普伐他汀对活化VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用

一、普伐他汀对激活的VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用（论文文献综述）

耿嘉男^[1]（2020）在《基于人参皂苷Rg3与瑞舒伐他汀不同内皮保护机制的二者联用抗动脉粥样硬化作用研究》文中研究表明动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是导致不稳定冠状动脉综合征和心源性猝死的重要原因之一,流行病学统计结果显示,自2015年以来亚洲众多国家中因脂代谢异常引发AS导致的心血管疾病发病率急剧上升,已成为除传染性疾病外有较高死亡率的疾病。内皮细胞是血管内膜的主要组成细胞,是保护血管的第一道重要屏障,内膜异常是AS典型病理改变,表现为内皮细胞愈合能力降低、抗炎症细胞浸润能力下降以及细胞凋亡等,进而累及血管进一步损伤。人参皂苷Rg3（ginsenoside Rg3,Rg3）是人参的主要活性成分之一,其抗肿瘤和免疫调节等药理作用已经被熟知。随着研究的不断深入,Rg3对心血管系统的保护作用亦被证实,但有关Rg3抗AS作用及相关机制尚未明确。瑞舒伐他汀属他汀类药物,为HMG-Co A还原酶抑制剂,因具有比其他同类药物调节血脂作用更强、半衰期更短以及生物利用度更高等优点而备受青睐,但其抗AS机制及是否与内皮保护作用有关尚需深入研究。本论文基于吉林省科技厅自然科学基金项目:“瑞舒伐他汀对ox-LDL导致内皮细胞内质网应激的干预作用及分子机制研究”（编号:20150101200JC）,探讨瑞舒伐他汀在脂代谢异常引发AS中除降脂外的内皮保护作用及机制,同时对比研究Rg3的内皮保护和抗AS作用及机制。并通过体内实验比较瑞舒伐他汀、Rg3或二者联用对ApoE-/-小鼠AS的保护作用,以期为临床不能耐受全剂量他汀类药物或高肝酶活性患者,联合应用瑞舒伐他汀和Rg3治疗,确保更有效的冠状动脉护理提供理论依据。主要研究如下:1.Rg3对ox-LDL诱导内皮细胞功能异常的作用及机制研究为确定Rg3是否对ox-LDL导致内皮细胞异常有改善作用,建立ox-LDL（200μg/mL）诱导的内皮细胞（HUVECs）损伤模型,Rg3（15、30μmol/L）对HUVECs进行预处理,应用划痕实验、单核细胞黏附实验和Western blotting等方法,研究Rg3对ox-LDL诱导HUVECs功能异常的影响。实验结果显示,Rg3可显着对抗ox-LDL导致的HUVECs愈合能力及抗单核细胞黏附功能下降,减少FAK的磷酸化,抑制黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,表明Rg3可抑制ox-LDL诱导HUVECs功能异常,且与抑制FAK介导的黏附因子表达有关。为阐明Rg3对ox-LDL诱导HUVECs功能异常的作用机制,采用了迁移实验、单核细胞黏附实验、Western blotting、免疫荧光和qPCR等方法和技术,对相关指标进行了检测。实验结果显示,Rg3可显着增强ox-LDL抑制HUVECs的PPARγ表达,抑制损伤的内皮细胞内NF-κB活化后核易位,降低炎症因子MCP-1和IL-6 mRNA水平;给予GW9662（PPARγ特异性抑制剂）对HUVECs进行预处理,可显着抑制Rg3增强HUVECs迁移及抗单核细胞黏附能力的作用,并抑制Rg3下调FAK的磷酸化、黏附因子和基质金属蛋白酶表达、NF-κB活化后核易位以及炎症因子的作用,表明Rg3可能通过上调内皮细胞PPARγ表达发挥抑制ox-LDL诱导HUVECs异常的作用。2.瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导内皮细胞凋亡的保护作用及机制研究建立ox-LDL诱导的内皮细胞损伤模型,瑞舒伐他汀（0.01、0.1及1μmol/L）对HUVECs进行预处理,应用试剂盒、MTT、流式细胞术、DAPI染色和Western blotting等技术和方法,探究瑞舒伐他汀的抗AS作用是否与内皮保护及抗内皮凋亡有关。实验结果显示,瑞舒伐他汀可显着增强ox-LDL刺激下HUVECs分泌NO水平降低,降低细胞氧化应激水平,增强HUVECs的PI3K/Akt/eNOS通路活化及Bcl-2/Bax的比率;MTT结果显示,瑞舒伐他汀可抑制ox-LDL诱导的HUVECs生存率下降;流式细胞术检测结果显示,瑞舒伐他汀可显着降低ox-LDL诱导的HUVECs凋亡率升高;DAPI染色结果显示,瑞舒伐他汀可显着抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞核损伤,以上均表明瑞舒伐他汀可以抑制ox-LDL诱导的HUVECs损伤及凋亡。此外,内皮细胞因其含有丰富的内质网,提示其可能对内质网应激异常导致细胞凋亡更为敏感,为阐明瑞舒伐他汀抑制ox-LDL诱导HUVECs凋亡的作用机制,对内质网应激相关通路进行检测,结果显示瑞舒伐他汀显着降低CHOP、sXBP1和Caspase-12mRNA水平,抑制GRP78表达,降低PERK、IRE1α及eIF2α的磷酸化,表明瑞舒伐他汀可能通过抑制内质网应激相关通路来抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。3.Rg3与瑞舒伐他汀联合应用对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用研究为比较Rg3与瑞舒伐他汀的抗AS作用,探究Rg3与瑞舒伐他汀联用是否可更有效抑制AS发生及发展,本研究采用高脂饲料（含40%脂肪,1.25%胆固醇）饲养ApoE-/-小鼠成功复制动脉粥样硬化模型后,随机分为4组:模型组、Rg3组（Rg3）、瑞舒伐他汀组（RSV）和Rg3与瑞舒伐他汀联用组（Rg3+RSV）,以C57BL/6J小鼠保持喂养普通饲料作为正常对照。给药4 w后,检测小鼠血清T-CHO、TG、LDL-C、HDL-C及CRP水平,HE染色和油红O染色观察小鼠主动脉AS斑块情况,MASSON染色检测小鼠主动脉胶原含量,免疫荧光染色检测小鼠主动脉内皮细胞凋亡情况,免疫组织化学染色检测主动脉和斑块巨噬细胞及平滑肌细胞含量,进而统计各组小鼠AS斑块核帽比及易损指数。本研究结果表明,与正常对照组比较,模型组小鼠T-CHO、TG、LDL-C以及CRP水平均显着升高,HDL-C水平显着降低;主动脉内膜及内膜下细胞排列紊乱,大量胞质呈空泡状,且主动脉内膜隆起纤维斑块层,动脉壁炎细胞浸润、泡沫化严重;主动脉内皮细胞凋亡显着增多,动脉壁胶原纤维含量显着减少;主动脉及斑块部位巨噬细胞表达显着增多,平滑肌细胞显着减少,小鼠AS斑块核帽比及易损指数显着升高。首先,与模型组比较,Rg3+RSV组及RSV组均显着降低小鼠血清LDL-C水平,显着抑制小鼠主动脉内皮细胞凋亡,且两组水平无显着差异,同时Rg3+RSV组显着降低小鼠血清T-CHO水平,但较正常仍呈较高水平,RSV组小鼠血清TG水平显着下降,提示瑞舒伐他汀可能发挥主要降低小鼠血清脂蛋白及抗内皮细胞凋亡作用;其次,Rg3+RSV组和Rg3组均显着降低AS小鼠血清中CRP水平,两组无显着差异,提示Rg3可能发挥主要降低小鼠炎症水平作用;另外,Rg3+RSV组和RSV组小鼠主动脉的胶原纤维含量较模型均显着增加,Rg3+RSV组和Rg3组巨噬细胞表达较模型组减少更为显着,而Rg3+RSV组α-SMA阳性表达增多显着,使得Rg3+RSV组AS斑块核帽比及易损指数降低更为显着。综上所述,Rg3可增强血管内皮细胞愈合能力及抵御炎症细胞黏附的能力,降低炎症因子和促AS细胞因子水平,可能与调节PPARγ/FAK信号通路有关,且Rg3可降低AS小鼠炎症水平,降低主动脉内膜及AS斑块巨噬细胞浸润,表明其可能通过抑制炎症对内皮损伤发挥抗AS作用;瑞舒伐他汀除改善AS小鼠血脂水平外,具有抑制AS小鼠血管内皮细胞凋亡作用,可能与增强血管内皮细胞PI3K/Akt/eNOS通路活化以及抑制内质网应激相关通路有关;另外,Rg3显示出显着抑制ApoE-/-小鼠的AS发生发展的作用,且Rg3与瑞舒伐他汀联用抗AS效果更为显着,提示当临床应用他汀类药物治疗AS效果不理想或对他汀类药物不耐受时,联合应用Rg3可能更有效发挥治疗AS作用。

毛泽楷^[2]（2019）在《普伐他汀通过恢复受损伤自噬以减轻白细胞介素1β诱导的软骨降解及作用机制研究》文中进行了进一步梳理第一部分骨性关节炎体外软骨退变模型建立及普伐他汀对其的影响【目的】构建大鼠软骨细胞骨性关节炎软骨退变的体外模型,并检测普伐他汀对炎性环境下软骨细胞基质降解的保护作用。【方法】由大鼠膝关节胫骨平台软骨组织取材分离得到软骨细胞后培养增殖传代;不同浓度（0,5,20以及60μM）普伐他汀处理软骨细胞24小时后使用CCK8法检测其细胞增殖活力;使用梯度递增浓度的普伐他汀（0,5,10以及20μM）预处理软骨细胞2小时后使用IL-1β（10 ng/mL）刺激软骨细胞24小时后收集蛋白和RNA样品,通过实时定量PCR和Western印迹技术检测不同处理组MMP3,MMP13和ADAMTS5等软骨降解相关效应基因和蛋白变化;使用普伐他汀（0或20μM）预处理软骨细胞2小时后,再用IL-1β（0或10 ng/mL）刺激软骨细胞24小时后多聚甲醛固定细胞,之后甲苯胺蓝软骨细胞外基质;使用普伐他汀（0或20μM）预处理软骨细胞,再用IL-1β（0或10 ng/mL）刺激软骨细胞24小时后收集蛋白和RNA样品,通过实时定量PCR和Western印迹技术检测不同处理组MMP3,MMP13和ADAMTS5等软骨降解相关效应基因和蛋白变化。【结果】分离的大鼠软骨细胞均一性高,生长功能良好,增殖性状稳定;不同浓度普伐他汀处理的大鼠软骨细胞,没有导致细胞增殖活力发生显着改变,实验浓度普伐他汀浓度没有对大鼠关节软骨细胞的细胞毒性;普伐他汀对骨性关节炎炎性软骨细胞基质降解发挥了剂量依赖性的治疗效应;普伐他汀可明显减轻IL-1β刺激导致的软骨细胞变性和基质破坏以及下调基质降解相关的效应基因和蛋白表达。【结论】大鼠软骨细胞骨性关节炎软骨退变的体外模型稳定可靠有效。普伐他汀对炎性环境下软骨细胞基质降解具有明显保护作用。第二部分普伐他汀对大鼠软骨细胞骨性关节炎性反应中自噬水平的影响【目的】探索普伐他汀对炎性环境下软骨细胞基质降解保护作用涉及的生理机制。【方法】使用普伐他汀（0或20μM）预处理软骨细胞2小时后,再用IL-1β（0或10 ng/m L）刺激软骨细胞24小时,固定样本,使用CCK8法测量普伐他汀对IL-1β诱导的软骨细胞基质降解的治疗作用中细胞增殖活性的变化;将普伐他汀（0或20μM）预处理2小时的软骨细胞暴露于IL-1β（0或10 ng/m L）刺激24小时,随后收集细胞,应用Annexin V-APC和7-AAD双染色法流式细胞学检测各组软骨细胞凋亡水平;为了评估普伐他汀对IL-1β诱导的软骨细胞基质降解的治疗作用中细胞自噬活性的变化,使用普伐他汀（0或20μM）预处理软骨细胞2小时后,再用IL-1β（0或10 ng/m L）刺激软骨细胞24小时,提取蛋白和RNA样品,通过实时定量PCR和Western印迹技术检测不同处理组atg7,atg12,Beclin1和LC3 II等自噬相关效应基因和蛋白变化;使用GFP-m RFP-LC3腺病毒感染不同处理组软骨细胞,普伐他汀预处理和IL-1β暴露后共聚焦显微镜检测不同处理组中软骨细胞中的自噬流变化。【结果】相对于空白组细胞,普伐他汀处理和IL-1β暴露对关节软骨细胞的增殖没有明显的抑制作用,软骨细胞凋亡率也无明显差异;普伐他汀可以上调炎症环境下软骨细胞受抑制的自噬相关基因和蛋白表达,同时增强炎性环境下自噬体向自噬溶酶体的转换,而对正常软骨细胞的自噬水平没有调控作用。【结论】在骨性关节炎早期炎性软骨退变中,对细胞增殖活性或细胞凋亡水平的调控不是普伐他汀治疗IL-1β诱导的软骨细胞基质降解的作用对象。普伐他汀主要通过恢复炎症环境下受损的自噬活性来减轻IL-1β诱导的软骨退变。第三部分普伐他汀调控大鼠软骨细胞骨性关节炎性反应中自噬水平过程中的相关信号转导通路机制的研究【目的】检测普伐他汀对炎性反应软骨细胞基质保护效应中涉及的信号转导通路。【方法】使用特异性自噬诱导剂雷帕霉素或特异性自噬抑制剂3-MA预处理软骨细胞2小时后,再用IL-1β（0或10 ng/m L）刺激软骨细胞24小时,提取蛋白和RNA样品,通过实时定量PCR和Western印迹技术检测不同处理组MMP3,MMP13和ADAMTS5等软骨降解相关效应基因和蛋白变化;通过蛋白质印迹技术检查在IL1β刺激期间软骨细胞中MAPK通路、PI3K/AKT/m TOR通路、NF-κB通路的家族蛋白磷酸化水平,并评估普伐他汀预处理对各通路激活水平的影响。应用p38的磷酸化抑制剂SB203580和p65的核转位抑制剂JSH-23预处理软骨细胞后IL-1β刺激24小时,收集样品蛋白,检测不同处理组相关通路蛋白磷酸化以及Beclin1和LC3 II等自噬相关蛋白变化。【结果】雷帕霉素恢复了软骨细胞中由IL-1β刺激导致的从LC3 A/B I到LC3 A/B II的转化障碍,而3-MA预处理组则加重了自噬受损。同时,雷帕霉素处理显着减轻了大鼠关节软骨细胞中IL-1β诱导的软骨降解相关金属蛋白酶（MMP3,MMP13和ADAMTS5）的表达增加,而3-MA处理则相反。IL-1β刺激可导致软骨细胞内MAPK通路、PI3K/AKT/m TOR通路、NF-κB通路相关蛋白磷酸化水平显着上升,而普伐他汀预处理则主要抑制了MAPK通路和NF-κB通路的磷酸化。进一步应用相应蛋白活化的选择性抑制剂的实验表明,抑制p38磷酸化可减轻IL-1β刺激导致的软骨细胞自噬损伤,而抑制p65则没有对这种自噬损伤表现出明显影响。【结论】调控软骨细胞炎症反应中受损的自噬活性可以有效影响软骨基质降解的严重程度,自噬是调节骨性关节炎软骨退变潜在的有效作用靶点。普伐他汀减轻炎症刺激相关的自噬损伤主要是通过抑制炎性反应中MAPK通路蛋白磷酸化水平所介导的。

