肖遵强[1]（2021）在《槲皮素通过靶向人抗原蛋白R抑制肝癌进展的机制研究》文中指出目的 研究槲皮素通过靶向作用于人抗原蛋白R（HuR）降低非编码RNA LINC01123的稳定性,并抑制肝癌细胞的增殖及转移的作用。进一步探索槲皮素抗肝癌的机制,为中药治疗肝癌提供新思路。方法1.使用不同浓度的槲皮素处理Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞,通过CCK-8试验,EdU试验,克隆平板实验,流式实验,证明槲皮素可以抑制肝癌细胞的增殖,并诱导肝癌细胞凋亡。2.使用不同浓度的槲皮素处理Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞,通过划痕实验,迁移实验,侵袭实验,证明槲皮素可以抑制肝癌细胞的迁移及侵袭性。3.建立裸鼠荷瘤模型,观察槲皮素是否可以在体内抑制肿瘤的生长。4.通过生信分析及临床资料分析,研究LINC01123在肝癌组织中的表达量与预后的关系。5.在Hep3B,HepG2和Huh7细胞中过表达或敲低LINC01123,通过CCK-8实验,EdU试验,transwell试验及建立裸鼠荷瘤模型,进一步证明LINC01123在体内及体外可促进肝癌的增殖转移。6.通过生信分析,RNA免疫共沉淀实验及双荧光素酶报告基因检测系统实验寻找LINC01123的靶点。7.通过生信分析及双荧光素酶报告基因检测系统实验寻找miR-34a-5p的靶点。8.通过TUFT1的挽救实验来证明LINC01123可通过miR-34a-5p/TUFT1轴促进肝癌的进展。9.通过生信分析,探究HuR与LINC01123表达量的相关性,通过RNA免疫共沉淀实验探究两者是否可以直接结合。10.在Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞中过表达或敲低HuR,检测LINC01123的RNA稳定性及表达量,探索HuR能否通过增加LINC01123的稳定性,促进LINC01123 的表达。11.通过生信分析,探索HuR是否是槲皮素的作用靶点。12.通过在Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞中过表达HuR,探索槲皮素是否通过靶向作用于HuR下调LINC01123的表达,从而发挥抗肝癌的作用。结果1.槲皮素可以通过剂量依赖的方式抑制Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞的增殖。2.槲皮素可以通过剂量依赖的方式抑制Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞的转移。3.槲皮素可以在体内实验中抑制肝癌的生长。4.LINC01123在肝癌组织中高表达,并与患者的不良预后相关。5.在Huh7细胞中敲低LINC01123的表达后,可以明显抑制Huh7细胞的增殖,侵袭及迁移,在HepG2及Hep3B细胞中过表达LINC01123可以促进HepG2,Hep3B细胞的增殖,侵袭及迁移。同时,LINC01123的沉默可以抑制体内实验中肝癌的生长。6.通过生信分析发现LINC01123与miR-34a-5p的表达量成反比,通过双荧光素酶报告基因检测系统和RNA免疫共沉淀实验可以证明LINC01123和miR-34-5p直接结合。7.通过生信分析发现miR-34-5与TUFT1的表达量成反比,通过双荧光素酶报告基因检测系统可以证明miR-34-5p和TUFT1直接结合。8.过表达miR-34-5p可以逆转LINC01123促进肝癌细胞增殖,迁移及侵袭的作用,过表达TUFT1可以逆转miR-34-5p抑制肝癌细胞增殖,迁移及侵袭的作用。9、HuR和LINC01123在肝癌组织中的表达量呈正相关关系,RNA免疫共沉淀实验证明HuR可以和LINC01123直接结合。10.在Hep3B,Huh7和MHCC97h细胞中过表达或敲低HuR的表达量,可以同向调控LINC01123的表达量,敲低HuR可以降低LINC01123的稳定性。11.通过生信分析及分子对接,可以证明HuR是槲皮素的潜在作用靶点。12.在Hep3B,Huh7,MHCC97h细胞中过表达HuR,可以逆转不同浓度的槲皮素对Hep3B,Huh7,MHCC97h细胞的增殖抑制和转移抑制的作用。结论 本研究发现LINC01123在肝癌中高表达,与患者预后不良相关,并可通过调节miR-34a-5p/TUFT1轴促进肝癌细胞的增殖及转移。HuR可与LINC01123结合,增加LINC01123的稳定,并促进其表达。HuR作为槲皮素的潜在靶点之一,槲皮素可通过靶向HuR,降低LINC01123的稳定性并抑制肝癌细胞的增殖与转移。本研究首次发现了中药单体槲皮素通过作用于LncRNA治疗肝癌的机制,为中药治疗肝癌提供了新的思路。
王婷[2]（2021）在《吴茱萸碱在胰腺癌细胞中诱导miR-489表达及其作用和机制研究》文中研究指明目的:虽然文献已报道吴茱萸碱（Evodiamine,Evo）能够抑制胰腺癌细胞的增殖,诱导自噬,并且使AKT和ERK信号通路活性下降,增强癌细胞对传统药物吉他西滨的敏感性,但其作用机制研究的尚不全面,如是否参与调控胰腺癌糖酵解途径,是否诱导功能性miRNAs表达,针对以上方面,本课题拟深入研究吴茱萸碱在胰腺癌细胞中的作用机制。方法:首先,制备经Evo处理的胰腺癌细胞蛋白样品和对照组样品,通过Western Blot检测胰腺癌细胞中糖酵解和侵袭相关的蛋白表达水平,筛选差异表达蛋白。其次,阅读文献并结合预测软件Target Scan7.2筛选出与差异蛋白有对应靶位点的miRNAs,进一步通过q PCR和western blot以及双荧光素酶实验检测候选miRNAs与靶基因的相关性。q PCR检测吴茱萸碱对候选miRNAs表达是否有影响,并研究候选miRNAs在胰腺癌中的功能,如对胰腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭的作用,以及相关信号通路的作用机制。结果:1.将胰腺癌细胞经吴茱萸碱处理后,检测了几种糖酵解和侵袭相关的蛋白表达水平,比较其中差异,通过分析发现吴茱萸碱在胰腺癌细胞中对LDHA和MMP16的蛋白表达有明显的抑制作用。2.进一步研究发现LDHA和MMP16均具有miR-489-3p潜在结合位点。经双荧光素酶实验验证,LDHA是miR-489的靶基因,并且进一步通过q PCR和western blot发现miR-489只对LDHA有靶向抑制作用,q PCR结果也证实经Evo处理后胰腺癌细胞中miR-489-3p表达水平明显升高。3.人为过表达miR-489后,胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低。过表达miR-489减少了癌细胞葡萄糖摄取和ATP生成水平,AKT信号通路活性下降,抑制糖酵解。结论:吴茱萸碱诱导胰腺癌细胞中miR-489表达上调,从而抑制其靶基因LDHA表达。单独转染miR-489 mimics后,胰腺癌细胞糖酵解、增殖、迁移和侵袭等能力受到抑制,AKT信号通路活性下降。综上,本课题首次证明吴茱萸碱能够诱导miR-489表达,从而调控胰腺癌细胞糖酵解途径和相关生物学特性的进展。本课题后续还会进行相关的体内实验来验证所得结论。目前研究结果丰富了Evo的抗胰腺癌作用机制,具有一定研究意义。
李娜[3]（2021）在《滨蒿内酯通过PI3K/Akt信号通路对胰腺癌的抑制作用及相关机制的研究》文中认为目的:胰腺癌是一种起病隐匿、早期诊断困难、进展迅速、治疗效果不佳、中位生存时间短、预后极差的恶性肿瘤。只有15-20%的患者有手术切除的机会,但高的转移倾向及术后复发率限制了手术的效果。吉西他滨等化疗药物能有效改善胰腺癌患者的预后,但耐药的出现降低了药物的疗效,此外需面对化疗的毒副作用和昂贵费用等问题。因此发展新的抗肿瘤治疗方法成为必然。近年来,天然产物因其活性物质结构新颖、抗肿瘤活性高,多靶点,毒性小而成为研究热点,既往研究表明天然产物可以通过多种途径调控肿瘤细胞增殖、自噬、凋亡、侵袭和转移、耐药,并调控胰腺干细胞的活性。滨蒿内酯是一种苯丙素类的天然产物,具有广泛药理学特性,因其抗肿瘤的活性而备受关注。研究表明滨蒿内酯在喉癌、白血病及前列腺癌中具有抗肿瘤的作用,但在胰腺癌中的作用及其可能的分子机制尚不清楚。近年来,生物信息学发展迅速,尤其是在肿瘤研究中,通过计算机、信息学技术的运用,收集、整理并分析大量的肿瘤数据,构建不同功能的数据库丰富肿瘤研究的方法。本研究通过结合生物信息学及肿瘤基础研究手段,探讨滨蒿内酯在胰腺癌中的抗肿瘤作用及可能的作用机制。研究方法:利用PubChem、SwissTargetPrediction、STITCH、Gene Cards、CTD、STRING、WebGestalt、Cytoscape等生物信息学数据库及分析平台确定滨蒿内酯作用于胰腺癌可能介导的信号通路及关键基因。进行体外细胞实验验证滨蒿内酯对胰腺癌细胞的作用,通过CCK8实验获得滨蒿内酯在胰腺癌细胞系的IC50值,检测其对胰腺癌细胞增殖的影响,划痕实验检测对胰腺癌细胞迁移的影响,Transwell实验检测对胰腺癌细胞迁移及侵袭的影响,流式细胞术检测对胰腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响,并通过western blot实验检测转移相关蛋白MMP9,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及PI3K/Akt信号通路相关分子的表达变化;然后通过裸鼠移植瘤及免疫组化实验检测滨蒿内酯在体内对胰腺癌增殖的影响;综合观察滨蒿内酯不同情况下对胰腺癌细胞各生物学行为的影响。最后应用Akt的通路激活剂SC79做回复实验,通过CCK8实验检测对胰腺癌细胞增殖的影响,划痕实验检测对胰腺癌细胞迁移的影响,Transwell实验检测对胰腺癌细胞迁移及侵袭的影响,流式细胞术检测对胰腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响,并通过western blot实验检测转移相关蛋白MMP9,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及PI3K/Akt信号通路相关分子表达的影响,进一步确认信号通路在滨蒿内酯抗胰腺癌中的作用。结果:1.通过数据库获得113个滨蒿内酯的药物靶点,4719个胰腺癌的疾病靶点,两者取交集,共获得83个滨蒿内酯治疗胰腺癌的药效靶点。2.滨蒿内酯可能参与的与肿瘤相关的信号通路分别为MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、pathways in cancer、TNF信号通路,共涉及34个靶点,其中2个靶点IKBKB、Akt1同时参与4条通路,9个靶点FLT4、EGFR、IGF1R、MET、PDGFRB、ERBB2、MAPK8、MAPK10及RPS6KA5参与了3条通路。3.通过Cytoscape软件可视化蛋白-蛋白互作网络,Degree排名前5的靶点分别为Akt1、SRC、HSP90AA1、MAPK8、EGFR、PTGS2（其中EGFR与PTGS2并列第5）,与信号通路相关的靶点取交集,滨蒿内酯治疗胰腺癌的候选关键基因最可能为Akt1,其次为MAPK8和EGFR。