cyclin D1和Rb蛋白产物在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达

一、妊娠滋养细胞肿瘤组织中cyclin D1、Rb蛋白产物的表达（论文文献综述）

张春英^[1]（2020）在《p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系》文中研究说明目的:通过检测p57KIP2、p53、C-erbB-2三种蛋白在子宫内膜样癌（Endometrioid carcinoma,EC）组织及正常子宫内膜组织中的表达情况,探讨三者与EC发生发展的关系,为临床判断EC患者的生物学行为提供一定的临床参考价值。方法:选取存档的100例EC组织作为实验组,60例正常子宫内膜（增生期、分泌期各30例）为对照组,运用Envision法,分别检测p57KIP2、p53、C-erbB-2三种蛋白在EC组织及正常子宫内膜组织中表达情况,以及三者在EC组织不同临床病理特征（组织学分级、临床分期、肌层浸润深度、年龄大小、有无淋巴结转移）中的相关性分析。结果:1、p57KIP2、p53、C-erbB-2蛋白在EC组织和增生期、分泌期组织中的表达情况:p57KIP2蛋白在EC组织的阳性表达率（30%）低于分泌期组织中的阳性表达率（93.3%）,高于在增生期组织中的阳性表达率（3.3%）,在增生期、分泌期与EC组织中的阳性表达率三组总体比较有统计学意义（P<0.05）,在增生期与分泌期、增生期与EC、分泌期与EC组织中两两比较均有统计学意义（P≤0.017）。p53蛋白在EC组织中的阳性表达率（59%）最高,在分泌期组织中不表达,在增生期组织中阳性表达率（3.3%）;C-erbB-2蛋白在EC组织的阳性表达率（50%）最高,在增生期组织中阳性表达率（6.7%）,在分泌期组织中的阳性表达率（3.3%）最低;p53蛋白和C-erbB-2蛋白在增生期、分泌期与EC组织中的阳性表达率三组总体比较均有统计学意义（P<0.05）,两两比较仅在EC与增生期、EC与分泌期表达之间比较有意义（P≤0.017）。2、p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白在EC组织中的表达及与临床病理特征的关系:在EC组织中,p57KIP2蛋白随着组织学分级的增加,阳性表达率呈递减趋势（在组织学Ⅰ级中表达最高,组织学Ⅲ级中表达最低）,总体比较差异有统计学意义,两两比较仅在Ⅰ级和Ⅲ级、Ⅱ级和Ⅲ级之间的表达比较有统计学意义（P≤0.017）。p53、C-erbB-2蛋白均随着组织学分级的增加,其阳性表达率呈递增趋势（在组织学Ⅰ级中表达最低,在组织学Ⅲ级中表达最高）,总体比较差异有统计学意义（P<0.05）;两两比较,p53和C-erbB-2蛋白均仅在Ⅰ级和Ⅱ级、Ⅰ级和Ⅲ级之间的表达比较有意义（P≤0.017）。随着癌组织由浅肌层往深肌层浸润,p57KIP2蛋白阳性表达率逐渐减少,p53、C-erbB-2蛋白阳性表达率逐渐增加（P<0.05）。随着手术病理分期由早期向晚期进展,p57KIP2蛋白阳性表达率逐渐减少,C-erbB-2蛋白阳性表达率逐渐增加,两者的阳性表达率均有统计学意义（P<0.05）。p53蛋白的阳性表达率与手术病理分期无关。三者阳性表达率均与盆腔淋巴结转移、患者年龄大小无关（P>0.05）。3、p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白表达之间的关系:在EC组织中,p53蛋白、C-erbB-2蛋白表达呈正相关（P<0.05）;p57KIP2、p53蛋白,p57KIP2、C-erbB-2蛋白表达无相关性（P>0.05）。结论:1、在EC组织中,p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白可能与EC的发生发展有关,而p57KIP2蛋白参与的细胞周期调控失衡可能与女性激素周期性调控有关。2、在EC组织中,随着组织学分级、手术病理分期、肌层浸润深度的增加,p57KIP2蛋白的表达逐渐减少,C-erbB-2蛋白的表达则逐渐增加;p53蛋白随着组织学分级、肌层浸润深度的增加,其表达逐渐增加。p57KIP2蛋白的低表达,p53、C-erbB-2蛋白的高表达,可能预示着EC患者有更差的预后。3、在EC组织中,p53蛋白与C-erbB-2蛋白表达之间呈正相关。4、联合检测EC患者肿瘤组织中p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白的表达情况,对指导临床评估患者的生物学行为有较为积极的指导意义。

李艳伟^[2]（2020）在《Kisspeptin-10对乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的影响》文中提出奶牛乳腺是合成乳汁和分泌乳汁的场所,奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,bMECs）是合成乳汁和分泌乳汁的主要细胞。在奶牛怀孕-泌乳周期中,乳腺上皮细胞的增殖和凋亡处于不同水平的动态平衡,在这个周期中乳腺上皮细胞增殖和凋亡速率具有较大的变化,这种正常的生理变化直接影响或决定奶牛泌乳期的长短和泌乳量的高低。奶牛的泌乳量还受bMECs数量和活力的影响。同时,泌乳早期乳腺的发育也影响泌乳上升阶段的泌乳量。因此,研究乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的机制具有重要意义。Kisspeptin（Kp）是由KISS1基因编码的一类神经肽类激素,其前体可裂解成含54个氨基酸的生物活性短肽,即Kp-54。Kp-54进一步裂解可形成Kisspeptin-10（Kp-10）等短肽,Kp家族的短肽可与G蛋白偶联受体54（G protein-coupled receptor 54,GPR54）特异性结合。研究发现KISS1/GPR54系统主要参与调节细胞增殖、青春期启动、性腺激素的分泌以及生殖活动等重要的生命活动。那么,Kp-10是否可能介导GPR54及下游信号分子调节乳腺上皮细胞的增殖,进而调节乳腺发育?目前海内外尚未见与此相关的研究报道。因此,本实验首先明确Kp-10对bMECs增殖的影响,接着通过添加Kp-10抑制剂研究Kp-10影响bMECs增殖的具体机制。为了进一步接近体内环境,通过选用体外培养奶牛乳腺组织块的方法进一步验证细胞实验研究结果。在研究Kp-10影响bMECs增殖后,通过C57雌鼠在体实验研究Kp-10对青春期乳腺发育的影响。首先,选用CCK-8技术检测不同浓度Kp-10对bMECs增殖的影响,结果表明10 nM和100 nM的Kp-10能够显着促进bMECs增殖。在后续实验中,选用100 nM的Kp-10作为实验浓度。通过流式细胞仪检测细胞周期、RT-PCR检测P21基因表达、Western blot检测Cyclin D1和Cyclin D3蛋白表达。结果表明100nM的Kp-10能够促进bMECs从G1期向G2期和S期转变、抑制P21基因表达及促进Cyclin D1和Cyclin D3蛋白表达。GPR54是Kp-10的受体,通过Western blot检测GPR54蛋白表达,结果表明Kp-10促进GPR54蛋白表达。为了进一步研究Kp-10促进bMECs增殖的机制,通过选用Kp-10的抑制剂Peptide-234研究Kp-10是否通过激活GPR54促进bMECs增殖,结果表明Peptide-234抑制了Kp-10促进的bMECs增殖;进一步研究发现Kp-10能激活bMECs中蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of Rapamycin,mTOR）、细胞外信号调节激酶（Extracellular regulated-protein kinase 1/2,ERK1/2）信号通路。分别选用AKT、mTOR、ERK1/2抑制剂处理后均能抑制Kp-10促进bMECs增殖的作用,说明Kp-10能够通过激活AKT、mTOR、ERK1/2信号通路促进bMECs增殖。同时,Kp-10能够激活视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma,Rb）、促进E2F1的蛋白表达、减少Rb和E2F1形成的复合物以及促进E2F1靶基因的表达。为了进一步接近体内环境,我们通过培养奶牛乳腺组织块来验证细胞实验研究结果,结果表明Kp-10能够激活奶牛乳腺组织块AKT、mTOR和ERK1/2信号通路,此外Kp-10能够促进乳腺组织块中Cyclin D1、Cyclin D3和增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）表达,抑制GPR54后抑制了Kp-10的上述作用。接着,分别选用AKT、mTOR和ERK1/2抑制剂处理后能够抑制Kp-10促进的乳腺组织块中Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA蛋白表达。最后,我们通过对出生30 d的C57雌鼠腹腔注射100μL浓度为6μM的Kp-10,每2 d注射一次、连续注射10次。实验鼠21 d后断颈处死,取乳腺进行全组织染色,结果表明Kp-10能够促进乳腺导管分支形成。Western blot检测Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA蛋白表达,结果表明Kp-10能够促进鼠乳腺Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA蛋白表达。以上研究结果表明Kp-10能够促进乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育。

