李恒超[1]（2021）在《基于DNA银簇的牛奶中氯霉素检测方法研究》文中研究表明长期食用含有抗生素残留的食物可能会导致人类患诸多疾病,如心血管衰竭、肠炎胃炎、肝肾功能损伤、过敏反应等。氯霉素（CAP）是目前最常见的残留抗生素之一,近几年的报道显示,CAP在动物源性食品中的检出率很高,因此需要发展快速高灵敏的检测方法增强对CAP的残留监测。以DNA为模板的银纳米簇（DNA-AgNCs）具有合成简便、波长可调、制备成本低等优点,基于DNA-AgNCs构建的各类传感器,具有多色检测、灵活信号输出等特点,近些年受到研究者的广泛关注,并应用于化学分析、环境检测、食品安全、疾病诊断、医学治疗等领域。本论文以CAP为检测对象,基于CAP适配体设计识别探针,使用DNA-AgNCs作为探针的信号输出方式,设计了三种CAP荧光检测方案,内容如下:（1）构建了基于CAP适配体自模板的“on-off”荧光检测方法。基于C-Ag-C介导CAP适配体形成发卡结构原理,以该发卡为模板开展DNA-AgNCs合成条件研究,优化了硝酸银与DNA浓度比、缓冲液类型、p H、反应时间等合成条件,得到量子产率为16.36%的DNA-AgNCs;进而基于CAP对该DNA-AgNCs的猝灭响应,建立了检测CAP的荧光方法,此方法设计简单,可在常温下实现对CAP的快速检测,在0.5-20 nmol/L的CAP浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=0.02867X+0.15709,R2=0.997,最低检出限为0.052 nmol/L。（2）借助足点介导的链置换反应技术,建立了基于DNA三通结的“off-on”CAP检测方法。开展三通结探针设计研究,包括适配体互补数、三通结碱基臂长、AgNCs模板序列等,使用三通结探针合成了具有良好荧光量子产率（17.54%）的DNA-AgNCs,并对其进行了TEM表征;开展缓冲液类型、p H、反应时间等实验条件优化,建立了CAP的“off-on”荧光检测方法,在1-10 nmol/L的浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=0.0484X+0.8523,R2=0.9981,最低检出限为0.89 nmol/L。（3）发展了基于dimer银簇及DNA三通结的双信号比率检测方法。首先通过一系列的合成筛选得到了具有红色和黄色荧光发射的DNA-AgNCs,对其进行了TEM表征,其次通过电泳及荧光实验优化了三通结探针的碱基连接数量,进而优化了温度、银簇合成参数、硝酸银、硼氢化钠和DNA的浓度比、缓冲液类型、p H等反应条件,建立了比率型CAP荧光检测方法,在0.01-0.5 nmol/L的浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=1.0543X+0.0867,R2=0.9887,最低检出限为9.8 pmol/L。
张晓彤[2]（2021）在《基于VBA为单体的新型纳米磁性分子印迹材料用于氯霉素残留分析研究》文中认为氯霉素（CAP）是一种具有卓越抗菌性能的广谱抗生素,曾被广泛应用到畜牧业和水产养殖中,但由于其具有严重的毒副作用,残留在动物体内的CAP会通过食物链到达人体,对人体产生伤害。从2002年起,我国便规定在动物源食品中CAP残留限量为不得检出,即“零容许量”。但由于其抗菌效率好,价格低廉,将CAP使用到水产品养殖及畜牧业中的现象仍有发生。因此制备一种高效简便的检测CAP方法具有重要的科学意义和实用价值。分子印迹技术（MIT）是在模拟自然界中酶-底物之间相互识别机制的基础上发展起来的技术。具有高度特异性识别性、广泛应用性、构效预定性三个代表性特征,可以重复使用且不会损失选择性,由于对大多数目标分析物有效的通用性被广泛应用于医药,化学材料,食品,环境等多个领域。本课题针对磁性分子印迹技术对动物源性食品中的CAP残留进行研究分析。筛选优化纳米磁珠的制备、硅烷化处理及双键接枝法,制备包覆Si O2壳层,接有KH-570的Fe3O4纳米粒子。进一步选择CAP为模板分子,对乙烯苯甲酸（VBA）为功能单体,二乙烯苯（DVB）为交联剂,偶氮二乙腈（AIBN）为引发剂,基于磁性表面分子印迹技术制备了对CAP具有选择性吸附的磁性表面分子印迹材料（MMIPs）。实验采用红外光谱（IR）、磁滞回线（VSM）、透射电镜（TEM）,热重分析（TGA）及动态激光粒径分析仪方法对制备的MMIPs进行表征。同时采用紫外光谱法对MMIPs吸附动力学、等温吸附及吸附选择性进行表征。为验证所制备MMIPs检测CAP残留的准确性及灵敏度,以鸡肉作为检测样本,分别采用MMIPs和国标GB/T 22338-2008方法进行对比分析,对两种方法的回收率、精密度及检测限进行比较。结果表明,红外光谱显示MMIPs具有570 cm-1处的Fe-O振动吸收峰,1098 cm-1的Si-O的振动特征峰,1720 cm-1的C=O伸缩振动吸收峰,2974 cm-1的C-H震动吸收峰、1490 cm-1和1590 cm-1的苯环骨架振动吸收峰,表明功能单体VBA通过交联聚合成功地连接到磁性纳米粒子表面,并在Fe3O4@Si O2表面形成了分子印迹聚合物壳。TGA结果显示相对于Fe3O4@Si O2,MMIPs失重率增加了约13%,表明分子印迹膜占总重量约13%。VSM表征显示MMIPs具有良好的饱和磁化强度。TEM和粒径表征显示MMIPs成球形或类球形,粒径分布较为均匀。通过吸附动力学、等温吸附、选择性实验结果表明所制备的MMIPs对CAP吸附性能稳定,对其相似药物（FF、TAP）能够区分。最后用MMIPs和国标GB/T 22338-2008进行比较,对鸡肉中的CAP残留进行检测,结果显示两者均具有良好的线性关系,定量限和回收率没有明显差异,为将MMIPs运用到实际样品的检测提供了基础。课题优化筛选采用表面分子印迹技术在磁性Fe3O4纳米粒子表面进行硅烷化处理,制备MMIPs,采用液相质谱联用法（LC-MS/MS）检测动物源性食品中CAP残留。制备的粒径分布均匀,包被率好,吸附磁性较高,选择性好。利用纳米磁性表面分子印迹技术具有操作简便、易于制备、成本低、对环境友好等优点,为兽药残留检测中样品前处理提供了新的思路。
郭添荣[3]（2021）在《动物源食品中兽药残留的高通量筛查方法研究》文中研究指明动物源食品基质复杂且各类残留兽药含量甚微且极性差别大,传统的兽药残留检测方法多数仅对具有同类基本结构的兽药进行检测,难以实现对不同化学结构的多种兽药同时检测。建立一套范围宽广、快速高效的兽药残留高通量筛查方法具有重要意义。为此,本论文基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS联用技术探讨了动物源食品中兽药残留的高通量非靶向筛查分析检测方法。主要研究内容及结果如下:（1）通过对液相色谱条件和静电场轨道阱高分辨质谱条件的研究,得到最佳的液相色谱和质谱分析条件,并在讨论离子化方式、离子加合模式和质谱碰撞能量的基础上建立了可同时筛查128种兽药的仪器分析方法。（2）利用Trace Finder软件构建了激素类、β-受体激动剂、磺胺类等5大类128种兽药化合物的基本化学信息的数据库,利用标准溶液在最佳仪器分析条件的基础上,获取128种兽药化合物的保留时间、母离子加合模式和质荷比、子离子质荷比等色谱和质谱指纹信息构建。从母离子精确质荷比、色谱保留时间分布、同分异构体鉴别、同位素特征4个方面分析评价了该质谱数据库,并确定了数据库筛查参数,同时以加标阳性样品预筛查验证,确保了后期药物定性筛查的准确性。（3）选取了猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、猪肝、鸡肝以及鱼肉等10种不同基质样品,通过对样品提取与净化条件的优化和针式滤膜的选择,开发了基于Oasis?PRi ME HLB固相萃取小柱的改良通过式固相萃取前处理方法。采用基质匹配标准曲线法定量,并从基质效应,方法的线性范围、检出限以及定量限,加标回收率和精密度等方面对建立的定量检测方法进行验证,各检测化合物在线性范围内呈良好的线性关系,方法的灵敏度、准确度和精密度均满足兽药残留检测分析要求。（4）用所建的非靶向高通量筛查检测方法,对市销的148批次动物源食品进行了兽药残留筛查检测,在94批次样品中检出兽药化合物残留,占采样量的63.5%,且存在一定数量的样品同时检出多种兽药。大多数检出药物虽然高出检出限,但却低于标准值,对照我国现行的兽药残留标准限量,发现问题样品2批次,占采样量的1.35%。总之,本研究建立的方法具有高通量、高精度、高可靠性和高灵敏度等显着优势,具有快速锁定与多目标确证潜在风险物质并准确定量性的优点,可有效节约资源和提高检测效率,是一种提升动物源食品中兽药残留监测与治理效能的有力手段。
