夏冰[1]（2016）在《慢性硫酸锰染毒对大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路及Hsp70的影响》文中提出目的通过建立大鼠慢性硫酸锰染毒模型,观察大鼠血浆氧化应激指标及Hsp70含量的变化,同时观察海马组织凋亡相关基因和Hsp70基因表达的变化、海马组织PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达及磷酸化的改变以及Hsp70蛋白的表达量,研究MnSO4诱发神经凋亡可能的机制以及对PI3K/Akt信号通路的影响,并探讨Hsp70作为慢性锰中毒的生物标志物的可行性。方法选择健康雄性SPF级SD大鼠40只,随机分成四组：空白对照组、低剂量组（5mg/kg）、中剂量组（10mg/kg）、高剂量组（20mg/kg）,每组10只,分笼饲养,自由饮水、摄食。分别腹腔注射生理盐水、5、10、20 mg/kg的MnSO4·H2O溶液染毒24周,每周五次,周末休息两天。在染毒第24周后颈椎脱臼处死大鼠,收集大鼠生物样本并称重,计算脏器系数；使用南京建成生物工程研究所试剂盒检测大鼠血浆SOD、GSH-Px、CAT及MDA水平,ELISA试剂盒检测血浆Hsp70含量；分离大鼠海马组织,荧光定量PCR法测定海马组织Caspase-3、Bcl-2、Box、Akt-1、FoxO3a、Hsp70 mRNA表达水平,Western Blot法测定Hsp70蛋白表达及Akt蛋白表达及其磷酸化水平。结果（1）随着染锰浓度的增加,大鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏脏器系数均随之升高,睾丸脏器系数随之明显下降。经统计学分析,高剂量组大鼠肝脏、脾脏、肺脏及肾脏脏器系数均显着高于对照组与低剂量组（P<0.05）,心脏系数显着低于中剂量组（P<0.05）,睾丸脏器系数显着低于其余三组（P<0.05）；中剂量组及低剂量组大鼠脾脏脏器系数显着高于对照组（P<0.05）。（2）慢性硫酸锰染毒大鼠高剂量组血浆SOD、GSH-Px及CAT活力分别为（135.46±35.41）U/ml、（845.81±26.06）U及（3.06±0.42）U/ml,均显着低于对照组（P<0.01）及低剂量组（P<0.05）。高剂量组大鼠血浆MDA浓度为（3.05±0.37）nmol/L,显着高于对照组的（2.53±0.21） nmol/L （P<0.01）及低剂量组的（2.61±0.35） nmol/L （P<0.05）。高剂量组染毒大鼠血浆Hsp70含量为（1020.50±134.86）ng/ml,显着高于对照组的（807.15±160.23）ng/ml（P<0.05）及低剂量组的（830.64±161.02）ng/ml （P<0.05）。（3）大鼠海马组织Akt-1、FoxO3a mRNh表达量随染毒剂量增加而降低（P<0.05）；高剂量组Hsp70mKNA表达量显着高于对照组、低剂量组及中剂量组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。高剂量组caspase-3及Bcl-2 mRNA表达量显着低于低剂量组（P<0.05）,但Bax mKNA表达量则显着高于对照组及低剂量组（P<0.05）。（4） Western Blot实验结果显示,随着硫酸锰染毒剂量增加,各组间海马Akt蛋白表达量无统计学差异（P>0.05）,但Akt（pS473）表达量呈上升趋势（P<0.05）。随着硫酸锰染毒剂量增加,海马Hsp70蛋白含量呈增加趋势,高剂量组Hsp70蛋白含量显着高于对照组（P<0.05）与低剂量组（P<0.05）。（5）Pearson相关性分析结果显示,大鼠血浆Hsp70含量与血浆SOD、CAT以及GSH-Px活力呈负相关性,相关系数分别为r1=-0.4439,r2=-0.4516,r3=-0.5226,差异均具有统计学意义（P<0.05）；血浆Hsp70含量与血浆MDA含量呈显着正相关性（r4=0.4785,P<0.05）。血浆Hsp70含量与海马组织Hsp70蛋白表达量成正相关,相关系数为r5=0.7415（P<0.05）。结论（1）慢性MnSO4染毒可能通过引起大鼠体内抗氧化能力下降,脂质过氧化水平升高,从而造成中枢神经细胞损伤及凋亡增加。（2）慢性MnSO4染毒可以激活大鼠海马PI3K/Akt通路,促进脂转录因子磷酸化,Hsp70表达相应增加。（3）慢性MnSO4染毒可以引起大鼠海马Hsp70含量增加,并与血浆Hsp70含量呈显着正相关。提示Hsp70可考虑作为慢性MnSO4暴露的效应性生物标志物。