王博^[3]（2020）在《活性氧介导的遗传毒性应激在1-硝基芘诱导胎盘滋养细胞周期阻滞中的作用》文中指出目的1-硝基芘（1-nitropyrene,1-NP）是硝基多环芳烃的代表之一,也是大气细颗粒物（fine particulate matter,PM2.5）的主要组分之一,其主要来源于柴油机尾气。早期研究发现1-NP是一种致突变和致癌物。国际癌症研究署（International Agency of Research on Cancer,IARC）在2012年将1-NP归为ⅡA类致癌物。越来越多的研究发现1-NP是一种发育毒物。课题组近期研究发现母体孕期1-NP暴露损伤成年期子代小鼠的认知功能。更重要的是母体孕期1-NP暴露可诱导胎鼠宫内生长受限（intrauterine growth restriction,IUGR）。然而1-NP诱导胎鼠IUGR的机制还不清楚。胎盘是维持胎儿发育的重要器官。胎盘重量的降低是诱导IUGR的主要原因之一。课题组前期研究发现孕期1-NP暴露诱导小鼠胎盘细胞增殖阻滞。一般的,在受到外源性和内源性生长因子的刺激后,细胞在周期素依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent kinases,CDKs）和细胞周期素（Cyclins）的协同作用下促进细胞增殖。在外界不利因素的刺激诱导细胞DNA损伤时,细胞中的遗传毒性应激信号被激活,抑制CDK/Cyclin复合物的活性,诱导细胞周期阻滞,进而抑制细胞增殖。活性氧（reactive oxygen species,ROS）是公认的DNA断裂剂,可诱导DNA双链断裂。众所周知,1-NP诱导细胞产生过量的ROS。然而,孕期1-NP暴露是否激活胎盘滋养细胞遗传毒性应激以及细胞遗传毒性应激在1-NP诱导胎盘细胞增殖阻滞中的作用还需要进一步研究。本研究的目的是探讨ROS介导的遗传毒性应激在1-NP所致胎盘细胞增殖阻滞和胎儿IUGR中的作用。方法本研究分为体外细胞实验和体内动物实验两部分。体外细胞实验由五个独立的实验组成。HTR8/SVneo细胞在不同的细胞实验中分别在不同时点（12,18,24 h）给予不同剂量的1-NP（0,1,5,10μM）孵育。实验一、探讨1-NP对胎盘滋养细胞凋亡和程序性坏死的影响。Annexin V/PI染色检测细胞凋亡和程序性坏死,同时检测程序性坏死蛋白RIP1、凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3和Cleaved-PARP的表达水平。实验二、探讨1-NP对胎盘滋养细胞增殖的影响。CCK8实验和实时细胞分析仪DP系统（Real-Time Cell-Analyzer DP system,RTCA）分别检测细胞活力和细胞增殖指数,同时检测细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达水平和阳性细胞百分比。实验三、探讨1-NP对胎盘滋养细胞周期的影响。流式细胞术检测细胞周期,同时检测细胞周期相关蛋白的表达水平和磷酸化水平。实验四、探讨1-NP对胎盘滋养细胞遗传毒性应激的影响。彗星实验检测DNA损伤,同时检测遗传毒性应激启动蛋白,即共济失调毛细血管扩张激酶（The protein kinase ataxia-telangiectasia mutated,ATM）的磷酸化水平及其下游靶分子的磷酸化水平和蛋白表达水平。实验五、探讨ROS在1-NP诱导的胎盘滋养细胞遗传毒性应激和细胞周期阻滞中的作用。DCFH-DA检测HTR8/SVneo细胞中ROS的水平。自由基清除剂N-叔丁基-α-苯基硝酮（phenyl-N-t-butylnitrone,PBN）预处理,检测1-NP孵育的HTR8/SVneo细胞中遗传毒性应激启动蛋白ATM的磷酸化水平、细胞周期相关蛋白的表达水平和磷酸化水平。动物实验中孕鼠给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）预处理,测量1-NP暴露的孕鼠胎盘重量、厚度、血窦面积,检测细胞增殖核抗原PCNA的表达水平,同时称量胎鼠的体重、测量胎鼠身长,探讨抗氧化剂NAC对1-NP诱导的小鼠胎盘细胞增殖阻滞和胎鼠IUGR的影响。结果体外细胞实验发现,1-NP不引起胎盘滋养细胞凋亡和和程序性坏死。细胞活力和细胞增殖指数在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着降低。细胞增殖核抗原PCNA的表达水平显着降低。1-NP孵育的胎盘滋养细胞中超过90%的细胞停滞在G0/G1或者G2/M期。同时,G2/M期相关蛋白CDK1和Cyclin B的表达水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着降低。G0/G1期相关蛋白CDK2的蛋白表达水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着降低。CDK2下游靶分子视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein,Rb）的磷酸化水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着降低。进一步研究发现1-NP诱导胎盘滋养细胞DNA损伤,DNA双链断裂标志蛋白γ-H2AX的磷酸化水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着升高。遗传毒性应激启动蛋白ATM及其下游靶分子（checkpoint kinase 2,Chk2）的磷酸化水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着升高。相反,Chk2下游靶分子细胞分裂周期蛋白25 A（cell division cycle 25A,Cdc25A）的蛋白表达水平在1-NP孵育的胎盘滋养细胞中显着降低。同时,1-NP显着升高胎盘滋养细胞胞内ROS水平。自由基清除剂PBN显着降低1-NP孵育的胎盘滋养细胞中遗传毒性应激启动蛋白ATM的磷酸化水平,升高G0/G1期相关蛋白Rb的磷酸化水平和G2/M期相关蛋白Cyclin B的蛋白表达水平,升高细胞增殖核抗原PCNA的表达水平。体内动物实验发现抗氧化剂NAC预处理部分恢复1-NP诱导的孕鼠胎盘重量和胎盘血窦面积的降低,NAC预处理部分恢复1-NP诱导的小鼠胎盘PCNA的表达水平,保护1-NP诱导的胎鼠IUGR。结论本研究发现1-NP诱导胎盘滋养细胞周期阻滞和遗传毒性应激。体外研究表明ROS介导1-NP诱导的胎盘滋养细胞周期阻滞和遗传毒性应激。体内研究表明抗氧化剂NAC减轻1-NP诱导的小鼠胎盘增殖抑制和胎鼠宫内生长受限。本研究为ROS介导的遗传毒性应激诱导小鼠胎盘增殖抑制和胎鼠宫内生长受限提供了实验室证据。

