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绿色链霉菌固体发酵生产木聚糖酶的研究

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一、橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究(论文文献综述)

孔海洋[1](2020)在《玉米麸皮木聚糖降解酶基因挖掘与分子改良》文中研究表明木聚糖酶能够将半纤维素中木聚糖水解为单糖和寡糖,已广泛应用于多个领域。玉米的加工副产物玉米麸皮作为重要的饲料原料,木聚糖含量丰富,但结构极为复杂,难以被传统木聚糖酶降解。本研究以实验室保存的嗜酸黑曲霉Aspergillus niger MJ5和购买的八株镰刀菌为材料,用添加了玉米麸皮的盐离子培养基进行降解玉米麸皮木聚糖的产酶菌株筛选。以玉米麸皮木聚糖为底物通过对培养液上清进行酶活力测定,发现嗜酸黑曲霉A.niger MJ5和禾谷镰孢菌Fusarium graminearum 2697的培养液上清有较高的玉米麸皮木聚糖酶活性。根据基因组测序结果,从这两株菌中筛选到15个GH5和GH10家族的木聚糖酶基因,尝试克隆并在毕赤酵母中进行表达。从A.niger MJ5中克隆得到了11个可能的GH5和GH10家族木聚糖酶基因,GH10家族的木聚糖酶基因Anxyn10A在毕赤酵母中表达后检测到玉米麸皮木聚糖酶活性。重组AnXYN10A最适pH为5.0,最适温度为60°C,以小麦阿拉伯木聚糖为底物时其比活为2507 U/mg,Km和Vmax分别为5.67 mg/mL和2835μmol/min·mg,以自制玉米麸皮木聚糖为底物时其比活为22 U/mg,Km和Vmax分别为12.7 mg/mL,36μmol/min·mg。从F.graminearum 2697中克隆得到了4个可能的GH10家族木聚糖酶基因,Fgxyn10A和Fgxyn10B在毕赤酵母中表达后具有相对较高的玉米麸皮木聚糖酶活性,对两个重组酶进行了性质测定。FgXYN10A最适温度为50°C,最适pH为5.0,FgXYN10B最适温度60°C,最适pH为5.5,以小麦阿拉伯木聚糖为底物二者的比活分别为1105U/mg和451 U/mg,以自制玉米麸皮木聚糖为底物二者的比活分别为19 U/mg和14 U/mg。A.niger MJ5来源的木聚糖酶AnXYN10A降解玉米麸皮木聚糖的能力及综合性能优于F.graminearum 2697来源的木聚糖酶。为了进一步提高AnXYN10A的稳定性和催化活性,我们以AnXYN10A为材料进行突变研究,分别在G89位﹑I130位和Y177位﹑G210位引入二硫键,两个二硫键突变体最适pH和温度及比活均与野生型相当,在60°C处理10 min的热稳定性较野生型均有约5%的提升。通过序列及结构分析设计突变体T302Y﹑L24Y﹑R161A,它们的最适温度和pH均与野生型一致,其中突变体T302Y热稳定性大幅提升,60°C处理10 min还剩余80%的酶活,而野生型仅剩余55%的酶活,比活较野生型下降了19%。突变体L24Y比活较野生型提升12%,但热稳定性下降严重(60°C处理10 min失活,而野生型剩余55%的酶活)。突变体R161A的热稳定性与野生型相当,比活较野生型有11%的提高。我们将二硫键突变与T302Y﹑R161A进行组合获得了组合突变体AnXYN10A-M,在毕赤酵母中表达的AnXYN10A-M最适温度和pH与野生型一致,热稳定性较野生型有大幅提高,60°C处理30 min剩余67%的酶活(同一条件下野生型剩余约30%的酶活),60°C的半衰期较野生型提高了3倍,Tm值提高了6.1°C。以小麦阿拉伯木聚糖为底物时比活为2251 U/mg,以玉米麸皮木聚糖为底物时比活为21 U/mg,与野生型相当。本研究通过对木聚糖酶基因资源的挖掘成功从A.niger MJ5和F.graminearum 2697中克隆了15个可能的木聚糖酶基因,并尝试在毕赤酵母当中进行了表达,获得了3个活性相对较高的玉米麸皮木聚糖降解酶。同时对AnXYN10A进行了突变研究,组合突变体AnXYN10A-M热稳定性大幅提升,催化活性与野生型相当,在饲料工业具有潜在的应用价值。