夏俊峰[2]（2011）在《牛磺鹅去氧胆酸抗小鼠热应激的研究》文中认为牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA）是动物胆汁中的一种结合胆汁酸,进来发现其具有抗炎、平喘、免疫调节等药理作用,但其在热应激领域的研究尚属空白。因此,本研究探讨了TCDCA对热应激小鼠免疫功能、内分泌及肝脏HSP70mRNA表达的影响,为将该活性成分开发成为抗热应激药物奠定基础。本课题将50只小鼠随机分成五组,分别为室温对照组、热应激模型组和高、中、低三个剂量的热应激给药组,TCDCA给药剂量分别为50、100、200mg/（kg·d）,置于（35.5±0.5）℃、相对湿度为60%的温箱中连续热应激7 d。检测TCDCA对热应激状态下小鼠脾脏指数、血清IgG、肠sIgA的影响;检测对外周血T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的影响;测定小鼠外周血清中皮质醇、三碘甲腺原氨酸（T3）分泌的水平;检测小鼠肝脏组织HSP70 mRNA的相对表达水平。通过以上实验结果评价TCDCA的抗热应激作用。实验结果如下:（1）热应激引起小鼠脾脏指数显着下降（P<0.05）,血清IgG、肠sIgA显着升高（P<0.05）,外周血CD8+、CD19+百分率显着下降（P<0.05）,CD4+百分率变化不显着（P﹥0.05）,CD4+/CD8+比值显着升高（P<0.05）,表明热应激导致小鼠机体免疫功能发生紊乱。TCDCA对热应激小鼠脾脏指数无显着影响;但能显着抑制热应激引起的血清IgG含量、小肠sIgA含量升高（P<0.05）和显着提高外周血CD8+、CD19+百分率（P<0.05）,同时能够调节CD4+/CD8+比值到正常水平。（2）热应激条件下,小鼠血清皮质醇含量显着降低（P﹤0.05）,T3含量极显着升高（P﹤0.01）,给予TCDCA能够显着地增加热应激小鼠血清皮质醇含量;显着性抑制小鼠血清T3含量的升高（P﹤0.05）。（3）热应激条件下,小鼠肝脏组织HSP70 mRNA相对表达显着性增加（P﹤0.05）;TCDCA能够显着性抑制肝脏组织HSP70 mRNA的增加（P﹤0.05）。综上可见,TCDCA对热应激导致的小鼠免疫功能紊乱具有明显的改善作用,并可以调节并维持热应激小鼠血清皮质醇、T3含量及肝脏组织HSP70 mRNA的表达相对稳定。
王晓亮[3]（2010）在《热应激条件下热休克蛋白70对鸡肠道结构和消化功能的影响》文中提出本文研究了热应激条件下热休克蛋白70（HSP70）的诱导剂（谷氨酰胺）及抑制剂（槲皮素）对AA肉鸡小肠黏膜组织中HSP70及其mRNA表达量、肠道形态结构、肠道食糜消化酶活性、血清皮质酮含量、白细胞总数、H/L比值、小肠黏膜组织中碱性磷酸酶（AKP）活性的影响,旨在探讨热应激条件下HSP70对鸡肠道黏膜结构和消化功能的影响。试验选用体重相近的36日龄AA肉鸡240只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只鸡,分别置于2个温湿度条件一致的环控舱内,每个舱安排每个处理组的3个重复。4个处理组分别为:对照组（注射生理盐水）;诱导组（按0.75g/kg体重给鸡注射谷氨酰胺）;抑制组（按5mg/kg体重给鸡注射槲皮素）;诱导+抑制组（同时给鸡注射0.75g/kg体重的谷氨酰胺和5mg/kg体重的槲皮素）。注射完24h后开始对所有试验鸡进行36℃急性热应激处理。共设5个热应激时间点:0h、2h、3h、5h、10h。于不同的热应激时间点,分别从每个处理组的每个重复中取出一只鸡采血并屠宰取肠黏膜组织样和空肠食糜,测定鸡血液中白细胞总数和H/L比值、血清皮质酮含量、肠黏膜组织中HSP70及其mRNA表达量、肠黏膜组织碱性磷酸酶（AKP）活性、肠道形态结构和肠道食糜中消化酶活性。试验结果表明:（1）热应激条件下,诱导组肠黏膜中HSP70的含量和HSP70mRNA的表达量显着升高（P<0.05）。（2）热应激条件下,试验处理和热应激时间对血液中皮质酮含量、白细胞的总数无显着影响,但可抑制异嗜白细胞/淋巴细胞的比例（P<0.05）,显着提高空肠黏膜中碱性磷酸酶活性、绒毛高度/隐窝深度（P<0.05）,并通过提高空肠食糜消化酶的活性（P<0.05）,来维持热应激条件下鸡肠道的消化功能。（3）热应激时间也是影响HSP70发挥作用的重要因素。总之,热应激条件下HSP70的过表达可以很好地发挥保护肉鸡肠道结构和正常生理功能的作用。
邱定杰[4]（2010）在《热应激对大鼠肝脏HSP70表达及其mRNA丰度变化规律的研究》文中研究表明以大鼠为试验动物,采用比色法、Western-blotting、半定量RT-PCR和Real–time PCR技术,从不同热应激强度（25℃、30℃、35℃和40℃）和40℃热应激后不同处理时间（0.5h,1.5h,2h,2.5h,4h和6h）两个角度,检测分析了大鼠血清中的丙二醛（MDA）含量、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力和总抗氧化能力（T-AOC）的大小,动态考察了大鼠肝脏中HSP70的表达量及其mRNA丰度变化规律,探讨HSP70mRNA水平的变化与热休克蛋白70表达的相关性,结果表明:1.应用比色法,对热应激大鼠血清中抗氧化能力指标进行了测定。与对照组25℃相比,30℃时,大鼠血清的MDA略有下降（P>0.05）。35℃时和40℃时,血清的MDA极显着的降低（P<0.01）。大鼠血清的SOD活力和T-AOC分别呈升高和降低的趋势,各热应激组的SOD活力和T-AOC值与对照组相比,差异极显着（P<0.01）。在不同热应激时间处理下,大鼠血清的MDA先升高,在4h时达到高峰（P<0.01）,之后开始下降,在6h时与0.5h相比差异不显着。大鼠血清的SOD活力和T-AOC值均处于上下波动状态,各热应激处理组的SOD活力均比0.5h极显着的升高（P<0.01）。