方媛^[4]（2020）在《STAT3信号通路通过下调CyclinD1、VEGF参与早期自然流产发病的机制研究》文中提出目的:检测STAT3信号通路及其下游基因Cyclin D1、VEGF等,以及血管生成的重要受体蛋白VEGFR1在正常人群、早期自然流产人群及早期复发性流产人群的流产组织（绒毛及蜕膜）中的表达水平,探索STAT3通路可能参与的自然流产的发病机制。方法:选择2017年12月2018年8月于安徽医科大学第一附属医院妇产科人工流产手术室行无痛人工流产的患者80例,其中因社会性因素自愿行人工流产的30名健康妇女为对照组,30名因胚胎停育或自然流产的患者为早期自然流产组（EUSA组）,另20名患者因与同一性伴侣发生过两次或以上的自然流产被定义为早期复发性流产组（EURSA组）。三组人群均为早期妊娠（妊娠6-9周）行无痛人流术,收集三组患者的绒毛组织及蜕膜组织。使用苏木精-伊红染色法观察三组绒毛组织在病理学上的表现差异。应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法、实时定量聚合酶链式反应等方法分别检测三组绒毛组织和蜕膜组织中磷酸化STAT3（p-STAT3）、Cyclin D1、VEGF及VEGFR1的表达差异。选择人绒毛膜外滋养细胞系（HTR-8/SVneo）建立绒毛外滋养细胞模型进行细胞部分的实验。使用不同浓度的STAT3信号通路抑制剂AG490（0,6.25,12.5,25,50,100μM）分别处理HTR-8/SVneo细胞24小时,48小时和72小时。倒置光学显微镜下拍摄不同浓度抑制剂作用48小时下的细胞生长状态,并使用蛋白质印迹法（Western blot）、实时定量聚合酶链式反应（q-PCR）分别检测梯度浓度抑制剂培养环境下的p-STAT3、Cyclin D1、VEGF的表达水平。使用CCK-8试剂盒检测梯度浓度抑制剂作用48小时后细胞的增殖情况,并且通过流式细胞术分析不同浓度药物对STAT3通路抑制的情况下,绒毛滋养细胞的凋亡情况。另外使用蛋白质印记法检测不同程度STAT3通路抑制作用下绒毛滋养细胞VEGFR1的表达情况,探索抑制STAT3通路后滋养层细胞血管生成能力的变化。结果:1.对照组与两组实验组（EUSA组和EURSA组）患者一般情况的比较三组患者在年龄、BMI、孕次、产次、停经时间上无统计学差异（p>0.05）。2.三组绒毛组织HE染色的病理学差异与对照组相比,EUSA组和EURSA组的绒毛组织经HE染色可观察到滋养细胞数量减少,部分细胞呈现核固缩现象,凋亡数量增加。3.Cyclin D1、VEGF及VEGFR1在三组绒毛组织中的表达免疫组织化学染色显示Cyclin D1、VEGF及VEGFR1在正常对照组的绒毛组织中染色明显强于EUSA组和EURSA组;同时在蛋白水平（Western blot的结果）和m RNA水平（q-PCR结果）表明Cyclin D1、VEGF及VEGFR1在EUSA组和EURSA组的蜕膜显着低于对照组（p<0.05）;4.Cyclin D1、VEGF及VEGFR1在三组蜕膜组织中的表达通过免疫组织化学染色、Western blot、q-PCR的实验结果,显示Cyclin D1、VEGF及VEGFR1在正常对照组的蜕膜组织中表达明显高于EUSA组和EURSA组（p<0.05）。5.STAT3的激活状态,即p-STAT3在三组绒毛及蜕膜中的表达免疫组织化学染色显示p-STAT3在正常对照组的绒毛组织和蜕膜组织中的特异性染色明显强于EUSA组和EURSA组。当每个组中的STAT3大致相同时,p-STAT3的蛋白水平在EUSA组和EURSA组（绒毛和蜕膜组织）中均呈下降趋势。6.抑制STAT3通路的激活对滋养细胞增殖的影响在使用梯度浓度抑制剂（0,6.25,12.5,25,50,100μM）AG490培养HTR-8/SVneo细胞48小时后,STAT3的磷酸化被显着抑制（Western blot结果）,倒置荧光显微镜下拍摄添加不同浓度抑制剂作用下滋养细胞的生长情况,随抑制剂浓度的增加,滋养细胞增殖减少,凋亡数量增多。CCK-8实验及流式细胞术检测结果显示,抑制STAT3通路的激活,使滋养细胞整体增殖受限,凋亡加剧。7.随着STAT3的激活被梯度抑制,Western blot实验结果表明Cyclin D1和VEGF的表达相应降低,且具有剂量依赖性。8.Western blot结果表明血管生长因子相关受体VEGFR1的表达在STAT3通路被抑制后,呈现下降趋势,具有剂量依赖性。结论:这项研究的结果表明,不明原因自然流产患者的绒毛组织和蜕膜组织中STAT3通路受到明显抑制,STAT3的下游调控蛋白Cyclin D1及VEGF表达降低,导致滋养层细胞生长受限,凋亡增加,且血管生成的重要受体VEGFR1的水平下降,进而导致绒毛滋养细胞外血管生成受损,影响早期胚胎的生长和发育,从而引发流产,这可能为部分不明原因的自然流产患者的临床治疗提供一定的指导作用。

朱英雪^[5]（2019）在《鸢尾素对上皮性卵巢癌细胞周期调控作用的研究》文中认为目的:鸢尾素（Irisin）是一种与能量代谢、胰岛素抵抗等相关的细胞因子,在人体中广泛表达且与多种肿瘤的病理过程等密切相关,但目前有关鸢尾素对上皮性卵巢癌细胞生物学作用的相关研究甚少,本研究旨在明确鸢尾素对上皮性卵巢癌细胞的生物学作用及细胞周期的影响。方法:用不同浓度梯度的鸢尾素处理上皮性卵巢癌细胞株A2780,CCK-8实验检测鸢尾素对A2780细胞的生长增殖的影响,流式细胞周期检测实验检测鸢尾素对A2780细胞周期的影响,Western Blot检测细胞周期相关蛋白如细胞周期蛋白D1的表达。用相关统计学软件进行处理分析,得出相关结论。结果:1.CCk-8实验:在鸢尾素浓度为0.625、1.25、2.5、5、10nmol/L的实验组中,A2780细胞的A值分别为0.428±0.045、0.442±0.048、0.472±0.031、0.469±0.042、0.468±0.027,与对照组（即鸢尾素浓度为0）的A值0.381±0.030相比,P均<0.01,差异具有统计学意义。选取鸢尾素浓度为2.5nmol/L做A2780细胞的时间曲线（0h、12h、24h、36h、48h）,A值分别为0.144±0.005、1.806±0.053、2.034±0.057、2.258±0.059、2.250±0.085,对照组（即鸢尾素浓度为0）的相同时间的A值分别为0.141±0.007、1.374±0.043、1.610±0.054、1.735±0.098、1.777±0.097,在12h、24h、36h、48h的实验组与对照组相比,P均<0.01,差异具有统计学意义。2.流式细胞周期检测实验:在未加入鸢尾素的A2780细胞中,约（59.3±5）%细胞在G0-G1期,约（18.2±4）%、（22.5±6）%的细胞分别聚集在细胞周期中的S、G2-M期;在加入2.5nmol/L鸢尾素培养的A2780细胞中,约（47.2±6）%细胞在G0-G1期,约（26.7±7）%、（26.1±4）%的细胞分别聚集在细胞周期中的S、G2-M期,与对照组分别相比,P均<0.01,差异具有统计学意义。3.Western Blot检测细胞周期相关蛋白—细胞周期蛋白D1的表达,实验组相较对照组,细胞周期蛋白D1的相对表达量为（1.340±0.024）,高于对照组的1,t=19.63,P<0.0001,差异具有统计学意义,即实验组细胞周期蛋白D1的表达明显增加。结论:1.鸢尾素促进上皮性卵巢癌A2780细胞的生长增殖,并呈时间依赖性。2.鸢尾素促进上皮性卵巢癌A2780细胞的细胞周期进程加快,促使细胞从G1期进入S期。3.鸢尾素促进上皮性卵巢癌A2780细胞中细胞周期蛋白D1的表达。

易婷^[6]（2019）在《苯并芘暴露促进小鼠蜕膜化过程中基质细胞增殖并抑制分化》文中研究说明目的:苯并芘（BaP）是一种重要的环境污染物,具有明显的生殖毒性。课题组前期的研究发现,孕早期BaP暴露损害小鼠子宫内膜形态并诱导蜕膜化缺陷。蜕膜化是子宫内膜基质细胞增殖分化形成大的上皮样蜕膜细胞的过程,为胚胎生长和胎盘形成提供空间。蜕膜化的正常进行与细胞周期调节密切相关,但关于BaP对早孕小鼠基质细胞蜕膜化过程中细胞周期的影响尚不清楚。本研究探讨了BaP对蜕膜化过程中基质细胞增殖分化的影响,为进一步研究BaP的生殖毒性提供实验依据。方法:前期实验结果证明0.2mg/kg/d BaP染毒影响了早孕小鼠子宫内膜容受性及蜕膜化过程,导致胚胎着床数下降,因此本实验采用0.2mg/kg/d BaP作为染毒剂量。首先建立BaP染毒孕鼠模型,从妊娠第1天（D1）至第8天（D8）,每日给予灌胃处理,分别于孕6、7、8天收取子宫材料,进行以下实验:（1）HE染色观察蜕膜组织形态,Western blot检测蜕膜化标志物BMP2的表达。（2）免疫组化,Real-time PCR和Western blot的方法检测蜕膜组织的增殖（Ki67和PCNA）,分化（Prl8a2和Prl3c1）以及多倍体化相关分子（CyclinD3,CDK6和p21）的表达。（3）流式细胞术检测蜕膜组织的DNA含量水平。（4）Western blot,免疫组化的方法检测G1/S转换的相关周期蛋白以及E2F/Rb信号通路相关因子的表达。（5）Western blot,Real-time PCR检测蜕膜组织G2/M期相关周期蛋白以及ATM/ATR激酶相关因子的表达。建立体外人工诱导蜕膜化基质细胞模型:通过分离小鼠基质细胞,免疫荧光检测基质细胞Vimentin的表达（鉴定基质细胞纯度）,体外诱导蜕膜化,同时建立BaP染毒细胞模型,进行以下实验:（1）Real-time PCR的方法检测蜕膜细胞分化标志分子Prl8a2和Prl3c1的表达;Western blot检测增殖标志物PCNA的表达。（2）Western blot检测G1/S和G2/M相关细胞周期因子的表达。（3）流式细胞术检测蜕膜细胞的DNA含量。结果:（1）BaP暴露导致蜕膜组织BMP2表达下调,4N和>4N细胞数量减少,损害了小鼠蜕膜化过程。（2）BaP暴露导致增殖标志分子Ki67和PCNA上调,分化标志分子Prl8a2和Prl3c1下调,引起蜕膜化过程基质细胞的增殖分化失衡。（3）BaP处理下调CyclinD3,CDK6和p21,影响蜕膜多倍体化相关因子的表达。（4）BaP处理上调CyclinA（E）/CDK2,CyclinD1/CDK4,和E2F/Rb信号通路相关分子的表达,促进G1/S进程,导致细胞增殖。（5）BaP处理上调CyclinB1/CDK1和pHH3的表达,抑制ATM/ATR激酶的表达,促进G2/M进程。（6）体外诱导基质细胞蜕膜化实验中,证实了基质细胞分离成功以及蜕膜化诱导成功;在BaP处理后Prl8a2和Prl3c1下调;与对照组相比,细胞周期蛋白改变与体内实验基本一致,并且流式细胞术检测结果显示BaP处理组4N和>4N细胞数量下降。结论:由上述的实验结果得出结论:苯并芘暴露促进蜕膜化过程中基质细胞增殖,抑制细胞分化,减少蜕膜多倍体形成,损害小鼠基质细胞蜕膜化过程,提示基质细胞增殖分化平衡失调可能是BaP导致蜕膜化缺陷的重要机制。

