清楚。论文I的研究发现,与对照组相比,AKI患者尿外泌体CD26表达显着降低;而AKI患者队列内部,尿外泌体CD26高表达组比低表达组有更高的出院肾功能恢复率;经过校正性别、年龄、慢性合并症、急性病因、危重程度、AKI分期之后,尿外泌体CD26与早期肾功能恢复、出院肾功能恢复等肾脏预后仍有独立的关联。因肾小球滤过膜的存在,尿外泌体较少来自于循环,肾脏细胞是尿外泌体的主要来源。由此我们推断表达CD26的肾脏细胞来源的外泌体可能有减轻肾脏损伤、促进肾脏修复的功能。CD26是细胞表面的跨膜糖蛋白,通常也被称作Dipeptidyl peptidase-4（DPP4）。其具备丝氨酸蛋白酶活性,广泛表达于多种类型的细胞中,在肾脏其表达于肾小球足细胞的基底膜,并高度表达于远端肾小管上皮细胞（TEC）的刷状缘微绒毛。研究发现CD26与细胞增殖、炎症调节等过程相关。TEC的再生是AKI修复的主要环节,研究发现CD26有促进细胞增殖的作用。并且CD26参与炎症反应的调节,其底物包含一些系列趋化性细胞因子。AKI主要病理过程发生于TEC,尤其远端TEC的损伤、坏死或凋亡,进而炎症细胞浸润、间质炎症反应的发生。肾脏修复主要过程为TEC的增生,替代丧失的TEC、修复肾小管上皮组织,炎症反应参与调控这一过程。良好的增生和调控,导致完全的修复和肾功能的恢复;反之则导致纤维化的加重,最终导致CKD。因此,我们假设CD26+外泌体可能通过促进TEC增生,抑制炎症反应,减轻纤维化,减轻肾损伤、促进肾脏修复。由此,我们拟通过体外培养小鼠肾小管上皮细胞系TCMK1,通过体外模拟AKI的主要致病过程缺血再灌注（ischemia/reperfusion injury,IR）,获取培养基上清中的生理外泌体（ExoNormal）,IR程序获取ExoIR,探索生理与IR条件下尿液中CD26的表达。过表达CD26腺病毒载转染TCMK1,构建TEC来源的CD267过表达的外泌体（ExoCD26）;利用手术构建IR相关的AKI小鼠动物模型,进一步利用外泌体进行干预,通过与对照组在肾脏功能、组织病理及增生、炎症等指标对照间的比较,探讨CD26+外泌体对AKI肾脏修复的影响,及其可能的机制。2 目的（1）体外实验中探讨缺血再灌注对肾小管上皮细胞（TEC）外泌体中CD26表达的影响;（2）利用CD26过表达的腺病毒载体转染肾小管上皮细胞,构建CD26过表达的TEC外泌体;（3）IR-AKI动物体内,示踪TEC外泌体能否被肾脏细胞摄取;（4）通过体内实验,探讨CD26过表达外泌体能否减轻肾损伤、促进肾脏修复,并探讨其可能的机制。3方法3.1细胞培养及病毒转染TCMKI细胞分别常规培养及缺血缺氧程序培养,两种培养条件下的细胞均按标准程序转染CD26过表达腺病毒与空载体。留取细胞培养基上清。3.2外泌体分离纯化及表达鉴定用超速差速离心法提取TCMK-1小鼠肾小管细胞上清中的外泌体。分别对常规培养细胞释放的外泌体ExoNormal,缺氧培养细胞释放的外泌体ExoIR,正常培养条件下CD26转染后细胞释放外泌体ExoCD26,及缺氧培养并转染的细胞释放的外泌体ExoIR+CD26,分别进行CD26表达的检测。外泌体与抗CD26抗体和荧光素结合的二抗充分反应后,加入流式细胞分析。3.3 AKI（IR）动物模型的建立C57BI/6雄性成年小鼠（8周）,戊巴比妥麻醉后,显微镜下,一侧肾蒂紧密结扎后,将肾脏切除;对侧肾动脉用动脉夹夹闭,观察肾脏变色,呈缺血改变,覆盖湿润纱布,夹闭30分钟。3.4外泌体的体内示踪避光条件下操作,使用PKH26标记外泌体,经尾静脉注入IR小鼠体内;分别于注射15分钟、2小时及12小时在麻醉下取肾脏组织;OCT包埋组织块,制成冰冻切片;切片经双蒸水水化、PBS清洗后,应用BSA终止反应;加入AQP1一抗,4度湿盒孵育过夜后,PBS清洗,加入荧光素偶联的AQP1二抗,37℃孵育30分钟,PBS清洗,DAPI染色、封片,即刻荧光显微镜下观察。3.5 IR小鼠干预措施及分组分为对照组,IR+BSA 组,IR+ExoNormal 组,1IR+ExoIR组,IR+ExoCD26组,每组各10只;对照组不做肾脏处理,余操作同IR手术各组;IR各组于手术后12h分别经尾静脉注入等蛋白质量的BSA,ExoNormal,ExoIR及ExoCD26进行干预。3.6 肾功能指标检测干预后72h,取血样。各血样离心后,保存血清。分别应用尿素氮和肌酐试剂盒进行检测,以得出尿素氮和肌酐的浓度数值。3.7 肾脏组织病理学检测干预后72h,进行肾脏取材。各肾脏组织分别进行HE染色和PAS染色,显示肾小管上皮损伤情况,并用半定量的方法,在各组间进行比较。3.8 肾脏增殖指标的检测免疫荧光技术检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）在各组肾脏的表达;Western blot的方法检测p21和p53在肾脏的表达。3.9 肾脏炎症指标的检测免疫荧光技术分别应用抗MOMA2抗体、抗neutrophil抗体及抗CXCR4抗体显示巨噬细胞、中性粒细胞在肾脏的浸润和趋化性细胞受体CXCR4在肾脏的表达。并应用Western blot的方法检测趋化性细胞因子SDF-1（CXCR4的配体）在肾脏的分布。3.10肾脏纤维化指标的检测Western blot的方法测定1型胶原在各组肾脏中的表达。4 结果4.1 外泌体鉴定电镜下可见纯化成分为双凹圆盘状的高电子密度囊泡,大多直径位于30-150nm;使用动态光散射技术检测微粒的粒径大小,结果提示分离纯化的囊泡直径呈单峰分布,平均直径在30-100nm左右。结果提示,使用经典的超速差速离心方法获得的为典型的外泌体囊泡,可用于下一步功能试验。4.2外泌体中CD26表达分析流式细胞分析显示,生理条件下TCMK-1细胞培养液上清中分离纯化的外泌体ExoNormal中CD26表达量较少,经过IR程序的TCMK-1细胞上清外泌体ExoIR中CD26表达轻度增加。分别向TCMK-1细胞系（常规条件培养）转染空载体病毒Vector和过表达CD26的病毒（VirusCD2）。病毒转染后,细胞系培养液上清分离纯化外泌体,流式测得该外泌体高度表达CD26,阳性率大于70%,即ExoCD26。同样方法转染缺氧条件下培养的TCMK-1细胞系,从细胞培养液上清采集的外泌体（ExoIR+CD26）,也高度表达CD26,与ExoCD26相似。