李建龙[1]（2021）在《人ZO-1蛋白生物信息学分析及20（S）-原人参二醇在脂多糖诱导的内皮屏障损伤中的作用》文中指出脓毒症是指机体在感染状态下产生多种生理紊乱反应,从而造成多种器官损伤和功能障碍,严重危及患者生命。脓毒症的发病机制涉及高度复杂的综合反应,其中心环节是内皮屏障功能的改变。紧密连接不仅是内皮细胞屏障细胞旁通路的重要组成部分,还可以调节内皮细胞功能。ZO-1是紧密连接蛋白的重要组分。目前关于人ZO-1的研究很多,但关于人ZO-1的生物信息学分析还未见报道。因此,通过对人ZO-1进行生物信息学分析,可以为研究人ZO-1在脓毒症细胞屏障损伤治疗提供理论依据。20（S）-原人参二醇（20（S）-PPD）属于原人参二醇型人参皂苷,其在抗炎保护血管方面具有很好的疗效。但是,目前关于20（S）-PPD是否能减轻炎症导致的内皮屏障损伤还未见报道。因此,20（S）-PPD能否改善LPS诱导的内皮屏障损伤是一项值得探讨研究的问题。实验第一部分,应用生物信息学方法揭示人紧密连接蛋白ZO-1各种理化性质和生物学功能,为治疗人脓毒症细胞屏障损伤提供思路和理论方法。本部分利用生物信息学工具对人ZO-1蛋白理化性质、结构功能和物种间同源关系进行预测分析。结果显示,人ZO-1含有27191个原子和1748个氨基酸,理论等电点为6.24,以负电荷残基总数居多,属于带负电荷的酸性蛋白;不稳定指数为59.28,亲水性总平均数为-0.911,属于不稳定亲水蛋白;亚细胞定位于细胞质且不含有信号肽和跨膜螺旋结构;二级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成,它们共同螺旋折叠形成更高级的三级结构;含有144个丝氨酸位点、54个苏氨酸位点和34个酪氨酸位点,N端具有三个PDZ结构域和SH3结构域,C端具有一个肌动蛋白结合区α区和功能未知区域ZU5区;人ZO-1与大鼠具有很高的同源性。KEGG信号通路分析显示,人ZO-1与多种紧密连接蛋白相互作用,参与多种生物反应过程。因此,ZO-1作为紧密连接重要的组成部分,参与细胞旁通路的多种调节,可以作为脓毒症相关内皮屏障损伤治疗的潜在靶点。实验第二部分,以人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为研究细胞,利用LPS诱导其损伤建立体外脓毒症模型,研究20（S）-PPD能否减轻LPS诱导的内皮屏障损伤。首先,利用CCK-8法检测细胞活力,确定20（S）-PPD作用HUVECs的安全浓度范围。然后,结合实验室前期研究成果,利用CCK-8法检测不同时间内LPS对HUVECs细胞活力的影响。其次,将对数生长期的HUVECs分为对照组、LPS组、20（S）-PPD+LPS组（P+L）,利用CCK-8法和Transwell小室检测20（S）-PPD对LPS诱导的HUVECs细胞活力和内皮屏障损伤的影响。最后,利用免疫荧光法观察20（S）-PPD对LPS诱导HUVECs细胞ZO-1和骨架蛋白F-actin的影响。结果显示,在2.5μmol·L-1时,20（S）-PPD明显增加了HUVECs的细胞活力（P<0.05）。10μg/m L的LPS在损伤HUVECs时,细胞活力随LPS作用时间延长而降低,从3h开始具有明显差异（P<0.05）。20（S）-PPD预处理组的细胞活力、TEER值都明显高于LPS组,Pa值明显低于LPS组（P<0.05）,所以选择2.5μmol·L-1的20（S）-PPD以及10μg/m L的LPS作用3h进行后续试验。免疫荧光结果显示,相对于对照组,LPS组F-actin发生明显的解聚、异位现象且微丝表现不明显,P+L组F-actin也存在解聚、异位现象,但相对于LPS组尚存在明显的微丝表现。相对于对照组,LPS组ZO-1荧光减弱且有显缺失、异位现象,P+L组ZO-1表达也存在减少和缺失表现,但ZO-1缺失现象相对于LPS组要少一些。以上结果表明,人ZO-1作为紧密连接重要的组成部分,参与细胞旁通路的多种调节,具备成为脓毒症治疗靶点的可能性。20（S）-PPD可以减轻LPS诱导的HUVECs细胞活力降低和单层细胞高通透性,其分子机制可能与增强细胞骨架蛋白F-actin和连接蛋白ZO-1表达有关。
刘倩[2]（2019）在《雾化吸入溶血磷脂酸对脓毒症大鼠肺损伤修复及肺内源性MSCs数量的影响》文中研究指明目标:本课题通过LPS脓毒症大鼠急性肺损伤（acute lung injury ALI）模型,研究体内炎症因子TLR4信号转导通路与间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的变化,了解ALI的发病相关机制。探讨雾化吸入溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对LPS引发的大鼠急性肺损伤是通过增高MSCs数量并抑制TLR4信号转导通路的炎症反应而促进肺损伤的修复。方法:60只SD大鼠随机分为5组:大鼠尾静脉分别注射PBS和LPS设为正常组（NC组）、脓毒症急性肺损伤组（LPS组）,LPS组中一部分肺损伤大鼠静脉注射LPA拮抗剂Ki 16425（LPS+KI组）,其中一部分LPS组及LPS+KI组大鼠分别雾化设为肺损伤大鼠雾化LPA治疗组（LPS+LPA组）、LPA治疗组（LPS+LPA+KI组）。在雾化LPA第一天（d1）及第七天（d7）分别麻醉大鼠,解剖后收集肺组织选用病理HE染色、湿/干重测定;收集外周血,ELISA检测大鼠外周血血清中TLR4、NFk B、IL-6及IL-21浓度;RT-PCR检测TLR4 m RNA及LPA受体m RNA的表达;western bolt检测NFk B/p-NFk B、ERK/p-ERK蛋白的表达,流式细胞术检测MSCs表面标志的相关抗体,计算各组MSCs百分比,研究LPA对MSCs数量的影响。结果:HE染色结果显示,LPS组d1镜下可见肺泡和肺间质炎细胞浸润及出血,间隔增厚,d7镜下可见肺泡和肺间质炎细胞浸润及出血,间隔增厚,肺泡上皮部分坏死及透明膜形成。LPS+LPA组镜下可见少数肺泡及肺间质炎细胞浸润和轻度出血,间隔轻度增厚,大部分透明膜修复,同时,LPS组较正常组大鼠肺组织湿/干重比增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组肺组织湿/干重比降低（p<0.01）,证明各组造模成功;ELISA实验显示,LPS组大鼠较正常组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均增高（p<0.001）,LPS+LPA组较LPS组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均降低（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均增高（p<0.01）;RT-PCR实验显示,LPS组大鼠肺组织较正常组TLR4 m RNA的表达明显增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组TLR4 m RNA的表达均降低（p<0.001）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4 m RNA的表达均增高（p<0.01）,且作为LPA受体LPAR1/2,实验发现LPS+LPA组分别较NC组、LPS组中LAPR1/2m RNA的表达增高（p<0.01,p<0.001）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4 m RNA的表达降低（p<0.01）。