4.Akt1及MAPK8在胰腺癌组织和正常胰腺组织之间具有表达差异,且差异有统计学意义,而EGFR无统计学的表达差异,推测滨蒿内酯抗胰腺癌的作用最可能是通过抑制Akt1的表达而实现的,其次是MAPK8。5.滨蒿内酯在Capan-2及SW1990细胞中IC50值分别为225.2μM及209.1μM;经100、200、400μM滨蒿内酯处理细胞,与Control组对比,滨蒿内酯明显抑制胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,诱导细胞周期停滞及凋亡,具有剂量依赖性,统计学差异明显。6.滨蒿内酯100、200、400μM与Control组对比,转移相关蛋白MMP9及抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax及cleaved caspase-3表达上调,具有统计学意义。7.通过qRT-PCR实验证实滨蒿内酯抑制Akt1表达,但不抑制MAPK8表达,滨蒿内酯最可能通过Akt1起到抗肿瘤的作用。8.滨蒿内酯100、200、400μM与Control组对比,不降低总PI3K及总Akt的表达,但显着抑制p-Akt的表达。9.在体内裸鼠移植瘤实验中,滨蒿内酯抑制移植瘤生长,显着降低移植瘤的体积及重量,且降低增殖相关蛋白Ki65及PCNA的表达。10.SC79可逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用,并阻断对细胞周期停滞及凋亡的诱导作用。11.SC79可逆转滨蒿内酯对胰腺癌转移相关蛋白MMP9及抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制作用、促凋亡蛋白Bax及cleaved caspase-3的促进作用。12.SC79可以阻断滨蒿内酯对p-Akt的抑制作用。结论:1.通过网络生物信息学数据库及分析平台获得滨蒿内酯作用于胰腺癌的候选关键基因,并经qRT-PCR实验确定Akt1为滨蒿内酯抗胰腺癌的关键基因。2.体外细胞实验显示滨蒿内酯显着抑制胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,引起细胞周期停滞及诱导凋亡,下调转移相关蛋白MMP9及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax及cleaved caspase-3的表达;体内动物实验证实滨蒿内酯显着抑制移植瘤生长。3.滨蒿内酯可能通过PI3K/Akt信号通路抑制胰腺癌细胞增殖、转移及侵袭,并诱导细胞周期停滞及细胞凋亡。4.PI3K/Akt通路激活剂SC79,可以阻断滨蒿内酯对胰腺癌的抑制作用。
陈鹏[4]（2021）在《陕西汉族非编码RNA基因多态性与结直肠癌风险相关性及MIR17HG与其microRNAs在结直肠癌中的作用研究》文中指出目的:通过非编码RNA基因多态性筛选出陕西汉族结直肠癌易感人群,筛选与结直肠癌发生密切相关microRNA,并对其在结直肠癌发生发展中的作用进行探讨,为临床预防及早期诊断结直肠癌提供理论依据。方法:1.设计一项包括514例CRC患者和510例健康对照的病例-对照关联研究,选取9个lnc RNAs基因[MIR137HG、MIR143HG（CARMN）、MIR3142HG、LINC-PINT、MIR124-1HG、MIR675HG（H19）、MIR17HG、MIR497HG和MIR133A1HG]、7个miRNAs基因（MIR577、MIR608、MIR675、MIR192、MIR618、MIR492和MIR423）及GREM1基因的49个SNPs,采用Agena Mass ARRAY基因分型技术,对所筛选的SNPs位点进行基因分型,通过卡方检验、logistic回归分析在遗传模型和分层分析下这些位点与中国陕西汉族人群CRC发病风险及临床病理参数之间的关系。并进行单倍型分析及MDR分析寻找预测CRC风险的最佳模型。2.分析MIR17HG及miR-17-92a簇在CRC病例及对照组的组织及血液中的表达。从TCGA和GDC数据库下载肿瘤RNA-seq数据,分析MIR17HG的mRNA表达。在TCGA数据库中下载生存数据用于生存分析,下载miRNA-seq表达量数据用于分析不同疾病分期的差异。从SRA和GEO数据库中下载数据用于健康人和患者血清及不同临床分期患者血清中游离miR-17-92a簇的丰度比较。3.纳入未经过任何治疗的陕西汉族病例50例,健康对照50例,用RT-qPCR对其血清中miR-17-92a簇的microRNAs表达进行检测,用ROC曲线判断这些microRNAs在诊断结直肠癌病例中的作用。4.用hsa-miR-18a-5p mimics和hsa-miR-18a-5p inhibitor对结直肠癌HCT116和SW480进行处理,研究hsa-miR-18a-5p对结直肠癌细胞的作用。利用shortest path算法分析蛋白互作网络中各基因与表达差异基因之间的网络关系,筛选结直肠癌的候选关键靶基因并进行初步验证。结果:1.rs73376930与增加中国陕西汉族CRC发病风险相关;而rs7549905、rs7318578、rs633727和rs58658771与降低中国陕西汉族CRC发病风险相关。单倍型GA较CA（rs3024270和rs2075744）、单倍型CT较TA（rs4779584和rs58658771）、单倍型AA较AG（rs2293581和rs73376930）均与降低CRC风险相关。含5个SNPs位点的模型（rs9440302,rs353300,rs1582417,rs157928,rs3024270）为预测CRC最佳模型,其交叉检验一致性为9/10,平衡精确性为:0.719,可预测患CRC的风险OR为6.65（95%CI:4.96-8.91）。2.MIR17HG在CRC组织中高表达,在Ⅳ期病例及黑种人中最高。miR-17-92a簇在CRC组织及血清中高表达,hsa-miR-20a-5p表达量最高。3.在陕西汉族结直肠癌病例血清中hsa-miR-18a-5p和has-miR-92a-1相对表达量高于正常人群。hsa-miR-18a-5p表达量与临床分期相关。血清hsa-miR-18a-5p+CEA+AFP诊断早期结直肠癌的AUC=0.899（95%CI:0.836-0.962,P<0.001）,灵敏度=0.88,特异性=0.738,优于单一指标。4.hsa-miR-18a-5p能降低CRC细胞的增殖、克隆形成能力,增加细胞凋亡的发生。用最短距离算法评估hsa-miR-18a-5p可能的11个靶基因,hsa-miR-18a-5p可能通过靶向LIF起到抑制CRC发展的作用。结论:1.非编码RNA基因多态性与结直肠癌风险相关。含五个SNPs的模型可以预测CRC的发病风险。2.MIR17HG与结直肠癌发生密切相关。MIR17HG及其microRNAs在CRC组织中高表达,表达量与临床分期及种族相关。miR-17-92a簇在CRC血清中高表达。3.在陕西汉族CRC血清中hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-92a-3p表达量增加,hsa-miR-18a-5p+CEA+AFP在诊断早期结直肠癌中具有优越性。4.hsa-miR-18a-5p的高表达能降低结直肠癌细胞的增殖、克隆形成能力,促进细胞凋亡的发生。
祖玛丽[5]（2021）在《绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI抑制乳腺癌细胞增殖及诱导凋亡的机制研究》文中提出研究目的:绞股蓝Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino属于传统中药和民族药,在我国西南少数民族地区应用广泛,是传统壮医的常用草药之一,用于治疗各种疾病,壮药名为gocaetmbaw。绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI是从绞股蓝中分离提取的皂苷类活性成分,为一对同分异构体。已有研究表明gypenoside L和gypenoside LI对多种癌细胞的生长具有抑制作用,但其在乳腺癌中的药理作用及其机制尚未见报道。2020年世卫组织国际癌症研究机构统计显示乳腺癌发病率居全球第一,女性生命健康受到严重威胁,目前对乳腺癌的治疗方式主要有手术、内分泌治疗、化疗、放疗以及靶向治疗等。由于缺乏有效的靶向治疗,高度转移性三阴乳腺癌（TNBC）的治疗仍具有很大的挑战性。E2F1转录因子为E2F家族成员之一,参与细胞周期调控和细胞凋亡。临床数据表明E2F1异常上调经常发生在各种类型的癌症中,与恶性进展和不良预后有关。ERCC6L是SNF2家族成员之一,参与染色质重塑、DNA重组和DNA修复,与多种癌症进展有关。因此,本课题目的是探究绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的抑制作用及分子机制。研究方法及结果:细胞表型实验证明gypenoside L和gypenoside LI均可抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,还可诱导内源性细胞凋亡,而且gypenoside LI的药效要强于gypenoside L,尤其对于三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231。RNA-seq 测序、KEGG 和基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）发现gypenoside L和gypenoside LI均可通过调控细胞周期发挥作用。流式周期检测发现gypenoside L可诱导乳腺癌细胞周期阻滞在G2/M期,gypenoside LI使细胞周期阻滞在G0/G1期。GO分析发现gypenoside L与细胞分裂、染色体分离有关;而gypenoside LI主要影响DNA复制。Metascape在线工具分析发现gypenoside LI下调的差异基因集或周期相关基因集主要受E2F1调控,转染实验及rescue实验证实gypenoside LI可通过抑制E2F1使细胞周期阻滞在G0/G1期,还可通过下调E2F1抑制ERCC6L的表达。而gypenoside L则不调控E2F1的表达。此外,gypenoside LI与siE2F1联合处理可发挥协同作用,使gypenoside LI在低浓度条件下便可杀死肿瘤细胞。而gypenoside L虽然不能抑制E2F1的表达,但可下调ERCC6L,结合在线数据库推测这可能与有丝分裂有关。此外,Western blot结果显示gypenoside L和gypenoside LI均不能改变p53的表达。由此可见,gypenoside L和gypenoside LI这对同分异构体发挥抗肿瘤作用并不依赖p53途径。结论:本研究证明gypenoside L和gypenoside LI可抑制乳腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用均不依赖p53途径,但是二者的作用机制却有所不同:gypenoside L可使乳腺癌细胞周期阻滞在G2/M 期,而 gypenoside LI阻滞在G0/G1期;同时,gypenoside LI可通过E2F1下调ERCC6L的表达,而gypenoside L却不改变E2F1的表达,结合数据库分析推测下调ERCC6L可能与有丝分裂途径有关。