李雪琨^[7]（2019）在《HPV E2对子宫颈癌SiHa细胞增殖分化相关基因表达调控的研究》文中进行了进一步梳理子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于乳腺癌,居女性恶性肿瘤第二位,我国是子宫颈癌高发区。大量研究发现人乳头瘤病毒感染是宫颈癌发生发展的主要原因。高危型HPV病毒持续感染宫颈基底细胞,HPV基因组整合到宿主染色体中,导致HPV E6、E7高表达,HPV E2表达降低或缺失,然而这一HPV癌相关基因异常表达的分子机制尚不明确。本课题选取子宫颈鳞状细胞癌、不同病变级别的宫颈癌前病变组织及子宫颈鳞癌SiHa、Caski细胞系为研究对象,利用QT-PCR、Western Blot、基因转染及体外动物实验,初步探讨了HPV E2与E6、E7表达的相互关系及对宫颈癌细胞增殖分化相关基因的影响。首先收集子宫颈鳞癌（Squamous cell carcinoma,SCC）及宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）石蜡组织105例,其中SCC 35例,CIN 70例（CIN I 26例、CINⅡ23例、CINⅢ21例）,利用RT-PCR检测子宫颈鳞癌及癌前病变组织中E2、E6、E7 mRNA的表达水平。结果显示,E6、E7 mRNA随着CIN级别的升高其表达量也逐级升高,其中CINⅢ级表达水平最高,同时子宫颈鳞癌组织中E6、E7 mRNA同样呈现出高表达但与CINⅢ无明显差异;E2基因随着CIN级别的升高表达量逐渐降低,在CINⅢ与子宫颈鳞癌组织中其表达量最低且表达水平无明显差异。设计HPV16 E2特异性引物,RT-PCR扩增E2基因,构建E2基因过表达质粒pcDNA3.1-HPV16E2,采用脂质体法将HPV16 E2基因过表达质粒及对照空质粒瞬时转染至SiHa细胞,实时荧光定量PCR法、Western blotting法分别检测两组SiHa细胞中E2、E6、E7基因及增殖分化相关基因Ki67、p16、CyclinD1、caspase14 mRNA和蛋白表达水平。设计合成E2基因特异性siRNA干扰质粒,将干扰质粒及空质粒载体经脂质体介导分别转染至Caski细胞,实时荧光定量PCR法、Western blotting法分别检测两组Caski细胞中E2基因沉默效率、E6、E7基因及增殖周期分化相关基因Ki67、p16、CyclinD1、caspase14mRNA和蛋白表达水平。结果显示,在过表达E2基因的SiHa细胞中E6、E7基因表达量在mRNA和蛋白水平上均有明显下降,细胞周期与分化相关基因CyclinD1、caspase14表达水平升高,p16、Ki67表达水平明显下降;在沉默E2的Caski细胞中,E6、E7基因表达量在mRNA和蛋白水平上均有明显升高,细胞周期与分化相关基因CyclinD1、caspase14表达水平下降,p16、Ki67表达水平明显升高。为了进一步研究E2基因对子宫颈鳞状细胞癌增殖分化的影响,将HPV16 E2基因过表达质粒稳定转染至SiHa细胞,经G418筛选、鉴定,获得E2基因稳定过表达细胞株SiHa-E2,将空载组SiHa细胞肿瘤悬液与E2基因稳定过表达SiHa细胞肿瘤悬液分别注射在雌性BALB/c裸鼠右侧腋下,裸鼠接种肿瘤细胞后,选择每周同一时间观察裸鼠生长、饮食及接种部位肿瘤生长情况,游标卡尺测量并记录移植瘤瘤体大小（长a,宽b）,计算肿瘤体积V=ab2/2,绘制裸鼠肿瘤生长曲线,第5周处死裸鼠剥离瘤体组织拍照称重。结果发现动物模型构建成功,成瘤率100%,接种E2稳定过表达SiHa细胞和空质粒载体SiHa细胞后,肿瘤呈持续生长状态且实验组裸鼠皮下移植瘤的生长速度较对照组明显减慢,瘤体质量较对照组明显减轻。本课题初步探讨了HPV16 E2基因影响子宫颈鳞癌增殖分化的分子机制,研究表明E2基因通过调控E6、E7基因表达水平抑制子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖,促进细胞分化;E2基因表达缺失是子宫颈鳞癌及高级别上皮内瘤变的分子特征之一,这为临床子宫颈鳞癌预防和治疗提供了新的可能靶点。