孙敏[2](2019)在《白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205次生代谢活性物质的结构鉴定及对尖孢镰刀菌的抑制作用》文中研究指明抗生素是由微生物次生代谢产生的一种活性物质,在农业及医学上有着广泛的用途。白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205是本实验室筛选到的一株对多种植物病原真菌具有较强拮抗活性的放线菌菌株,田间试验证实该生防制剂对草莓根腐病、黄瓜枯萎病等土传病害有较好的防控效果。为了探索其防控机制,本文首先对S.albospinus CT205液体发酵产生的活性物质物质进行提取纯化及结构鉴定,其次研究环境因素对菌株CT205产生活性物质的影响,最后探索CT205液体发酵产生的活性物质及其固体发酵产生的主要挥发性成分2-苯乙醇协同抑制黄瓜尖孢镰刀菌的作用效果。研究结果如下:对S.albospinus CT205进行液体发酵、离心、收集上清液,乙酸乙酯萃取、减压浓缩、甲醇溶解,收集活性物质。对活性物质进行薄层层析及生物显影检测确定活性物质Rf值,并采用制备型薄板分离获得单体化合物。紫外扫描显示活性物质在λ=215nm处有最大吸收峰,UPLC分离检测确定活性物质的吸收峰值位置,HPLC-TOF-HR-MS检测分析一级质谱、二级质谱表明活性物质分子量为282.2,该物质与放线酮分子量相同,1H NMR、13C NMR检测其骨架结构,红外光谱佐证活性物质各功能基团(羰基、羟基、氨基等)的存在。鉴定该物质为放线酮,又名环己酰亚胺(Cycloheximide)。并建立了 一种快速检测发酵液中活性物质含量的化学检测方法,测定发酵液中放线酮含量为37.95mg/L。研究发酵条件对S.albospinus CT205液体发酵的影响,发现不同起始pH,不同发酵温度及不同发酵周期均影响S.albospinus CT205发酵产生活性物质的含量。液体发酵初始pH=8.0,发酵温度28℃时,发酵周期96 h时为最佳发酵条件,S.albospinus CT205代谢产生放线酮量最高。探究比较在S.albospinus CT205液体发酵培养基中添加适量的黄瓜主要根系分泌物组分(glucose,oxalicacid和glutamic Acid),结果表明:添加适量的glucose和Oxalic Acid可以提高放线酮的产量,添加glutamic acid则对放线酮的产量没有显着影响。探索放线酮及S.albospinus CT205产生的挥发性物质2-苯乙醇对黄瓜尖孢镰刀菌抑制的效果。研究发现放线酮、2-苯乙醇单独处理均可抑制尖孢镰刀菌的生长活性,且放线酮与2-苯乙醇两种物质组合具有协同抑制抑制尖孢镰刀菌的作用,在放线酮40μg/mL+2-苯乙醇25 μL处理时,尖孢镰刀菌菌丝生长相对抑制率为82.49%,菌丝基本不生长;在放线酮8 μg/mL+2-苯乙醇30 μL处理时,尖孢镰刀菌孢子萌发抑制率100%,达到完全抑制的效果。本研究鉴定了白刺链霉菌CT205次生代谢产生的活性物质为放线酮,并建立了一种检测发酵液中放线酮含量的化学检测方法。发现不同的环境因素对CT205发酵产活性物质的含量有较大的影响,并证实放线酮及2-苯乙醇对黄瓜尖孢镰刀菌具有协同抑制的效果。研究结果为制备安全高效的生防制剂防控土传枯萎病提供理论基础。

李吉萍,包昌杰,陈光,张斯童[3](2019)在《木聚糖酶异源表达的研究进展》文中进行了进一步梳理木聚糖(xylan)在自然界中的含量极其丰富,在农作物和农林剩余物中大量存在。随着能源资源问题的日益凸显,对木聚糖的应用和研究越来越受到重视。木聚糖酶(xylanase)是可以将木聚糖降解为低聚木糖和木糖的一类水解酶,近年来,为了实现木聚糖酶的高产、高酶活表达,科研工作者做了大量的研究工作,就木聚糖酶异源表达(heterologous expression)的研究进展进行综述。

罗玲[4](2015)在《木聚糖酶产生菌株的选育、发酵工艺及酶学性质的研究》文中认为本文以玉米芯粉为碳源进行产木聚糖酶菌株的选育、发酵工艺优化、酶的分离纯化和酶学性质的研究,具体研究内容如下:(1)利用透明圈法筛选产木聚糖酶的菌株,经鉴定该菌株LMZY为异硫链霉菌(Streptomyces althioticus),测定其生长曲线,选取26 h为种子培养时间。(2)采用单因素试验、Plackett-Burman试验设计、中心复合试验设计等方法对LMZY菌株发酵产木聚糖酶的发酵工艺进行了优化,最优培养条件为:温度40℃,周期120 h,初始p H 5.0,摇床转速160 r/min,接种量6%,装液量50m L/250m L。最优发酵培养基配方(g/L)为:玉米芯粉24.4,大豆16,KNO3 8,K2HPO40.4,Na2HPO40.754,Mg SO4?7H2O 0.4。预测酶活为36.65 U/m L,实际酶活为36.45U/m L,与预测值吻合良好。(3)对原始菌株LMZY进行诱变,发现紫外诱变效果最佳,紫外照射最佳时间为1.0 min,获得紫外诱变突变株LMZM,经摇瓶发酵测定酶活为46.61 U/m L,比LMZY提高了27%左右,并且具有良好的遗传稳定性。测定其生长曲线,选取26 h为种子培养时间。(4)采用单因素试验、Plackett-Burman试验设计,中心复合试验设计等方法对LMZM菌株发酵产木聚糖酶的发酵工艺进行了优化,最优培养条件为:温度40℃、周期108 h、起始p H 5.5、接种量8%、摇床转速160 r/min、装液量50 m L/250 m L。最优发酵培养基配方(g/L)为:玉米芯粉27.85,大豆粉16.25,酵母粉3.46,Mg SO4?7H2O为1.176,K2HPO4为0.6,Na2HPO4为0.4。预测酶活为117.804 U/m,实际酶活为116.63 U/m L与预测值吻合良好,比LMZM优化前(46.32 U/m L)提高了1.52倍。(5)采用硫酸铵盐析、脱盐、离子交换层析、凝胶过滤层析色谱技术,纯化后的木聚糖酶为电泳纯单一组分,其相对分子质量为31.75 k D。(6)所得木聚酶的酶促反应最适温度为60℃,该酶最适作用p H值为8.0。研究表明:K+和Na+对该木聚糖酶酶促反应的影响不显着;Cu2+对该木聚糖酶酶促反应有较强的促进作用,其次是Ca2+、Zn2+和Mg2+;Mn2+在低浓度时作用不显着,但高浓度时抑制作用较明显;Hg2+对酶促反应的抑制作用强烈,其次是Co2+、Ba2+、Fe2+和Fe3+。同时,β-巯基乙醇和EDTA对酶促反应的影响不显着,SDS、DEPC、EDC、NBS和L-色氨酸对酶促反应有一定的抑制作用,而Triton X-100、DTT对酶促反应有一定的促进作用,尿素和L-半胱氨酸对酶促反应的促进作用更为显着。该木聚糖酶的米氏常数为43.03 mg/m L,最大反应速率为312.5μmol/(m L.min)。而且,其水解产物的薄层层析色谱分析的结果表明该酶为内切木聚糖酶。此外,该木聚糖酶对底物的专一性较强,而对其他底物作用较差,且一定程度提高牛皮纸明度。