李彬[6]（2021）在《circ＿0027089通过miR-136-5p/NACC1轴调控乙型肝炎病毒相关肝癌的进程》文中进行了进一步梳理目的:肝癌在世界范围内约占90%,而世界范围内的肝癌大多数发生在亚太地区。乙型肝炎病毒（HBV）感染是引发肝癌发展的主要危险因素,约50%的肝癌可归因于HBV感染。Meta-analyses显示,乙肝病毒感染者发生肝癌的可能性是非感染者的15-20倍。环状RNA（circRNA）被定义为非编码RNA,其特征是其特殊的共价闭环结构。circRNA的表达模式复杂,表现为组织分期特异性表达,与非肿瘤组织相比,大量circRNA在肿瘤组织中显着上调或下调。前期的研究中发现circ＿0027089在乙肝相关的肝癌组织中高表达,但其在乙肝相关的肝癌中的作用还未见报道。研究发现circRNA可以通过充当分子海绵或竞争性内源性RNA（ce RNAs）,竞争性地抑制miRNA的表达和生物学功能。在线预测网站（circBank）发现circ＿0027089与miR-136-5p具有结合位点,研究报道miR-136-5p在肝癌组织中下调,但其在乙肝相关的肝癌组织中的作用还有待探讨,我们猜测circ＿0027089是通过miR-136-5p发挥功能的,通过进一步的分析,在线预测网站（star Base）预测到miR-136-5p与NACC1具有结合位点,且NACC1高表达加速了肝癌的进程,因此推测circ＿0027089是否通过调控miR-136-5p/NACC1轴调控乙肝相关肝癌的发展过程,旨在为乙肝相关肝癌的治疗提供新方向。研究方法:采用qPCR法检测肝癌细胞系HepG2、HepG2.2.15、HepAD38、HepAD38（tet-off）中HBV DNA水平;采用qRT-PCR法与Western blot法分别检测Control组、肝癌组织（HBV-）、肝癌组织（HBV+）中circ＿0027089、miR-136-5p、NACC1的表达量;采用qRT-PCR法与Western blot法分别检测乙肝相关肝癌细胞HepG2.2.15和HepAD38（tet-off）中circ＿0027089、miR-136-5p、NACC1的表达量;采用Pearson法检测肝癌组织（HBV+）中circ＿0027089与miR-136-5p表达量的相关性,miR-136-5p与NACC1表达量的相关性以及circ＿0027089与NACC1表达量的相关性。以HepG2.2.15和HepAD38（tet-off）细胞为研究对象,实验分组:Vector组、pCD5-circ＿0027089组、si-NC组、si-circ＿0027089#1组、si-circ＿0027089#2组、si-circ＿0027089#2+anti-miR-NC组、si-circ＿0027089#2+anti-miR-136-5p组、miR-NC组、miR-136-5p组、miR-136-5p+pc DNA组、miR-136-5p+NACC1组。采用CCK8实验检测细胞活力;采用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率;采用流式细胞术分别检测细胞凋亡率与细胞周期;采用试剂盒检测Caspase3/7活力;采用划痕实验检测细胞划痕愈合率;采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因实验与RIP实验检测circ＿0027089与miR-136-5p的靶向关系,以及miR-136-5p与NACC1的靶向关系。sh-NC、sh-circ＿0027089分别转染入HepG2.2.15细胞后经皮下注射入裸鼠体内建立乙肝相关肝癌裸鼠模型,培养27 d后采用脱颈法处死裸鼠,取出移植瘤组织,分别检测移植瘤组织重量与体积;采用qRT-PCR法与Western blot法分别检测移植瘤组织中circ＿0027089、miR-136-5p、NACC1的表达水平。结果:1、HepG2.2.15细胞HBV DNA水平均明显高于HepG2细胞（P<0.05）,HepAD38（tet-off）细胞中HBV DNA水平均明显高于HepAD38细胞（P<0.05）。2、与Control组比较,肝癌组织（HBV-）、肝癌组织（HBV+）中circ＿0027089与NACC1的表达水平升高（P<0.05）,miR-136-5p的表达水平降低（P<0.05）,且肝癌组织（HBV-）与肝癌组织（HBV+）比较差异有统计学意义;与人肝永生化细胞THLE-2比较,HepG2.2.15和HepAD38（tet-off）细胞中circ＿0027089与NACC1的表达水平升高（P<0.05）,miR-136-5p的表达水平降低（P<0.05）。3、与Vector组比较,pCD5-circ＿0027089组细胞活力升高（P<0.05）,克隆形成率与划痕愈合率升高（P<0.05）,S期细胞比例升高（P<0.05）,侵袭细胞数增多（P<0.05）,凋亡率与Caspase3/7活力降低（P<0.05）,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）。4、与si-NC组比较,si-circ＿0027089#1组、si-circ＿0027089#2组circ＿0027089的表达水平降低（P<0.05）,其中si-circ＿0027089#2组circ＿0027089的表达水平相对较低,因而选用si-circ＿0027089#2进行后续实验。5、与si-NC组比较,si-circ＿0027089#2组细胞活力降低（P<0.05）,克隆形成率与划痕愈合率降低（P<0.05）,S期细胞比例降低（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,凋亡率与Caspase3/7活力升高（P<0.05）,G0/G1期细胞比例升高（P<0.05）。6、双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实circ＿0027089可靶向调控miR-136-5p,circ＿0027089与miR-136-5p呈负相关（r=-0.5564,P=0.0009）。7、与si-circ＿0027089#2+anti-miR-NC组比较,si-circ＿0027089#2+anti-miR-136-5p组细胞活力升高（P<0.05）,克隆形成率与划痕愈合率升高（P<0.05）,S期细胞比例升高（P<0.05）,侵袭细胞数增多（P<0.05）,凋亡率与Caspase3/7活力降低（P<0.05）,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）。8、双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实miR-136-5p可靶向调控NACC1,miR-136-5p与NACC1呈负相关（r=-0.6363,P<0.001）。9、与miR-NC组比较,miR-136-5p组细胞活力降低（P<0.05）,克隆形成率与划痕愈合率降低（P<0.05）,S期细胞比例降（P<0.05）,侵袭细胞数减少（P<0.05）,凋亡率与Caspase3/7活力升高（P<0.05）,G0/G1期细胞比例升高（P<0.05）。10、与miR-136-5p+pc DNA组比较,miR-136-5p+NACC1组细胞活力升高（P<0.05）,克隆形成率与划痕愈合率升高（P<0.05）,S期细胞比例升高（P<0.05）,侵袭细胞数增多（P<0.05）,凋亡率与Caspase3/7活力降低（P<0.05）,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）。11、circ＿0027089与NACC1呈正相关（r=0.7232,P<0.0001）,与si-NC组比较,si-circ＿0027089#2组NACC1的表达量降低（P<0.05）;与si-circ＿0027089#2+anti-miR-NC组比较,si-circ＿0027089#2+anti-miR-136-5p组中NACC1的表达量升高（P<0.05）。12、与sh-NC组比较,sh-circ＿0027089组裸鼠移植瘤体积与重量均明显降低（P<0.05）,circ＿0027089与NACC1的表达水平降低（P<0.05）,miR-136-5p的表达水平升高（P<0.05）。结论:1、敲低circ＿0027089可明显降低乙肝相关肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,并可诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,还可诱导细胞凋亡。2、miR-136-5p过表达可抑制乙肝相关肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,并可诱导细胞周期阻滞,还可促进细胞凋亡,而NACC1过表达可明显拮抗miR-136-5p过表达对乙肝相关肝癌细胞生物学行为的作用。3、敲低circ＿0027089可通过调控miR-136-5p/NACC1分子轴而抑制乙肝相关肝癌裸鼠移植瘤生长。4、circ＿0027089可通过负向调控miR-136-5p的表达而上调NACC1的表达从而参与乙肝相关肝癌发生及发展过程。
高蕾,曾俊涛,周真真,阚娜,王小红[7]（2020）在《过表达miR-125a-5p靶向STAT3抑制结肠癌体外生长和治疗移植瘤裸鼠的研究》文中提出目的:探究过表达miR-125a-5p抑制结肠癌的机制及其对移植结肠癌裸鼠的影响及机制。方法:通过基因预测软件TargetScan、miRanda和TarBase筛选出miR-125a-5p的靶基因STAT3;miR-125a-5p mimic和pcDNA-STAT3转染SW480细胞;RT-PCR检测miR-125a-5p表达,Western blot检测STAT3、Ki67、caspase-3、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、c-Myc和cycD表达,克隆形成实验检测细胞生长,Transwell实验检测细胞侵袭,倒置显微镜观察上皮-间质细胞形态变化;裸鼠皮下注射转染miR-125a-5p mimic的结肠癌SW480细胞构建模型,30 d后检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67、Vimentin表达,RT-PCR检测miR-125a-5p表达,Western blot检测Bcl-2、 c-Myc和cycD表达。结果:miR-125a-5p与STAT3在3′UTR区存在结合位点,荧光素酶实验证实miR-125a-5p靶向作用于STAT3,对STAT3表达起抑制作用;在体外,与Control组相比,miR-125a-5p mimic组克隆形成率显着降低,Ki67表达显着下调,caspase-3表达显着上调,侵袭细胞数显着减少,E-cadherin表达显着上调,Vimentin和N-cadherin表达显着下调,Bcl-2、c-Myc和cycD表达显着下调;在体内,与Control组相比,miR-125a-5p mimic组肿瘤重量显着减轻,miR-125a-5p、Bcl-2、 c-Myc和cycD表达显着下调,Ki67和Vimentin阳性率显着减少。结论:过表达miR-125a-5p可靶向STAT3抑制结肠癌SW480细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,诱导其凋亡,并抑制STAT3下游靶基因Bcl-2、c-Myc和cycD表达,从而抑制结肠癌。