血清的T-AOC值除在热应激处理1h后显着的升高（P<0.05）和1.5h、2h后极显着的下降外（P<0.01）,其他各组无明显差异。2.应用Western-blotting方法,对热应激大鼠肝脏中HSP70的表达量进行了测定。大鼠肝脏HSP70在25℃就有较低水平的表达,与对照组相比,在30℃时,肝脏HSP70表达量就明显的增加（P<0.05）。35℃和40℃时,表达量极显着的增加（P<0.01）。不同的热应激时间时,大鼠肝脏HSP70表达量呈先增加,到2h时表达量达到峰值（P<0.01）,随着热应激时间的延长,HSP70表达量开始下降。在热应激处理4h和6h时,HSP70表达量与0.5h相比差异不显着（P>0.05）。3.应用半定量RT-PCR技术对热应激大鼠肝脏HSP70mRNA进行了定量研究。不同强度的热应激对大鼠肝脏HSP70mRNA的表达量有显着影响,在30℃时,HSP70mRNA表达量略有下降（P>0.05）。在35℃和40℃时,表达量显着的高于对照组（P<0.05）。在不同的热应激时间里,大鼠肝脏HSP70mRNA的表达量呈先迅速增加,到热应激1h时达到最高（P<0.01）。随着热应激时间的延长,HSP70mRNA的表达量开始下降,各热应激处理组的表达量均极显着的高于0.5h组（P<0.01）。4.应用Real-time PCR技术对热应激大鼠肝脏HSP70mRNA进行了定量研究。不同强度的热应激对大鼠肝脏HSP70mRNA的转录量有极显着的影响,各热应激处理组的HSP70mRNA的转录量极显着高于对照组（P<0.01）。在不同的热应激时间里,大鼠肝脏HSP70mRNA的转录量呈先迅速升高,到热应激1h时达到峰值（P<0.01）,之后开始降低。在热应激1.5h时和2h时,极显着高于0.5h（P<0.01）。而在热应激2.5h和4h时,极显着的低于0.5h（P<0.01）。在热应激6h时,与0.5h相比差异不显着（P>0.05）。5.通过两个等级（秩）变量间的相关分析表明,Real-time PCR和半定量RT-PCR基因检测结果极相关,两种定量PCR检测HSP70mRNA无差异,基本反映了热应激状态下HSP70mRNA转录的规律。研究表明,肝脏HSP70mRNA对热应激反映迅速,变化幅度较大,HSP70mRNA转录量在热应激反应中的总体变化趋势与HSP70表达量近似,通过mRNA的检测可在一定程度上反映HSP70的表达情况。在不同热应激强度和时间下,HSP70mRNA的转录水平呈规律性的变化,其可作为动物热应激的生物标志之一。
张莉[5]（2009）在《营养水平对热应激种公猪繁殖性能和血液生化指标的影响》文中研究说明本试验研究夏季热应激条件下,饲粮中不同消化能、蛋白质水平对大约克种公猪繁殖性能和血液生化指标的影响。通过机体内分泌激素和血清常规生化指标的变化,分析营养水平对机体代谢规律的影响,为提高种公猪的繁殖性能提供理论依据。选择18头血缘相同,15月龄左右、体重（186±14）kg、体况和繁殖性能接近的已调教好人工采精的健康成年大约克种公猪。采用2×3因子试验设计,将18头种公猪随机分为6组,每个组3个重复,每个重复1头猪。DE设两个水平,分别为12.97MJ/kg和13.81MJ/kg,CP设三个水平,分别为13%、15%、17%。动物试验在2008年6月1日到9月10日进行,预饲期10天,正饲期90天。热应激条件下,每头猪每天饲喂2.8kg左右饲粮,每周采精3次,每头猪每周进行一次精液品质鉴定,试验开始和结束时空腹对每头猪前腔静脉采血以测定各项血液指标。试验研究结果如下:（1）高能水平下种公猪的日增重比低能水平下提高8.55%（p＜0.05）:蛋白质水平对种公猪的日增重存在极显着的影响,蛋白质水平在15%时日增重比13%和17%组分别提高了15.94%（p＜0.01）和26.37%（p＜0.01）;其二者的互作效应对日增重的影响差异不显着（p＞0.05）。（2）消化能水平对开始射精时间和持续射精时间都无显着影响（p＞0.05）,蛋白质水平对二者都有显着影响,其中15%水平组开始射精时间比17%水平组延迟10.30%（p＜0.05）,与13%水平组差异不显着（p＞0.05）;15%蛋白质水平组持续射精时间比13%和17%组分别延长了5.90%（p＜0.05）和9.10%（p＜0.01）。消化能和蛋白质互作对开始射精时间无显着影响（p＞0.05）;对持续射精时间的影响差异显着（p＜0.05）,12.97MJ/kg-15%组合下持续射精时间最长。（3）消化能水平对射精量影响差异不显着（p＞0.05）;蛋白质水平对射精量有极显着的影响（p＜0.01）,15%蛋白质水平下射精量比13%和17%水平下分别提高了15.96%（p＜0.01）和9.98%（p＜0.01）。消化能水平对精子密度的影响表现出勉强显着性（0.05＜p＜0.10）;蛋白质水平对密度的影响差异极显着（p＜0.01）,15%蛋白质水平组比13%和17%水平组密度分别增加了6.88%（p＜0.05）和14.14%（p＜0.01）。消化能水平对精子畸形率有显着影响,低能组比高能组畸形率降低7.22%（p＜0.05）;蛋白质水平对畸形率也存在显着影响（p＜0.05）,17%水平组畸形率有所上升,比15%水平组升高17.10%（p＜0.05）。