各组外泌体进行western blot检测,显示ExoNormal对CD26的表达均少,ExoIR对CD26的表达较ExoNormal轻度增加;常规培养的细胞系转染VirusCD26后释放的外泌体（ExoCD26）对CD26表达显着增加;缺氧条件下培养的细胞系,转染VirusCD26后,其外泌体（ExoIR+CD26）对CD26的表达也显着增加,与ExoCD26无明显差异。4.3 AKI动物模型的鉴定经过一侧肾动脉钳夹,对侧肾脏切除,72h后小鼠血尿素氮、肌酐显着升高,肾脏组织出现IR病理学改变,证实AKI造模成功。4.4动物体内外泌体示踪PKH26标记的外泌体通过尾静脉注入IR小鼠体内,2h后取材,制冰冻切片,荧光标记AQP1。显示肾小管上皮细胞内可见外泌体荧光标记,肾脏其他类型细胞内未见外泌体荧光标记。提示,肾小管上皮细胞（TEC）来源的外泌体选择性的被TEC所摄取。4.5外泌体对肾脏功能指标的影响IR小鼠血清尿素尿素氮及肌酐水平显着增高:与BSA相比,ExoNormal及ExoIR对肾功能指标无影响,而ExoCD26显着降低了血清尿素氮和肌酐水平。4.6外泌体对肾脏组织损伤的影响HE染色及PAS染色显示,IR小鼠肾脏出现明显损伤,包含肾小管扩张,刷状缘缺失,肾小管上皮细胞的坏死,管型的形成等;与BSA相比,ExoNomal及ExoIR未能减轻肾脏损伤,而ExoCD26显着降低了肾损伤评分和损伤肾小管分数,减轻了肾脏组织损伤。4.7外泌体对TECs增生的影响免疫荧光染色示,IR小鼠肾脏增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）显着降低;与 BSA 相比,ExoNormal 及 ExoIR 未能增加PCNA的表达,而ExoCD26显着增加了 PCNA的表达,PCNA沿肾小管分布。此外,IR小鼠肾脏p21和p53表达显着升高,提示细胞分裂增生的阻滞;与BSA相比,ExoNormal及ExoIR未能降低p21和p53的表达,但ExoCD26显着降低了两者的表达。以上结果提示,ExoCD26促进了 TECs细胞的增生。4.8外泌体对肾脏炎症反应的影响免疫荧光显示,IR肾脏中性粒细胞、巨噬细胞浸润显着增加;与BSA相比,ExoNormal及ExoIR未能显着降低中性粒细胞和巨噬细胞的浸润,而ExoCD26显着降低了两种炎症细胞的浸润。同时,Western blot和免疫荧光结果显示,SDF-1和CXCR4这一对趋化因子及受体在IR肾脏表达显着增加;与BSA相比,ExoNormal及ExoIR未能明显改变其表达,但ExoCD26显着降低了两者表达。提示,ExoCD26能降低趋化性细胞因子及受体的表达,并改善炎症细胞的浸润。4.9外泌体对肾脏纤维化的影响Western blot结果显示,IR肾脏1型胶原表达显着增加;与BSA相比,ExoNormal及ExoIR未能显着改变其表达,而ExoCD26显着降低了 1型胶原表达。提示,ExoCD26抑制早期肾纤维化。5.结论（1）缺血再灌注使肾小管上皮细胞系来源的外泌体CD26的表达增加;（2）肾小管上皮细胞系来源的外泌体在IR-AKI小鼠动物模型体内,可被TEC摄取;（3）ExoCD26可改善AKI小鼠肾脏功能指标,减轻肾脏损伤,其可能的机制是ExoCD26被TEC摄取后,促进TEC增殖,减轻肾脏炎症反应和纤维化,从而促进肾脏的修复。
徐云[2]（2021）在《成人公民逝世后急性肾损伤供者肾移植的疗效研究》文中认为目的:通过研究成人公民逝世后急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）供体肾移植的临床疗效,并比较肾功能正常与AKI供肾移植术后受者/移植肾存活率影响,讨论AKI供肾临床应用价值。方法:本研究回顾性分析了中国人民解放军联勤保障部队第923医院器官移植中心2017年1月至2019年12月期间所有符合纳入、排除标准行肾移植手术供受者的临床资料:肾功能正常供肾移植术共计298例、AKI供肾移植术共计195例。AKI供肾移植受者组拟定为AKI组、将肾功能正常供肾移植受者组拟定为non-AKI组。比较两组受者术后1年内移植肾功能恢复情况、各种并发症的发生率,对移植肾功能延迟恢复（delayed graft function,DGF）独立危险因素进行单因素及多因素分析,并分析移植术后4年内受者/移植肾存活率。结果:1.non-AKI组与AKI组受者术后1年血清肌酐恢复良好,non-AKI组肌酐稳定在（142.10±27.54）μmol/L,AKI供肾组肌酐均值稳定在（133.83±86.80）μmol/L,比较两组之间无显着性差异（P=0.2）。2.non-AKI组受者移植术后1年内急性排斥反应（acute rejection,AR）的发病率为14.77%,AKI组受者为22.56%,P=0.03,比较两组间AR发病率有显着性差异;non-AKI组术后1周内DGF发生率14.13%,AKI供肾组29.23%,P=0.000,两组受者DGF发病率有显着性差异;两组间其它并发症比较均无显着性差异（P>0.05）。3.DGF独立危险因素（供者方面）:AKI（OR:2.69、95%CI:2.51-2.88、P=0.000）、热缺血时间（OR:1.53、95%CI:1.43-1.64、P=0.000）、供肾获取前血肌酐（OR:1.01、95%CI:1.001-1.014、P=0.02）、冷缺血时间（OR:0.95、95%CI:0.93-0.98,P=0.000）;DGF独立危险因素（受者方面）:糖尿病（OR:0.59、95%CI:0.52-0.67,P=0.000）、体质指数（OR:1.05、95%CI:1.03-1.06、P=0.000）。4.non-AKI组受者与AKI组受者肾移植术后4年受者存活率无显着性差异（P=0.385）,而non-AKI组存活率（91.27%）比较AKI组移植肾存活率（87.69%）,有显着性差异（P=0.019）。结论:1.相对non-AKI受者,AKI受者移植后术后1月内Scr下降幅度小,多尿期尿量恢复较慢,但术后1年肾功能恢复良好。AKI组受者移植术后DGF、AR发病率高于non-AKI组,其它并发症发病率无明显差异,说明两组供肾移植术后近期临床疗效相似。2.发生DGF独立危险因素:AKI供肾、热缺血时间、冷缺血时间、获取供肾前的Scr水平;受者的体质指数、糖尿病。3.虽然AKI组移植肾4年期存活率略低于non-AKI组,经仔细评估后,AKI供肾可作为肾移植重要的器官来源,缓解器官短缺。