杨金娣^[8]（2016）在《新基因F10参与绒癌细胞系JAR增殖和细胞周期调节的机制研究》文中研究说明绒癌（choriocarcinoma,CCA）是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤,恶性程度极高,发生转移早而广泛。F10基因（GenBank号:AB196290）是本研究团队从葡萄胎与正常早孕绒毛的差异cDNA文库中筛选出的与绒癌发生及侵袭行为相关的新基因[1]。F10基因对绒癌细胞增殖、细胞周期的影响尚未完全清楚。前期研究通过构建RNAi慢病毒载体及真核质粒表达载体,将设计构建的重组体转染到绒癌细胞,经筛选及包装后获得F10基因稳定沉默及过表达的绒癌细胞系JAR[2],采用CCK-8法、流式细胞仪、Western-Blotting、免疫荧光细胞化学技术等方法,探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系,对新基因F10参与绒癌细胞系JAR增殖和细胞周期调节的机制进行初步研究。一、研究内容和研究方法我们选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细胞系JAR,以未处理组绒癌细胞为对照组,采用CCK8法绘制细胞生长曲线观察F10沉默及过表达对绒癌细胞生长的影响,同时使用流式细胞仪检测F10基因对细胞周期的影响,进一步通过Western-Blot检测绒癌细胞相关周期蛋白比如:cyclinA2、cyclinB1、cyclin C、cyclinD1、cyclinE、CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、P16、P21以及相关细胞周期调节因子:增殖细胞核抗原（PCNA）、黏着斑激酶（FAK）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4（PAK4）的表达水平差异,并用免疫荧光细胞化学技术定位及定量上述周期的蛋白的表达差异。二、结果1.生长曲线反映三组JAR细胞在第一天即开始出现增殖,均呈指数生长,F10过表达组增殖速度最快,未处理组次之,F10沉默组最慢,因此,F10基因的沉默减缓细胞的生长速度,对绒癌细胞的增殖有抑制作用,而F10基因的过表达对绒癌细胞的生长有促进作用。2.流式细胞仪检测结果显示,三组JAR细胞中,F10沉默组出现了明显凋亡峰,F10过表达组细胞的G2/M期细胞比例（41.37%）较F10沉默组（17.06%）升高2.4倍,未处理组（20.77%）较F10沉默组升高1.2倍,二组相比差异有显着性差异（p<0.05）,说明F10沉默组、未处理组、F10过表达组的G2/M期细胞依次增多,说明3组细胞增殖周期依次加快。提示F10基因的沉默可能增加绒癌细胞的凋亡,而F10基因过表达有促进细胞增殖的作用。3.三组绒癌细胞系JAR的周期蛋白表达水平差异。3.1细胞周期正性调节因子:Western blot检测结果示:与未处理对照组相比,F10 基因沉默组 cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK3、CDK5、CDK6,CDK8、CDK9蛋白表达水平显着低于未处理对照组（p<0.001）,F10过表达组cyclinA2、B1、C、D1、E和CDK6、7、8、9蛋白表达水平显着增高（p<0.001）;免疫荧光细胞技术检测结果示:与未处理对照组比较,F10基因沉默组cyclinB1、D1、E 和 CDK1、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK8、CDK9 蛋白表达水平显着低于未处理对照组（p<0.05）,F10基因过表达组cyclinB1、D1、E和CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9 蛋白表达水平显着高于未处理对照组（p<0.05）。3.2细胞周期负性调节因子:Western blot检测结果示:F10基因沉默组、未处理组及过表达组三组细胞P16蛋白表达阳性,且呈上升趋势,沉默组较未处理组、过表达组较未处理组均有统计学差异（p<0.05）,免疫荧光细胞技术检测P16蛋白表达结果于Western blot检测结果一致。然而,结合Western blot检测结果与免疫荧光细胞技术检测结果示三组细胞P21的蛋白表达差异并不显着。3.3丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4（PAK4）:Western blot检测结果示F10基因沉默组PAK4蛋白表达水平显着低于未处理对照组（p<0.05）,F10基因过表达组PAK4蛋白表达水平显着高于未处理对照组（p<0.05）,与免疫荧光细胞技术检测结果一致。3.4增殖细胞核抗原（PCNA）:Western blot检测结果示三组细胞的增殖细胞核抗原PCNA蛋白水平表达无差异,而免疫荧光细胞技术检测结果示:F10基因沉默组PCNA达水平显着低于未处理对照组（p<0.05）,F10基因过表达组PCNA蛋白表达水平显着高于未处理对照组（p<0.05）。3.5黏着斑激酶（FAK）:Western blot检测结果示F10基因沉默组及过表达组FAK蛋白表达水平均显着高于未处理对照组（p<0.05）,以F10沉默组与未处理组的差异为明显,免疫荧光细胞技术检测FAK蛋白表达结果示F10基因沉默组FAK蛋白表达水平均显着高于未处理对照组（p<0.05）;而F10过表达组与对照组间无明显差异。3.6绒癌细胞中细胞周期蛋白调节因子的定位:在绒癌细胞中,CyclinA2、D1和CDK7蛋白表达完全在肿瘤细胞核中;cyclinE、CDK1、CDK2、CDK6、CDK8、CDK9、P21蛋白主要表达在细胞核,少量在胞浆中;cyclinB1、C和CDK3、CDK4、CDK5、P16、PAK4、FAK蛋白主要定位于细胞质中,PCNA在细胞核和细胞质中均有表达。三、结论1.通过CCK8法绘制生长曲线,发现F10基因沉默后,绒癌细胞系JAR出现了生长速度减缓,而F10基因过表达使绒癌细胞生长速度加快,提示F10基因促进绒癌细胞生长,从而推测F10基因可能参与其增殖过程。2.流式细胞仪检测细胞周期实验显示F10沉默组、F10未处理组、F10过表达组的G2/M期细胞依次增多,3组细胞周期依次加快,提示F10基因可能通过影响细胞周期,从而干预绒癌细胞增殖。3.Western blot及免疫荧光细胞技术证实了 F10基因通过调节部分细胞周期蛋白表达,加快细胞周期进程,促进绒癌细胞增殖。

