卢耀军,赵瑞平,孙凯,乌日娜,韩瑞娟[1]（2016）在《共价结合生长因子胶原补片对人骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响》文中指出目的制备与碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）共价结合的胶原蛋白海绵补片,探讨其对人骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响。方法制备胶原补片,随机分为空白对照组和实验组。空白对照组胶原补片在无菌条件下经碳化二亚胺处理,实验组胶原补片于室温条件下利用N-羟基硫代琥珀酰亚胺+磷酸盐缓冲液+1-（3-二甲基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液处理,并与b FGF和VEGF共价结合。保存后1、3、7、14、21、28天采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中b FGF和VEGF含量。将人骨髓间充质干细胞均匀接种于两组胶原补片上,分别进行细胞计数、MTT检测以及溴脱氧尿苷单克隆抗体增殖实验,并采用SMA免疫荧光染色检测细胞分化情况,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况。结果实验组胶原补片与VEGF和b FGF结合率均显着高于空白对照组（P<0.05）。绘制释放曲线并分析发现,实验组生长因子处于稳定状态,仅有极少数发生解离释放。制备后28天,大部分生长因子存留于胶原补片上。随时间推移,两组胶原补片上骨髓间充质干细胞均呈增长趋势。接种后3天、7天比较显示,实验组胶原补片上碳化二亚胺数量均显着多于对照组（P<0.05）。经RT-PCR检测和SMA免疫荧光染色发现,与空白对照组相比,实验组胶原补片上细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平均显着下调（P<0.05）。结论 b FGF和VEGF共价结合的胶原补片可以对人骨髓间充质干细胞产生较大影响,有效促进其增殖并抑制分化。
徐瑞剑,王志强[2]（2015）在《基因转染骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的实验研究》文中研究表明目的探索一种行之有效的方法增强细胞黏附力,加快组织工程心脏瓣膜的体外构建。方法通过纤维连接蛋白羧基端细胞结合域（FnCBD64）的原核表达、提取和纯化,构建FnCBD64基因重组腺病毒载体Ad.FnCBD64,并进行绵羊骨髓基质干细胞（BMSCs）的体外分离培养及生物学特性分析,制备去细胞猪主动脉瓣,在无菌条件下将脱细胞瓣叶圆片置入96孔板中（心室面向上）,分别给予Fn、FnCTD64牛血清白蛋白（BSA）预先包埋,未预包埋作为对照组。细胞悬液接种,每只瓣叶种植细胞数为4×105个。在开始种植细胞的第8天取瓣叶进行细胞计数,电镜扫描MTT检测。结果对照组在经过脉动冲刷实验高流量液体的冲刷以后,其表面的骨髓间质干细胞几近完全脱落,电镜扫描下为裸露的瓣膜支架;而预涂FnCBD64组虽然经过高流量的流体冲刷,有稀疏的细胞残留,细胞间有瓣膜支架的结构;转染Ad.FnCBD64组瓣膜表面存留的细胞比预涂FnCBD64组明显多,某些部位细胞呈复层生长,细胞可见排列极性改变,有向活体内细胞转化的趋势。结论预涂FnCBD64和转染Ad.FnCBD64均能明显增强BMSCs在去细胞猪主动脉瓣叶及整体瓣膜上的黏附,而转染Ad.FnCBD64的效果更好。
苗青[3]（2014）在《层粘连蛋白增强脱细胞真皮基质支架上骨髓间充质干细胞粘附力的实验研究》文中研究指明目的：观察层粘连蛋白（Laminin,LN）、牛血清蛋白（Bovine serum albumin, BSA）对脱细胞真皮基质（Acellular dermal mat rix, ADM）支架上骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesechymal stem cells, BMSCs）黏附的影响,为组织工程应用提供一定的实验基础。方法：①培养正常人的BMSCs制成细胞悬液,原代及传代培养形态学观察；采用EnVision二步法标记,鉴定BMSCs分化为成纤维母细胞样细胞的特征。②无菌条件下将脱细胞真皮基质置入12孔板中（真皮面向上）,实验组分别给予Ln、BSA预先包埋,对照组不做预包埋处理。接种细胞悬液,在种植细胞后第9天取真皮片进行细胞计数和MTT检测。结果：经Ln预涂组其MTT的0D吸光值明显高于预涂BSA及对照组。结论：LN能促进BMSCs在脱细胞真皮基质上的聚集、黏附及增殖,为组织工程生物瓣的研究提供了一定的实验基础。