胡树菁[3]（2021）在《肺移植受者出院计划方案的构建》文中指出目的:构建肺移植受者出院计划方案,编制方案实施过程中所需的各种表单和手册,以期为肺移植受者及其家庭照顾者提供学习的可靠材料,同时为临床移植工作者提供标准的、规范的工具,从而指导临床开展肺移植受者出院计划,促使肺移植受者从医院到家庭的顺利过渡。方法:1.《肺移植受者出院计划方案》主体内容的构建（1）出院计划的评估:根据Meleis过渡理论和Fitch支持性照顾需求理论构建本研究的理论框架。依据本研究的理论框架,将出院计划的评估对象确定为肺移植受者和家庭照顾者,肺移植受者的评估内容包括受者的一般资料、出院需求和知识水平3个部分,肺移植照顾者的评估内容包括照顾者的基本资料、照顾需求和知识水平3个部分。本研究通过文献研究法初步确定肺移植受者的需求内容,通过半结构化访谈探讨肺移植受者的出院需求,据此编制了《肺移植受者出院计划评估单》。此外,通过半结构化访谈探讨肺移植照顾者的照顾需求,据此编制了《肺移植照顾者评估单》。（2）出院计划的制定与实施:依据本研究的理论框架,计划阶段是制定肺移植受者和家庭照顾者的实施计划,实施阶段主要是住院期间对肺移植受者和照顾者进行个体化的干预（主要为健康教育）。因此,本研究首先依据《肺移植受者出院计划评估单》编制《肺移植受者计划实施单》,依据《肺移植照顾者评估单》编制《肺移植照顾者计划实施单》。其次通过半结构化访谈调查医护人员对出院健康教育框架的建议,结合前期对肺移植受者和照顾者的需求调查结果,构建出肺移植受者健康教育的内容框架。然后系统检索、筛选并评价肺移植受者健康教育相关指南、系统评价及随机对照试验研究,提取健康教育相关的最新证据。最后通过专家咨询对《肺移植受者出院健康教育内容》进行论证和修订,依据形成的健康教育内容编制了《肺移植受者健康教育手册》（患者版和护士版）。（3）出院计划的评价:依据本研究的理论框架,肺移植受者出院计划的评价分为两个阶段:出院时及出院后。出院时评价受者的出院准备度、出院需求和知识水平,以及家庭照顾者的准备度、照顾需求和知识水平。出院后评价肺移植受者的自我管理能力和知识水平,以及照顾者的照顾能力和知识水平。本阶段明确了评价阶段使用的工具,并自行编制《肺移植受者出院回访记录单》。2.形成《肺移植受者出院计划方案》《肺移植受者出院计划方案》主体内容构建完成,方案中需要使用的各种表单和手册编制完成,最终形成《肺移植受者出院计划方案》。结果:1.《肺移植受者出院计划方案》主体内容的构建结果（1）出院计划的评估阶段,编制的《肺移植受者出院计划评估单》包含3部分内容:肺移植受者一般资料、出院需求以及知识水平的评估。其中肺移植受者的需求包括信息需求、生理需求、心理情感需求、精神需求、社会需求、资源需求。编制的《肺移植照顾者评估单》也包含3部分内容:照顾者的基本资料、照顾者的照顾需求及知识水平的评估。其中照顾者的需求包括信息需求、心理需求、社会需求和资源需求。（2）出院计划的制定和实施阶段,编制的《肺移植受者计划实施单》主要包括用药、并发症、饮食、康复、日常生活、复查、症状应对、心理情感、精神、社会和资源支持,共1 1部分内容。编制的《肺移植照顾者计划实施单》包含药物指导、并发症指导、饮食指导、康复指导、心理疏导、社会支持和资源支持,共7部分内容。肺移植受者出院健康教育的内容是基于对4部指南、3篇证据总结、3篇专家共识、7篇系统评价以及20篇随机对照试验进行系统检索、评价和内容分析、以及通过专家咨询修订而形成的;据此编制的《肺移植受者健康教育手册》包含肺移植出院后所要遵守的事项、肺移植用药指导、肺移植相关并发症知识、肺移植出院后的饮食与营养、肺移植出院后的康复运动、肺移植后日常生活与居家自我监测、肺移植后症状的识别和应对、肺移植后的心理适应与情绪调整、肺移植术后社会支持、肺移植门诊随访复查、资源推荐等共计11个方面的内容。（3）出院计划的评价阶段:评价阶段需使用的表单有《出院准备度量表》、《照顾者准备度量表》、《肺移植受者出院回访记录单》、《移植受者自我管理行为量表》、《移植受者知识问卷改编版》、《照顾者照顾能力量表》,其中《肺移植受者出院回访记录单》是自行编制的,包含两部分内容,第1部分为记录肺移植受者出院后的身心状况以及遇到的困难,第2部分为询问肺移植受者的知识了解情况。2.《肺移植受者出院计划方案》的形成最终形成的《肺移植受者出院计划方案》内容包括:肺移植受者出院计划的目的、肺移植受者出院计划实施的原则、肺移植受者出院计划的服务对象、肺移植受者出院计划的团队成员、肺移植受者出院计划的服务内容、肺移植受者出院计划的流程、肺移植受者出院计划所需表单和手册、肺移植受者出院计划的质量控制,共8项内容,其中含10个表单,2个手册。结论:本研究基于Meleis过渡理论和Fitch支持性照顾需求理论构建《肺移植受者出院计划方案》。方案的形成过程具有科学性和严谨性,具体体现在3个方面:在方案的制定上,系统检索和评价肺移植受者健康教育的相关证据,将获取的信息进行归纳、整合,经过专家咨询修订后形成;在出院计划的流程上,严格按照出院计划的标准化流程,包括出院计划的评估、出院计划的制定和实施、出院计划的评价3个阶段;在工具的使用上,方案中的各种表单和手册制作过程科学严谨。因此,形成的《肺移植受者出院计划方案》能够为临床移植工作者开展出院计划提供标准的、规范的工具,这对于临床开展出院计划服务具有指导性的积极意义,从而促进肺移植受者顺利从医院过渡到家庭,提高受者的出院准备度、知识水平和改善自我管理行为。