western bolt检测LPS组大鼠肺组织p-NFk B的蛋白表达明显增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组p-NFk B的蛋白表达降低（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组p-NFk B的蛋白表达增高（p<0.05）,而LPS组p-ERK的蛋白表达降低（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组p-ERK的蛋白表达增高（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组p-ERK的蛋白表达降低（p<0.01）,并具有显着性。且流式细胞术检测MSCs表面标志的相关抗体,得LPS+LPA组较LPS组、正常组MSCs%增高（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组MSCs%降低（p<0.05）,并具有显着性。结论:1、ALI模型病理镜下可见肺内炎细胞浸润及出血,间隔增厚,同时肺组织湿/干重比较正常组明显增高,证明ALI大鼠造模成功,且LPS引发ALI大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达增高,肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达增高,表明ALI中LPS通过TLR4途径参与炎症反应。2、雾化LPA能降低LPS引发ALI大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达、肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达,同时提高了肺内p-ERK蛋白表达和增加MSCs数量,病理可见肺内炎细胞浸润、出血减轻,透明膜修复,表明LPA通过抑制TLR4信号通路激活及增加MSCs数量对脓毒症肺损伤进行修复,为脓毒症肺损伤改善预后提供了思路。3、LPA抑制剂KI模型病理肺内炎细胞浸润、出血加重,且大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达较LPS组增高,肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达较LPS组增高,同时使p-ERK蛋白表达和MSCs LPS组数量较LPS组下降。反向说明LPA通过抑制TLR4信号通路激活及增加MSCs数量对脓毒症肺损伤进行修复。
柴瑞平[3]（2019）在《生脉注射液质量控制及抗脓毒症作用机制研究》文中提出生脉注射液是中药经典复方现代化应用的代表性药物之一,源于《内外伤辩惑论》中记载的古方生脉饮,本论文结合化学分析、敏感生物活性测定、网络药理学及代谢组学技术对生脉注射液的质量评价及针对脓毒症诊疗的分子机制进行研究,实验结果如下:第一部分:采用指纹图谱技术分析5厂家9批次生脉注射液UPLC色谱图,确定24号色谱峰五味子醇甲为参照峰,标定44个共有峰,并确定、指认其中人参皂苷Rg1（10号峰）等11个共有峰,9批次样品的色谱图相似度均大于0.91,表明批次间差异较小,样品溶液制备工艺较为稳定,方法准确可靠。第二部分:采用多指标性成分定量分析手段,建立了稳定、快速的UPLC色谱方法;结合主成分分析建立生脉注射液综合评价模型,各批次得分从高到低:S2、S9、S5、S1、S6、S7、S8、S3。第三部分:建立了采用敏感生物活性指导的生脉注射液质量控制标准,更加客观、明确、综合地反映其质量:（一）建立了基于DPPH自由基清除能力的质量控制方法学,5厂家9批次生脉注射液清除自由基能力较稳定;（二）建立基于RAW264.7细胞模型抗炎物质（NO）清除的质量控制方法学,紧密联系其疗效,增强生物活性质控方法的专属性,5厂家9批次生脉注射液清除抗炎物质NO能力较稳定;第四部分:采用网络药理学技术对生脉注射液抗脓毒症的作用机制进行了简要分析,首先基于指纹图谱的分析结果,其中9种有效成分经Pubchem数据库确证,在STITCH数据库中获取9种成分可能作用的靶点约62个,从HPO数据库收集到符合要求的脓毒症相关人体内靶点有58个,通过STRING数据库对生脉注射液活性成分作用靶标与脓毒症人体靶标进行蛋白质间相互作用分析,删除无关靶标后,利用Cytoscape v3.5.1软件可视化展现药物靶标与疾病靶标的相互作用关系,使用Network Analyzer插件分析该网络中各个节点的网络拓扑性质,获得其中连接度、介度、紧密度中位数分别为:19、0.014、0.449,筛选均大于中位数的靶点按连接度排序取前20个,即为生脉注射液治疗脓毒症网络中的关键靶点,主要包括:ABL1、CCND1、CDK1、CDK2、CDK6、CDKN1B、RB1、HSP90AA1、SMARCA4、RBL2、CTNNB1、MDM2、SP1、LRRK1、BTK、PIK3R1、TMPRSS11D、ACTG2、CD79A、RET等。KEGG代谢通路富集分析得到20条主要的生物信号通路,推测生脉注射液主要通过对 Pathways in cancer,Cell cycle,p53 signaling pathway 等通路的调节发挥协同作用,提示生脉注射液可能通过参与调节免疫、炎症反应、细胞凋亡等过程发挥治疗脓毒症的保护作用,经GO生物学分析可知,生脉注射液有效成分在治疗脓毒症疾病过程中参与调控机体多种生物学过程,如细胞周期、能量代谢、细胞内信号转导、转录调控及免疫系统发育等,提示其可能对脓毒症引发全身性炎症反应、免疫失调进行回调,对风险极高的继发性多器官功能障碍从能量代谢等角度产生保护作用,初步揭示了该药抗脓毒症药效活性的多通路交互调控的作用特点。第五部分:利用尿液代谢组学技术探究生脉注射液抗脓毒症的作用机制,采用经典的的盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,进行尿液代谢组学分析。实验结果发现,尿液代谢轮廓显示生脉注射液组大鼠代谢分布趋近于空白组大鼠,证明生脉注射液对脓毒症大鼠有良好的治疗及回调作用,其中调节牛磺酸和亚牛磺酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等可能是其治疗脓毒症的关键机制。
卢幼然,狄浩然,丁军颖,郭玉红,刘清泉[4]（2018）在《脓毒症免疫失衡机制及中医治疗》文中研究表明脓毒症高致死率使其成为人类健康的重大威胁,其发病机制尚未完全明确,已知免疫失衡是其主要发病机制之一。高迁移率族蛋白B1（High Mobility Group Box1 Protein,HMGB1）是致免疫失衡的关键因子,有RAGE、TLRs和CD24等多种受体,可通过与受体结合,介导多种信号转导通路,从而发挥免疫调节功能。中药以单体和复方治疗脓毒症均取得一定进展,有待进一步结合现代医学共同应对脓毒症挑战。