彭娟,赖科洋[4]（2021）在《食品中金刚烷胺残留检测方法新进展》文中指出金刚烷胺是一种抗病毒药物,滥用后会对消费者健康构成威胁。尽管包括中国和美国在内的许多国家都禁止在家畜和家禽生产中使用金刚烷胺,但目前金刚烷胺仍在被非法使用。本综述简要介绍了金刚烷胺的理化性质、危害、检出事件、检测标准和检测方法。传统检测方法,例如高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附法、免疫层析法以及化学发光免疫分析法等现在已经被广泛用于检测金刚烷胺,基于抗原抗体反应的新型免疫分析法和基于金刚烷胺结构特点的分子印迹新方法正在受到越来越多的关注,有望在将来得到应用。
陈健[5]（2020）在《基于同步荧光光谱的禽肉中典型抗生素残留快速检测方法研究》文中提出禽肉是一种具有很高营养价值的食品,也是生活饮食中不可缺少的食品之一。在家禽养殖中,为了防治家禽的疾病,不可避免的会使用到抗生素。然而,部分抗生素不易降解,不合理的使用会导致其残留在家禽体内,进而威胁到人们的身体健康。为了确保禽肉产品的质量安全,一些国内外学者一直在探索研究抗生素残留快速检测技术。传统的检测抗生素残留方法前处理复杂、耗时长、成本高,较难实现禽肉中抗生素残留的快速检测。本文以禽肉（鸡肉、鸭肉）为载体,以磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine,SM2）、氧氟沙星（ofloxacin,OFL）、甲磺酸达氟沙星（danofloxacin mesylate,DFM）、盐酸沙拉沙星（sarafloxacin hydrochloride,SARH）和盐酸强力霉素（doxycycline hydrochloride,DCH）为研究对象,采用同步荧光技术结合化学计量学方法探索禽肉中抗生素残留的快速检测方法。主要的研究工作如下:（1）采用同步荧光技术结合化学计量学方法实现了禽肉中SM2和OFL残留的快速检测。首先,分析了SM2标准溶液、OFL标准溶液、空白禽肉提取液和含SM2和OFL的禽肉提取液的三维同步荧光光谱,确定了禽肉中SM2和OFL残留检测的波长差（Δλ）分别为150 nm和210 nm,荧光激发峰分别为292.5 nm和295 nm。其次,采用单因素试验考察了β-巯基乙醇和邻苯二甲醛溶液加入量及时间对荧光强度的影响,确定了鸡肉中SM2和OFL残留的最佳检测条件为:β-巯基乙醇溶液300μL、邻苯二甲醛溶液25μL和采集时间44 min;确定了鸭肉中SM2和OFL残留的最佳检测条件为:β-巯基乙醇溶液400μL、邻苯二甲醛溶液25μL和采集时间40 min。最后,利用峰高法和峰面积法分别建立了鸡肉中SM2和OFL残留的预测模型。试验结果表明,与基于峰面积法的预测模型相比,基于峰高法的预测模型的综合评价更好。基于峰高法的SM2残留预测模型的线性方程为y=0.550 5x+18.884,训练集决定系数（coefficient of determination for the training set,RT2）为0.919 4,预测集决定系数（coefficient of determination for the prediction set,RP2）为0.897 3,预测集均方根误差（root mean square error for the prediction set,RMSEP）为6.060 5 mg/kg,回收率处于76.1～115.2%之间,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）处于2.7～7.0%之间。基于峰高法的OFL残留预测模型的线性方程为y=7.783 8x+15.919,R2T为0.973 8,R2P为0.997 3,RMSEP为0.539 2 mg/kg,回收率处于96.7～110.1%之间,RSD处于2.8～10.0%之间。此外,利用峰高法和峰面积法分别建立了鸭肉中SM2和OFL残留的预测模型。试验结果表明,与基于峰面积法的预测模型相比,基于峰高法的预测模型的综合评价更好。基于峰高法的SM2残留预测模型的线性方程为y=0.501 7x+19.049,R2T为0.8447,R2P为0.815 6,RMSEP为7.950 9 mg/kg,回收率处于81.7～155.1%之间,RSD处于4.1～6.7%之间。基于峰高法的OFL残留预测模型的线性方程为y=7.320 6x+10.705,R2T为0.996 6,R2P为0.996 2,RMSEP为0.526 7 mg/kg,回收率处于96.4～111.2%之间,RSD处于2.9～6.8%之间。（2）采用同步荧光技术结合化学计量学方法实现了禽肉中DFM和OFL残留的快速检测。首先,分析了DFM标准溶液、OFL标准溶液、空白禽肉提取液和含DFM和OFL的禽肉提取液的同步荧光光谱,确定了禽肉中DFM和OFL残留的检测Δλ分别为130 nm和200 nm,荧光激发峰分别为288 nm和325 nm。其次,采用单因素试验考察了氢氧化钠溶液浓度和表面活性剂种类对荧光强度的影响,确定了鸡肉中DFM和OFL残留的最佳检测条件为:氢氧化钠溶液浓度0.1mol/L和SDS溶液浓度0.1 mol/L;确定了鸭肉中DFM和OFL残留的最佳检测条件为:氢氧化钠溶液浓度0.1 mol/L和SDS溶液浓度0.1 mol/L。最后,利用线性回归、偏最小二乘回归（partial least squares regression,PLSR）和多元线性回归（multiple linear regression,MLR）算法分别建立了鸡肉中DFM和OFL残留的预测模型。试验结果表明,与基于线性回归和MLR的DFM残留预测模型相比,基于PLSR的DFM残留预测模型的综合评价更好,其R2P为0.978 3,RMSEP为1.934 2 mg/kg,相对预测误差（ratio of prediction to deviation,RPD）为5.876 5;与基于线性回归和PLSR的OFL残留预测模型相比,基于MLR的OFL残留预测模型的综合评价更好,其R2P为0.895 0,RMSEP为3.859 8 mg/kg,RPD为2.509 1。此外,利用线性回归、PLSR和MLR算法分别建立了鸭肉中DFM和OFL残留的预测模型。试验结果表明,与基于PLSR和MLR的预测模型相比,基于线性回归的预测模型的综合评价更好。基于线性回归的DFM残留预测模型的R2P为0.968 2,RMSEP为1.619 2 mg/kg,RPD为4.711 7。基于线性回归的OFL残留预测模型的RP2为0.964 3,RMSEP为2.244 0 mg/kg,RPD为4.751 3。（3）采用同步荧光技术结合化学计量学方法实现了鸡肉中SARH和DCH残留的快速检测。首先,分析了SARH标准溶液、DCH标准溶液、空白鸡肉提取液和含SARH和DCH的鸡肉提取液的三维同步荧光光谱,确定了鸡肉中SARH和DCH残留检测的Δλ都为110 nm,荧光激发峰分别为320 nm和381 nm。其次,采用单因素试验考察了硫酸镁溶液浓度和SDS溶液浓度及时间对荧光强度的影响,确定了鸡肉中SARH和DCH残留的最佳检测条件为:硫酸镁溶液浓度0.375 mol/L、SDS溶液浓度0.30 mol/L和采集时间12 min。最后,利用MLR、PLSR和支持向量回归（support vector regression,SVR）算法分别建立了鸡肉中SARH和DCH残留的预测模型。试验结果表明,与基于MLR和SVR的预测模型相比,基于PLSR的预测模型的综合评价更好。基于PLSR的SARH残留预测模型的R2P为0.846 5,RMSEP为0.344 1 mg/kg,RPD为2.588 2。基于PLSR的DCH残留预测模型的R2P为0.914 1,RMSEP为5.890 9 mg/kg,RPD为3.243 5。本文采用同步荧光技术结合化学计量学方法探索了禽肉中SM2、OFL、DFM、SARH和DCH残留的快速检测方法,在此基础上可以进一步优化和拓宽同步荧光技术在禽肉中其它抗生素残留检测中的应用。