王一竹[4]（2021）在《临床中药学实践及器官移植免疫抑制治疗中联用五酯制剂对他克莫司的影响》文中指出临床中药学立足于我国传统中医药理论,以临床用药为核心,是研究中药基本理论与临床应用的一门学科。中药临床药师是架起中医学和中药学的桥梁,应在临床实践中形成科学的临床思维,以中医药理论为指导,充分应用现代技术指导临床合理用药。本人在中日友好医院药学部、中西医结合肿瘤内科、肺移植科实践期间,完成了 36周的治疗药物监测实验室常规工作、18周的中药咨询工作以及48周的专科临床中药学药学实践。通过医学与药学、中药与西药、临床与实验室等多方面结合的学习,掌握了常用治疗药物的前处理、患者用药教育、临床中药学查房、个体化给药、建立患者药历等多项临床技能。随着实体器官移植技术的不断成熟,器官移植成为治疗终末期器官功能衰竭最为理想的手段,我国器官移植的发展也与中医药文化背景相结合,面临移植术后众多并发症,中医药发挥了其独特优势。移植术后伴随的免疫排斥反应对患者长期存活率具有重要影响,因此,免疫抑制剂的研究及临床合理应用占据了非常重要的地位。目前,他克莫司作为移植术后抗排异的一线药物在临床广泛使用,但由于他克莫司治疗窗狭窄,患者个体差异大,如何达到有效血药浓度范围成为其发挥临床疗效的关键。近年来,关于中成药五酯制剂对他克莫司治疗的影响成为临床热点讨论内容,本研究采用循证与临床研究相结合的方式,对五酯制剂在器官移植术后应用的合理性进行分析,以期为临床用药提供参考。1联用五酯制剂对肝、肾移植术后他克莫司治疗影响的Meta分析系统检索中国知网（CNKI）、万方数据库（Wan fang）、维普中文期刊全文数据库（VIP）、中国生物医学文献数据库（CBM）、PubMed和Cochrane Library,由两名研究者将文献资料筛选、提取、纳入、偏倚风险评价之后,以联用五酯制剂后的肝、肾移植术后他克莫司的血药浓度、维持剂量、急性排斥反应发生率、肝、肾功能及不良反应发生情况为结局指标,使用Reviewmanager 5.3软件进行Meta分析。最终纳入13篇研究,共包括711例肝、肾脏器移植受者。Meta分析结果显示,联用五酯胶囊后,他克莫司血药浓度显着高于对照组[MD=1.34,95%CI=（1.19,1.49）,P<0.00001],他克莫司使用剂量显着低于对照组[MD=-0.96,95%CI=（-1.13,-0.79）,P<0.00001],肝移植受者的ALT显着低于对照组[MD=-23.83,95%CI=（-35.00,-12.66）,P<0.0001],生化指标水平及不良反应发生率与对照组相比差异无统计学意义。2五酯制剂联合他克莫司治疗有效性、安全性、经济性的系统评价系统检索 CNKI、Wan fang、VIP、CBM、PubMed 及 Cochrane Library,由两名研究者将文献资料筛选、提取、纳入、偏倚风险评价之后,以五酯胶囊联合他克莫司治疗的有效率、治疗费用和不良反应发生率为结局指标进行系统评价。最终纳入22篇研究,包括12篇随机对照试验、7篇病例对照和3篇病例报道,共计1362例患者。结果显示他克莫司联用五酯制剂预防肝、肾移植术后免疫排斥反应的效果与不良反应发生率均无统计学差异,治疗特发性膜性肾病的缓解率优于对照组,治疗费用与成本-疗效比均优于对照组。3联用五酯胶囊对肺移植术后他克莫司治疗的影响选择肺移植术后联用五酯胶囊以提高他克莫司血药浓度的患者作为研究对象,检测患者他克莫司血药浓度,记录患者联用五酯胶囊后的他克莫司给药剂量及肝、肾功能和血常规指标的变化,并进行回顾性分析与讨论。纳入的肺移植受者给予五酯胶囊第1天的他克莫司血药浓度呈上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;联用第3天和第7天的C/D显着上升（P<0.05）。患者给予五酯胶囊后第1天、第3天、第7天的他克莫司剂量,较联用之前显着减少（P<0.05）,血清肌酐、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等生化指标,白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、淋巴细胞百分数、红细胞、血红蛋白、红细胞压积等血常规指标水平差异无统计学意义（P>0.05）。综上所述,肝、肾器官移植受者术后联用五酯制剂可提高他克莫司血药浓度并减少他克莫司使用剂量,保护患者的肝功能,但与单用他克莫司相比,联用五酯制剂后的患者急性排斥反应发生率没有降低,对肾功能的影响有待进一步研究。除此之外,五酯制剂用药安全性好,具有良好的经济学效益,值得在临床推广使用。
周欣怡[5]（2021）在《肾移植受者延续护理成效评价指标体系的构建》文中研究表明目的本研究以奥马哈系统为基础,采用德尔菲法联合层次分析法构建肾移植受者延续护理成效评价指标体系并确定指标权重。对指标体系进行信效度分析初步检验指标体系的科学性和有效性,为临床评价肾移植受者延续护理效果提供参考,为制定下一步护理计划,改进护理质量提供决策依据。方法以奥马哈系统为基础,通过文献回顾及质性访谈,构建肾移植受者延续护理成效评价指标体系初稿。运用德尔菲法对21名专家进行两轮专家函询,确立肾移植受者延续护理成效评价指标体系。通过层次分析法对肾移植延续护理成效评价指标体系进行权重设置。根据该指标体系形成肾移植受者延续护理成效评价表,对安徽省某三甲医院肾移植随访中心的288名肾移植受者进行调查,采用内部一致性信度、内容效度及结构效度来检验指标体系的信效度。结果1.肾移植受者延续护理成效评价指标体系初稿包括5个一级指标、19个二级指标、61个三级指标。19名专家应答,两轮函询专家相同。两轮专家函询表的有效回收率分别为90.5%和100%,专家权威程度系数为0.897,第2轮专家函询后各级指标协调系数为0.235?0.336（P<0.05）。经两轮函询后,形成包含5个一级指标、16个二级指标和48个三级指标的肾移植受者延续护理成效评价指标体系。2.肾移植受者延续护理成效评价指标体系各级指标的一致性比例CR为0.000～0.054,均<0.1。各一级指标的权重分别为社会环境领域（0.142）、生理领域（0.299）、心理领域（0.299）、健康行为相关领域（0.201）、满意度（0.060）。其中,社会环境领域中权重最高的为“医疗资源利用状况”（0.077）,生理领域中权重最高的为“积极心理状态”（0.224）,生理领域中权重最高的为“移植肾功能”（0.134）,健康行为相关领域中权重最高的为“药物治疗相关依从性”和“定期随访与自我监测”（均为0.068）,满意度领域中权重最高的为“延续护理服务”（0.045）。3.肾移植受者延续护理成效评价指标体系的总体Cronbach’sα系数为0.877,社会环境领域、心理领域、生理领域、健康相关行为领域和满意度的Cronbach’sα系数为0.587?0.903;指标总体内容效度指数为0.972,各条目内容效度指数为0.833?1.000;各一级指标与总体的相关系数为0.656?0.878（P<0.05）。结论1.构建的肾移植受者延续护理成效评价指标体系以奥马哈系统为理论框架,结合文献分析和肾移植受者访谈结果,内容科学、全面且具有疾病特异性。2.研究选择的函询专家权威性及代表性良好,咨询结果可靠;层次分析法与第二轮专家函询结果的结合运用,增加了肾移植受者延续护理成效评价指标体系权重的科学性与可靠性。3.通过信效度检验,显示肾移植受者延续护理成效评价指标体系具有良好的信效度,可作为评价肾移植受者延续护理成效的有效测量工具。