蒋华[5]（2017）在《脓毒症肝损伤的中医证候分析及犀角地黄汤干预的临床和实验研究》文中指出研究背景脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合征,可以进一步发展为感染性休克、多器官功能障碍综合征,是重症患者死亡的最主要原因之一。在脓毒症发病和发展的整个过程中,肝脏清除细菌和内毒素,以及产生炎症介质和炎性因子作用能对人体产生有效保护作用,但是肝脏也会成为失控的炎症反应袭击的潜在靶器官。脓毒症引起肝损伤在以前被认为是严重疾病的终末期,主要表现为转氨酶升高和黄疸。但是现在许多研究发现脓毒症初期就会出现症状不显着的肝功能障碍。虽然脓毒症并不经常并发肝损伤,但是一旦并发肝损伤,病情已经到了严重阶段。因此,尽早诊断和尽早治疗脓毒症肝损伤,对防治脓毒症有极其重要意义。研究目的1)通过临床研究初步明确脓毒症肝损伤患者的主要证候分布。2)运用犀角地黄汤治疗脓毒症肝损伤患者,评估其疗效和对预后的影响。3)通过盲肠结扎穿刺术造模大鼠实验研究,探讨犀角地黄汤对脓毒症肝损伤的作用机制。4)为将来临床开展大规模多中心前瞻性研究提供可靠依据。研究方法1)检索关于脓毒症肝损伤和犀角地黄汤的相关文献,为运用犀角地黄汤治疗脓毒症肝损伤提供理论依据。2)收集200例脓毒症肝损伤患者肝功能指标和中医症状体征等四诊信息,采用聚类分析的方法评估症状体征,结合卫气营血辨证,归纳中医的证候分类,获得脓毒症肝损伤患者的证候分布规律,并通过分析各类别患者的肝功能指标和预后来评估不同证候患者的病情严重程度。3)采用随机对照方法观察犀角地黄汤治疗30例脓毒症肝损伤患者的疗效,评估治疗后3天、7天犀角地黄汤对肝功能指标、APACHEⅡ评分、SOFA评分和28天累积生存率的影响。4)运用盲肠结扎穿刺（CLP）法模拟脓毒症肝损伤大鼠模型,以病理改变作为肝损伤的依据。设预先喂养犀角地黄汤的造模大鼠为试验组（CLP+XJDHT组）,对照组为普通造模大鼠（CLP组）观察犀角地黄汤在不同时间点对脓毒症肝损伤大鼠一般情况、血清肝功能指标、血清氧化应激指标、血清炎性因子浓度和对肝组织STAT1和STAT3信号通路的影响。研究结果1)通过文献研究发现脓毒症适合于卫气营血辨证论治,而脓毒症肝损伤往往处于血分证,适合使用犀角地黄汤治疗。2)共收集了 200例脓毒症肝损伤患者的中医症状体征信息,通过聚类分析,共得出了三类证候。经专家共识,表现为血分证的患者有106例,表现为营分证的患者有64例,表现为卫分证/气分证的患者有30例。对三类患者肝功能指标和28天累积生存率进行分析,血分证患者的AST、ALT和TBIL水平明显高于卫分证/气分证和营分证（P<0.05）。血分证患者的28天累计生存率显着低于卫分证/气分证、营分证（P<0.01）。3)60例脓毒症肝损伤患者随机分为犀角地黄汤组和对照组,经过治疗后发现犀角地黄汤能改善脓毒症肝损伤患者的ALT、AST和TBIL水平（P<0.05）,降低APACHE Ⅱ评分及SOFA评分（P<0.05）,而28天生存率没有差异。4)盲肠结扎穿刺法造模脓毒症大鼠,以病理图片为依据判定脓毒症肝损伤模型造模成功。CLP 组术后 6h,12h,24h 时点存活率分别为:81.25%、45.83%、37.50%,CLP+XJDHT组相对应的存活率分别为:87.50%、54.16%、43.75%,两组没有统计学差异。5)CLP+XJDHT组大鼠血清ALT、AST水平在24h时点显着低于CLP组（P<0.01）,而TBIL水平没有统计学差异。6)在12h时点CLP+XJDHT组大鼠肝脏SOD活力值高于CLP组（P<0.05）,在24h时点CLP+XJDHT组大鼠肝脏SOD活力值显着高于CLP组（P<0.01）。在12h时点,CLP+XJDHT组大鼠肝组织MDA水平显着低于CLP组（P<0.01）;在24h时点CLP+XJDHT组大鼠肝组织iNOS水平显着低于CLP组（P<0.01）。7)造模后CLP组的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平均在6h达到高峰,然后逐步回落。而CLP+XJDHT组的IL-1β浓度6h达到高峰,而TNF-α、IL-6和IL-8水平的高峰出现在12h左右。12h时点CLP+XJDHT组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-8均低于CLP组（P<0.05）。24h 时点 CLP+XJDHT 组大鼠血清 IL-6、IL-8 高于于 CLP 组（P<0.05）。而两组血清IL-4和IL-10高峰均出现在24h时点。6h时点CLP+XJDHT组大鼠血清IL-4和 IL-10 均低于 CLP 组（P<0.05 或P<0.01）。12h、24h 时点 CLP+XJDHT 组大鼠血清 IL-4 和 IL-10 均高于 CLP 组（P<0.01）。8)两组大鼠肝脏组织STAT1mRNA和STAT3mRNA的表达没有差异。两组大鼠肝组织STAT1和STAT3白水平没有差异。发现CLP术后6h、12h、24h,CLP组大鼠的p-STAT1平明显高于CLP+XJDHT组（P<0.01）,发现CLP术后6h、12h,CLP组大鼠的p-STAT3水平高于 CLP+XJDHT 组（P<0.05）。研究结论1)证候聚类分析提示脓毒症肝损伤患者适合使用卫气营血辨证的证候分型治疗,临床上以血分证居多,病情最危重。2)谷丙转氨酶和谷草转氨酶在脓毒症肝损伤初期更加敏感,总胆红素的改变在时间上相对延后。3)犀角地黄汤能改善脓毒症肝损伤患者肝功能指标及危重病评分,不影响预后。4)犀角地黄汤可以改善脓毒症肝损伤大鼠的部分肝功能指标。5)临床和实验结果显示脓毒症早期的总胆红素变化不明显,不宜纳入脓毒症肝损伤的早期诊断依据。6)犀角地黄汤改善脓毒症肝损伤的可能机制:减轻氧化应激状态和提高抗氧化能力;减少促炎因子释放,增加抗炎因子释放,调控失衡的炎症反应,在脓毒症早期能干预STAT1和STAT3的信号通路。
钟玙沄[6]（2019）在《内毒素血症过程中SETD4调控炎性细胞因子表达的分子机制》文中指出脓毒症（Sepsis）是一种全身炎症反应综合征,进一步发展会导致脓毒性休克（Septic shock）、多器官功能障碍综合征（MODS）甚至死亡。由于脓毒症的发病机制复杂,目前尚无有效的防治措施。探讨脓毒症的确切发生机制仍是相关研究领域的重点和关键问题。已有的研究结果表明,由内毒素（LPS）等病原相关分子模式（PAMPs）诱导的大量炎症因子的产生和活化是导致脓毒症和脓毒症休克最为关键的环节。目前认为,炎性细胞因子的产生除了与PAMPs激活Toll样受体（TLR）及其介导的细胞信号转导通路MAPK、NF-κB有关外,与组蛋白的修饰如甲基化修饰及其介导的染色体重构也有密切关系。组蛋白甲基化修饰主要由一类含有高度保守的SET结构域的SET家族蛋白完成。研究证实SET家族蛋白通过甲基化组蛋白在炎症反应及相关疾病中发挥着重要作用。SETD4是本课题组前期利用蛋白质组学技术研究小鼠内毒素休克发生机制时发现的差异表达蛋白。目前有关SETD4蛋白功能的报道很少。本课题拟利用课题组前期构建的Setd4基因敲除小鼠,在动物水平验证SETD4是否能够调控细胞因子的产生及影响内毒素休克动物的生存率;并进一步通过查找SETD4的甲基化底物、甲基化位点以及甲基化程度等,深入探讨SETD4在内毒素血症中调控细胞因子释放的分子机制。本课题已取得的重要实验结果如下:1.与野生型（Setd4+/+）相比,Setd4敲除（Setd4-/-）后内毒素休克小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、MCP-1和INF-γ等炎性细胞因子的释放显着降低,提示SETD4能正向调控细胞因子的产生;2.Setd4成敲除能够降低内毒素休克小鼠的死亡率,表明SETD4介导的炎性细胞因子表达在内毒素休克中扮演着重要角色;3.