杜金童[8]（2020）在《CDK1在胰腺癌中的生物学功能、临床意义及相关抑制剂研究》文中提出研究背景胰腺癌是恶性程度极高的消化道肿瘤之一,其总体5年生存率不足8%。近年来,随着研究的深入,越来越多的治疗方案被不断提出,但胰腺癌患者的预后并未得到明显的改善。目前,传统的化疗药物对胰腺癌患者疗效有限,胰腺癌的靶向治疗也一直举步维艰。2005年FDA批准了“吉西他滨+厄洛替尼”用于局部晚期不可切除或有远处转移的胰腺癌患者的治疗,然而仅约10天的生存期提高使得厄洛替尼在胰腺癌治疗中难以取得较大的临床获益。2019年12月,FDA批准了 PARP抑制剂奥拉帕利用于携带BRCA基因突变的转移性胰腺癌患者的维持治疗,然而携带有BRCA基因突变的转移性胰腺癌患者人群数量有限。因此,有必要继续探索新的抗胰腺癌靶点,为未来胰腺癌的临床治疗研究提供一定的基础。细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases,CDKs）在细胞周期的调控中处于核心地位。目前,在人体中已发现的CDKs包含20个亚型,其中CDK1～6和CDK14～18直接参与细胞周期调控,其它CDKs则主要调控基因转录。已有研究证实,CDKs的异常激活可导致细胞周期进程的失调,从而导致肿瘤细胞异常增殖。近年来,已有多个CDK4/6的选择性小分子抑制剂被FDA批准上市,用于晚期或转移性乳腺癌患者。有研究发现了 CDKs在胰腺癌的发生和发展中具有重要作用。CDK5在胰腺腺癌中过度表达,可促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。KRAS突变可刺激CDK8的表达,通过Wnt/β-catenin信号通路促进胰腺癌细胞的侵袭和迁移。在众多的CDKs中,CDK1则具有不可替代的位置。在正常生理条件下,CDK1与Cyclin A或Cyclin B形成复合物,调控细胞周期G2/M,而CDK1异常激活则与肿瘤的发生发展密切相关。CDK1在结直肠癌、肝癌和肺癌等多种肿瘤中过表达,并且与患者的不良预后有关。CDK1选择性抑制剂RO3306对白血病、乳腺癌等多种肿瘤细胞具有良好的抗增殖活性。然而CDK1在胰腺癌中的研究仍然较少。有研究发现,磷酸酶CDC25B的抑制剂可抑制胰腺癌细胞生长,并观察到CDK1磷酸化水平增高以及细胞G2/M期阻滞。CDK1在胰腺癌患者组织中高表达,且与患者较差的预后有关。目前仍未有研究阐明抑制CDK1对胰腺癌生长的影响,CDK1在胰腺癌中的生物学功能与临床意义有待进一步探索。此外,尽管已有研究发现CDKs泛抑制剂具有良好的抗胰腺癌活性,然而靶向CDK1的选择性抑制剂RO3306在胰腺癌中的抗肿瘤活性及作用机制尚未见报道。因此,仍需进一步研究CDK1成为抗胰腺癌靶点的潜力,探索新的抗胰腺癌策略。另一方面,细胞凋亡的异常调控也是胰腺癌发生发展的重要原因。有研究表明,抗凋亡蛋白Mcl-1在胰腺癌中异常表达,抑制Mcl-1可抑制胰腺癌的生长。对Mcl-1蛋白及内源性细胞凋亡通路的调控是CDKs抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡的重要机制。因此,可通过研究CDK1抑制剂RO3306对Mcl-1蛋白的影响,进而分析其作用机制。另外,多项研究表明,Mcl-1小分子抑制剂具有较好的抗胰腺癌活性。因此,进一步筛选新型Mcl-1抑制剂有助于将来探索新的抗胰腺癌策略。研究目的本课题旨在研究CDK1作为新型抗胰腺癌靶点的潜力,探索新的抗胰腺癌策略,为将来胰腺癌的临床转化研究提供一定的基础。首先,研究CDK1在胰腺癌中的生物学功能;其次,研究CDK1在胰腺癌患者中的表达及临床意义;再次,进一步对已知的CDK1抑制剂RO3306进行抗胰腺癌活性研究,通过研究RO3306对Mcl-1等相关蛋白的影响以探索其作用机制;最后,筛选新型CDK1抑制剂和Mcl-1抑制剂,并对其进行靶点抑制活性及抗胰腺癌活性研究。研究方法和结果第一部分敲减CDK1对胰腺癌体内外生长的影响1、首先,通过生物信息学分析、基因敲减和细胞增殖实验,发现敲减CDK1能够在体外显着抑制胰腺癌细胞的增殖。（1）基于TCGA数据中170余例胰腺癌患者的mRNA表达谱数据,通过生物学信息学GEPIA平台分析了CDK1-CDK10在胰腺癌组织和正常组织中的表达情况,发现CDK1、CDK2和CDK6在胰腺癌患者组织中高表达（p<0.01）,且其高表达与患者差的生存期相关（p<0.05）。（2）通过Celigo细胞增殖实验,分别研究了敲减CDK1、CDK2和CDK6对Panc-1胰腺癌细胞增殖的影响,发现敲减CDK1对Panc-1细胞增殖的抑制效果最为明显（p<0.005）。2、进一步研究了敲减CDK1对胰腺癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移的作用。通过MTT细胞增殖实验,发现了敲减CDK1可抑制胰腺癌细胞（Panc-1和Aspc-1）的增殖（p<0.05）。使用流式细胞仪进行细胞周期和细胞凋亡实验,结果表明,敲减CDK1可将胰腺癌细胞（Panc-1和Aspc-1）阻滞在G2/M期（p<0.05）,但对细胞凋亡无明显影响（p>0.05）。通过Transwell实验表明,敲减CDK1能够抑制Panc-1细胞迁移（p<0.05）,而对Aspc-1细胞的迁移没有影响（p>0.05）。3、使用肿瘤异种移植模型研究了敲减CDK1对裸鼠胰腺癌体内生长的影响,结果表明,与对照组相比,敲减CDK1的瘤体生长速度及重量均低于对照组（p<0.05）。第二部分CDK1在胰腺癌患者中的表达与临床意义1、首先,通过免疫组化方法检测了 CDK1在90例胰腺癌术后患者的胰腺癌组织及对应的60例癌旁组织中的表达。结果显示,在44例有配对癌旁组织的患者中,CDK1在胰腺癌患者中高表达,其细胞浆表达高于细胞核表达（p<0.05）。2、进一步分析了 73例胰腺癌患者中CDK1的表达与临床病理特点的关系。结果示,CDK1在细胞浆中的表达与组织学分级、p53和Ki67表达有关（p<0.05）;CDK1在细胞核中的表达与p53表达有关（p<0.05）。3、最后,分析了 CDK1的表达与73例胰腺癌患者预后的关系。Kaplan-Meier曲线法及单因素分析表明,CDK1细胞浆高表达的患者具有更短的总生存期（p<0.05）。COX多因素分析表明组织学分级和N分期是总生存期的独立预后因子（p<0.05）,而CDK1不是总生存期的独立预后因子（p>0.05）。CDK1细胞核表达与胰腺癌患者的总生存期无关（p>0.05）。第三部分CDK1抑制剂RO3306的抗胰腺癌活性及作用机制研究1、首先,研究了 RO3306在胰腺癌细胞中的抗增殖活性。(1通过Western-blot实验,检测了 CDK1在五种胰腺癌细胞系中的表达,发现了 CDK1在SW1990细胞系中表达量最高。（2）通过SRB细胞增殖实验,发现了 RO3306能够抑制五种胰腺癌细胞的增殖,且其对SW1990细胞的抗增殖效果最佳（IC50=2.9 μM）,优于化疗药物5-Fu（IC50=4.9 μM）。2、进一步研究了 RO3306抗胰腺癌的作用机制。（1）使用流式细胞仪检测了 RO3306对SW1990细胞周期的影响,结果发现,RO3306能够将细胞周期阻滞在G2/M和S期（p<0.05）。通过Western-blot实验表明,RO3306可能是通过激活p53-p21信号通路实现对细胞周期S期的阻滞。（2）使用流式细胞仪检测了RO3306对SW1990细胞凋亡的影响,结果发现,RO3306能够诱导SW1990细胞凋亡（p<0.005）。通过Western-blot实验表明,RO3306可能通过影响Bcl-2-Bax信号通路以及调控Mcl-1蛋白的磷酸化水平,进而诱导胰腺癌细胞凋亡。3、最后,通过SRB抗增殖实验研究了 RO3306与四种化疗药物（5-Fu、吉西他滨、紫杉醇或奥沙利铂）的联合用药效果,结果表明RO3306能够增强5-Fu和紫杉醇对胰腺癌细胞SW1990的抗增殖活性。第四部分新型CDK1抑制剂及Mcl-1抑制剂的研究1、通过计算机虚拟筛选平台进行了 CDK1抑制剂以及Mcl-1抑制剂的筛选。综合运用三维药效团和分子对接技术,分别构建了针对CDK1小分子抑制剂和Mcl-1小分子抑制剂的虚拟筛选平台,对商业化合物库中21万个分子进行了虚拟筛选。通过对筛选到的命中化合物进行活性测试,发现了初步具有CDK1抑制活性的化合物,以及与阳性药Gossypol活性相当的Mcl-1抑制剂M02（Ki=5.4μM）和 M08（Ki=0.53μM）。2、进一步研究了新型Mcl-1抑制剂M02和M08的抗胰腺癌活性。Western-blot实验表明,Mcl-1蛋白在五种胰腺癌细胞中均有表达,在SW1990细胞中表达最高。SRB实验表明,M02和M08在胰腺腺癌细胞SW1990中具有一定的抗增殖活性（IC 50=44.4-48.4μM）。细胞周期和细胞凋亡实验表明,M02和M08不仅能够诱导SW1990细胞凋亡（p<0.005）,而且可将细胞周期阻滞在G2/M期（p<0.05）。进一步的联合用药实验表明,M08能够提高吉西他滨或5-Fu对胰腺癌细胞的抗增殖活性,而M02对吉西他滨或5-Fu的抗增殖活性影响较小。研究结论1、敲减CDK1对胰腺癌细胞具有抗增殖活性,可将胰腺癌细胞阻滞在G2/M期,并且在小鼠肿瘤异种移植模型中具有较好的肿瘤生长抑制效果,表明CDK1有望成为新型抗胰腺癌靶点。2、CDK1在胰腺癌患者中高表达,其细胞浆表达高于细胞核表达。细胞浆表达与肿瘤级别、p53表达和Ki67表达等临床病理特征有关,细胞核表达与p53的表达有关。细胞浆高表达CDK1的患者具有更短的总生存期。提示CDK1可作为胰腺癌潜在的生物学标志物。3、CDK1抑制剂RO3306在多种胰腺癌细胞系中均具有抗增殖活性。RO3306对胰腺癌细胞周期阻滞的作用与p53-p21信号通路有关。RO3306还可通过影响Bcl-2-Bax信号通路以及下调Mcl-1蛋白的磷酸化水平,进而诱导胰腺癌细胞凋亡。此外,RO3306能够增强5-Fu或紫杉醇对胰腺癌细胞的抗增殖活性。4、发现了新型具有CDK1抑制活性的化合物,以及与阳性药活性相当的Mcl-1新型抑制剂M02和M08。特别是,M02和M08具有抗胰腺癌活性,且M08可增强吉西他滨或5-Fu对胰腺癌细胞的抗增殖活性。