消化能和蛋白质对精子活力作用勉强显着（0.05＜p＜0.10）。消化能水平对有效精子数有极显着的影响,12.97MJ/kg组有效精子数比13.81MJ/kg提高8.75%（p＜0.01）;15%水平组有效精子数比13%水平组和17%水平组分别提高了19.87%（p＜0.01）和17.72%（p＜0.01）。消化能和蛋白质互作对精液品质影响差异不显着（p＞0.05）。（4）低能组睾酮含量比高能组提高了7.07%（p＜0.05）;15%蛋白质组比17%蛋白质组高了3.67%（p＜0.05）,与13%组差异不显着。消化能水平对血清FSH和LH含量影响差异不显着;15%蛋白质组FSH比17%含量高8.98%（p＜0.05）,15%蛋白质LH组比13%和17%蛋白质组高22.11%（p＜0.05）和19.59%（p＜0.05）。消化能和蛋白质的互作对其影响差异也不显着。蛋白质水平的改变对hTSH、T3的分泌影响差异显着（p＜0.05）,15%蛋白质水平组比其他两水平组hTSH、T3含量显着提高。（5）蛋白质水平对HSP70影响差异极显着（p＜0.01）,15%水平组HSP70比17%和13%组分别提高了13.69%（p＜0.01）和8.17%（p＜0.05）。消化能水平对血清BUN影响差异显着（p＜0.05）,对TP、ALB和GLU影响差异不显着;蛋白质水平对BUN、GLU和ALB影响差异极显着或显着。消化能和蛋白质互作对血清BUN、GLU、TP和ALB影响差异极显着（p＜0.01）或显着（p＜0.05）,其中以12.97MJ/kg-15%组合各指标效果最佳。消化能和蛋白质互作对CK含量有极显着影响。综上,对于成年大约克种公猪,在夏季热应激发生时,建议其每天采食DE 12.97MJ/kg、CP15%的配合饲料2.8kg左右能够有效地缓解热应激给机体造成的影响,保持较好的繁殖性能。
肖定福,张彬,胡雄贵[6]（2009）在《热应激蛋白对畜禽抗应激机理的研究进展》文中研究表明热应激蛋白（heat shock proteins,HSPs）是机体在应激条件下所产生的一组特异性蛋白质,能使机体迅速适应环境变化。作者简要介绍了HSPs的来源及分类,阐述了HSP70的基因结构和调控机制,综述了HSPs抗应激功能及在畜禽应激反应中的表达,以期为从分子水平探索HSPs抗应激机理提供参考。
刘庆华[7]（2009）在《娟荷杂交牛耐热性能研究》文中研究表明本研究目的在于揭示娟荷杂交牛耐热性能及其机理,为培育我国的耐热品系奶牛积累基础。通过分析娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛产奶性能,测定热应激对血液流变学、血清无机离子浓度、酶活性、一氧化氮合成酶（NOS）活力、一氧化氮（NO）浓度、丙二醛（MDA）含量、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、总抗氧化能力（T-AOC）的变化情况,分析不同群体奶牛在不同环境温度下免疫功能指标的变化,探讨高温环境对奶牛免疫功能的影响规律,同时对血液HSP70的表达、HSP基因多态性与荷斯坦和娟-荷杂交牛耐热性能的相关性进行了分析。结果表明,与荷斯坦奶牛相比,娟荷杂交牛耐热性能较强,并初步探讨了其耐热应激的相关机理。1娟荷杂交牛培育及与荷斯坦奶牛性能比较选用第1胎次、产犊日期、产奶量相近的娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛和荷斯坦奶牛各10头,测定全期泌乳性能及热应激期的体温、皮温、呼吸率及产奶性能等指标。结果表明：在热应激期间牛舍内平均温度为31.10℃（20.13℃～39.40℃）,温湿度指数THI平均为81.75条件下,娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛直肠温度、皮温、呼吸频率与荷斯坦牛比均差异显着（P<0.05）,娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛之间差异不显着（P>0.05）。在同一营养水平下,娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛乳中乳脂率、乳蛋白率、乳总固体物都比荷斯坦高,其中乳脂率和乳蛋白率均差异极显着（P<0.01）。305 d泌乳量和4%标准奶量荷斯坦牛均高于娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛,但差异均不显着（P>0.05）。从单位体重产奶量及料奶比指标看,娟荷级进杂交二代牛与娟荷杂交一代牛、荷斯坦牛之间差异显着（P<0.05）,娟荷杂交一代牛与荷斯坦牛之间差异不显着（P>0.05）。荷斯坦牛、娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛7、8月份产奶量月下降率分别为14.50%、12.31%；13.89%、3.19%；13.38%、11.08%。产奶量月下降率娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代牛比荷斯坦牛下降幅度明显降低,差异显着（P<0.05）。