与Setd4+/+的BMDMs相比,Setd4-/-的BMDMs受LPS刺激时IL-6、TNFα、IL-1β的mRNA水平降低,与Setd4敲除后血清细胞因子水平减少一致,提示SETD4可能在转录水平调控炎性细胞因子的产生;4.无论是Setd4+/+还是Setd4-/-的BMDMs,在LPS刺激后MAPK和NF-κB信号通路被活化,相关信号分子的磷酸化均增强,但两组间活化程度没有明显差异,提示Setd4调控细胞因子转录的作用可能发生在MAPK和NF-κB信号通路的下游;5.质谱鉴定和特异性抗体检测体外甲基化反应产物均发现,SETD4能够使H3K4me2增强,用特异性抗体还检测到SETD4能使H3K4me1增强;6.基于Setd-/-和Setd4+/+的BMDMs细胞实验结果发现,当Setd4敲除后,LPS刺激引起的H3K4me1和H3K4me2甲基化程度降低;7.与 Setd4+/+BMDMs 相比,Setd4-/-BMDMs 受 LPS 刺激后 H3K4me1 和H3K4me2在Tnf和Il-6启动子处募集显着下降。基于上述结果得出以下结论:SETD4通过使H3K4me1和H3K4me2增强进而促进炎性细胞因子Tnf和Il-6的转录,使机体在内毒素血症过程中炎性细胞因子的产生增加,炎症反应加剧并导致动物死亡。SETD4在内毒素血症的发生及发展过程中发挥了重要作用。
蔡彬[7]（2016）在《瓜氨酸对脓毒症早期大鼠肝损伤的保护作用及其机制研究》文中提出第一部分瓜氨酸对脓毒症大鼠肝损伤及Cit-NO循环的影响背景与目的:临床调查发现,脓毒症时血浆及肌肉中的精氨酸（Arg）水平明显下降,然而对脓毒症患者直接补充外源性精氨酸并不能改善脓毒症的病情发展。瓜氨酸（Cit）可以通过“瓜氨酸—一氧化氮循环”（Cit-NO cycle）参与精氨酸的体内代谢。并且肝脏是参与Cit-NO循环的重要器官之一,同时也是脓毒症发生发展中最容易受到损伤的器官之一。因此,本研究探讨补充外源性瓜氨酸对脓毒症大鼠肝损伤以及Cit-NO循环的影响。方法:本研究采用最经典的盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症大鼠模型,将大鼠分为正常组（Normal group）,假手术组（sham group）,瓜氨酸组（Cit group）,生理盐水组（NS group）,CLP模型组（CLP group）以及CLP模型加瓜氨酸组（CLP+Cit group）。再根据CLP造模后大鼠被处死的时间点,CLP组和CLP+Cit组又各自分出6h,12h,24h,48h四个时间点亚组。Cit组和CLP+Cit组大鼠术前给予瓜氨酸连续灌胃给药7天,剂量为200mg/d。术后每6小时观察各组大鼠一般状况及生存情况,在预定时间点处死各组大鼠,收集大鼠血液及肝脏组织样本。取大鼠血液使用生化检测仪检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。取肝脏组织做HE染色观察病理变化情况,利用检测试剂盒分别测量大鼠肝脏组织超氧化物歧化酶（SOD）的活力、丙二醛（MDA）的含量、NO的含量以及诱导型一氧化氮合酶（i NOS）的活力。运用高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测大鼠血浆中Cit和Arg含量。所有相关数据的统计分析利用SPSS 16.0统计软件进行,设定P<0.05为存在统计学差异。结果:Sham group,Cit group和NS group存活率均为100%（8/8）。CLP group术后6h,12h,24h,48h四个时间点亚组相对应的存活率分别为:75%（9/12）,50%（8/16）,33.33%（8/24）和6.25%（2/32）。CLP+Cit group术后6h,12h,24h,48h四个时间点亚组相对应的存活率分别为:83.33%（10/12）,68.75%（11/16）,66.67%（16/24）和25%（8/32）。CLP+Cit 24h和48h亚组大鼠的生存率均显着高于相对应的CLP 24h和48h亚组大鼠（both P<0.05）。HE染色结果显示所有CLP组和CLP+Cit组大鼠肝脏均出现不同程度的肝损伤相关病理改变。此外,实验结果显示CLP+Cit 12h和24h亚组大鼠血清AST水平显着低于CLP 12h和24h亚组（both P<0.05）。在CLP术后6h,12h,24h三个时间点,CLP+Cit各组大鼠肝脏SOD活力值都显着高于CLP各组（all P<0.05）。然而,CLP+Cit各组大鼠肝脏MDA水平都低于CLP各组,其中CLP+Cit 12h和24h亚组大鼠肝脏MDA水平显着低于CLP 12h和24h亚组（both P<0.01）。另外,在CLP术后6h,12h,24h三个时间点,CLP各组大鼠肝脏NO水平都显着高于CLP+Cit各组（all P<0.05）。同时,i NOS活力在CLP+Cit各组中都低于CLP各组,但比较不存在统计学差异（all P>0.05）。在术后24h内,CLP组大鼠血浆Arg水平随着时间变化呈下降趋势,并且CLP 24h亚组大鼠血浆Arg含量显着低于正常组（P<0.01）。此外,CLP+Cit组大鼠血浆Arg浓度明显高于CLP组（P<0.05）。CLP术后24h内,CLP+Cit组大鼠血浆Arg水平改变不显着,CLP+Cit 24h亚组大鼠血浆Arg含量接近基线水平（Cit group）。结论:补充外源性瓜氨酸可以改善脓毒症大鼠的生存情况,提高存活率。补充外源性瓜氨酸可以使得脓毒症大鼠肝组织SOD活力升高,提高脓毒症大鼠肝脏抗氧化的能力,对肝脏具有保护作用。补充外源性瓜氨酸可以降低脓毒症早期大鼠肝脏中MDA水平,减轻肝脏受损伤程度。外源性瓜氨酸可以减少脓毒症时NO的生成,提高血浆Arg含量并且使之维持在基线水平。第二部分瓜氨酸对脓毒症早期细胞因子表达的影响背景与目的:细胞因子在脓毒症的发生发展中扮演着十分重要的角色。脓毒症早期,机体处于促炎阶段,此时体内产生大量的促炎细胞因子,主要包括IL-1、IL-6、TNF-α等。这些促炎细胞因子的释放,激活机体先天性或者适应性免疫应答,进一步诱导其它细胞因子或炎症介质释放,引起“细胞因子风暴”,是造成肝损伤的重要因素。前期研究发现外源性瓜氨酸可以降低脓毒症大鼠促炎因子IL-6的表达,被视为一种安全的免疫调节途径。因此,本部分研究在前期研究的基础上,进一步全面探讨外源性瓜氨酸对脓毒症早期主要细胞因子表达的影响。方法:利用CLP脓毒症大鼠模型,将大鼠分为正常组（Normal group）,瓜氨酸组（Cit group）,CLP模型组（CLP group）以及CLP模型加瓜氨酸组（CLP+Cit group）。根据造模后大鼠被处死的时间点,CLP组和CLP+Cit组又各自分出6h,12h,24h三个时间点亚组。利用Luminex悬浮液态芯片技术对各组大鼠血清中细胞因子的浓度进行检测,总共包括27种细胞因子和趋化因子:EGF,Eotaxin,Fractalkine,G-CSF,GM-CSF,GRO/KC/CINC-1,IFN-γ,IL-1α,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12（p70）,IL-13,IL-17A,IL-18,IP-10,Leptin,LIX,MCP-1,MIP-1α,MIP-2,RANTES,TNF-α和VEGF。