杨莉[1]（2019）在《益母草碱对肉仔鸡的免疫和抗氧化作用及其机制研究》文中认为目的:研究益母草碱对肉仔鸡生长性能,免疫功能、抗氧化活性以及肠道黏膜屏障保护作用的调控机制,为益母草碱在肉鸡养殖中的应用提供理论依据。方法:（1）将600只1日龄ROSS 308肉仔鸡随机分为5个处理组,每个处理组8个重复,每个重复15只鸡。每个处理组分别是在基础饲粮中添加0,15,30,60,120 mg/kg的益母草碱,整个试验分为中期（021日龄）和后期（2242）两个阶段。通过检测不同水平益母草碱对肉仔鸡生长性能,免疫器官指数、抗体效价、血脂含量以及血清免疫抗氧化等指标,确定益母草碱的最佳添加水平。（2）在上一部分研究结果的基础上,采用2×2因子随机区组设计,以添加益母草碱（0或者120 mg/kg）和LPS（腹腔注射生理盐水或者1.5 mg/kg BW的LPS）攻毒作为处理因素,将120只1日龄健康、体重相近的肉仔鸡,随机分为2个处理组,每个处理组12个重复,每个重复5只。第14、16、18和20天,从每个处理组选出半数肉仔鸡腹腔注射LPS,另一半注射相同剂量的生理盐水,检测21和28日龄肉仔鸡生长性能、免疫器官指数、血清和脾脏免疫抗氧化水平,了解益母草碱对LPS诱导的炎症反应和氧化应激是否有缓解作用,为后续研究提供试验依据。（3）在试验二的基础上,采集21和28日龄肉仔鸡十二指肠、空肠以及回肠黏膜和其内容物,通过检测其小肠黏膜形态、肠道菌群数量变化以及肠黏膜抗氧化指标,观察益母草碱对LPS诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用;通过荧光定量PCR检测炎性因子和炎性介质的mRNA表达水平,探究益母草碱对炎症反应的调控作用;通过Western Blot检测紧密连接蛋白和MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的磷酸化水平,明确益母草碱缓解肠道炎症反应和氧化应激的作用机制。（4）采用14胚龄的SPF鸡胚原代分离肠上皮细胞,建立体外培养模型,采用CCK-8法检测细胞活力,确定益母草碱和LPS的最佳处理浓度和时间;通过荧光定量PCR检测炎性因子、抗氧化酶和紧密连接蛋白mRNA的表达水平,探明益母草碱对LPS诱导的肠上皮细胞炎症反应的保护作用;通过Western Blot检测相关信号通路因子的磷酸化水平,明确益母草碱对缓解体内和体外肠道屏障功能损伤影响的作用机制是否一致。结果:（1）在饲粮中添加益母草碱对全期肉鸡的生长性能无明显影响,但益母草碱显着增加脾脏指数、新城疫抗体效价、血清中IgA、IgM、CAT、T-SOD、T-AOC、LDL-C、HDL-C的含量,能够显着降低血清中MDA、TC以及CHOL的含量（P<0.05）。此外,还可以显着增加42日龄肉仔鸡血清中GSH的活性（P<0.05）。但对法氏囊和胸腺指数、传染性法氏囊抗体滴度、血清中IgG、IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度无显着影响（P>0.05）。综上所述,饲粮补充益母草碱可提高肉鸡的免疫功能和抗氧化能力,降低肉鸡的血脂水平。（2）在饲粮中添加益母草碱对LPS应激前后肉仔鸡（1-14天,22-28天）的生长性能和血清中免疫球蛋白含量无显着差异。在LPS应激期（14-21）和恢复期（21-28）,益母草碱可有效缓解LPS诱导的肉仔鸡ADG和ADFI的降低、脾脏指数的增加、血清和脾脏MDA水平的升高以及GSH和SOD活力的下降（P<0.05）。此外,添加益母草碱可显着减轻LPS诱导的血清和脾脏中IL-1β、IL-6和TNF-α水平的增加（P<0.05）,并显着降低脾脏中NF-κB mRNA的表达量（P<0.05）。（3）经LPS诱导可显着破坏肉仔鸡十二指肠和空肠的黏膜形态,提高其血清中二胺氧化酶和D-乳酸的含量、小肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌的数量和MDA的水平,降低十二指肠和空肠黏膜中GSH和T-SOD活性以及乳酸杆菌的数量（P<0.05）。而在饲料中添加益母草碱能显着缓解LPS对十二指肠和空肠的影响（P<0.05）,对回肠的作用不显着（P>0.05）。与此同时,添加益母草碱还可显着下调因LPS诱导空肠黏膜中NF-κB、COX-2、TNF-α、IL-1β以及IL-l-6 mRNA的表达量的升高（P<0.05）,上调ZO-1和Occludin mRNA的表达量（P<0.05）。另外,益母草碱还抑制了LPS诱导的p38、ERK and JNK MAPKs信号通路的激活、IκBα磷酸化和NF-κB的核易位。（4）经检测,采用40μM/mL益母草碱预处理3 h后,可显着缓解LPS诱导的肠上皮细胞的凋亡,益母草碱能通过提高SOD1、GPX1、ZO-1以及Occludin基因表达量（P<0.05）,降低iNOS、COX-2、TNF-α以及IL-1β的表达量（P<0.05）,抑制MAPK/NF-κB信号通路的激活,从而缓解LPS应激对肠上皮细胞造成的损伤,保护细胞的完整性。结论:在饲粮中添加120 mg/kg的益母草碱可显着增强肉鸡的免疫功能和抗氧化水平,缓解由LPS诱导引起的肉鸡肠道炎症反应、氧化应激以及黏膜屏障功能的损伤,其保护作用的机制是通过抑制NF-κB核转位和MAPK信号通路关键分子的磷酸化,阻碍炎性因子和炎性介质的表达,并通过提高抗氧化酶的活性,进而干预LPS引起的炎症反应和氧化应激;抑制肠道病原菌的过渡繁殖,调节紧密连接蛋白的表达,进而维持肠道黏膜屏障的稳定和完整性。本试验为抗应激新饲料添加剂的开发提供了新的理论依据。
徐婧[2]（2016）在《黄连对LPS诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用研究》文中研究表明严重的创伤、感染可导致机体炎症反应失控,最终引发内毒素血症及肝功能衰竭。研究表明,黄连（Rhizoma Coptis,RC）具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、止痛、降血糖、保肝解毒等诸多生物学活性,但其对LPS引起的肝细胞损伤的保护及其作用机制尚未见报道。故本试验以黄连（RC）水提物为试验药物、地塞米松（Dexamethasone,DEX）为阳性对照药物、体外培养的大鼠肝细胞（BRL cells）为靶细胞,采用脂多糖（LPS）构建肝细胞损伤模型后,进行以下几方面的研究:CCK-8法筛选RC的无毒浓度及LPS的损伤浓度,CCK-8法检测RC与LPS共同作用于BRL细胞24 h时细胞存活率,流式细胞术检测BRL细胞凋亡率,RT-PCR检测TLR4上的NF-κB、IRF3两条信号传导通路上mRNA相对表达量变化,荧光倒置显微镜观察NF-κB p65蛋白核转移等。结果如下:（1）筛选RC的无毒浓度及LPS的损伤浓度:RC的无毒浓度为0.175 mg/mL,LPS的损伤浓度为0.1 mg/mL;同时发现,RC浓度在0.06250.125 mg/mL时对BRL细胞有促增值作用。经再次筛选,认为0.1 mg/mL RC促增殖作用最好。（2）RC与LPS共同作用于BRL细胞24 h时细胞存活率检测:CCK-8结果表明,与LPS处理组相比,RC在0.175 mg/mL时能使BRL细胞存活率从73.79%增加至81.62%;0.1 mg/mL时能使BRL细胞存活率升高至91.23%。即RC浓度为0.1 mg/mL时,保护作用较好。（3）细胞凋亡率检测:BRL细胞正常对照组、LPS处理组、0.175 mg/mL RC+LPS干预组、0.1 mg/mL RC+LPS干预组、0.0001 mg/mL Dex+LPS阳性对照组的总凋亡率（%）分别为:0.32±0.04、19.26±0.65、16.43±0.73、9.33±0.47、6.34±0.43。RC干预组与LPS处理组比较,细胞总凋亡率显着下降（p<0.01）,其中,RC为0.1mg/mL能使BRL细胞凋亡率由19.26%降低至9.33%。可见RC能有效抑制LPS诱导的BRL细胞凋亡,且RC在0.1 mg/mL时效果更好。（4）荧光定量PCR检测:与正常对照组相比,LPS处理组可使TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IRF3 mRNA的表达显着上升（p<0.05）,说明LPS诱导的损伤通过TLR4/NF-κB通路和TLR4/IRF3通路,最终导致炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α释放,从而损伤肝细胞;与LPS处理组相比,RC干预组均可抑制上述基因表达上调（p<0.05）,对肝细胞损伤起到保护作用,其机制与TLR4/NF-κB通路和TLR4/IRF3通路有关。（5）免疫荧光检测:BRL细胞正常对照组中,FITC标记的NF-κB p65蛋白主要分布在细胞质中,显现绿色荧光,DAPI染色后细胞核呈蓝色荧光;LPS处理的BRL细胞,胞质中绿色荧光减弱,胞核颜色由深蓝色变为浅绿色;经RC处理后,BRL细胞核颜色变为不同程度的蓝绿色。该结果表明,在LPS作用下部分NF-κB p65蛋白由细胞质转移到了细胞核,而RC干预组均可不同程度的抑制LPS诱导的NF-κB p65核转移,且RC在0.1 mg/mL时效果明显。结论:黄连对LPS诱导的大鼠肝细胞损伤具有明显保护作用,能显着改善细胞生长状态,减轻LPS导致的细胞毒性,降低细胞凋亡率。其机制为,黄连可以影响TLR4信号通路,阻碍NF-κB和IRF3通路激活,抑制NF-κB p65蛋白入核,减少炎症因子如TNF-α、IL-1β、IL-6等的释放。
华永丽[3]（2014）在《当归挥发油干预大鼠LPS炎症模型的相关代谢物及代谢通路分析》文中研究表明代谢组学技术的发展为中国传统兽医药学的现代化研究提供了一种选择，将代谢组学技术应用到中兽药药效评价方面具有广阔的前景。本论文以当归挥发油为研究对象，气相-质谱联用（GC-MS）为分析技术，建立了甘肃道地药材当归挥发油化学成分指纹图谱；在此基础上，建立大鼠炎症模型并利用当归挥发油进行干预，采用代谢组学研究策略，进行了当归挥发油的抗炎机制研究，从机体整体水平揭示其抗炎的机理；将整合化的策略应用到研究中，分析了当归挥发油抗炎相关的代谢物、代谢通路以及与当归挥发油抗炎作用相关的细胞因子之间的关系，为甘肃道地药材当归的开发利用、诠释当归挥发油抗炎机制提供了基础研究资料，而且为解决中药的整体效应和物质基础提供新思路和新方法。主要研究结果如下：1.采用水蒸汽蒸馏法和有机溶剂石油醚提取当归挥发油，使用GC-MS测定了其主要化学组成。主要化学成分为Z-藁本内酯、罗汉柏烯、-雪松烯、2-甲氧基苯酚、（+）-香橙烯、-甜没药烯、（-）-匙叶桉油烯醇、Z-丁烯基酞内酯、E-藳本内酯等。对甘肃15个采样地的当归挥发油GC-MS检测结果进行相似度评价和主成分分析，结果表明相似度均大于0.900，甘肃不同地区的当归挥发油化学成分之间没用明显的差异。2.采用腹腔注射脂多糖（LPS，100μg/kg），建立大鼠LPS炎症模型。给予当归挥发油低剂量组（OVASL，0.088g/kg）、当归挥发油中剂量组（OVASM，0.176g/kg）、当归挥发油高剂量组（OVASH，0.352g/kg）干预，阳性对照地塞米松（Dex）、空白对照组（KB）。LPS注射8h后，取血液测定血常规，分离血清测定生化指标及相关细胞因子、炎性介质，分离血浆、接取尿液、取肺组织、肝组织用于GC-MS代谢组学分析。当归挥发油各剂量组均可以降低大鼠LPS炎症模型组白细胞（WBC）、谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）、碱性磷酸酶测定（ALP），显示当归挥发油能有效地抑制大鼠体内的炎症症状和对大鼠的肝脏损伤有一定保护作用，减少了LPS对其伤害。当归挥发油的抗炎机制可能是抑制LPS诱导的巨噬细胞分泌炎症介质一氧化氮（NO）和促炎细胞因子肿瘤坏死因子α （TNF-α）、白介素6（IL-6）、白介素1β （IL-lβ）、白介素8（IL-8），促进抗炎细胞因子白介素（IL-10）分泌，以及抑制组胺（HIS）、5-羟色胺（5-HT）炎性介质的释放，其中OVASM效果最好。3.