万彩笺^[3]（2019）在《辛伐他汀对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响》文中指出目的:研究辛伐他汀对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响,初步探讨其抗肿瘤的可能机制。方法:应用不同浓度辛伐他汀（0、6.25、12.5、25、50μmol/L）干预肾上腺皮质癌SW-13细胞,MTT检测其抑制率;细胞划痕检测其细胞迁移能力;Hoechst33258荧光染色检测其凋亡数目;实时荧光定量PCR实验检测Notch1及p53表达量。结果:1.不同浓度的辛伐他汀干预SW-13细胞后,24h抑制率分别是0、24.96±3.17%、33.65±2.03%、46.21±1.50%、54.65±3.20%。48h抑制率分别是0、31.02±2.12%、45.24±1.79%、62.61±2.05%、73.54±3.74%。72h抑制率分别是0、55.73±4.77%、63.33±2.09%、77.67±3.88%、86.90±4.35%,干预24h、48h、72h中均为50μmol/L干预组对SW-13细胞增殖抑制最明显（P<0.05）。2.不同浓度辛伐他汀干预SW-13细胞24h后迁移距离分别是57.31±1.21μm、52.45±0.95μm、49.61±1.05μm、45.76±1.55μm、42.27±0.64μm,各干预组和对照组比较,差异有统计学意义（F=81.046,P=0.000）。干预48h后细胞迁移距离分别是105.67±3.79μm、93.24±4.16μm、64.04±2.60μm、51.65±2.54μm、38.50±1.32μm。干预组和对照组比较,差异具有统计学意义（F=255.104,P=0.000）。干预24h、48h均为50μmol/L干预组对SW-13细胞迁移距离抑制最明显（P<0.05）。干预24h细胞迁移率分别是12.22±0.26%、11.18±0.21%、10.58±0.22%、9.76±0.33%、9.01±0.14%。,各干预组和对照组比较,差异具有统计学意义（F=80.750,P=0.000）。干预48h细胞迁移率分别是22.53±0.81%、19.88±0.88%、13.65±0.56%、11.01±0.54%、8.21±0.28%。各干预组和对照组比较,差异具有统计学意义（F=255.161,P=0.000）。24h、48h均为50μmol/L干预组对SW-13细胞迁移率抑制最明显（P<0.05）。3.随着辛伐他汀浓度的增高,细胞凋亡数目增加。干预24h后细胞凋亡数分别是1.830±0.753、4.000±0.707、7.400±1.140、14.600±0.8917.600±1.140。各干预组和对照组比较,差异有统计学意义（F=276.723,P=0.000）。50μmol/L干预组对SW-13细胞诱导的凋亡数目最多（P<0.05）。4.干预24h后Notch1 mRNA相对表达量分别是1、1.737±0.146、2.356±0.102、2.693±0.290,各干预组和对照组比较,差异具有统计学意义（F=57.521,P=0.000）。随着辛伐他汀浓度增加,Notch1表达量增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。p53 mRNA的相对表达量分别是1、1.437±0.034、2.324±0.272、3.493±0.358,各干预组和对照组比较,差异具有统计学意义（F=71.608,P=0.000）。随着辛伐他汀浓度增高,p53表达量增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.辛伐他汀可抑制肾上腺皮质癌SW-13细胞的增殖、迁移,呈现时间和浓度依赖性;2.辛伐他汀诱导抑制肾上腺皮质癌SW-13细胞的增殖、迁移可能与上调Notch1、上调p53的表达有关。