杨巧玲,李琳,黄萍,陈美演,覃珍珍,张宇[6]（2020）在《儿童肝移植随访的现状及展望》文中进行了进一步梳理儿童肝移植已成为一种标准化的治疗终末期肝病的手段,给大量终末期肝病患儿带来了希望,术后长期、规范的随访是提高肝移植受者长期生存和生活质量的有效保障。目前儿童肝移植随访管理和长期照护等随访体系还有待进一步优化。本文拟对当前儿童肝移植随访领域进行回顾,总结随访方面的经验及观点,为儿童肝移植随访提供一些借鉴。
段亚哲[7]（2020）在《八段锦运动方案在提高某三甲医院肾移植受者生活质量中的应用研究》文中认为一、研究目的本研究在文献复习的基础之上,对国内外肾移植受者生活质量、运动锻炼情况进行分析并查找存在的不足,通过借鉴国内外成年肾移植受者运动指导指南,结合我国国情,经过检索文献、专家咨询等方法构建以八段锦为主的肾移植受者运动锻炼方案,通过验证临床实际效果,最终建立肾移植受者从“入院-出院-院外”的延续性锻炼模式,为肾移植受者提供系统、科学、规范的运动锻炼方案,提高其生活质量。二、研究内容与方法1、现况调查。本研究采用随机抽样,选取2016年9月至2018年1月上海市某三甲医院器官移植科收治的肾移植受者265例为研究对象,通过一般受者资料调查表和简化版的普适性简明生活质量量表SF-36对肾移植受者进行研究生活质量现况调查,发现肾移植受者SF-36量表生理健康及心理健康的得分分别为（61.7.08±6.261）、（56.31±7.90）分,职业类别、移植肾功能延迟恢复和运动锻炼对肾移植受者生活质量有显着的影响。2、文献研究和专家咨询。通过大量查阅文献了解国内外肾移植受者运动锻炼和八段锦锻炼的临床应用现况,在此基础上形成以八段锦为核心的肾移植受者运动锻炼初步方案;再通过专家咨询对移植科、中医科、运动与康复医学科医生、护理方面专家进行咨询,对肾移植受者运动锻炼初步方案展开专家讨论,保证该方案的科学性、实效性。3、实证研究。选取2018年6月-12月期间在三甲医院移植科随访的肾移植受者35名作为对照组,给予肾移植术后常规护理措施;选取2019年1月-6月期间在某三甲医院移植科随访的肾移植受者35名作为试验组,实施肾移植受者进行八段锦练习。对受者的体质指数、肾脏功能、心脏功能、生活质量和自理能力等指标进行对比分析,验证运动锻炼处方的效果。三、结果与讨论1、通过对肾移植受者的现况调查分析发现,目前我中心肾移植受者的生活质量水平有待提高,而本研究显示职业类别、移植肾功能延迟恢复和运动锻炼对肾移植受者生活质量有显着的影响。医护人员可通过探索系统、科学的肾移植受者锻炼方案,帮助受者通过进行运动锻炼提高其生活质量。2、通过文献研究和专家咨询,形成了以八段锦为核心的肾移植受者运动锻炼的初步方案,包括术后初期锻炼方案、院外早期锻炼方案、院外长期锻炼方案和运动锻炼方案质量控制工具共四个部分。3、通过实证研究对该方案进行验证,结果显示:两组受者在体质指数（BMI）中有差异,但差异不具有统计学意义;试验组在血肌酐指标、6min步行实验以及生活质量、日常生活能力中的效果更为显着,差异显着具有统计学意义（P<0.05）。故由上可知,以八段锦为基础的运动锻炼方案虽然不能显着改善锻炼者的体质指数,但是其体重有下降趋势;本方案可明显改善肾移植受者肾功能、心功能、生活质量和日常生活能力,从而提高肾移植恢复的效果。
王金金[8]（2020）在《基于层级全责一体化模式的健康教育对肾移植患者健康教育 知识掌握水平、治疗依从性及生活质量的影响》文中进行了进一步梳理目的探讨层级全责一体化模式的健康教育对肾移植患者健康教育知识掌握水平、治疗依从性及生活质量的影响。方法选取2017年3月至2018年3月郑州大学第一附属医院收治的肾移植患者184例为研究对象,采用数字随机抽样法分为对照组和观察组,各92例。对照组给予常规健康教育,观察组给予层级全责一体化模式的健康教育。观察并比较两组患者干预前后健康教育知识掌握水平、治疗依从性及生活质量的变化。结果干预前,两组患者的健康教育知识掌握水平、治疗依从性及生活质量评分比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;干预后,观察组患者的健康教育知识掌握水平评分显着高于对照组;观察组患者的治疗依从性评分显着高于对照组;观察组患者的生活质量评分显着高于对照组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论实施层级全责一体化模式的健康教育,能够有效地对患者健康指导进行连续性和完整性的强化,提升其对健康教育知识掌握水平的能力和治疗依从性,对肾移植患者的远期预后和生活质量的改善具有重要作用。
曾旭婧[9]（2020）在《中国内地肾移植受者出院后延续护理研究的文献计量学分析》文中指出目的分析中国内地肾移植受者出院后延续护理的研究现状和存在问题,为该领域的进一步发展研究提供参考依据。方法通过对中国知网（CNKI）、万方和维普数据库2019年9月13日之前收录的主题词和关键词为"肾移植"、"延续护理"、"延续性护理"、"连续护理"及"延伸护理"的肾移植术后延续护理相关文献进行系统检索,并进行常规文献计量学分析。结果本研究共纳入38篇有效文献,7.89%的文献来源于核心期刊;发文量从2017年起开始呈显着上升趋势;52.63%的文献来源于中国东部等经济较发达地区;78.95%的文献第一作者发文量为1篇,核心作者群尚未形成;97.37%的内容主要集中在延续护理的应用与效果观察方面;排首位的延续护理干预方式为电话和短信随访。结论近年来,中国内地肾移植延续护理的发展日益受到重视,但仍存在研究发展不均衡、研究的深度和广度不够等问题,今后可充分发挥网络优势,采用多种措施相结合的干预方式,加强医院与社区的联系,建立适合中国国情的延续护理模式。