张翌[9]（2020）在《LncRNA TMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴影响胰腺癌自噬的作用与机制研究》文中研究指明目的:胰腺癌是一种恶性程度很高,诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%,是预后最差的恶性肿瘤之一。越来越多的研究发现长链非编码RNA（1ncRNA）在胰腺癌（PC）的进展中发挥显着的作用。TMPO antisense RNA 1（TMPO-AS1）是近年来被发现在多种肿瘤中发挥作用,然而其在PC中的作用尚不清楚。方法:采用RT-PCR检测PC组织中TMPO-AS1的表达,分析TMPO-AS1表达水平和患者临床病历资料以及预后的相关性。在体外实验中,分别实施敲低和过表达实验验证TMPO-AS1对（PC-3和PANC-1）增殖,迁移和上皮间质转化（EMT）的作用。此外,采用生物信息学分析TMPO-AS1的下游分子靶点,采用双荧光素酶实验和RNA免疫共沉淀（RIP）实验验证TMPO-AS1和miR-873-3p,miR-873-3p和TRIM11的关系。采用 Western blot检测TRIM11和Akt的蛋白表达。结果:TMPO-AS1在PC组织中显着上调,且与PC肿瘤体积,不良预后密切相关。过表达TMPO-AS1显着促进了 PC-3细胞的增殖,迁移和EMT,而敲低TMPO-AS1则抑制了 PANC-1细胞的增殖,迁移和EMT.此外,miR-873-3p是TMPO-AS1的靶点。过表达miR-873-3p抑制了 PC的进展,并削弱了TMPO-AS1的促癌效应。进一步机制研究证实,miR-873-3p靶向TRIMP11的3’非翻译区（3’UTR）.敲低TRIMP11抑制了 PC的增殖,迁移和侵袭,减弱了 Akt的活化。进一步探究TRIM11下游的机制表明,敲低TRIM11可以通过抑制自噬降低PC的增殖、侵袭与迁移。结论:TSMPO-AS1通过调节miR-873-3p/TRIM11轴调控PC的自噬,从而促进PC的增殖,迁移和EMT。
孟子琦[10]（2020）在《基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究》文中研究指明研究背景在世界范围内,肝癌、胰腺癌、肺癌高居恶性肿瘤发病率和死亡率的前列,严重威胁着人们的生命健康,也给家庭和社会带来了沉重的负担。中药注射剂在肿瘤治疗中具有独特的优势,广泛应用于临床。但由于中药具有多成分、多途径、多靶点、多功能的特点,导致药效物质基础不明确、作用机制不清楚,增加了研究的难度,严重影响了国际化的进程。复方苦参注射液具有清热利湿,凉血解毒,散结止痛的作用,临床上广泛用于恶性肿瘤的治疗,然而其作用机制尚未完全阐明。近年来伴随着生物信息学的迅猛发展,新理念、新思路不断涌现,网络药理学与生物信息学的结合成为提高中医药研究水平的重要路径。基于此,本研究运用整合生物信息学方法,分析探究复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的作用机制。研究目的通过生物信息学方法确认肝癌、胰腺癌中的关键基因。通过网络药理学方法预测、筛选复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的化学成分、作用靶点和信号通路并进行网络构建,从系统层面揭示复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的多成分、多靶点、多通路复杂机制。研究方法1.生物信息学分析在肝癌关键基因研究中,从GEO数据库下载基因芯片数据集,使用limma包进行差异表达分析,之后采用RobustRankAggreg包对数据集进行整合分析,筛选出共同被确认为差异表达的基因。通过STRING获取差异基因的蛋白互作信息,导入Cytoscape构建蛋白互作网络,并使用MCODE进行模块分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。利用KM plotter、GEPIA进行生存分析、表达水平分析和关联性分析。在胰腺癌关键基因研究中,从TCGA数据库下载转录组测序数据和患者的临床信息,利用WGCNA包构建共表达网络、识别基因模块并与临床信息相关联。通过Cytoscape对模块进行可视化,并使用CytoHubba确定关键基因。通过clusterProfiler包进行GO富集分析,并通过DAVID进行KGEE通路富集分析。采用survival包进行单因素Cox回归分析,随后根据单因素的P值筛选基因进行多因素Cox回归分析,构建生存相关的线性风险评估模型,通过Kaplan-Meier生存曲线评估高、低风险组样本的总体生存率差异情况。采用survivalROC包绘制ROC曲线,评价预后模型的预测准确性。2.网络药理学分析在复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过 STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction、TCMSP 获取化学成分的靶点。通过TTD、GEO、TCGA获得肝细胞癌相关基因。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“化合物-肝细胞癌靶点网络”、“药物-化合物-靶点-通路网络”,对网络的关键拓扑参数进行分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。使用KM plotter、GEPIA进行生存分析和关联性分析。利用AutoDock进行分子对接模拟。在复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过 STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction、TCMSP 获取化学成分的靶点。通过合并TTD、TCGA以及WGCNA筛选出的关键基因得到胰腺癌相关基因。随后通过STRING获取蛋白互作信息。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“化合物靶点-胰腺癌靶点蛋白互作网络”、“药物-化合物-蛋白互作靶点-通路网络”,并使用MCODE对网络进行模块分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析。利用AutoDock+进行分子对接模拟。在复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究中,通过文献检索获得复方苦参注射液的化学成分,通过STITCH、SuperPred、SwissTargetPrediction获取化学成分的靶点,通过TTD、OMIM获得肺癌相关基因。随后通过STRING获取蛋白互作信息。使用Cytoscape构建“化合物-潜在靶点网络”、“肺癌靶点蛋白互作网络”、“化合物-肺癌靶点网络”、“药物-化合物-靶点-通路网络”,对网络的关键拓扑参数进行分析。通过DAVID进行GO和KEGG富集分析并通过systemsDock进行分子对接模拟。研究结果1.生物信息学分析结果对13个肝细胞癌基因芯片数据集进行整合分析,得到380个差异基因,包括293个下调基因和87个上调基因。通过蛋白互作网络与模块分析得到1 1个关键基因（CDK1、CCNB2、CDC20、CCNB1、TOP2A、CCNA2、MELK、PBK、TPX2、KIF20A、AURKA）和2个重要模块。富集分析表明,差异基因主要与代谢相关通路有关,关键基因和模块1与细胞周期密切相关。生存分析发现关键基因均与肝细胞癌患者生存时间呈负相关。表达水平分析表明关键基因均在肝细胞癌中高表达,关联性分析表明CDK1的表达与其他关键基因的表达呈正相关。对TCGA胰腺癌转录组测序数据进行筛选,共得到177个样本和5000个基因用于WGCNA分析,并得到11个基因模块。通过肿瘤分级、肿瘤分期和患者的生存状态最终筛选出黑色模块和蓝色模块作进一步研究。GO富集分析显示黑色模块与肿瘤的发生发展密切相关,蓝色模块与肿瘤的分化、侵袭和转移密切相关。KEGG通路富集分析显示,黑色模块中的基因主要富集在细胞周期、p53信号通路等通路上。蓝色模块中的基因主要富集在粘蛋白型O-聚糖的生物合成、花生四烯酸代谢、ECM-受体相互作用、紧密连接等通路上。通过网络分析,分别筛选出黑色模块和蓝色模块中的5个关键基因（NCAPG、BUB1、CDK1、TPX2、DLGAP5;INAVA、MST1R、TMPRSS4、TMEM92、SFN）,且这些基因均在胰腺癌中高表达。生存分析得到5个基因构建预后模型,其中TSPOAP1与胰腺癌患者生存时间呈正相关,ADGRG6、GPR87、FAM111B、MMP28与胰腺癌患者生存时间呈负相关。2.网络药理学分析结果在复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究中,通过网络分析,筛选出6个关键靶点（BCHE、SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A、CDK1）,其中 CDK1 在肝细胞癌中高表达,其余5个均为低表达。GO富集分析显示,复方苦参注射液调控的与肝细胞癌有关的靶点主要富集在细胞周期、凋亡过程调控、代谢过程等生物过程中。KEGG通路富集分析表明,这些靶点主要与药物代谢-细胞色素P450、花生四烯酸代谢等通路有关。此外,关联性分析结果表明SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A的表达与CDK1的表达有很强的负相关关系。生存分析结果表明,CDK1与肝细胞癌患者生存时间呈负相关,SRD5A2、EPHX2、ADH1C、ADH1A与肝细胞癌患者生存时间呈正相关。在复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究中,通过网络分析与模块分析,筛选出6个关键靶点（AKT1、MAPK1、MAPK3、EGFR、CDK1、JAK1）和3个重要模块。GO富集分析显示,3个重要模块主要与细胞周期、细胞增殖、JAK-STAT级联、MAPK级联、磷酸化,凋亡过程调控有关。KEGG通路富集分析表明,3个重要模块显着富集在细胞周期、ErbB信号通路、PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等通路上。在复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究中,通过网络分析,筛选出8个关键靶点（CHRNA3、DRD2、PRKCA、CDK1、CDK2、CHRNA5、MMP1、MMP9）。GO 富集分析显示,复方苦参注射液调控的与肺癌有关的靶点显着富集在有丝分裂细胞周期G1/S转换、蛋白质磷酸化、ERK1和ERK2级联的调控、激酶活性等生物过程和分子功能中。KEGG通路富集分析表明,这些靶点主要参与癌症通路、癌症中的蛋白多糖、PI3K-Akt信号通路、非小细胞肺癌和小细胞肺癌等通路。研究结论本研究综合运用网络药理学和生物信息学方法,在系统层面揭示了复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的化学成分、作用靶点和信号通路。初步阐释了复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的作用机制可能与协同调控多个关键靶点和通路有关。本研究可为中药注射剂治疗不同类型恶性肿瘤的作用机制研究提供线索和思路,为进一步开展复方苦参注射液治疗肝癌、胰腺癌、肺癌的基础实验研究以及促进治疗肝癌、胰腺癌、肺癌中药的临床合理应用提供参考和借鉴。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 中药单体槲皮素抑制肝癌细胞增殖转移的机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验细胞系 |