结果表明娟荷杂交牛具有较好耐热性及较高生产性能。2热应激对奶牛血液流变学与生化指标的影响60头健康娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛分为3组,分别于冬季12月份（牛舍日平均气温为10.35℃,THI为47.24）和次年夏季7月份（牛舍日平均气温为31.07℃,THI为82.61）条件下,测定热应激对血液流变学及血清无机离子浓度和酶活性的影响。结果表明：除血沉外,全血比黏度、血浆比黏度、红细胞压积荷斯坦牛、娟荷杂交牛夏季都明显升高,与冬季之间差异均极显着（P<0.01）,但在夏季或冬季荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异不显着。血清K+浓度娟荷杂交牛冬季与夏季之间差异显着（P<0.05）,荷斯坦牛冬季与夏季之间以及荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异不显着。热应激极显着降低血清Na+浓度、血清Ca2+浓度（P<0.01）,但夏季或冬季荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异不显着。血清Cl-浓度不同品种及季节之间差异均不显着。热应激显着升高谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性（P<0.05）,但夏季或冬季各品种之间差异不显着。谷草转氨酶冬季荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异显着（P<0.05）,其余季节和品种之间差异均不显着。结果显示,娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛的全血比黏度、血浆比黏度、红细胞压积、血清Na+浓度、血清Ca2+浓度以及谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性之间的差异均不显着,谷草转氨酶冬季荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异显着（P<0.05）,这些指标不同季节之间差异显着。这些指标可以作为奶牛热应激程度的参考指标。奶牛血液生理与生化指标与季节或外界温度变化关系较大,娟荷杂交一代牛、娟荷级进杂交二代血液生理与生化指标变化差异不显着。3热应激对奶牛抗氧化特性的影响60头健康娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛分为3组,分别在冬季和夏季测定热应激对血清中一氧化氮合成酶（NOS）活力、一氧化氮（NO）浓度、丙二醛（MDA）含量,总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力,总抗氧化能力（T-AOC）的变化情况。结果表明：不论荷斯坦牛还是娟荷杂交牛夏季血清中一氧化氮合成酶（NOS）活力都显着低于冬季一氧化氮合成酶（NOS）活力（P<0.01）；而夏季娟荷杂交牛血清中一氧化氮合成酶（NOS）活力显着低于荷斯坦牛血清中一氧化氮合成酶（NOS）活力（P<0.01）；但是冬季娟荷杂交牛和荷斯坦牛血清中一氧化氮合成酶（NOS）活力则差异不显着（P>0.05）。荷斯坦牛血清中NO浓度冬季与夏季差异显着（P<0.05）,而娟荷杂交牛血清中NO浓度冬季与夏季差异不显着（P>0.05）；夏季荷斯坦牛与娟荷杂交牛血清中NO浓度差异不显着（P>0.05）,而冬季荷斯坦牛和娟荷杂交牛血清中NO浓度差异显着（P<0.05）。夏季娟荷杂交牛血清中MDA含量显着低于荷斯坦牛（P<0.05）；T-SOD活力显着高于荷斯坦牛（P<0.05）；T-AOC有升高的趋势但差异不显着。在冬季,娟荷杂交牛与荷斯坦牛相比血清中的MDA含量、T-SOD活力和T-AOC均无显着差异。无论娟荷杂交牛还是荷斯坦牛,夏季与冬季相比血清中MDA含量、T-SOD活力均差异极显着,荷斯坦牛血清中T-AOC差异显着,而娟荷杂交牛血清中T-AOC无显着性差异。由此表明,热应激对奶牛的抗氧化能力产生显着的影响；夏季娟荷杂交牛的抗氧化能力高于荷斯坦牛,更能适应热带和亚热带地区高温高湿的气候条件。这为奶牛热应激的诊断和选育耐热奶牛品种提供理论根据。4热应激对奶牛免疫功能的影响采用MTT法、ELASA、玫瑰花环试验法等方法,对不同群体奶牛在接受不同温度环境后免疫功能指标的变化,来探讨高温环境对奶牛免疫功能的影响规律。研究发现：（1）从不同的月份采样测定的IgM,IgG,IgA总量差异均不显着（P>0.05）。娟荷杂交牛各个时期三类免疫球蛋白水平比荷斯坦牛高,娟荷杂交牛夏季IgM含量与荷斯坦牛相比差异显着（P<0.05）,IgG,IgA差异均不显着（P>0.05）。（2）荷斯坦牛、娟荷杂交牛体细胞数7月与3月、11月之间差异均显着（P<0.05）,夏季奶牛体细胞数明显高于其他季节,与夏季乳房炎发生率高的生产现象相一致。但各个时期体细胞数荷斯坦牛与娟荷杂交牛之间差异不显着（P>0.05）。（3）11月份奶牛淋巴细胞刺激指数上升,显着高于7月份（P<0.05）,亦高于3月份（P<0.05）。