王东彩[10]（2020）在《基于移动医疗APP的膀胱癌术后膀胱灌注患者延续性护理方案的构建及效果评价》文中认为目的1.构建基于移动医疗APP的TUR-BT术后膀胱灌注患者的延续性护理方案。2.探讨构建的延续性护理干预措施对TUR-BT术后膀胱灌注患者负性情绪、生活质量、不良反应的影响,进一步提高患者的自护能力,为其在临床中的护理应用提供理论参考。方法选取2018年5月至2019年5月于河南省某三级甲等医院行“经尿道膀胱肿瘤切除（TUR-BT）术”后并在本院日间治疗中心门诊行膀胱灌注化疗的患者作为研究对象,依据样本量计算公式,考虑10%失访率,共纳入150患者进行研究。运用计算机随机数字发生器将其分为对照组和干预组,对照组接受常规护理,干预组在常规护理基础上进一步接受为期3个月的基于移动医疗APP的延续性护理干预,即干预组患者除接受面对面指导和电话随访外,还通过移动医疗APP接受关于疾病知识、日常活动、饮食、心理健康等方面的健康指导。干预结束后,采用患者一般情况调查表、抑郁自评量表（SDS）、焦虑自评量表（SAS）及非肌层浸润性膀胱癌患者生活质量量表（QLQ-BLS24）、不良反应记录表评价该延续性护理干预措施对TUR-BT术后膀胱灌注患者负性情绪及生活质量的影响。数据库的建立使用Epi Data 3.0软件,采用SPSS20.0统计软件进行数据分析,采用（?）±s、x2检验、t检验、重复测量方差分析等统计方法进行结果分析。所有检验均以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1.依照本研究的纳入、排除标准,最终得到有效结果143例,完成率95.3%。2.干预组73例患者与对照组70例患者基线比较,两组患者在性别、年龄、婚姻状况、文化程度、家庭月总收入、职业、目前的医疗付费形式、合并症、疾病分期方面比较均无统计学差异（P>0.05）具有均衡可比性;护理干预前,两组患者SDS得分、SDS中重度得分率、SAS得分、SAS中重度得分率之间均未发现具有统计学差异（P>0.05）,两组患者在生活质量量表各维度得分均无统计学差异（P>0.05）。3.护理干预后,两组患者SDS得分、SDS中重度得分率、SAS得分、SAS中重度得分率均较护理干预前降低且均具有统计学差异（P<0.05）,干预组护理干预后SDS得分、SDS中重度得分率、SAS得分、SAS中重度得分率与对照组护理干预后比较降低程度更大,且均具有统计学差异（P<0.05）。4.护理干预后,两组患者总体健康状况、躯体功能、角色功能、认知功能、情绪功能、社会功能及功能子量表得分均较护理干预前升高且差异均具有统计学意义（P<0.05）,症状量表及症状子量表得分均较护理干预前降低且差异均具有统计学意义（P<0.05）;护理干预后干预组总体健康状况、角色功能、认知功能、情绪功能、社会功能、功能子量表的得分均显着高于对照组且均具有统计学差异（P<0.05）,护理干预后干预组症状量表及症状子量表得分与对照组护理干预后比较降低程度更大,且均具有统计学差异（P<0.05）。结论基于移动医疗APP的延续性护理是一种方便可行、切实有效的干预方式,能够显着改善膀胱癌术后行门诊膀胱灌注患者的负性情绪,降低不良反应发生率,并提高其生活质量,具有较好的应用前景,值得在临床中推广使用。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 论文Ⅰ CD26阳性尿外泌体与重症患者急性肾损伤预后关系的前瞻性队列研究 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1.前言 |
| 2 方法与材料 |
| 3 结果 |
| 4 讨沦 |
| 5 结论 |
| 6 局限性 |
| 附图与附表 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ CD26阳性外泌体对急性肾损伤后肾脏修复作用的机制研究 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5.结论 |
| 6.局限性 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞外囊泡与肾脏疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 发表论文1 |
| 发表论文2 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 研究资料与方法 |
| 1.1 供者 |
| 1.1.1 供者的选择 |
| 1.1.2 供者基本的临床资料 |
| 1.2 受者 |
| 1.2.1 受者的选择 |
| 1.2.2 受者基本临床资料 |
| 1.3 肾移植前供、受者相关组织配型 |
| 1.3.1 ABO血型配型 |
| 1.3.2 人类白细胞抗原(human lymphocyte antigen,HLA) |
| 1.3.3 群体反应性抗体(panel reactive antibody,PRA) |
| 1.3.4 淋巴毒试验(交叉配合试验) |
| 1.4 与肾移植相关手术情况 |
| 1.4.1 获取供肾 |
| 1.4.2 供肾保存方式 |
| 1.4.3 修肾 |
| 1.4.4 肾移植手术方式 |
| 1.5 围手术期处理 |
| 1.5.1 保护性隔离 |
| 1.5.2 术后监护 |
| 1.6 免疫抑制治疗 |
| 1.6.1 免疫诱导方案 |
| 1.6.2 免疫维持方案 |
| 1.7 随访 |
| 1.8 相关诊断标准 |
| 1.8.1 AKI 诊断、分期标准(见表 2、3、4、5) |
| 1.8.2 DGF诊断标准 |
| 1.8.3 脑死亡的判定 |
| 1.8.4 急性排斥反应 |
| 1.8.5 终末期肾病诊断标准 |
| 1.8.6 急性肾小管坏死(acute tubular necrosis, ATN) |
| 1.9 观察与分析指标 |
| 1.9.1 移植前供、受者指标 |
| 1.9.2 移植术后肾功能恢复情况 |
| 1.9.3 肾移植术后受者并发症 |
| 1.9.4 生存分析 |
| 1.9.4.1 生存时间 |
| 1.9.4.2 生存结局 |
| 1.10 统计学处理方法 |
| 结果 |
| 2.1 肾移植前临床资料的比较 |
| 2.1.1 供者临床资料比较 |
| 2.1.2 受者临床资料比较 |
| 2.1.3 受者移植前免疫学配型资料对比 |
| 2.2 移植术后肾功能变化 |
| 2.2.1 Scr的变化情况 |
| 2.2.2 尿量的变化情况 |
| 2.3 肾移植术后并发症发生情况 |