刘卫华[6]（2019）在《动物源食品中氟甲喹快速免疫检测技术的研究》文中进行了进一步梳理氟甲喹（flumequine,FLU）是一种动物专用的喹诺酮类抗生素,用于预防和治疗畜禽及水产类动物的疾病。但是,滥用或者超标使用的情况时有发生,造成动物性食品中的氟甲喹残留问题,对人类的健康造成极大的危害。世界各国都规定了动物性食品中氟甲喹残留的最大限量,作为食品安全监管的标准和依据,而建立简单、快速、高通量的检测方法也很有必要。本研究采用活泼酯法合成氟甲喹完全抗原,通过免疫动物制备了多克隆抗体,建立了氟甲喹间接竞争酶联免疫分析方法（icELISA）;建立了氟甲喹固相膜免疫分析方法;制备了氟甲喹分子印迹膜,并将其作为人工抗体,建立了直接竞争仿生酶联免疫分析方法（BELISA）。建立的icELISA法和BELISA法适于大量样品的快速定量筛查,预处理简单,操作方便快速,检测限低;固相膜免疫分析方法适于快速定性筛查,准确可靠,简便易操作。氟甲喹完全抗原的合成及多克隆抗体的制备。采用活泼酯法将FLU半抗原与载体蛋白牛血清蛋白（BSA）及卵清蛋白（OVA）偶联,制备出FLU-BSA（免疫原）和FLU-OVA（包被原）。通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE凝胶电泳两种方法确定人工抗原成功地合成。用免疫原FLU-BSA免疫两只新西兰大耳白兔,获得抗血清（FLU-1和FLU-2）;采用间接竞争ELISA方法测定抗血清效价和亲和性,FLU-1与FLU-2效价相当（均为1:12800）,经纯化后,FLU-1抗体（IC50为0.06 ng/mL）亲和性明显高于FLU-2（IC50为0.21 ng/mL）,故选择FLU-1抗体进行后续免疫检测试验。氟甲喹残留的ELISA检测方法的建立。采用间接竞争ELISA法优化FLU的检测条件,最优条件为:包被量10 μg/mL,抗血清稀释度1:3200,封闭液为1%明胶,酶标二抗稀释度1:2500,pH值7.5,反应缓冲液是1×PBS,乙腈含量是0%～20%。在最优条件下建立间接竞争ELISA方法,该方法的IC50为2.03 ng/mL,最低检出限达1.21×10-4 ng/mL,具有比较高的准确性和灵敏度。将FLU与其结构类似物左氧氟沙星（LVX）、加替沙星（GAT）和氧氟沙星（OFX）进行交叉反应试验,交叉反应率都很低,抗体特异性好。选择牛肉、猪肉、虾肉、牛奶、熟猪肝和生猪肝作为试样,研究基质影响的消除方法。牛肉、猪肉和牛奶经过超声提取后以PBS稀释10倍,虾肉需稀释20倍,猪肝等内脏类需要稀释40倍,就可以有效地消除基质的影响。在加标回收试验中,在三个加标水平上的回收率在72.80%～97.30%之间。用HPLC法对建立的间接竞争ELISA法进行验证,其检测结果之间的拟合程度很高,相关系数R2均大于0.96,这可以说明所建立的ELISA方法准确、可靠、简便、快速,可用于动物性食品中氟甲喹残留的快速定量分析。氟甲喹残留的固相膜免疫检测方法的建立。采用柠檬酸三钠还原法制备出来胶体金,以胶体金标记FLU抗体制备出来免疫金。以硝酸纤维素（NC）膜作为固相载体,分别包被上FLU-OVA、酶标二抗作为T线、C线,对测定条件进行的优化结果是:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗最佳稀释倍数为40倍、包被量1.0 μg、免疫金稀释度为1:5（v/v）、金标抗体与待测溶液的混合比例为1:5（v/v）在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫层析固相膜,最低检出限为40 μg/L。对牛肉、猪肉、虾肉、牛奶、熟猪肝、生猪肝进行基质影响的消除试验,牛肉、猪肉、虾肉基质的提取液需用1×PBS缓冲液稀释20倍,牛奶、熟猪肝、生猪肝稀释40倍,可以消除基质的影响。加标回收试验的结果用肉眼观察即可看到有明显的梯度,说明方法有效。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法是一种定性检测方法,在实际的检测工作中无需仪器,目测结果即可,时间较短,适用于大批量样品的现场快速定性筛选。氟甲喹残留的BELISA检测方法的建立。通过分子动力学模拟,确定氟甲喹与甲基丙烯酸（MAA）结合的最佳摩尔比为1:2。以FLU为模板,以MAA作为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）作为交联剂,偶氮二异丁腈（AIBN）作为引发剂,以96孔酶标板作为固相载体,制备出了分子印迹膜（MIPs）。通过静态吸附试验和吸附动力学试验对其进行表征,结果表明分子印迹膜已经成功合成。采用活泼酯法制备酶标抗原,对BELISA反应体系的条件进行优化,确定的最优条件是:酶标抗原的稀释倍数为8000倍,pH为7.1,甲醇含量为5%的PBST缓冲液。在此条件下建立直接竞争BELISA法,该方法检测线性范围是1～100000 ng/mL,灵敏度IC50为140.62 ng/mL,检测限为1.09ng/mL。与结构类似物左氧氟沙星（LVX）、氧氟沙星（OFX）和依诺沙星（ENX）的交叉反应率分别为17.8%、17.5%和11.0%,表明该方法的特异性较高。采用直接稀释法进行基质消除,虾肉样品提取液经过20倍稀释、牛肉样品提取液经过40倍稀释后即可消除基质的干扰。三个加标水平下的回收率在80.7%～92.3%之间,这即可表明此样品前处理方法可行。通过HPLC法验证该方法的准确性,结果表明,HPLC与BELISA呈现良好的线性关系,相关系数R2在0.98以上,这说明建立的BELISA方法准确、可靠,可以用于动物性食品中氟甲喹残留的快速检测。