这表明不同季节或月份对奶牛淋巴细胞转化有一定的影响作用,但荷斯坦牛与娟荷杂交牛在不同时期淋巴细胞刺激指数差异均不显着（P>0.05）。无论是荷斯坦牛或娟荷杂交牛,7月的E-玫瑰花环形成率均低于3月与11月,差异均显着（P<0.05）,夏季娟荷杂交牛的E-玫瑰花环形成率显着高于荷斯坦牛（P<0.05）。夏季娟荷杂交牛的E-玫瑰花环形成率、IgM含量均高于荷斯坦牛,说明娟荷杂交牛在夏季的机体免疫功能较强,能较好地抵抗热应激的危害。5奶牛HSP基因表达、多态性与耐热性的关系分析研究HSP基因多态性与荷斯坦和娟-荷F1血清生化指标的相关性,为进一步加快奶牛耐热育种进程提供参考依据。采用PCR-SSCP技术对荷斯坦和娟荷杂交一代牛两个奶牛群体的热应激基因（HSPA8和HSPA3）进行了SNP分析,对部分基因型个体的PCR产物进行测序和序列比较,并分析了标记基因型与奶牛血清生化指标间的相关性。测序发现HSPA8座位存在T缺失突变以及C→G颠换和T→C转换突变；HSPA3座位发现C→A颠换突变。HSP基因的HSPA8位点表现多态性,两个群体显出AA、AB、BB三种基因型,BB基因型只存在于娟-荷F1群体中。HSPA3位点也表现多态,两个群体显出AA、AB、BB三种基因型,且主要都是AB基因型个体。该基因座处于Hardy—Weinberg平衡状态（P>0.05）。相关性分析表明,HSPA3和HSPA8位点多态性与血清中的T-SOD活力、MDA含量存在相关性。设计引物扩增HSPA1A基因的5’-侧翼区,通过PCR-SSCP技术分析启动子区的多态性,寻找SNPs位点,分析发现：扩增片段大小280bp,扩增产物具有基因多态性。供试的80头娟-荷F1和荷斯坦奶牛共发现4种基因型,分别为：AA型、BB型、AB型和AC型,卡方检验奶牛在该位点基因频率差异极显着（P<0.01）,未达到Hardy-Weinberg平衡。AC型奶牛耐热性能高于其他基因型（AA,AB,BB）奶牛,差异显着（P<0.05）。建议作为抗热应激的奶牛选育分子遗传标记。在进样量相同的情况下,夏季荷斯坦牛血液淋巴细胞HSP70表达量最高,11月的次之,3月的血液淋巴细胞HSP70表达量最低。3月的荷斯坦牛血液淋巴细胞HSP70表达量和11月的HSP70表达差异显着（P<0.05）,11月的和3月、7月的HSP70表达差异均极显着（P<0.01）。娟荷杂交一代牛血液淋巴细胞热应激蛋白HSP70表达量是荷斯坦奶牛的2.1倍,差异显着（P<0.05）。6热应激奶牛肝脾HSP70的表达特征及细胞凋亡观测为了探讨热应激对奶牛组织形态和机能的影响,对热应激奶公犊肝脏、脾脏进行了显微结构观察,分析了HSP70在肝、脾的表达特征,并进行了细胞凋亡的观察。结果表明：各组在常温状态下,其肝脾结构基本一致；娟荷杂交牛较荷斯坦牛脾脏组织内淋巴小结界限较大,红髓、白髓结构完整性较好,边缘被膜平整,淋巴小结内的淋巴细胞排列较致密,反映娟荷杂交牛较耐热的组织结构差异。在不同热应激刺激状态下,各组奶牛肝脾均有不同程度的损伤,而且肝脾细胞的超微结构变化随热应激后不同时间点而有所不同。热应激奶牛组织中HSP70含量随应激时间的延长呈现波动变化,与同期各组织细胞所呈现的病理损伤变化存在一定的相关,提示HSP70含量可作为判定组织应激损伤的标志之一。热应激对奶牛器官组织的影响是逐渐加重的过程,呈现部分淋巴细胞从凋亡到坏死的病理学变化过程。不同高温热应激均可造成肝脏、脾脏结构及其细胞的损伤,温度越高损伤越重。结论：热应激条件下,娟荷杂交牛直肠温度明显比荷斯坦牛低,每千克单位体重产奶高于荷斯坦牛,产奶量月下降率娟荷杂交牛比荷斯坦牛下降幅度明显降低。夏季娟荷杂交牛的抗氧化能力高于荷斯坦牛,娟荷杂交牛的E-玫瑰花环形成率、IgM含量均高于荷斯坦牛,娟荷杂交牛在夏季的机体免疫功能较强,能较好地抵抗热应激的危害。HSPA3和HSPA8位点多态性与血清中的T-SOD活力、MDA含量存在相关。HSPA1A位点与耐热性能存在多态性,与热应激反应有关,4种基因型的奶牛中AC型奶牛在高温季节耐热性能指标显着高于其它三种基因型奶牛。在相同热应激条件下,娟荷杂交一代牛热应激蛋白HSP70的表达显着高于荷斯坦奶牛热应激蛋白HSP70的表达。热应激对奶牛器官组织的影响是逐渐加重的过程,呈现部分淋巴细胞从凋亡到坏死的病理学变化过程。不同高温热应激均可造成肝脏、脾脏结构及其细胞的损伤,温度越高损伤越重。综合上述指标可得出,娟荷杂交牛比荷斯坦牛更能适应热带和亚热带地区高温高湿的气候条件。
杨力明[8]（2008）在《哈茨木霉几丁质酶V基因等克隆及其特性研究》文中研究指明在当今世界大力倡导可持续发展的大环境下,可持续发展思想及环保意识提高了生物防治技术的重要性,受到了国际社会的极大关注。构建出高效、广谱及价格低廉的生物农药来替代化学农药,最低限度的减少环境污染,达到绿色生产、绿色环保的目的。哈茨木霉（Trichoderma harzianum）是一种优良的生物防治真菌,在植物病害,尤其是土壤传染病害的生物防治中具有重要的应用价值。哈茨木霉主要通过重寄生作用、溶菌作用、抗生素作用、蛋白酶作用以及对空间和营养的竞争机制达到防治植物病原菌的目的。在各种恶劣的生存条件下哈茨木霉的抑菌功能受到了极大限制和破坏,限制了其生防潜力的进一步发挥。因而,提高哈茨木霉的防治效果,及保证其在逆境条件下生防功能顺利实现具有重要的意义。