马慧^[4]（2017）在《普伐他汀对腹主动脉瘤形成的影响和机制研究》文中认为1研究背景腹主动脉瘤（abdominal aortic aneurysm,AAA）是一种常见的具有潜在致死危险的慢性血管退行性疾病,一旦破裂,死亡率超过85%。在美国,AAA在65岁以上的男性老年人群中发病率达到6%-9%,而每年因AAA破裂导致死亡的人数占总死亡人数的0.8%。目前由于对AAA缺乏有效的内科治疗手段,临床上一旦发现AAA,即采用危险性很高的手术治疗切除AAA,以预防瘤体的破裂而致命。由于AAA具备危害性大、内科治疗效果差及外科手术风险高等临床特征,因此从AAA的发病机制着手,找到致AAA的危险因素,进而预防AAA的形成和破裂,具有重要意义。机制上,AAA是由于动脉中层弹力蛋白破坏、血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）凋亡、代偿性胶原蛋白沉积等而引起腹主动脉管壁的永久性扩张。血管壁的炎症反应和基质降解是引起AAA的关键因素。例如,在动物实验研究中,血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,AngⅡ）能上调氧化应激,从而启动基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）的基因转录,最终导致AAA形成。他汀类药物（3-羟基-3-甲基戊二酰单酰辅酶A还原酶抑制剂）除了具有强效降脂作用外,还能通过抑制VSMC增殖、阻止内皮细胞黏附、改善内皮功能以阻止动脉粥样硬化的形成。他汀类药物也可引起不良作用,例如胰岛素抵抗、肝酶升高、骨骼肌毒性和心肌萎缩。然而,现有的研究结果中他汀类药物对AAA的作用尚存在分歧。例如,普伐他汀在低剂量（5mg/kg/day）时可以抑制脑动脉瘤的形成,而在高剂量（25mg/kg/day和50mg/kg/day）时则促进雌激素敲除大鼠脑动脉瘤的形成。与之不同的是,辛伐他汀抑制了 AngⅡ所诱导的载脂蛋白E基因敲除（Apoe-/-）小鼠AAA的形成;瑞舒伐他汀和阿托伐他汀对AAA无影响。AMP 活化的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）在真核生物能量稳态中起重要作用,它含有α、β、γ三种亚单位,其中αα是催化亚单位,β和γ是调节亚单位。前期研究发现吸烟的主要活性成分尼古丁可激活AMPK,最终导致了 Apoe-/-小鼠AAA形成;普伐他汀在骨骼肌细胞和内皮细胞能激活AMPK,提示普伐他汀可能促进AAA形成。激活蛋白2α（Activator protein 2α,AP-2α）是AP-2转录因子家族成员之一。研究发现敲除AP-2转录因子的小鼠由于异常发育在出生之后就会死亡,提示AP-2转录因子对哺乳动物是必不可少的。Park等人研究认为神经生长因子能活化转录因子AP-2α依赖的MMP-2的基因转录,引起内皮细胞侵润,最终促进血管形成。前期研究发现AMPKα2作为AP-2α转录因子的上游激酶,能磷酸化转录因子AP-2α的第219个丝氨酸残基（AP-2α protein at serine 219,AP-2α-S219）;阿司匹林可激活AMPK,从而增加了 AP-2α转录因子的表达,最终发挥稳定易损性动脉粥样斑块的作用。综上所述,现有的研究结果中他汀类药物对AAA的作用仍然存在分歧,且有关普伐他汀在AngⅡ所诱导的Apoe-/-小鼠AAA中的作用尚无研究报道。因此,应用AngⅡ诱导的Apoe-/-小鼠的AAA模型,探讨普伐他汀对AAA的影响及机制研究。2目的（1）观察普伐他汀在持续灌注Ang Ⅱ所诱导的Apoe-/-小鼠AAA形成中的作用;（2）探讨普伐他汀促进AAA形成的分子机制。3方法3.1构建AMPK或者AP-2 α慢病毒载体根据三个不同序列的AMPK shRNA或者AP-2α shRNA,转染小鼠VSMCs验证AMPK或者转录因子AP-2α干扰效果,筛选干扰效果最优的shRNA序列构建慢病毒载体。3.2动物模型的建立体内动物实验分为四部分。第一部分:观察普伐他汀对Ang Ⅱ所诱导的Apoe--/-小鼠AAA的影响。选取8-12周龄（体重20-25克）雄性Apoe-/-小鼠91只,先用普伐他汀（50mg/kg/day）喂养小鼠4周,然后将生理盐水或者AngⅡ（0.72mg/kg/day或者1.44mg/kg/day）装入植入式胶囊渗透压泵中,将渗透压泵埋于小鼠皮下持续恒速泵入28天,并持续给予普伐他汀。全程给予普通饮食喂养。8周后实验结束,小鼠予以安乐死。第二部分和第三部分:应用干扰AMPK或者AP-2α的慢病毒探讨普伐他汀对AngⅡ诱导的AAA的作用是否由AMPK或者AP-2α介导。选取8-12周龄（体重20-25克）雄性Apoe-/-小鼠90只,给予普伐他汀（50mg/kg/day）喂养小鼠4周后尾静脉注射慢病毒,慢病毒注射后第二天,将AngⅡ（1.44mg/kg/day）装入植入式胶囊渗透压泵中,然后将渗透压泵埋于小鼠皮下持续恒速泵入28天,并持续给予普伐他汀。全程给予普通饮食喂养。8周后实验结束,小鼠予以安乐死。第四部分:观察辛伐他汀和甲羟戊酸对Ang Ⅱ所诱导的Apoe--小鼠AAA的影响。选取8-12周龄（体重20-25克）雄性Apoe-/-小鼠77只,先用普伐他汀（50mg/kg/day,口服）、辛伐他汀（50mg/kg/day,灌胃）和甲羟戊酸（2mg/kg/day,腹腔注射）治疗小鼠4周,然后将AngⅡ（1.44mg/kg/day）装入植入式胶囊渗透压泵中,将渗透压泵埋于小鼠皮下持续恒速泵入28天,并持续给予普伐他汀、辛伐他汀和甲羟戊酸。全程给予普通饮食喂养。8周后实验结束,小鼠予以安乐死。3.3组织病理学检测实验结束后,小鼠予以安乐死,留取胸主和腹主动脉组织,根据AAA定义（腹主动脉最大直径超过正常腹主动脉直径的50%）观察AAA的形成率,并测量腹主动脉的最大直径。制备腹主动脉石蜡切片,厚度为4.5 μm,进行H&E染色和Verhoeff弹力纤维染色;免疫组织化学方法检测腹主动脉组织中α-SM actin、MMP-2、MMP-9、4-HNE和P47的含量;免疫荧光方法用于检测腹主动脉组织中GFP、AMPK和AP-2α的表达。3.4细胞培养用4-8代小鼠和人VSMCs进行实验。（1）小鼠VSMCs应用不同浓度（0、0.1、1、10、50、100μM）普伐他汀刺激细胞2h。（2）小鼠VSMCs用10 μM tempol预处理30min后,再用50 μM普伐他汀共孵育2h。（3）小鼠VSMCs用20 μM compound C预处理30min后,再用50 μM普伐他汀共孵育2h。（4）小鼠 VSMCs 转染 Control shRNA 和 AMPK shRNA 或者 AP-2α shRNA干扰AMPK或者AP-2α的表达后,再用50 μM普伐他汀刺激细胞24h。（5）小鼠和人VSMCs用50μM普伐他汀预处理30min后,再用1 mMAngⅡ共孵育24h。（6）小鼠和人VSMCs用50 μM普伐他汀、10 μM辛伐他汀和100 μM甲羟戊酸预处理30min后,再用1 mM AngⅡ共孵育24h。3.5 活性氧（reactive oxygen species,ROS）的测定利用荧光探针二羟乙锭测定小鼠VSMCs中ROS的水平。3.6 免疫印迹（western blot）利用western blot检测小鼠腹主动脉和VSMCs内pAMPK、AMPK、pAP-2α、AP-2α、MMP-2、MMP-9、NOX4、4-HNE和 P47 的蛋白表达。3.7 RT-PCR从小鼠腹主动脉组织或者干预后的小鼠VSMCs中提取RNA,测定MMP-2和MMP-9的mRNA表达。β-actin用作为内参对照。3.8明胶酶谱法利用MMP明胶酶谱试剂盒检测小鼠动脉和细胞培养基中MMP-2的活性。3.9酶联免疫吸附测定（ELISA）利用ELISA测定人血清中MMP-2的水平。3.10临床标本的收集收集手术后病人的AAA组织用于病理学检测。收集服用普伐他汀后病人的血液,并从血液用提取单核细胞,提取蛋白,利用western blot检测pAMPK、AMPK、pAP-2α和AP-2α的表达。4结果4.1 Apoe-/-小鼠血压变化与对照组相比,AngⅡ输注后的Apoe-/-小鼠的血压均显着升高,然而普伐他汀,甲羟戊酸以及辛伐他汀对小鼠血压无明显影响。4.2 Apoe-/-小鼠血脂的检测普伐他汀及辛伐他汀治疗显着增加Apoe-/-小鼠内TC和LDL-C的水平。4.3普伐他汀增加了 AAA的发生率、死亡率和严重程度对照组小鼠未形成AAA及未发现死亡。AngⅡ（0.72）模型组、AngⅡ（0.72）普伐他汀组、AngⅡ（1.44）模型组和AngⅡ（1.44）普伐他汀组AAA的发生率为 26.67%、53.33%、60.87%和 91.30%,小鼠死亡率为 0.00%、13.33%、21.74%和47.82%。两种剂量的AngⅡ均显着增加了 AAA的发生率和小鼠的死亡率以及小鼠腹主动脉的最大直径和弹力纤维的将解度,然而持续灌注剂量为1.44 mg/kg/day的AngⅡ所诱导的AAA的发生率和小鼠的死亡率以及小鼠腹主动脉最大直径和弹力纤维的降解度比剂量为0.72 mg/kg/day的AngⅡ更加明显,与模型组相比,普伐他汀显着增加了小鼠AAA的发生率、死亡率、严重程度以及腹主动脉最大直径和弹力纤维的降解度。4.4 H&E和Verhoff弹力纤维染色模型组AAA可见动脉管壁结构破坏,主要表现在部分弹力纤维断裂、中断,外膜增厚,动脉管壁变薄,呈瘤样扩张,常伴有血栓形成,普伐他汀治疗明显加重了 AngⅡ诱导的AAA动脉管壁组织学的病理变化。4.5普伐他汀在小鼠VSMCs中通过ROS磷酸化ANPK普伐他汀在小鼠VSMCs中呈浓度依赖性的磷酸化AMPK的第172个苏氨酸（pAMPK-T172）,Tempol可消除普伐他汀上调Nox4、p47、4-HNE和pAMPK-T172的表达作用。同样的,DHE荧光染色表示,Tempol消除了普伐他汀产生的ROS含量。4.6普伐他汀在小鼠VSMCs中通过ROS磷酸化AP-2 α普伐他汀在小鼠VSMCs中呈浓度依赖性的磷酸化AP-2α第219个丝氨酸（pAP-2α-S219）,Tempol可消除普伐他汀上调pAP-2α-S219的表达作用。4.7普伐他汀依赖AMPK磷酸化AP-2 αCompound C可消除普伐他汀上调的pAP-2α-S219的表达水平。然后应用AMPK siRNA转染细胞干扰AMPK的表达进一步观察AMPK在普伐他汀磷酸化AP-2α中的作用,发现AMPK siRNA而不是对照siRNA阻止了普伐他汀对AP-2α磷酸化的影响。4.8普伐他汀在小鼠VSMCs中通过磷酸化AMPK和AP-2 α上调MMP2的基因转录普伐他汀在小鼠VSMCs中呈浓度依赖性的增加MMP-2的蛋白表达,Tempol或者Compound C消除了普伐他汀上调的MMP-2的蛋白和mRNA表达水平以及活性。同样的,用AMPKshRNA干扰细胞AMPK后,MMP-2的蛋白和mRNA表达水平以及活性显着降低。然后用AP-2α siRNA转染细胞干扰AP-2α的表达后进一步观察AP-2α在普伐他汀上调MMP-2表达中的作用。首先,结果发现干扰AP-2α后对普伐他汀磷酸化AMPK无影响,说明AP-2α是AMPK的下游分子。其次,与对照shRNA+普伐他汀组相比,AP-2α shRNA+普伐他汀组的MMP-2的蛋白和mRNA表达水平以及活性显着降低。4.9小鼠VSMCs在AngⅡ刺激状态下,普伐他汀能激活AMPK α 2/AP-2 α/MMP2信号通路。与对照组相比,单独AngⅡ或者普伐他汀刺激细胞均能显着增加pAMPK和pAP-2α的蛋白表达水平以及MMP-2的蛋白和mRNA表达水平;而AngⅡ和普伐他汀共孵育进一步的增加pAMPK和pAP-2α的蛋白表达水平以及MMP-2的蛋白和mRNA表达水平。4.10人VSMCs在AngⅡ刺激状态下,普伐他汀能激活AMPK α 2/AP-2 α/MMP2信号通路。为观察小鼠效应的平移适用性,即检验这些效应是否表现在人VSMCs上,应用AngⅡ和普伐他汀刺激人VSMCs。结果发现普伐他汀同样能激活静息或者AngⅡ刺激状态下人VSMCs中的pAMPK和pAP-2α的蛋白表达水平以及MMP-2的蛋白和mRNA表达水平。4.11慢病毒敲除AMPK α后可消除普伐他汀促进Apoe/小鼠AAA形成的作用与注射对照shRNA慢病毒相比,尾静脉注射AMPKα shRNA慢病毒明显抑制了小鼠腹主动脉组织中的AMPKα2蛋白表达。同样的,与对照shRNA组相比,普伐他汀显着增加了AngⅡ诱导小鼠AAA的发生率和死亡率、腹主动脉的最大直径以及AAA组织内弹力纤维的降解,然而尾静脉注射AMPKα shRNA慢病毒组明显消除了普伐他汀促进AngⅡ诱导小鼠AAA形成的作用。4.12慢病毒敲除AP-2α后可消除普伐他汀对AngⅡ诱导的Apoe/小鼠AAA形成的作用与注射对照shRNA慢病毒相比,尾静脉注射AP-2α shRNA慢病毒明显抑制了小鼠腹主动脉组织中的AP-2α蛋白表达。与对照shRNA组相比,普伐他汀显着增加了 AngⅡ诱导小鼠AAA的形成,然而敲除AP-2α后,普伐他汀未表现出促进AAA形成的作用。4.13辛伐他汀不能模仿普伐他汀激活VSMCs内AMPKα2/AP-2α/MMP2信号通路,而且甲羟戊酸不能消除普伐他汀的这一作用不同于普伐他汀,辛伐他汀并不能增加AngⅡ刺激状态下VSMCs中pAMPK、pAP-2α和MMP2的表达水平。而且甲羟戊酸也不能消除普伐他汀上调pAMPK、pAP-2α和MMP2表达的作用。4.14辛伐他汀不能促进AngⅡ诱导的Apoe-/-小鼠AAA的形成与普伐他汀相比,辛伐他汀并没有影响AngⅡ诱导的Apoe-/-小鼠AAA的发生率和死亡率以及腹主动脉最大直径、动脉组织内弹力纤维的降解和MMP-2的表达。4.15甲羟戊酸不能逆转普伐他汀促AAA形成作用单独甲羟戊酸治疗小鼠对AngⅡ诱导的Apoe--小鼠AAA的形成不产生任何影响,而且甲羟戊酸也并不抑制普伐他汀对AAA的影响。4.16 AAA患者腹主动脉组织中的pAMPK和pAP-2 α的水平增高与正常组织相比,AAA组织中pAMPK和pAP-2α的水平明显增高。4.17服用普伐他汀患者外周血细胞中的pAMPK和pAP-2 α的水平增高。与对照患者相比,服用普伐他汀患者外周血细胞中pAMPK和pAP-2α的水平明显增高。此外,ELISA结果显示,普伐他汀服用患者血清中的MMP-2水平也显着增高。5结论（1）普伐他汀促进AngⅡ诱导Apoe-/-鼠AAA的发生率、死亡率和严重性;（2）普伐他汀通过ROS激活AMPK,使AMPKα2进入细胞核内与AP-2α结合后直接磷酸化AP-2α,继而与MMP-2的基因启动子形成复合物,从而活化了MMP-2的基因转录;（3）普伐他汀促进AAA形成的病理机制是通过激活AMPKα2/AP-2α/MMP2信号通路,而不是依赖于HMG-CoA还原酶抑制途径而发挥作用的。1研究背景阿霉素（adriamycin,ADR）是一种临床常用的蒽环类化疗药物,对实体瘤及血液系统肿瘤均有较好的疗效。然而,该药可引发心脏的毒副作用,当ADR在体内累积到一定剂量时会对心脏产生不可逆的损害,导致继发性扩张型心肌病和充血性心力衰竭。目前,阿霉素心肌病（adriamycin-induced cardiomyopathy,ACM）的发病机制仍未完全阐明,其可能的机制包括：氧化应激、心肌细胞凋亡、炎症反应、心肌纤维化、能量代谢异常、钙超载、DNA损伤以及线粒体损伤等,其中心肌细胞凋亡和氧化应激发挥着重要的作用。目前用于减轻ADR诱导的心脏损害的药物有血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI）、血管紧张素拮抗剂（angiotensin receptor antagonists,ARB）、抗氧化剂、右雷佐生等,然而不幸的是,这些药物还没有获得足够有效的证据证明其在临床上能常规使用。因此,寻找针对ACM安全而且有效的防护药物,促进ADR的安全应用具有十分重要的临床意义。肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）在ACM的病理生理过程中发挥着重要作用,而抑制ACE/血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）/1型血管紧张素受体（Type 1 angiotensin receptor,AT1R）轴能够改善ACM的预后。传统上,ACEI和ARB主要参与抑制AngⅡ的合成和阻止AT1R的活化;然而,AngⅡ的降解也在调控AngⅡ水平中发挥着重要的作用,特别在组织水平上。由于ACE2能使AngⅡ失活而限制其血管收缩作用以及能催化AngⅡ形成Ang（1-7）的作用,因此被认为是RAS系统中治疗心血管疾病的一个潜在治疗靶点。Ang（1-7）作为AngⅡ的内源性拮抗因子,在心血管系统中发挥着重要生物学作用,例如改善心脏功能、扩张血管、抗心律失常、降低血压等。Crackower等人首次报道了敲除ACE2基因的小鼠会出现严重的心肌收缩功能障碍;在心肌梗死或者糖尿病心肌病的大鼠模型中,过表达ACE2基因可减少心肌间质胶原沉积,从而改善左室重构和功能障碍。其他研究也表明ACE2/Ang（1-7）/Mas受体轴参与心脏的生理过程及心力衰竭的病理过程。.ACE2是近年来新发现的一种羧肽酶,属于ACE同工酶,其中42%的催化结构域与ACE相同。它能够将AngⅠ转化为Ang（1-9）,亦能够高效的将AngⅡ转化为Ang（1-7）。既往很少有研究报道过表达ACE2基因对ACM的直接影响,本研究拟在ACM大鼠模型的基础上采用直接心内注射ACE2腺病毒载体的方法增加大鼠体内ACE2的活性,观察ACE2基因直接心内转染或者ACEI如西拉普利对ACM的影响,并探讨其治疗作用的可能分子机制。2目的（1）用Wistar大鼠建立ADR诱导的心肌病动物模型;（2）观察ACE2基因和西拉普利治疗在大鼠ACM中的作用;（3）探讨ACE2基因保护ACM的分子机制。3方法3.1构建ACE2过表达腺病毒载体应用（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法,按引物 ACE2 F:5 ’-GAAAGTTGCTCAGTGGATGGGAT-3’;R:5 ’-TTTGCTAAAAGGAAGTCTGAGCATC-3’,从小鼠肾脏组织RNA中扩增出小鼠ACE2基因的cDNA序列,克隆到pMD18-T载体,之后再亚克隆到pDC316载体中,构建穿梭质粒（pDC316-ACE2）。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒进行同源重组,形成重组腺病毒载体,然后将重组腺病毒质粒转染到293细胞中包装成Ad-ACE2。3.2动物模型的建立190只8-10周龄（体重250-300克）雄性Wistar大鼠,分为对照组（20只）和治疗组（170只）。治疗组大鼠给予腹腔内注射ADR 2.5mg/kg（用高压灭菌的三蒸水溶解）,隔日1次,共计6次,累积剂量为15mg/kg。对照组给予同等剂量的三蒸水。在注射ADR的2周期间,治疗组大鼠死亡10只,然后将治疗组剩余大鼠随机分为4组（每组40只）:模型组、Ad-EGFP组、Ad-ACE2组和西拉普利组。大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）使其完全麻醉,气管切开连接动物呼吸机,打开胸腔,充分暴露心脏,打开心包。Ad-ACE2组大鼠用30号针在左心室壁穿刺6个部位,深度约1-2mm,然后直接注射总体积为200μlACE2腺病毒载体（2×109pfu）,Ad-EGFP组注射等体积等滴度的EGFP腺病毒载体,而模型组注射200μl的无菌生理盐水。手术结束后,大鼠继续给予普通饮食喂养。西拉普利组大鼠通过灌胃给予10mg/kg/day西拉普利治疗4周。病毒注射2周后,每组取8只大鼠给予安乐死,测定ACE2基因的转染效率,剩余大鼠继续喂养2周至实验结束,所有大鼠予以安乐死。3.3血压测量在实验结束后,用鼠尾血压测量仪测量所有大鼠的血压和心率,每只大鼠测量3次后取其血压和心率平均值。3.4心脏超声检查大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）使其完全麻醉，连接肢体导联进行心电图监测,选用RMV710B探头,以二维以及M型超声于左室长轴或短轴检测以下指标:左室舒张末期直径（LVEDD）和容积（LVEDV）以及左室收缩末期直径（LVESD）和容积（LVESV）。左室缩短分数（FS;%）=（LVEDD-LVESD）/LVEDD × 100。左室射血分数（LVEF;%）=（LVEDV-LVESV）/LVEDV× 100。3.5 RT-PCR留取大鼠的心肌组织提取总的RNA,采用RT-PCR方法检测ACE2的mRNA表达。3.6 免疫印迹（western blot）留取大鼠的心肌组织提取总蛋白,进行western blot检测ACE2、ACE、CollegenⅠ、Collegen Ⅲ、ICAM-1、VCAM-1、TNF-α、AMPK、ERK、PI3K、AKT、Bcl-2、Caspase-3、TGF-β1、MMP-1、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 蛋白表达。3.7组织病理学检测实验结束后,大鼠予以安乐死,留取心肌组织,进行H&E染色和Masson染色;免疫组织化学方法检测心肌组织中ACE2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原、VCAM-1和TNF-α的含量。3.8 TUNEL 染色利用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡。3.9酶联免疫吸附测定（EL ISA）取新鲜的心肌组织,放入含有蛋白酶抑制剂Cocktail的IMDM培养基中经超声震碎形成组织匀浆,离心后留取上清液用于检测;血液同样放入含有蛋白酶抑制剂Cocktail的促凝管中,离心后留取血浆用于检测。取组织上清液和血浆进行 AngⅡg（1-7）ELISA 检测。3.10 ACE2活性的测定提取心肌组织蛋白,ACE2能分解7-Mca-YVADAPK（Dnp）-OH反应底物的C末端的2,4-二硝基苯基部分,从而促使荧光增强。使用酶标仪检测激发光为320 nm以及散射光为400 nm时的荧光强度,动态检测荧光强度4个小时。ACE2活性=无ACE2抑制剂时的荧光强度-存在ACE2抑制剂DX600时的荧光强度。3.11 SOD活性的测定留取大鼠的心肌组织提取总蛋白,测定蛋白浓度,根据SOD活性检测试剂盒说明,在激发波长为550 nm用酶标仪检测SOD各样品的吸光度数值,SOD活性=[（对照管吸光度-样品管吸光度）/对照管吸光度]÷0.5×（反应液的总体积/取样量）÷待测样品的蛋白浓度。4结果4.1大鼠的一般情况和死亡率与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组大鼠均出现皮毛粗糙失去光泽、腹泻、眼睛周围红色分泌物、腹部肿大、腹水等现象,然而Ad-ACE2组大鼠无上述症状,西拉普利组大鼠仅表现轻度的上述症状。从腺病毒注射到4周实验结束开始计算,模型组、Ad-EGFP组、Ad-ACE2组、西拉普利组大鼠的死亡率分别为71.88%、75.00%、18.75%、46.88%。对照组大鼠未发现死亡。与模型组和Ad-EGFP组相比,Ad-ACE2组和西拉普利组大鼠的死亡率明显的下降。Ad-ACE2组大鼠的死亡率显着低于西拉普利组。4.2 ACE2的转染效率在病毒转染后2周观察大鼠心肌组织内ACE2的转染效率,与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组大鼠心肌组织中ACE2 mRNA和蛋白表达水平以及活性显着增高,而模型组与Ad-EGFP组大鼠心肌组织中ACE2的含量无明显差别。与模型组和Ad-EGFP组相比,过表达ACE2或西拉普利治疗显着增加了 ACE2 mRNA和蛋白表达水平以及活性;而且西拉普利组大鼠心肌组织中ACE2的含量显着低于Ad-ACE2组。4.3 H&E染色对照组心肌组织可见心肌细胞排列整齐,胞核大小均一,无心肌纤维破坏,细胞间隙正常。模型组和Ad-EGFP组心肌细胞肥大,心肌纤维断裂,炎症侵润。Ad-ACE2组和西拉普利组的上述病理学改变较模型组和Ad-EGFP组明显减轻,然而西拉普利组减轻的程度不如Ad-EGFP组。4.4心肌中ACE2和ACE的表达在病毒转染4周实验结束后,Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组ACE2的表达仅轻度增加,无统计学差异;与模型组Ad-EGFP组和西拉普利组相比,Ad-ACE2组ACE2的表达则显着增加。模型组和Ad-EGFP组ACE的表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组,模型组与Ad-EGFP组或者Ad-ACE2组与西拉普利组相比无统计学意义。4.5心肌和血浆中Ang（1-7）和AngⅡ的水平ELISA检测结果显示,与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组大鼠心肌和血浆中的Ang（1-7）和AngⅡ的水平均显着增加,模型组与Ad-EGFP组相比无明显差异;与模型组和Ad-EGFP组相比,Ad-ACE2组和西拉普利组大鼠心肌和血浆中的Ang（1-7）的水平可进一步显着增加,而AngⅡ的水平则显着降低;与西拉普利组相比,ACE2过表达使大鼠心肌和血浆中的Ang（1-7）的水平明显增加,而AngⅡ的水平则显着降低4.6 TUNEL染色以及c-caspase3和Bcl-2蛋白表达TUNEL染色结果显示,与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组大鼠心肌组织中TUNEL染色阳性细胞相对含量显着增高,而模型组与Ad-EGFP组差别无统计学意义。与模型组和Ad-EGFP组相比,Ad-ACE2组和西拉普利组大鼠心肌组织中TUNEL染色阳性细胞相对含量则明显降低,而Ad-ACE2组与西拉普利组差别无统计学意义。模型组和Ad-EGFP组c-caspase3的蛋白表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组;模型组与Ad-EGFP组或者Ad-ACE2组与西拉普利组c-caspase3的蛋白表达无明显差异。与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组Bcl-2的蛋白表达明显减低,模型组与Ad-EGFP组相比无明显差异;Ad-ACE2组和西拉普利组Bcl-2的蛋白表达较模型组和Ad-EGFP组明显增加;而相比于西拉普利组,ACE2过表达使大鼠心肌组织中Bcl-2的蛋白表达显着增加。4.7 AMPK的蛋白表达与模型组和Ad-EGFP组相比,ACE2过表达和西拉普利处理可显着增加AMPK的磷酸化;而相比于Ad-ACE2组,西拉普利处理使大鼠心肌组织中AMPK的磷酸化显着降低。4.8炎症因子的表达免疫组化结果显示,Ad-ACE2组和西拉普利组VCAM-1及TNF-α的表达较模型组和Ad-EGFP组显着降低;而与西拉普利组相比,Ad-ACE2组VCAM-1及TNF-α的表达明显的增多。Western blot检测结果同样显示,模型组和Ad-EGFP组ICAM-1、VCAM-1及TNF-α表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组;模型组与Ad-EGFP组或者Ad-ACE2组与西拉普利组ICAM-1的表达无明显差异。4.9 NOX2、P47和iNOS的表达及SOD活性Western blot检测结果显示模型组和Ad-EGFP组NOX2和P47的表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组,模型组与Ad-EGFP组相比无统计学意义;与西拉普利组相比,Ad-ACE2组P47的表达明显降低,而NOX2的表达无明显差异。模型组和Ad-EGFP组SOD的活性明显低于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组,模型组与Ad-EGFP组SOD的活性无明显差别;与西拉普利组相比,Ad-ACE2组SOD的活性显着降低。Western blot检测结果显示,Ad-ACE2组和西拉普利组iNOS的表达较模型组和Ad-EGFP组显着降低,模型组与Ad-EGFP组或者Ad-ACE2组与西拉普利组相比无统计学意义。4.10 ERK的蛋白表达Western blot检测结果显示,与模型组和Ad-EGFP组相比,ACE2过表达和西拉普利处理可显着减低ERK的磷酸化,而模型组与Ad-EGFP组或者Ad-ACE2组与西拉普利组相比无统计学意义。4.11 PI3K和AKT的蛋白表达Western blot检测结果显示,与对照组、模型组和Ad-EGFP组相比,ACE2过表达和西拉普利处理可显着增加PI3K和AKT的磷酸化,而相比于Ad-ACE2组,西拉普利处理使大鼠心肌组织中AMPK的磷酸化显着降低。4.12心率、血压及心脏超声测定结果各组间大鼠的心率无显着差异。与对照组相比,其余各组大鼠血压均显着降低,但Ad-ACE2组及西拉普利组大鼠血压与模型组及Ad-EGFP组相比无差别。心脏超声测定结果显示,与模型组和Ad-EGFP组相比,Ad-ACE2组和西拉普利组LVESD和LVEDD显着降低,而LVEF和FS则显着增加;相比于西拉普利组,Ad-ACE2组LVEF和FS显着增加,左室舒张末期直径则显着降低。4.13胶原的表达Masson染色显示,与模型组和Ad-EGFP组相比,而ACE2过表达和西拉普利处理可显着减低胶原沉积;而相比于西拉普利组,ACE2过表达使大鼠心肌组织中的胶原沉积更加显着降低;模型组与Ad-EGFP组间无统计学意义。免疫组化和western blot检测结果均显示模型组和Ad-EGFP组Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组,模型组与Ad-EGFP组相比无统计学意义;与西拉普利组相比,ACE2过表达可显着降低大鼠心肌组织中的Ⅲ型胶原的表达,而对Ⅱ型胶原的表达无明显影响4.14 MMP-9、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2 和 TGF-β 1 的表达Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组和Ad-EGFP组MMP-9的表达显着增加,而模型组与Ad-EGFP组MMP-9的表达无明显差异;与模型组和Ad-EGFP组相比,Ad-ACE2组和西拉普利组MMP-9的表达增加更加显着,Ad-ACE2组与西拉普利组相比无统计学意义。各组间大鼠心肌组织中MMP-1、TIMP-1以及TIMP-2的表达无统计学意义。Western blot检测结果显示模型组和Ad-EGFP组TGF-β1的表达明显高于对照组、Ad-ACE2组和西拉普利组,而模型组与Ad-EGFP组相比无统计学意义;与西拉普利组相比,Ad-ACE2组TGF-β1的表达明显降低。5结论（1）ACE2基因治疗明显改善ACM心肌重构和收缩功能障碍以及降低ACM大鼠的死亡率;（2）ACE2基因治疗发挥心脏保护作用的分子机制包括ACE2抑制心肌细胞凋亡、炎症反应、氧化应激以及心肌纤维化;活化AMPK、PI3K和AKT的磷酸化;抑制ERK1/2的磷酸化及TGF-β1表达;降低心肌组织中AngⅡ含量而增加Ang（1-7）的含量;（3）ACE2基因对ACM的治疗效果优于西拉普利。