李然[7]（2018）在《兽药氟苯尼考及其代谢物与甲砜霉素残留免疫分析方法的研究》文中认为氟苯尼考（Florfenicol,FF）和甲砜霉素（Thiamphenicol,TAP）作为新型氯霉素类广谱抗生素,被广泛用于兽医临床上细菌感染性疾病的预防和治疗,也经常被滥用及非法添加到动物饲料、注射药剂及内服药剂中。但由于氟苯尼考及甲砜霉素在动物源性食品及环境中的残留易导致致病菌株产生耐药性,且二者对于人体及动物均具有血液毒性、免疫毒性和胚胎毒性等毒性,威胁消费者健康。因此,加强对此类药物的监控、控制二者在动物性食品中的残留很有必要。目前对氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺（Florfenicolamine,FFA）、甲砜霉素的分析手段主要有液相色谱、液相色谱-串联质谱法等仪器法,仪器法准确可靠,但存在成本高、操作复杂耗时、通量低、不易普及等不足。免疫分析法具有快速、灵敏、低成本、易于现场操作等特点,作为初筛方法,可与仪器法搭配使用,满足大批量样品的快速筛查需求。本文以氟苯尼考、氟苯尼考胺及甲砜霉素为研究对象,设计合成系列半抗原并制备了有效单克隆抗体及多克隆抗体,通过对抗体-包被原的组合筛选,建立了三种不同检测性能的间接竞争酶联免疫分析法。主要研究内容和结果如下:（1）以氟苯尼考及甲砜霉素结构为基础制备了6种相关半抗原（FF、FFA、FFD、FFM、FFAC、TAPN）,偶联载体蛋白后通过动物免疫获得抗血清。经鉴定,鼠抗血清FFD-BSA和FFD-KLH能够特异性识别检测对象,同源包被条件下效价均为1:128000,对1μg/mL的氟苯尼考抑制率分别为80%和74%。进一步用以上两种免疫抗原制备兔抗血清及鼠源单克隆抗体,经过抗体-包被原筛选,得到不同检测效果的抗体-包被原组合。（2）基于兔多抗pAb-FFD-KLH1与包被原FFM-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和甲砜霉素残留的间接竞争酶联免疫分析方法（ciELISA）。该方法对于氟苯尼考的IC50为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31-5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC50为3.21 ng/mL,线性检测范围为0.6-17.01 ng/mL,检出限为0.24 ng/mL;与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77%-116%之间,变异系数<16%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（3）基于兔多抗pAb-FFD-KLH2与包被原FF-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为8.94ng/mL,线性检测范围为2.32-34.46 ng/mL,检出限为1.06 ng/mL;对于氟苯尼考胺的IC50为10.96 ng/mL,线性检测范围为3.05-39.45 ng/mL,检出限为1.45 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加回收率均在64.8%-96.4%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（4）基于鼠单抗mAb-FFD-BSA与包被原FFD-OVA,建立了特异性检测氟苯尼考的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为9.48 ng/mL,线性检测范围为1.75-51.36 ng/mL,检出限为0.64 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考的添加回收率在88%-108%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。
张国翠[8]（2017）在《食品中氯霉素标准检测方法的研究综述》文中认为对食品中氯霉素检测标准方法进行了分析,介绍了液相色谱串联质谱法、气相色谱-质谱法、酶联免疫法、气相色谱法及液相色谱法的检测原理及应用范围,同时综合阐述了各自的优越性及局限性,并对其在实际检测工作中的应用提出了建议,将酶联免疫法与色谱-质谱方法相结合,既能够实现快速筛查,又能够保证结果的准确性、可靠性,这将是未来氯霉素检测技术的发展趋势。
许景月[9]（2016）在《非标记核酸适配体传感器检测动物源性食品中四环素和多巴胺残留》文中研究说明目前,动物物源性食品中的兽药残留已经成为人类健康与食品安全的一大威胁。传统的兽药残留检测方法通常比较昂贵、耗时、步骤繁琐、选择性差,难以满足现场快速检测的需求。核酸适配体能够特异性地结合目标物,并伴随着自身构象的变化,具有亲和力高、特异性强、成本低等优点,已成为一种新型理想的生物传感器识别元件,被广泛地应用于食品分析领域。根据是否对核酸适配体进行标记或修饰,核酸适配体传感器可以分为标记型和非标记型。对核酸适配体的标记过程通常耗时、费力、昂贵,且会影响其与目标物结合的亲和力与特异性。因此,本文以染料作为信号探针,基于目标物和核酸适配体间的特异性结合,建立了两种非标记型核酸适配体传感器,具有快速、简便、检测成本低、灵敏度高且选择性好等优点,可以被推广应用于食品中其他有害物小分子的检测中,在农业和环境领域将有更广大的应用前景。研究内容主要包括:1.以核酸适配体作为识别元件、以插入型染料噻唑橙（Thiazole Orange,TO）作为信号元件构建了一种非标记核酸适配体传感器检测四环素（Tetracycline,TET）。TET的核酸适配体为富含G碱基的单链DNA,本身存在着G-四联体构型。TO在游离状态下几乎没有荧光,但可以插入DNA尤其是G-四联体构型的DNA中,产生极大的荧光增强效应。当TET不存在时,TO会嵌入到核酸适配体中,并产生荧光信号。当TET存在时,TET核酸适配体会与TET特异性地结合并发生构型变化,核酸适配体的G-四联体构型遭到破坏,TO被释放为游离状态从而导致体系荧光强度的降低。根据这种荧光强度的变化可以实现对TET的特异性检测。在最优反应条件下,该核酸适配体传感器对TET进行检测的线性范围为0.05-1000μg/m L,检出限为0.022μg/m L,并应用于牛奶样品中的TET检测,回收率在89.0%-107.9%范围内,相对标准偏差（Relative Standard Deviation,RSD）为0.6%-1.4%。因此,这种非标记核酸适配体传感器简单快速、成本低、灵敏性和选择性好,为四环素的现场检测提供了一种简单、快速的新方法。2.基于核酸适配体与目标物的特异性结合以及罗丹明B（Rhodamine B,RB）和金纳米粒子（Au Nanoparticles,Au NPs）间的荧光共振能量转移（Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET）建立了一种检测多巴胺的非标记型核酸适配体传感器。单链核酸适配体可以吸附在Au NPs表面,增强Au NPs的稳定性,有效抵抗盐离子诱导的聚集,分散的Au NPs通过FRET猝灭RB的荧光。当目标物多巴胺存在时,多巴胺核酸适配体与多巴胺的特异性结合可引起其构象发生变化使其无法保护Au NPs,盐效应使失去保护的Au NPs发生聚集,从而降低FRET效率,此时,RB的荧光恢复。在最适反应条件下,该荧光传感器对多巴胺进行检测的线性范围为26-2.90×103 n M,检出限为2 n M,并且已成功应用于猪饲料和鸡肝样品中多巴胺的检测,回收率在91.4%-103.5%范围内,RSD为0.9%-2.3%。该方法具有操作简便,灵敏度低、选择性好等优点,可以实现对食品中多巴胺残留的现场快速检测。不仅如此,这种非标记核酸适配体传感器对食品中的其他兽药残留、乃至其他有害物小分子均具有很好的应用前景。
赵晓军,王钰伟,武大引[10]（2015）在《双水相气浮溶剂浮选-紫外分光光度法测定水中痕量氯霉素》文中提出采用双水相气浮溶剂浮选这一新型、绿色的方法分离富集水体中痕量氯霉素,用光度法检测。考察了分相盐、p H、浮选时间、氮气流速等条件,得出最佳浮选条件为:分相盐Na Cl,p H=10,浮选时间为40 min,氮气流速为25 m L/min。氯霉素浓度在1.2925.8μg/m L浓度范围内线性关系良好,回归方程:A=0.030 3C+0.024 4,相关系数R=0.999 0。此条件下,浮选率为91.2%,用该方法分析环境水体中痕量氯霉素含量,结果令人满意。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 氯霉素概述 |
