李中润[1]（2021）在《骨髓间充质干细胞通过调节自噬和铁死亡修复六价铬致睾丸损伤的研究》文中研究说明目的:铬化合物广泛应用在生产生活中,其中六价铬化合物具有很强的毒性作用。睾丸作为重金属毒物的靶器官,极易受到六价铬的侵害,导致男性生殖健康受到影响。目前,没有理想的方法治疗六价铬所致睾丸损伤。本课题组以往的实验结果证明镉暴露会导致大鼠睾丸组织受损,而骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植可以修复镉致睾丸损伤。我们推测BMSCs也可以修复六价铬所致睾丸损伤。本文将BMSCs移植进六价铬致大鼠睾丸损伤模型中,观察移植BMSCs对六价铬所致的睾丸损伤的修复作用,并进一步探讨BMSCs对六价铬所致睾丸损伤的修复作用机制。方法:BMSCs的分离、培养、鉴定和标记:收集一周龄内的Wistar大鼠乳鼠的骨髓细胞,贴壁法纯化细胞并扩增细胞。流式细胞仪检测细胞表面标志CD45和CD90以及细胞周期。诱导培养细胞向成脂细胞和成骨细胞分化。CM-Dil标记BMSCs并计算其标记率。BMSCs移植对六价铬致大鼠睾丸损伤的修复作用:24只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,每组8只。模型组和治疗组按0.4 mg/kg·bw的剂量,腹腔注射重铬酸钾溶液。对照组注射等体积的生理盐水。每周染毒5天,连续染毒30天。染毒结束后24 h和48 h,治疗组通过球后静脉注射5×106个CM-Dil标记的BMSCs,对照组和模型组注射相同体积的PBS。观察大鼠饮食活动等一般状态。移植2周后,处死大鼠。原子吸收法检测各组大鼠睾丸组织内铬含量。HE染色观察各组睾丸的病理组织学变化,根据Johnsen score标准对其进行病理评分。Lillie二价铁染色法检测各组睾丸内二价铁含量。激光共聚焦显微镜观察治疗组大鼠睾丸内BMSCs的定植情况。Western blot（WB）法检测大鼠睾丸内自噬相关蛋白LC3B和Beclin1,AKT/m TOR通路中AKT、p-AKT和m TOR蛋白的表达。免疫组织化学法检测LC3B、Beclin1、AKT、p-AKT、m TOR、p-m TOR、4-HNE、GPX4、SLC7A11和Tf R1蛋白的表达。结果:BMSCs的分离、培养、鉴定和标记:第3代BMSCs经流式细胞仪检测大部分细胞处于G1期;表面标志CD45几乎没有表达,CD90高表达;诱导分化后油红O染色和茜素红染色阳性,表明获得细胞具有分化成脂细胞和成骨细胞的能力。激光共聚焦显微镜下观察到被CM-Dil标记的BMSCs,标记率为93.56%±2.87%。以上结果证明所培养细胞为BMSCs。BMSCs移植对六价铬致大鼠睾丸损伤的修复作用:染毒后,模型组和治疗组大鼠活动减少,食欲减退。细胞移植后,治疗组大鼠状况有所恢复。对照组大鼠睾丸HE结果显示生精小管内细胞排列正常,生精功能正常。模型组大鼠睾丸生精小管内成熟精子减少,支持细胞和精原细胞排列松散,生精功能受损。治疗组大鼠睾丸较模型组成熟精子增多,支持细胞、精原细胞和精母细胞排列有序。Johnsen score评分结果显示,模型组和治疗组评分显着低于对照组（P<0.05）,治疗组显着高于模型组（P<0.05）。在激光聚共焦显微镜下治疗组大鼠睾丸组织中观察到CM-Dil标记的BMSCs。原子吸收法显示模型组和治疗组睾丸铬含量显着高于对照组（P<0.05）,模型组与治疗组间无统计学差异。Lillie染色结果表明模型组大鼠睾丸内二价铁含量增多,治疗组二价铁含量减少。免疫组化和WB结果显示,模型组和治疗组自噬相关蛋白Beclin1和LC3B表达较对照组显着升高（P<0.05）,治疗组的Beclin1和LC3B表达低于模型组（P<0.05）。铁死亡相关蛋白免疫组化结果显示,模型组和治疗组4-HNE和Tf R1蛋白表达着高于对照组（P<0.05）,而治疗组4-HNE和Tf R1蛋白表达显着低于模型组（P<0.05）。模型组和治疗组GPX4和SLC7A11蛋白表达显着低于对照组（P<0.05）,而治疗组GPX4和SLC7A11蛋白表达显着高于模型组（P<0.05）。免疫组化结果显示,模型组和治疗组的p-AKT和p-m TOR蛋白表达显着低于对照组（P<0.05）。而治疗组的p-AKT和p-m TOR蛋白表达显着高于模型组（P<0.05）。模型组m TOR蛋白表达显着低于对照组（P<0.05）,治疗组m TOR蛋白表达显着高于模型组（P<0.05）。AKT蛋白表达各组之间无统计学差异。AKT、p-AKT和m TOR的WB结果与免疫组化结果趋势一致。结论:骨髓间充质干细胞移植能够修复六价铬致大鼠睾丸损伤。骨髓间充质干细胞可能通过调节自噬和铁死亡的发生来修复六价铬致大鼠睾丸损伤。骨髓间充质干细胞可能通过AKT/m TOR通路调节自噬与铁死亡的发生。
王正[2]（2021）在《草铵膦对雄性小鼠生殖功能的损伤与姜黄素对其的保护效果及作用机制》文中进行了进一步梳理研究背景及目的男性生殖功能障碍的发病率正在逐年升高,目前每年每1000名成年男性中,就有11.7人遭受其困扰。导致男性生殖功能损伤的一个主要因素是过度使用化学用品造成的环境污染,比如农作物或地表水中农药的超标残留。部分化学制剂可在人体中产生过多活性氧自由基,造成了氧化应激损伤。草铵膦是一种在全球范围内广泛使用的广谱触杀型除草剂,通过抑制植物中谷氨酰胺合成酶、造成活性氧累积起到杀伤作用。长期累积摄入一定量的草铵膦对于神经系统、胚胎发育等方面均有负面作用,这是由于草铵膦能引发人体氧化应激反应从而造成损伤。男性睾丸的氧化-还原调节能力较弱,尤其是睾丸中缺乏抗氧化剂保护的精子对于氧化应激反应尤为敏感。氧化应激会导致精子内活性氧水平上升,继而破坏精子细胞质膜上的蛋白质和脂质,同时破坏DNA的完整性,影响细胞膜的流动性和通透性,进而对精子的形态和功能产生负面影响、导致不育。基于草铵膦对人体的损伤原理以及睾丸易受氧化应激损伤的特点,草铵膦可能可以通过日常生活的慢性摄入对男性生殖系统造成一定程度的损伤,但目前关于草铵膦对于男性生殖系统影响的相关研究还比较欠缺。另一方面,研究显示尽早、合理运用抗氧化剂治疗能够有效保护男性生殖功能免受氧化应激损伤。而姜黄素具有多种多样的生物学活性,大量临床研究已经验证了其显着的抗氧化以及抗癌、消炎等作用,并且目前姜黄素已被广泛应于多种疾病的临床治疗上。鉴于其抗氧化能力,姜黄素有着治疗氧化应激损伤所致男性不育的巨大潜力。本研究在既往研究的基础上,深入探索了草铵膦对于雄性哺乳动物生殖系统的损伤与危害,并且验证该损伤可能的机制与原理;同时结合姜黄素的药理学作用,验证其对于该损伤有无保护作用,以期能够为改善不育这一困扰现代男性、亟待解决的难题提供新的思路。研究方法1、建立草铵膦损伤的小鼠精母细胞模型,并验证草铵膦对于小鼠精母细胞的损伤作用;2、建立草铵膦损伤的雄性BALB/c小鼠模型,取出睾丸组织以及附睾中的精子,检测睾丸组织及精子活力,验证草铵膦对于睾丸生精能力的损伤作用;3、探索草铵膦损伤后小鼠精母细胞（GC-2细胞）及雄性BALB/c小鼠生殖系统自身发生的保护性改变;4、探索姜黄素对于草铵膦损伤的GC-2细胞模型及雄性BALB/c动物模型的保护效果及作用通路。结果1、草铵膦处理后小鼠精母细胞活力降低、凋亡增加并伴线粒体膜电位改变;2、草铵膦使小鼠精母细胞产生氧化应激损伤;3、草铵膦处理导致雄性BALB/c小鼠体重减轻、生殖能力下降;4、草铵膦处理导致雄性BALB/c小鼠睾丸组织发生氧化应激并且凋亡增加;5、草铵膦处理后小鼠精母细胞Nrf-2/HO-1通路被激活;6、草铵膦可诱发小鼠精母细胞发生自噬,细胞通过自噬激活Nrf-2/HO-1通路抗氧化;7、姜黄素预处理能够保护草铵膦导致的小鼠精母细胞活力下降,并减少细胞凋亡;8、姜黄素预处理能够减少草铵膦灌胃所导致的BALB/c小鼠生殖系统损伤,保护精子数量及活力。结论草铵膦可对小鼠生殖系统造成氧化应激损伤,造成细胞活力下降、凋亡增加,精子数量减少、活力降低等一系列影响;而另一方面,小鼠生殖系统通过增强自噬激活Nrf-2/HO-1通路可进行一定程度上的保护,而姜黄素可上调Nrf-2/HO-1通路的表达,发挥其抗氧化作用,减轻草铵膦所致小鼠生殖系统的损伤,进而有效地保护了小鼠生殖功能。
杨欢[3]（2021）在《右归饮益精生血的作用机制及其与EPO的相关性》文中研究指明背景《素问·阴阳应象大论》曰“肾生骨髓,髓生肝”。五行之中,肾属水为母,肝属木为子,其“髓生肝”即肾精化生肝血,为母子相生关系的体现。肝藏血,肾藏精,精血可以互化,故“精血同源”。右归饮是经典的补肾益精方,具有阴阳双补、填精补血的功效。课题组假设“促红细胞生成素（EPO）可能是肾精的重要物质基础,可作为肾精的生物学标志物”,并在抗衰、健脑、健骨、改善生殖功能低下、增强免疫等方面验证了补肾益精中药改善肾精亏虚动物体质的同时逆转了EPO的降低。本课题拟研究右归饮对肾精亏虚贫血大鼠模型的改善作用及其与EPO的相关性,以期进一步验证“EPO可作为肾精的生物学标志物”的假设。本课题受到国家自然科学基金面上项目（81473549）资助。目的观察右归饮对肾精亏虚贫血大鼠模型的改善作用及其与EPO的相关性,阐释右归饮“益精生血”疗效的生物学作用机制。方法1.腺嘌呤致肾精亏虚贫血大鼠模型的复制方法:用200 mg·kg-1的腺嘌呤悬液灌胃雄性SD大鼠连续3周后,再每隔一日灌胃持续8周以维持模型。2.模型成功判定标准:（1）肾精亏虚检测指标:检测大鼠血清中肌酐（CREA）、尿素（UREA）、尿素氮（BUN）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）、甲状旁腺激素（PTH）、镁（Mg）、磷（P）、葡萄糖（Glu）、铁（Fe）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和肌酐清除率。（2）贫血检测指标:检测大鼠全血中的红细胞数目（RBC）、红细胞压积（HCT）、血红蛋白（HGB）。每只大鼠与正常组大鼠均值相比,取以上值均出现显着性差异的大鼠,作为造模成功的大鼠,纳入下一步试验。3.模型成功动物分组并均衡性检验及给药:将模型成功的大鼠随机分为模型组和右归饮10 g·kg-1、20 g·kg-1、40 g·kg-1三个剂量组和rh EPO组。分组之后,给药之前,对各组动物的模型成功判定标准指标进行均衡性检验,统计学结果显示无显着性差异后方给予药物。第4周开始,右归饮各组每日上午灌胃相应剂量的右归饮配方颗粒液,rh EPO组三日一次皮下注射500 IU·kg-1的rh EPO,连续给药8周,同时除正常组以外,各组均每隔一日下午灌胃200 mg·kg-1腺嘌呤以维持模型。4.右归饮对肾精亏虚贫血大鼠模型的改善作用的观察指标及检测方法:（1）观察各组动物肾脏组织大体形态学,肾脏进行石蜡切片制作HE染色和Masson染色观察其组织形态学。（2）全自动血液生化仪检测血清中CREA、UREA、Mg、P、Glu、甘油三酯（TG）、碱性磷酸酶（ALP）和尿液中CREA、UREA、总蛋白（TP）的含量。（3）酶联免疫法测定血清中CRH、ACTH、CORT、T3、T4、PTH、Fe、Hepcidin、IL-1、白介素-2（IL-2）、IL-6、TNF-α的含量。