为增强哈茨木霉防治效果和对外界抵抗能力,利用真菌表达载体pBI121,pCAMBIA1301和克隆载体pUC18,成功构建了用于根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化表达载体pCA-GChiⅤ和pCA-GSOD。以潮霉素抗性基因为选择标记,目的基因的启动子为CaMV35S,两种载体分别含有几丁质酶（ChiⅤ）基因、超氧化物岐化酶（SOD）基因。对影响哈茨木霉转化的因素进行优化,获得了该系统转化哈茨木霉的最佳条件。经过潮霉素抗性选择培养,Southern杂交,RT-PCR及传代分析得到稳定遗传的转化子。采用与三种植物病原菌室内拮抗实验,检测重组ChiⅤ和SOD后的哈茨木霉转化子的抑菌活性。结果表明通过根癌农杆菌介导的转化系统所获得转ChiⅤ哈茨木霉转化子具有良好的抑菌活性,对植物病原菌都表现出很强的拮抗作用。通过根癌农杆菌介导的转化系统所获得SOD哈茨木霉转化子保持了哈茨木霉菌的抑菌活性,对哈茨木霉原菌和SOD哈茨木霉转化子进行高温和盐胁迫实验进行了比较,结果证实,哈茨木霉原菌在逆境下不能正常存活;而SOD木霉转化子转化后的哈茨木霉菌,在逆境下仍能正常存活,且对植物病原菌仍具备良好的拮抗作用。ChiⅤ基因在哈茨木霉中的表达,明显提高了哈茨木霉的抑菌能力。SOD基因在哈茨木霉中的表达,提高了哈茨木霉对高温和高盐的抗逆性,保证了哈茨木霉能够在高温和高盐的条件下发挥其生防功能。从而,为哈茨木霉的抑菌功能在更广泛的领域中应用奠定了基础。在获得的哈茨木霉（T. harzianum）EST序列基础上,为提高哈茨木霉菌抗外界干扰能力,克隆了与抗碱性盐和干旱相关的sod和hsp24基因的DNA序列,克隆获得的这些序列已在GenBank上注册。将克隆得到的sod和hsp24基因构建原核表达载体pET-sod、pET-hsp24,通过双酶切、测序检测证明重组载体构建成功。通过IPTG诱导使sod、hsp24基因在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中表达,SDS-PAGE检测分别获得15.7kD、24.0kD的蛋白带,蛋白大小与预期相符,说明它们已经在大肠杆菌（E. coli）中表达,并检测了sod蛋白粗酶活和hsp24的耐热功能,证明了哈茨木霉（T. harzianum）基因能够在原核生物中良好表达。为提高哈茨木霉菌（T. harzianum）的sod和hsp24基因表达效率,我们将sod和hsp24基因构建到带有高效启动子的酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）表达载体pYES2上,并转入酿酒酵母（S. cerevisiae）INVSc1细胞,得到了携带sod、hsp24外源基因的酵母转化子。逆境胁迫实验表明转sod、hsp24基因酵母对Na2CO3和干旱的耐受能力明显提高,表明sod、hsp24基因与哈茨木霉（T. harzianum）的抗逆境胁迫相关,这对研究哈茨木霉（T. harzianum）在自然界常见逆境下的生物防治能力具有重要意义。以上基因的克隆和功能研究为哈茨木霉（T. harzianum）其它功能基因的克隆和研究建立了完善的技术平台,对哈茨木霉（T. harzianum）重要生物防治基因的进一步发掘和利用具有重要意义。同时,将几丁质酶基因和超氧化物歧化酶基因分别转化到哈茨木霉（T. harzianum）中并表达,以及转化后的哈茨木霉菌的功能认定,使我们获得了良好生物防治效果的基因工程菌。为今后应用提供了科学依据。本项研究克隆了涉及生物防治和胁迫响应方面的基因,这些基因的获得将在揭示生物防治机理、研究哈茨木霉（T. harzianum）逆境下的生物防治能力变化以及其体内高价值酶基因的发掘等方面也具有重要意义,是系统地、多方位地对哈茨木霉（T. harzianum）的生物防治分子机理研究的开始。
王枫,徐文,于芳,曹瑞,曹子鹏[9]（2005）在《预热对白血病患者胸腔渗出细胞H2O2的影响》文中提出目的探讨预热对肿瘤细胞过氧化氢敏感性的影响及其机制。方法将白血病患者胸腔渗出细胞（K562）在40℃预热不同时间,诱导细胞热应激蛋白70（HSP70）高表达,用RT-PCR检测细胞HSP70mRNA水平;将细胞暴露于0.1,0.2,0.4,0.8mmol的H2O216h,用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力,观察预热对不同水平H2O2敏感性的影响;保持H2O2浓度为0.2mmol不变,观察不同预热时间对细胞H2O2敏感性的影响。结果40℃预热后细胞的HSP70含量升高,在预热120min后达到最高,以后缓慢下降,可维持10h以上;预热细胞对不同浓度H2O2的敏感性均显着低于未预热细胞;对于相同浓度的H2O2而言,预热120min的细胞对敏感性最低。结论预热可以引起细胞HSP70表达增高,降低细胞对H2O2的敏感性。