王绍花,宗工理,刘飞,朱希强,凌沛学[5](2013)在《不同来源木聚糖酶酶学性质研究》文中研究指明目的研究比较4种不同来源木聚糖酶的酶学性质,为各酶在不同领域应用提供理论依据。方法通过摇瓶发酵获得源自4种菌株的木聚糖酶粗酶液,用二硝基水杨酸(DNS)法测定各木聚糖酶的酶活性,并研究酶学性质。结果嗜热棉毛菌、绿色木霉、泡盛曲霉和橄榄绿链霉菌来源的木聚糖酶的最适温度分别为70,60,50和60℃;最适pH分别为6,4,4和6。嗜热棉毛菌来源的木聚糖酶耐热性最强,高温60℃下,酶活性高于85%,70℃仍保持60%以上的酶活性,且在pH411的范围内能保持较高稳定性。另外3种来源的木聚糖酶则有较强的耐酸性。结论嗜热棉毛菌来源的木聚糖酶有饲料添加剂方面的应用优势。另外3种来源的木聚糖酶可根据不同行业对木聚糖酶的要求,应用于食品、医药、能源、环境等领域。

罗翀[6](2013)在《工程菌产木聚糖酶的工艺及酶学性质研究》文中认为本论文在前期实验室工作的基础上,以产木聚糖酶的基因工程大肠杆菌为研究对象,以碳氮源优化后的培养基为基准,着重研究发酵过程中接种量、溶氧、pH值、培养温度等培养条件对菌体生长及产生的木聚糖酶酶活力的影响,并研究了木聚糖酶的酶学性质和木聚糖酶降解产物,以及不同金属离子对木聚糖酶的影响,得出以下结论:(1)对菌株产酶的发酵条件进行了优化,确定了接种量为12%,发酵过程中溶氧值为25%,pH为6.8,生长期培养温度为37℃,诱导期培养温度为36℃。优化后,木聚糖酶酶活最高可达790U/mL,一般稳定在700U/mL以上。(2)研究了该酶的酶学性质,确定了最适pH值为6.4,最适反应温度为55℃,在pH5.2-8.8条件下2小时能保持90%以上活力,分别在65℃和80℃下处理10min,仍保持98.5%和85%的相对活性。基于该酶具有较宽的pH稳定范围和热稳定性,表明该酶具有较高的生产应用价值。(3)研究了金属离子对该木聚糖酶的影响,其中Na+、Ca2+、K+具有激活作用,能增强其酶活;Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+、Cu2+具有抑制作用,能降低其酶活。且金属离子对木聚糖酶的激活作用和抑制作用均会随离子浓度提高而增强。(4)用薄层色谱法分析该酶对燕麦木聚糖的降解产物,其中90%以上为木二糖、木三糖、木四糖和木五糖等低聚糖,说明该木聚糖酶是一种以内切作用为主的木聚糖酶。