谷向向^[9]（2016）在《补肾法、疏肝法对IVF-ET胚胎着床反复失败患者子宫内膜容受性的影响机制及其比较》文中进行了进一步梳理目的:本研究通过观察补肾法、疏肝法对IVF-ET胚胎着床反复失败患者治疗前后子宫内膜容受性的影响,以探讨两法对改善子宫内膜容受性,提高胚胎种植率及临床妊娠率的作用机制及异同比较。方法:将符合纳入标准及排除标准的IVF-ET胚胎着床失败患者117例设为实验组。根据中医辨证结果为肾虚证和肝郁证的不同分为补肾组和疏肝组,其中补肾组62例（增殖期35例、分泌期27例）、疏肝组55例（增殖期33例、分泌期22例）。另设因输卵管因素行IVF-ET预备周期且生殖激素及子宫内膜活检均正常者58例为对照组（增殖期32例、分泌期26例）。补肾组、疏肝组患者分别于末次移植失败后月经第5天服用补肾助孕方、逍遥丸3个月经周期,中药治疗3个周期结束后行IVF-ET常规方案或胚胎移植。补肾组、疏肝组患者于中药治疗前后增殖期（月经干净第3-5天）及分泌期（超声检测排卵后6-8天）抽取静脉血3ml,分离血清置-20℃冰箱保存备检。补肾组、疏肝组患者于中药治疗前,在其末次移植失败后行宫腔镜探查术或诊断性刮宫术（取内膜时间同取静脉血日）,收集子宫内膜组织标本,中药治疗3个周期结束后,收集相对应患者增殖期或分泌期子宫内膜组织。对照组取静脉血、行宫腔镜或诊刮收集子宫内膜时间、方法同实验组。中药治疗结束后及对照组采集标本的下一周期行IVF-ET治疗或胚胎移植。所取各组新鲜内膜组织,先用生理盐水将其表面上附着的血液、粘液等清洗干净,然后将进行HE染色及免疫组织化学法的组织固定于4%多聚甲醛固定液中,将用于扫描电镜观察的组织固定于2.5%戊二醛固定液中,以上内膜组织均保存于4℃冰箱,待用;余下全部组织放入液氮中冷冻,24小时之后再将其移至-80℃冰箱内保存,用于ELISA酶联法和实时荧光定量PCR的检测。采用全自动化学发光法检测血清中E2、P的含量;采用he染色法观察子宫内膜不同分期的组织形态;采用免疫组织化学法检测子宫内膜组织中er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、cyclind1、mmp-9、enos的蛋白表达及定位;采用扫描电镜观察种植窗期子宫内膜胞饮突;采用elisa酶联法检测子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、cyclind1、mmp-9、enos的蛋白表达;采用实时荧光定量pcr检测子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、cyclind1、mmp-9、enosmrna的表达。结果:1各组临床妊娠率及宫内妊娠率的比较补肾增殖期治疗组妊娠17例,妊娠率为48.6%,宫内妊娠率为42.9%;补肾分泌期治疗组妊娠15例,妊娠率为55.6%,宫内妊娠率为51.9%。疏肝增殖期治疗组妊娠15例,妊娠率为45.5%,宫内妊娠率为42.4%;疏肝分泌期治疗组妊娠11例,妊娠率为50.0%,宫内妊娠率为50.0%。增殖期对照组妊娠13例,妊娠率为40.6%,宫内妊娠率为37.5%;分泌期对照组妊娠10例,妊娠率为38.5%,宫内妊娠率为30.8%。与增殖期对照组和分泌期对照组比较,补肾增殖期治疗组、补肾分泌期治疗组、疏肝增殖期治疗组及疏肝分泌期治疗组临床妊娠率和宫内妊娠率均明显升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）;补肾增殖期治疗组高于疏肝增殖期治疗组临床妊娠率,且差异有统计学意义（p<0.05）;补肾分泌期治疗组高于补肾增殖期治疗组及疏肝分泌期治疗组临床妊娠率和宫内妊娠率,且差异均有统计学意义（p<0.05）;疏肝分泌期治疗组高于疏肝增殖期治疗组临床妊娠率和宫内妊娠率,但差异无统计学意义（p>0.05）;补肾增殖期治疗组高于疏肝增殖期治疗组宫内妊娠率,但差异无统计学意义（p>0.05）。2各组血清中e2、p的含量比较与增殖期对照组、补肾增殖期治疗前组及疏肝增殖期治疗前组比较,补肾增殖期治疗后组及疏肝增殖期治疗后组血清中e2、p含量均升高,且差异无统计学意义（p>0.05）;补肾增殖期治疗后组血清中e2、p含量高于疏肝增殖期治疗后组,且差异无统计学意义（p>0.05）。与增殖期对照组比较,补肾增殖期治疗前组及疏肝增殖期治疗前组血清中e2、p含量,差异均无统计学意义（p>0.05）。与分泌期对照组、补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组比较,补肾分泌期治疗后组及疏肝分泌期治疗后组血清中e2、p含量均升高,且差异有统计学意义（p<0.05）;补肾分泌期治疗后组血清中e2、p含量高于疏肝分泌期治疗后组,且差异有统计学意义（p<0.05）。与分泌期对照组比较,补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组血清中e2、p含量,差异均无统计学意义（p>0.05）。3患者子宫内膜组织苏木精-伊红he染色结果3.1增殖期治疗前（补肾组增殖期治疗前、疏肝组增殖期治疗前）及增殖期对照组he染色结果显示:腺体组织较少,大多短小,且以椭圆形为主,偶见细长弯曲状,腺上皮低柱状,细胞核小,核分裂较少,几乎无分泌现象,间质细胞排列紧密。3.2分泌期治疗前（补肾组分泌期治疗前、疏肝组分泌期治疗前）及分泌期对照组he染色结果显示:腺体组织较多,且多成弯曲扩张状,腺上皮细胞核下空泡出现,有分泌现象,腺体内覆盖单层柱状上皮细胞,细胞核较大,色浅,间质较疏松。3.3增殖期治疗后（补肾组增殖期治疗后、疏肝组增殖期治疗后）he染色结果显示:腺体组织较多,大多数呈细长弯曲状,偶见短小者,腺上皮呈假复层,且上皮细胞有堆积倾向,细胞核分裂较多,有分泌现象,间质细胞排列较为疏松、水肿。3.4分泌期治疗后（补肾组分泌期治疗后、疏肝组分泌期治疗后）he染色结果显示:腺体组织多,且显着弯曲扩张,腺上皮细胞呈立方形,核位于中央,核大,色浅,胞浆透明,分泌现象明显,间质疏松、水肿明显。4扫描电镜观察患者子宫内膜种植窗期胞饮突结果4.1补肾分泌期治疗前组:大量微绒毛出现水肿现象,且向宫腔内突出,可见少量短小的微绒毛融合,细胞顶端出现表面光滑而细长的质膜突起（发育中的胞饮突）。4.2补肾分泌期治疗后组:几乎看不到微绒毛,可见大量表面光滑的质膜突起,大小一致,呈“花样”肿胀（充分发育的胞饮突）。4.3疏肝分泌期治疗前组:大量短小的微绒毛,相互融合,整个细胞的顶端出现光滑而细长的质膜突起（发育中的胞饮突）;偶见呈鹅卵石外观的质膜突起,状似蘑菇（充分发育的胞饮突）。4.4疏肝分泌期治疗后组:微绒毛数量减少,出现大量内膜表面质膜突起,突起表面光滑,形如蘑菇（充分发育的胞饮突）。4.5分泌期对照组:质膜突起数量少,且出现皱褶现象,有的质膜突起顶端覆盖微绒毛,细胞体积增大（衰退期的胞饮突）;几乎看不到“花样”肿胀的质膜突起。5各组免疫组织化学法检测患者子宫内膜组织er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos的蛋白表达结果5.1免疫组织化学法检测患者子宫内膜组织er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达部位er、pr在子宫内膜腔上皮、腺上皮细胞核及间质细胞核中均有表达,其中er主要在腺上皮细胞核中表达,且增殖期表达明显高于分泌期（p<0.05）,而pr则主要在间质细胞核中表达,且分泌期表达显着高于增殖期（p<0.05）;vegf、vegfr-2在子宫内膜腔上皮、腺上皮细胞、间质细胞及血管内皮细胞中均有表达,定位于细胞浆,其中以腺上皮细胞浆表达最为明显,表达强度自增殖期至分泌期略下降;pcna在子宫内膜腺上皮及间质细胞核内表达,且分泌期表达高于增殖期（p<0.05）;mmp-9在子宫内膜的腔上皮及腺上皮细胞浆中均有表达,而在腺上皮表达高于腔上皮,间质细胞浆中也有少量表达,且分泌期表达高于增殖期（p<0.05）;cyclind1主要表达于子宫内膜腺上皮的细胞核中,间质细胞核内弱表达,且分泌期高于增殖期表达（p<0.05）;enos在子宫内膜腺上皮、腔上皮及血管内皮细胞浆中表达,间质细胞浆内微弱表达,且分泌期表达高于增殖期（p<0.05）。5.2免疫组织化学法检测患者子宫内膜组织er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达结果在不同分组之间的比较与增殖期对照组、补肾增殖期治疗前组及疏肝增殖期治疗前组比较,补肾增殖期治疗后组及疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而补肾增殖期治疗后组及疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中er、pr蛋白表达均降低,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾增殖期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均高于疏肝增殖期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）,补肾增殖期治疗后组子宫内膜组织中er、pr蛋白表达均低于疏肝增殖期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2蛋白表达均高于补肾增殖期治疗后组,且差异均有无统计学意义（p>0.05）;与增殖期对照组比较,补肾增殖期治疗前组和疏肝增殖期治疗前组子宫内膜组织中er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。与分泌期对照组、补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组比较,补肾分泌期治疗后组及疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而补肾分泌期治疗后组及疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中er、pr的蛋白表达均低于分泌期对照组、补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾分泌期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均高于疏肝分泌期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而补肾分泌期治疗后组子宫内膜组织中er、pr蛋白表达均低于疏肝分泌期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）;疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2蛋白表达均高于补肾分泌期治疗后组,且差异均无统计学意义（p>0.05）;与分泌期对照组比较,补肾分泌期治疗前组和疏肝分泌期治疗前组子宫内膜组织中er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。6elisa酶联法检测人子宫内膜组织vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos的蛋白表达结果在不同分组之间的比较与增殖期对照组、补肾增殖期治疗前组及疏肝增殖期治疗前组比较,补肾增殖期治疗后组及疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾增殖期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均高于疏肝增殖期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2蛋白表达均高于补肾增殖期治疗后组,且差异均有无统计学意义（p>0.05）;与增殖期对照组比较,补肾增殖期治疗前组和疏肝增殖期治疗前组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。与分泌期对照组、补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组比较,补肾分泌期治疗后组及疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾分泌期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达均高于疏肝分泌期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）;而疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2蛋白表达均高于补肾分泌期治疗后组,且差异均无统计学意义（p>0.05）;与分泌期对照组比较,补肾分泌期治疗前组和疏肝分泌期治疗前组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos蛋白表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。7实时荧光定量pcr法检测子宫内膜组织vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达结果在不同分组之间的比较与增殖期对照组、补肾增殖期治疗前组及疏肝增殖期治疗前组比较,补肾增殖期治疗后组及疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾增殖期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达均高于疏肝增殖期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）,而疏肝增殖期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2mrna基因表达均高于补肾增殖期治疗后组,且差异均有无统计学意义（p>0.05）;与增殖期对照组比较,补肾增殖期治疗前组和疏肝增殖期治疗前组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。与分泌期对照组、补肾分泌期治疗前组及疏肝分泌期治疗前组比较,补肾分泌期治疗后组及疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达均升高,且差异均有统计学意义（p<0.05）;其中补肾分泌期治疗后组子宫内膜组织中pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达均高于疏肝分泌期治疗后组,且差异均有统计学意义（p<0.05）;而疏肝分泌期治疗后组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2mrna基因表达均高于补肾分泌期治疗后组,且差异均无统计学意义（p>0.05）;与分泌期对照组比较,补肾分泌期治疗前组和疏肝分泌期治疗前组子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enosmrna基因表达,差异均无统计学意义（p>0.05）。8e2、p、er、pr、vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos之间的相关性分析e2与er、pr、vegf、enos均呈正相关（r=0.516,p=0.020;r=0.736,p=0.000;r=0.468,p=0.038;r=0.942,p=0.000）;p与er、pr、vegf均呈负相关（r=-0.781,p=0.000;r=-0.837,p=0.000;r=-0.482,p=0.031）;vegf与cyclind1、mmp-9、enos均呈正相关（r=0.663,p=0.001;r=0.626,p=0.003;r=0.533,p=0.016）;cyclind1与pcna、mmp-9均呈正相关（r=0.931,p=0.000;r=0.878,p=0.000）;mmp-9与enos呈正相关（r=0.448,p=0.048）。（p<0.05有统计学意义）结论:1补肾法、疏肝法均能显着提高ivf-et胚胎着床反复失败患者的临床妊娠率及宫内妊娠率,且补肾法高于疏肝法,分泌期优于增殖期。2补肾法、疏肝法通过提高ivf-et胚胎着床反复失败患者血清中的e2、p含量,降低子宫内膜组织中er、pr的表达,上调子宫内膜组织中vegf、vegfr-2、pcna、mmp-9、cyclind1、enos的表达,促进细胞增殖,增加子宫内膜血管生成,提高血管通透性,从而改善子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。3补肾法、疏肝法能够改善ivf-et胚胎着床反复失败的患者子宫内膜组织形态,促进胞饮突的发育及形成,促使子宫内膜间质与腺体同步,最终使子宫内膜于“种植窗”达到最佳容受状态。4评估子宫内膜容受性主要针对于分泌期,补肾法、疏肝法于子宫内膜分泌期对子宫内膜容受性的改善优于增殖期。5补肾法在提高ivf-et胚胎着床反复失败患者血清中的e2、p含量,降低子宫内膜组织中er、pr的表达,上调子宫内膜组织中pcna、MMP-9、CyclinD1、eNOS的表达,改善子宫内膜组织形态,促进胞饮突的发育及形成,促使子宫内膜间质与腺体的同步性方面均优于疏肝法。6疏肝法上调IVF-ET胚胎着床反复失败患者子宫内膜组织中VEGF、VEGFR-2的表达高于补肾法,故疏肝法增加子宫内膜血供优于补肾法。