马蕾^[5]（2014）在《阿托伐他汀对高血压患者内皮细胞功能和血压的影响》文中认为背景高血压因其“高患病率、高致残率、高致死率”已经成为严重危害人类健康的最常见疾病之一，近年来其发病率呈逐步上升且年轻化的趋势。高血压早期虽然无明显病理改变，但是长期高血压可使心、脑、肾以及血管等重要靶器官受到致命性打击。血管内皮细胞损伤被认为是高血压最早期和最重要的血管损害，也是动脉粥样硬化（AS）发病的早期关键性环节。内皮细胞损伤后，其合成分泌功能发生紊乱，对血管舒张因子合成减少，对血管收缩因子释放增多，引起血管平滑肌细胞增殖，导致动脉血管顺应性减退和动脉管壁结构重构，在高血压、AS、心力衰竭等心血管疾病的进展中起着重要作用。因此，对内皮细胞功能损伤进行早期干预治疗，阻止或逆转血管功能恶化及结构重构，可能是预防高血压等心血管疾病进展恶化的重要措施。近年来降压药物对内皮功能损伤的治疗作用逐渐受到研究者关注，热点主要集中在钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β受体阻滞剂、利尿剂的降压外血管保护作用，以期为心血管事件风险较小的高血压早期患者选择出更好的早期降压药物。他汀类药物作为临床上广泛应用的调脂类药物，其对AS患者和高脂血症患者的血管内皮修复作用及内皮功能改善作用已被广泛研究报道。但是，目前关于他汀类药物对高血压患者内皮功能障碍治疗效果和机制的研究尚少，尚不清楚他汀类药物是否可在降压治疗的基础上进一步改善高血压患者的内皮细胞功能及血压控制情况。因此，在应用降压药物良好控制血压的基础上，将阿托伐他汀用于无AS和高脂血症的高血压患者，可能会进一步修复已经发生的血管损伤，改善受损的内皮功能，对探索高血压患者的早期治疗方案有重要的临床意义。目的观察阿托伐他汀对高血压患者血管内皮细胞功能及血压的影响。对象与方法收集2012年7月至2013年1月于我院就诊的高血压患者92例，92例受试者均停药2周，复测血压仍符合标准者85例，测量并记录85例受试者的血清一氧化氮（NO）浓度、肱动脉血流介导的血管舒张功能（FMD）、肱踝动脉脉搏波传导速度（baPWV）和血压，然后应用苯磺酸氨氯地平片（5mg/d）和琥珀酸美托洛尔缓释片（47.5mg/d）对受试者进行降压预处理，并要求规律作息、戒烟酒和低盐低脂饮食。2周后再次测血压，血压控制达标者74例，随机分为对照组和研究组，每组各37例，测量并记录两组受试者的血清NO浓度、肱动脉FMD、baPWV和血压，将此次测量结果记为0月数据。对照组受试者按预处理方案继续治疗，研究组在上述治疗方式的基础上加用阿托伐他汀钙片（20mg/d）。于治疗3月、6月、9月、12月测量并记录两组受试者的血清NO浓度、肱动脉FMD、baPWV和血压。结果1、最终共61例受试者纳入统计分析，对照组30例，研究组31例。对于所有观察指标，重复测量检验结果均显示P时间＜0.05和P分组*时间＜0.05，说明时间因素以及时间*分组的交互作用有统计学意义，即各观察指标有随时间变化的趋势，并且时间因素的作用因分组的不同而不同，研究组各观察指标随时间趋势的变化更明显。2、血清NO浓度、肱动脉FMD、baPWV的P分组＜0.05，说明两种治疗方案对内皮功能改善的疗效有差别,研究组受试者内皮功能的改善更明显。3、SBP、DBP的P分组＞0.05，尚不能认为两种治疗方案的降压效果有差别。进一步对SBP、DBP的5个时间点的两组均数进行简单效应检验，发现两组SBP、BBP在6月、9月、12月的均数差异均有统计学意义（P＜0.05），可认为在治疗6个月以后，两种治疗方案的降压效果出现差别,研究组受试者血压下降更明显。结论1、在降压治疗的基础上加用阿托伐他汀，可使高血压患者的血管内皮功能得到更快更好的恢复。2、阿托伐他汀可能有助于高血压患者血压的控制。