江学斌[7](2013)在《基于工业化生产的毕赤酵母高效表达木聚糖酶XYL1的研究》文中研究表明木聚糖酶(Xylanase)是一类能专一降解木聚糖为低聚木糖和木糖的水解酶,在制浆造纸、饲料、食品、酿酒等领域具有良好的应用前景,并可为能源短缺、环境污染等相关社会问题提供新的解决方式。木聚糖酶主要来源于枯草芽孢杆菌、类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、链霉菌等原核微生物和黑曲霉、里氏木霉、青霉、等真菌,但上述原始菌株产木聚糖酶的水平较低,难以达到工业化生产要求,从而限制了木聚糖酶在商业上的应用。有鉴于此,本研究根据毕赤酵母的偏爱密码子人工设计合成了编码链霉菌S38(Streotomyces sp.S38)木聚糖酶XYL1(Xlyanase1)的成熟肽基因,以X33为宿主菌,选用PGAP为启动子,构建组成型表达XYL1的工程菌株X33/pGAPZ A-XYL1。实验表明木聚糖酶XYL1基因成功插入表达载体pGAPZ A中,获得的重组载体pGAPZ A-XYL1,经电转化整合至毕赤酵母X33基因组DNA中。重组工程菌X33/pGAPZ A-XYL1传代稳定,连续传代10代无显着基因丢失,可满足补料分批发酵生产的需要;而连续传代15代的基因丢失率仅为10%。重组工程菌X33/pGAPZ A-XYL1产木聚糖酶活性在摇瓶水平为215±10IU/mL。发酵液离心收获的上清,经5kDa膜包浓缩置换缓冲液、Q-sephrose FF强阴离子交换层析和Sephadex G-25分子筛联用分离纯化,获得电泳纯度高于90%的重组木聚糖酶XYL1,比活力从796.80IU/mg提高到1328.69IU/mg。肽指纹图谱鉴定结果显示,纯化的XYL1与来源于链霉菌Streptomyces sp. S38的内切β-1,4木聚糖酶1(GenBank注册号X98518.1)完全匹配。实验表明重组木聚糖酶XYL1在耐热性方面具有比原酶更好的酶学性质,最适pH为6.0,在pH3.09.0时酶活保持稳定;最适反应温度为55℃,且45℃-65℃酶活相对稳定;在60℃处理30min后仍剩余63%的酶活力;重组木聚糖酶XYL1的催化反应机理可以用米氏方程描述,其νmax为5000μmol/min·mg prot,Km为2.0mg/mL。摇瓶实验比较了甘油、葡萄糖、甲醇这三种碳源对表达的影响,结果表明葡萄糖更适用作发酵的碳源,并确定了发酵初始葡萄糖最适浓度为30g/L。在5L罐中研究了工程菌X33/pGAPZ A-XYL1的连续发酵工艺,结果显示,工程菌发酵第5天进入稳定态:菌体浓度基本稳定在400g/L(WCW)水平,最大菌体产率DCx为8.14g/L.h(WCW);木聚糖酶XYL1的表达水平稳定在1100IU/mL,木聚糖酶XYL1最大产率DCp达23028IU/L·h。残糖含量在发酵液中维持较低水平,平均为2.56g/L;DO一直稳定在30-40%。连续培养持续了17天,稀释速率D为0.48d-1,产物产率则为补料分批发酵的1.66倍。重组毕赤酵母在发酵过程中的的遗传稳定性较好,未出现明显的基因丢失现象;同时由于料液在反应器中平均停留的时间短,未见明显的蛋白酶降解XYL1的现象。以葡萄糖为限制性底物,通过5L罐的恒化培养,获得相关动力学参数,比生长速率μ与葡萄糖浓度Cs关系符合Monod方程,菌体生长动力学模型μ=0.35Cs(/0.38+Cs),其中μmax=0.35h-1,Ks=0.38g.L-1;比生长速率μ与比产物形成速率的关系呈钟罩型曲线,XYL1生成动力学模型qp=-0.0529μ2+0.0168μ-0.0003(0.024≤μ≤0.212);底物消耗动力学模型,qs=1.6025μ+0.0277;理论最大菌体对葡萄糖得率为YG=0.624g/g,维持系数m=0.0277g/g.h;通过比生长速率μ与菌体生产率DCx的关系研究,推导出最佳稀释速率Dopt=0.316h-1,实验预测的最大菌体生产率(DCx)m=7.509g/L·h。对μ与产物生产率DCp的关系进行了研究,μ与产物生产率DCp的关系和μ与qp的关系类似,其峰值出现在μ=0.156h-1。从菌量、产量、菌体得率系数(YX/S)、产物得率系数(YP/S)和比产物形成速率(qp)等动力学参数出发,在50L发酵罐中比较了间歇流加、恒速流加和指数流加等不同流加模式对毕赤酵母工程菌X33/pGAPZ A-XYL1生长和重组XYL1表达的影响,结果显示指数流加是该工程菌高密度发酵的最优的流加模式。在上述指数流加发酵的基础上进一步优化,并采取分段控制工艺进行发酵,最终发酵菌体湿重达415g/L,酶活达2788IU/m L,发酵水平比单纯的指数流加提高了20%。采用分段控制工艺在10m3生产罐上进行三批次发酵放大试验,平均放罐体积8.152m3,最高菌湿重达到486g/L,最高酶活3420IU/m L。上述结果表明分段控制工艺放大效果良好,三批次间发酵差异较小,发酵产酶水平比50L罐发酵规模提高了23%,总体工艺稳定。

胡玉琪,丁长河[8](2012)在《固态发酵生产木聚糖酶的研究进展》文中研究说明由于木聚糖酶能够将半纤维素中的木聚糖主链分解,因而广泛应用于造纸、饲料和食品等行业。固态发酵可以直接利用低成本的农业废弃物,具有低成本、低能耗、高产率和环境污染少等优点。因此,有必要对固态发酵生产木聚糖酶的工艺控制和研究现状进行简要概括,为大规模的工业化生产提供理论依据。

王权帅,康文丽,生吉萍,申琳[9](2011)在《不同发酵条件对Fusarium.solani ZH0101产木聚糖酶的影响》文中指出以本实验室筛选到的一株产木聚糖酶但不产纤维素酶的真菌Fusarium solani ZH0101为供试菌株,利用麦秸为诱导物,对产木聚糖酶的液体发酵培养基进行优化。对发酵时间、麦秸添加量、培养基起始pH值、磷酸盐、金属离子、无机氮源和有机氮源对产酶的影响进行研究,优化最佳的培养条件。优化后的液体发酵培养基条件为:麦秸20g/L、KH2PO4 4g/L、CH3COONH4 1g/L、酵母膏2g/L和起始pH值为6.0,发酵时间为14d。优化条件下所产无纤维素酶活力的木聚糖酶酶活力为26.85U/mL,能比未优化前的20.82U/mL提高近30%。

袁冬华[10](2011)在《重组木聚糖酶的发酵及应用研究》文中指出木聚糖酶是木聚糖水解酶系中最主要的一种,可由许多微生物经液态发酵产生,在酿酒、饲料、食品、医药、制浆造纸和能源环保工业上具有广阔的应用前景。针对目前酿酒和饲料行业使用的微生物木聚糖酶产量低、稳定性不高的缺点,本文对重组毕赤酵母的产木聚糖酶条件、酶学性质及酶的应用进行了研究。采用单因素实验分析了重组毕赤酵母摇瓶发酵时种子液的种龄、接种量和生长相的初始pH、碳源、氮源及培养时间。利用Plackett-Burman实验设计对诱导相中10个因素进行筛选,通过方差分析得知影响木聚糖酶表达的主要因子为酵母膏、诱导pH和摇床转速,并采用Box-Behnken的响应面分析对其进行优化,优化后的酶活为262.8 U/mL。将优化好的摇瓶发酵条件应用于7 L发酵罐上实现了木聚糖酶的高密度表达,酶活为2054.9 U/mL。分别采用阴离子交换色谱和凝胶过滤层析对透析后的酶进行分离纯化,经SDS-PAGE验证得知部分纯化酶中含有两种蛋白质,分子量分别约为35 kDa和31 kDa,酶的比活为3071.71 U/mg,纯化倍数为6.79,回收率为30.2%。部分纯化酶的最适作用温度和pH分别为60℃和6;酶的酸碱稳定性和热稳定性都较好,在pH 4.07.5的条件下保温1 h后相对酶活仍大于60%,80℃保温2 min后剩余酶活为52%;低浓度的Na+、Ca2+与高浓度的Fe2+、Mn2+和SDS对酶活有促进作用,K+、Cu2+和低浓度的Zn2+对酶活有抑制作用,EDTA对酶活几乎没有影响。酶促反应动力学参数分别为米氏常数Km=20.07 mg/mL,最大反应速率Vmax=714.29μmol/mL/min。将木聚糖酶用于全麦芽或以小麦芽和大米为辅料的麦汁糖化过程中,能明显加快麦汁过滤速度,降低PAX含量,提高浸出物和可溶性氮含量;在麦芽制造过程中添加粗酶,则能改善成品麦芽的品质。体外酶解实验发现,木聚糖酶能降低饲料原料大麦、小麦、麸皮和玉米中的总木聚糖含量,并能促进原料中粗蛋白的降解。