（4）兽用全自动血细胞分析仪检测血液中RBC、HCT、HGB、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白浓度、白细胞数目（WBC）、单核细胞数目、单核细胞百分比、中性粒细胞数目、淋巴细胞百分比、PLT、PCT的含量。（5）免疫荧光和免疫印迹法检测肾脏中α-SMA的相对表达量。（6）免疫组化和免疫印迹法检测肾脏中TGFβ的相对表达量。（7）免疫荧光法检测肾脏中PDGFRβ的相对表达量。5.血清和肾脏中EPO含量及肾脏中EPO信号通路的检测方法:（1）酶联免疫法测定血清和肾脏中EPO的含量。（2）免疫印迹法检测肾脏中EPO相关通路中PHD2、GATA2、HIF2α、PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、p-m TOR、HIF1α、EPOR、JAK2、p-JAK2、STAT5、p-STAT5蛋白的相对表达量。结果1.腺嘌呤致模型组大鼠体质及肾功能显着降低。与正常组相比,模型组大鼠毛色更暗淡,精神更加萎靡不振,体重增长更缓慢,24 h尿液更加清澈,24 h尿量显着增多（P<0.01）,肾脏颜色苍白、肿大,表现为“大白肾”,肾脏指数和肾上腺指数显着升高（均P<0.01）,血清中CRH、ACTH、CORT、T3、PTH、Mg、P、ALP、Hepcidin显着升高（P<0.05）,血清中T4、Glu、TG、Fe显着降低（P<0.05）,表明模型大鼠体质降低;与正常组相比,模型组大鼠尿液中CREA、UREA、TP显着降低（P<0.01或P<0.05）,血清中CREA、UREA、BUN显着升高（P<0.05）,肌酐清除率显着降低（P<0.01）,表明模型大鼠肾功能降低。2.腺嘌呤致模型组大鼠出现显着贫血、炎症及肾纤维化。与正常组相比,模型组大鼠血液中RBC、HCT、HGB、MCV、淋巴细胞百分比显着降低（P<0.05或P<0.01）,平均红细胞血红蛋白浓度、WBC、单核细胞数目、单核细胞百分比、中性粒细胞数目显着升高（P<0.05或P<0.01）,表明模型大鼠出现贫血症状。与正常组相比,模型组大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α显着升高（P<0.01）,IL-2显着降低（P<0.01）,表明模型大鼠出现了炎症。与正常组相比,模型组大鼠肾脏中胶原容积分数显着升高（P<0.01）,肾脏中TGFβ、α-SMA、PDGFRβ相对表达量显着升高（均P<0.05）,表明模型大鼠肾脏发生了纤维化。3.腺嘌呤致肾精亏虚贫血大鼠EPO含量显着降低,EPO通路蛋白显着异常。与正常组相比,模型组大鼠血清和肾脏中EPO含量显着降低（P<0.05）;肾脏中PHD2、GATA2蛋白表达显着升高（均P<0.05）,HIF2α、p-AKT、m TOR、p-m TOR、HIF1α、JAK2、p-JAK2、STAT5、p-STAT5显着降低（P<0.05或P<0.01）。4.右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠的体质。与模型组相比,右归饮组大鼠的毛色、精神状态得到改善,体重增长较快,肾脏的组织形态学得到改善,肾脏指数显着降低（P<0.05）,右归饮组血清中CRH、ACTH、CORT、T3、PTH、Mg、P、ALP、Hepcidin显着降低（P<0.05或P<0.01）,Fe显着升高（P<0.05）,右归饮10 g·kg-1组、20 g·kg-1组T4显着升高（P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组、40 g·kg-1组的Glu显着升高（P<0.05）,表明右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠模型的体质。5.右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠的肾功能。与模型组相比,右归饮10 g·kg-1组尿液中UREA显着升高（P<0.05）,右归饮40 g·kg-1组尿液中TP显着升高（P<0.01）,右归饮组血清中CREA、UREA、BUN显着降低（P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组肌酐清除率显着升高（P<0.05）,表明右归饮能改善肾精亏虚贫血大鼠模型的肾功能。6.右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠血常规指标。与模型组相比,右归饮10 g·kg-1组、20 g·kg-1组大鼠血液中的RBC、HCT、HGB显着升高（P<0.05或P<0.01）,右归饮20 g·kg-1组的MCV显着升高（P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组的平均红细胞血红蛋白浓度显着降低（P<0.05）,右归饮10 g·kg-1组的WBC显着降低（P<0.01）,右归饮20 g·kg-1组的单核细胞数目、单核细胞百分比、中性粒细胞数目显着降低（均P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组的淋巴细胞百分比显着升高（P<0.05）。7.右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠的炎症指标。与模型组相比,右归饮组血清中IL-1、IL-6、TNF-α显着降低（P<0.05）,右归饮组IL-2显着升高（P<0.01）。8.右归饮能显着改善肾精亏虚贫血大鼠的肾脏纤维化。与模型组相比,右归饮组胶原容积分数显着降低（P<0.05）,右归饮组肾脏中的TGFβ、α-SMA、PDGFRβ相对表达量显着降低（均P<0.05）,表明右归饮可以减轻模型大鼠的肾脏纤维化程度。9.右归饮能显着逆转肾精亏虚贫血大鼠的EPO含量及信号通路异常。与模型组相比,右归饮20 g·kg-1组、40 g·kg-1组大鼠血清中EPO含量显着升高（P<0.01）,右归饮10 g·kg-1组、20 g·kg-1组、40 g·kg-1组肾脏中EPO含量显着升高（均P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组PHD2、GATA2蛋白相对表达量显着降低（P<0.05）,右归饮各组HIF2α、p-AKT、p-JAK2蛋白相对表达量显着升高（均P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组、40 g·kg-1组PI3K、HIF1α蛋白相对表达量显着升高（均P<0.05）,右归饮40 g·kg-1组m TOR蛋白表达显着升高（P<0.05）,右归饮10 g·kg-1组p-m TOR蛋白表达显着升高（P<0.05）,右归饮20 g·kg-1组STAT5蛋白相对表达量显着升高（P<0.05）。结论1.200 mg·kg-1腺嘌呤连续灌胃3周,间隔灌胃8周后,能成功复制肾精亏虚贫血大鼠模型。2.该模型动物血清中EPO含量和肾脏中EPO蛋白表达均显着下降,PHD2/HIF2α,PI3K/AKT/m TOR/HIF1α及JAK2/STAT5通路中蛋白含量发生显着变化,显示了肾精亏虚贫血与EPO具有显着的相关性。3.补肾益精经典名方右归饮可显着改善肾精亏虚贫血大鼠模型的肾功能、炎症、肾纤维化及血常规指标,其机制可能与升高血清中EPO、肾脏中EPO的含量,调节PHD2/HIF2α,PI3K/AKT/m TOR/HIF1α及JAK2/STAT5通路中蛋白含量有关。4.上述结果证明了补肾益精名方右归饮具有益精生血的作用,为中医理论“精血同源”提供了一个实验支撑,支持“EPO可作为肾精生物学标志物”的假设。
乔祚[4]（2021）在《补肾解毒方对电离辐射损伤孕鼠胎盘组织活性及妊娠结局的防治作用研究》文中研究说明目的观察中、低剂量电离辐射对雌鼠孕产水平、妊娠结局及胎盘活性的影响,探究补肾解毒方对中、低剂量电离辐射致雌鼠生殖机能及妊娠结局损伤的防护作用,通过研究孕鼠胎盘活性的变化,对补肾解毒方防治生殖机能辐射损伤的相关作用和靶点做进一步探讨。方法将购入的180只实验小鼠（雄鼠60只,雌鼠120只）,按照性别分隔并展开为期3d的适应性喂养,并将处于动情期阶段的雄性小鼠和雌性小鼠在第4d早上8:00时,按照1:2比例进行合笼饲养。至第5d早上8:00,观察雌性小鼠是否形成阴栓,如观察到阴栓已形成则视为受孕成功,并将当日记为妊娠第1d。随机抽取105只受孕成功的雌鼠,其后随机分组为:空白对照组,1Gy辐射组、1Gy中药组,2Gy辐射组、2Gy中药组,4Gy辐射组、4Gy中药组,共7组,每组15只。从妊娠第1d开始,每天早上8:00对各组孕鼠进行灌胃,3个中药组灌服补肾解毒方汤剂（浓度13.5g/kg）,0.2ml/只;空白对照组和3个辐射组则灌服生理盐水,0.2ml/只,此实验步骤连续进行10d。妊娠第11d早上暂停灌胃,对孕鼠分别称重后,除去空白对照组,其余6组要按实验要求分别接受与辐射源等距离的1Gy、2Gy、4Gy60Coγ-射线进行全身性辐照。妊娠第12d恢复灌胃操作,至妊娠第20d停止。妊娠第20d不再进行灌胃,对各组孕鼠一般体征进行记录后,用10%水合氯醛对各组孕鼠以腹腔注射的方式实施麻醉,其后进行解剖,取出仔鼠及胎盘,记录孕鼠妊娠结局,计算胎盘系数,对孕鼠胎盘组织抗氧化酶水平进行检测及比较,对孕鼠胎盘病理形态学改变进行观察。结果胎盘系数比较:相较于空白对照组,1Gy辐射组及1Gy中药组的系数都有所下降（P<0.05）,1Gy中药组胎盘系数比1Gy辐射组更高（P<0.05）;2Gy辐射组及2Gy中药组的系数均小于空白对照组（P<0.05）,2Gy中药组大于2Gy辐射组（P<0.05）;而相较于空白对照组,4Gy辐射组及4Gy中药组胎盘系数下降明显（P<0.05）,但4Gy中药组仍大于4Gy辐射组（P<0.05）。胎盘组织活性比较:相较于空白对照组,1Gy辐射组、1Gy中药组胎盘组织中SOD、GSH-Px水平均有所降低（P<0.05）,MDA含量相较于空白对照组均出现上涨的情况（P<0.01）;1Gy中药组中SOD及GSH-Px与1Gy辐射组相比含量更高（P<0.05）,而MDA含量则低于1Gy辐射组（P<0.05）。2Gy辐射组、2Gy中药组胎盘组织中的SOD水平与空白对照组相比偏低（P值分别为P<0.01,P<0.05）,且GSH-Px水平也均低于空白对照组（P<0.05）,MDA则高过空白对照组的含量（P<0.05）;2Gy中药组中的SOD、GSH-Px水平均高于2Gy辐射组（P值分别为P<0.01,P<0.05）,MDA水平则低于2Gy辐射组（P<0.05）。4Gy辐射组、4Gy中药组SOD水平与空白对照组相比下降明显（P值分别为P<0.01,P<0.05）,而两组的GSH-Px水平也均低于空白对照组（P值分别为P<0.05,P<0.01）,两组MDA水平则均高于对照组（P<0.05）,4Gy中药组的SOD、GSH-Px活性比4Gy辐射组更强（P值分别为P<0.05,P<0.01）,而MDA水平均低于4Gy辐射组（P<0.05）。胎盘组织病理形态学观察:空白对照组胎盘绒毛丰富,组织结构和细胞结构未见异常。3个辐射组的胎盘组织存在着不同程度的受损现象,1Gy辐射组变化较小,间质水肿,绒毛血管扩张受阻,滋养层细胞排列规则度下降;2Gy、4Gy辐射组的损伤呈加重趋势,胎盘绒毛数量减少、结构紊乱,滋养层细胞数量下降,细胞形态结构改变,出现细胞器消失、空泡化,甚至变性、坏死等情况,胎盘组织破坏程度随辐射剂量的加大而增加。3个中药组胎盘组织结构破坏程度均低于辐射组,细胞变性、坏死程度与同剂量辐射组相比减轻。结论中、低剂量电离辐射会造成孕鼠状态异常、体重减轻,同时会降低胎盘系数和胎盘组织抗氧化活性,使胎盘组织病理形态发生改变,影响孕鼠妊娠结局。补肾解毒方可一定程度上减轻电离辐射对孕鼠机体造成的损伤,提升辐射后孕鼠体重及机体状态的恢复水平,减轻胎盘组织病理形态方面损伤,修复胎盘组织抗氧化能力,提高胎盘系数和组织活性,从而对孕鼠孕产起到良性干预,改善其妊娠结局。补肾解毒方对于电离辐射损伤孕鼠胎盘组织活性和妊娠结局具有较好的防治效果,对于生殖相关辐射防护而言具有持续研究的价值。