| 2.4 受者免疫抑制方案 |
| 2.5 DGF独立危险因素的单因素及多因素分析 |
| 2.5.1 供者方面的因素 |
| 2.5.2 受者方面的因素 |
| 2.6 受者与移植肾生存分析 |
| 讨论 |
| 3.1 AKI诊断标准对比 |
| 3.2 对AKI供者诊断标准的选择 |
| 3.3 供者基本临床特征 |
| 3.4 受者基本临床特征 |
| 3.5 肾功能恢复情况 |
| 3.5.1 术后血肌酐变化 |
| 3.5.2 术后受者尿量变化 |
| 3.6 移植术后并发症发生情况 |
| 3.6.1 DGF |
| 3.6.1.1 供者因素 |
| 3.6.1.2 受者因素 |
| 3.6.1.3 免疫因素 |
| 3.6.2 肺部感染 |
| 3.6.3 尿路感染 |
| 3.6.4 移植肾血管并发症 |
| 3.6.4.1 移植肾动脉血栓 |
| 3.6.4.2 移植肾出血 |
| 3.6.4.3 移植肾动脉狭窄 |
| 3.6.5 尿漏 |
| 3.6.6 AR |
| 3.7 生存分析 |
| 3.8 本研究的局限性 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 急性肾损伤供者肾移植的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 《肺移植受者出院计划方案》主体内容的构建 |
| 第一节 肺移植受者出院计划的评估 |
| 一、文献研究法初步确定肺移植受者的需求内容 |
| 二、半结构化访谈探讨肺移植受者的出院需求 |
| 三、编制《肺移植受者出院计划评估单》 |
| 四、半结构化访谈探讨肺移植照顾者的照顾需求 |
| 五、编制《肺移植照顾者评估单》 |
| 第二节 肺移植受者出院计划的制定与实施 |
| 一、编制《肺移植受者计划实施单》和《肺移植照顾者计划实施单》 |
| 二、《肺移植受者出院健康教育内容》框架的构建 |
| 三、《肺移植受者出院健康教育内容》的构建 |
| 四、《肺移植受者出院健康教育内容》的论证和修订 |
| 五、编制《肺移植受者健康教育手册》 |
| 第三节 肺移植受者出院计划的评价 |
| 一、评价阶段需要使用的工具 |
| 二、编制《肺移植受者出院回访记录单》 |
| 第二章 《肺移植受者出院计划方案》的形成 |
| 一、肺移植受者出院计划的目的 |
| 二、肺移植受者出院计划实施的原则 |
| 三、肺移植受者出院计划的服务对象 |
| 四、肺移植受者出院计划的团队成员 |
| 五、肺移植受者出院计划的服务内容 |
| 六、肺移植受者出院计划的流程 |
| 七、肺移植受者出院计划所需表单和手册 |
| 八、肺移植受者出院计划的质量控制 |
| 结语 |
| —、研究结论 |
| 二、本研究创新之处 |
| 三、研究局限性及对未来研究的建议 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 五味子及其制剂对钙调神经磷酸酶抑制剂影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 临床中药学实践 |
| 1 药学服务概述 |
| 2 临床中药学的构成及职能 |
| 3 临床中药学实践内容 |
| 第二章 器官移植免疫抑制治疗中联用五酯制剂的对他克莫司的影响 |
| 第一节 联用五酯制剂对肝、肾移植术后他克莫司治疗影响的Meta分析 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第二节 五酯制剂联合他克莫司治疗的有效性、安全性、经济性系统评价 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第三节 五酯胶囊对肺移植术后他克莫司治疗的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 中英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 理论基础 |
| 3 操作性定义 |
| 4 研究目的 |
| 5 研究意义 |
| 6 研究内容 |
| 7 研究方法 |
| 8 技术路线图 |
| 第二章 肾移植受者延续护理评价指标体系的初建 |
| 1 文献回顾 |
| 1.1 检索策略 |
| 1.2 文献纳入及排除标准 |
| 1.3 检索路径 |
| 1.4 文献质量评价及资料提取 |
| 1.5 文献汇总分析 |
| 2 质性访谈 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 资料收集与分析 |
| 2.3 伦理 |
| 2.4 质量控制 |
| 2.5 结果 |
| 3 指标体系初稿形成 |
| 第三章 肾移植受者延续护理成效评价指标体系的确立 |
| 1 专家咨询 |
| 1.1 专家选择 |
| 1.2 制定专家函询表 |
| 1.3 专家函询的实施 |
| 1.4 统计处理与分析 |
| 1.5 结果 |
| 2 肾移植受者延续护理成效评价指标权重设置 |
| 2.1 建立层次结构模型 |
| 2.2 构建模型的判断矩阵 |
| 2.3 计算权重及一致性检验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 评价指标体系的科学性和可靠性分析 |
| 3.2 评价指标体系的内容分析 |
| 第四章 肾移植受者延续护理成效评价指标体系的信效度检验 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究工具 |
| 2.2 资料收集方法 |
| 2.3 质量控制 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 信度分析 |
| 3.3 效度分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 指标体系的信度分析 |
| 4.2 指标体系的效度分析 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 研究的创新性、局限性与展望 |
| 1 研究的创新性 |