蒲磊,李亚雄,蒋立虹[4]（2014）在《组织工程心脏瓣膜种子细胞:来源及应用》文中研究指明背景:应用机械瓣和生物瓣行瓣膜置换是治疗终末期瓣膜病的有效手段,然而他们的临床应用受到多个因素的限制。具备生物活性的组织工程心脏瓣膜有潜力克服机械瓣和生物瓣的不足,选择适宜的种子细胞是组织工程心脏瓣膜研究的一个重要方面,许多成熟的体细胞和干细胞已被用于构建组织工程心脏瓣膜,然而尚未获得理想的结果。目的:以构成瓣膜的细胞成分为基础,对用于构建组织工程心脏瓣膜的种子细胞、体外细胞种植方法的研究进行综述。方法:由第一作者基于PubMed数据库和万方数据库应用计算机检索2000年1月至2012年12月相关的文章,英文检索词为"Tissue engineering,Heart valves,Cell",中文检索词为"组织工程,心脏瓣膜,细胞",优选文章内容与组织工程心脏瓣膜种子细胞直接相关,具备针对性和权威性,发表在权威杂志的文章共39篇进行综述。结果与结论:瓣膜的细胞成分主要是内皮细胞和间质细胞,早期人们常用内皮细胞和成纤维细胞构建组织工程瓣膜,随着干细胞研究的深入,应用搏动性生物反应器种植间充质干细胞具有构建的组织工程瓣膜的潜力。
孙艳丽,韩宏光,黄带发,贺顺川,李予杰[5]（2013）在《组织工程心脏瓣膜的构建:现状与前景》文中研究说明背景:目前临床上应用的心脏生物瓣和机械瓣都存在一些缺陷和不足,而组织工程心脏瓣膜有可能避免这些问题的出现,成为瓣膜替代物的理想选择。目的:探讨构建组织工程心脏瓣膜的实验研究进展。方法:应用数据库检索的方法分析关于组织工程心脏瓣膜的实验研究文献,组织工程心脏瓣膜的三大要素为种子细胞、支架材料和细胞种植。结果与结论:心脏瓣膜修复和置换是目前治疗心脏瓣膜性疾病的主要外科手段。目前,主要用于构建组织工程心脏瓣膜的种子细胞有血管内皮细胞、内皮祖细胞以及骨髓间充质干细胞等。经脱细胞处理的支架具有良好的生物力学性能和组织相容性,细胞种植后支架表面会形成一层连续的细胞层,其构建的组织工程心脏瓣膜是可行的。组织工程心脏瓣膜有着良好的应用前景,但目前还有很多问题需要解决,还处于研究的初级阶段。
苗青,刘鹏,丰波[6]（2013）在《组织工程心脏瓣膜的研究进展》文中研究表明心脏瓣膜疾病给广大患者带来了无尽的痛苦,大多数都是由于心脏瓣膜结构的破坏和功能的失调而造成的,目前最有效的手段就是通过手术治疗行瓣膜置换,而现有的人工心脏瓣膜主要有两种,一种是机械瓣膜,植入后患者需终生服用抗凝药物,需要经常抽血化验来调整抗凝药物的用量,而抗凝药物服用的过量或不足都会导致出血或血栓形成,带来新的病痛。另一种是生物瓣膜,植入后不需要终生抗凝,但是生物瓣膜没有自我修复功能其组织会逐渐衰退,导致使用期限的缩短,在青
潘震[7]（2013）在《材料表面拓扑形貌的细胞响应以及PLGA组织工程多孔支架的制备与软骨组织修复研究》文中进行了进一步梳理软骨缺损修复是再生医学领域非常有挑战性的一个课题。组织工程学的出现,将可能使人们从传统的器官移植和植入这种以伤补伤的方法进入到一个器官制造的新时代,其为软骨缺损修复提供了新的思路和方法。软骨组织的损伤或者缺损往往会伴随软骨下骨的改变,近年来,采用双层支架来模拟关节软骨和软骨下骨各自内在结构和生理功能以实现软骨和软骨下骨的同时修复成为一个新思路,但关于双层支架的很多基本问题还有待于进一步探索。未来生物材料的设计需要对于材料的细胞响应有深入的认识。近几十年来的相关研究已经大大加深了人们对于“生物材料”涵义的理解,同时也提供了更多探索的方向。材料的诸多因素可以影响细胞行为,其中,表面形貌的效应普遍存在,并且由于形貌改变可不涉及化学成份的改变,故相应的材料改性容易最终获得批准应用。本博士论文以聚乳酸—羟基乙酸共聚物（PLGA）这种有应用价值的可降解高分子为基质材料,开展了生物医用材料方面的研究。论文首先从二维平面探索微米拓扑形貌的细胞响应行为并得出基本规律,继而将其应用于三维多孔支架中,最后再用组织工程双层支架进行关节软骨和软骨下骨同时修复的动物实验。该研究有助于理解材料物理因素对于细胞的作用,为生物材料设计提供指导。