郭晓青^[10]（2011）在《β-hCG高表达促进人类卵巢上皮细胞恶性转化及裸鼠致瘤性的机制研究》文中研究说明研究背景卵巢上皮性癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,其恶性程度高,临床症状隐蔽,缺乏相对特异性的症状,不易早期发现,病情发展迅速,直到出现腹胀腹水,或者大的腹部肿块才得以就诊,确诊时绝大多数已属晚期,预后差,病死率居妇科恶性肿瘤之首。有数据报道,2010年美国有约21880例新发病例,其死亡人数高达13850。尽管手术技巧的提高可以做到最大限度的切除肿瘤,铂类、紫衫醇类以及二线化疗药物治疗的临床应用,给患者带来了多种生机,晚期卵巢癌患者的5年生存率仍无明显提高。许多研究发现,不同组织学类型的卵巢上皮性癌具有相对独立的病因及分子生物学改变,表现为不同的基因表达谱、遗传倾向以及分子发生机制。此外,越来越多的证据表明,输卵管粘膜,尤其是输卵管伞部上皮很可能是浆液性卵巢癌的起源,然而,关于卵巢癌的确切发生起源及分子发生机制尚处于探索阶段。在临床上,人绒毛膜促性腺激素p亚单位（β-hCG）是妊娠滋养细胞肿瘤及卵巢生殖细胞肿瘤诊断及检测中敏感的肿瘤标记物之一。分子生物学研究表明人绒毛膜促性腺激素（hCG）至少有4种变体,分别由不同来源的细胞分泌且具有完全不同的生物学功能。第一种是由妊娠期合体滋养细胞分泌的hCG,是一杂合二聚体糖蛋白复合物,糖蛋白激素（glyco-protein hormone, GPH）家族中的一个成员,由一个完全相同的α亚基,和一个激素特异性的β亚基组成。α亚基与β亚基之间由疏水非公价键和离子间的相互作用连接。在妊娠期间hCG具有促进妊娠黄体分泌孕酮,维持妊娠进展的重要生理作用；第二种由合体滋养细胞分泌的高糖基化的hCG,亦为妊娠进展所必需,是一种自分泌蛋白质,作用于细胞滋养细胞,能够促进细胞生长、妊娠组织的着床以及绒毛膜癌细胞的浸润[12,13]；第三种是由多种其它来源的恶性肿瘤细胞所分泌的游离hCGβ亚基,其不与α亚基形成二聚体,以游离形式存在。该非滋养细胞来源的游离β-hCG具有促进肿瘤细胞生长及恶性转化的生理作用；第四种为垂体hCG,是女性月经周期中,由垂体前叶促性腺细胞分泌的,其功能类似于LH,能够促进卵泡成熟、初级卵母细胞的减数分裂、排卵、卵泡的黄素化以及孕激素的生物合成[15,16]近来,游离β-hCG在非妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及作用倍受关注,膀胱及宫颈癌细胞体外实验表明,高表达的游离β-hCG在促进细胞增殖同时具有抑制肿瘤细胞凋亡的功能；在人宫颈癌细胞中沉默β-hCG的表达,能够促进凋亡；β-hCG还具有促进人乳腺上皮细胞进入有丝分裂期,预示其将有助于乳腺上皮细胞的恶性转化。有研究发现,在卵巢上皮性癌组织中不仅有β-hCG表达水平的升高,其同类受体hCGR的表达含量也增加,预示β-hCG在卵巢上皮性癌的发生、发展中发挥着重要作用。此外,相关的临床研究表明,在诸多不同来源的非妊娠滋养细胞肿瘤患者血清、尿液及肿瘤组织中β-hCG浓度升高与患者的预后相关。在膀胱癌患者中,尿液β-hCG浓度升高,预示着肿瘤侵袭性强,化疗敏感性差,临床预后差。然而,绒毛膜促性腺激素p亚单位在卵巢上皮性癌发生、发展中的功能及分子发生机制不详,无系统的相关研究。在美国M.D.Anderson肿瘤研究中心病理系“刘劲松实验室”的一项前期研究中,为探讨原发性卵巢癌中常见的转化癌基因,从10例高级别浆液性卵巢癌（High grade serous carcinoma）组织中构建了逆转录病毒cDNA表达文库。随后,用该cDNA文库感染NIH3T3细胞并接种到软琼脂上,将193个阳性克隆挑选出来进行基因测序,其中11个克隆为β-hCG基因。最近,Nowak-Markwi等也报道了8例上皮性卵巢癌中β-hCG的转录水平及分布增加。这就促使我们进一步探索β-hCG基因在卵巢上皮性癌分子发生机制中的作用。研究目的本课题通过对稳定表达β-hCG基因cDNA的永生化人卵巢表面上皮细胞T29β-hCG及T80β-hCG细胞的一系列实验研究,观察β-hCG基因对细胞增殖及细胞周期进程的影响；进一步研究β-hCG对细胞凋亡、细胞周期调控的分子机制：通过体内、外实验验证β-hCG对永生化人卵巢表面上皮细胞恶性转化方面的作用；研究人正常卵巢上皮、输卵管上皮、卵巢良、恶性上皮性肿瘤中β-hCG的表达差异。以探讨人绒毛膜促性腺激素在促进永生化人卵巢表面上皮细胞恶性转化中的作用,及其致瘤活性的分子发生机制,为卵巢上皮性癌的防治提供新的策略和方法。方法1.简介本研究中的细胞系：（1）T29和T80细胞系：是由正常人卵巢表面上皮细胞系IOSE-29和IOSE-80,依次经SV40T/t抗原和人端粒酶逆转录酶的催化亚单位（hTERT）,逆转录病毒转染产生的永生化的人卵巢表面上皮细胞系。T29和T80细胞系的非致瘤性已被本实验室的前期研究证实,该细胞系在本研究中作为亲代对照组。（2） T29β-hCG和T80β-hCG细胞系：是T29和T80细胞经逆转录病毒转染β-hCG基因cDNA所产生的稳定表达β-hCG的永生化人卵巢表面上皮细胞系。该细胞系在本研究中作为实验组。2.研究方法：（1）体外实验对照研究（流式细胞仪）分析2个实验组和2个亲代对照组永生化人卵巢表面上皮细胞的凋亡率；Western blot检测4组细胞在凋亡进程中促生存蛋白Bcl- XL的表达及促凋亡蛋白Bad的表达差异。（2）体外实验对照研究（细胞增殖实验MTT）4组永生化人卵巢表面上皮细胞在培养24h、48h及60h或72h的细胞增殖差异；流式细胞仪分析各组细胞中G1期细胞、G2期细胞的百分率；Western blot检测细胞周期进程中的细胞周期相关蛋白cyclin E,cyclin D1及与其相应的细胞周期依赖性激酶CDK2、CDK4及CDK6在各组细胞中的表达差异。（3）观察4组永生化人卵巢表面上皮细胞在体外软琼脂的克隆形成率；分别将T29、T80、T29β-hCG及T80β-hCG细胞（5×106）移植于裸鼠皮下,观察其在裸鼠的成瘤率。免疫组织化学检测裸鼠肿瘤中相关蛋白的免疫反应模式及表达。（4）用组织芯片进行免疫组织化学法检测人体相关组织中β- hCG的表达及模式：病理统计分析β- hCG在正常卵巢上皮、输卵管上皮、卵巢非赘生性囊肿,卵巢良性囊腺瘤及不同级别卵巢浆液性癌组织中的表达差异；病理统计分析β-hCG在不同组织学类型的卵巢上皮性癌组织中的表达; Kaplan-Meier生存分析β-hCG的表达对卵巢上皮性癌患者总生存率及无瘤生存率的影响。结果1.流式细胞仪细胞周期分析显示,与对照组T29细胞相比较,T29β- hCG细胞的凋亡率显着下降,12.3%（T29）比2.9%（T29β- hCG）,χ2=629.13,p=0.000,差异有统计学意义；与对照组T80细胞相比较,T80β-hCG细胞的凋亡率显着下降,9.2%（T80）比3.1%（T80β-hCG）,χ2=322.34,p=0.000,差异有统计学意义。免疫印迹（Western blot）实验结果显示,与对照组T29及T80细胞相比较,T29β-hCG及T80β-hCG细胞中促生存蛋白Bcl- XL的表达增高,虽然未改变促凋亡蛋白Bad的总蛋白含量,却显着降低了具有促凋亡生物活性的磷酸化Bad的表达水平。2.细胞增殖实验（MTT）结果显示,与对照组T29细胞相比较,相同数量的T29β-hCG细胞分别在培养24h、48h、60h时,细胞增殖显着增加,差异有统计学意义（F=50.70,P=0.000）；与对照组T80细胞相比较,相同数量的T80β-hCG细胞分别在培养24h、48h、72h时,细胞增殖显着增加,差异有统计学意义（F=93.42,P=0.000）。流式细胞仪细胞周期分析显示,与对照组T29及T80细胞相比较,T29β-hCG及T80β-hCG细胞的G2期细胞群百分率显着增加,分别为22.6%（T29）比33.3%（T29β-hCG）（x2=27.93, v=1,P=0.000）,19.7%（T80）比29.8%（T80β-hCG） （x2=27.39,v=1,P=0.000）,差异有统计学意义。免疫印迹（Western blotting）实验结果显示,与对照组T29及T80细胞相比较,T29β-hCG及T80β-hCG细胞中细胞周期相关蛋白cyclin E和cyclin D1以及其相应周期蛋白依赖性激酶Cdk2、Cdk4及Cdk6的表达增高。3.软琼脂体外克隆形成实验结果显示,与对照组T29及T80细胞相比较,相同数量的T29β-hCG及T80β-hCG细胞的克隆形成数量显着增加,分别为P<0.01及P=0.01,有统计学差异。体外实验中T29β-hCG细胞的成瘤率为13/24（10只裸鼠）,T80β-hCG细胞的成瘤率为6/14（7只裸鼠）,经13周观察对照组T29及T80细胞的成瘤率为0/8（分别为2只裸鼠）,均无肿瘤形成,P<0.01,有统计学差异。裸鼠移植瘤组织病理学检查表现为低分化上皮性癌的病理形态学改变。免疫组织化学检测裸鼠肿瘤中相关蛋白表达：①β- hCG强阳性表达于肿瘤上皮细胞胞膜及细胞浆中,并有部分向细胞外间质分泌的免疫反应模式；②肿瘤上皮细胞SV40 T抗原强阳性表达；③肿瘤组织微血管内皮细胞中CD34强阳性表达；④细胞角蛋白（cyrtokeratin）在移植瘤上皮细胞胞质中强阳性表达；⑤移植瘤上皮细胞胞核孕激素受体阳性表达、雌激素受体阴性表达。4.β- hCG在常见人卵巢上皮性癌及交界性卵巢肿瘤组织中表达升高,在正常卵巢上皮、输卵管上皮及卵巢非赘生性囊肿中不表达或低表达,差异具有统计学意义（χ2=21.89,v=5,P=0.001）；在各种常见组织学类型的卵巢上皮性癌组织中β- hCG的表达无差异,P=0.8；β- hCG在卵巢上皮性癌中的表达与患者的总生存率及无瘤生存率无相关性,P>0.05。结论1.人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）通过上调促生存蛋白的表达、下调促凋亡蛋白的表达,抑制细胞的凋亡进程。2.β-hCG的过度表达促进了永生化人卵巢表面上皮细胞的增殖,并通过诱导细胞周期相关蛋白cyclin E和cyclin D1以及其相应周期蛋白依赖性激酶Cdk2、Cdk4及Cdk6的表达增高,促进了细胞周期的进程。3.β-hCG的过度表达增强了永生化人卵巢表面上皮细胞的克隆性生长能力,并促进裸鼠移植肿瘤的形成及生长,即β-hCG的过度表达将促进永生化人卵巢表面上皮细胞恶性转化,具有类似转化癌基因的功能。4.β-hCG在常见人卵巢上皮性癌及交界性卵巢肿瘤组织中的表达高于正常卵巢上皮、输卵管上皮及卵巢非赘生性囊肿的表达；在各种常见组织学类型的卵巢上皮性癌组织中β- hCG的表达无差异,预示β- hCG在卵巢上皮性癌中的表达及调节不具有组织学类型特异性；β- hCG的表达对卵巢上皮性癌患者的总生存率及无瘤生存率无相关性,对卵巢癌的临床预后不具有预测意义。