采用GC-MS测定空白对照组（KB）、LPS炎症模型组、Dex、OVASL、OVASM、OVASH各组血浆、肝组织、肺组织、尿液中代谢物，分别鉴定和推测出72、70、66、80种代谢物。应用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）对各组血浆、肝组织、肺组织、尿液GC-MS数据进行分析，发现KB、LPS炎症模型组得到完全分离，Dex、OVASL、OVASM、OVASH靠近对照组，表明炎症模型复制成功，且Dex、OVASL、OVASM、OVASH能够干预大鼠的炎症反应，表现恢复到正常状态的趋势。通过重要变量投影因子（VIP）及非参数检验筛选出血浆、肝组织、肺组织、尿液中的差异代谢物，其中OVASM表现出潜在的药理效应，调节多个差异代谢物到正常状态。运用代谢组学途径分析（Metabolomics PathwayAnalysis, MetPA）数据库对差异代谢物的代谢途径进行分析。（1）血浆中筛选出32种差异代谢物，这些差异代谢物与脂肪酸代谢、糖酵解、甘氨酸、尿素代谢有关，提示当归挥发油抗炎作用可能是通过调节血浆中尿素含量，使蛋白质的合成恢复；增加血浆中甘氨酸，发挥直接作用靶细胞或间接调节炎症因子起到细胞保护作用，从而缓解炎症反应；恢复脂类代谢紊乱，肝X受体表达上调，以发挥抗炎作用。（2）肝组织中筛选出23种差异代谢物，这些差异代谢物与亚油酸代谢、半乳糖代谢、甘油酯代谢和花生四烯酸（AA）代谢有重要的相关性，提示当归挥发油抗炎作用可能是通过降低肝脏中游离脂肪酸和甘油的含量，以减少炎性因子的释放和促进抗炎因子释放；提高半乳糖的含量，使肝脏中半乳糖的代谢正常。（3）肺组织中筛选出27差异代谢物，这些差异代谢物与谷氨酸盐和谷氨酸酯代谢、亚油酸代谢、-亚麻酸的代谢、半乳糖代谢、花生四烯酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、戊醣酸途径；磷酸戊糖途径及甘油酯等代谢通路有重要的相关性，提示当归挥发油抗炎作用可能是通过恢复谷氨酸的生成以阻滞琥珀酸的积聚从而减少炎症因子的释放；减少肺组织匀浆亚油酸含量，使脂类代谢恢复正常从抑制炎症的进程；通过增加二十二碳六烯酸（DHA）的释放，使炎症反应产生时AA释放量减少，抑制炎性介质的产生。（4）尿液中筛选出27差异代谢物，这些差异代谢物与谷氨酸盐和谷氨酸酯代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，半乳糖代谢，花生四烯酸代谢、丙酮酸代谢，戊醣酸途径，柠檬酸循环，氨酰基-tRNA生物合成及糖酵解和糖质新生通路有重要的相关性，提示当归挥发油抗炎作用可能是通过降低尿液中谷氨酸、琥珀酸、丙酮酸含量使三羧酸循环障碍恢复，回调葡萄糖、半乳糖等含量使糖酵解、戊醣酸途径代谢恢复正常，增加丝氨酸、甘氨酸的合成、减少谷氨酸的积累，提高机体的抗氧化能力以发挥抗炎作用。4、采用MetPA数据库构建各组血浆、肝组织匀浆、肺组织匀浆、尿液筛选出的所有差异代谢物的相关代谢通路，其中谷氨酸盐和谷氨酸酯代谢，亚油酸代谢，亚麻酸代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸盐和谷氨酸盐代谢，甘油酯代谢，半乳糖代谢，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸的生物合成，花生四烯酸代谢，戊糖和葡萄糖醛酸酯互换现象，丙酮酸代谢，戊醣酸途径，氨基糖和核苷酸糖代谢，半胱氨酸和蛋氨酸代谢，氨酰基-tRNA生物合成，糖酵解和糖质新生，柠檬酸循环影响值大于0.1，认为这些代谢通路是与LPS致炎、OVASL、OVASM、OVASH、Dex干预作用有密切的相关性。采用Matlab软件对所有差异代谢物及其KB、LPS炎症模型组、OVASL、OVASM、OVASH进行热点聚类分析，所筛选的差异代谢可以表征KB、LPS炎症模型、Dex、OVASM、OVASL、OVASH各组。当归挥发油和地塞米松能回调变化的代谢物，当归挥发油回调的代谢物与地塞米松回调的代谢物有部分重叠，但也存在差异。大鼠LPS所致炎症模型造成代谢紊乱的中心环节可能是三羧酸循环发生障碍、糖酵解促进及脂肪酸代谢紊乱，使相关谷氨酸及谷氨酸酯代谢、支链氨基酸代谢等紊乱，当归挥发油可以促使三羧酸循环、糖酵解及脂肪酸代谢紊乱恢复，从而达到抗炎作用。5.采用Spss软件对所检测到的差异代谢物与检测的炎性因子、炎性介质指标进行相关性分析，表明所筛选琥珀酸、丙酮酸、葡萄糖、乳酸、乙酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸具有生物学意义。综上，当归挥发油通过其多成分（Z-藁本内酯、甲酸、1S--蒎烯、6-十一烷酮、罗汉柏烯、-雪松烯、2-甲氧基苯酚、（+）-香橙烯、-（甜）没药烯、（-）-匙叶桉油烯醇、Z-丁烯基酞内酯、E-藳本内酯）作用于多个代谢通路（谷氨酸盐和谷氨酸酯代谢，亚油酸代谢，亚麻酸代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，甘油酯代谢，半乳糖代谢，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸的生物合成，花生四烯酸代谢，戊糖和葡萄糖醛酸酯互换现象，丙酮酸代谢，戊醣酸途径，糖酵解和糖质新生，三羧酸循环）使LPS炎症所造成的三羧酸循环、糖酵解及脂肪酸代谢等紊乱恢复。所筛选的琥珀酸、丙酮酸、葡萄糖、乳酸、乙酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸等差异代谢物具有生物学意义，可以作为LPS致炎及当归挥发油抗炎的生物标志物。
赵延涛[4]（2011）在《LPS致流产作用及保胎中药的调控效应研究》文中提出繁殖障碍是使家畜繁殖力降低的主要原因,引起繁殖障碍的重要原因之一就是流产。哺乳动物尤其是反刍家畜又以妊娠早期的胚胎丢失几率最高。流产不仅造成胎儿夭折和母畜产奶量损失,延长母畜产仔间隔,而且常常引起胎衣滞留,造成子宫内膜炎,及母畜的习惯性流产,甚至使母畜失去繁殖性能,直接影响家畜的繁殖、品种的改良,给国家和企业造成巨大的经济损失,已经引起人们的高度重视。内毒素（感染或水平上升）是造成流产的一个重要原因,故本研究运用LPS建立小鼠肠道和肝脏损伤、流产和胚胎着床障碍的三种模型,并结合体外细胞培养的方法,探讨内毒素对肝脏的损伤机制及肝脏对内毒素的清除,同时研究LPS诱导小鼠流产和着床障碍的分子机制以及保胎中药的作用机理,为阐明LPS与妊娠母胎界面的免疫关系,寻找能够有效预防和调控妊娠早期胚胎丢失的药物并探索其作用机制,从而减少流产在动物生产中的发生,提高母畜的繁殖力和畜牧业养殖的经济效益。通过对LPS致小鼠肝损伤模型进行研究,发现LPS导致肠道的通透性增加,肠黏膜紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达降低,推测破坏肠黏膜机械屏障可能是LPS对肠黏膜屏障损伤的重要机制之一。同时腹腔注射LPS引起回肠ROS大量蓄积,提示ROS可能参与调节LPS引发的肠黏膜屏障损伤过程。LPS处理组小鼠血清中的ALT/AST显着升高,说明肝细胞受损,肝功能下降。肝脏MDA含量剧增,抗氧化酶SOD、CAT、GPx活性明显降低,意味着LPS引起肝脏ROS的大量蓄积,并引起了脂质过氧化损伤。通过DHE荧光法检测发现LPS同样能引起人肝癌细胞HepG2产生大量的ROS,这一点与体内试验结果一致。同时LPS导致小鼠血中有大量的NO,肝脏的TNF-α、KC的含量明显升高,KC mRNA表达显着升高,肝脏的iNOS蛋白和肝细胞核内的NF-κB表达上升。LPS刺激HepG2之后能使其分泌大量的IL-8,且通过免疫荧光染色发现胞浆中静态的NF-κB被激活,转位于细胞核,参与调节趋化因子IL-8（或KC）的转录。LPS处理24h后,血清中内毒素水平仍明显高于对照组,说明受损的肝脏尚未能彻底清除血液中的内毒素,另一方面肠道通透性增加有可能导致肠腔内大量的内毒素被吸收入血。对LPS诱导孕鼠流产模型研究发现,LPS可显着减低孕鼠的子宫重量和子宫局部的Th2型细胞因子（IL-4和IL-10）含量,升高子宫Th1型细胞因子（主要是IFN-γ,对IL-2作用不明显）含量,使母-胎界面的Th1/Th2细胞因子平衡向着Th1方向偏移,同时诱导子宫内膜内的CD4+T细胞和F4/80巨噬细胞大量聚集,但基本不影响CD8+T细胞的含量。预口服保胎无忧散、泰山磐石散和白术散三种中药方剂的水煎液能调节子宫微环境,提高子宫重量,抑制Th1型细胞因子的分泌,提高Th2型细胞因子的水平,还能显着降低LPS引起的CD4+T细胞和巨噬细胞的增加,同时使子宫CD8+T细胞的数量显着增加,从而调节Th1/Th2的免疫平衡,使其向着有利于正常妊娠的方向发展,显着降低了孕鼠的流产率和胚胎吸收率,并对LPS造成的子宫损伤有一定的修复作用。采用孕3d小鼠腹腔注射LPS的方法成功建立胚胎着床障碍模型。研究发现,LPS处理后,小鼠血清和子宫组织中NOS活性明显增加,子宫中IFN-γ含量显着上升、IL-10含量无显着变化,且呈剂量依赖性,使Th1/Th2平衡向Th1反应方向移动,因此改变了着床期小鼠子宫免疫微环境,导致了胚胎着床障碍。口服0.5 mg或1 mg黄芩苷或槲皮素均能明显拮抗LPS诱导的着床障碍,使平均着床胚胎数显着上升,着床率升高。黄芩苷显着抑制LPS引起的子宫组织中IFN-γ水平的上升,提高子宫IL-10的含量,降低子宫和血清的NOS活性,从而减少NO的过量合成,使其接近于正常妊娠状态。以上结果在LPS处理的体外培养着床期小鼠子宫内膜细胞的模型中,也得到证实。此外槲皮素能通过显着抑制LPS诱导的子宫IFN-γmRNA的高表达,上调子宫组织中TGF-β1 mRNA的表达来调节子宫局部的免疫平衡。黄芩苷和槲皮素均调节子宫局部的免疫平衡,使其向着有利于妊娠建立的Th2反应偏移,发挥保胎促孕功效。综上,LPS通过导致肠道紧密连接蛋白表达降低,肠黏膜屏障受损,引发内毒素血症。大量的LPS刺激Kupffer细胞和肝细胞,产生大量ROS,抗氧化酶活性降低,激活NF-κB,产生大量的炎性介质,加重了肝损伤,清除内毒素的能力下降。LPS诱导的孕鼠流产和着床障碍,主要是通过破坏母胎界面的Th1/Th2免疫平衡状态;而中药方剂和中药成分能够显着拮抗LPS的破坏作用,改善和修复子宫的免疫平衡,使其有利于正常妊娠和着床,发挥其保胎促孕功效。
吴春燕[5]（2010）在《运动疲劳对小鼠海马GDNF、GFRα-1mRNA和蛋白表达的影响及益气养血补肾方的调节作用》文中研究表明目的：探讨运动疲劳对小鼠海马组织GDNF、GFRα-1表达的影响及益气养血补肾方对运动疲劳的作用效果及机理。方法：将100只小鼠随机分为4组：对照组、模型组、西药组和中药组,除对照组外,其余三组以连续4周递增强度的无负重游泳的方式建立运动疲劳模型,并分别给予生理盐水、支链氨基酸水溶液、益气养血补肾方水煎液干预。分别用分光光度法检测血清及海马组织MDA含量,SOD、GSH-PX和iNOS活性,高效液相色谱法检测海马组织5-羟色胺（5-HT）和多巴胺（DA）含量,实时荧光定量PCR法检测海马组织胶质源性神经营养因子（GDNF）和受体GFRα-1 mRNA表达,免疫组化法检测GDNF和GFRα-1蛋白表达。结果：模型组小鼠海马GDNF、GFRα-1 mRNA和蛋白表达水平较对照组显着升高。中药组小鼠海马组织MDA、5-HT含量较模型组显着降低,DA含量、SOD活性及GDNF、GFRα-1mRNA和蛋白表达水平显着升高。结论：运动疲劳模型小鼠海马GDNF、GFRα-1mRNA和蛋白表达水平上调,提示GDNF和GFRα-1参与了运动疲劳产生的神经生物学调控过程。益气养血补肾方可以通过降低小鼠海马组织MDA、5-HT含量,提高DA含量、SOD活性,促进GDNF、GFRα-1的mRNA和蛋白表达水平而发挥神经保护作用,延缓或消除运动疲劳的发生。