常晓翠[5]（2020）在《α-硫辛酸和绿原酸对镉致鸡肝脏损伤的保护作用》文中指出重金属镉是一种分布广泛、生物毒性明显的常见环境污染物。镉污染可以通过食物链传递、富集和放大,可致人畜发生骨质疏松、实质器官损伤、肿瘤等多种疾病。肝脏是镉毒性作用的重要靶器官,有研究证明镉能够导致肝脏细胞发生凋亡,并且镉肝脏毒性的主要毒理机制是氧化损伤作用。鸡是人们日常食用的主要家禽,因环境污染和使用矿物添加剂脱镉处理不彻底等原因,鸡镉中毒发生的潜在风险较高,这不仅影响鸡的生长发育,还可能使镉通过食物链进入人体内,威胁人类的健康。因此,迫切需要找到鸡镉中毒解毒的有效途径和方法。本试验以镉氧化损伤的毒性机制为理论依据,研究了抗氧化剂α-硫辛酸（α-lipoic acid,α-LA）和绿原酸（chlorogenic acid,CGA）及其联合应用对鸡肝脏损伤的保护作用及其机制。方法:96只一周龄扬州本地三黄鸡,随机分为8组,分别为空白对照组、镉组、α-LA组、CGA 组、α-LA+CGA 组、镉+α-LA 组、镉+CGA 组、镉+α-LA+CGA 组,每组 12 只,公母各半。其中染镉方式为自由饮水（50 mg/L）,α-LA给药方式为拌饲（400 mg/kg）,CGA给药方式为灌胃（45mg/kg）。试验期共三个月,每天记录鸡的体质量,试验结束后采血,测定其血液生化指标,处死鸡采集肝脏、心脏、肾脏、脑等脏器,计算脏器系数;收集肝脏样本,观察其显微和超微病理变化。比色法测定肝脏中抗氧化酶GSH-Px、T-SOD、CAT、GST的活性和MDA、GSH、H2O2以及T-AOC的含量;电感耦合等离子质谱法（ICP-MS）测定肝脏中与抗氧化相关的微量元素Fe、Mn、Zn、Se、Cu及肝脏中镉的含量。荧光定量PCR检测线粒体凋亡通路相关基因的表达量。结果:（1）生长发育指标观察结果显示,与对照组相比,镉中毒组体质量、肝脏系数和心脏系数显着降低（P<0.05）,脑系数,肾脏系数显着升高（P<0.05）;各保护剂组差异不显着（P>0.05）。与镉中毒组相比,各保护剂与镉共处理组体质量、脏器系数有所恢复,但差异不显着（P>0.05）;与α-LA+CGA+镉组相比,α-LA、CGA分别与镉共处理组体质量和脏器系数均无显着变化（P>0.05）。与对照组相比,镉中毒组AST、UA、CREA、镉含量显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,TP、ALB含量、A/G值和血红蛋白浓度极显着降低（P<0.01）,GLO、ALP、LDH、CK无显着差异（P>0.05）;各保护剂组差异不显着（P>0.05）。与镉中毒组相比,α-LA与镉共处理组A/G值、ALB、TP含量显着或者极显着升高（P<0.05或P<0.01）,CREA、镉含量显着下降（P<0.05）,其他指标均无显着变化（P>0.05）;CGA与镉共处理组TP含量和A/G值显着升高（P<0.05）,CREA、镉含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,其他指标无显着变化（P>0.05）;α-LA+CGA与镉共处理组A/G值、TP、ALB、镉含量含量显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,LDH、UA、CREA、镉含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,其他指标无显着变化（P>0.05）。与α-LA+CGA+镉组相比,α-LA与镉共处理组,镉含量显着升高（P<0.05）,其余各指标无明显变化（P>0.05）;CGA与镉共处理组各指标无显着变化（P>0.05）。（2）病理变化观察结果显示镉中毒组肝脏细部分空泡变性或者出现炎性细胞浸润,线粒体脊断裂,模糊,细胞核核膜部分溶解消失等。与镉中毒组比较,各保护剂与镉共处理组细胞核和线粒体损伤有所缓解。（3）肝脏氧化应激指标测定,结果显示,与对照组相比,镉中毒组MDA、GSH、H2O镉含量极显着升高（P<0.01）,T-SOD、GST、GSH-Px、CAT活性和T-AOC2、Mn、Fe、Cu、Zn、Se含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）;各保护剂组各项指标无显着变化（P>0.05）。与镉中毒组相比,α-LA与镉共处理组MDA、GSH、H2O2镉含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,GST、GSH-Px活性和T-AOC、Mn、Cu、Zn含量显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,其他指标无显着变化（P>0.05）;CGA与镉共处理组H2O2、镉含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,T-AOC、Mn显着升高（P<0.05）,其他指标无显着变化（P>0.05）;α-LA+CGA与镉共处理组MDA、GSH、H2O2镉含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.05）,Mn、Fe、Cu、Zn、Se含量显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,其他指标无显着变化（P>0.05）。与α-LA+CGA+镉组相比,α-LA与镉共处理组各指标无显着变化（P>0.05）;CGA与镉共处理组MDA、H2O2含量显着升高（P<0.05）,T-AOC、Zn含量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,其余指标无显着变化（P>0.05）。（4）肝脏凋亡蛋白Bax的免疫组化结果显示,与对照组相比,镉中毒组Bax蛋白表达量极显着升高（P<0.01）;各保护剂组无显着变化（P>0.05）。与镉中毒组相比,各保护剂与镉共处理组Bax蛋白表达量显着或极显着下降（P<0.05或P<0.01）。与α-LA+CGA+镉组相比,α-LA、CGA分别与镉共处理组Bax蛋白表达量无显着差异（P>0.05）。凋亡相关基因表达量结果显示,与对照组相比,镉中毒组Bax、CytC、Caspase3、Caspase9表达量显着或极显着升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2表达量和Bcl-2/Bax值极显着降低（P<0.01）;各保护剂组各基因表达量无显着差异（P>0.05）。与镉中毒组相比,各保护剂与镉共处理组,Bax、Cyt C、Caspase 9和Caspase 3表达量显着或极显着降低（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2的表达量和Bcl-2/Bax值显着或极显着升高（P<0.01）。与α-LA+CGA+镉组相比,α-LA与镉共处理组Bcl-2的表达量和Bcl-2/Bax值显着降低（P<0.05）,其他各基因表达量均无显着差异（P>0.05）;CGA与镉共处理组Bcl-2的表达量和Bcl-2Bax值极显着降低（P<0.01）,Caspase 9 显着升高（P<0.05）。结论:α-LA和CGA能降低镉在体内的蓄积,缓解镉中毒对鸡生长发育产生的不利影响,并且联合用药效果更好。α-LA和CGA能缓解镉对鸡肝脏的氧化损伤,抑制镉通过线粒体通路介导肝细胞的凋亡,对镉致肝脏损伤具有保护作用,联合用药对于提高鸡抗氧化能力、抑制凋亡、减少镉在体内的蓄积都具有更好的效应。
张玉林[6]（2020）在《人羊膜上皮细胞修复大鼠卵巢功能不全的实验研究》文中研究指明每年全球范围内有多达百万女性罹患癌症,其中大约10%的女性患者在育龄期。化学治疗的应用使癌症患者的生存率明显提高,约90%年轻的早期癌症患者在治疗后可以存活,但是化学治疗引起的远期并发症的风险却不可忽视。其中,最突出的远期影响包括因为化学治疗所引起的原发性卵巢功能不全（primary ovarian insufficiency,POI）或卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）所致的早绝经和不育,极大地影响育龄期患者的生存质量。因此,在不妨碍癌症治疗的原则上,提高此类患者的生存质量、保护卵巢功能和生育力已经成为临床上医生与患者共同面临的难题。基础实验及临床病例表明,在杀灭癌症细胞的同时,许多化学治疗药物可以不同程度地损伤卵巢功能、使卵巢结构紊乱、卵巢纤维化明显、影响卵泡的启动、生长发育及成熟过程,但其具体机制仍不十分清楚。目前,临床上预防或者治疗化疗相关卵巢功能不全主要的方法有:促性腺激素释放激素类似物治疗、性激素替代治疗及生育力冷冻保存技术。促性腺激素释放激素类似物治疗预防化疗引起的卵巢功能不全目前只在乳腺癌中观察到有一定效果;性激素替代治疗只能改善患者的围绝经期症状,不能改善卵巢功能及生育能力;而生育力冷冻保存技术受到患者年龄、身体状态及婚姻状态等的制约,因此每种方法都有其局限性,尚不能广泛应用于临床。随着再生医学的兴起及发展,干细胞已经在多种疾病中证实有组织修复及组织再生的作用。目前,多个研究表明,干细胞移植在改善卵巢功能、修复卵巢组织结构及促进生育力方面具有一定的作用,但其机制仍不清楚。近年来,人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells,h AECs）的发现及研究为再生医学领域指引了新的研究方向。由于羊膜为医疗废物、来源丰富、获取简单、无道德伦理的制约,且h AECs具有一定干细胞特性、免疫原性低且未发现致瘤性,因此h AECs在再生医学领域具有广阔的应用前景,有望成为修复化疗所致卵巢功能不全的新方法。据报道,h AECs可以分泌多种细胞因子,这些细胞因子可能参与增殖、免疫调节、细胞凋亡和血管生成过程,并可以通过静脉移植、原位注射或腹腔注射h AECs或h AECs条件培养基改善卵巢功能,但其具体机制仍不十分清楚。第一部分 hAECs的原代细胞提取及生物学特性目的提取h AECs并培养、鉴定,为后续实验提供细胞移植的种子细胞。方法征得孕妇及家属同意并书面签署知情同意书后,收集经剖腹产分娩的羊膜组织,采用胰酶消化法获取h AECs;通过观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物的表达,对分离培养的h AECs进行鉴定;通过细胞免疫荧光检测h AECs表达卵泡刺激素受体（Follicle-stimulating hormone receptor,FSHR）的情况。