本论文的主要创新性工作包括以下几方面：1.制备了一系列不同尺寸的微米阵列,研究其细胞响应行为,并发现适合骨髓基质干细胞黏附的尺寸。本论文在二维PLGA膜表面制备了一系列不同高度（深度）的微柱（微坑）阵列,然后研究骨髓基质干细胞在这些拓扑形貌表面的生长情况。根据实验结果,我们发现1μm高度（或深度）的微柱（或微坑）阵列相对于其它高度（或深度）的阵列更利于细胞的生长。进一步我们比较了1μm微坑和1μm微柱,发现1μm微柱比微坑和光滑膜更适合骨髓基质干细胞的黏附。2.利用材料表面微柱阵列实现了对于细胞核严重自我变形的调控。本论文工作过程中,意外发现新生大鼠骨髓基质干细胞细胞核在特定高度的PLGA微柱阵列表面能发生严重自我变形；细胞核变形并非是由细胞核的重力作用引起的,而可能是由细胞铺展时的内应力导致；尽管骨髓基质干细胞发生了如此严重的细胞核变形,其仍具备增殖和成骨分化的能力。本文通过设计不同微柱阵列,成功控制了细胞核的形状,在国际上首次实现了哑铃形、方形、十字交叉等异常细胞核形状。此外进一步研究了另外五种细胞（Hela、PC12、NIH3T3、MC3T3、 Chondrocyte）,发现细胞在微柱阵列表面的细胞核变形现象具有普适性；同时其响应程度具有细胞类型依赖性。3.通过设计新型致孔剂实现了三维PLGA多孔支架内部孔结构以及孔壁拓扑形貌的控制。基于粒子浸出技术,首次通过对石蜡球致孔剂表面物理修饰的办法调控了组织工程支架内表面微米拓扑形貌。在石蜡球这种致孔剂粒子表面通过氯化钠粒子的撞击制备出微米尺寸的凹坑,然后再把这些微米拓扑形貌转移到三维多孔支架孔表面,从而获得微米凸起结构。三维多孔支架中的这些微米凸起能促进新生Sprague Dawley （SD）大鼠骨髓基质干细胞的黏附,同时并不影响干细胞的增殖和分化。此外,还首次发明“糖粘盐”这种新型致孔剂,使得制备得到的组织工程支架具有规则的球形孔形状以及良好的连通性,并且孔表面具有微米拓扑形貌。制备得到的组织工程多孔支架利于SD大鼠骨髓基质干细胞的生长。这些研究成果为组织工程和再生医学中的材料设计提供新的视野和技术。4.设计了PLGA双层多孔支架,并通过合作研究,探讨了支架物理参量对于体内关节软骨修复效果的影响。在动物实验之前,本论文按照国家标准“医疗器械生物学评价”的相关要求设计了PLGA支架材料体内外的生物相容性实验,并研究了其在新西兰大白兔体内的降解行为。通过实验,发现PLGA支架材料细胞毒性小,血液相容性好,且不会在骨/软骨缺损处引起明显的炎症反应,同时具有合适的降解速率。另外,制备了双层支架以修复新西兰大白兔骨/软骨缺损,并首次实现对双层支架中各层最优孔隙率、孔径探索。设计并制备好双层支架后,通过合作研究,将PLGA双层支架植入新西兰大白兔骨/软骨缺损处（直径4mm,深度5mm）,以检验各组支架对其修复效果。术后12周,从大体观、H&E染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色、组织学评分和相关基因的表达这些结果中我们得出：软骨段支架孔隙率为92%,骨段支架孔隙率为77%的双层支架及软骨段孔径为100-200μm,骨段孔径为300-450μm的双层支架能实现比其它孔隙率或孔径组合更好的修复效果。除了上述工作以外,在“复旦大学博士生短期国际访学资助计划”资助下赴美国密歇根大学进行为期4个月短期交流期间,我还合成了两组分的聚酸酐,并研究了其表面溶蚀性能、制备了药物释放装置。
康凯,曲辉,汤继权,贾智博,张宇南,张春风,吴华,李仁科,蒋树林[8]（2013）在《利用人骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的体外实验》文中研究指明背景:目前临床应用的人工瓣膜,无论机械瓣还是生物瓣都存在着诸如易感染、出血和血栓形成并发症,因瓣口狭窄需再手术等自身难以克服的缺陷。理论上具有生物活性的组织工程心脏瓣膜可克服上述缺点,但种子细胞和瓣膜支架的选取尚存在争议。目的:探讨应用人骨髓基质干细胞及脱细胞猪主动脉瓣支架体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法:采用去垢剂-核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣叶细胞成分,获取施行简单先心病修补患者胸骨来源的骨髓基质干细胞,将其种植于脱细胞猪主动脉瓣支架共培养5d。结果与结论:流式细胞技术证实接种的种子细胞的表面抗原符合人骨髓基质干细胞的特征;光镜及电镜检查证实,猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除,获得完整无细胞的纤维网状支架;瓣叶去细胞前后的生物力学性能无明显变化;种植的人骨髓基质干细胞可在脱细胞猪主动脉瓣支架表面形成一层连续的细胞层;接种的人骨髓基质干细胞有向成纤维细胞分化的趋势。以上结果提示种植人骨髓基质干细胞于脱细胞猪主动脉瓣支架上,可构建出组织工程心脏瓣膜。