二、橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究(论文提纲范文)

(1)玉米麸皮木聚糖降解酶基因挖掘与分子改良(论文提纲范文)

摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 木聚糖
        1.1.1 木聚糖的来源与结构
        1.1.2 玉米麸皮木聚糖
        1.1.3 木聚糖的提取
    1.2 低聚木糖
        1.2.1 低聚木糖的作用
        1.2.2 低聚木糖的获取
    1.3 木聚糖酶
        1.3.1 木聚糖酶的结构与分类
        1.3.2 木聚糖酶的来源与外源表达
        1.3.3 木聚糖酶的理化性质
    1.4 木聚糖酶对不同木聚糖的降解
    1.5 木聚糖酶的分子改良
    1.6 木聚糖酶的应用
    1.7 问题与展望
        1.7.1 存在问题
        1.7.2 未来展望
    1.8 本研究的目的与意义
第二章 玉米麸皮木聚糖降解酶基因的克隆与表达
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株与质粒
        2.1.2 引物合成及测序
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 试剂﹑试剂盒及工具酶
        2.1.5 培养基及溶液配制
        2.1.6 玉米麸皮木聚糖的制作
    2.2 实验方法
        2.2.1 产玉米木聚糖降解酶菌株筛选
        2.2.2 玉米木聚糖降解酶基因的克隆
        2.2.3 重组表达载体的构建
        2.2.4 玉米木聚糖降解酶基因在毕赤酵母中的表达
        2.2.5 重组木聚糖酶的酶学性质的测定
    2.3 实验结果
        2.3.1 产玉米木聚糖降解酶菌株筛选结果
        2.3.2 来源于A.niger MJ5和F.graminearum2697 木聚糖酶基因的克隆
        2.3.3 木聚糖酶的异源表达与性质测定
    2.4 讨论
    小结
第三章 A.niger MJ5 来源的An XYN10A的突变研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株与质粒
        3.1.2 引物合成与测序
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 试剂﹑试剂盒﹑工具酶
        3.1.5 培养基及溶液
    3.2 实验方法
        3.2.1 序列比对与结构分析
        3.2.2 突变体的构建
        3.2.3 突变体的表达
        3.2.4 突变体的性质测定
    3.3 实验结果
        3.3.1 序列及结构分析确定突变位点
        3.3.2 突变体质粒的构建
        3.3.3 突变体的表达及性质测定
    3.4 讨论
    小结
第四章 全文总结
参考文献
附录A
致谢
作者简历

(2)白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205次生代谢活性物质的结构鉴定及对尖孢镰刀菌的抑制作用(论文提纲范文)