结果分离纯化的h AECs呈铺路石样,细胞大小及形态均一,呈圆形或多角形,并呈集落样生长;4代后细胞渐呈梭形,细胞增殖减慢;h AECs高表达干细胞标志物（SSEA4,Nanog）、上皮细胞标志物（CD324,CD326）;而低表达间充质细胞标志物（CD105）、造血干细胞标志物（CD34、CD45）和免疫学标志物（HLA-DR）;h AECs可以表达颗粒细胞的标志物FSHR。结论h AECs来源丰富,具有干细胞及上皮细胞特性,低免疫原性,无成瘤性,在干细胞治疗领域中具有广阔的应用前景。第二部分 环磷酰胺诱导大鼠卵巢损伤模型的建立目的建立稳定的环磷酰胺所致大鼠卵巢损伤的动物模型。方法将8-10周龄有规律动情周期的SD大鼠随机分为4组（环磷酰胺注射第1天记为D1）:对照组（D1-D15 0.9%生理盐水）;低剂量环磷酰胺损伤组（D1 50mg/kg,D2-D15 8mg/kg）;中剂量环磷酰胺损伤组（D1 100mg/kg,D2-D15 8mg/kg）;高剂量环磷酰胺损伤组（D1200mg/kg,D2-D15 8mg/kg）。（1）观察大鼠一般状态,称量体重及卵巢重量,绘制大鼠的生存曲线;（2）检测大鼠的动情周期改变,分析环磷酰胺对大鼠卵巢的毒性作用;（3）化学发光法检测化疗结束后3天及2周的血清雌激素E2水平,了解环磷酰胺对大鼠内分泌功能的作用;（4）Elisa检测化疗结束后2周的血清AMH及FSH水平,了解环磷酰胺对大鼠内分泌功能的作用;（5）HE染色观察大鼠卵巢组织学改变及卵泡计数,评估环磷酰胺对卵巢组织学的损伤情况及对卵泡的作用。结果（1）低剂量环磷酰胺组大鼠体重及卵巢重量降低,死亡率低,中、高剂量环磷酰胺组大鼠死亡率高,故选用低剂量环磷酰胺构造卵巢功能不全的模型;（2）模型组大鼠的血清雌激素E2水平较对照组在化疗结束后3天有所下降,在化疗结束后2周明显下降;（3）模型组大鼠的血清AMH较对照组在化疗结束后2周明显下降,而FSH水平较对照组在化疗结束后2周明显上升;（4）模型组及对照组大鼠在化疗开始前均有规律的动情周期,化疗开始后1周,模型组约54%的大鼠出现异常的动情周期,化疗结束后1周模型组仍有46%的大鼠表现为异常的动情周期,而此过程对照组大鼠均有正常的动情周期;（5）环磷酰胺给药后卵巢组织损伤明显,卵巢纤维化明显,模型组较对照组窦前卵泡、窦卵泡明显减少,而闭锁卵泡显着增加。结论低剂量环磷酰胺经腹腔注射（D1 50mg/kg,D2-D15 8mg/kg）,可以建立稳定的环磷酰胺所致大鼠卵巢损伤的模型。第三部分 hAECs修复大鼠卵巢卵巢功能不全的有效性研究目的探究h AECs修复环磷酰胺所致大鼠卵巢损伤的有效性及对生育力的影响,并初步探究h AECs治疗的机制。方法选用PHK26荧光染料成功标记第1代h AECs,用于h AECs移植的体内追踪。将8-10周龄的SD大鼠纳入实验,将大鼠随机分为4组,以第1次腹腔注射环磷酰胺或生理盐水记为第1天（D1）。对照组（D1-15腹腔注射0.9%生理盐水,D16尾静脉注射PBS,双卵巢原位注射PBS）;模型组（D1-15腹腔注射环磷酰胺,D16尾静脉注射PBS,双卵巢原位注射PBS）;h AECs经尾静脉移植组（D1-15腹腔注射环磷酰胺,D16尾静脉注射h AECs,双卵巢原位注射PBS）;h AECs经卵巢原位移植组（D1-15腹腔注射环磷酰胺,D16尾静脉注射PBS,双卵巢原位注射h AECs）。（1）实验中观察大鼠一般状态,称取大鼠体重及卵巢重量;（2）卵巢组织冰冻切片后观察细胞移植后24小时及2周后PKH26标记的h AECs在卵巢中的存活与分布情况;（3）Elisa检测血清中AMH及FSH水平,分析h AECs移植对大鼠内分泌功能的影响;（4）阴道涂片检测大鼠动情周期改变,了解h AECs移植对下丘脑-垂体-性腺轴的完整性的作用;（5）HE染色观察卵巢组织学改变及卵泡计数,评估h AECs修复大鼠卵巢组织结构的效果;（6）免疫组化检测AMH、FSHR及Klotho蛋白在卵巢的分布及表达情况,初步探究h AECs移植修复卵巢损伤可能的机制;（7）大鼠合笼实验探究并记录大鼠胚胎的数量,评估h AECs移植对大鼠生育力的作用。结果（1）PKH26标记的h AECs可以向损伤的卵巢迁移,在细胞移植后24小时、2周均可以观察到红色荧光,移植的h AECs主要分布于卵巢间质区;（2）h AECs移植后可以在一定程度上提高损伤大鼠的体重及卵巢重量;（3）与模型组相比,h AECs移植可以升高损伤大鼠血清AMH水平,并降低血清FSH水平,改善卵巢功能不全大鼠的内分泌功能;（4）h AECs移植可降低损伤大鼠的异常动情周期,降低环磷酰胺所致的卵巢毒性作用;（5）h AECs移植使窦前卵泡、窦卵泡数量增加,闭锁卵泡数量减少,对卵巢组织有修复作用;（6）与模型组相比,h AECs移植可使卵巢组织AMH、FSHR及Klotho蛋白的表达水平上调;（7）h AECs尾静脉移植组、h AECs原位注射组及模型组大鼠的胚胎数量较对照组显着减少,尾静脉移植细胞组大鼠合笼后胚胎数较模型组明显增加,原位注射细胞组大鼠的胚胎数量较模型组略有增加。结论h AECs移植可以修复损伤的卵巢功能和结构,增加窦前及窦卵泡的数量,减少闭锁卵泡的数量;h AECs静脉移植可以显着改善受损大鼠的生育力功能;h AECs移植可以使卵巢组织AMH、FSHR及Klotho蛋白的表达水平上调,可能与抑制原始卵泡过度激活、促进生长卵泡发育、成熟及调节颗粒细胞的功能有关。第四部分 hAECs修复大鼠卵巢功能不全的机制研究目的h AECs修复大鼠卵巢功能不全的可能机制,希望为化疗引起的卵巢损伤的治疗提供相关理论基础,为临床上修复损伤的卵巢功能提供新的思路和策略。方法在已经证实h AECs在修复环磷酰胺所致大鼠卵巢损伤的可行性后,本实验选用RNA SEQ进行三组卵巢组织的测序,每组含3例卵巢组织。三组分别为h AECs尾静脉移植组、h AECs原位注射组及模型组,在h AECs移植后2周取卵巢组织进行测序及进一步验证。（1）卵巢组织的总RNA提取、逆转录、合成双链c DNA、扩增及测序,生物信息学分析h AECs治疗组与模型组的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,对差异表达基因的GO（Gene Ontology）及KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）分析,了解差异基因的功能及可能涉及的通路;（2）RT-q PCR验证部分差异表达基因,进一步明确差异基因的表达水平;（3）免疫组化及Western Blot验证显着富集的类固醇激素合成通路的蛋白表达水平,从基因及蛋白表达水平探究h AECs治疗的潜在机制。结果（1）m RNA测序发现h AECs尾静脉移植组和模型组共有783个表达差异的基因,其中有619个上调的差异基因及164个下调的差异基因。而原位注射h AECs组与模型组之间有168个差异表达基因,其中116个上调的差异基因和52个下调的差异基因;（2）GO分析显示,h AECs尾静脉移植组与模型组的DEGs主要富集于离子通道活性和跨膜转运蛋白活性,而原位注射h AECs组与模型组的DEGs显着富集类固醇激素生物合成过程和类固醇激素代谢过程。KEGG分析显示,h AECs尾静脉移植组与模型组的DEGs在核糖体、蛋白消化和吸收通路、神经活动配体-受体相互作用通路及c AMP信号通路显着富集;而原位注射h AECs组与模型组的DEGs主要参与类固醇激素生物合成通路;（3）绘制维恩图发现尾静脉注射细胞组与原位注射细胞组相对于模型组共同差异表达的基因共有4个,包括2个上调和2个下调的基因。在进一步的q PCR验证中,2个上调差异基因IRF7（regulatory factor 7）与Mx1（Mx dynamin-like GTPase 1）表达与测序结果一致,即IRF7与Mx1在尾静脉注射细胞组与原位注射细胞组的表达均显着增加,相对于模型组卵巢组织的表达。而另两个下调差异基因MFAP31（microfibril-associated glycoprotein 3-like）及CITED2（c AMP-responsive element-binding protein（CREBBP）/p300-interactingtrans-activator 2 with glutamic acid（E）and aspartic acid（D）-rich tai）在q PCR的验证中,三组无显着差异;（4）KEGG分析显示原位注射组与模型组间DEGs主要富集于类固醇激素生物合成通路,进一步q PCR发现,Msmo1、SQLE、NSDH1、FDFT1、TM7SF2在原位注射组显着上调,而其他三个基因DHCR24,CYP51,HSD17B7仍然高于模型组,这与测序结果比较一致;m RNA测序结果显示,与模型组相比,原位注射h AECs组中与合成雌激素和黄体酮的关键酶如Star、Cyp11a1、Cyp19a1和Hsd17b1的表达值（FPKM值）也升高。此外,我们还观察分析了3组中血管内皮生长因子受体1（Vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1）、VEGFR2和VEGFR3的表达。VEGFR1（原位注射h AECs组）和VEGFR2（静脉移植h AECs组）的表达分别较模型组显着升高（P<0.05）,而VEGFR3在3组间无差异;（5）免疫组化和western blotting分析发现,原位注射细胞组与模型组之间DEGs显着富集的类固醇激素生物合成通路的其中2个酶角鲨烯单加氧酶（Squalene monooxygenase,SQLE）和法尼基二磷酸法尼基转移酶1（Farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1）主要在卵巢黄体组织的颗粒细胞中表达,原位注射组的表达较模型组显着升高（P<0.01）。结论h AECs移植可能通过上调AMH表达,减少原始卵泡的过度激活;增加FSHR及KL蛋白表达,维持生长卵泡的发育及促进卵泡成熟;高通量测序结果显示h AECs移植对核糖体、蛋白消化、蛋白吸收、神经活性配体-受体相互作用、c AMP信号通路、甾体生物合成通路等均有影响,促进类固醇激素合成、卵泡发育和排卵;此外,h AECs移植还可通过上调促血管及抗炎因子IRF7、Mx1、VEGFR1及VEGFR2,促进血管生成,减少炎症等发挥修复作用。