| 1.1.1 氯霉素简介 |
| 1.1.2 氯霉素检测方法 |
| 1.2 核酸适配体概述 |
| 1.2.1 核酸适配体简介 |
| 1.2.2 核酸适配体传感器检测机理 |
| 1.2.3 基于核酸适配体传感器的检测方法 |
| 1.3 DNA银纳米簇概述 |
| 1.3.1 DNA银纳米簇的性质及表征方法 |
| 1.3.2 DNA银纳米簇的合成方法 |
| 1.3.3 结构和序列对DNA银纳米簇的影响 |
| 1.3.4 DNA银纳米簇的检测应用 |
| 1.4 课题的立题背景及意义 |
| 1.5 课题主要研究内容 |
| 第二章 基于氯霉素适配体自模板“on-off”快速荧光检测方法研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 DNA溶液配制 |
| 2.3.2 检测步骤 |
| 2.3.3 检测条件的优化 |
| 2.3.4 检测范围的确定 |
| 2.3.5 选择性测试 |
| 2.3.6 回收率测定 |
| 2.3.7 量子产率的测定 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 检测方法的原理及可行性分析 |
| 2.4.2 检测方法的实验条件优化 |
| 2.4.3 检测方法的检测范围与线性 |
| 2.4.4 检测方法的选择性 |
| 2.4.5 检测方法的回收率 |
| 2.4.6 DNA- AgNCs的荧光量子产率测定 |
| 第三章 基于足点介导的链置换和三通结的“off-on”的氯霉素快速检测方法研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 DNA溶液配制 |
| 3.3.2 检测步骤 |
| 3.3.3 可行性测定 |
| 3.3.4 检测条件的优化 |
| 3.3.5 检测范围的确定 |
| 3.3.6 选择性测试 |
| 3.3.7 回收率测定 |
| 3.3.8 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.3.9 透射电镜的表征 |
| 3.3.10 量子产率的测定 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 检测方法的原理 |
| 3.4.2 检测方法的可行性分析与电泳结果验证 |
| 3.4.3 TEM表征及粒径分析 |
| 3.4.4 检测方法的实验条件优化 |
| 3.4.5 检测方法的检测范围与线性 |
| 3.4.6 检测方法的选择性 |
| 3.4.7 检测方法的回收率 |
| 3.4.8 DNA- AgNCs的荧光量子产率测定 |
| 第四章 基于dimer银簇及三通结的双信号比率检测氯霉素方法研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 DNA溶液配制 |
| 4.3.2 检测步骤 |
| 4.3.3 检测条件的优化 |
| 4.3.4 检测范围的确定 |
| 4.3.5 选择性测试 |
| 4.3.6 回收率测定 |
| 4.3.7 琼脂糖凝胶电泳 |
| 4.3.8 透射电镜的表征 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 检测方法的原理 |
| 4.4.2 DNA模板的筛选 |
| 4.4.3 检测方法的可行性分析与电泳结果验证 |
| 4.4.4 TEM表征及粒径分析 |
| 4.4.5 检测方法的实验条件优化 |
| 4.4.6 检测方法的检测范围与线性 |
| 4.4.7 检测方法的选择性 |
| 4.4.8 检测方法的回收率 |
| 主要结论与未来展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A:中英文缩略词对照表 |
| 附录 B:DNA模板筛选荧光光谱示意图 |
| 附录 C:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 分子印迹概述 |
| 1.1.1 分子印迹技术的基本原理 |
| 1.1.2 分子印迹技术的分类 |
| 1.1.3 分子印迹聚合物的制备方法 |
| 1.1.4 MIPs的制备要素 |
| 1.1.5 MMIPs在兽药残留中的研究进展 |
| 1.2 CAP残留分析检测及现状 |
| 1.2.1 CAP简介 |
| 1.2.2 CAP滥用及危害 |
| 1.2.3 CAP残留相关政策及污染现状 |
| 1.2.4 CAP残留常见检测方法 |
| 1.3 论文研究目的、意义和内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.3 主要试剂的配制 |
| 2.3.1 制备CAP储备液 |
| 2.3.2 制备TAP储备液 |
| 2.3.3 制备FF储备液 |
| 2.4 氯霉素分子印迹聚合物的制备 |
| 2.4.1 制备磁性Fe_3O_4纳米粒子 |
| 2.4.2 制备Fe_3O_4@ SiO_2纳米粒子 |
| 2.4.3 制备Fe_3O_4@ SiO_2@ C=C |
| 2.4.4 制备CAP MMIPs |
| 2.5 MMIPs表征 |
| 2.5.1 红外表征 |
| 2.5.2 VSM表征 |
| 2.5.3 热重表征 |
| 2.5.4 TEM表征 |
| 2.5.5 粒径表征 |
| 2.6 MMIPs吸附试验 |
| 2.6.1 吸附动力学试验 |
| 2.6.2 等温吸附试验 |
| 2.6.3 吸附选择性试验 |
| 2.7 MMIPs用于鸡肉中CAP残留检测的方法学评价 |
| 2.7.1 样品处理方法 |
| 2.7.2 LC-MS分析 |
| 2.7.3 线性试验 |
| 2.7.4 定量限试验 |
| 2.7.5 回收率试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 MMIPs表征测定 |
| 3.1.1 红外表征 |
| 3.1.2 TGA表征 |
| 3.1.3 VSM表征 |
| 3.1.4 TEM表征 |
| 3.2 MMIPs吸附试验 |
| 3.2.1 CAP、FF及 TAP紫外可见吸收图谱及标准曲线建立 |
| 3.2.2 吸附动力学试验 |
| 3.2.3 等温吸附试验 |
| 3.2.4 选择性研究结果分析 |
| 3.3 MMIPs用于鸡肉中CAP残留检测的方法学评价 |
| 3.3.1 系统适用性试验 |
| 3.3.2 相对线性试验 |
| 3.3.3 定量限试验 |
| 3.3.4 回收率试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 磁性分子印迹聚合物制备工艺的筛选 |
| 4.2 磁性分子印迹聚合物对实际样品中CAP检测性评价 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 常见易残留兽药的分类 |
| 1.2.1 激素类 |
| 1.2.2 β-受体激动剂 |
| 1.2.3 磺胺类抗菌素药物 |
| 1.2.4 喹诺酮类抗菌素药物 |
| 1.2.5 大环内酯类抗生素药物 |
| 1.3 兽药残留的危害及限量标准 |
| 1.4 动物源食品中兽药残留样品前处理技术 |
| 1.4.1 萃取技术 |
| 1.4.2 凝胶渗透色谱(GPC) |
| 1.4.3 免疫亲和层析(IAC) |
| 1.4.4 超声波辅助提取(SAE) |
| 1.4.5 QuEChERS方法 |
| 1.5 动物源食品中兽药残留检测方法 |
| 1.5.1 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 1.5.2 分子印迹技术(MIT) |