结果:悬浮液态芯片检测细胞因子得到的标准曲线以及质控参数结果均满意。细胞因子浓度结果显示,CLP 6h亚组大鼠血清中所有检测的27种细胞因子浓度都高于正常组,其中21种细胞因子的浓度比较存在统计学差异（P<0.05）。其余6种细胞因子IL-13,Fractalkine,LIX,IL-18,VEGF,IL-12（p70）在CLP 6h亚组中的浓度同样高于正常组,但不存在统计学差异。在CLP造模后24h内,总共检测的27种细胞因子中,20种细胞因子的血清浓度水平达到峰值的时间点在CLP+Cit group中晚于CLP group,包括EGF,Eotaxin,G-CSF,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12（p70）,IFN-γ,IL-17,Leptin,MCP-1,MIP-1α,MIP-2,TNF-α,VEGF,IL-13和Fractalkine。只有2种细胞因子GM-CSF和IP-10的浓度峰值在CLP+Cit group中出现得早于CLP group。此外在CLP术后6h时,促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6在CLP6h亚组大鼠血清中的浓度明显高于CLP+Cit 6h亚组（all P<0.05）。而在造模后24h时间点上,主要的抗炎因子IL-4和IL-10在CLP+Cit 24h亚组大鼠血清中的浓度比CLP 24h亚组高出5倍左右,其中血清IL-4的比较存在统计学差异（P<0.05）结论:芯片结果表明我们实验中CLP脓毒症大鼠模型建立效果满意。补充外源性瓜氨酸可以延缓脓毒症早期体内细胞因子和趋化因子的释放。补充外源性瓜氨酸使得脓毒症早期机体的“促炎状态”得到缓解,减少促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的大量释放。外源性瓜氨酸使得抗炎细胞因子IL-4和IL-10的释放延迟。第三部分瓜氨酸对脓毒症大鼠STAT1/STAT3信号通路的影响背景与目的:JAK/STAT信号通路是多种炎症细胞因子的共同信号通路,在脓毒症中发挥着举足轻重的作用。其中STAT1和STAT3在脓毒症中相关作用的研究报道尤为突出,被认为是与脓毒症关系最为密切的STAT家族成员,参与许多炎症因子的信号传导过程。本部分研究在前一部分研究的基础上,探讨补充外源性瓜氨酸对脓毒症大鼠STAT1/STAT3信号通路的影响。方法:利用CLP脓毒症大鼠模型,将大鼠分为CLP模型组（CLP group）以及CLP模型加瓜氨酸组（CLP+Cit group）。根据造模后大鼠被处死的时间点,CLP group和CLP+Cit group又各自分出6h,12h,24h三个时间点亚组。利用实时荧光定量PCR技术检测CLP group和CLP+Cit group大鼠造模术后6h,12h,24h三个时间点肝脏组织中STAT1和STAT3的m RNA表达水平。利用免疫印迹方法检测CLP group和CLP+Cit group大鼠肝脏组织中STAT1和STAT3的蛋白表达水平以及磷酸化水平。结果:在术后6h,12h,24h三个时间点,STAT1和STAT3 m RNA相对表达量在CLP group和CLP+Cit group之间都不存在显着统计学差异（P>0.05）。同样在这三个时间点上,CLP group和CLP+Cit group大鼠肝脏组织中STAT1和STAT3蛋白表达水平也不存在统计学差异（P>0.05）。但是,CLP+Cit 6h和12h亚组大鼠肝脏组织STAT1和STAT3的磷酸化水平则明显低于CLP 6h和12h亚组（P<0.05）。结论:在CLP诱导的脓毒症大鼠中,补充外源性瓜氨酸不影响STAT1和STAT3的m RNA水平及蛋白表达水平,但是可以下调脓毒症早期STAT1和STAT3蛋白的磷酸化水平。
李俊[8]（2010）在《安宫牛黄丸对脓毒症大鼠JAK/STAT通路的干预作用》文中研究表明目的：在成功复制脓毒症动物模型基础之上,从分子细胞层面探讨脓毒症的发病机制,并采用安宫牛黄丸进行干预,观察安宫牛黄丸对脓毒症大鼠的保护作用,并在此基础上观察安宫牛黄丸对脓毒症早期炎症介质TNF-α、晚期炎症介质HMGB-1的mRNA表达的影响以及对JAK/STAT通路活化的影响,从分子水平探索安宫牛黄丸治疗脓毒症的机制和深层次靶点,为中医药治疗脓毒症的机理研究能够深入到分子水平、为丰富和发展中医温病学治法理论的科学内涵、阐述中医名方安宫牛黄丸治疗温热病危重症候（脓毒症）的现代药理机制、为进一步探索中西医结合治疗高发病率、高病死率重大疾病脓毒症的方案打下理论基础。方法：采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症动物模型。SPF级大鼠90只,雌雄各半,随机分为5组,（1）正常对照组（n=10）,麻醉后取血,处死取材待测；（2）模型组（n=20）,于CLP前0.5h,CLP后6h,以10ml／kg体重灌胃蒸馏水,并于术后24h取血、处死取材待测；（3）安宫牛黄丸低、中、高剂量干预组各20只（n=60）,于CLP前0.5h,CLP后6h,分别以1.0g／kg、2.0g／kg、3.0g／kg体重灌胃给药,并于术后24h取血、处死取材待测。同时观察各组动物24小时内死亡率及一般表现；动物尸体解剖腹腔感染程度；检测术后第6h、12h、24h动物肛温；血分析仪检测术后24小时动物白细胞计数；全自动生化分析仪测定血清ALT、AST、BUN、Crea、TB水平；酶学分光光度法测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量；显色基质鲎试剂测定血浆内毒素含量；半定量RT-PCR法检测肝脏、肺脏、肾脏STAT1、STAT3、TNF-α、HMGB-1 mRNA的表达；EMSA法检测肝脏、肺脏STAT1、STAT3 DNA结合活性。结果：采用CLP法复制脓毒症动物模型,动物术后6小时后病态逐渐明显,并开始出现死亡,动物活动减少,不再合群取暖,嗜睡,竖毛,不饮水,有的出现呼吸急促,脓尿,腹泻,眼角渗出物等,24小时的累积死亡率达到了55%；从动物尸检发现腹腔感染程度比较严重；模型动物一直处于一个低温状态（中心体温<36℃）并出现了白细胞减少症（外周血白细胞计数或<4×109／L）,并同时伴有主要脏器的严重损害（血清ALT、AST、TB水平显着高于正常对照组动物、肺脏MPO活性显着高于正常对照组）；脓毒症动物血浆内毒素水平要显着高于正常对照组；脓毒症大鼠各主要脏器STAT1、STAT3 DNA活性显着升高,JAK/STAT通路高度活化,同时早期炎症介质TNF-α、晚期炎症介质HMGB-1的mRNA表达显着上调。安宫牛黄丸能够改善脓毒症大鼠的一般表现,显着降低脓毒症大鼠的死亡率,提高脓毒症休克时大鼠的体温,提高脓毒症大鼠的白细胞计数,安宫牛黄丸具有降低脓毒症大鼠血清ALT、AST水平的趋势,能够显着降低脓毒症大鼠血清TB水平,降低脓毒症大鼠肺脏MPO活性,降低脓毒症大鼠血浆内毒素含量；安宫牛黄丸能够显着下调JAK/STAT通路中STAT1和STAT3的mRNA表达,能够显着减弱STATs RNA的结合活性,显着降低JAK/STAT通路的活化程度,同时还能显着下调TNF-α和HMG-1mRNA的表达。