唐雪鹏[9]（2012）在《骨髓基质干细胞与牙周膜干细胞膜片在牙周组织再生的实验研究》文中进行了进一步梳理牙周病是牙齿支持组织，包括牙周膜、牙槽骨、牙骨质在内的炎症性疾病，若未得到及时治疗可导致牙槽骨的吸收致使牙齿脱落，它是严重危害人类牙齿和全身健康的常见口腔疾病。牙周病学的研究已成为口腔界的主要研究领域，并在此领域的研究中取得了长足的进步。但由于目前常规牙周治疗方法的局限性，尚不能再生出完整的牙周组织，而组织再生技术弥补了牙周组织再生过程中的某些不足，已开始应用于牙周再生领域。移植干细胞对组织的修复和重建能力取决于种子细胞自身的生物学特性以及宿主微环境的直接和间接的作用。目前对于组织工程中干细胞和微环境谁的主导作用更为明显尚存在争议。但总体概念是干细胞和微环境相互影响，共同介导了种子细胞的迁移、定植、分化和增殖过程。宿主植床内时空分布的各种信号分子介导了干细胞的分化和增殖；同时种子细胞通过旁分泌作用改善宿主微环境，甚至调控机体全身状况达到组织再生和修复的目的。因此，选择合适的种子细胞类型不仅关系到种子细胞本身的生物学活性，也影响着宿主微环境；而改善宿主微环境则更利于移植干细胞的存活、分化和活性的发挥。牙周膜干细胞（PDLSC）和骨髓基质干细胞（BMMSC）是具有多向分化潜能的间充质干细胞，但其再生能力受移植模式、诱导环境、宿主微环境调控等条件的影响。两种干细胞的所表现出的牙周再生能力尚不一致，近年来两种不同的干细胞在基础研究领域及临床组织器官修复领域广泛应用。因而，能否利用两种干细胞不同分化的特性在牙周组织工程中协同作用，再生出牙槽骨、牙周膜/牙骨质样组织，为应用干细胞治疗的内源性再生医学技术作为转化为临床治疗手段提供依据。为此本课题设计为以下三个部分：第一部分骨髓基质干细胞与人牙周膜干细胞膜片的制备与鉴定目的：通过有限稀释法成功分离培养人牙周膜干细胞与骨髓基质干细胞，并制备成单层细胞膜片与牙本质片和HA-TCP共培养，检测干细胞和细胞膜片的生物学活性。方法：通过流式细胞仪检测牙周膜干细胞与骨髓基质干细胞的细胞表型和细胞周期；对两种干细胞进行成骨和成脂诱导；MTT和克隆形成率检测评价其增殖能力；组织学和免疫组织化学观察单层细胞膜片的结构；将两种膜片与牙本质片和HA-TCP共培养电镜观察支架材料对膜片结构的影响。结果：1、两种干细胞具有集落化生长的趋势；2、两种干细胞成骨成脂诱导后茜素红染色和油红O染色阳性；3、制备的单层hPDLSC膜片和BMMSC膜片内大量细胞外基质沉积、细胞排列更为紧密、极性化更为明显，均强阳性表达Col-I，OCN、Lamin等细胞外基质的结构蛋白，弱表达Col-Ⅲ；4、膜片与支架材料共培养电镜结果显示膜片内细胞形态未见显着性变化，细胞复层化趋势更为明显，层间细胞间有序地连接，细胞的极性化趋势更为明显，BMMSC组可见空间分布更为广泛和致密的细胞外矿化基质的沉积。结论：本组分离培养的PDLSC和BMMSC具有间充质干细胞特性。以其为种子细胞的膜片具有丰富的细胞外基质，能够介导细胞与支架材料的吸附和定植。第二部分两种干细胞膜片复合不同支架材料体内异位再生的实验研究目的：通过将hPDLSC膜片与hBMMSC膜片复合后与牙本质片和HA-TCP共培养，并进行体内不同部位移植以评价体内及体外微环境对干细胞分化的影响。方法：通过两类单层膜片复合后与牙本质片和HA-TCP共培养，电镜和组织学动态观察膜片显微结构变化，并将hPDLSC cs、hBMMSC cs和hPDLSC/BMMSC cs进行皮下和颅骨缺损移植比较组织再生情况。结果：1、双层细胞膜片的质地更为致密，细胞结合紧密，表面大量矿化沉积，细胞与牙本质的骨架结合紧密；2、三种膜片无支架材料皮下移植均仅有质地、走形不一致的纤维组织的再生，未见矿化物质的生成；3、三种膜片复合牙本质片皮下移植均可形成不均量的矿化物沉积和纤维样组织，似牙周膜/牙骨质样结构，PDLSC组和PDLSC/BMMSC组再生的纤维穿通性更明显，表面矿化沉积更均衡；4、三种膜片复合HA-TCP皮下也形成类牙周膜/牙骨质样结构，但纤维和矿化物的沉积均差于相应的牙本质片组，以BMMSC组最差；5、颅骨缺损修复组织学结果显示植入区无明显炎症反应，炎细胞较少，缺损边缘可见大量的新生骨组织形成。