晏斌[7]（2020）在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中认为背景:2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计全世界大约有4850万对夫妇（8～12%）患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%～70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑（Ornidazole,ORN）制备弱精子症动物模型,观察不同剂量（200,400,800 mg/（kg·d））的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱（L-carnitine,LC）含量、附睾肉碱转运蛋白（Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2）的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/（kg·d）ORN;模型 2 组:400mg/（kg·d）ORN;模型 3组:800mg/（kg·d）ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na（由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃）。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液（0.7ml/100g）进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率（PR+NP级精子百分率）分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义（P>0.05）;模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）;模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异（P<0.05）。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）,模型3组精子浓度下降（P<0.01）;与对照组比较,模型1组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率无统计学改变（P>0.05）,模型2组、模型3组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率均下降（P<0.01）。结论:1.200 mg/（kg·d）ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/（kg·d）ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/（kg·d）ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/（kg·d）ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/（kg·d）ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在（pH 7.2～7.4）0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）;模型组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降（P<0.05）。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,（PR+NP）级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高（P<0.05）;且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组（P<0.05）。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠（PR+NP）级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高（P<0.05）;与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异（P<0.01）;灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异（P>0.05）。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。
安琪[8]（2020）在《睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究》文中研究说明背景:睾酮在精子发生的过程中发挥着至关重要的作用。一些无精子症和少弱精子症患者的外周血睾酮会有所降低,但也有少数患者的外周血睾酮水平未低于正常范围。男性不育症中的特发性少弱精子症发病机制不明,临床上主要还是依赖经验性的药物治疗,其中补充雄激素或其衍生物则是其中的一种常用疗法。此外,药物治疗在特发性男性不育的临床治疗上应用广泛且相对简单,同时与自然生育的期望更为符合,因此更易于被医患双方接受。目的:通过建立少弱精子症模型大鼠来探究雄激素治疗的效果,并对可能的机制进行探讨。方法:第一,系统回顾了有关TU单独或联合用药治疗男性少弱精子症的文献,通过荟萃分析为下一步探索雄激素治疗少弱精子症模型大鼠提供了循证医学支持。第二,在结合既往研究的基础上,选取了6月龄的雄性SD正常大鼠来观察四种不同剂量的雄激素对其生殖器官和内分泌代谢的影响,以进一步明确生理剂量范围并探索下一步治疗实验中适合的药物剂量。第三,根据筛选出可能适用于治疗的药物剂量,对雷公藤多苷诱导的少弱精子症模型大鼠进行治疗,并从生殖脏器质量、精子质量、血清激素水平、睾丸组织抗氧化指标以及病理组织形态学等多角度、多方面评估治疗效果。第四,通过电镜来观察大鼠睾丸组织中精曲小管的超微结构变化,并在借助HPLC-MS的基础上深入挖掘有关雄激素治疗少弱精子症大鼠的代谢组学变化,即通过生物体内代谢物的变化情况来探究代谢物与病理变化之间的相对关系从而进行定量分析。同时,结合相关的凋亡通路和细胞特异标志物,探索了雄激素治疗少弱精子症大鼠模型的准确靶点与作用机制,为其临床应用提供了理论基础。结果:首先,就改善患者精液质量的结果而言,荟萃分析显示TU联合治疗的效果整体上要优于单用十一酸睾酮或其他用药治疗,并且单用十一酸睾酮的疗效并不亚于使用其他药物。因此,十一酸睾酮可在一定程度上直接或间接地促进和改善特发性少弱精子症患者的精液质量,也为下一步探讨雄激素治疗少弱精子症大鼠模型提供了文献依据和理论基础。其次,通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,并结合大鼠脏器质量、精子质量、血清激素水平以及病理组织形态学等,进一步筛选出了 7.56mg/kg和15.12mg/kg两个对于正常大鼠生理功能影响相对最小的“生理剂量”。第三,通过建立少弱精子症大鼠模型,结果提示雄激素治疗能够在一定程度上改善精子浓度和活动率（P<0.05）,但对于精子的运动参数并无改善作用（P>0.05）;H&E染色结果提示:与空白对照组相比,十一酸睾酮治疗组的生精细胞有所增多,间质细胞变性,支持细胞胞浆空泡化相对减少,生精上皮进一步恢复,继而Johnsen评分明显恢复并且凋亡率显着降低（P<0.05）;在血清生殖激素方面:FSH和LH水平明显恢复（P<0.05）,同时T和E2水平显着增加（P<0.05）;而睾丸组织中的氧化应激物MDA与GSH-PX的水平明显降低（P<0.05）,特别是睾丸内睾酮的水平明显升高（P<0.05）。第四,通过电镜观察十一睾酮治疗组中睾丸组织中精曲小管的超微结构,发现生精细胞间隙明显缩小,生精细胞排列相对紧密,线粒体略有肿胀但结构基本完整,线粒体嵴排列紊乱减少,空泡亦显着减少;借助HPLC-MS挖掘少弱精子症模型大鼠在治疗前后代谢物质的差异,结果发现花生四烯酸、精氨酸和脯氨酸、苯丙氨酸以及甘油磷脂这四条代谢物质通路在治疗前后存在显着差异（P<0.05）;第五,以甘油磷脂代谢途径为基础,验证了可能涉及的通路如Bcl-2/Bax-Caspase3/9以及RIPK1-MLKL/pMLKL的蛋白表达情况;与溶剂对照组相比,治疗后的线粒体凋亡通路Bax、Caspase3/9表达明显降低（P<0.05）,而Bcl-2表达显着增加（P<0.05）;在细胞坏死性凋亡通路中,TNF-α、RIPK1以及pMLKL表达量显着增加（P<0.05）,pMLKL表达则是明显降低（P<0.05）;细胞特异性标志物如睾丸紧密连接标志物Occludin,支持细胞标志物SOX9,间质细胞标志物StAR以及肽能神经纤维标志物PGP9.5等经治疗后都有明显恢复（P<0.05）。结论:雄激素治疗对于睾酮低下性少弱精子症大鼠模型精子生成与生殖功能恢复具有明显改善作用。1.通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,筛选与确定7.56mg/kg和15.12mg/kg两个“生理剂量”用于少弱精子症模型大鼠的治疗实验;2.在建立的睾酮低下型少弱精子症大鼠模型的基础上,我们发现15.12mg/kg剂量的十一酸睾酮无论是在改善生殖内分泌激素水平和精子质量,还是在减轻氧化应激产物对细胞组织损伤都有相对更好的效果;3.电镜结果提示:十一酸睾酮15.12mg/kg剂量对于生精细胞超微结构,包括细胞间隙和线粒体地恢复更加明显,在借助HPLC-MS代谢组学的基础上发现磷脂甘油代谢通路具有显着差异性;4.雄激素可通过线粒体凋亡途径以及细胞坏死性凋亡途径来实现其治疗作用,并且可改善相关细胞标志物来调控生精过程。
张大伟[9]（2020）在《垂直距离对骨质疏松大鼠TMJ关节盘的影响》文中提出目的通过对骨质疏松大鼠后牙区垫合垫打开咬合,探讨垂直距离的升高对骨质疏松大鼠颞下颌关节盘的影响,从而为临床骨质疏松正畸患者打开咬合提供一定的实验依据。方法1 90只SD大鼠,雌性,6月龄,体重210g～230g,随机选取40只做正常组,在剩余大鼠中选45只大鼠行维甲酸灌胃,5只行等体积蒸馏水灌胃,15天后从灌胃组大鼠中各选5只进行检测,测量每只大鼠的体质量、血清碱性磷酸酶（ALP）含量、生殖系统脏器系数、以及股骨骨密度（BMD）,建立骨质疏松的动物模型。2将骨质疏松大鼠,平均分为A、B两组,每组20只,A组为骨质疏松+合垫组,B组为骨质疏松组。再将正常组大鼠,平均分为C、D两组,每组20只,C组为正常+合垫组,D组为正常组。对A、C两组大鼠双侧上颌磨牙区垫合垫建立垂直距离升高模型,B、D两组大鼠不做任何措施。每组按照各个时间点（第1、2、3、4周）处死大鼠。组织固定后,CBCT观察大鼠头部颞下颌关节髁突形态及在关节窝中的位置变化;HE染色观察大鼠关节盘组织结构及炎症表现;免疫组织化学染色检测TNF-α表达水平,Image-Pro Plus6.0软件测量TNF-α的阳性表达光密度值（MOD值）,所有数据通过SPSS 26.0统计软件进行统计分析。结果1灌胃建模15天后,骨质疏松模型组与对照组大鼠体质量差异有统计学意义（P<0.05）;两组间血清碱性磷酸酶（ALP）含量有显着差异（P<0.05）;模型组与对照组大鼠生殖系统脏器系数差异具有统计学意义（P<0.05）;对于大鼠股骨骨密度（BMD）的结果,两组大鼠骨密度具有显着差异（P<0.05）。2 CBCT观察结果显示前3周时,A组髁突呈现不规则状,关节腔间隙变小,且随着时间推移,髁突不规则程度增加甚至有轻微骨缺损,关节腔间隙几近消失;C组髁突形态结构正常,关节腔略有减小,随着时间推移,髁突形态结构轻度异常,关节腔间隙轻微减小;第4周时,A组髁突仍呈不规则状,未见明显骨缺损,关节腔间隙略微增加;C组髁突形态结构正常,关节腔大小正常。HE染色可见,在第1周、2周、3周时A组关节盘的炎症反应呈升高趋势,纤维破坏逐渐加深,在第4周时,其炎症虽有所缓解但未曾消退,纤维结构部分恢复。而C组在第4周时,其颞下颌关节盘的炎症几乎消退殆尽,纤维结构正常。免疫组织化学染色结果显示,第1周、第2周、第3周和第4周时,A组与其他3组两两比较均存在统计学差异,（P<0.05）;且B组与D组在各时间点两两比较有统计学差异（P<0.05）;C组与D组在前3周两两比较均有统计学差异（P<0.05）,而在第4周时差异无统计学意义（P>0.05）。结论1垂直距离的升高会对大鼠的颞下颌关节盘造成一定的病理性改变。2正常大鼠垂直距离升高后颞下颌关节盘的病理改变易于恢复。3骨质疏松大鼠颞下颌关节盘的病理改变程度随着升高垂直距离时间而加重,且不易恢复。图23幅;表8个;参89篇。