结论：采用CLP法能够成功复制脓毒症大鼠模型；大鼠脓毒症的发病机制可能与JAK/STAT通路高度活化以及由此通路激活的早期TNF-α、晚期炎症介质HMGB-1等炎症介质释放有关,并由此而导致了炎症反应失控,最终可能引起脏器的损害,引发MODS、脓毒症休克等。安宫牛黄丸能够降低脓毒症大鼠模型的死亡率,提高脓毒症休克时大鼠的体温,提高脓毒症大鼠的白细胞计数,对脓毒症大鼠整体有较好的保护作用。同时,安宫牛黄丸能够具有降低脓毒症大鼠血清ALT、AST水平的趋势,能够显着降低脓毒症大鼠血清TB水平,降低脓毒症大鼠肺脏MPO活性、血浆内毒素含量,对脓毒症大鼠主要脏器功能有明显的改善作用,这可能是安宫牛黄丸治疗脓毒症的机制之一。安宫牛黄丸能够显着下调脓毒症大鼠肝脏、肺脏、肾脏等主要脏器中早期炎症介质TNF-α和晚期炎症介质HMGB-1 mRNA表达；能够显着下调脓毒症大鼠肝脏、肺脏、肾脏等主要脏器中STAT1、STAT3 mRNA表达；还能显着降低JAK/STAT通路中STAT1和STAT3 DNA结合活性,降低JAK/STAT通路的活化程度。这从分子水平进一步阐明了安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机制,为安宫牛黄丸在危重病急救领域中的应用提供了理论基础。
杨丽萍[9]（2008）在《JAK/STAT3通路与MAPK通路协同调节早期炎症介质TNF-α转录活性》文中进行了进一步梳理在脓毒症的早期,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和信号转导及转录激活因子3（STAT3）通路分别被直接和间接的激活。MAPK通路是真核细胞介导细胞外信号到细胞内反应的重要信号转导系统;Janus激酶/信号转导和转录激活因子（JAK/STAT）通路是脓毒症中重要的信号通路之一,参与多种重要炎症因子的信号转导及调控。在机体的脓毒性反应中内毒素（脂多糖,LPS）起触发剂的作用,它激活MAPK通路后,肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素1β（IL-1β）等多种炎性细胞因子大量生成,其具体机制已基本清楚。其中TNF-α作为一种重要的早期炎症介质,又间接激活JAK/STAT途径,STATs活化后直接进入核内参与LPS诱导的基因表达。在这一病理过程中,STAT3被激活,晚期炎症介质——高迁移率族蛋白B1（HMGB1）合成和释放增加,这两者均可引起TNF-α的表达增强,但其具体信号转导机制仍不清楚。许多资料表明,参与脓毒症的信号通路之间存在着复杂的交汇作用,其中STAT3蛋白序列中含有简单、高度保守的MAPK磷酸化位点;而细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun氨基未端激酶（JNK）和p38都可以磷酸化STAT3的727位丝氨酸位点,其中ERK1/2和p38与STAT3密切相关。因此,一方面我们假设ERK2与p38和STAT3之间存在相互作用,并在LPS介导TNF-α的基因表达方面具有调节作用;另一方面,本研究拟进一步探讨STAT3和HMGB1在TNF-α启动子的作用位点,为深入认识HMGB1相关信号通路的分子基础及其干预途径提供理论依据。为了验证第一方面的假设,我们应用免疫共沉淀的方法对p38与STAT3、ERK2与STAT3的结合情况进行了研究,结果发现,p38与STAT3、ERK2与STAT3在体内均存在相互作用。在此基础上,我们对这种相互作用在LPS介导TNF-α基因表达中的机制进行了探讨。为了进行免疫共沉淀实验,首先将人的p38和ERK2利用特异性引物扩增得到,并将其克隆到带有HA标签的pcDNA3载体上。然后将Flag-STAT3分别和HA-p38与HA-ERK2质粒共同转染293T细胞后,将细胞裂解并进行免疫共沉淀。结果证实,在细胞的上清中用抗Flag抗体偶合磁珠检测到STAT3蛋白表达,其后使用抗HA抗体分别检测到p38/ERK2蛋白表达,说明STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,为下一步实验奠定了基础。在将HA-p38和Flag-STAT3与TNF-α启动子全长报告基因共同转染293T细胞后,检测它们是否共同协调TNF-α启动子的活性。结果发现,p38和STAT3在刺激前后不仅单独可以调节TNF-α启动子的活性,而且可以协同调节其活性;在将HA-ERK2和Flag-STAT3与TNF-α启动子全长报告基因共同转染293T细胞后,检测它们是否共同协调TNF-α启动子的活性。结果显示,ERK2和STAT3在刺激前后不仅单独可以调节TNF-α启动子的活性,而且可以协同调节其活性。在RNA干扰实验中观察如果阻断STAT3通路,p38/ERK2和STAT3的协同作用将被降低,TNF-α的合成将随之减少。为了证实这一想法,将STAT3的干扰质粒与p38/ERK2和STAT3质粒混合物共同转染细胞,进行TNF-α启动子全长报告基因的活性检测。结果发现,如果应用STAT3的干扰RNA抑制STAT3的表达,p38/ERK2和STAT3对TNF-α的协同效应将被抑制。为了探讨STAT3在TNF-α启动子的作用位点,我们首先将Flag-STAT3与全长TNF-α启动子报告基因共同转染COS-7细胞,观察STAT3作用的剂量-效应。结果证实,STAT3对TNF-α基因的表达不受LPS调节,无论是否有LPS刺激,随着STAT3剂量的增加,TNF-α基因的表达亦随之增加。在将200 ng/ml浓度的Flag-STAT3质粒分别和不同长度的TNF-α启动子报告基因质粒共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察不同片段的TNF-α启动子活性。结果发现,95 bp片段的TNF-α缺失突变体作用最明显,增加了6.9倍。其次,我们分别构建了70 bp、75 bp、80 bp和85 bp片段的TNF-α缺失突变体——pTNF-α（70bp）、pTNF-α（75 bp）、pTNF-α（80 bp）和pTNF-α（85 bp）,并将它们与Flag-STAT3共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察到85 bp片段的活性与95 bp片段相似,当片段到达80 bp时,活性降低到对照水平。为了进一步了解其精确结合位点,我们将85 bp片段突变体的81和82位碱基突变,检测其对TNF-α活性影响,发现启动子活性下降。最后,为了证明STAT3的潜在结合位点在80 bp到85 bp之间,且81和82位这两个位点的突变确实改变了STAT3对TNF-α启动子活性,我们进行凝胶迁移阻滞实验,观察到TNF-α启动子62-85 bp的野生型γ-p32标记的探针可以与核蛋白STAT3结合,而突变的62-85 bp标记的探针不能与核蛋白STAT3结合。在探讨HMGB1在TNF-α启动子的作用位点实验中,我们首先将人的HMGB1构建到带有HA标签的pcDNA3载体上。其次,HA-HMGB1与全长TNF-α启动子报告基因共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察HMGB1作用的剂量-效应。结果发现,随着HMGB1从100 ng/ml增加到1500 ng/ml,TNF-α启动子的活性先增加后降低。在将300ng/ml HMGB1与不同片段TNF-α报告基因共同转染细COS-7细胞并用LPS刺激后,发现在启动子95-120碱基之间的一个经典的内毒素作用位点NF-IL6位点可能是HMGB1作用于TNF-α启动子的主要作用部位。通过上述研究可以得出以下结论:1.STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用。2.在LPS刺激下,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应。3.在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低。4.STAT3对TNF-α的基因表达的调节不依赖LPS刺激。5.STAT3在TNF-α启动子的潜在结合位点在80到85碱基片段之间。6.HMGB1对TNF-α基因表达的调节依赖于LPS刺激。7.HMGB1在TNF-α启动子的可能作用部位在经典的内毒素作用位点——NF-IL6位点。