摘要
ABSCRACT
第一章 文献综述
    1 放线菌及其应用
    2 放线菌的液体发酵
    3 活性物质结构的检测方法
        3.1 紫外扫描(UV)
        3.2 超高液相色谱检测(UPLC)
        3.3 高效液相色谱-串联质谱联用技术(HPLC-TOF-HR-MS)
        3.4 红外光谱检测(FTIR)
        3.5 核磁共振检测(~1HNMR ~(13)CNMR)
    4 环境因素对放线菌发酵产生活性物质的影响
    5 黄瓜土传枯萎病的危害及生物防治
    6 研究目的意义与技术路线
        6.1 研究目的与意义
        6.2 技术路线
第二章 Streptonyces albospinus CT205液体发酵及活性物质的分离鉴定
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.1.1 供试菌株
        1.1.2 培养基
        1.1.3 实验试剂
        1.1.4 实验材料
        1.2 方法
        1.2.1 S.albospinus CT205液体发酵
        1.2.2 S.albospinus CT205代谢产生活性物质的提取及纯化
        1.2.3 活性物质的紫外(UV)扫描检测
        1.2.4 活性物质的超高效液相色谱(UPLC)检测
        1.2.5 活性物质的高效液相色谱-串联质谱联用技术(HPLC-TOF-HR-MS)检测
        1.2.6 活性物质的红外光谱(FTIR)检测
        1.2.7 活性物质的核磁共振波谱(NMR)检测
        1.2.8 S.albospinus CT205发酵液中活性物质含量的测定
        1.3 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 S.albospinus CT205液体发酵
        2.1.1 发酵过程中菌丝形态变化
        2.1.2 发酵过程中pH、菌丝体浓度及活性物质的相对含量的变化
        2.1.3 发酵液中活性成分薄板层析检测
        2.2 活性物质的紫外(UV)吸收光谱
        2.3 活性物质的UPLC检测结果
        2.4 活性物质的HPLC-TOF-HR-MS检测
        2.5 活性物质的FTIR分析
        2.6 活性物质的核磁共振波谱
        2.7 S.albospinus CT205发酵液中放线酮含量的测定结果
    3 讨论
    4 小结
第三章 环境因素对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.1.1 供试菌株
        1.1.2 培养基
        1.2 方法
        1.2.1 环境因素对S.albospinus CT205液体发酵产生放线酮含量的影响
        1.2.2 黄瓜根系分泌物主要组分对S.albospinus CT205液体发酵产生放线酮含量的影响
        1.3 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 环境因素对S.albospinus CT205液体发酵产生放线酮含量的影响
        2.1.1 不同初始pH对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
        2.1.2 不同温度对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
        2.1.3 不同发酵周期对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
        2.2 根系分泌物主要组分对S.albospinus CT205液体发酵产生放线酮含量的影响
        2.2.1 葡萄糖(glucose)对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
        2.2.2 草酸(OxalicAcid)对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
        2.2.3 谷氨酸(glutamate)对S.albospinus CT205发酵产生放线酮含量的影响
    3 讨论
    4 小结
第四章 放线酮及2-苯乙醇协同抑制尖孢镰刀菌的效果研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.1.1 供试菌株
        1.1.2 培养基
        1.1.3 实验样品
        1.2 方法
        1.2.1 放线酮对尖孢镰刀菌的抑制作用
        1.2.2 2-苯乙醇对尖孢镰刀菌的抑制作用
        1.2.3 放线酮与2-苯乙醇协同抑制尖孢镰刀菌的作用
        1.3 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 放线酮对尖孢镰刀菌生长的影响
        2.1.1 放线酮对尖孢镰刀菌菌丝生长的影响
        2.1.2 放线酮对尖孢镰刀菌孢子萌发的影响
        2.2. 2-苯乙醇对尖孢镰刀菌生长的影响
        2.2.1 2-苯乙醇对尖孢镰刀菌菌丝生长的影响
        2.2.2 2-苯乙醇对尖孢镰刀菌孢子萌发的影响
        2.3 放线酮与2-苯乙醇协同抑制尖孢镰刀菌的效果
        2.3.1 放线酮与2-苯乙醇协同作用对尖孢镰刀菌菌丝生长的影响
        2.3.2 放线酮与2-苯乙醇协同作用对尖孢镰刀菌孢子萌发的影响
    3 讨论
    4 小结
全文总结
创新点
参考文献
致谢
攻读硕士研究生期间发表的学术论文
附表

(3)木聚糖酶异源表达的研究进展(论文提纲范文)

1 木聚糖酶概述
    1.1 木聚糖降解酶系
    1.2 木聚糖酶的结构
    1.3 木聚糖酶的理化性质
2 木聚糖酶的异源表达
    2.1 木聚糖酶在细菌表达系统中的表达
        2.1.1 木聚糖酶在大肠杆菌中的异源表达
        2.1.2 木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的异源表达
    2.2 木聚糖酶在真菌中的异源表达
        2.2.1 木聚糖酶在毕赤酵母中的异源表达
        2.2.2 木聚糖酶在酿酒酵母中的异源表达
        2.2.3 木聚糖酶在丝状真菌中的异源表达
3 木聚糖酶在植物表达系统中的表达
4 展望

(4)木聚糖酶产生菌株的选育、发酵工艺及酶学性质的研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
目录
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 木聚糖及木聚糖酶系
    1.3 木聚糖酶催化机制
    1.4 木聚糖酶的研究现状
        1.4.1 木聚糖酶的生产
        1.4.2 产木聚糖酶菌株的选育方法
        1.4.3 木聚糖酶的分离纯化及酶学性质
    1.5 木聚糖酶应用
        1.5.1 在食品行业的应用
        1.5.2 在造纸行业的应用
        1.5.3 在饲料行业的应用
        1.5.4 在医药行业的应用
        1.5.5 在能源行业的应用
    1.6 本研究的意义、目的及内容
        1.6.1 目的及意义
        1.6.2 研究内容
第2章 产木聚糖酶菌株的筛选
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培养基
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 木聚糖酶的测定
        2.2.2 产木聚糖酶菌株的筛选
        2.2.3 生长曲线的绘制
    2.3 结果与分析
        2.3.1 木糖标准曲线的绘制
        2.3.2 菌株的筛选与鉴定
        2.3.3 菌株生长曲线的绘制
    2.4 小结
第3章 原始菌株LMZY产木聚糖酶工艺优化
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 培养基
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 试验方法
        3.2.1 产木聚糖酶发酵条件优化
        3.2.2 产木聚糖酶发酵培养基成分优化
    3.3 结果与分析
        3.3.1 产木聚糖酶发酵条件优化
        3.3.2 产木聚糖酶发酵培养基成分优化
        3.3.3 验证试验
    3.4 小结
第4章 异硫链霉菌LMZY产木聚糖酶的诱变选育
    4.1 材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 培养基
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 试验方法
        4.2.1 紫外诱变
        4.2.2 硫酸二乙酯(DES)诱变
        4.2.3 遗传稳定性试验
        4.2.4 菌株生长曲线的绘制
    4.3 结果与分析
        4.3.1 紫外线诱变
        4.3.2 DES诱变
        4.3.3 遗传稳定性试验结果
        4.3.4 生长曲线的绘制
    4.4 小结
第5章 诱变菌株LMZM产木聚糖酶工艺优化
    5.1 材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 培养基
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要仪器设备
    5.2 试验方法
        5.2.1 产木聚糖酶发酵条件优化
        5.2.2 产木聚糖酶发酵培养基成分优化
    5.3 结果与分析
        5.3.1 产木聚糖酶发酵条件优化
        5.3.2 产木聚糖酶发酵培养基成分优化
        5.3.3 验证试验
    5.4 小结
第6章 酶的分离纯化与酶学性质研究
    6.1 材料
        6.1.1 菌株
        6.1.2 培养基
        6.1.3 主要试剂
        6.1.4 主要仪器设备
    6.2 试验方法
        6.2.1 粗酶液的制备
        6.2.2 木聚糖酶的分离纯化
        6.2.3 木聚糖酶的酶学性质
    6.3 结果与分析
        6.3.1 木聚糖酶的分离纯化
        6.3.2 木聚糖酶的酶学性质
    6.4 小结
第7章 总结与展望
    7.1 总结
    7.2 创新点
    7.3 展望
参考文献
致谢
附录