张震洪^[6]（2014）在《他汀类药物对尿蛋白、肾脏事件、非透析患者全因死亡的系统评价》文中认为研究目的和背景：蛋白尿是目前应用最为广泛的早期诊断、预测肾病以及心血管事件的无创性指标之一。从1969年Keen首次发现高血糖患者尿液白蛋白排泄量的增加；到2012年我国颁布的“高血压与糖尿病患者微量白蛋白尿的筛查干预中国专家共识”。人们经过近半个世纪的研究,发现白蛋白尿与心血管事件、肾终点事件发生、临床预后密切相关,也是心血管、肾终点事件链重要暴露因素。检测尿蛋白、特别尿微量白蛋白有助于发现各种疾病的早期肾功能损害,为心血管疾病、肾病高危患者的危险分层与制定个体化干预策略提供依据；管理好尿蛋白可望逆转肾病的病理过程、保护靶器官功能、改善临床预后。目前明确能治疗蛋白尿的药物是血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin-converting enzyme inhibitor, ACEI）类药物和血管紧张素受体阻断剂（angiotensin receptor blocker,ARB）类药物。而在心血管领域中广泛应用的他汀类药物治疗蛋白尿的作用却有待临床实践和基础研究的进一步探讨。他汀类药物,即p-羟甲基戊二酰单酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂,是广泛应用于临床的公认的高效降脂药。他汀类除了调整血脂水平作用外,还具有改善血管内皮；抑制血管平滑肌细胞增殖血管平滑肌细胞增殖；抑制血管炎症反应、抗氧化、防治动脉粥样硬化、改善血压、抗肿瘤、免疫作用等非调脂肪作用。大量的临床实践和基础研究证明,他汀通过其多效的药理机制发挥对心血管、肾功能的保护作用。他汀对尿蛋白的影响的讨论,无论在动物实验或多个临床试验甚至是大型的临床研究都出现两种不同的结果；而从理论上分析,也有不同的声音：他汀类药物从药理机制上分析能改善血脂指标水平,发挥抗肾脏动脉粥样硬化作用；保护血管内皮和外膜脂肪舒张功能；抑制血管炎症物质活化、系膜细胞过度增殖及胞外基质堆积减轻肾血管的动脉硬化；改善肾局部循环血供和肾小管的重吸收功能；通过潜在的降压机制调节血压、改善肾小球高滤过、高动力状态；保护足细胞、减轻肾小管间质损伤；从而减少尿白蛋白的滤过、减少蛋白尿。但是,某些他汀类药物从药理机制上分析、能诱发管型蛋白尿的产生：干扰了近端肾小管细胞的胆固醇合成、促进肾小管细胞变性退化、从而影响肾小管细胞膜胞吞、重吸收蛋白质的功能；另外,大剂量的他汀经肾排泄,加重了肾小管重吸收的负荷,干扰了蛋白质的重吸收；从而使尿蛋白升高。无论是动物实验等基础研究、大型临床研究还是meta分析均表明他汀治疗能使肾病患者获益。他汀发挥调脂、非调脂等多效机制改善肾功能：他汀可以有效地降低血浆低密度脂蛋白C（low density lipoprotein-C,LDL-C）水平,减少肾小球系膜区和小管间质中脂蛋白的沉积,降低肾小球毛细血管袢内压,改善肾脏局部异常的血液流变学指标。他汀还可以减少甲羟戊酸的合成而抑制小G蛋白的异戊二烯化,使其以无活性的形式在胞浆内大量堆积,从而抑制高血糖、高脂血症、高胰岛素血症等诱发的肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞、肾间质成纤维细胞、血管内皮细胞等的增殖；抑制细胞因子和生长因子的表达、减轻氧化应激、改善血管内皮功能；调节外周血管舒缩功能,导致血管舒张,降低血压；作用于各种免疫细胞（主要是单核巨噬细胞和T细胞）的聚集、分化、增殖、分泌活动,干预肾脏疾病的免疫应答,改善肾功能。从肾脏疾病链来谈,尿蛋白是最重要的暴露因素之一；肾脏临床事件是联系暴露因素和终点结局（死亡）最重要的一环；全因死亡是肾病进展的最终结局。评价对全因死亡终点的影响是一切治疗手段有效性最有力的证据。目前单独以尿蛋白、肾脏事件报道、全因死亡例数作为一级观察终点,关于他汀对肾病疾病链全面的系统评价文章,国内外均未见报道。我们的研究对尿蛋白不同的测量指标进行分析、在尿蛋白从微量白蛋白、显性蛋白尿不同阶段分别做系统评价,较为全面反应他汀类药物对蛋白尿的干预作用。并通过他汀对肾脏事件、非透析患者全因死亡的系统评价,全面评估他汀在从暴露因素、临床事件、结局死亡整个肾脏事件链的干预作用,从而为肾病治疗学发展、临床合理用药提供循证医学证据。研究方法第一部分：他汀对尿蛋白的影响本部分实验又分为两组。根据基线尿蛋白测量指标水平分为显性蛋白尿组和微量白蛋白尿组。显性蛋白尿组：基线24h尿蛋白定量大于1000mg;尿微量白蛋白组：基线微量的白蛋白排出<30mg/24h、或尿白蛋白与肌酐比值（urinary albumin to creatinine ratio, UACR）为30-300mg/g,或尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion ratio, UAER）定量20-200mg/min。利用PubMed、Cochrane library、EMBASE数据库,全面检索迄今为止他汀对尿蛋白、尿微量白蛋白影响的临床随机对照试验。他汀检索词：’HMG CoA reductase inhibitors" OR"statin" OR "Simvastatin" OR "fluvastatin" OR "lovastatin " OR "Rosuvastatin" OR "atorvastatin" OR "xuezhikang";尿蛋白的检索词："urinary microalbumin" OR "microalbuminuria" OR "albumin creatinine ratio" OR "ACR" OR "urinary albumin excretion ratio" OR "AER"OR "proteinuria" OR "24h albumin";随机对照试验检索词："randomized controlled"OR "clinical trial"OR "random" OR "control"OR"RCT"。各个不同范筹检索词用“AND”连接,进行检索；同时在各个数据库进行扩展检索,阅读相关综述和相关文献的参考文献,通过制定的纳入标准、排除标准纳入试验、同时对纳入文献进行质量评价。提取实验组和对照组患者的基本情况、试验后尿蛋白或微量白蛋白测量值的均值和标准差、利用RevMan软件对其行meta分析、评价他汀类药物对显性蛋白尿、微量白蛋白尿的影响。绘制森林图分析结果、并绘制漏斗图分析发表偏倚；根据检验结果采用相应效应模型进行合并效应量。当各研究间有统计学同质性I2<50%时,采用固定效应模型；反之,I2>50%,采用随机效应模型分析。第二部分：他汀对肾脏事件的影响肾脏事件包括终末期肾脏疾病（肾衰竭导致透析或移植）,肌酐水平增加一倍,肾小球滤过率（glomerular filtration rate, GFR）下降50%。利用PubMed、 Cochrane library、EMBASE数据库,全面检索迄今为止他汀与各级肾脏事件发生事件报道有关的临床随机对照试验。他汀检索词：“HMG CoA reductaseinhibitors " OR "statin "OR"Simvastatin" OR"fluvastatin"OR"lovastatin " OR "Rosuvastatin" OR "atorvastatin" OR"xuezhikang";肾脏事件的检索词："End stage renal disease"OR " doubling of creatinine" OR "progression of impaired renal function" OR"50%decrease in eGFR"OR"kidney event""Dialysis"OR"kidney transplantation";随机对照试验检索词："randomized controlled"OR"clinical trial"OR "random" OR "control"OR "RCT"。各个不同范筹检索词用“AND”连接,进行检索；同时在各个数据库经行扩展检索,阅读相关综述和相关文献的参考文献,通过制定的纳入标准、排除标准纳入试验、同时对纳入文献进行质量评价。主要的观察指标是应用他汀后,各种肾脏事件发生例数。利用RevMan软件对其行neta分析、评价他汀类药物肾脏事件发生的影响。绘制森林图分析结果、并绘制漏斗图分析发表偏倚；根据检验结果采用相应效应模型进行合并效应量。当各研究间有统计学同质性I2<50%时,采用固定效应模型；反之,I2>50%,采用随机效应模型分析。第三部分他汀对肾病非透析患者全因死亡的影响利用PuMed、Cochrane library、EMBASE数据库,全面检索迄今为止他汀与非肾脏透析肾病患者死亡发生例数报道有关的临床随机对照试验。他汀检索词：" HMG CoA reductase inhibitors " OR "statin "OR "Simvastatin "OR "fluvastatin" OR "lovastatin "OR"Rosuvastatin"OR "atorvastatin"OR"xuezhikang";非透析治疗的检索词："not requiring dialysis"OR "nondialytic treatment";随机对照试验检索词："randomized controlled"OR"clinical trial"OR "random" OR "control"OR "RCT";全因死亡的检索词“all cause mortality" OR"death "OR "mortality"OR "end point "。各个不同范筹检索词用“AND”连接,进行检索；同时在各个数据库经行扩展检索,阅读相关综述和相关文献的参考文献,通过制定的纳入标准、排除标准纳入试验、同时对纳入文献进行质量评价。主要的观察指标是应用他汀后,非透析病人发生死亡例数。利用RevMan软件对其行meta分析、评价他汀类药物肾脏事件发生的影响。绘制森林图分析结果、并绘制漏斗图分析发表偏倚；根据检验结果采用相应效应模型进行合并效应量。当各研究间有统计学同质性I2<50%时,采用固定效应模型；反之,I2>50%,采用随机效应模型分析。结果：第一部分他汀对尿蛋白的影响本研究共纳入8个试验,其中显性蛋白尿6个、微量白蛋白尿2个；6个研究为B级,2个研究为C级。Jadad评分为1-3分。显性蛋白尿组分析共纳入6个研究,共患者311例。他汀治疗组156例、对照组155例；入选文献异质性检验I2<50%,采用固定效应模型进一步分析；结果显示与对照组相比经他汀治疗后,可降低显性蛋白尿患者24小时尿蛋白定量734.44mg [（95%CI-826.41,-642.48）, z=15.65, P<0.01]。结果提示他汀类药物可有效降低显性蛋白尿；漏斗图提示6个研究分布不对称,存在发表偏倚的可能。微量蛋白尿组共纳入2个研究,均以白蛋白排泄率为测量指标。入选文献异质性检验I2=51%,采用随机效应模型进一步分析；结果显示与对照组相比经他汀治疗后,略降低微量蛋白尿患者UAER34.27μg/min [（95%CI-88.06,19.51）,Z=1.25,P>0.05]。这表明他汀类药物有降低尿微量白蛋白的趋势,但未达到统计学意义。第二部分他汀对肾脏事件的影响本研究共纳入5个试验,均为高质量的研究,Jadad评分为3-5分（5分表）。他汀治疗组18064例、对照组18073例；入选文献异质性检验I2<50%,采用固定效应模型进一步分析；结果显示与对照组相比经他汀治疗后,可降低患者肾脏事件的发生[OR=0.91,（95%CI0.83,0.99）,z=2.09, P=0.04]。这表明他汀类药物减少肾脏事件的发生；剔除SUB-SHARP研究行敏感性分析。结果提示,他汀有降低肾脏事件发生趋势,但无统计学意义[OR=0.79,（95%CI0.61,1.01）,z=1.86,P=0.06]。这说明本次meta分析结论欠稳定；漏斗图提示5个研究大致分布对称,发表偏倚可能性不大。第三部分他汀对肾病非透析患者全因死亡的影响本研究共纳入7个试验,Jadad评分为1-5分（5分表）。他汀治疗组14197例、对照组14404例；入选文献异质性检验I2<50%,采用固定效应模型进一步分析；结果显示与对照组相比经他汀治疗后,可减少患者全因死亡例数[OR=0.77,（95%CI0.70,0.85）,Z=5.32,P<0.01]。剔除PPP研究行敏感性分析,未实质性改变原来结果,说明本次研究结论较为可信。[OR=0.64,（95%CI0.49,0.84）,Z=3.21,P<0.01]。漏斗图提示7个研究大致分布对称,发表偏倚可能性不大。结论：本研究通过观察他汀干预肾脏疾病链三个重要的环节（暴露因素、临床事件、终点死亡）的影响,来系统、全面评价他汀类药物对肾脏疾病的影响。结果显示：他汀类药物干预能有效减少显性蛋白尿,减少肾脏事件的发生；降低肾病非透析患者全因死亡；但未能减少尿微量白蛋白。以上结果清晰表达以下结论：他汀类药物能有效干预肾病危险因素、减少临床事件,最终改变临床结局。局限性及展望：第一部分他汀对尿蛋白的影响共纳入8个研究,纳入的样本量不多,为中、低质量的研究,降低了本次研究的检验效能。我们虽多次扩大检索范围,但遗憾的是本研究微量白蛋白组纳入研究只有2个、入选病例少、我们应谨慎对待他汀对微量白蛋白尿的研究结果。随着研究的深入,未来必将有更多,大样本、高质量的随机对照研究来支持、验证我们的研究结论。第二部分他汀对肾脏事件的影响纳入共5个随机对照试验（randomized controlled trial, RCT）的Jadad评分在3-5分之间,证据水平为高级。入选的RCT虽然质量高,但只有5个,这也限制了我们通过亚组分析他汀对不同的肾脏事件行的影响；纳入研究样本量差异较大（从123-16145）、SUB-SHARP研究占的权重大,行敏感性分析提示单一研究对最后结果影响大,影响了统计效力；尽管漏斗图未显示明显偏倚,但发表偏倚不可避免。未来还需要更多高质量、大样本、前瞻性的随机对照实验以肾脏事件为一级终点而不是安全性指标,来观察他汀对临床肾脏事件的影响。第三部分他汀对肾病非透析患者全因死亡的影响本次研究入选的RCT7个,6个为中、高级质量研究、1个为低质量研究。纳入研究少,这限制了我们通过亚组分析他汀对不同病因造成死亡的影响；纳入研究样本量差异较大（从17-16824）、PPP研究占的权重大,单一研究对最后结果影响大,影响了统计效力；但敏感性分析提示本次研究结论较为稳定；尽管漏斗图未显示明显偏倚,但发表偏倚不可避免。究竟他汀能不能改变肾病最终结局,答案还待未来临床实践、循证试验去揭晓。