| 1.5.3 液相色谱法(LC) |
| 1.5.4 气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS) |
| 1.5.5 液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS) |
| 1.6 超高效液相色谱-高分辨质谱联用分析技术 |
| 1.6.1 超高效液相色谱(UHPLC) |
| 1.6.2 高分辨质谱(HRMS) |
| 1.6.3 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术及其在动物源食品兽药检测中的应用 |
| 1.7 本论文研究的目的及意义 |
| 2 兽药仪器分析方法的建立 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 仪器与设备 |
| 2.2.2 试剂与耗材 |
| 2.2.3 标准品物质 |
| 2.2.4 质量轴调谐校正 |
| 2.2.5 色谱-质谱条件 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 液相色谱条件的优化 |
| 2.3.2 高分辨质谱参数的优化 |
| 2.3.3 离子化方式和离子加合模式 |
| 2.3.4 碰撞能量的优化 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 兽药高分辨质谱筛查数据库的构建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 仪器与设备 |
| 3.2.2 试剂与耗材 |
| 3.2.3 标准品与标准溶液 |
| 3.2.4 色谱-质谱条件 |
| 3.2.5 数据库的构建 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 一级精确质量数(MS1)指纹识别数据库 |
| 3.3.2 二级HCD碎片离子(MS2)定性确证谱图库 |
| 3.3.3 精确质量数分析 |
| 3.3.4 色谱保留时间分析 |
| 3.3.5 同分异构体鉴别 |
| 3.3.6 数据库筛查参数的设置与验证 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 高分辨质谱筛查数据库的应用研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 仪器与设备 |
| 4.2.2 试剂与耗材 |
| 4.2.3 样品准备与前处理 |
| 4.2.4 色谱-质谱条件 |
| 4.2.5 高通量筛查流程 |
| 4.2.6 数据分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 样品前处理方法优化 |
| 4.3.2 基质效应评价 |
| 4.3.3 方法的线性范围、检出限以及定量限 |
| 4.3.4 回收率与精密度 |
| 4.3.5 实际样品筛查验证 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 市售动物源食品中兽药残留筛查分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 仪器与设备 |
| 5.2.2 试剂与耗材 |
| 5.2.3 样品准备与前处理 |
| 5.2.4 仪器分析条件 |
| 5.2.5 数据分析 |
| 5.2.6 兽药残留高通量筛查与分析检测 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 市售大宗动物源食品中兽药残留筛查确证结果 |
| 5.3.2 市售大宗动物源食品中兽药残留含量分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 英文缩略表 |
| 附录B 兽药数据库信息 |
| 附录C 方法的线性关系、检出限以及定量限 |
| 附录D 10类基质中128种兽药的回收率和精密度 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务及主要成果 |
| 致谢 |
| 1 金刚烷胺残留检测的传统方法 |
| 1.1 高效液相色谱法 |
| 1.2 液相色谱-质谱联用法 |
| 1.3 酶联免疫吸附法 |
| 1.4 免疫层析法 |
| 1.5 化学发光免疫分析法 |
| 2 新型检测方法 |
| 2.1 基于免疫学反应的检测新方法 |
| 2.2 基于金刚烷胺分子印迹的检测新方法 |
| 3 结语 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景和意义 |
| 1.1.1 禽肉中典型抗生素残留的简述 |
| 1.1.2 国内外家禽养殖中抗生素使用的发展进程 |
| 1.1.3 禽肉中抗生素残留的危害 |
| 1.1.4 研究意义 |
| 1.2 国内外禽肉中抗生素残留的传统检测方法研究现状 |
| 1.2.1 液相色谱法 |
| 1.2.2 液相色谱和质谱联用法 |
| 1.2.3 微生物法 |
| 1.2.4 酶联免疫吸附法 |
| 1.2.5 胶体金免疫层析检测技术 |
| 1.3 国内外禽肉中抗生素残留的快速检测方法研究现状 |
| 1.3.1 表面增强拉曼光谱法 |
| 1.3.2 同步荧光光谱法 |
| 1.4 主要研究内容和技术路线 |
| 1.4.1 主要研究内容 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 1.5 课题来源 |
| 1.6 本章小结 |
| 2 禽肉中SM2和OFL残留的同步荧光光谱快速检测方法研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验仪器与材料 |
| 2.2.2 样品的制备 |
| 2.2.3 标准溶液以及禽肉提取液的三维同步荧光光谱的采集 |
| 2.2.4 定性试验设计方案 |
| 2.2.5 定量试验设计方案 |
| 2.2.6 荧光光谱仪参数设置 |
| 2.2.7 数据处理方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 标准溶液以及禽肉提取液的三维同步荧光光谱 |
| 2.3.2 鸡肉中SM2和OFL残留的同步荧光光谱分析 |
| 2.3.3 鸭肉中SM2和OFL残留的同步荧光光谱分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 禽肉中DFM和 OFL残留的同步荧光光谱快速检测方法研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验仪器与材料 |
| 3.2.2 样品的制备 |
| 3.2.3 标准溶液以及禽肉提取液的同步荧光光谱的采集 |
| 3.2.4 定性试验设计方案 |
| 3.2.5 定量试验设计方案 |
| 3.2.6 荧光光谱仪参数设置 |
| 3.2.7 数据处理方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 标准溶液以及禽肉提取液的同步荧光光谱 |
| 3.3.2 鸡肉中DFM和 OFL残留的同步荧光光谱分析 |
| 3.3.3 鸭肉中DFM和 OFL残留的同步荧光光谱分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 鸡肉中SARH和 DCH残留的同步荧光光谱快速检测方法研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验仪器与材料 |