江国锋[6]（2010）在《加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠肺损伤的实验研究》文中进行了进一步梳理休克肺（急性肺损伤,ALI）是感染性休克早期损害的主要器官,近年来,中医药工作者结合现代医学对ALI发病机制进行了有益的探索,提出了许多治则,依据这些治则的实验研究虽取得了一定疗效,但疗效不佳。本实验依据休克肺损伤正虚邪实这一病机,提出益气活血解毒治疗思路,应用LPS复制大鼠内毒素休克肺损伤模型,观察具有益气活血解毒作用的加味生脉饮注射液对休克肺的影响。目的观察具有益气活血解毒作用的加味生脉饮注射液对休克肺损伤的保护作用和可能作用环节。方法分组：SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、加味生脉饮注射液组（生脉饮组）、地塞米松组各24只,每组再分为休克后1h、2h、3h和6h组4个时相,每个时相保证至少有6只大鼠模型成功。造模：静脉注射LPS复制内毒素休克肺损伤模型,假手术组给予生理盐水20ml/kg,模型组给予LPS 8mg/kg,地塞米松组给予LPS 8mg/kg+地塞米松5mg/kg,加味生脉饮组给予LPS 8mg/kg+加味生脉饮注射液10 ml/kg,各给药组是在复制内毒素休克模型10min之后给治疗药物,各组输液量均控制在20ml/kg。以MAP比基础值降低25%-30%,作为急性内毒素休克模型成功的标准。取材：选取左肺中叶,用0.9%生理盐水冰浴匀浆,4℃3500 r/min离心10 min,取上清制备为10%匀浆,-70℃保存待测。取右侧中叶肺组织,约100mg检测肺组织含水量,剩余部分右侧肺组织置10%中性福尔马林中固定,制作形态学标本。指标：一般情况、死亡率、肺组织含水量、平均动脉压和形态学观察、化学测定法测肺组织SOD活性和MDA含量、化学测定法测肺组织NO含量和iNOS活性、RT-PCR方法检测肺组织NOS1mRNA和FGF2mRNA的表达。统计：教据用SAS 8.2软件进行分析,先进行方差齐性检验,方差齐直接进行方差分析；方差不齐进行参数替换后,进行方差齐性检验,方差齐者进行方差分析。结果以X±S表示,组间差异采用方差分析（ANOVA/LSD）,以P<0.05作为显着性差异的标准。结果1一般情况假手术组动物一般情况良好；模型组动物在注射内毒素后即出现呼吸急促、口唇紫绀、体温下降、四肢厥冷、寒战；药物干预后,呼吸急促明显减轻、有萎靡、腹泻、竖毛表现。2常规指标①6h模型组死亡率83.3%,地塞米松组和加味生脉饮组死亡率明显低于LPS模型组（P<0.05）,两组组间比较对死亡率的影响无显着差异（P>0.05）；②休克6h时,模型组大鼠肺含水量较假手术组明显增加,各给药组大鼠肺含水量明显低于模型组,统计有显着性差异（P<0.01）,地塞米松组和加味生脉饮组组间无显着性差异（p>0.05）；③假手术组动物MAP无明显变化。模型组动物MAP在注射内毒素后迅速下降,30 min内有所回升,于90-120min后逐渐缓慢下降,直至死亡。治疗组动物血压降低程度明显减轻（p<0.05）。加味生脉饮组与地塞米松组比较无明显差异（p>0.05）；④假手术组肺组织结构正常；模型组休克1h,发现肺组织多处小血管扩张充血,休克6h,多数动物肺出血、小血栓形成较普遍；地塞米松组大鼠肺组织结构未显示明显损害性变化。多数动物出现小血管扩张充血；有3只动物出现局灶性肺萎陷,2只局部小灶状肺组织出血,13只肺组织淋巴细胞聚集形成淋巴滤泡；加味生脉饮组大鼠（24只）肺组织结构显示损害性变化明显减轻。24只大鼠仍发现肺组织多处小血管扩张充血。3氧自由基指标①与假手术组比较,模型组肺组织SOD活性明显降低（P<0.01）；与模型组比较,加味生脉饮组和地塞米松组SOD活性明显升高（P<0.01）；加味生脉饮组和地塞米松组组间比较有显着差异（P<0.05）,②与假手术组比较,模型组肺组织MDA含量明显升高（P<0.01）；与模型组比较,加味生脉饮组和地塞米松组肺组织MDA含量显着降低（P<0.01,P<0.05）；加味生脉饮组和地塞米松组组间比较有显着性差异（P<0.05）。4 NO自由基与假手术组相比,模型组肺组织NO浓度和iNOS活性显着增高（P<0.01）,应用加味生脉饮注射液或地塞米松进行干预治疗后,地塞米松组组和加味生脉饮注射液组肺组织NO浓度和iNOS活性较模型组明显降低（P<0.01,P<0.05）,加味生脉饮组和地塞米松组组间比较有显着性差异（P<0.05）。5 RT-PCR在内毒素休克发生发展过程中,肺内NOS1 mRNA表达在休克1h和休克2h有明显减少（p<0.05）,休克3h明显增多（p<0.05）; FGF2mRNA表达在休克1h有增多,休克2h有明显增多（p<0.05）,休克3h开始减少（p<0.05）。结论加味生脉饮注射液具有保护内毒素休克大鼠肺组织的作用,其方式可能通过升高平均动脉压、降低死亡率、减轻肺组织含水量、提高SOD活性、减少MDA生成、抑制iNOS表达生成大量NO和增加FGF2 mRNA表达,减少NOS1 mRNA表达提高机体总抗氧化能力,达到防治内毒素休克肺损伤的保护作用.这说明益气活血解毒法是防治休克早期肺损伤的有效治则。
倪新强[7]（2010）在《“肺与大肠相表里”理论的实验研究 ——泻肺平喘灵及拆方对肠源性肺损伤模型动物的机理研究》文中进行了进一步梳理1研究目的本文通过对“肺与大肠相表里”的理论及实验研究分析,旨在揭示其理论建构的合理性,探讨理论特色及客观性,以期为运用泻肺平喘灵治疗小儿痰热壅肺证哮喘提供理论依据。2研究方法2.1理论研究采用中医理论发生学研究方法,对中医肺与大肠的基本概念、基本观点和基本理论的形成与演变,作出客观而确实的诠释；开展肺与大肠西医学相关性理论研究,以西医学中有关肺与大肠生理、病理联系的物质基础为依托,阐释肺系疾病与大肠疾病在发病机制、症状中的联系,探讨中医“肺与大肠相表里”的物质基础。2.2实验研究将70只SD大鼠随机等分为正常组、模型组、解扎组、三拗组、三通组、三活组及泻肺平喘灵组,每组各10只,选用体外直肠不全结扎造模,治疗组于术后72h从体外解除直肠结扎丝线并继续常规饲养,同时分别以三拗汤、三通方、三活方、泻肺平喘灵灌胃。2.3检测指标的确定及检测方法2.3.1一般状况观察：包括各组大鼠实验处置前后的外观、活动、摄食量、二便、体温、呼吸的频率和幅度、呼吸道分泌物、体重等。2.3.2肺组织湿／干重比：处死动物后取右肺上叶准确称取湿重,干燥48h后,再称取干重,计算肺湿／干重比。2.3.3肺、肠组织病理学变化观察：肺肠组织石蜡包埋切片,HE染色,用于光镜下观察。2.3.4用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中内毒素（ET）、肿瘤坏死因子a （TNF-α）的水平；以TBA法测定大鼠肺组织丙二醛含量；考马斯亮兰法（Bradford法）测定肺泡灌洗液中总蛋白含量；定磷法测定肺泡灌洗液中磷脂含量。3结论3.1传统理论“肺与大肠相表里”在临床具有重要指导意义。3.2泻肺平喘灵通过降低模型动物血清中ET、TNF-α,降低肺组织中MDA,降低肺泡灌洗液中总蛋白,增加BALF中磷脂含量,从而保护受损的肺组织。
陆静[8]（2010）在《小G蛋白RhoA在自发性高血压大鼠运动降压中的作用及机制研究》文中研究指明目的:通过观察运动对自发性高血压大鼠血浆和主动脉AngⅡ含量、主动脉NO含量、RhoAmRNA和ROCKmRNA表达的影响,探讨适宜运动对高血压及并发症的预防作用及其作用机制,为高血压及其并发症的防治提供理论依据。方法:Wistar雄性大鼠16只,随机分为安静对照组（WC组）和运动组（WT组）,雄性SHR大鼠16只,随机分为安静对照组（SC组）和运动组（ST组）,每组8只。WT和ST组每日进行60min的无负重游泳运动,每周6次,持续8周。实验期间每周测定大鼠血压和体重,8周后分别测定各组主动脉NO含量,大鼠血浆和主动脉AngⅡ含量,主动脉NOS、iNOS活性,主动脉RhoAmRNA、ROCKmRNA、ROCK-1mRNA、ROCK-2mRNA的表达情况。结果:1.8周60min游泳运动后,Wistar运动组体重较安静组相比显着下降（P<0.01）,SHR运动组体重较安静组相比显着下降（P<0.01）,SHR运动组血压较安静组相比显着下降（P<0.01）。说明运动可以通过控制大鼠体重降低SHR大鼠的血压。2.8周60min游泳运动后,SHR运动组和安静组血浆AngⅡ含量较Wistar安静组相比显着升高（P<0.05）,Wistar运动组血浆AngⅡ含量较安静组相比虽升高但无显着性差异（P>0.05）,SHR运动组大鼠血浆AngⅡ含量较安静组相比虽有下降,但无显着性差异（P>0.05）。SHR运动组主动脉AngⅡ含量较安静组显着降低（P<0.05）,Wistar运动主动脉AngⅡ含量也显着低于安静组（P<0.05）。说明运动虽对大鼠血浆AngⅡ无显着影响但可有效降低大鼠主动脉AngⅡ的含量。3.8周60min游泳运动后,SHR运动组大鼠主动脉NO含量、NOS活性明显高于安静组（P<0.05）,Wistar运动组主动脉NO含量、NOS活性明显高于安静组（P<0.05）。Wistar运动组主动脉iNOS活性与安静组也未见显着升高（P>0.05）,SHR运动组和安静组相比未见显着升高（P>0.05）。说明运动可以促进大鼠NO的合成释放,增强NOS的活性,降低血压。4.8周60min游泳运动后,Wistar运动组大鼠ROCKmRNA含量显着低于安静组（P<0.05）,但RhoAmRNA表达与安静组相比有降低趋势但不显着（P>0.05）。SHR运动组主动脉RhoAmRNA、ROCKmRNA、ROCK-1mRNA表达量较安静组相比显着降低（P<0.05）,但ROCK-2mRNA表达量与安静组相比降低不显着（P>0.05）。说明运动通过下调RhoA/ROCK通路活性实现降压目的且ROCK-1分型起着重要作用。结论:1.长期规律的适宜运动可以明显抑制SHR大鼠血压的进一步升高,对高血压具有一定缓解作用,同时对Wistar大鼠和SHR大鼠体重的增长有一定的抑制作用。2.长期规律的适宜运动可以降低SHR和Wistar大鼠主动脉AngⅡ的含量,减轻AngⅡ的升压作用,对预防和降低高血压具有积极的作用。3.长期规律的适宜运动可以升高SHR和Wistar大鼠主动脉NO含量,调高NOS活性,表明运动可以促进NO的合成释放,增强NOS的活性,使舒血管作用恢复,血压下降。4.运动可通过多条途径明显抑制SHR大鼠主动脉RhoA/ROCK通路,如通过降低AngⅡ含量进而防止更多的RhoA和ROCK被激活,上调NO和增强NOS的活性来抑制RhoA/ROCK的通路的活性,最后达到运动降压的目的。
王锋[9]（2009）在《肠源性内毒素血症在阿尔茨海默病发病中作用及相关机制研究》文中研究表明老年性痴呆是一种慢性进行性精神衰退性疾病,临床表现以痴呆症状最为突出,病理改变以大脑的萎缩和变性为主。临床上主要包括阿尔茨海默型痴呆（Alzheimer’s Disease,AD）、脑血管性痴呆（VascularDementia,VD）和其他混合痴呆等,是世界范围内严重影响老年人健康的常见病、多发病。以往认为欧美国家人群中的痴呆患者以AD为主,亚洲国家则以VD为主。我国几个城市普查60岁以上老年人中,VD为人口的324/10万,AD为328/10万。1990年张明远等与美国几家科研单位合作流行病学调查发现,上海在55岁以上痴呆患者中,AD占64.7%,VD占26.8%。说明在我国至少在某些地区AD在痴呆患者中占主要地位。而AD防治的最大障碍是病因未明。AD在65岁以上的老年人有11%、80岁以上有50%会出现病症。其主要特征为智力的损伤,包括学习记忆、语言、读写、行为,以及对周围环境的识别,最终可导致死亡。其病理改变为弥漫性脑萎缩,以颞叶前、中部及海马、顶叶及前额叶区的萎缩最明显,脑室扩大,脑回变窄、脑沟加宽、脑裂加大;显微镜下可见神经原纤维缠结（NFT）,老年斑（SPs）和颗粒空泡变性比健康老年人明显增多。多年来对AD的病因做了大量的研究,但迄今为止,病因仍不明,确切的致病因素并未找到。因为病因极其复杂,有患者自身的生物学因素,也有多种环境与社会因素的影响。在AD发病机制的众多假说中,炎症机制假说占有重要的地位,大量的研究证明在AD发生过程中脑内有大量的炎性因子,如白介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子β（Transforming Growth factorβ,TGF-β）、环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）、补体及急性期反应蛋白的分泌。