李静乐^[7]（2012）在《Periostin在平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及阿托伐他汀的影响》文中指出目的观察Periostin （Pn）在大鼠颈动脉损伤后的表达情况及其与动脉内膜增生过程的关系以及体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞在TGF-p1刺激下Pn的表达情况及其与平滑肌细胞迁移、增殖等活动的关系；观察阿托伐他汀对上述过程的影响并初步探讨其抑制Pn表达的分子机制。为防治血管重塑及增生性血管疾病提供治疗新靶点。方法采用通气-干燥法损伤大鼠右侧颈总动脉制备动物模型。45只大鼠随机分成正常对照组（不行手术）和阿托伐他汀组、模型对照组,分别于术后1周、2周、4周各处死大鼠5只取右颈总动脉标本,采用组织形态学检测内膜增生；采用免疫组织化学染色和RT-PCR观察血管组织Pn的表达。采用组织块贴壁培养法进行血管平滑肌细胞的原代培养,取3-6代细胞用于实验。采用10ng/mlTGF-β1刺激VSMC,并用不同浓度阿托伐他门（0.1umol/L.1.0umol/L、10.0umol/L）干预,24小时后用RT-PCR及Western-blot法检测VSMC中Pn mRN和蛋白的表达；用Boyden趋化小室测试细胞迁移情况,用MTT法测定细胞增殖情况。原代培养大鼠主动脉SMC,采用lOng/ml TGF-β1刺激VSMC,分别加入10umol/L阿托伐他汀、MVA及10umol/L阿托伐他汀、Rho激酶抑制剂Y-27632,24小时后用RT-PCR及Western-blot法检测VSMC中PnmRN和蛋白的表达。结果（1）正常对照组血管各时间段内膜无明显变化。与正常对照组血管比较,大鼠颈动脉损伤后1周、2周、4周新生内膜增生明显,内膜面积及内/中膜面积比值增加。（2）正常对照组血管各时间段未见明显Pn表达。与正常对照组血管比较,大鼠颈动脉损伤后1周、2周、4周Pn表达明显增加。（3）阿托伐他汀组2周、4周Pn表达和内膜面积、内/中膜面积比值与模型对照组比较明显减少。（4）大鼠VSMC在TGF-β1刺激下Pn表达明显增加,且VSMC迁移率及增殖率显着增加。Pn抗体可明显抑制TGF-β1诱导的VSMC的迁移和增殖。（5）阿托伐他汀明显减少大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的Pn表达,显着抑制VSMC的迁移率及增殖率,且呈浓度依赖性。（6）Rho激酶抑制剂Y-27632可明显减少大鼠VSMC在TGF-β1诱导下的Pn表达,作用与阿托伐他汀类似。（7）加入MVA后,阿托伐他汀对TGF-β1诱导大鼠VSMC中Pn表达的抑制作用明显降低。结论（1）Pn可促进平滑肌细胞增殖和迁移,在动脉损伤后内膜增生过程中起重要作用。（2） TGF-β1可通过Rho/Rho激酶信号通路促进血管平滑肌细胞中的Pn表达。（3）阿托伐他汀可能是通过抑制MVA等类异戊二烯的生成,阻断Rho/Rho激酶信号通路,进而抑制’TGF-β1诱导的VSMC中的Pn表达。（4）阿托伐他汀可能通过抑制Pn而抑制平滑肌细胞的增殖和迁移及大鼠动脉损伤后的内膜增生。