结论： hPDLSC/BMMSC复合膜片能够整合两种干细胞的生物学特性，在适宜的微环境作用下更有利于干细胞向牙周再生方向定向分化。第三部分犬PDLSC/BMMSC膜片在牙周组织缺损修复再生中的实验研究目的：观察犬PDLSC cs、BMMSC cs和PDLSC/BMMSC cs对犬急性牙周缺损的再生作用。方法：分离培养犬PDLSC和BMMSC，并制备PDLSC cs、BMMSC cs和PDLSC/BMMSC cs；建立急性牙周缺损模型，进行膜片移植，组织学及影像学评价。结果：1、PDLSC和BMMSC两种干细胞都具有间充质干细胞特性；2、犬PDLSC cs和BMMSC cs的成膜速度均快于人的两种干细胞膜片；3、对PDLSC膜片、BMMSC膜片和PDLSC/BMMSC复层膜片术前术后的影像学结果比较显示：三组均有较强的骨组织再生修复能力，牙槽骨缺损均达到完全修复，术前术后牙槽骨密度、邻间牙槽嵴高度、附着丧失未见显着差异。对照组骨密度有一定程度增加，牙槽骨增加不明显。4、组织学观察显示：PDLSCs，BMMSCs及PDLSCs/BMMSCs组牙周缺损部分均有不同程度的修复和再生，而空白对照组增生不明显。结论：PDLSC cs、BMMSC cs对牙周组织再生均起着重要的作用。PDLSC/BMMSC cs能够利用两种干细胞分化特性，在牙槽骨、牙根面等复杂的牙周微环境作用下再生出牙槽骨、牙周膜/牙骨质样组织。
傅杰,蒋迎九[10]（2011）在《组织工程心脏瓣膜的研究进展》文中进行了进一步梳理心脏瓣膜置换术仍然是当前治疗心脏瓣膜病最有效的治疗方法,但目前临床应用的人工心脏瓣膜疗效却不尽如人意。随着组织工程学的兴起与发展,组织工程心脏瓣膜的研究越来越受到关注并成为研究的热点。现对组织工程心脏瓣膜研究在种子细胞的选择、支架材料的选择、瓣膜体外构建方法、动物实验与临床应用等方面取得的进展,进行综述。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 1 材料与方法 |
| 1.1实验材料 |
| 1.2实验方法[8-11] |
| 1.3观察指标 |
| 1.4统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1两组胶原补片与VEGF和b FGF结合率比较 |
| 2.2细胞增殖情况 |
| 2.3细胞分化情况 |
| 3 讨论 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 体外BMSCs的获取、培养与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2 BMSCs的获取与培养 |
| 1.3 相关表型的检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 BMSCs倒置显微镜观察 |
| 2.2 相关表型的检测 |
| 3 讨论 |
| 3.1 BMSCs |
| 3.2 BMSCs的体外分离、纯化和扩增 |
| 3.3 BMSCs传代后细胞的生物学特性 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 层粘连蛋白(Ln)促进BMSCs粘附研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2 分组 |
| 1.3 真皮基质片细胞计数 |
| 1.4 MTT检测 |
| 1.5 组织学观察 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞计数及MTT检测 |
| 2.2 BMSCs粘附后的组织学检查 |
| 2.3 扫描电镜所见 |
| 3 讨论 |
| 3.1 种子细胞间的粘附力 |
| 3.2 脱细胞真皮基质 |
| 3.3 层粘连蛋白的结构及生物学特性 |
| 3.4 MTT检测 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间已发表学术论文 |
| 文章亮点: |