| 2 研究的局限与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 肾移植受者延续护理效果评价指标的系统性综述 |
| 参考文献 |
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 二、相关概念界定 |
| 三、研究目的 |
| 四、研究内容和方法 |
| 五、技术路线 |
| 第一部分 肾移植受者生活质量现况调查 |
| 一、对象与方法 |
| 二、结果与分析 |
| 三、总结与建议 |
| 第二部分 肾移植受者运动锻炼的国内外研究 |
| 一、国外肾移植受者运动锻炼研究 |
| 二、国内肾移植受者运动锻炼研究 |
| 三、八段锦的临床应用研究 |
| 四、运动方案的内容研究 |
| 五、总结 |
| 第三部分 肾移植受者运动锻炼方案的构建 |
| 一、形成肾移植受者运动锻炼的初步方案 |
| 二、肾移植受者运动锻炼方案的构建 |
| 第四部分 以八段锦为基础的肾移植受者运动锻炼方案的实证研究 |
| 一、研究对象与方法 |
| 二、研究结果 |
| 三、讨论 |
| 四、总结 |
| 第五部分 全文总结 |
| 一、研究结论 |
| 二、研究的创新点 |
| 三、研究存在的不足与局限性 |
| 附录1 “成年DCD肾移植受者运动锻炼方案实证研究”知情同意书 |
| 附录2 受者基线调查表 |
| 附录3 中文版生活质量简明调查表 |
| 附录4 中文版日常生活能力量表(ADL) |
| 附录5 专家咨询意见征询表 |
| 附录6 肾移植患者生命质量提高指导手册 |
| 附录7 肾移植患者随访手册 |
| 文献综述 肾移植受着生活质量研究进展 |
| 参考文献 |
| 参考文献 |
| 在读期间 发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源与检索策略 |
| 1.2 文献纳入与排除标准 |
| 1.3 文献分析方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献发表年度分布 |
| 2.2 文献第一作者单位所在地区分布 |
| 2.3 发文机构类型 |
| 2.4 发表期刊分布 |
| 2.5 合着和第一作者分布情况 |
| 2.6 文献基金资助 |
| 2.7 文献研究设计类型和样本量分布 |
| 2.8 高频关键词分析 |
| 2.9 出院后延续护理干预方式及持续时间 |
| 2.10 延续护理团队与成员培训、考核 |
| 2.11 评价指标类型 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中国内地肾移植受者出院后延续护理研究日益受到重视 |
| 3.1.1 中国内地肾移植受者出院后延续护理研究正处于高速增长期 |
| 3.1.2 我国相关部门已开始加大对肾移植受者出院后延续护理研究的基金支持 |
| 3.2 中国内地肾移植受者出院后延续护理研究发展不均衡 |
| 3.2.1 中国中东部地区在研究中起主导作用 |
| 3.2.2 大学附属医院是研究的主要力量 |
| 3.2.3 期刊种类分散集中度低 |
| 3.2.4 核心作者群和高产作者尚未形成,研究持续性和协作度不足 |
| 3.3 中国内地肾移植受者出院后延续护理研究的质量有待进一步提高 |
| 3.3.1 研究缺乏多学科团队协作 |
| 3.3.2 研究有待进一步规范化 |
| 3.3.3 研究深度和广度有待加强 |
| 3.3.4 研究文献种类单一质性研究和量性结合不足 |
| 3.3.5 干预方案和实施流程有待进一步完善 |
| 3.4 近年中国内地肾移植受者出院后延续护理的研究热点 |
| 3.5 中国内地肾移植受者出院后延续护理研究的发展趋势 |
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 操作性定义和理论依据 |
| 3 研究目的与意义 |
| 4 技术路线 |
| 一、基于移动医疗APP的膀胱癌术后膀胱灌注患者延续性护理方案构建 |
| 1 干预方案初步构建 |
| 2 专家论证 |
| 3 预试验 |
| 4 干预方案最终形成 |
| 二、基于移动医疗APP的膀胱癌术后膀胱灌注患者延续性护理干预效果评价 |
| 1 对象与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 评价指标 |
| 1.3 干预的具体实施过程 |
| 1.4 数据分析 |
| 1.5 质量控制 |
| 1.6 伦理原则 |
| 2 结果 |
| 2.1 干预组与对照组两组患者的一般情况比较 |
| 2.2 干预前后两组患者的负性情绪比较 |
| 2.3 干预前后两组患者的生活质量比较 |
| 2.4 干预后两组患者的不良反应发生率比较 |
| 2.5 护理干预应用情况和依从性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 基于移动医疗APP的延续性护理可改善膀胱癌术后膀胱灌注患者负性情绪 |
| 3.2 基于移动医疗APP的延续性护理可提高膀胱癌术后膀胱灌注患者的生活质量 |
| 3.3 基于移动医疗APP的延续性护理可降低患者膀胱癌术后膀胱灌注患者的不良反应发生率 |
| 3.4 基于移动医疗APP的延续性护理干预应用情况和依从性较好 |
| 4 研究的创新性、局限性与展望 |
| 4.1 研究的创新性 |
| 4.2 研究的局限性 |
| 4.3 对未来研究的展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 膀胱癌术后膀胱灌注患者就医依从性及延续性护理研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录A 知情同意书 |
| 附录B 患者一般资料调查表 |
| 附录C 抑郁自评量表(SDS) |
| 附录D 焦虑自评量表(SAS) |
| 附录E 欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表 |
| 附录F 欧洲癌症患者非基层浸润性膀胱癌特异性生命质量测定量表 |
| 个人简历、攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