耿静^[8]（2011）在《蛋白激酶D在高血压主动脉重塑中的作用及分子机制研究》文中研究说明研究背景高血压是心血管疾病最重要的危险因素,而血管重塑是导致高血压患者心血管事件发生率显着增加的独立危险因素。与高血压相伴随的血管结构和功能的改变即高血压血管重塑,主要包括管壁增厚、管壁管腔比值增大和小血管减少,以及随之产生的血管功能异常。血管重塑不仅仅是一种代偿反应,也是高血压的主要病理基础之一,是引起高血压各种严重并发症以及循环系统功能紊乱的重要原因。血管重塑可导致一系列的临床事件,如高血压、动脉粥样硬化和血管狭窄等。目前的研究表明,高血压主动脉重塑是死亡率增加的主要原因之一。因此预防和改善血管重塑也是高血压治疗的主要目标之一和评价高血压治疗效果的重要指标。血管重塑的发病机制和防治措施已成为国内外的研究热点。高血压血管重塑是一个非常复杂的病理过程,其确切的机制仍不十分明确。研究发现,血管重塑涉及多个细胞过程的变化,如细胞肥大、增殖、调亡、重塑、炎症反应、氧化应激、细胞因子的活化、细胞外基质产生与降解等。高血压主动脉重塑的中心环节是因血管平滑肌细胞肥大导致的血管中膜增厚。蛋白激酶D（PKD）家族是一种新发现的Ca2+/钙调蛋白依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,主要包括PKD1、PKD2, PKD3三个成员。PKD结构与酶的活性均和PKC家族不同。越来越多的证据表明,PKD介导的信号通路在心血管系统中发挥重要作用,尤其在调节心肌收缩、心室肥厚及重塑中的作用。最近的研究显示血管平滑肌细胞也表达PKD,且PKD的活性能被一些刺激因素激活,如血管紧张素Ⅱ,血小板源性生长因子和血栓素等。用血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞时,PKD通过AT1/PKCδ途经被激活。另外有研究证实PKD可通过使组蛋白去乙酰酶5（HDAC5）磷酸化介导血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞肥大。然而,PKD在自发性高血压大鼠主动脉组织中的活性表达及其在主动脉重塑中的作用机制还不是很明确。高血压患者经常伴随血脂代谢紊乱,因此他汀类药物在高血压患者中应用广泛。越来越多的证据表明,他汀类药物除了能够有效降低血脂水平外,还能发挥其降脂以外的多项心血管保护效应,如：改善血管内皮功能、稳定动脉粥样硬化斑块、抗炎抗氧化以及阻止心室肥厚、改善心室重塑等。无论患者血脂是否正常,应用他汀类药物均能降低心血管疾病的致残率和死亡率。最近的研究表明,阿托伐他汀能抑制心肌肥厚及纤维化。然而,它在血管重塑中的保护作用及其具体机制还不是很清楚。本课题动态观察高血压大鼠主动脉组织中PKD表达和活化特点及其与主动脉重塑的关系；研究PKD在高血压主动脉重塑中的作用机制；初步探讨阿托伐他汀对高血压主动脉重塑的改善作用及其分子机制。旨在从分子角度阐明高血压血管重塑的发病机制和他汀类药物改善血管重塑的机制。为高血压血管重塑的防治提供新思路和理论依据。目的1.进一步明确自发性高血压大鼠主动脉重塑的发生发展过程；2.探讨自发性高血压大鼠主动脉组织中蛋白激酶D的活性表达在血管重塑中的作用。3.评价阿托伐他汀在改善高血压主动脉重塑发生发展中的作用及与PKD的关系。方法8周龄WKY大鼠40只、自发性高血压（SHR）大鼠50只。WKY大鼠随机分为四组,A组：8周龄（n=10只）；B组：16周龄（n=10只）；C组：24周龄（n=10只）,G组：WKY安慰剂（n=10只）。SHR大鼠随机分为五组：D组：8周龄（n=10只）；E组：16周龄（n=10只）；F组：24周龄（n=10只）；H组：SHR安慰剂（n=10只）；Ⅰ组：SHR阿托伐他汀（ATV）50mg·kg-1·d-1 （n=10只）。以标准大鼠饲料喂养及普通饮水。另外,WKY安慰剂组、SHR安慰剂组及SHR阿托伐他汀治疗组,自16周龄开始每天以蒸馏水或阿托伐他汀分别灌胃,持续8周。于8、16、24周处死动物,留取胸主动脉组织标本备用。实验过程中,进行以下检测：（1）各组大鼠每隔2周测量体重、心率及尾动脉血压一次；（2）分别于喂养前、喂养至16周、24周抽血测定空腹血脂；（3） HE、Masson及天狼腥红染色,观察主动脉壁内膜结构、中膜厚度、弹力纤维和胶原沉积变化；（4）测量主动脉壁中层厚度（MT）、内径（LD）、胶原体积分数（VFC）,并计算MT/LD比值；（5）计算羟脯氨酸含量；（6） ELISA法检测炎症因子IL-6和TNF-α; （7） Western blot法检测硝基酪氨酸、PKD、p-PKD744/748、p-PKD916蛋白的表达。结果1.实验动物基本情况实验过程中共有2只大鼠死亡,SHR大鼠组16及24周龄组各一只。在普通喂养周期内死亡。SHR阿托伐他汀治疗组无死亡。共88只大鼠完成实验,其中WKY组40只,SHR组48只。2.各组大鼠基本指标比较喂养前,各组大鼠心率、血脂均无显着差异（P>0.05）；SHR大鼠尾动脉收缩压高于WKY大鼠,差异显着（P<0.05）。WKY大鼠的血压在整个喂养过程中无明显升高,与WKY组比较,SHR大鼠血压随周龄逐渐升高,差异有显着性意义（P<0.05）；SHR阿托伐他汀治疗组尾动脉收缩压明显降低,有显着性差异（P<0.05）实验前各组大鼠血甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）间差异无显着性统计学意义（P>0.05）。SHR阿托伐他汀组血清TC及LDL均较WKY安慰剂、SHR安慰剂组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,TG和HDL-C变化不明显（P>0.05）。3.主动脉形态及组织病理观察HE染色显示：WKY大鼠血管壁无明显增厚,平滑肌细胞体积较小,大小均一,排列整齐,中膜层弹力纤维排列有序,内膜均一,无增厚；SHR大鼠中膜明显增厚,中膜内平滑肌细胞肥大,形态不规则,排列紊乱,弹力纤维层扭曲,内皮细胞排列紊乱,内膜略有增厚,部分内皮细胞有脱落。随着周龄的增加,上述表现愈加明显。阿托伐他汀组与SHR安慰剂组相比较,内、中膜结构均明显改善,内膜较平滑均一,中膜增厚明显减弱,平滑肌细胞肥大减退,排列较规则,中层弹力纤维结构较完整有序。Masson染色显示：WKY组弹力纤维排列整齐,胶原增生不明显；SHR组胶原纤维明显增多,弹力纤维减少、排列紊乱甚至断裂；阿托伐他汀组与SHR安慰剂组相比较,胶原增生减少,弹力层增多,排列较整齐。天狼腥红染色显示：与WKY对照组相比,SHR组随着周龄增加,Ⅰ型胶原纤维和Ⅲ型胶原显着增加,阿托伐他汀组比SHR安慰剂组胶原纤维明显减少。4.主动脉重塑相关指标变化与WKY组比较,SHR组MT、MT/LD、VFC均显着增加（P<0.05）；阿托伐他汀组较SHR安慰剂组MT、MT/LD、VFC显着降低（P<0.05）。5.羟脯氨酸含量变化WKY大鼠在整个喂养过程中,羟脯氨酸含量无明显增加。与WKY组比较,SHR组羟脯氨酸随周龄显着增加（P<0.05）；阿托伐他汀组较SHR安慰剂组羟脯氨酸显着降低（P<0.05）。6.炎症因子表达变化与WKY组比较,SHR组IL-6和TNF-α均显着增加（P<0.05）；阿托伐他汀可明显降低IL-6和TNF-α（P<0.05）。7.氧化应激硝基酪氨酸是氧化应激的标志物,与WKY组相比,SHR组硝基酪氨酸表达明显增加（P<0.05）；阿托伐他汀可明显降低硝基酪氨酸表达（P<0.05）。8. Westen blot检测各组主动脉组织中PKD及磷酸化PKD的表达与同周龄WKY对照组相比,SHR8、16.24周龄组大鼠主动脉组织中p-PKD744/748、p-PKD916表达明显升高（P<0.05）；随着周龄的增加SHR组p-PKD744/748、p-PKD916表达水平逐渐升高（P<0.05）。同期WKY各组大鼠的P-PKD744/748、p-PKD916没有显着性变化。SHR阿托伐他汀组P-PKD744/748. P-PKD916较SHR安慰剂组的表达减弱,有统计学意义（P<0.05）。SHR各组总的PKD表达无明显变化。结论1.SHR大鼠随着喂养时间延长呈增龄性主动脉重塑,为高血压主动脉重塑发病机制的研究提供了可靠的动物模型平台。2.SHR大鼠主动脉组织中磷酸化PKD的表达随着主动脉重塑过程逐渐升高,提示磷酸化PKD参与了自发性高血压大鼠主动脉重塑的发生发展过程。3.阿托伐他汀可以改善自发性高血压大鼠主动脉重塑的发展,这与其抗炎抗氧化特性有关,其作用靶点可能与PKD有关。研究背景高血压状态下,大小动脉的结构和功能都会发生变化,从而引起血管重塑及心血管疾病的危险性增加。血管壁中膜增厚是高血压主动脉重塑最重要的特征性病理改变,其主要形成原因是管壁中层血管平滑肌细胞的肥大。高血压血管肥厚和重塑是对病理状态下血流动力学长期变化的一种代偿反应。高血压血管肥厚包含的细胞分子学过程有：VSMC肥大、增殖、迁移、凋亡、炎症反应、氧化应激和纤维化。肾素血管紧张素系统（RAS）在高血压和心血管疾病的发生发展过程中发挥重要作用。实验证据证明,在高血压血管重塑的发生发展过程中,伴随着血管局部RAS的激活和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的高水平表达。RAS的中心环节是AngⅡ识别其特异性受体,并通过一定的信号通路发挥作用。作为RAS系统的主要效应因子,AngⅡ是高血压心血管重塑的重要调节因子。AngⅡ是一种血管活性肽,通过升高血压引起血管重塑和内皮功能紊乱。然而,AngⅡ还可以通过不依赖血流动力学的作用介导血管重塑。大量的证据表明,AngⅡ通过刺激VSMC肥大而诱导病理性的血管重塑。AngⅡ还参与血管纤维化,通过TGF-β依赖性和非依赖性Smad通路引起血管纤维化。另外,AngⅡ是血管组织中ROS和促炎转录因子的主要调节因子。ERK5是最近发现的MAPK家族的新成员,在不同类型细胞中的定位不同。多种刺激因素,如神经生长因子,表皮生长因子,血小板源性生长因子和血管紧张素Ⅱ都能激活ERK5。ERK5在将信号从细胞膜传递到细胞核的过程中激活了一个三级级联反应：MAPKKK或MEKK2/MEKK3; MAPKK或MEK5; MAPK或ERK5,受到刺激后,这些激酶持续磷酸化并活化下游的效应因子,包括肌细胞增强因子（MEF2）。ERK5在调节肥厚相关基因,尤其是MEF2依赖的c-jun基因方面有潜在作用,通过直接磷酸化MEF2使其活化,从而调节肥大反应。ERK5在AngⅡ刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞中可激活下游的MEF2。PKD作为肥厚调节因子,参与心脏与血管的肥厚性重塑。PKD对MAPK家族信号通路具有调节作用,如PKD通过磷酸化Ras结合蛋白RIN1而上调Ras和ERK1/2信号通路的活性；通过磷酸化c-Jun而下调JNK的活性。但是关于PKD对ERK5是否有调节作用,目前尚无相关研究。因此,本实验将进行体外AngⅡ诱导人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）肥大实验,验证PKD/ERK5/MEF2信号通路是否参与其中,从而为高血压血管重塑的逆转提供新的治疗靶点。研究目的1.验证AngⅡ诱导人主动脉血管平滑肌细胞（HASMCs）肥大的作用；2.明确AT1/PKCδ/PKD/ERK5/MEF2信号转导通路在Angll诱导HASMCs肥大中的作用机制；研究方法1.人主动脉血管平滑肌细胞的体外培养HASMCs购自ScienCell （San Diego, CA）公司,在MEM培养基,37℃和5%CO2中培养,取代数在4-8,处于生长对数期的细胞进行实验。4细胞分组处理1)无刺激因素孵育细胞；2) AngⅡ刺激细胞,筛选最佳刺激浓度和时间；3) AngⅡ刺激+DMSO孵育细胞；4) AngⅡ刺激+AT1拮抗剂Losartan孵育细胞；5) AngⅡ刺激+AT2拮抗剂PD123319孵育细胞；6) AngⅡ刺激+PKC抑制剂Go6983孵育细胞；7) AngⅡ刺激+Control siRNA孵育细胞；8) AngⅡ刺激+PKCδsiRNA孵育细胞；9) AngⅡ刺激+PKD siRNA孵育细胞；10) AngⅡ刺激+ERK5 siRNA孵育细胞。3.对各组HASMCs进行如下检测：1)电镜观察细胞形态学改变；2)3H-亮氨酸摄入率测定,评估细胞肥大的程度；3) Western blot测定PKC, p-PKCα/β,ζ,ε,δ, PKD、p-PKD744/748、P-PKD916、ERK1/2、p-ERK 1/2、ERK5、p-ERK5、MEF2C、p-MEF2C的表达,用特异性的抑制剂或si RNA阻断通路的各环节,观察下游分子的表达变化；4)免疫荧光测定各分子的表达及ERK5在胞浆胞核之间的转位。研究结果1.AngⅡ刺激HASMCs的形态学变化AngⅡ刺激组：加AngⅡ（以无血清培养液溶解）使终浓度为100nM；正常对照组（control）:培养液中加等量无血清培养液。处理一定时间后在显微镜下观察细胞形态学变化。镜下观察可见在加用AngⅡ刺激后,HASMCs较正常对照组表现明显肥大。2. AngⅡ刺激的HASMCs 3H—亮氨酸掺入率的测定一定浓度的AngⅡ（100nM）刺激不同时间（0min、5min、15min、30min、60min）,15分钟后HASMCs 3H-亮氨酸掺入较空白组明显增高（P<0.01）。当时间恒定时（15min）,HASMCs 3H-亮氨酸掺入随着AngⅡ浓度（1nM、10nM、100nM、1000 nM）的增加呈剂量依赖性增加,后三组明显高于对照组,差异非常显着（P<0.01）。3. Western blot测定AT1/PKCδ/PKD/ERK5/MEF2C信号通路1) AngⅡ刺激HASMCs后,PKC不同亚型的激活AngⅡ100nM不同时间（0、5、15、30、60min）刺激平滑肌细胞,观察不同亚型PKC磷酸化蛋白的表达,结果发现磷酸化PKCδ在5分钟时开始表达,15到30min达到表达高峰,以后则呈逐渐下降趋势,60min时表达恢复基线水平。PKCa/p和PKCε表达随时间无明显变化,PKCζ则在30min时开始表达,60min时表达有所增加。2) AngⅡ对HASMs中ERK1/2和ERK5的激活AngⅡ100nM不同时间（0、5、15、30、60min）刺激平滑肌细胞,观察ERK1/2、ERK5总蛋白及磷酸化蛋白的表达,结果发现磷酸化ERK5在5分钟时开始表达,15到30min达到表达高峰,以后则呈逐渐下降趋势,60min时表达恢复基线水平。磷酸化ERK1/2表达较早,5min表达达高峰,较0、15、30、60min有显着性差异（p<0.01）。ERK1/2、ERK5总蛋白表达在各时间段没有变化。3)AngⅡ通过AT1激活ERK5AngⅡ受体有两个亚型AT1、AT2。应用ATl特异性拮抗剂Losartan（0.3、1.0、3.0μmol/L）及AT2特异性拮抗剂PD123319（5、10、20μmol/L）预处理平滑肌细胞30min,然后AngⅡ100nM刺激15min,结果显示Losartan剂量依赖性阻断p-ERK5的表达,而PD123319对p-ERK5的表达没有影响。4)AngⅡ激活ERK5依赖于PKCδ通路应用PKC的抑制剂Go6983不同浓度（0.3、1、3μmol/L）预处理平滑肌细胞30min,AngⅡ100nM刺激15min,结果显示Go6983呈剂量依赖性抑制磷酸化ERK5的表达,由此证明PKC参与AngⅡ激活ERK5的过程。用PKC8 siRNA预处理细胞后,再加入AngⅡ刺激,ERK5的磷酸化明显受到抑制,说明PKCδ是ERK5的上游分子。5)AngⅡ介导的PKD激活呈AT1/PKCδ依赖性AngⅡ诱导的PKD活化呈时间和浓度依赖性。AT1受体拮抗剂Losartan 3mmol/L阻断p-PKD的表达,而AT2受体拮抗剂PD123319 10mmol/L对p-PKD的表达没有影响；PKC抑制剂Go6983呈剂量依赖性抑制磷酸化PKD的表达；PKCδsiRNA明显抑制PKD的活化。由此证明AT1/PKCδ参与AngⅡ激活PKD的过程。6)PKD参与AngⅡ介导的ERK5的激活应用PKD siRNA转染HASMCs,观察下游分子ERK5的表达。结果显示：PKD siRNA抑制p-ERK5的表达,与对照组有显着性差异（P<0.01）。7)PKCδ/PKD/ERK5参与了AngⅡ介导的MEF2C的激活AngⅡ100nM不同时间（0、5、15、30、60min）刺激HASMCs,观察MEF2C的激活。结果显示：磷酸化MEF2C在5分钟时开始表达,15min达到表达高峰（p<0.01）,30min表达恢复基线水平。PKC抑制剂、PKCδsiRNA、PKD siRNA、ERK5 siRNA显着减少磷酸化MEF2C的表达（p<0.01）。8) PKCδ/PKD/ERK5参与了Angll介导的HASMCs肥大AngⅡ100nM刺激15分钟,HASMCs 3H-亮氨酸摄入率明显增加（p<0.01）；PKC抑制剂、PKCδsiRNA、PKD siRNA、ERK5 siRNA显着降低3H-亮氨酸摄入率（p<0.01）。4.免疫荧光1)免疫荧光测定各分子的表达用免疫荧光细胞化学染色观察AngⅡ100nM刺激不同时间后HASMCs PKD、ERK5和MEF2C的表达。结果显示：PKD胞质表达,MEF2C胞核表达,而ERK5随着刺激时间不同在胞浆和胞核之间转位。2)ERK5胞浆胞核之间的转位静息状态下,ERK5位于细胞质中,AngⅡ100nM刺激5分钟后,ERK5逐渐向细胞核转位,15分钟时基本全部位于胞核内,随后ERK5又重新向细胞质转移,在1小时时基本恢复基线水平。3) AT1/PKCδ/PKD信号通路参与了Angll介导的ERK5转位AngⅡ100nM刺激15分钟后,ERK5的细胞核表达水平达最高。分别应用AT1受体拮抗剂,PKC抑制剂、PKCδsiRNA和PKD siRNA干扰细胞,阻断ERK5的磷酸化,ERK5的转位明显被抑制,提示ERK5的转位依赖于其磷酸化情况。结论1.验证了AngⅡ具有诱导HASMCs肥大的作用；2.首次证明AT1/PKCδ/PKD/ERK5/MEF2C信号通路参与AngⅡ诱导的HASMCs肥大的过程。