钟丹[10]（2008）在《清瘟败毒饮对脓毒症患者临床疗效、部分血清免疫指标影响的观察》文中研究表明目的:探讨清瘟败毒饮对脓毒症患者的临床疗效以及部分血清免疫学指标的影响。方法:选取2005年11月至2008年2月成都中医药大学附属医院ICU收治的符合脓毒症诊断标准、中医辨证为气营两燔的患者49例,采用随机、单盲、对照的临床试验方法设计,随机分为中西医结合治疗组（治疗组）24例,单纯西医治疗组（对照组）25例,分别采用中药清瘟败毒饮加西医常规治疗与单纯西医治疗组对比,观察治疗组及对照组治疗前后临床疗效,进行中医症状积分、APACHEⅡ评分比较;血清IgG、IgA、IgM、C3、CRP、TNF-a浓度变化观察。结果:治疗组和对照组中医症状积分、APACHEⅡ评分比较,以及血清C3、CRP、TNF-a浓度下降幅度明显大于对照组,有显着的统计学意义。对照组和治疗组临床疗效比较,总有效率分别为:70.83%、64.00%,经统计学比较无显着差别（P＜0.05）。结论:清瘟败毒饮结合西医常规治疗脓毒症临床疗效确切,可降低血清C3、CRP、TNF-a水平,优于单纯西医治疗组,抑制脓毒症患者过度免疫应答,减少过度免疫应答对机体自身的损害,值得临床进一步研究。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 第一部分 人紧密连接蛋白ZO-1 的生物信息学分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 第二部分 20(S)-原人参二醇在脂多糖诱导的内皮屏障损伤中的作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 人参皂苷在脓毒症治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 生脉注射液UPLC指纹图谱的建立 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 色谱条件 |
| 3.2 精密度试验 |
| 3.3 稳定性试验 |
| 3.4 重复性试验 |
| 3.5 指纹图谱建立及相似度评价 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 生脉注射液UPLC色谱图的建立 |
| 4.2 指纹图谱精密度试验考察结果 |
| 4.3 指纹图谱稳定性试验考察结果 |
| 4.4 指纹图谱重复性试验考察结果 |
| 4.5 参照峰选择与共有峰标定 |
| 4.6 指纹图谱相似度评价结果 |
| 5 小结与讨论 |
| 第二章 基于化学计量学的生脉注射液成分含量研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 色谱条件 |
| 3.2 线性关系考察 |
| 3.3 精密度试验 |
| 3.4 稳定性实验 |
| 3.5 重复性试验 |
| 3.6 加样回收率试验 |
| 3.7 含量测定 |
| 3.8 主成分分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 生脉注射液3D采集图谱 |
| 4.2 生脉注射液各成分特征紫外光谱图 |
| 4.3 线性关系考察结果 |
| 4.4 精密度考察结果 |
| 4.5 稳定性考察结果 |
| 4.6 重复性考察结果 |
| 4.7 加样回收率考察结果 |
| 4.8 含量测定结果 |
| 4.9 主成分分析结果 |
| 5 小结与讨论 |
| 第三章 基于敏感生物活性指标的生脉注射液质量控制方法研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 基于DPPH自由基清除能力的生脉注射液质量控制方法研究 |
| 3.1.1 实验过程 |
| 3.1.2 方法学考察 |
| 3.2 基于抗炎活性(抑制NO释放能力)对生脉注射液的质量控制方法研究 |
| 3.2.1 实验方法 |
| 3.2.2 方法学考察 |
| 4 实验结果 |
| 5 小结与讨论 |
| 第四章 基于实验及网络药理学的生脉注射液抗脓毒症机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 动物 |
| 2.2 仪器与药品 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 生脉注射液抗脓毒症小鼠炎症反应实验 |
| 3.2 生脉注射液有效成分在人体内靶标预测 |
| 3.3 脓毒症疾病靶点的收集 |
| 3.4 药物作用靶标-脓毒症疾病蛋白相互作用网络图的构建 |
| 3.5 生脉注射液抗脓毒症治疗作用关键靶标的筛选 |
| 3.6 KEGG及GO分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 生脉注射液抗脓毒症小鼠炎症反应实验结果 |
| 4.2 生脉注射液药物作用靶标-脓毒症疾病蛋白相互作用网络图的构建 |
| 4.3 生脉注射液抗脓毒症治疗作用关键靶标的预测及分析 |
| 4.4 KEGG及GO分析 |
| 5 小结与讨论 |
| 第五章 基于代谢组学的生脉注射液治疗脓毒症作用机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 脓毒症大鼠模型复制、给药及代谢样本制备 |
| 3.2 代谢组学分析条件 |
| 3.3 代谢组学数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 一般情况观察结果 |
| 4.2 大鼠尿液代谢轮廓分析 |
| 4.3 代谢通路分析 |
| 5 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 1 结论 |
| 2 不足之处 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 中药复方药效物质基础研究方法及应用实例 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介及发表文章 |
| 1 脓毒症免疫失衡机制 |
| 1.1 HMGB1受体 |
| 1.1.1 RAGE RAGE是一种多配体的膜受体, 由 |
| 1.1.2 Toll样受体 |