王智超[10]（2020）在《基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:在前期实验研究“感毒清的质量控制成分黄芪甲苷对PM2.5所致急性肺损伤肺组织结构保护作用”的基础上,进一步探讨黄芪甲苷保护PM2.5所致急性肺损伤的作用机制。方法:将35只大鼠随机分成5组:空白组、模型组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组。实验设计为造模前经腹腔注射（intraperitoneal injection,i.p）预防性给药,以观察药物对PM2.5造成损伤的保护性作用。预防性给药3日后开始制备急性肺损伤大鼠模型,以气道滴注PM2.5混悬液的方式进行,造模时间为预防性给药开始后的第3日、第5日。预防性给药剂量为:黄芪甲苷低剂量50mg/kg/b.w,每日给药1次;黄芪甲苷高剂量100mg/kg/b.w,每日给药1次;法舒地尔剂量10mg/kg/b.w,每日给药1次;空白组和模型组给与等体积生理盐水。本次实验于第二次造模后开始计时,计时24h时后麻醉大鼠处死,获取肺组织及肺泡灌洗液进行检测。右肺膈叶做干湿比观察肺组织水肿情况;右肺尖叶做HE染色及Mc Guigan病理评分观察病理损伤程度;副叶检测ICAM-1、IL-1β、MPO水平判断肺损伤炎症水平;BCA法检测肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白的含量,同时做细胞计数及细胞分类判断肺损伤渗出水平;部分右肺膈叶做透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤情况;免疫组化法观察肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2定位、Western Blot法检测肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2、NF-κB、p-NF-κB、IκB、p-IκB、E-cadherin含量。实验结果采用SPSS 22.0统计软件进行数据统计及分析,Graph Pad Prism 8.0进行绘图。结果:（1）肺组织水肿情况:与空白组相比,模型组大鼠的干湿比、总肺含水量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织干湿比、总肺含水量明显降低（P<0.001）。（2）肺组织中总蛋白含量和细胞渗出情况:在BCA法检测总蛋白渗出中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显降低（P<0.001）。在细胞计数和中性粒细胞瑞氏-吉姆萨染色中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显升高（P<0.001）;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量组和法舒地尔组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显下降（P<0.001）,黄芪甲苷低剂量组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数有所下降（P<0.01）。（3）肺组织形态学观察:HE染色结果表明空白组大鼠肺组织结构基本完整;模型组大鼠肺泡结构出现塌陷,肺泡充血、出血明显,大量含蛋白质水液渗出,中性粒细胞和成纤维细胞聚集;各给药组大鼠肺组织结构较模型组明显好转。在病理评分中,与空白组相比,模型组大鼠病理总积分明显升高（P<0.001）,在出血（P<0.01）、肺泡充血（P<0.05）、肺泡壁增厚或透明膜（P<0.05）评分中有升高;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量明显降低病理总积分（P<0.001）和出血评分（P<0.01）;黄芪甲苷低剂量、法舒地尔可以降低病理总积分（P<0.01）。（4）肺组织中炎症水平:与空白组相比,模型组大鼠IL-1β水平（P<0.01）、MPO活性（P<0.001）、ICAM-1活性（P<0.001）明显升高;与模型组相比,各给药组IL-1β、ICAM-1水平明显降低（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量组、低剂量组MPO活性明显降低（P<0.001）,法舒地尔组MPO活性有所降低（P<0.01）。（5）肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构:空白组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积正常,肺泡结构基本正常。模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积增大且不规则,排空明显呈空泡化,肺泡结构紊乱。各给药组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构较模型组明显好转,肺泡结构基本正常。（6）Rho A/ROCK蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,ROCK2蛋白活性有一定升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白活性明显降低（P<0.001）。与模型组相比,各给药组Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,法舒地尔明显抑制ROCK2蛋白活性（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量可抑制ROCK2蛋白活性（P<0.05）;黄芪甲苷高剂量组E-cadherin蛋白活性有所升高（P<0.05）,黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组E-cadherin蛋白活性明显升高（P<0.01）。（7）NF-κB蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显降低（P<0.001）。结论:（1）黄芪甲苷可以保护PM2.5诱导的急性肺损伤,抑制PM2.5造成的炎症因子、水肿液和蛋白质渗出。（2）黄芪甲苷可以抑制PM2.5所致的炎症反应,保护肺组织的正常结构和功能。（3）黄芪甲苷对肺组织结构的保护作用可能是通过Rho A/ROCK/NF-κB信号通路发挥作用。
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本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 铬的一般特性介绍 |
| 1.2 铬的应用与污染现状 |
| 1.3 Cr(Ⅵ)的毒性 |
| 1.3.1 Cr(Ⅵ)对呼吸系统的毒性作用 |
| 1.3.2 Cr(Ⅵ)对皮肤的毒性作用 |
| 1.3.3 Cr(Ⅵ)对雄性生殖系统的毒性作用 |
| 1.4 Cr(Ⅵ)损伤生殖系统的机制 |
| 1.4.1 氧化应激损伤 |
| 1.4.2 DNA损伤 |
| 1.4.3 自噬 |
| 1.4.4 铁死亡 |
| 1.4.5 PI3K/AKT/m TOR信号通路参与调节自噬和铁死亡 |
| 1.5 Cr(Ⅵ)致睾丸损伤的修复 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 仪器与试剂 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 BMSCs的分离、扩增和鉴定 |
| 2.2.3 BMSCs向成脂细胞和成骨细胞诱导分化 |
| 2.2.4 CM-Dil标记BMSCs |
| 2.2.5 BMSCs修复重铬酸钾致大鼠睾丸损伤模型的建立 |
| 2.2.6 大鼠一般状态观察 |
| 2.2.7 原子吸收法检测大鼠睾丸内铬含量 |
| 2.2.8 大鼠睾丸内骨髓间充质干细胞的定植 |
| 2.2.9 大鼠睾丸病理组织学观察及病理评分 |
| 2.2.10 Lillie染色检测大鼠睾丸内二价铁含量变化 |
| 2.2.11 免疫组织化学法检测大鼠睾丸内自噬、铁死亡和AKT/m TOR通路相关蛋白的表达 |
| 2.2.12 WesternBlot 法检测睾丸内自噬和 AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达 |
| 2.3 统计学分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 BMSCs的分离、扩增和鉴定 |
| 3.1.1 BMSCs分离和扩增 |
| 3.1.2 BMSCs表面标志检测 |
| 3.1.3 BMSCs细胞周期的检测 |
| 3.1.4 BMSCs向成脂和成骨细胞诱导分化 |
| 3.1.5 CM-Dil标记BMSCs观察和标记率 |
| 3.2 BMSCs移植后在Cr(Ⅵ)暴露大鼠睾丸中的定植 |
| 3.3 Cr(Ⅵ)暴露大鼠致睾丸损伤和BMSCs对 Cr(Ⅵ)致睾丸损伤的修复 |
| 3.3.1 大鼠一般状态观察 |
| 3.3.2 大鼠睾丸的病理组织学观察和病理评分 |
| 3.3.3 大鼠睾丸铬含量检测 |
| 3.3.4 大鼠睾丸内二价铁含量的检测 |
| 3.3.5 免疫组织化学法检测大鼠睾丸内自噬相关蛋白的表达 |
| 3.3.6 Western Blot法检测大鼠睾丸内自噬相关蛋白的表达 |
| 3.3.7 免疫组织化学法检测大鼠睾丸内铁死亡相关蛋白的表达 |
| 3.3.8 免疫组织化学法检测大鼠睾丸内AKT/m TOR信号通路相关蛋白的表达 |
| 3.3.9 Western Blot 法检测大鼠睾丸内 AKT/mTOR 信号通路相关蛋白的表达 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 BMSCs具有修复Cr(Ⅵ)致大鼠睾丸组织的损伤的作用 |