| 0 引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 2 结果Results |
| 3 讨论Discussion |
| 文章亮点: |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 资料来源: |
| 资料检索公式: |
| 入选标准: |
| 2 组织工程心脏瓣膜的构建Construction of tissue-engineered heart valves |
| 2.1 构建组织工程心脏瓣膜的种子细胞 |
| 2.1.1 血管内皮细胞 |
| 2.1.2 内皮祖细胞 |
| 2.1.3 干细胞 |
| 2.2 构建组织工程心脏瓣膜的支架材料 |
| 2.2.1 Triton X-100-SD法脱猪主动脉瓣膜细胞 |
| 2.2.2 丹参酚酸B处理脱细胞猪心脏瓣膜 |
| 2.2.3聚乙二醇纳米微球改性去细胞瓣 |
| 2.3 细胞种植 |
| 2.3.1 类金刚石涂层瓣膜与犬血管内皮细胞 |
| 2.3.2 脱细胞猪主动脉瓣支架与骨髓基质干细胞 |
| 3 问题与展望Problems and prospects |
| 1 自体心脏瓣膜的组织结构及病理结构 |
| 2 组织工程心脏瓣膜 |
| 2.1 支架材料 |
| 2.1.1 高分子合成材料支架 |
| 2.1.2 天然支架材料 |
| 2.1.3 混合型支架材料 |
| 2.2 种子细胞的选择 |
| 2.2.1 血管内皮细胞 |
| 2.2.2 成纤维细胞和平滑肌细胞 |
| 2.2.3 骨髓基质干细胞 |
| 2.2.4 胚胎干细胞 (ES) |
| 2.3 种子细胞与支架材料的黏附 |
| 2.4 组织工程生物瓣膜的构建及生物反应器 |
| 2.4.1 组织工程心脏瓣膜的构建 |
| 2.4.2 生物反应器的构建 |
| 3 组织工程心脏瓣膜的动物实验和临床试验 |
| 3.1 动物实验 |
| 3.2 临床试验 |
| 4 总结 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 组织工程支架 |
| 1.1.1 主要的组织工程材料类型 |
| 1.1.1.1 天然的高聚物 |
| 1.1.1.2 人工合成的高聚物 |
| 1.1.1.3 无机材料 |
| 1.1.2 组织工程多孔支架的制备方法 |
| 1.1.2.1 改进的适度温度下热压/粒子浸出技术 |
| 1.1.2.2 常温模压/粒子浸出制备技术 |
| 1.1.2.3 常温注塑成型/粒子浸出制备技术 |
| 1.1.3 PLGA多孔支架的性能 |
| 1.1.3.1 PLGA支架材料的力学性能 |
| 1.1.3.1.1 共聚物组分的影响 |
| 1.1.3.1.2 干/湿状态的影响 |
| 1.1.3.1.3 PLGA支架孔隙率的影响 |
| 1.1.3.1.4 PLGA支架孔形状的影响 |
| 1.1.3.1.5 其它因素的影响 |
| 1.1.3.2 PLGA支架材料的降解行为 |
| 1.1.3.2.1 PLGA支架材料体外降解的三阶段 |
| 1.1.3.2.2 孔径、孔隙率对PLGA支架降解行为的影响 |
| 1.1.3.2.3 其它因素的影响 |
| 1.1.3.2.3.1 PLGA共聚物的组成 |
| 1.1.3.2.3.2 PLGA共聚物的结晶度 |
| 1.1.3.2.3.3 温度和pH |
| 1.1.3.2.3.4 力学刺激 |
| 1.1.3.2.3.5 体内降解行为 |
| 1.1.4 组织工程支架的表面修饰 |
| 1.2 材料表面拓扑形貌的细胞响应行为 |
| 1.2.1 纳米尺度拓扑形貌 |
| 1.2.1.1 细胞黏附 |
| 1.2.1.2 细胞增殖 |
| 1.2.1.3 细胞迁移 |
| 1.2.1.4 细胞分化 |
| 1.2.2 微米尺度拓扑形貌 |
| 1.2.2.1 细胞黏附 |
| 1.2.2.2 细胞增殖 |
| 1.2.2.3 细胞迁移 |
| 1.2.2.4 细胞分化 |
| 1.3 组织工程双层支架用于修复骨/软骨缺损 |
| 1.4 课题的提出 |
| 参考文献 |
| 第二章 微米拓扑形貌的尺寸对骨髓基质干细胞的响应行为的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料与试剂 |
| 2.2.2 PLGA微米拓扑阵列的制备 |
| 2.2.3 PLGA膜的表征 |