| 4.2.2 样品的制备 |
| 4.2.3 标准溶液以及鸡肉提取液的三维同步荧光光谱的采集 |
| 4.2.4 鸡肉中SARH和 DCH残留的定性试验设计方案 |
| 4.2.5 鸡肉中SARH和 DCH残留的定量试验设计方案 |
| 4.2.6 荧光光谱仪参数设置 |
| 4.2.7 数据处理方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 标准溶液以及鸡肉提取液的三维同步荧光光谱 |
| 4.3.2 鸡肉中SARH和 DCH残留的同步荧光光谱检测条件优化 |
| 4.3.3 鸡肉中SARH和 DCH残留的主成分分析 |
| 4.3.4 鸡肉中SARH和 DCH残留的预测模型的建立和预测结果的分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文及专利 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 研究目的与意义 |
| 1.1.1 动物性食品安全与兽药残留 |
| 1.1.2 氟甲喹概述 |
| 1.1.3 研究意义 |
| 1.2 喹诺酮类及氟甲喹检测方法的研究进展 |
| 1.2.1 喹诺酮类检测方法的研究进展 |
| 1.2.2 氟甲喹检测方法的研究进展 |
| 1.3 存在的主要问题 |
| 1.4 主要研究内容和方法 |
| 第二章 氟甲喹完全抗原合成及多克隆抗体制备 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 药品及试剂 |
| 2.1.2 缓冲溶液体系 |
| 2.1.3 仪器及设备 |
| 2.1.4 试验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 完全抗原的合成与鉴定 |
| 2.2.2 氟甲喹多克隆抗体的制备与纯化 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 完全抗原的合成与鉴定 |
| 2.3.2 氟甲喹多克隆抗体的制备及纯化 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 氟甲喹残留的ELISA检测方法研究 |
| 3.1 材料与试剂 |
| 3.1.1 药品及试剂 |
| 3.1.2 缓冲溶液体系 |
| 3.1.3 仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 包被原最适浓度和抗血清最适稀释度的确定 |
| 3.2.2 间接竞争ELISA反应体系条件的优化 |
| 3.2.3 间接竞争ELISA标准曲线的建立 |
| 3.2.4 ELISA方法的稳定性 |
| 3.2.5 抗体的特异性 |
| 3.2.6 样品的测定 |
| 3.2.7 ELISA方法的验证——高效液相色谱法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 包被原最适浓度和抗血清最适稀释度的确定 |
| 3.3.2 间接竞争ELISA反应体系条件的优化 |
| 3.3.3 间接竞争ELISA法标准曲线的建立 |
| 3.3.4 ELISA方法的稳定性 |
| 3.3.5 抗体的特异性 |
| 3.3.6 样品的测定 |
| 3.3.7 ELISA方法的验证——高效液相色谱法 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 氟甲喹残留的固相膜免疫检测方法研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 药品及试剂 |
| 4.1.2 仪器及设备 |
| 4.1.3 试验样品 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 胶体金及金标抗体的制备 |
| 4.2.2 胶体金标记固相膜的制备 |
| 4.2.3 胶体金标记固相膜检测条件的优化 |
| 4.2.4 最低检出限的确定 |
| 4.2.5 样品的基质消除 |
| 4.2.6 样品的加标回收测定 |
| 4.3 结果及分析 |
| 4.3.1 胶体金的制备及质量鉴定 |
| 4.3.2 胶体金与FLU抗体结合最适pH值的确定 |
| 4.3.3 胶体金标记最佳抗体加入量的确定 |
| 4.3.4 胶体金标记固相膜检测条件的优化 |
| 4.3.5 最低检出限的确定 |
| 4.3.6 样品基质的消除 |
| 4.3.7 样品的加标回收测定结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 氟甲喹残留的仿生酶联免疫检测方法研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 药品及试剂 |
| 5.1.2 仪器及设备 |
| 5.1.3 实验样品 |
| 5.1.4 溶液体系的配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 氟甲喹分子印迹膜(MIPs)的制备及表征 |
| 5.2.2 酶标抗原的制备 |
| 5.2.3 仿生酶联免疫分析方法的操作过程 |
| 5.2.4 BELISA反应体系条件的优化及方法的建立 |
| 5.2.5 样品检测 |
| 5.2.6 BELISA方法的验证 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 氟甲喹分子印迹膜的制备及表征 |
| 5.3.2 仿生酶联免疫分析方法的条件优化及建立 |
| 5.3.3 方法的特异性 |
| 5.3.4 样品测定 |
| 5.3.5 BELISA方法的验证——高效液相色谱法 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.1.1 氟甲喹完全抗原的合成及多克隆抗体的制备 |
| 6.1.2 氟甲喹间接竞争ELISA检测方法的建立与应用 |
| 6.1.3 氟甲喹固相膜免疫检测方法的建立与应用 |
| 6.1.4 基于分子印迹技术的氟甲喹仿生酶联免疫检测方法的建立与应用 |
| 6.2 本研究的创新点 |
| 6.3 本研究的不足之处 |
| 6.4 展望 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的论文 |
| 附件 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩略表 |
| 1 前言 |
| 1.1 氯霉素类抗生素简介 |
| 1.2 氟苯尼考和甲砜霉素残留及危害 |
| 1.2.1 氟苯尼考和甲砜霉素的应用概述 |
| 1.2.2 氟苯尼考和甲砜霉素残留现状及危害 |
| 1.3 氟苯尼考与氟苯尼考胺和甲砜霉素检测技术研究进展 |
| 1.3.1 仪器检测法 |
| 1.3.2 免疫检测法 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 1.5 本研究的主要内容及技术路线 |
| 1.5.1 主要内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 半抗原设计及合成 |
| 2.2.2 半抗原的鉴定 |
| 2.2.3 人工抗原的合成 |
| 2.2.4 人工抗原的鉴定 |
| 2.2.5 动物免疫 |
| 2.2.6 抗血清的制备及评价 |
| 2.2.7 兔多克隆抗体的纯化 |
| 2.2.8 单克隆抗体的制备及评价 |
| 2.2.9 鼠源单克隆抗体的纯化 |