(5)不同来源木聚糖酶酶学性质研究(论文提纲范文)

1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌种
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 粗酶液制备
        1.2.2 木聚糖酶活性测定
        1.2.3 酶学性质分析
2 结果
    2.1 木聚糖酶最适反应温度测定
    2.2 木聚糖酶温度耐受性分析
    2.3 木聚糖酶反应最适p H测定
    2.4 木聚糖酶p H耐受性分析
3 讨论

(6)工程菌产木聚糖酶的工艺及酶学性质研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
目录
第一章 前言
    1.1 国内外酶制剂产业现状
    1.2 木聚糖酶概述
        1.2.1 木聚糖酶的研究进展
        1.2.2 木聚糖酶的生产
        1.2.3 木聚糖酶酶学性质研究
        1.2.4 木聚糖酶的应用
        1.2.5 木聚糖酶技术发展趋势
    1.3 大肠杆菌表达系统
    1.4 本论文的立题目背景和研究内容
        1.4.1 立题背景
        1.4.2 研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培养基
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 摇瓶种子培养
        2.2.2 小罐种子培养
        2.2.3 发酵罐发酵条件优化实验
        2.2.4 木聚糖酶的酶学性质研究
        2.2.5 木聚糖酶降解产物研究
        2.2.6 金属离子对木聚糖酶的影响研究
        2.2.7 细胞密度(OD_(600))测定
        2.2.8 酶活测定
第三章 结果与分析
    3.1 木聚糖酶的发酵条件优化
        3.1.1 发酵接种量优化
        3.1.2 发酵溶氧优化
        3.1.3 发酵pH值优化
        3.1.4 发酵温度优化
        3.1.5 发酵条件优化正交实验
        3.1.6 组合实验
    3.2 木聚糖酶的酶学性质研究
        3.2.1 木聚糖酶的pH值稳定性研究
        3.2.2 木聚糖酶的最适pH值研究
        3.2.3 木聚糖酶的热稳定性研究
        3.2.4 木聚糖酶的最适反应温度研究
    3.3 木聚糖酶的降解产物研究
    3.4 金属离子对木聚糖酶的影响研究
讨论
结论
创新点
参考文献
致谢
作者简历
在读期间科研学术成果目录

(7)基于工业化生产的毕赤酵母高效表达木聚糖酶XYL1的研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 木聚糖酶
        1.2.1 概述
        1.2.2 木聚糖酶研究状况
        1.2.3 木聚糖酶的应用
    1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统
        1.3.1 概述
        1.3.2 巴斯德毕赤酵母表达系统的宿主菌
        1.3.3 巴斯德毕赤酵母表达系统的表达载体
        1.3.4 巴斯德毕赤酵母高效表达策略
    1.4 论文的立项依据及主要研究内容
第二章 木聚糖酶 XYL1 毕赤酵母高效表达体系的建立
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 主要仪器
        2.2.2 实验材料
        2.2.3 实验方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 XYL1 的 DNA 片段获得
        2.3.2 含 XYL1 基因的重组表达载体的构建
        2.3.3 重组酵母的获得与鉴定
        2.3.4 重组工程菌的稳定性
        2.3.5 XYL1 基因在重组酵母中的表达及表达产物鉴定
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第三章 重组木聚糖酶 XYL1 酶学性质研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 主要仪器
        3.2.2 实验材料
        3.2.3 实验方法
    3.3 结果
        3.3.1 木聚糖酶 XYL1 纯化
        3.3.2 重组木聚糖酶 XYL1 的酶学性质研究
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第四章 组成型重组毕赤酵母恒化培养及动力学研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 主要仪器
        4.2.2 实验材料
        4.2.3 实验方法
    4.3 结果
        4.3.1 重组木聚糖酶 XYL1 表达碳源的确定
        4.3.2 分批培养初始葡萄糖浓度的确定
        4.3.3 重组毕赤酵母连续发酵试验
        4.3.4 重组毕赤酵母恒化培养试验
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第五章 重组木聚糖酶 XYL1 发酵工艺研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料与方法
        5.2.1 主要仪器
        5.2.2 实验材料
        5.2.3 实验方法
    5.3 结果
        5.3.1 间歇补料发酵
        5.3.2 恒速补料发酵
        5.3.3 指数补料发酵
        5.3.4 分段控制发酵
        5.3.5 不同补料策略的比较
        5.3.6 10m~3发酵罐的放大试验
    5.4 讨论
    5.5 本章小结
结论与展望
    结论
    论文创新性
    展望
参考文献
附录
    附录一:测序图
    附录二:缓冲液的配制方法
英文缩略词表
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
附件

(9)不同发酵条件对Fusarium.solani ZH0101产木聚糖酶的影响(论文提纲范文)