这些炎性因子通过一系列的信号转导途径,如NF-κB、丝裂原激活蛋白激酶(（mitogen-αctivated proteinkinase,MAPK）途径激活神经小胶质细胞（microglia,MG）和星形细胞（astrocyte,AC）,使之释放更多的炎性因子,同时它们又共同参与了脑局部炎症过程,与淀粉样蛋白（βamyloid,Aβ）和Tau蛋白的沉积紧密相关,这些研究确定了局部炎症在AD的病理生理过程中发挥了重要作用,甚至有的作者将炎症同SP和NFT共同并列为AD的3大主要特征。韩德五教授于1995年首次提出的肝功能衰竭发生机制的肠源性内毒素血症（Intestinalendotoxemia,IETM）假说认为肠源性内毒素激活枯否细胞所分泌的多种活性物质（如细胞因子、炎性介质、自由基等）可引起“继发性肝损伤”,是导致多种急慢性肝病演化为肝功能衰竭发生的重要机制之一。大量的实验及临床研究证明,不但肝脏疾患伴有IETM,烫伤、烧伤、创伤、出血性休克、急性胰腺炎等多种疾病也伴有IETM。在IETM中发挥核心作用的内毒素是革兰氏阴性杆菌细胞壁外膜表层构成成份,是脂多糖（LPS）与蛋白的复合体,是体内巨噬细胞最敏感的激活剂。正常肠道中含有大量的细菌和内毒素,生理状态下由于肠粘膜屏障的保护作用,肠腔中存在的内毒素只有极少量进入外周循环,对机体维持一定的免疫力可能有意义;同时肝脏的枯否细胞也会吞噬清除血液中过多的内毒素,防止IETM的发生。但是,当机体受到严重创伤（包括手术）、烧伤、放化疗和长期传统的肠外营养时,肠粘膜有可能发生通透性增高;或枯否细胞吞噬活性严重下降,对血浆中内毒素清除能力下降时,就有可能导致细菌及内毒素移位,引起内源性感染,甚至多脏器功能衰竭（MOF）。内毒素是到目前为止已知的诱导IL-1、TNF-α等最重要的因子,可以充分激活巨噬细胞,释放大量炎症因子,激活细胞因子级联反应:1、枯否细胞活化后可生成和释放TNF-α、IL-1、IL-6、血小板激活因子（platelet-activatedfactor,PAF）、PGs等细胞因之的分泌,损伤肝细胞;枯否细胞活化后所释放的白三烯,特别是LT-B4具有强烈的化学趋化作用,吸引并激活中性粒细胞,产生并释放自由基,使细胞膜和细胞器膜发生脂质过氧化而损伤细胞。2、枯否细胞活化后生成和释放的活性氧中间产物（ROI）可引发脂质过氧化反应,损伤生物膜系统、核酸和蛋白质导致肝细胞死亡。3、枯否细胞与肝窦内皮细胞是花生四烯酸特别是PGD2、PGE2及血栓素的重要来源,可经对应的受体作用于肝细胞,引起蛋白磷酸化及膜稳定性变化。通过以上机制,IETM会导致全身炎症反应综合症（SIRS）、多器官功能不全（MOD）,甚至多器官功能衰竭（MOF）。综上所述,IETM会导致机体发生严重的SIRS,而局部炎症在AD的病理生理过程中发挥了重要作用。那么同样高发于老年人的IETM与AD二者之间有何联系?IETM会不会是AD发病的一个危险因素?IETM在AD发病过程中有何作用?目前尚未见到相关报道,为此,我们设计了本次课题研究研究计划。本研究由以下三个部分组成:第一部分D-半乳糖和三氯化铝建立的AD大鼠模型的研究实验目的及背景关于AD的发病机制目前有胆碱能学说、基因突变和多态性学说、自身免疫学说、能量代谢障碍学说等。目前,依据各种学说已建立了多种AD动物模型,但每种模型均有一定的局限性,不能全面模拟AD的病理特征。为了建立一种准确可靠的AD模型,我们进行了本次实验,以期为AD研究提供一种新的大鼠模型。大量研究表明,铝元素具有剂量与作用时间依赖性的诱导动物脑内发生病理变化,具有明显的神经毒作用,可引起明显的学习及记忆减退。D-半乳糖能较好的模拟小鼠的衰老表现,使小鼠机体出现与自然衰老相似的代谢紊乱特征,还引起脑神经元的一系列退行性改变,但腹腔注射D-半乳糖和AlCl3制备阿尔茨海默病大鼠模型的报道还未见到。实验方法1、AD模型制备:模型组腹腔注射D-半乳糖60mg·kg-1·d-1（生理盐水配制,60g/L,给药量0.2ml/200g）和AlCl3 25mg·kg-1·d-1（双蒸水配制,25g/L,给药量0.2ml/200g）,连续90天;空白对照组腹腔注射等量的生理盐水和等量的双蒸水。2、Morris水迷宫行为学实验2.1定位航行实验水池分为N、E、S、W 4个象限。实验前1d将大鼠放入水池（不含平台）自由游泳2 min熟悉水迷宫环境,试验历时5d,每天分上午（n-1）,下午（n-2）两个时间段,每段分别训练4次。训练开始时将平台置于SW象限,每个时间段分别从池壁4个起始点将大鼠面向池壁放入水池,记录每次找到平台的时间（逃避潜伏期,escape latency）和游泳路径。如大鼠在120s内找不到平台,由实验者将其引上平台,潜伏期记为120s,并记录为1次寻找站台错误,每次间隔4min让大鼠休息,再行下次试验。2.2空间探索实验在第5天下午第5次训练时拆除水下平台,然后任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中,测其120s内在各象限的游泳距离及占总距离的百分率和120 s内跨越各象限平台相应位置次数及占总次数的百分率,并记录大鼠120s内搜索平台的路线图。3、大鼠脑组织总蛋白（TP）、组织过氧化物酶（POD）、总抗氧化能力（T-AOC）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）、胆碱酯酶（ChE）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）测定:取各组大鼠脑组织,分析天平称湿重,按脑组织:生理盐水0.2g:1.8ml比例制成10%脑组织匀浆,3000r/min,离心15min,取上清液,冻存待测。TP、POD、T-AOC、ChAT、ChE、NOS、NO试剂盒由南京建成生物制品有限公司提供,严格按照操作说明进行操作。4、大鼠脑组织Tau蛋白浓度检测:双抗体夹心式酶联免疫吸附法（ELISA）。5、大鼠脑组织凋亡测定:TUNEL法与流式细胞仪检测。6、大鼠脑组织电镜观察:大鼠脑组织切成1mm3大小的组织块,经2%二甲砷酸钠缓冲戊二醛和1%锇酸双固定,丙酮脱水,包埋,制成超薄切片,在JEM 100CX型透射电镜下观察脑组织的改变。7、大鼠脑组织Aβ1-40检测:免疫组织化学法。8、大鼠脑组织APP、PS1和BACE mRNA检测:两步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测。实验结果本部分实验通过给大鼠腹腔注射D-半乳糖和AlCl3,不但复制出大鼠整体衰老过程、学习记忆力减退、脑组织ChAT活性降低、ChE活性升高所致乙酰胆碱能系统活性降低,脑组织抗氧化能力降低及NO系统活性增高等AD特征性的变化。同时,AD大鼠脑组织内APP、PS1、BACE mRNA表达增强、出现Aβ沉积、Tau蛋白含量增高、脑细胞凋亡、老年斑等AD的特征性病理变化。实验结论腹腔注射D-半乳糖和AlCl3可以成功制备阿尔茨海默病模型,为AD的研究提供了一种新的大鼠模型。第二部分IETM在AD模型发病中相关机制研究实验目的及背景IETM假说是韩德五教授于1995年首次提出的肝功能衰竭发生的机制。在IETM中发挥核心作用的内毒素可以激活枯否细胞分泌多种活性物质（如细胞因子、炎性介质、自由基等）,可引起“继发性肝损伤”,甚至会导致全身炎症反应综合症（SIRS）、多器官功能不全（MOD）,甚至多器官功能衰竭（MOF）的发生。大量的实验及临床研究证明,在烫伤、烧伤、创伤、出血性休克、急性胰腺炎等多种疾病也有IETM的发生。Goto等的研究表明337名72岁的老年人中有21.5%的老年人血浆内毒素水平高于正常,可见即使在正常人,IETM水平也随着年龄增长在逐渐升高。炎症机制假说在AD发病机制的众多假说中占有重要的地位,大量的研究证明在AD发生过程中脑内有大量的炎性因子,如TNF-α、IL-1、IL-6、TGF-β、COX-2、补体及急性期反应蛋白的分泌。这些炎性因子通过一系列的信号转道途径,如NF-KB、MAPK途径激活神经MG和AC,使之释放更多的炎性因子,同时它们又共同参与了脑局部炎症过程,与Aβ和Tau蛋白的沉积紧密相关,这些研究确定了局部炎症在AD的病理生理过程中发挥了重要作用。在我们所制备的AD模型体内是否也出现了IETM?如果是,IETM与AD二者之间有无内在的联系?IETM是否参与了AD的发病过程?IETM会不会是AD发病的一个危险因素?目前尚未见相关报道,为此我们进行了第二部分实验。实验方法1、血浆LPS、TNF-α、IL-1β及IL-10测定:采用改良过氯酸法检测血浆LPS含量,鲎试剂盒由上海医学化验所提供;放射免疫分析法测定血浆中TNF-α、IL-1β及IL-10含量,试剂盒由解放军总医院东亚免疫研究所提供。2、大鼠肝脏枯否细胞功能状态检测:免疫组织化学SABC染色法检测肝组织溶菌酶LYZ阳性细胞-KC的数量和形态。3、二胺氧化酶（Diamine oxidase,DAO）、谷氨酰胺（Glutamine,Gln）及谷氨酰胺酶（Glutaminase）活性检测:DAO采用黎君友等分光光度计法,谷氨酰胺采用酚一次氯酸法检测,谷氨酰胺酶活性采用荧光法测定。4、肠粘膜常规HE染色,光镜下观察粘膜结构变化。5、大鼠血清S-100β测定:双抗体夹心式酶联免疫吸附法（ELISA）,试剂盒购自上海森雄生物科技有限公司。6、大鼠脑组织ZO-1蛋白检测:免疫印迹法（Western blot）。实验结果腹腔注射D-半乳糖和AlCl3制备的AD模型大鼠血浆中LPS、TNF-α、IL-1β及IL-10含量均明显升高,与对照组比较有统计学差异（P＜0.01）;肝组织KC数量减少,吞噬LPS功能减弱;肠粘膜及血脑屏障通透性均明显升高,屏障功能明显下降。实验结论腹腔注射D-半乳糖和AlCl3制备的AD模型大鼠KC吞噬功能、肠粘膜屏障及血脑屏障功能均明显下降,血浆中LPS及TNF-α、IL-1β等炎症因子含量增高,AD大鼠体内出现了IETM。第三部分LPS激活BV-2细胞及其分子机制的研究研究目的及背景脑内炎症在AD、帕金森病等慢性神经变性疾病发病机理上发挥着重要作用。作为脑内固有免疫细胞的MG在AD发病中的急性与慢性神经炎症过程中均担当了重要的角色。MG被激活后产生释放大量的前体炎症因子,可以产生细胞毒性因子（蛋白水解酶、细胞因子、兴奋性氨基酸、毗啶、2,3-二羧酸、补体蛋白、活性氧媒介物、一氧化氮等）,Seabrook等的实验证明脑内炎症和MG有着密切关系,LPS诱导MG激活产生炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6,其信号转导途径有PTK途径、磷酸脂酶A2（PLA2）途径,还与细胞内核转录因子NF-κB、CREB等的活化有关。有研究表明,Aβ在AD发病中的毒性作用机制可能与其扰乱细胞内钙稳态、产生活性氧和自由基、增加兴奋性毒性等作用有关。我们通过体外培养BV-2细胞来研究在IETM中发挥核心致病作用的LPS对MG的激活作用、MG激活后释放的炎症因子在AD发病中的作用及其具体机制,从而进一步揭示IETM在AD发病中的作用及其机制。实验方法1、BV-2细胞培养:BV-2细胞株购自中国医科院协和医科大学基础医学细胞中心。含体积分数为0.1的胎牛血清的DMEM高糖培养基加青霉素100u/ml、链霉素100u/ml,置37℃、体积分数为0.05的CO2的培养箱内培养,每隔1d换1次培养液,三四天传代1次。每次实验前细胞在含有10g/L牛血清白蛋白的DMEM培养基中培养48h后使细胞处于同步化状态。2、BV-2细胞分组:BV-2（阴性对照组）;BV-2+Aβ:30min、1h、3h、6h、12h、24h组;BV-2+LPS:30min、1h、3h、6h、12h、24h组。分别加入含有LPS（100ng/ml）、Aβ（20μg/ml）的培养基,培养30min、1h、3h、6h、12h、24h后,进行以下实验项目,每个处理组每个时间点观察6片。3、BV-2细胞形态学观察:取对数生长期BV-2细胞接种于6孔培养板中（密度为2×105/孔）,每组设3个平行孔,倒置显微镜下观察BV-2细胞形态,拍照。