| 2.2.10 抗体-包被原组合的筛选 |
| 2.2.11 ciELISA方法的建立 |
| 2.2.12 ciELISA方法的特异性 |
| 2.2.13 ciELISA方法精密度 |
| 2.2.14 ciELISA方法稳定性 |
| 2.2.15 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 2.2.16 样品前处理及基质干扰 |
| 2.2.17 实际样品的测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 半抗原合成与鉴定 |
| 3.2 人工抗原合成与鉴定 |
| 3.3 多克隆抗体制备及纯化 |
| 3.3.1 鼠抗血清制备及评价 |
| 3.3.2 兔抗血清鉴定及纯化 |
| 3.4 单克隆抗体制备及纯化 |
| 3.4.1 单克隆抗体的制备及纯化 |
| 3.4.2 单克隆抗体评价 |
| 3.5 抗体-包被原组合的筛选 |
| 3.6 同时检测FF及TAP的ciELISA方法建立 |
| 3.6.1 棋盘法 |
| 3.6.2 工作条件的优化 |
| 3.6.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.6.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.6.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.6.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.6.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.6.8 ciELISA法样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.6.9 实际样品的测定 |
| 3.7 同时检测FF及FFA的ciELISA方法建立 |
| 3.7.1 棋盘法 |
| 3.7.2 工作条件的优化 |
| 3.7.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.7.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.7.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.7.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.7.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.7.8 样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.7.9 实际样品的测定 |
| 3.8 特异性检测FF的ciELISA方法建立 |
| 3.8.1 棋盘法 |
| 3.8.2 工作条件的优化 |
| 3.8.3 ciELISA标准曲线的建立 |
| 3.8.4 ciELISA方法特异性 |
| 3.8.5 ciELISA方法精密度 |
| 3.8.6 ciELISA方法稳定性 |
| 3.8.7 ciELISA方法有机溶剂耐受性 |
| 3.8.8 样品前处理及基质干扰的消除 |
| 3.8.9 实际样品的测定 |
| 4 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 半抗原的设计与合成 |
| 4.1.2 免疫方法理化参数优化 |
| 4.1.3 影响ciELISA稳定性因素的分析 |
| 4.1.4 本研究免疫方法与其他免疫方法的比较 |
| 4.2 结论 |
| 4.3 创新点 |
| 4.4 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附图 |
| 1 氯霉素的标准检测方法研究 |
| 1.1 液相色谱串联质谱法 (LC-MS法) |
| 1.2 气相色谱-质谱法 (GC-MS法) |
| 1.3 酶联免疫法 (ELIS A法) |
| 1.4 气相色谱法及液相色谱法 |
| 2 总结与建议 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 兽药的概述 |
| 1.1.1 兽药的分类 |
| 1.1.2 兽药的危害 |
| 1.1.3 兽药的检测方法 |
| 1.2 核酸适配体传感器的概述 |
| 1.2.1 核酸适配体传感器的优点 |
| 1.2.2 核酸适配体传感器的分类 |
| 1.2.3 核酸适配体传感器在荧光检测方面的应用 |
| 1.3 论文研究的内容及意义 |
| 1.3.1 研究目的 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 拟解决的关键问题 |
| 第 2章 基于荧光探针噻唑橙建立非标记核酸适配体传感器检测四环素 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验药品与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 CD色谱的测定 |
| 2.2.4 非标记核酸适配体荧光传感器检测TET |
| 2.2.5 实际样品牛奶的前处理 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 实验原理的验证 |
| 2.3.2 实验条件的优化 |
| 2.3.3 标准曲线的建立 |
| 2.3.4 选择性实验 |
| 2.3.5 实际样品中TET的测定 |
| 2.4 结论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 基于罗丹明B和金纳米粒子间的荧光共振能量转移建立非标记核酸适配体传感器检测多巴胺 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验药品与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 柠檬酸根包被的AuNPs的制备与表征 |
| 3.2.4 非标记核酸适配体荧光传感器检测多巴胺 |
| 3.2.5 实际样品猪饲料和鸡肝的前处理 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 基于核酸适配体利用Au NPs为探针比色检测多巴胺 |
| 3.3.2 基于核酸适配体利用RB和AuNPs间FRET荧光检测多巴胺 |
| 3.3.3 灵敏性与选择性 |
| 3.3.4 实验样品中的应用 |
| 3.4 结论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
| 1 实验部分 |
| 1.1 试剂与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 双水相气浮溶剂浮选 |
| 1.2.2 双水相萃取 |
| 1.2.3 浮选率计算 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 亲水有机溶剂和析相盐的选择 |
| 2.2 检测波长的选择 |
| 2.3 标准曲线的绘制 |
| 2.4 氯化钠的浓度 |
| 2.5 p H的影响 |
| 2.6 氮气流速的影响 |
| 2.7 浮选时间的影响 |
| 2.8 共存物质的影响 |
| 2.9 双水相气浮溶剂浮选法与双水相萃取法的对比 |
| 2.1 0 样品测定 |
| 3 结论 |