| 2.2.4 细胞的分离和培养 |
| 2.2.5 细胞的肌动蛋白、纽蛋白和细胞核荧光染色 |
| 2.2.6 骨髓基质干细胞的成骨分化 |
| 2.2.7 MTT表征细胞活力 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 利用微柱阵列控制骨髓基质干细胞的细胞核形状 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 原料与试剂 |
| 3.2.2 PLGA微柱阵列的制备 |
| 3.2.3 PLGA膜的表征 |
| 3.2.4 细胞的分离和培养 |
| 3.2.5 细胞骨架和细胞核荧光染色 |
| 3.2.6 骨髓基质干细胞的成骨分化 |
| 3.2.7 MTT表征细胞活力 |
| 3.2.8 细胞核形状的定量表征 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 骨髓基质干细胞核变形现象的发现 |
| 3.3.2 骨髓基质干细胞核形状的控制 |
| 3.3.3 核变形的普适性与细胞种类依赖性 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 组织工程三维多孔支架孔表面微米拓扑形貌的构建 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 原料与试剂 |
| 4.2.2 带微米拓扑形貌的石蜡球致孔剂的制备 |
| 4.2.3 三维多孔支架的制备与表征 |
| 4.2.4 骨髓基质干细胞的分离和培养 |
| 4.2.5 MTT表征细胞活力 |
| 4.2.6 骨髓基质干细胞的成骨分化 |
| 4.2.7 多孔支架中细胞数量的测量 |
| 4.2.8 碱性磷酸酶的定量测定 |
| 4.2.9 统计分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 表面带有微米凹坑的石蜡球致孔剂的制备 |
| 4.3.2 孔表面带有微米凸起的组织工程三维多孔支架的制备 |
| 4.3.3 三维多孔支架孔表面细胞的黏附和增殖 |
| 4.3.4 三维多孔支架孔表面干细胞的成骨分化 |
| 4.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 新型支架致孔剂“糖粘盐”粒子的制备与相应三维多孔支架的研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 原料与试剂 |
| 5.2.2 “糖粘盐”致孔剂的制备 |
| 5.2.3 三维多孔支架的制备与表征 |
| 5.2.4 骨髓基质干细胞的分离和培养 |
| 5.2.5 MTT表征细胞活力 |
| 5.2.6 骨髓基质干细胞的成骨分化 |
| 5.2.7 多孔支架中细胞数量的测量 |
| 5.2.8 碱性磷酸酶的定量测定 |
| 5.2.9 统计分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 “糖粘盐”致孔剂的制备 |
| 5.3.2 用“糖粘盐”致孔剂制备三维多孔支架 |
| 5.3.3 三维多孔支架中骨髓基质干细胞的行为 |
| 5.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 PLGA支架材料生物相容性及降解行为研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验部分 |
| 6.2.1 原料与试剂 |
| 6.2.2 实验动物 |
| 6.2.3 新西兰兔骨髓基质干细胞的获取 |
| 6.2.4 PLGA支架的制备 |
| 6.2.5 PLGA支架与细胞复合体的构建与表征 |
| 6.2.6 PLGA支架载细胞的动态观察 |
| 6.2.7 PLGA浸提液的细胞毒性 |
| 6.2.8 PLGA浸提液血液相容性 |
| 6.2.9 PLGA支架体内植入与降解 |
| 6.2.10 PLGA支架中山羊BMSC与平面培养的肋软骨细胞共培养体外诱导向成软骨分化 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 PLGA支架与细胞复合体的构建 |
| 6.3.2 培养于PLGA支架中的细胞的动态观察 |