| 4.2 BMSCs修复Cr(Ⅵ)致大鼠睾丸组织的损伤的机制探讨 |
| 4.2.1 BMSCs可能通过减少自噬修复Cr(Ⅵ)致大鼠睾丸组织损伤 |
| 4.2.2 BMSCs可能通过减少铁死亡修复Cr(Ⅵ)致大鼠睾丸组织损伤 |
| 4.2.3 BMSCs可能通过AKT/m TOR通路调节自噬与铁死亡的发生 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 第一部分 草铵膦对于雄性小鼠精母细胞及生殖系统的损伤作用 |
| 一、前言 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第二部分 姜黄素对于草铵膦引起的小鼠精母细胞及雄性小鼠生殖系统损伤的保护作用 |
| 一、前言 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 氧化应激对于男性不育影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 肾精亏虚贫血大鼠模型评价及其与EPO的相关性 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 腺嘌呤致大鼠肾精亏虚评价 |
| 3.2 腺嘌呤致大鼠贫血评价 |
| 3.3 腺嘌呤致肾精亏虚贫血大鼠模型成功的判定依据 |
| 3.4 腺嘌呤致肾精亏虚贫血大鼠EPO减少 |
| 本章讨论 |
| 本章小结 |
| 第二章 右归饮对肾精亏虚贫血大鼠的的改善作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 右归饮对肾精亏虚贫血大鼠体质的改善 |
| 3.2 右归饮对肾精亏虚贫血大鼠血常规指标的改善 |
| 3.3 右归饮对肾精亏虚贫血大鼠炎症指标的改善 |
| 3.4 右归饮对肾精亏虚贫血大鼠肾脏纤维化的改善 |
| 本章讨论 |
| 本章小结 |
| 第三章 右归饮改善肾精亏虚贫血大鼠的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 右归饮显着升高肾精亏虚贫血大鼠血清和肾脏中EPO的水平 |
| 3.2 右归饮能调控肾精亏虚贫血大鼠肾脏中EPO上游PHD2/HIF2α通路中相关蛋白的表达 |
| 3.3 右归饮能显着上调肾精亏虚贫血大鼠肾脏中EPO上游PI3K/AKT/m TOR/HIF1α通路中相关蛋白的表达 |
| 3.4 右归饮能显着上调肾精亏虚贫血大鼠肾脏中EPO下游JAK2/STAT5 通路中相关蛋白的表达 |
| 本章讨论 |
| 本章小结 |
| 第四章 右归饮益精生血作用机制与EPO相关的逻辑探讨(理论分析) |
| 1.肾精与EPO的主要生成来源相似 |
| 2.肾精与EPO对于机体生理功能均具有非同一般的重要作用 |
| 3.肾精亏虚与EPO降低对机体疾病的发生发展均具有重要影响 |
| 4.补充外源性EPO能够改善肾精亏虚证贫血大鼠的体质 |
| 5.补肾益精名方右归饮改善肾精亏虚贫血大鼠体质的同时伴随着EPO升高 |
| 全文总结 |
| 创新点及意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 促红细胞生成素与中医肾精的相似性探讨 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间科研工作汇报 |
| 附录:中英文缩略词对照表 |
| 动物外观图片 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新型的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、文献综述 中医药防治辐射导致生殖系统受损的相关研究 |
| 参考文献 |
| 二、在学期间科研成绩 |
| 三、致谢 |
| 四、个人简介 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 镉的毒性作用及机理研究进展 |
| 1 镉的理化特性 |
| 2 镉的污染状况 |
| 3 镉对机体的损伤 |
| 3.1 镉与肝损伤 |
| 3.2 镉与肾损伤 |
| 3.3 镉与骨损伤 |
| 3.4 镉与脑损伤 |
| 3.5 镉与免疫损伤 |
| 3.6 镉与生殖损伤 |
| 4 镉中毒机理研究 |
| 5 镉解毒剂的研究进展 |
| 第二章 α-硫辛酸的生物学功能与应用研究进展 |
| 1 α-硫辛酸的理化特性 |
| 2 α-硫辛酸的体内代谢 |
| 3 α-硫辛酸的抗氧化作用 |
| 4 α-硫辛酸的应用 |
| 第三章 绿原酸的生物学功能与应用研究进展 |
| 1 绿原酸的理化特性 |
| 2 绿原酸的代谢 |
| 3 绿原酸的作用 |
| 4 绿原酸的应用 |
| 本研究的目的与意义 |
| 第二部分 实验部分 |
| 第一章 α-硫辛酸和绿原酸对镉暴露下鸡生长性能和生化指标影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与处理 |
| 2.2 样品采集 |
| 2.3 血清生化指标的检测 |
| 2.4 血清镉含量的检测 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡体质量的影响 |
| 3.2 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡各脏器系数的影响 |
| 3.3 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡血清生化指标的影响 |
| 3.4 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡血液红细胞的影响 |
| 3.5 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡血清中镉含量的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 α-硫辛酸和绿原酸对镉暴露下鸡肝脏组织病理学的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物的处理与分组 |
| 2.2 肝脏组织病理学的观察 |
| 2.3 肝脏组织超微结构的观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 α-硫辛酸和绿原酸对镉中毒鸡肝脏组织病理学的观察 |
| 3.2 α-硫辛酸和绿原酸对镉暴露下鸡肝脏组织超微结构的观察 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 α-硫辛酸和绿原酸对染镉鸡肝脏抗氧化性能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物的分组与处理 |
| 2.2 肝脏氧化指标的测定 |
| 2.3 肝脏微量元素的测定 |
| 2.4 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝脏氧化指标的测定 |
| 3.2 肝脏中微量元素的测定 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 α-硫辛酸和绿原酸对染镉鸡肝脏细胞线粒体凋亡通路影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物的处理与分组 |
| 2.2 免疫组化切片的制备 |
| 2.3 引物的设计 |
| 2.4 肝脏组织总RNA的提取 |
| 2.5 RNA的转录 |
| 2.6 qRT-PCR |
| 2.7 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝脏组织凋亡蛋白Bax的免疫组化结果 |
| 3.2 肝脏线粒体凋亡基因的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第1章 hAECs的分离、培养、鉴定与生物学特性分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第2章 环磷酰胺诱导大鼠卵巢损伤模型的建立 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第3章 hAECs修复大鼠卵巢功能不全的体内实验 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第4章 hAECs修复大鼠卵巢功能不全的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第5章 结论 |
| 第6章 综述 |
| 1 综述一化学治疗引起卵巢功能损伤的机制与治疗措施 |
| 2 综述二羊膜上皮细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 综述一 中医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 西医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态 |
| 3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量 |
| 3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数 |
| 3.4 精子浓度及活动率 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究 |
| 实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 精子浓度及活动率 |
| 3.2 附睾LC含量 |
| 3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响 |
| 3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响 |
| 实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 灵归方对血清性激素水平的影响 |
| 3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响 |
| 3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响 |
| 讨论 |
| 1. 选择LC相关通路作为研究的依据 |
| 2. 选择ORN作为造模药物的依据 |
| 3. 灵归方组方分析 |
| 4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制 |
| 4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量 |