1 材料与方法
    1.1 菌株、材料、培养基与试剂
    1.2 仪器与设备
    1.3 方法
        1.3.1 培养条件
        1.3.2 酶活力测定
        1.3.2. 1 木聚糖酶活力测定
        1.3.2. 2 内切葡聚糖酶活力测定
        1.3.3 pH值测定
        1.3.4 发酵时间对产酶的影响
        1.3.5 麦秸添加量对产酶的影响
        1.3.6 不同起始pH值对产酶的影响
        1.3.7 不同磷酸盐添加量对产酶的影响
        1.3.8 钙、镁和铜离子对产酶的影响
        1.3.9 不同无机氮源对产酶的影响
        1.3.1 0 不同有机氮源对产酶的影响
        1.3.1 1 不同酵母膏添加量对产酶的影响
        1.3.1 2 优化后培养基与原始培养基产酶能力的比较
        1.3.1 3 数据处理
2 结果与分析
    2.1 发酵时间对产酶的影响
    2.2 麦秸添加量对产酶的影响
    2.3 不同起始pH值对产酶的影响
    2.4 不同磷酸盐添加量对产酶的影响
    2.5 钙、镁、铜离子对产酶的影响
    2.6 不同无机氮源对产酶的影响
    2.7 不同有机氮源对产酶的影响
    2.8 优化后培养基与原始培养基产酶能力比较
3 讨论

(10)重组木聚糖酶的发酵及应用研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 木聚糖的分布与结构
    1.2 木聚糖酶的概况
        1.2.1 木聚糖酶的分子结构和木聚糖水解酶系的组成
        1.2.2 原始菌株的木聚糖酶生产
        1.2.3 木聚糖酶的分子改造
    1.3 木聚糖酶的应用
        1.3.1 木聚糖酶在啤酒酿造上的应用
        1.3.2 木聚糖酶在饲料工业上的应用
        1.3.3 木聚糖酶在其他行业的应用
    1.4 立题背景与意义
    1.5 主要研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 原料
        2.1.3 培养基
        2.1.4 药品试剂
    2.2 仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 毕赤酵母摇瓶培养方法
        2.3.2 生长相的单因素实验
        2.3.3 Plackett-Burman 和Box-Behnken 实验设计
        2.3.4 7L 发酵罐规模木聚糖酶的高密度表达
        2.3.5 木聚糖酶酶活分析
        2.3.6 DEAE-纤维素阴离子交换色谱
        2.3.7 Sephadex G-75 凝胶层析
        2.3.8 蛋白质浓度测定和SDS-PAGE
        2.3.9 木聚糖酶的最适作用pH 和酸碱稳定性实验
        2.3.10 木聚糖酶的最适反应温度和热稳定性实验
        2.3.11 金属离子和化合物对木聚糖酶活力的影响
        2.3.12 酶促反应动力学参数测定
        2.3.13 麦芽制造和麦汁糖化时木聚糖酶的添加实验
        2.3.14 麦芽制造方法
        2.3.15 协定糖化及麦汁指标测定
        2.3.16 总木聚糖和PAX 的测定
        2.3.17 大米、小麦辅料糖化实验工艺
        2.3.18 木聚糖酶对饲料原料的体外酶解实验
第三章 结果与讨论
    3.1 重组毕赤酵母产木聚糖酶的发酵条件优化
        3.1.1 毕赤酵母生长曲线的绘制
        3.1.2 单因素实验确定毕赤酵母的最适生长条件
        3.1.3 实验设计确定毕赤酵母的最适产酶条件
        3.1.4 7 L 发酵罐规模的木聚糖酶高密度表达
    3.2 重组木聚糖酶的分离纯化和酶学性质研究
        3.2.1 DEAE-纤维素阴离子交换色谱
        3.2.2 Sephadex G-75 凝胶过滤层析
        3.2.3 SDS-PAGE 验证
        3.2.4 木聚糖酶的纯化结果
        3.2.5 木聚糖酶的最适作用pH 和酸碱稳定性
        3.2.6 木聚糖酶的最适反应温度和热稳定性
        3.2.7 金属离子和化合物对木聚糖酶活力的影响
        3.2.8 木聚糖酶的反应动力学参数
    3.3 木聚糖酶在啤酒和饲料行业中的应用
        3.3.1 全麦芽糖化过程中木聚糖酶添加实验
        3.3.2 全麦芽糖化过程中木聚糖酶与β-葡聚糖酶协同添加实验
        3.3.3 辅料糖化过程中木聚糖酶的添加实验
        3.3.4 制麦过程中木聚糖酶添加实验
        3.3.5 木聚糖酶对不同饲料原料的体外酶解效果研究
第四章 主要结论与展望
    4.1 主要结论
    4.2 展望
致谢
参考文献
作者在攻读硕士学位期间发表的论文

四、橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究(论文参考文献)

  • [1]玉米麸皮木聚糖降解酶基因挖掘与分子改良[D]. 孔海洋. 中国农业科学院, 2020(01)
  • [2]白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205次生代谢活性物质的结构鉴定及对尖孢镰刀菌的抑制作用[D]. 孙敏. 南京农业大学, 2019(08)
  • [3]木聚糖酶异源表达的研究进展[J]. 李吉萍,包昌杰,陈光,张斯童. 中国生物工程杂志, 2019(07)
  • [4]木聚糖酶产生菌株的选育、发酵工艺及酶学性质的研究[D]. 罗玲. 湖北工业大学, 2015(09)
  • [5]不同来源木聚糖酶酶学性质研究[J]. 王绍花,宗工理,刘飞,朱希强,凌沛学. 食品与药品, 2013(06)
  • [6]工程菌产木聚糖酶的工艺及酶学性质研究[D]. 罗翀. 湖南农业大学, 2013(07)
  • [7]基于工业化生产的毕赤酵母高效表达木聚糖酶XYL1的研究[D]. 江学斌. 华南理工大学, 2013(11)
  • [8]固态发酵生产木聚糖酶的研究进展[J]. 胡玉琪,丁长河. 中国酿造, 2012(09)
  • [9]不同发酵条件对Fusarium.solani ZH0101产木聚糖酶的影响[J]. 王权帅,康文丽,生吉萍,申琳. 食品科学, 2011(13)
  • [10]重组木聚糖酶的发酵及应用研究[D]. 袁冬华. 江南大学, 2011(01)


木聚糖酶论文 固体培养基论文 链霉菌论文 基因合成论文 毕赤酵母论文

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