| 6.3.3 PLGA支架材料浸提液的细胞毒性 |
| 6.3.4 PLGA浸提液的血液相容性 |
| 6.3.5 PLGA支架材料的体内植入与降解 |
| 6.3.6 PLGA支架材料中山羊BMSC与平面培养的肋软骨细胞共培养体外诱导向成软骨分化 |
| 6.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 不同孔隙率分布双层支架修复兔关节软骨/软骨下骨缺损 |
| 7.1 前言 |
| 7.2 实验部分 |
| 7.2.1 原料与试剂 |
| 7.2.2 PLGA双层支架的制备 |
| 7.2.3 PLGA双层支架力学性能的测试 |
| 7.2.4 实验动物 |
| 7.2.5 骨髓基质干细胞的分离、培养与传代 |
| 7.2.6 细胞示踪标记 |
| 7.2.7 体外接种细胞及其电镜表征 |
| 7.2.8 动物模型制备 |
| 7.2.9 取材及组织学观察 |
| 7.2.9.1 标本处理 |
| 7.2.9.2 H&E染色 |
| 7.2.9.3 甲苯胺蓝染色 |
| 7.2.9.4 番红O-固绿染色 |
| 7.2.9.5 免疫组织化学染色 |
| 7.2.10 Real-time PCR检测相关基因表达 |
| 7.3 结果与讨论 |
| 7.3.1 PLGA双层支架的制备 |
| 7.3.2 PLGA双层支架的力学性能 |
| 7.3.3 PLGA双层支架植入骨/软骨缺损 |
| 7.3.4 组织学/免疫组织学检测和评分 |
| 7.3.5 相关基因的表达 |
| 7.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第八章 不同孔径分布双层支架修复兔关节软骨/软骨下骨缺损 |
| 8.1 前言 |
| 8.2 实验部分 |
| 8.2.1 原料与试剂 |
| 8.2.2 PLGA双层支架的制备 |
| 8.2.3 动物实验 |
| 8.3 结果与讨论 |
| 8.3.1 PLGA双层支架的制备 |
| 8.3.2 PLGA双层支架植入骨/软骨缺损 |
| 8.3.3 骨/软骨缺损修复大体观和断面观察 |
| 8.3.4 组织学检查 |
| 8.3.5 相关基因的表达 |
| 8.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第九章 全文总结 |
| 9.1 论文的主要工作 |
| 9.2 论文工作的主要创新性 |
| 9.3 论文的理论和实际意义 |
| 9.4 论文的不足与展望 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 新鲜瓣叶与去细胞支架的形态学观察 |
| 2.2 新鲜瓣叶与去细胞支架的机械力学测定 |
| 2.3 种子细胞的鉴定 |
| 2.4 细胞种植后瓣膜情况 |
| 3 讨论 |
| 目录 |
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人的骨髓基质干细胞膜片与牙周膜干细胞膜片的制备与鉴定 |
| 实验一 人骨髓基质干细胞与牙周膜干细胞的分离培养与鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 人骨髓基质干细胞与牙周膜干细胞膜片的制备 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 两种干细胞膜片与不同支架材料复合的体外实验 |
| 1 材料 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 两种干细胞膜片复合不同支架材料体内异位再生的实验研究 |
| 实验一 两种干细胞膜片复合不同支架材料体内异位移植实验 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 PDLSC/BMMSC 复层膜片修复颅骨缺损的实验性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 犬PDLSC/BMMSC膜片在牙周组织缺损修复再生中的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 展望 |
| 附图 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