张宇,欧阳平,罗烨,赖文岩,许顶立^[9]（2010）在《普伐他汀对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞syndecan-4蛋白表达的影响》文中研究说明目的观察普伐他汀对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分别应用终浓度为20ng/mlTNF-α、10μmol/ml普伐他汀、20μmol/ml普伐他汀、20ng/mlTNF-α+10μmol/ml普伐他汀、20ng/mlTNF-α+20μmol/ml普伐他汀分别作用24h,并设立相关对照组进行比较。采用MTS/PMS法确定VSMCs的增殖状态,利用Westernblot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中syndecan-4蛋白的表达。结果 （1）与对照组比较,TNF-α组能显着刺激大鼠VSMCs的增殖（P<0.05）,而普伐他汀不同剂量组单独应用对大鼠VSMCs的增殖均无明显作用（P>0.05）。TNF-α联合普伐他汀共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs增殖均有显着减少（P<0.05）。（2）Westernblot蛋白免疫印迹法测定显示:与对照组比较,TNF-α组能显着刺激VSMCs的syndecan-4蛋白表达（P<0.05）,而普伐他汀不同剂量组单独应用对VSMCs的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P>0.05）。TNF-α联合普伐他汀共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs的syndecan-4蛋白表达显着降低（P<0.05）。结论普伐他汀可明显抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。

王丽岳^[10]（2010）在《Nur77调节PCI术后再狭窄血管平滑肌细胞增殖机制研究》文中研究指明目的：建立颈动脉再狭窄大鼠动物模型,探索再狭窄的发病机制并进行干预性研究。方法：取颈部正中切口,无菌暴露鼠颈动脉；在颈内动脉（ICA）起始部及颈总动脉（CCA）近心侧距动脉分叉2cm处用动脉夹临时夹闭；自颈外动脉（ECA）远端结扎并由结扎近心侧穿刺进入导丝、球囊导管,撤除CCA动脉夹进行球囊扩张血管成形术（PTA）。术后随机分为两组,一组用阿托伐他汀干预,一组作为对照组,于PTA后不同时间进行组织学及形态学分析（左侧颈总动脉作正常对照组）。观察两组内膜厚度与管腔面积。结果：PTA后早期CCA主要病理改变是血栓形成,中晚期为血管平滑肌细胞（VSMC）由中层移行至内膜并失控增殖伴有基质增多；两组管腔明显狭窄（P<0.01）,内膜增厚（P<0.01）,药物干预组与对照组相比内膜变薄,管腔面积增加（P<0.05）结论：大鼠颈总动脉PTA模型模拟了临床过程,成功率高,为PTA之动脉阶段局部用药或转基因治疗实验首选模型。阿托伐他汀减轻球囊扩张术后再狭窄。目的：观察阿托伐他汀对大鼠血管球囊损伤术后再狭窄中核孤儿受体Nur77表达水平的影响及其与血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的关系,探讨阿托伐他汀防治血管球囊损伤术后再狭窄新的作用机制。方法：100只SD雄性大鼠高脂饮食,喂养1周后随机分为三组：空白对照组（BC组）,血管球囊损伤术组（CG组）,血管球囊损伤术后药物组（AIG组）。显微镜下检测各组血管病理形态学改变及平滑肌细胞增殖率,应用免疫组织化学法及Western Blot:分析各组血管组织中Nur77的表达;RT-PCR检测各组血管组织中ERK、PDGF-B、Nur77、NF-κB的基因表达。体外培养VSMCs应用Western Blot分析阿托伐他汀对VSMCs中PDGF-B诱导的Nur77的基因表达。结果：大鼠血管球囊损伤术后CG组核孤儿受体Nur77表达水平增高,血管内膜-中膜显着增厚（P<0.01）；AIG组血管组织中Nur77表达较BC组增加,较CG组减少,血管内膜-中膜厚度与CG组比较变薄（P<0.05）。PDGF-B诱导VSMCs中Nur77高表达,阿托伐他汀抑制VSMCs中PDGF-B诱导的Nur77蛋白表达。结论：血管球囊损伤术后,鼠颈动脉内膜增厚,Nur77高表达,血管平滑肌细胞增殖；阿托伐他汀降低损伤血管Nur77表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖。体外培养血管平滑肌细胞,阿托伐他汀显着抑制PDGF-B诱导的Nur77表达。通过降低Nur77表达抑制VSMCs增殖,可能是他汀类药物新的预防血管损伤术后再狭窄的机制。目的：研究PDGF诱导血管平滑肌细胞中Nur77表达机制及其与血管平滑肌细胞增殖的关系。探讨阿托伐他汀对PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖和Nur77表达的关系。方法：分离培养鼠血管平滑肌细胞,分别与PD98059,阿托伐他汀,siRNANur77孵育后应用PDGF刺激,检测Nur77,ERK表达；检测PCNA表达。结果：PDGF诱导的血管平滑肌细胞中Nur77通过ERK-MAPK信号途径表达。阿托伐他汀减少PDGF诱导的Nur77表达,抑制血管平滑肌细胞增殖。在Nur77沉默后的血管平滑肌细胞中,PDGF诱导的细胞增殖减少。结论：PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖受Nur77调控,阿托伐他汀降低Nur77表达减少血管平滑肌细胞增殖,这可能是他汀类药物抗细胞增殖的新的途径。Nur77可能是减少再狭窄的新的治疗靶点。

二、普伐他汀对激活的VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、普伐他汀对激活的VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用（论文提纲范文）

（1）基于人参皂苷Rg3与瑞舒伐他汀不同内皮保护机制的二者联用抗动脉粥样硬化作用研究（论文提纲范文）

（2）普伐他汀通过恢复受损伤自噬以减轻白细胞介素1β诱导的软骨降解及作用机制研究（论文提纲范文）

（3）辛伐他汀对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响（论文提纲范文）

（4）普伐他汀对腹主动脉瘤形成的影响和机制研究（论文提纲范文）

（5）阿托伐他汀对高血压患者内皮细胞功能和血压的影响（论文提纲范文）

（6）他汀类药物对尿蛋白、肾脏事件、非透析患者全因死亡的系统评价（论文提纲范文）

（7）Periostin在平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及阿托伐他汀的影响（论文提纲范文）

（8）蛋白激酶D在高血压主动脉重塑中的作用及分子机制研究（论文提纲范文）

（9）普伐他汀对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞syndecan-4蛋白表达的影响（论文提纲范文）

（10）Nur77调节PCI术后再狭窄血管平滑肌细胞增殖机制研究（论文提纲范文）

四、普伐他汀对激活的VSMC增殖和细胞因子合成的干预作用（论文参考文献）

• [1]基于人参皂苷Rg3与瑞舒伐他汀不同内皮保护机制的二者联用抗动脉粥样硬化作用研究[D]. 耿嘉男. 吉林大学, 2020(01)
• [2]普伐他汀通过恢复受损伤自噬以减轻白细胞介素1β诱导的软骨降解及作用机制研究[D]. 毛泽楷. 华中科技大学, 2019(03)
• [3]辛伐他汀对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响[D]. 万彩笺. 广西医科大学, 2019(08)
• [4]普伐他汀对腹主动脉瘤形成的影响和机制研究[D]. 马慧. 山东大学, 2017(08)
• [5]阿托伐他汀对高血压患者内皮细胞功能和血压的影响[D]. 马蕾. 郑州大学, 2014(02)
• [6]他汀类药物对尿蛋白、肾脏事件、非透析患者全因死亡的系统评价[D]. 张震洪. 南方医科大学, 2014(11)
• [7]Periostin在平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及阿托伐他汀的影响[D]. 李静乐. 中南大学, 2012(12)
• [8]蛋白激酶D在高血压主动脉重塑中的作用及分子机制研究[D]. 耿静. 山东大学, 2011(11)
• [9]普伐他汀对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞syndecan-4蛋白表达的影响[J]. 张宇,欧阳平,罗烨,赖文岩,许顶立. 南方医科大学学报, 2010(05)
• [10]Nur77调节PCI术后再狭窄血管平滑肌细胞增殖机制研究[D]. 王丽岳. 华中科技大学, 2010(11)