4、BV-2细胞吞噬功能定量测定:参考Hirose的方法进行,细胞培养皿（104个细胞/片/皿）中加入聚苯乙烯乳珠0.5×108个,培养30min、1h、3h、6h、12h、24h后,PBS洗三次,洗去未被吞噬聚苯乙烯乳珠,直接倒置显微镜下对细胞所吞噬聚苯乙烯乳珠进行计数,观察,照像。每皿任取5个视野,每个视野随机数20个BV-2进行计数,取细胞吞噬聚苯乙烯乳珠数的平均值代表该皿细胞的吞噬功能。5、BV-2细胞OX-42检测:免疫荧光法。Aβ1-40与LPS分别作用30min、1h、3h、6h、12h、24h后终止细胞培养,PBS清洗3次,丙酮室温固定,3%过氧化氢-甲醇室温下10min,正常山羊封闭血清,室温下孵育20min,滴加一抗5μl（小鼠抗大鼠OX-421:100）,湿盒内37℃孵育2h,二抗（FITC）,室温1h,倒置显微镜观察拍照。每皿任取5个视野,取每个视野OX-42阳性表达细胞数及荧光强度代表该皿细胞的活性。6、BV-2细胞培养上清液TNF-α、IL-1β测定:双抗体夹心式酶联免疫吸附法（ELISA）。7、BV-2细胞凋亡检测:各组细胞用PBS制成细胞悬液,不低于1×106个细胞/管,20%冰乙醇固定,轻轻混匀,PBS洗1次,重悬于500μlPBS后流式细胞仪检测。8、BV-2细胞p38、JNK、NF-κB蛋白表达水平检测:免疫印迹法（Western blot）。9、BV-2细胞[Ca2+]i变化检测:按实验要求培养的BV-2,加入终浓度为10μmol/L的Fluo-3/AM,37℃负载40min,置于MRC-1024型共聚焦显微镜下,488nm激发波长,522nm发射波长扫描。细胞游离[Ca2+]i动态测定:选定待测BV-2细胞后,先预扫4min获得基线值,继续扫描至4min时分别各自快速加入LPS 100ng/ml和Aβ1-40 20μg/ml观察荧光值的变化,用随机附带的Time-course/Rationmetric软件给出加药前后神经元内荧光值随时间变化的曲线。每皿取5个视野,每个视野随机选取10个BV-2细胞进行荧光值统计。荧光值强度代表[Ca2+]i的浓度。实验结果Aβ1-40与LPS均可以激活BV-2细胞,使其形态发生明显变化,吞噬能力增强,OX-42表达增强,TNF-α、IL-1β分泌增多,凋亡率较对照组明显升高（P＜0.01）,p-p38、p-JNK及NF-κB表达水平均明显高于对照组,[Ca2+]i明显升高。实验结论LPS可以通过p38、JNK、NF-κB信号转导通路迅速激活BV-2细胞,提高其吞噬能力,促进其分泌炎症因子;而且,LPS对BV-2细胞还有促凋亡作用,并可以使BV-2细胞钙稳态失衡,发生钙超载。LPS对BV-2的这种激活作用与Aβ1-40相似,可见LPS在AD的发病中发挥了与Aβ1-40类似的致病作用。通过以上三部分研究,我们可以得出以下结论:1、腹腔注射D-半乳糖和AlCl3可以成功制备AD大鼠模型。2、AD模型大鼠血浆中LPS及炎症因子水平升高,枯否细胞吞噬能力、肠粘膜屏障功能及血脑屏障功能均明显下降,体内有IETM的发生。3、LPS可以通过p38、JNK、NF-κB信号转导通路激活BV-2细胞,释放炎症因子;促进BV-2细胞凋亡;使BV-2细胞钙稳态失衡,发生钙超载。从而从多个角度导致AD的发病。综上所述,IETM是AD发生发展的重要影响因子之一。
何健卓[10]（2008）在《加味黄连解毒汤调控NF-kB对多器官功能障碍综合征的影响》文中研究说明目的随着医学进步及其他危重病患者治愈率的提高,多脏器功能不全综合征（MODS）的威胁也日渐突出,已成为ICU内导致患者死亡最主要的原因之一,是创伤及感染后最严重的并发症。目前,它是近代急救医学中出现的新的重大课题,其病因复杂、防治困难、死亡率极高,是当今国际医学界共同瞩目的研究热点,更是良性疾病患者死亡的最直接、最重要的原因之一。因此如何提高其诊断和救治水平已是当务之急。MODS发病机制复杂,炎症反应学说是其基石,肠道动力学说也是全身过度炎症反应发生机制之一。同时应用具确切抗炎作用的黄连解毒汤及具有减少细菌及毒素移位及抗炎抑菌作用的大黄对治疗MODS具有切实意义。本研究主要集中在两个方面:1、使用加味黄连解毒汤治疗MODS患者,以APACHEⅢ评分对器官功能进行评价,统计病死率,探讨加味黄连解毒汤防治MODS的临床治疗效果。2、动物实验对MODS大鼠使用加味黄连解毒汤进行干预,从病理生理的角度观察中药复方对MODS时各器官组织的N F—κB、NO（一氧化氮）、NOS（一氧化氮合成酶）等炎症介质指标变化,生理指标变化和组织病理上对脏器保护作用,尝试阐明加味黄连解毒汤防治MODS的分子生物学机制。方法1、通过临床病例观察加味黄连解毒汤对MODS的防治作用,以2005年8月至2008年4月广州中医药大学第一附属医院重症监护室（ICU）符合入选标准的48例患者为研究对象,随机分为中西治疗组和西医治疗组,中西治疗组给予加味黄连解毒汤结合西医治疗,西医治疗组给予单纯西医治疗,用急性生理与慢性健康评估（APACHEⅢ）评分作为指标进行疗效观察,并分析治疗前后胃肠道、外周循环、心脏等器官功能是否改善。2、通过腹腔注射酵母多糖——液体石蜡混悬液法制作MODS大鼠模型观察,应用物理、生化、免疫组化及病理学等方法观察加味黄连解毒汤对MODS大鼠模型的行为、体温、呼吸、心率、血浆丙氨酸转氨酶、肌酐以及外周血、心脏、小肠等器官组织的NF—κB、NO（一氧化氮）、NOS（一氧化氮合成酶）等炎症介质指标变化和组织病理上的影响。3、实验结果以中位数（全距）或算术平均数±标准差（（?）±SD）表示,两组比较用t检验,多组比较用F检验,多组组间两两比较用最小显着差异法（LSD）检验,计数资料比较用x2及秩和检验,各项统计均用SPSS14.0统计软件在计算机上完成。结果1、临床病例分析1.1、存活组与死亡组两组共48例患者,存活35例,死亡13例。死亡组患者于入ICU起APACHEⅢ评分即高于存活组患者,说明死亡组患者的病情严重程度更重。随着住院天数的延长,存活组患者的病情减轻,评分逐渐降低;死亡组患者的病情加重,评分均逐渐升高。死亡组APACHEⅢ评分于治疗前及治疗后与存活组比较差异有显着性（P＜0.05）。1.2、两组患者治疗前后APACHEⅢ评分结果显示中西治疗组治疗后APACHEⅢ评分与治疗前明显下降,与西医治疗组同期相比显着降低;西医治疗组治疗前后评分无明显差异:两组治疗前后差值比较有显着性差异（P＜0.05）。两组MODS患者的病死率分别为13.04%和40%,两组间比较有显着性差异。1.3、胃肠道及外周循环衰竭发生率高于心脏。治疗前两组比较各脏器功能衰竭的发生状况无显着差异。经治疗后,加味黄连解毒汤对减少胃肠道、循环功能衰竭的疗效与西医治疗组比较有显着差异（P＜0.05）。而两组治疗前后对减少心脏衰竭未见显着差异（P＞0.05）。2、MODS动物试验研究2.1、按腹腔注射酵母多糖—液体石蜡混悬液法复制MODS大鼠模型是成功的,符合MODS动物模型的诊断标准。另一方面,此MODS大鼠模型的行为、形态、脏器功能指标和解剖病理的表现均能反映中医的热毒蕴结、脏腑损伤的病机,故其符合作为加味黄连解毒汤调控炎症介质对MODS影响研究的动物模型。2.2、与空白组比较,模型组血清、小肠组织和心脏组织iNOS和NO于造模后显着升高,血清和小肠组织cNOS明显减少。与模型组比较,中药组血清、小肠组织iNOS、NO明显降低,cNOS显着增加;心脏组织各时点的NO显着性降低,iNOS及cNOS未见统计学差异。2.3、中药治疗组大鼠的各脏器病理改变较模型组减轻。模型组小肠组织可见大量N F—κB表达的阳性细胞,多数为棕黄色,阳性率高。中药治疗组阳性细胞减少,多数为浅黄色或黄色,且阳性率较模型组明显降低,具有统计学意义（P＜0.05）。模型组心脏组织可见NF—κB表达,但阳性率及颜色深度较小肠组织为低,中药治疗后心脏组织NF-κB表达阳性细胞率较模型组未见明显降低,两者比较无统计学差异（P＞0.05）。结论1、APACHEⅢ评分通过对患者入ICU时病情的评定及死亡风险率的预测,以及在治疗过程中反复评分对病情进行动态观察,有助于临床医师决定治疗的手段、强调及评价新疗法的价值,提高医疗质量,能较准确地判断病情及对死亡率有一定预测效应。2、加味黄连解毒汤联合西医治疗能有效地降低MODS患者的APACHEⅢ评分及死亡率,其疗效优于单纯西医治疗。可改善MODS患者整体病理生理状态、器官功能,延缓或阻断器官衰竭的进一步恶化,有效防治MODS。3、加味黄连解毒汤对不同器官功能衰竭效果不一样,对胃肠道及循环功能衰竭治疗效果较佳,能有效改善MODS患者的胃肠道功能。4、按腹腔注射酵母多糖—液体石蜡混悬液法复制MODS大鼠模型是成功的,符合MODS动物模型的诊断标准。5、实验显示NF—κB及iNOS、NO在血浆、肠道、心脏组织表达及分布不同,各脏器在SIRS/MODS发生发展过程中受打击的时间及程度不一。初步提示肠道炎症或细菌和内毒素移位可成为循环中NO激活的场所,是炎症因子在远隔器官聚集、活化从而损伤组织细胞的策源地。6、实验表明加味黄连解毒汤能有效地改善MODS大鼠脏器功能及病理形态,其机制可能是通过抑制NF-κB表达从而减轻促炎介质及iNOS过度活化,从而有助于预防SIRS及控制其多器官功能损害的发生与发展。7、NO及NOS抑制效应是复杂的,对NOS不同的同工酶进行抑制会产生不同的生理或病理效应,起到保护或损伤脏器功能的作用。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1 研究目的和意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 益母草碱研究概括 |
| 2.2 免疫应激及其相关信号通路 |
| 2.3 肠道黏膜的损伤及其机制 |
| 3 主要研究内容 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 益母草碱对肉仔鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力和血脂指标的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验材料与动物 |
| 1.2 试验试剂 |
| 1.3 试验仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验动物的处理与分组 |
| 2.2 饲养管理 |
| 2.3 指标测定与方法 |
| 2.3.1 生长性能 |
| 2.3.2 免疫器官指数 |
| 2.3.3 血清免疫球蛋白、抗体效价和细胞因子含量 |
| 2.3.4 血清抗氧化指标的测定 |
| 2.3.5 血脂相关指标的测定 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 益母草碱对肉仔鸡生长性能的影响 |
| 3.2 益母草碱对肉仔鸡免疫器官的影响 |
| 3.3 益母草碱对肉仔鸡抗体效价和细胞因子的影响 |
| 3.4 益母草碱对肉仔鸡血清免疫球蛋白的影响 |
| 3.5 益母草碱对血清中MDA、T-SOD以及CAT的影响 |
| 3.6 益母草碱对血清中T-AOC和GSH的影响 |
| 3.7 益母草碱对血脂指标的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 益母草碱对肉仔鸡生产性能和免疫功能的影响 |
| 4.2 益母草碱对肉仔鸡血清抗氧化指标和血脂含量的影响 |
| 5 小结 |
| 试验二 益母草碱对LPS应激肉仔鸡的生长性能、免疫功能和脾脏免疫抗氧化的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验材料与动物 |
| 1.2 试验试剂 |
| 1.3 试验仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验动物的处理与分组 |
| 2.2 攻毒与饲养管理 |
| 2.3 指标测定与方法 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 益母草碱对LPS应激肉仔鸡生产性能的影响 |
| 3.2 益母草碱对LPS应激肉仔鸡免疫器官指数的影响 |
| 3.3 益母草碱对LPS应激肉仔鸡血清抗氧化指标的影响 |