| 2. 实验动物 |
| 3. 实验试剂及实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 细胞培养 |
| 2. 细胞药物处理 |
| 3. 细胞增殖实验 |
| 4. 细胞迁移和侵袭实验 |
| 5. 细胞凋亡实验 |
| 6. 裸鼠荷瘤及给药模型的构建 |
| 7. 统计分析 |
| 二、结果 |
| 1. 槲皮素可以抑制HCC细胞的增殖 |
| 2. 槲皮素可以诱导HCC细胞的凋亡 |
| 3. 槲皮素可以抑制HCC细胞的侵袭及转移 |
| 4. 槲皮素可以抑制体内HCC的生长 |
| 三、分析与讨论 |
| (一)中药治疗HCC的认识及发展 |
| 1. 中医对肝癌的认识 |
| 2. 肝癌的中医病因学研究 |
| 3. 肝癌的中医治疗思想 |
| 4. 肝癌常用的治疗方剂与中药 |
| 5. 中药可改善HCC患者症状及预后 |
| 6. 中药可改善化疗药物的副反应 |
| 7. 中药治疗HCC的分子机制 |
| 8. 中医治疗HCC的挑战 |
| (二) 槲皮素的肝脏保护作用和抗肿瘤机制研究 |
| 1. 槲皮素广泛存在于抗肿瘤中药且安全低毒 |
| 2. 槲皮素对肝脏具有多重保护作用 |
| 3. 槲皮素治疗HCC的机制 |
| 四、小结 |
| 第二部分 槲皮素靶向人抗原蛋白HuR调控LINC01123治疗肝癌的机制研究 |
| 第一章 长链非编码RNA LINC01123通过调节miR-34a-5p/TUFT1轴促进肝癌细胞的增殖和侵袭 |
| 一、材料与方法 |
| (一)实验材料 |
| (二)实验方法 |
| 1. 临床样本的收集分析 |
| 2. 细胞转染 |
| 3. 组织或细胞的RNA提取 |
| 4. 荧光定量PCR |
| 5. 细胞增殖实验 |
| 6. 细胞迁移和侵袭实验 |
| 7. 蛋白样品制备及免疫印迹实验 |
| 8. 双荧光素酶报告基因检测系统实验 |
| 9. RNA免疫共沉淀分析 |
| 10. 裸鼠荷瘤模型的构建 |
| 11. 生物信息学分析 |
| 12. 统计分析 |
| 二、结果 |
| 1. LINC01123在HCC组织中表达上调,与患者的预后不良相关 |
| 2. LINC01123促进HCC细胞增殖和侵袭 |
| 3. LINC01123沉默抑制了体内HCC的生长 |
| 4. LINC01123通过海绵吸附作用,靶向结合miR-34a-5p |
| 5. LINC01123可通过miR-34a-5p/TUFT1轴促进HCC进展 |
| 三、分析与讨论 |
| 四、小结 |
| 第二章 HuR可增加LINC01123的稳定性并促进其表达 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 生物信息学分析 |
| 2. 细胞转染 |
| 3. HuR敲低的细胞系中LINC01123半衰期的测定 |
| 4. RNA免疫共沉淀分析 |
| 5. 细胞RNA的提取 |
| 6. 荧光定量PCR |
| 7. 蛋白样品制备及免疫印迹实验 |
| 8. 统计分析 |
| 二、结果 |
| 1. HuR在HCC组织中高表达,与LINC01123的表达量呈正相关关系 |
| 2. LINC01123与HuR存在潜在的结合可能 |
| 3. HuR能增加LINC01123的稳定性,并单向促进LINC01123的表达 |
| 三、分析与讨论 |
| 四、小结 |
| 第三章 槲皮素靶向HuR作用于LINC01123抑制HCC的增殖与转移 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 实验材料 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 生物信息学分析 |
| 2. 细胞药物处理 |
| 3. 细胞RNA的提取 |
| 4. 荧光定量PCR |
| 5. 细胞增殖实验 |
| 6. 细胞迁移及侵袭实验 |
| 7. 细胞凋亡实验 |
| 8. 蛋白样品制备及免疫印迹实验 |
| 9. 统计分析 |
| 二、结果 |
| 1. HuR是槲皮素的潜在作用靶点 |
| 2. 槲皮素通过靶向HuR下调LINC01123的表达并抑制HCC的进展 |
| 三、分析与讨论 |
| 四、小结 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 学术成果 |
| 致谢 |
| 文献综述 人抗原蛋白R与肿瘤耐药机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂、细胞株 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 吴茱萸碱抑制胰腺癌细胞中LDHA和 MMP16 的蛋白表达 |
| 2.2 双荧光素酶实验 |
| 2.3 吴茱萸碱诱导胰腺癌细胞中miR-489 的表达 |
| 2.4 miR-489 转染胰腺癌细胞后抑制LDHA mRNA和蛋白表达水平 |
| 2.5 miR-489 抑制胰腺癌细胞增殖 |
| 2.6 miR-489 抑制胰腺癌细胞伤痕愈合能力 |
| 2.7 miR-489 抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭能力 |
| 2.8 miR-489 抑制胰腺癌细胞有氧糖酵解 |
| 2.9 miR-489 在胰腺癌细胞中抑制AKT信号通路的活化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 microRNAs调控肿瘤有氧糖酵解的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:生物信息学分析滨蒿内酯抑制胰腺癌的关键基因 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 获得药物分子结构 |
| 2.2 预测药物靶点 |
| 2.3 预测胰腺癌靶点 |
| 2.4 潜在作用靶点GO分析及通路分析 |
| 2.5 蛋白质相互作用网络的构建 |
| 2.6 候选关键基因的表达模式 |
| 3 结果 |
| 3.1 滨蒿内酯潜在作用靶点 |
| 3.2 靶点富集分析 |
| 3.3 蛋白质相互作用网络的构建 |
| 3.4 验证候选关键基因的表达模式 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:滨蒿内酯通过PI3K/Akt信号通路对胰腺癌的抑制作用 |
| 6 前言 |
| 7 材料与方法 |
| 7.1 试剂和仪器 |
| 7.1.1 主要试剂与材料 |
| 7.1.2 主要仪器 |
| 7.2 步骤与方法 |
| 7.2.1 细胞培养 |
| 7.2.2 CCK8实验检测细胞增殖 |
| 7.2.3 划痕实验检测细胞迁移 |
| 7.2.4 Transwell实验检测细胞迁移及侵袭 |
| 7.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 7.2.6 流式细胞术检测细胞周期 |
| 7.2.7 细胞RNA的提取 |
| 7.2.8 mRNA反转录成cDNA |
| 7.2.9 PCR实验测定Akt1及MAPK8的表达 |
| 7.2.10 细胞蛋白的提取 |
| 7.2.11 蛋白浓度测定 |
| 7.2.12 western blot检测细胞迁移、凋亡相关蛋白及信号通路相关分子的表达 |
| 7.2.13 裸鼠种瘤 |
| 7.2.14 制作肿瘤病理切片 |
| 7.2.15 免疫组化检测Ki67及PCNA表达 |
| 7.2.16 统计学分析 |
| 8 结果 |
| 8.1 CCK8实验验证滨蒿内酯抑制胰腺癌细胞增殖 |
| 8.2 划痕实验验证滨蒿内酯抑制胰腺癌细胞迁移 |
| 8.3 Transwell实验验证滨蒿内酯抑制胰腺癌细胞迁移及侵袭 |
| 8.4 流式细胞术验证滨蒿内酯诱导胰腺癌细胞凋亡 |
| 8.5 流式细胞术验证滨蒿内酯引起胰腺癌细胞周期停滞 |
| 8.6 qRT-PCR实验验证滨蒿内酯对Akt1及MAPK8表达的影响 |
| 8.7 western blot实验验证滨蒿内酯对细胞迁移、凋亡相关蛋白及信号通路相关分子表达的影响 |
| 8.8 裸鼠成瘤实验验证滨蒿内酯对胰腺癌的抑制作用 |
| 8.9 免疫组化实验验证滨蒿内酯抑制KI67及PCNA的表达 |
| 9 讨论 |
| 10 结论 |
| 第三部分:PI3K/Akt信号通路激动剂对滨蒿内酯抑制胰腺癌作用的影响 |
| 11 前言 |
| 12 材料与方法 |
| 12.1 试剂和仪器 |
| 12.1.1 主要试剂与材料 |
| 12.1.2 主要仪器 |
| 12.2 步骤与方法 |
| 12.2.1 细胞培养及分组 |
| 12.2.2 CCK8实验检测细胞增殖 |
| 12.2.3 划痕实验检测细胞迁移 |
| 12.2.4 Transwell实验检测细胞迁移及侵袭 |
| 12.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 12.2.6 流式细胞术检测细胞周期 |
| 12.2.7 细胞蛋白的提取 |
| 12.2.8 蛋白浓度测定 |
| 12.2.9 western blot检测细胞迁移及凋亡相关蛋白及信号通路相关分子的表达 |
| 12.2.10 统计学分析 |
| 13 结果 |
| 13.1 CCK8实验验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞增殖的抑制作用 |
| 13.2 划痕实验验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞迁移的抑制作用 |
| 13.3 Transwell实验验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞迁移及侵袭的抑制 |
| 13.4 流式细胞术验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞凋亡的诱导 |
| 13.5 流式细胞术验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对胰腺癌细胞周期停滞的诱导 |
| 13.6 Western blot实验验证PI3K/Akt信号通路激动剂SC79逆转滨蒿内酯对细胞迁移及凋亡相关蛋白及信号通路相关分子表达的影响 |