| 1.1.3 其他受体 |
| 1.2 HMGB1相关信号通路 |
| 1.2.1 正调节信号转导通路 |
| 1.2.2 负调节信号转导通路 |
| 2 脓毒症的中医治疗进展 |
| 2.1 脓毒症的中医病因病机 |
| 2.2 脓毒症的中医治疗进展 |
| 2.2.1 中药单体成分治疗脓毒症 |
| 2.2.2 中药复方治疗脓毒症 |
| 中文摘要 Abstract 前言 第一部分 理论研究 |
| 一、现代医学对脓毒症肝损伤的认识 |
| 1 脓毒症肝损伤的发病机制 |
| 2 脓毒症肝损伤的表现 |
| 3 脓毒症肝损伤的治疗 |
| 4 小结 |
| 二、祖国医学对脓毒症肝损伤的认识 |
| 1 现代中医对脓毒症肝损伤病因病机的认识 |
| 2 现代中医对脓毒症肝损伤辨证体系的研究 |
| 3 现代中医药治疗脓毒症肝损伤的现状 |
| 4 小结 |
| 三、犀角地黄汤治疗脓毒症肝损伤的理论依据 |
| 1 脓毒症和卫气营血辨证的对应关系 |
| 2 犀角地黄汤的临床应用 |
| 3 研究设想 |
| 参考文献 第二部分 临床研究 |
| 一、脓毒症肝损伤患者的中医证候分析 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 二、犀角地黄汤对脓毒症肝损伤患者的临床疗效 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 第三部分 实验研究 |
| 一、犀角地黄汤对脓毒症肝损伤大鼠肝功能影响及其抗氧化作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 二、犀角地黄汤对脓毒症细胞因子表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 三、犀角地黄汤对脓毒症肝损伤大鼠STAT1/STAT3信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 第四部分 全文总结 |
| —、结论 |
| 二、创新 |
| 三、问题与措施 附录 攻读博士学位期间取得的研究成果 致谢 作者简介 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料 |
| 1. 主要实验仪器 |
| 2. 主要实验试剂 |
| 3. 配制试剂 |
| 4. 质粒、细胞、细菌和实验动物 |
| 5. 使用统计软件和统计方法 |
| 第一部分 Setd4基因敲除对内毒素血症小鼠血清细胞因子水平的影响 |
| 1. 实验目的 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二部分 Setd4基因敲除对MAPK和NF-κB信号转导通路的影响 |
| 1. 实验目的 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三部分 SETD4甲基化组蛋白位点及转移酶功能研究 |
| 1. 实验目的 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 在读博士连读期间发表的文章 |
| 致谢 |
| 个人简历 摘要 ABSTRACT 前言 参考文献 第一部分 |
| 瓜氨酸对脓毒症大鼠肝损伤及Cit-NO循环的影响 实验材料 实验方法 结果 讨论 小结 参考文献 第二部分 |
| 瓜氨酸对脓毒症早期细胞因子表达的影响 实验材料 实验方法 结果 讨论 小结 参考文献 第三部分 |
| 瓜氨酸对脓毒症大鼠STAT1/STAT3信号通路的影响 实验材料 实验方法 结果 讨论 小结 参考文献 全文总结 附录 |
| 1 附录 |
| 2 综述 参考文献 致谢 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 一、研究背景 |
| 二、立题依据 |
| 三、研究内容 |
| 四、技术路线 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 脓毒症的现代医学研究进展 |
| 一、脓毒症的发病机制 |
| 二、脓毒症的治疗进展 |
| 第二章 脓毒症的中医药研究进展 |
| 一、中医对脓毒症的认识 |
| 二、中医药对脓毒症的治疗进展 |
| 第三章 安宫牛黄丸的研究进展 |
| 一、安宫牛黄丸的药理研究 |
| 二、安宫牛黄丸的临床应用 |
| 第四章 JAK/STAT通路、TNF-α及HMGB-1与脓毒症的关系研究进展 |
| 一、JAK/STAT通路与脓毒症的关系研究进展 |
| 二、TNF-α与脓毒症的关系研究进展 |
| 三、HMGB-1与脓毒症的关系研究进展 |
| 第五章 小结与回顾 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠的保护作用 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二章 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠TNF-α和HMGB-1表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三章 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠JAK/STAT通路mRNA表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四章 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠JAK/STAT通路DNA结合活性的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 讨论与结论 |
| 一、脓毒症动物模型的建立 |
| 二、安宫牛黄丸对脓毒症大鼠的保护作用 |
| 三、安宫牛黄丸对脓毒症大鼠TNF-α和HMGB-1 mRNA表达的影响 |
| 四、安宫牛黄丸对脓毒症大鼠JAK-STAT通路的干预作用 |
| 五、本研究创新性 |
| 六、结论 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ |
| 附录Ⅱ |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 STAT3通过与MAPK相互作用调节早期炎症介质TNF-α启动子的转录活性 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 HMGB1和STAT3在TNF-α启动子上作用位点的探索 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 清瘟败毒饮对脓毒症患者临床疗效、血清免疫学指标影响研究 |
| 1 试验目的 |
| 2 课题来源 |
| 3 病例选择和研究方法 |
| 4 疗效评定方法 |
| 5 统计学处理 |
| 6 结果 |
| 7 讨论 |
| 8 问题与展望 |
| 文献综述 |
| 1 中医学对脓毒症认识及研究进展 |
| 2 脓毒症的现代研究概况及进展 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附页 |