| 3.4 益母草碱对LPS应激肉仔鸡脾脏抗氧化能力的影响 |
| 3.5 益母草碱对LPS应激肉仔鸡血清中细胞因子的影响 |
| 3.6 益母草碱对LPS应激肉仔鸡血清免疫指标影响 |
| 3.7 益母草碱对LPS应激肉仔鸡脾脏中相关基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 益母草碱对LPS诱导肉仔鸡生产性能和免疫器官指数的影响 |
| 4.2 益母草碱对LPS诱导肉仔鸡血清抗氧化指标的影响 |
| 4.3 益母草碱对LPS诱导肉仔鸡免疫指标的影响 |
| 4.4 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡脾脏相关基因的表达 |
| 5 小结 |
| 试验三 益母草碱对LPS应激肉仔鸡肠道免疫抗氧化的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药物与动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 试验器材 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验动物分组及处理 |
| 2.2 攻毒与饲养管理 |
| 2.3 指标测定与方法 |
| 2.4 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡肠黏膜形态的影响 |
| 3.2 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡肠道菌群的影响 |
| 3.3 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡肠道黏膜抗氧化指标的影响 |
| 3.4 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡血清中二胺氧化酶和D-乳酸的影响 |
| 3.5 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡肠黏膜相关基因表达量的影响 |
| 3.6 益母草碱对LPS诱导的肉仔鸡肠黏膜相关蛋白表达量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 益母草碱对LPS应激小肠形态的影响 |
| 4.2 益母草碱对LPS应激小肠菌群的影响 |
| 4.3 益母草碱对LPS应激小肠黏膜氧化指标的影响 |
| 4.4 益母草碱对LPS应激空肠黏膜信号通路的影响 |
| 4.5 益母草碱对LPS应激空肠黏膜紧密连接蛋白和通透性的影响 |
| 5 小结 |
| 试验四 益母草碱对脂多糖应激鸡胚肠上皮细胞的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验材料与鸡胚 |
| 1.2 试验试剂 |
| 1.3 试验器材 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 原代鸡肠上皮细胞分离、培养与鉴定 |
| 2.2 细胞荧光免疫 |
| 2.3 不同浓度及时间的益母草碱对鸡胚肠上皮细胞活力的影响 |
| 2.4 不同浓度及时间的LPS对鸡肠上皮细胞活力的影响 |
| 2.5 益母草碱对LPS应激的鸡肠上皮细胞活力的模型建立 |
| 2.6 RT-PCR检测益母草碱对肠上皮细胞相关基因表达量的影响 |
| 2.7 蛋白质印记法(Western-Blot)检测蛋白的表达量 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡胚肠上皮细胞的生长动态 |
| 3.2 鸡肠上皮原代细胞细胞荧光免疫结果 |
| 3.3 不同浓度和时间的益母草碱对肠上皮细胞活力的影响 |
| 3.4 不同浓度和时间LPS对肠上皮细胞的影响 |
| 3.5 益母草碱对LPS诱导的鸡胚肠上皮细胞活力的保护作用 |
| 3.6 益母草碱对LPS诱导鸡胚肠上皮细胞相关基因表达量的影响 |
| 3.7 益母草碱对LPS诱导鸡胚肠上皮细胞相关蛋白表达量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 鸡肠上皮细胞的分离、培养及鉴定 |
| 4.2 益母草碱对LPS诱导的鸡肠上皮细胞活力和相关酶的影响 |
| 4.3 益母草碱对LPS诱导的鸡肠上皮紧密连接蛋白和MAPKs/NF-κB信号通路的影响 |
| 5 小结 |
| 第三章 结论 |
| 第四章 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞系 |
| 1.1.2 主要试剂及药品 |
| 1.1.3 主要仪器与材料 |
| 1.1.4 主要溶液的配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 黄连水提液的制备 |
| 1.2.2 细胞培养 |
| 1.2.3 BRL细胞生长曲线的测定 |
| 1.2.4 药物浓度筛选与分组 |
| 1.2.4.1 黄连无毒浓度和促增殖浓度筛选 |
| 1.2.4.2 LPS损伤浓度筛选 |
| 1.2.4.3 试验分组 |
| 1.2.5 黄连对LPS处理过的细胞存活率的影响 |
| 1.2.6 黄连对LPS处理过的细胞生长状况及形态的影响 |
| 1.2.7 黄连对LPS处理过的细胞凋亡的影响 |
| 1.2.8 黄连对LPS处理的细胞NF-κB和IRF3信号传导通路mRNA表达量的影响 |
| 1.2.8.1 细胞总RNA的提取 |
| 1.2.8.2 RNA浓度测定及质量检测 |
| 1.2.8.3 逆转录为cDNA |
| 1.2.8.4 荧光定量PCR |
| 1.2.9 黄连对LPS诱导的NF-κB p65核转移的影响 |
| 1.2.10 数据处理及统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 BRL细胞生长曲线的绘制 |
| 2.2 黄连无毒浓度和促增殖浓度筛选 |
| 2.3 LPS损伤浓度筛选 |
| 2.4 黄连对LPS处理过的细胞存活率的影响 |
| 2.5 黄连对LPS处理过的细胞生长状况及形态的影响 |
| 2.6 黄连对LPS处理过的细胞凋亡率的影响 |
| 2.7 黄连对LPS处理的细胞NF-κB和IRF3信号传导通路mRNA表达量的影响 |
| 2.7.1 细胞总RNA提取质量检测 |
| 2.7.2 引物验证结果 |
| 2.7.3 荧光定量结果 |
| 2.8 黄连对LPS诱导的NF-κB p65核转移的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 黄连对肝损伤的保护作用 |
| 3.2 黄连对细胞凋亡的影响 |
| 3.3 黄连对LPS致BRL细胞损伤的保护通路 |
| 3.4 有待进一步研究的问题 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 摘要 |
| Summary |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 代谢组学在中医药领域的应用 |
| 1.1.1 代谢组学与中医证候的研究 |
| 1.1.2 代谢组学与针灸的研究 |
| 1.1.3 应用代谢组学开展中药及方剂的整体疗效和毒理研究 |
| 1.1.4 代谢组学应用于中医药研究的展望 |
| 1.2 代谢组学整合化研究进展 |
| 1.2.1 多种样本的整合分析 |
| 1.2.2 分析检测技术的整合 |
| 1.2.3 数据分析技术的整合 |
| 1.2.4 数据的整合 |
| 本论文关注的问题 |
| 技术路线 |
| 第二章 当归挥发油化学指纹图谱建立 |
| 2.1. 材料与方法 |
| 2.1.1 仪器与试剂 |
| 2.1.2 当归挥发油的提取方法 |
| 2.1.3 GC-MS 分析方法 |
| 2.1.4 数据分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 水蒸气蒸馏法提取的当归挥发油成分 |
| 2.2.2 石油醚提取法提取的挥发油成分 |
| 2.2.3 当归挥发油指纹图谱建立方法学考察 |
| 2.2.4 当归 GC-MS 指纹图谱的建立 |
| 2.2.5 不同产地当归挥发油的 PCA 模式识别 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 当归挥发油提取方法 |
| 2.3.2 当归挥发油化学成分的分析和鉴定 |
| 2.3.3 当归挥发油指纹图谱建立 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 当归挥发油对 LPS 炎症的保护作用研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料与仪器 |
| 3.1.2 当归挥发油急性毒性的测定方法 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.1.4 数据分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 急性毒性实验结果 |
| 3.2.2 各组大鼠的一般行为学观察 |
| 3.2.3 当归挥发油对大鼠的血液指标影响 |
| 3.2.4 当归挥发油对大鼠血清中 iNOS、NO 影响 |
| 3.2.5 当归挥发油对大鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β、IL-4、IL-10 的影响 |
| 3.2.6 当归挥发油对大鼠血清中 COX-2、PGE2、HIS、5-HT 的影响 |
| 3.2.7 当归挥发油对炎性介质与细胞因子影响的相关性分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 LPS 大鼠炎症模型的建立 |
| 3.3.2 当归挥发油剂量选择 |
| 3.3.3 当归挥发油对 LPS 所致内毒素炎症的保护作用 |
| 3.3.4 当归挥发油在 LPS 大鼠炎症模型中作用机制的探讨 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 当归挥发油干预大鼠 LPS 炎症模型的代谢组学研究 |
| 第一节 当归挥发油干预 LPS 炎症模型大鼠血浆代谢组学研究 |
| 4.1.1 材料和方法 |
| 4.1.2 结果 |
| 4.1.3 讨论 |
| 4.1.4 小结 |
| 第二节 当归挥发油干预 LPS 炎症模型的大鼠肝组织代谢组学研究 |
| 4.2.1 材料和方法 |
| 4.2.2 结果 |
| 4.2.3. 讨论 |
| 4.2.4 小结 |
| 第三节 归挥发油对 LPS 炎症作用的肺组织代谢组学研究 |
| 4.3.1. 材料与方法 |
| 4.3.2. 结果 |
| 4.3.3 讨论 |
| 4.3.4 小结 |
| 第四节 当归挥发油干预 LPS 炎症模型的大鼠尿液代谢组学研究 |
| 4.4.1 材料与方法 |
| 4.4.2. 结果 |
| 4.4.3 讨论 |
| 4.4.4 小结 |
| 第五章 当归挥发油干预大鼠 LPS 炎症模型代谢组学的整合化研究 |
| 5.1 采用 MetPA 数据库构建血浆、肝组织匀浆、肺组织匀浆、尿液总相关代谢通路 |
| 5.1.1 各组差异代谢物变化及代谢通路分析 |
| 5.1.2 LPS 所致急性炎症干扰的通路及当归挥发油作用机制分析 |
| 5.2 代谢组学数据与细胞因子、炎性介质的相关性分析 |
| 5.2.1 三羧酸循环相关代谢物与细胞因子、炎性介质的相关性分析 |
| 5.2.2 糖酵解相关代谢物与细胞因子、炎性介质的相关性分析 |
| 5.2.3 亚油酸、二十二碳六烯酸、花生四烯酸代谢物与细胞因子、炎性介质的相关性分析 |