| 14 讨论 |
| 15 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 天然产物在胰腺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 结直肠癌(CRC)简述 |
| 1.2 microRNAs与CRC关系 |
| 1.3 LncRNAs与CRC关系 |
| 1.4 结直肠癌的早筛 |
| 1.4.1 目前用于平均风险人群的CRC筛查主要包括以下方法 |
| 1.4.2 microRNAs可作为肿瘤的早期筛查指标 |
| 1.5 MIR17HG及其在结直肠癌中的作用 |
| 1.6 本课题的研究目标和意义 |
| 第二章 LncRNAs,miRNAs及GREM1基因多态性与中国陕西汉族结直肠癌风险的相关性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 主要仪器及试剂 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.4 统计分析方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 参与者的基本特征 |
| 2.3.2 HWE检验结果 |
| 2.3.3 等位基因分布及与CRC风险的关系 |
| 2.3.4 遗传模型下SNPs与CRC风险的关系 |
| 2.3.5 SNPs与CRC风险相关分层分析 |
| 2.3.6 SNPs与CRC临床特征相关性 |
| 2.3.7 单倍型与CRC风险的关系 |
| 2.3.8 多个SNPs交互作用的MDR分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 MIR137HG和MIR577多态性与CRC的关系 |
| 2.4.2 MIR143HG多态性与CRC的关系 |
| 2.4.3 MIR3142HG多态性与CRC的关系 |
| 2.4.4 LINC-PINT多态性与CRC的关系 |
| 2.4.5 MIR124-1HG多态性与CRC的关系 |
| 2.4.6 MIR608多态性与CRC的关系 |
| 2.4.7 H19和MIR675多态性与CRC的关系 |
| 2.4.8 MIR192、MIR618和MIR492多态性与CRC的关系 |
| 2.4.9 MIR17HG多态性与CRC的关系 |
| 2.4.10 GREM1 多态性与CRC的关系 |
| 2.4.11 MIR497HG、MIR423和MIR133A1HG多态性与CRC的关系 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 MIR17HG及其编码的micro RNAs在结直肠癌中的表达及临床信息关联的生物信息学分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 研究对象 |
| 3.2.2 研究方法 |
| 3.2.3 统计方法 |
| 3.3 研究结果 |
| 3.3.1 MIR17HG的泛癌分析 |
| 3.3.2 MIR17HG在结直肠癌中的表达与临床预后分析 |
| 3.3.3 miR-17-92a簇在结直肠癌与癌旁正常组织中的表达及临床预后分析 |
| 3.3.4 miR-17-92a簇在结直肠癌病例与健康对照,病例不同分期中血清中的表达及预后分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 miR-17-92a簇在大多数肿瘤及CRC中高表达 |
| 3.4.2 miR-17-92a簇的microRNAs在大多数肿瘤及结直肠癌组织中高表达 |
| 3.4.3 miR-17-92a簇的microRNAs在CRC病例血清中高表达 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 miR-17-92簇在结直肠癌病例与健康人群血清中的表达分析及诊断作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 研究方法 |
| 4.2.1 研究对象 |
| 4.2.2 主要仪器和试剂 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.2.4 统计学方法 |
| 4.3 研究结果 |
| 4.3.1 研究对象基本特征 |
| 4.3.2 病例组与对照组血清学指标 |
| 4.3.3 血清中microRNA的相对表达量 |
| 4.3.4 CEA、AFP、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-92a-1诊断结直肠癌的ROC曲线 |
| 4.3.5 CEA、AFP、hsa-miR-18a-5p联合诊断结直肠癌的ROC曲线 |
| 4.3.6 各指标与结直肠癌分期的相关性分析 |
| 4.3.7 hsa-miR-18a-5p、CEA对早期结直肠的诊断的ROC曲线 |
| 4.3.8 各指标区分早晚结直肠癌的ROC曲线 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 糖蛋白癌胚抗原和甲胎蛋白 |
| 4.4.2 miR-17-92a簇作为血清肿瘤诊断标志物的应用 |
| 4.4.3 hsa-miR-18a-5p作为血清肿瘤诊断标志物的应用 |
| 4.5 结论 |
| 第五章 hsa-miR-18a-5p对结直肠癌细胞生物学功能的影响及候选靶基因分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 研究方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 主要仪器及试剂 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.2.4 统计方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 hsa-miR-18a-5p在结直肠癌细胞系中表达上调 |
| 5.3.2 结直肠癌细胞中hsa-miR-18a-5p干预效果 |
| 5.3.3 hsa-miR-18a-5p差异表达对结直肠癌细胞增殖的影响 |
| 5.3.4 hsa-miR-18a-5p差异表达对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响 |
| 5.3.5 hsa-miR-18a-5p差异表达对结直肠癌细胞凋亡的影响 |
| 5.3.6 结直肠癌表达差异基因及功能注释 |
| 5.3.7 hsa-miR-18a-5p靶基因及其预后分析 |
| 5.3.8 关键靶基因分析 |
| 5.3.9 靶基因LIF与hsa-miR-18a-5p结合位点预测 |
| 5.3.10 Western Blot检测LIF与hsa-miR-18a-5p表达关系 |
| 5.3.11 LIF功能预测 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 hsa-miR-18a-5p促进肿瘤发生发展 |
| 5.4.2 hsa-miR-18a-5p抑制肿瘤发生发展 |
| 5.4.3 在不同发育阶段和不同组织学亚型的同一器官的癌症中已观察到hsa-miR-18a的相反作用 |
| 5.4.4 hsa-miR-18a-5p抑制结直肠癌的发生发展 |
| 5.5 结论 |
| 结语和展望 |
| 参考文献 |
| 附录1:基因与泛癌的相关性 |
| 附录2:HCT116细胞鉴定证明 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间的科研成果 |
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一章 绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡 |
| 第一节 Gypenoside L和gypenoside LI抑制乳腺癌细胞增殖 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第二节 Gypenoside L和gypenoside LI抑制乳腺癌细胞迁移 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第三节 Gypenoside L和gypenoside LI诱导乳腺癌细胞凋亡 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第四节 结论与讨论 |
| 第二章 Gypenoside LI下调E2F1使乳腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期 |
| 第一节 Gypenoside LI影响乳腺癌细胞转录组 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第二节 Gypenoside LI诱导乳腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第三节 Gypenoside LI通过下调E2F1使乳腺癌细胞阻滞在G0/G1期 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第四节 Gypenoside LI通过下调ERCC6L抑制乳腺癌细胞增殖 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第五节 E2F1可调控ERCC6L的表达 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第六节 结论与讨论 |
| 第三章 Gypenoside L诱导乳腺癌细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡机制研究 |
| 第一节 Gypenoside L影响乳腺癌细胞转录组 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第二节 Gypenoside L诱导乳腺癌细胞周期阻滞在G2/M期 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第三节 Gypenoside L下调乳腺癌细胞中ERCC6L的表达可能与有丝分裂有关 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第四节 Gypenoside L诱导乳腺癌细胞产生ROS |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验小结 |