| 4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达 |
| 4.3 灵归方抗氧化作用 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一章 雄激素治疗少弱精子症的研究总结 |
| 前言 |
| 第一节 雄激素及相关制剂在男性特发性少弱精子症治疗中的应用现状 |
| 1. 男性不育症及特发性少弱精子症概念 |
| 2. 睾酮生成与精子发生的关系 |
| 3. 雄激素口服及注射常用制剂的药代动力学以及安全性 |
| 4. 雄激素制剂的用法和疗效 |
| 5. 中医药对少弱精子症的治疗 |
| 6. 雄激素在少弱精子症治疗中的展望 |
| 参考文献 |
| 第二节 国内雄激素治疗少弱精子症对患者精液参数改善情况的荟萃分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 检索策略 |
| 1.2 干预措施以及结局变量 |
| 1.3 疗效判定标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 文献筛选与资料提取 |
| 1.7 文献质量评估 |
| 1.8 统计学处理方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1 文献检索情况 |
| 2.2 荟萃分析结果 |
| 2.2.1 精液量 |
| 2.2.2 精子浓度 |
| 2.2.3 精子活力 |
| 2.2.4 精子畸形率 |
| 2.2.5 精子活动率 |
| 2.2.6 总有效率(%) |
| 2.3 发表偏倚分析 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 雄激素对正常大鼠生殖激素水平及生精功能的影响 |
| 前言 |
| 第一节 正常大鼠雄激素的给药方式及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TU注射对正常大鼠睾丸形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TU注射对正常大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 TST对少弱精子症模型大鼠生殖功能影响的研究 |
| 前言 |
| 第一节 少弱精子症大鼠模型的建立、雄激素治疗性给药以及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症大鼠模型的睾丸组织形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TST对睾丸组织生精细胞凋亡的检测(TUNEL法) |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第四节 TST对少弱精子症模型大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第五节 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织氧化应激指标以及睾酮水平的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织蛋白及血清代谢组学的调控研究 |
| 前言 |
| 第一节 透射电镜观察“生理剂量”TST对大鼠睾丸组织超微结构的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症模型大鼠作用的HPLC-MS分析——基于代谢组学的研究 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 结论 |
| 第三节 Bcl-2/Bax-Caspase3/9和TNFα-RIPK1-MLKL凋亡途径相关基因蛋白表达调控 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 博士期间发表论文及参与科研项目情况 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 大鼠骨质疏松模型的建立 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料与器械 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.1.3 取材与检测 |
| 1.2 实验结果 |
| 1.2.1 灌胃后动物的大体观察 |
| 1.2.2 大鼠体质量的测量结果 |
| 1.2.3 大鼠血清ALP的测量结果 |
| 1.2.4 大鼠生殖系统脏器系数的测量结果 |
| 1.2.5 大鼠股骨骨密度的测量结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第2章 垂直距离的升高对骨质疏松大鼠TMJ关节盘的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料与器械 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 样本采集、检测与统计 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 大鼠颞下颌关节CBCT观察结果 |
| 2.2.2 大鼠颞下颌关节盘HE染色结果 |
| 2.2.3 免疫组织化学染色结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 实验动物的选择 |
| 2.3.2 骨质疏松动物模型的建立 |
| 2.3.3 垂直距离升高模型的建立 |
| 2.3.4 颞下颌关节的变化 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第3章 综述 垂直距离与骨质疏松症对颞下颌关节影响的研究进展 |
| 3.1 骨质疏松症的发病机制 |
| 3.2 骨质疏松症对TMJ的影响 |
| 3.3 垂直距离对颞下颌关节的影响 |
| 3.4 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写 |
| 第一部分 文献回顾 |
| 1.颗粒物污染与健康效应 |
| 1.1.细颗粒物PM2.5的理化特征 |
| 1.2.细颗粒物PM2.5对健康效应的影响 |
| 1.3.细颗粒物PM2.5对呼吸系统的影响机制 |
| 2.细颗粒物诱导急性肺损伤的机制探讨 |
| 2.1.急性肺损伤与细颗粒物 |
| 2.2.炎症损伤是细颗粒物致急性肺损伤的重要机制 |
| 2.3.肺泡上皮细胞介导的水液转运功能下降是细颗粒物致肺损伤的关键结局 |
| 2.4.肺微血管内皮细胞介导的炎症渗出是细颗粒物致肺损伤的中心环节 |
| 2.5.粘附分子在细颗粒物致急性肺损伤中的桥梁作用 |
| 3.Rho A/ROCK信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 3.1.小G蛋白Ras超家族中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 3.2.Rho A/ROCK信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的作用机制 |
| 4.NF-κB信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 4.1.NF-κB信号通路中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 4.2.NF-κB信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的直接作用 |
| 5.细颗粒物PM2.5介导急性肺损伤的中医认识 |
| 5.1.中医学对PM2.5为主的大气污染的认识 |
| 5.2.PM2.5所致肺系疾病及急性肺损伤的中医认识 |
| 5.3.中药黄芪的益气功效是预防环境毒邪致病的关键 |
| 6.参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1.本课题的研究思路,内容 |
| 1.1.研究思路 |
| 1.2.研究内容 |
| 1.3.技术路线图 |
| 2.实验材料 |
| 2.1.实验动物 |
| 2.2.动物饲养 |
| 2.3.主要试验仪器和设备 |
| 2.4.实验材料和试剂 |
| 3.试验方法 |
| 3.1.动物分组 |
| 3.2.给药方法 |
| 3.3.造模方法 |
| 3.4.动物处死 |
| 3.5.实验流程图 |
| 3.6.标本获取 |
| 3.7.指标检测 |
| 3.8.统计学方法及绘图 |
| 4.实验结果 |
| 4.1.一般情况 |
| 4.2.肺组织形态学观察 |
| 4.3.肺水肿指标的变化趋势 |
| 4.4.BALF中总蛋白含量的测定 |
| 4.5.肺组织HE染色 |
| 4.6.肺组织Mc Gugan病理评分 |
| 4.7.肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数 |
| 4.8.肺组织中炎症因子水平的测定 |
| 4.9.肺组织中MPO水平的测定 |
| 4.10.肺组织中黏附因子的测定 |
| 4.11.肺组织超微结构的透射电镜分析 |
| 4.12.肺组织中相关蛋白的Western Blot检测 |
| 4.13.肺组织中相关蛋白的免疫组化分析 |
| 4.14.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的相关性分析 |
| 4.15.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的回归性分析 |
| 4.16.小结 |
| 5.讨论 |
| 5.1.PM2.5诱导急性肺损伤大鼠模型的构建 |
| 5.2.基于多步骤黏附理论探讨炎症损伤在PM2.5致ALI中的作用机制 |
| 5.3.黄芪甲苷对PM2.5诱导急性肺损伤大鼠肺组织结构的保护作用 |
| 5.4.基于Rho A/ROCK/NF-κB通路探讨黄芪甲苷保护肺组织结构、抑制炎症渗出的机制 |
| 结论 |
| 本实验创新性及意义 |
| 存在问题及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中药黄芪补气功效与药理作用的研究进展 |
| 1.中药黄芪 |
| 1.1.历史沿革 |
| 1.2.化学成分 |
| 2.黄芪补气之功 |
| 2.1.益气升阳 |
| 2.2.益气止咳喘 |
| 2.3.益卫固表 |
| 2.4.补气利水 |
| 3.药理学作用 |
| 3.1.炎症损伤的药理学机制 |
| 3.2.免疫调节的药理学机制 |
| 4.黄芪及其化合物在急性肺损伤中的运用 |
| 5.总结 |
| 6.参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