二、妊娠滋养细胞肿瘤组织中cyclin D1、Rb蛋白产物的表达（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、妊娠滋养细胞肿瘤组织中cyclin D1、Rb蛋白产物的表达（论文提纲范文）

（1）p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系（论文提纲范文）

（2）Kisspeptin-10对乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的影响（论文提纲范文）

（3）活性氧介导的遗传毒性应激在1-硝基芘诱导胎盘滋养细胞周期阻滞中的作用（论文提纲范文）

（4）STAT3信号通路通过下调CyclinD1、VEGF参与早期自然流产发病的机制研究（论文提纲范文）

（5）鸢尾素对上皮性卵巢癌细胞周期调控作用的研究（论文提纲范文）

（6）苯并芘暴露促进小鼠蜕膜化过程中基质细胞增殖并抑制分化（论文提纲范文）

（7）HPV E2对子宫颈癌SiHa细胞增殖分化相关基因表达调控的研究（论文提纲范文）

（8）新基因F10参与绒癌细胞系JAR增殖和细胞周期调节的机制研究（论文提纲范文）

（9）补肾法、疏肝法对IVF-ET胚胎着床反复失败患者子宫内膜容受性的影响机制及其比较（论文提纲范文）

（10）β-hCG高表达促进人类卵巢上皮细胞恶性转化及裸鼠致瘤性的机制研究（论文提纲范文）

四、妊娠滋养细胞肿瘤组织中cyclin D1、Rb蛋白产物的表达（论文参考文献）

• [1]p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系[D]. 张春英. 遵义医科大学, 2020(12)
• [2]Kisspeptin-10对乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育的影响[D]. 李艳伟. 吉林大学, 2020(08)
• [3]活性氧介导的遗传毒性应激在1-硝基芘诱导胎盘滋养细胞周期阻滞中的作用[D]. 王博. 安徽医科大学, 2020(01)
• [4]STAT3信号通路通过下调CyclinD1、VEGF参与早期自然流产发病的机制研究[D]. 方媛. 安徽医科大学, 2020(02)
• [5]鸢尾素对上皮性卵巢癌细胞周期调控作用的研究[D]. 朱英雪. 青岛大学, 2019(02)
• [6]苯并芘暴露促进小鼠蜕膜化过程中基质细胞增殖并抑制分化[D]. 易婷. 重庆医科大学, 2019(01)
• [7]HPV E2对子宫颈癌SiHa细胞增殖分化相关基因表达调控的研究[D]. 李雪琨. 河北北方学院, 2019(01)
• [8]新基因F10参与绒癌细胞系JAR增殖和细胞周期调节的机制研究[D]. 杨金娣. 南方医科大学, 2016(05)
• [9]补肾法、疏肝法对IVF-ET胚胎着床反复失败患者子宫内膜容受性的影响机制及其比较[D]. 谷向向. 河北医科大学, 2016(05)
• [10]β-hCG高表达促进人类卵巢上皮细胞恶性转化及裸鼠致瘤性的机制研究[D]. 郭晓青. 南方医科大学, 2011(04)