| 第五节 结论与讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 天然产物调节转录因子预防及治疗癌症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 攻读学位期间主持及主要参与课题 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 circ_0027089 在乙肝相关肝癌细胞中的表达及功能研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 细胞与主要试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 配置溶液 |
| 2.4 肝癌组织来源 |
| 2.5 细胞培养 |
| 2.6 qPCR检测肝癌细胞中HBV DNA水平 |
| 2.7 细胞转染 |
| 2.8 实验分组 |
| 2.9 qRT-PCR实验检测circ_0027089 的表达水平 |
| 2.10 CCK8 实验检测细胞活力 |
| 2.11 平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力 |
| 2.12 流式细胞术检测细胞凋亡率 |
| 2.13 Caspase3/7 活力测定 |
| 2.14 检测细胞周期 |
| 2.15 划痕实验 |
| 2.16 Transwell小室实验检测细胞侵袭 |
| 2.17 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 乙肝相关的肝癌细胞中HBV DNA复制水平 |
| 3.2 circ_0027089 在肝癌组织和细胞中的表达 |
| 3.3 过表达circ_0027089 可促进乙肝病毒相关肝癌细胞增殖,并抑制凋亡 |
| 3.4 过表达circ_0027089 促进细胞周期进程 |
| 3.5 过表达circ_0027089 促进细胞迁移和侵袭 |
| 3.6 敲低circ_0027089 可抑制乙肝病毒相关肝癌细胞增殖,并促进凋亡 |
| 3.7 敲低circ_0027089 抑制细胞周期进程 |
| 3.8 敲低circ_0027089 抑制细胞迁移和侵袭 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 circ_0027089/miR-136-5p/NACC1 在乙肝相关肝癌细胞中的分子机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 细胞与主要试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 细胞培养 |
| 2.4 主要溶液配制 |
| 2.5 细胞转染 |
| 2.6 实验分组 |
| 2.7 qRT-PCR实验检测miR-136-5p、NACC1 mRNA的表达水平 |
| 2.8 CCK8 实验检测细胞活力 |
| 2.9 平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力 |
| 2.10 流式细胞术检测细胞凋亡率 |
| 2.11 Caspase3/7 活力测定 |
| 2.12 检测细胞周期 |
| 2.13 划痕实验 |
| 2.14 Transwell小室实验检测细胞侵袭 |
| 2.15 双荧光素酶报告基因实验 |
| 2.16 RIP实验 |
| 2.17 Western blot实验检测NACC1 蛋白表达量 |
| 2.18 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 circBank、双荧光标记和 RIP实验预测circ_0027089和miR-136-5p靶向结合 |
| 3.2 miR-136-5p在肝癌组织和细胞中低表达 |
| 3.3 circ_0027089 基因敲低通过增加miR-136-5p的表达抑制肝癌细胞增殖和周期,并促进凋亡 |
| 3.4 circ_0027089 基因敲低通过增加miR-136-5p的表达抑制细胞周期进程 |
| 3.5 circ_0027089 基因敲低通过增加miR-136-5p的表达抑制细胞迁移和侵袭 |
| 3.6 starbase、双荧光素酶标记和RIP实验预测NACC1与miR-136-5p存在靶向关系 |
| 3.7 NACC1 在肝癌组织和细胞中高表达 |
| 3.8 过表达 NACC1 可以恢复过表达 miR-136-5p对细胞增殖和凋亡的影响 |
| 3.9 过表达 NACC 1 可以恢复过表达 miR- 136-5p对细胞周期的影响 |
| 3.10 过表达 NACC1 可以恢复过表达 miR-136-5p对细胞迁移和侵袭的影响 |
| 3.11 circ_0027089 可通过靶向作用miR-136-5p调控NACC1 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 敲低circ_0027089 抑制了体内肿瘤的生长 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 敲低circ_0027089 抑制体内肿瘤生长 |
| 3.2 敲低circ_0027089对miR-136-5p和 NACC1 表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 非编码RNA在肝癌发生及发展过程中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 靶基因预测 |
| 1.2.2 结肠癌SW480细胞培养及转染 |
| 1.2.3 荧光素酶报告基因实验 |
| 1.2.4 RT-PCR |
| 1.2.5 Western blot |
| 1.2.6 克隆形成实验 |
| 1.2.7 Transwell检测 |
| 1.2.8 体内实验 |
| 1.2.9 免疫组化 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 靶向关系预测 |
| 2.2 miR-125a-5p过表达抑制结肠癌SW480细胞生长 |
| 2.3 miR-125a-5p过表达抑制结肠癌SW480细胞侵袭 |
| 2.4 miR-125a-5p过表达抑制结肠癌SW480细胞上皮间质转化 |
| 2.5 Western blot检测STAT3下游靶基因Bcl-2、c-Myc和cycD表达 |
| 2.6 裸鼠体内实验 |
| 3 讨论 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 1. 胰腺癌的靶向治疗现状 |
| 2. 细胞周期蛋白依赖性激酶CDKs在肿瘤中的研究 |
| 3. 抗凋亡蛋白Mcl-1 |
| 4. 研究方案 |
| 5. 参考文献 |
| 第一部分 敲减CDK1对胰腺癌体内外生长的影响 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 3. 实验结果与讨论 |
| 4. 小结 |
| 5. 参考文献 |
| 第二部分 CDK1在胰腺癌患者中的表达及临床意义 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 参考文献 |
| 第三部分 CDK1抑制剂抗胰腺癌活性与及作用机制研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 3. 实验结果与讨论 |
| 4. 小结 |
| 5. 参考文献 |
| 第四部分 新型CDK1抑制剂和相关抗凋亡蛋白Mcl-1抑制剂的研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料与方法 |
| 3. 实验结果与讨论 |
| 3.1 CDK1小分子抑制剂的虚拟筛选 |
| 3.2 Mcl-1小分子抑制剂的虚拟筛选 |
| 3.3 Mcl-1抑制剂M02和M08的抗胰腺癌活性 |
| 4. 小结 |
| 5. 参考文献 |
| 综述: CDKs在胰腺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| English manuscript Ⅰ Structure-based virtual screening, biological evaluation and biophysical study of novel Mcl-1 inhibitors |
| English manuscript Ⅱ Recent progress in development of cyclin-dependent kinase 7 inhibitors for cancer therapy |
| 缩略表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 TMPO-AS1/MIR-873-3P/TRIM11在胰腺癌患者中的表达与预后的关系 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 第二章 TMPO-AS1/MIR-873-3P/TRIM11促进胰腺癌的进展 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 第三章 TRIM11通过调控自噬促进胰腺癌进展的作用与机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 自噬作用在胰腺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 复方苦参注射液抗肿瘤作用机制研究进展 |
| 综述二 复方苦参注射液临床应用进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于整合生物信息学的复方苦参注射液治疗三种常见肿瘤作用机制研究 |
| 一、基于生物信息学的肝癌关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 二、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗肝癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 三、基于生物信息学的胰腺癌关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 四、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗胰腺癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 五、基于网络药理学的复方苦参注射液治疗肺癌作用机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 技术路线 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 1 研究成果 |
| 2 研究的创新与特色 |
| 3 研究的展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