| 5.3 小结 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 导师简介 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 内毒素 |
| 1.1.1 内毒素的结构 |
| 1.1.2 内毒素的生物学特性 |
| 1.1.3 内毒素的检测方法 |
| 1.1.4 LPS 的信号转导通路 |
| 1.2 内毒素对肠道和肝脏的损伤 |
| 1.2.1 LPS 对肠道的损伤 |
| 1.2.2 LPS 对肝脏的损伤 |
| 1.2.3 肝脏的排毒 |
| 1.3 免疫调控与妊娠 |
| 1.3.1 MHC 与妊娠 |
| 1.3.2 激素与妊娠 |
| 1.3.3 免疫细胞与妊娠 |
| 1.3.4 细胞因子与妊娠 |
| 1.3.5 NO 与妊娠 |
| 1.3.6 TGF-β与妊娠 |
| 1.4 中药保胎促孕 |
| 2 LPS 对肝脏和肠道的损伤机制研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 试验试剂 |
| 2.1.4 试验仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物处理 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 肠道通透性的体外检测 |
| 2.2.4 荧光法检测组织细胞内活性氧 |
| 2.2.5 肝损伤的测定 |
| 2.2.6 内毒素测定, |
| 2.2.7 ELISA 法测定肝脏KC、TNF-α和细胞IL-8 水平 |
| 2.2.8 肝脏MDA 的测定 |
| 2.2.9 肝脏SOD，CAT，GPx 活性的测定 |
| 2.2.10 紧密连接蛋白的蛋白免疫印迹 |
| 2.2.11 核蛋白的提取 |
| 2.2.12 细胞内ROS 测定 |
| 2.2.13 RT-PCR 测定肝脏KC mRNA 的表达 |
| 2.2.14 NF-κB 的免疫荧光染色 |
| 2.2.15 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 LPS 对肠道的损伤 |
| 2.3.2 LPS 对肝脏的损伤 |
| 2.3.3 LPS 对HepG2 的损伤 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 中药方剂对LPS 致流产的保护作用和机理研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 试验药品与试剂 |
| 3.1.3 试验仪器 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 动物处理 |
| 3.2.2 胚胎吸收率（死亡率）和流产率计算 |
| 3.2.3 试验取样 |
| 3.2.4 子宫组织及血清中4 种细胞因子含量的测定 |
| 3.2.5 子宫组织孕酮含量的测定 |
| 3.2.6 子宫的组织学观察 |
| 3.2.7 免疫组化测定子宫CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞及F4/80 巨噬细胞的分布及数量 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 中药方剂保胎作用结果 |
| 3.3.2 LPS 与中药方剂对小鼠子宫重量的影响 |
| 3.3.3 中药方剂对LPS 诱导流产小鼠细胞因子含量的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 保胎中药方剂对抗LPS 诱导流产的效果 |
| 3.4.2 LPS 和保胎中药对Th1/Th2 型细胞因子的调节 |
| 3.4.3 LPS 及保胎中药对子宫组织孕酮分泌的影响 |
| 3.4.4 LPS 诱导流产及中药保胎方剂对子宫免疫细胞的调节 |
| 3.5 小结 |
| 4 中药成分黄芩苷槲皮素对LPS 诱导着床障碍的保护作用 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 试验试剂 |
| 4.1.3 试验仪器 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 LPS 阻碍小鼠胚胎着床模型的建立 |
| 4.2.2 黄芩苷对LPS 生殖损伤的保护作用 |
| 4.2.3 槲皮素对LPS 生殖损伤的保护作用 |
| 4.2.4 子宫组织及血清中IFN-γ、IL-10 含量的测定 |
| 4.2.5 子宫组织及血清中一氧化氮合成酶活性测定 |
| 4.2.6 原位杂交法检测子宫组织TGF-β1mRNA 的表达 |
| 4.2.7 RT-PCR 检测子宫组织中IFN-γmRNA 的表达 |
| 4.2.8 统计处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 LPS 阻碍小鼠胚胎着床 |
| 4.3.1.1 LPS 诱导小鼠着床失败 |
| 4.3.1.2 LPS 对子宫IFN-γ、IL-10 含量的影响 |
| 4.3.1.3 不同剂量 LPS 对 NOS 活性的影响 |
| 4.3.2 黄芩苷对LPS 诱导的胚胎着床失败的保护作用 |
| 4.3.3 槲皮素对LPS 诱导的胚胎着床失败的保护作用 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 建立LPS 诱导小鼠胚胎着床障碍模型 |
| 4.4.2 阻碍胚胎着床的不同剂量LPS 对于IFN-γ、IL-10 和NOS 活性的调节 |
| 4.4.3 黄芩苷对于LPS 诱导着床障碍的保护机制 |
| 4.4.4 槲皮素对于LPS 诱导着床障碍的保护机制 |
| 4.5 小结 |
| 5 中药成分对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护作用 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 试验试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 溶液配制 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 小鼠着床期子宫内膜细胞原代培养 |
| 5.2.2 LPS 对小鼠着床期子宫内膜细胞的干扰剂量MTT 法筛选 |
| 5.2.3 黄芩苷对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护作用 |
| 5.2.4 槲皮素对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护作用 |
| 5.2.5 ELISA 检测子宫内膜细胞培养上清液中IFN-γ、IL-10 的含量 |
| 5.2.6 子宫内膜细胞上清液中NOS 活性检测 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 小鼠着床期子宫内膜细胞原代分离培养结果 |
| 5.3.2 LPS 及黄芩苷作用于子宫内膜细胞的有效剂量筛选结果 |
| 5.3.3 黄芩苷和槲皮素对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 着床期小鼠子宫内膜细胞的分离培养 |
| 5.4.2 LPS 对小鼠子宫内膜细胞损伤模型的建立 |
| 5.4.3 黄芩苷对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护 |
| 5.4.4 槲皮素对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护 |
| 5.5 小结 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 运动中枢疲劳的概念 |
| 2 运动中枢疲劳的机制 |
| 2.1 神经递质与运动中枢疲劳 |
| 2.2 自由基代谢与运动中枢疲劳 |
| 2.3 一氧化氮、一氧化氮合酶与运动中枢疲劳 |
| 2.4 神经营养因子与运动疲劳 |
| 2.5 其他因素与运动疲劳 |
| 3 运动中枢疲劳的消除途径 |
| 3.1 BCAA |
| 3.2 糖 |
| 3.3 胆碱 |
| 3.4 其他 |
| 4 中医药与运动中枢疲劳 |
| 4.1 中医学对运动中枢疲劳的认识 |
| 4.2 中药延缓或消除运动中枢疲劳的现状 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 运动疲劳模型的制备及益气养血补肾方对运动疲劳小鼠体重、肌酸激酶、尿素氮和睾酮的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 2 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠血清和海马组织MDA含量、SOD和GSH-PX活性的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计学方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 3 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠血清和海马组织iNOS活性的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 统计学方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 4 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠海马组织5-HT、DA含量的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 统计学方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 5 益气养血补肾方及运动疲劳对小鼠海马组织GDNF及其受体GFRα-1mRNA表达的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 统计学方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 6 益气养血补肾方及运动疲劳对小鼠海马组织GDNF及其受体GFRα-1蛋白表达的影响 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.3 图像分析与统计学处理 |
| 6.4 实验结果 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 运动疲劳模型的建立 |
| 2 中医病因病机及益气养血补肾方方药分析 |
| 2.1 病位在脑,病本在脾肾 |
| 2.2 肾精不足,气血亏虚为主要病因病机 |
| 2.3 补肾益精、气血双补为治疗大法 |
| 2.4 益气养血补肾方的组方及配伍意义 |
| 2.5 益气养血补肾方的现代药理学研究 |
| 3 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠体重的影响 |
| 4 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠CK、BUN、T的影响 |
| 5 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠血清和海马组织MDA、SOD和GSH-PX的影响 |
| 6 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠血清和海马组织iNOS的影响 |
| 7 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠海马组织5-HT和DA的影响 |
| 8 益气养血补肾方对运动疲劳小鼠海马组织GDNF和GFRα-1的影响 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文着作 |
| 科研成果 |
| 详细摘要 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 休克时急性肺损伤促炎/抗炎失调的发病机制及治疗思路 |
| 1. 促炎因子研究 |
| 2. 抗炎因子研究 |
| 3 非特异性抗炎症治疗 |
| 4 特异性抗炎治疗 |
| 5 抗氧化治疗 |
| 6 其他 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性肺损伤的中医药治疗现状 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨证论治 |
| 3 常用方药 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠肺损伤的保护作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠肺组织NO和iNOS的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠肺组织NOS1 mRNA和FGF2 mRNA的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附图 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一章 中医文献研究 |
| 1. "肺和大肠相表里"理论渊源 |
| 1.1 肺肠义蕴分析 |
| 1.2 肺肠解剖形态的认识 |
| 1.3 司外揣内 |
| 1.4 阴阳学说 |
| 1.5 五行学说 |
| 1.6 肺肠经络循行 |
| 1.7 肺肠气化相通 |
| 2. "肺与大肠相表里"理论内涵 |
| 2.1 生理相关 |
| 2.2 病理互传 |
| 2.3 肺肠合治治则、方药 |
| 2.4 总结 |
| 3. "肺与大肠相表里"的临床应用 |
| 3.1 肺病治肠 |
| 3.2 肠病治肺 |
| 3.3 肺肠并治 |
| 3.4 针灸治疗 |
| 第二章 现代医学研究 |
| 1. "肺与大肠相表里"的实验研究进展 |
| 1.1 肺病及肠 |
| 1.2 肠病及肺 |
| 1.3 经络与腧穴的相关性 |
| 2. "肺与大肠相表里"的物质基础研究 |
| 2.1 组织结构 |
| 2.2 肠道气体排泄途径 |
| 2.3 肠源性内毒素 |
| 2.4 粘膜免疫系统 |
| 2.5 氧化-抗氧化系统 |
| 2.6 内分泌物质 |
| 2.7 微生态学 |
| 2.8 其它 |
| 第三章 实验研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠血清ET比较 |
| 2.3 各组大鼠血清TNF-α比较 |
| 2.4 各组大鼠肺组织W/D比较 |
| 2.5 各组大鼠肺组织病理学 |
| 2.6 各组大鼠肠组织病理学 |
| 2.7 各组大鼠BALF中蛋白比较 |
| 2.8 各组大鼠BALF中总磷脂比较 |
| 2.9 各组大鼠肺组织MDA比较 |
| 讨论 |
| 1. 中医对肠源性肺损伤的认识 |
| 2. "肺与大肠相表里"理论动物模型的制备 |
| 3. 泻肺平喘灵的拆方及药物研究 |
| 3.1 本课题组方依据及方义分析 |
| 3.2 泻肺平喘灵的现代药理学研究 |
| 3.3 泻肺平喘灵拆方论析 |
| 4. 泻肺平喘灵的作用及机理探讨 |
| 4.1 泻肺平喘灵及拆方对实验大鼠一般情况的影响 |
| 4.2 泻肺平喘灵及拆方对大鼠血清ET的影响 |
| 4.3 泻肺平喘灵及拆方对模型大鼠血清TNF-α的影响 |
| 4.4 泻肺平喘灵及拆方对模型大鼠肺组织W/D的影响 |
| 4.5 泻肺平喘灵及拆方对模型大鼠肺、肠组织病理形态学的影响 |
| 4.6 泻肺平喘灵及各拆方对模型大鼠BALF中总蛋白浓度的影响 |
| 4.7 泻肺平喘灵及各拆方对模型大鼠BALF中磷脂水平的影响 |
| 4.8 泻肺平喘灵及各拆方对模型动物肺组织中MDA水平的影响 |
| 4.9 小结 |
| 5. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 前言 |
| 1. 高血压概述 |
| 1.1 血管平滑肌细胞（VSMC）与高血压 |
| 1.2 高血压的运动疗法 |
| 2. 血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）概述 |
| 2.1 AngⅡ与高血压关系 |
| 2.2 运动与AngⅡ |
| 3. NO 概述 |
| 3.1 NO 与高血压 |
| 3.2 NO 与运动 |
| 4. NOS 概述 |
| 4.1 三型NOS 概述 |
| 4.2 NOS 与高血压 |
| 4.3 NOS 与运动 |
| 5. RhoA 概述 |
| 5.1 小G 蛋白（small G protein）家族介绍 |
| 5.2 RhoA 概述 |
| 5.3 RhoA/ROCK 通路与高血压 |
| 6. 小结 |
| 参考文献 |
| 引言 |
| 第二部分 实验部分 |
| 1 材料及方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 运动方式 |
| 1.3 体重测定 |
| 1.4 血压测定 |
| 1.5 指标测试 |
| 1.6 材料与仪器 |
| 1.7 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 运动对大鼠体重变化的影响 |
| 2.2 运动对大鼠收缩压变化的影响 |
| 2.3 运动对大鼠血浆和主动脉AngⅡ含量的影响 |
| 2.4 运动对大鼠主动脉NO 含量的影响 |
| 2.5 运动对大鼠主动脉NOS，iNOS 活性的影响 |
| 2.6 运动对大鼠主动脉RhoAm RNA 表达的影响 |
| 2.7 运动对大鼠主动脉ROCK-1m RNA、ROCK-2m RNA 表达的影响 |
| 2.8 运动对大鼠主动脉ROCKm RNA 表达的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 运动对 Wistar、SHR 大鼠体重的影响 |
| 3.2 运动对 Wistar、SHR 大鼠血压的影响 |
| 3.3 运动对 Wistar、SHR 大鼠血浆和主动脉 AngⅡ的影响 |
| 3.4 运动对 Wistar、SHR 大鼠主动脉 NO 含量的影响 |
| 3.5 运动对 Wistar、SHR 大鼠主动脉 NOS,iNOS 活性的影响 |
| 3.6 运动对 Wistar、SHR 大鼠主动脉 RhoAmRNA 表达的影响 |
| 3.7 运动对 Wistar、SHR 大鼠主动脉 ROCK-1mRNA、ROCK-2mRNA、ROCKmRNA 表达的影响 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 D-半乳糖和三氯化铝建立的AD大鼠模型的研究 |
| 实验一 AD模型大鼠行为学研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 AD模型大鼠脑组织POD、T-AOC、ChAT、ChE、NOS、NO含量研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 AD模型大鼠脑组织凋亡研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 AD模型大鼠脑组织Aβ1-40、OX-42表达水平研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 AD模型大鼠脑组织APP、PS1与BACE1基因表达水平研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 AD模型大鼠脑组织Tau蛋白含量研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 第二部分 IETM在AD模型发病中相关机制研究 |
| 实验七 AD模型大鼠LPS、IL-1β、IL-10及TNF-α水平研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 AD模型大鼠肝脏枯否细胞功能状态的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 AD模型大鼠肠粘膜屏障功能研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十 AD模型大鼠血脑屏障功能研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 第三部分 LPS激活BV-2细胞及其分子机制的研究 |
| 实验十一 LPS激活BV-2细胞的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十二 LPS诱导BV-2细胞释放炎症介质的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十三 LPS诱导BV-2细胞凋亡研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十四 p38、JNK在LPS激活BV-2细胞及AD中作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十五 NF-κB在LPS激活BV-2细胞及AD中作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十六 LPS对BV-2细胞内游离Ca~(2+)的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 结论 |
| 综述 |
| 阿尔茨海默病的研究进展 |
| 小胶质细胞与阿尔茨海默病 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 引言 |
| 一、MODS的命名及概念 |
| 二、MODS的发病机制及诊断 |
| 三、MODS的临床特征及治疗进展 |
| 四、中医学对MODS的认识及中医药治疗MODS的研究 |
| 五、本课题立论依据 |
| 第二部分 加味黄连解毒汤治疗MODS的临床研究APACHEⅢ评分对48例多器官功能障碍综合征患者的临床分析 |
| 一、资料与方法 |
| (一)入选标准 |
| (二)临床资料 |
| (三)研究方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第三部分 加味黄连解毒汤调控NF-k B对MODS大鼠作用的研究 |
| 第一节、SD大鼠MODS动物模型制作与检验 |
| 一、实验材料 |
| 二、腹腔注射酵母多糖——液体石蜡混悬液法制作SD大鼠MODS模型 |
| 三、MODS大鼠模型的评定 |
| 四、讨论 |
| 第二节、加味黄连解毒汤对MODS大鼠血清、肠和心脏组织一氧化氮系统的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果和统计分析 |
| 三、讨论 |
| 第三节、加味黄连解毒汤对MODS大鼠肠、心脏组织中NF-k B表达及病理的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果和统计分析 |
| 三、讨论 |
| 第四部分 结论 |
| 一、临床研究 |
| 二、实验研究 |
| 三、存在问题及展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