李俊杰,桑润滋,田树军,冯志华[10]（2004）在《热激蛋白在动物应激中的应用》文中研究表明热应激蛋白（HSPs）存在于所有动物细胞中,是动物受到应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白,与机体的应激关系密切,在进化上高度保守。本文在对HSP发现、分类及功能简要介绍的基础上,对HSP70在动物应激中的作用及其调控机制进行了详细的综述,指出HSP将对阐明动物应激机理有重要的意义。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 个人简历 |
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 动物实验 |
| 2.2.1 动物来源、分组、染毒及饲养条件 |
| 2.2.2 动物体重、生活习性及一般情况记录 |
| 2.2.3 动物处死并收集样本 |
| 2.3 外周血氧化应激水平测定 |
| 2.3.1 大鼠血浆SOD水平测定 |
| 2.3.2 大鼠血浆MDA含量测定 |
| 2.3.3 大鼠血浆CAT活力测定 |
| 2.3.4 大鼠血浆GSH-Px活力 |
| 2.4 大鼠血浆HsP70含量的测定 |
| 2.5 RT-PCR检测各基因的MRNA表达 |
| 2.5.1 大鼠海马组织总RNA提取 |
| 2.5.2 cDNA合成 |
| 2.5.3 RT-PCR扩增反应 |
| 2.6 WESTERN BLOT实验 |
| 2.6.1 大鼠海马组织蛋白提取与定量 |
| 2.6.2 Western Blot检测各蛋白表达 |
| 2.7 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 慢性硫酸锰锰染毒对大鼠体重及一般情况的影响 |
| 3.2 慢性硫酸锰染毒对大鼠脏器系数的影响 |
| 3.3 慢性硫酸锰染毒对大鼠外周血氧化应激的影响 |
| 3.4 慢性硫酸锰染毒对凋亡相关基因表达的影响 |
| 3.4.1 大鼠海马组织中Bcl-2基因mRNA相对表达量 |
| 3.4.2 大鼠海马组织中Bax基因mRNA相对表达量 |
| 3.4.3 大鼠海马组织中Caspase-3基因mRNA相对表达量 |
| 3.5 慢性硫酸锰染毒对PI3K/AKT通路的影响 |
| 3.5.1 大鼠海马组织中Akt-1基因mRNA相对表达量 |
| 3.5.2 大鼠海马组织中FoxO3a基因mRNA相对表达量 |
| 3.5.3 大鼠海马组织Akt及其磷酸化蛋白表达量 |
| 3.6 慢性硫酸锰染毒对HsP70的影响 |
| 3.6.1 慢性硫酸锰染毒对大鼠外周血Hsp70含量的影响 |
| 3.6.2 大鼠海马组织Hsp70基因mRNA相对表达量 |
| 3.6.3 大鼠海马组织Hsp70蛋白表达量 |
| 3.7 相关性分析 |
| 3.7.1 大鼠血浆Hsp70含量与氧化应激相关性分析 |
| 3.7.2 大鼠血浆Hsp70含量与海马组织Hsp70蛋白表达量相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 慢性硫酸锰染毒大鼠血浆氧化应激水平改变与神经细胞凋亡 |
| 4.2 大鼠慢性硫酸锰染毒对PI3K/AKT通路的影响 |
| 4.3 大鼠慢性硫酸锰染毒对HsP70的影响 |
| 4.4 慢性硫酸锰染毒与大鼠神经细胞凋亡 |
| 5 结论 |
| 5.1 研究结论 |
| 5.2 研究的创新点 |
| 5.3 研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生期间发表的论文 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 热应激与应激概述 |
| 1.1.1 应激概述 |
| 1.1.2 热应激概述 |
| 1.2 热应激对动物机体的影响 |
| 1.2.1 热应激对内分泌机能的影响 |
| 1.2.1.1 热应激对甲状腺机能的影响 |
| 1.2.1.2 热应激对肾上腺机能的影响 |
| 1.2.2 热应激对免疫功能的影响 |
| 1.2.2.1 热应激对免疫器官的影响 |
| 1.2.2.2 热应激对体液免疫的影响 |
| 1.2.2.3 热应激对细胞免疫的影响 |
| 1.2.2.4 热应激对肠道黏膜免疫的损伤 |
| 1.2.3 热应激对采食量的影响 |
| 1.2.4 热应激对生产性能、繁殖性能的影响 |
| 1.2.5 热应激对呼吸机能和体温的影响 |
| 1.2.6 热应激对内脏各器官组织形态学的影响 |
| 1.3 热应激与热休克蛋白70（HSP70） |
| 1.4 抗热应激药物的研究进展 |
| 1.5 TCDCA 现代药理学研究进展 |
| 1.6 本课题研究的目的、意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 化学试剂 |
| 2.1.3 溶液配制 |
| 2.1.4 仪器设备 |
| 2.1.5 数据分析 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物模型的建立及给药 |
| 2.2.2 样品采集 |
| 2.2.3 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素(T3)和皮质醇的影响的检测 |
| 2.2.3.1 小鼠血清中皮质醇含量的放射免疫法检测 |
| 2.2.3.2 小鼠血清中甲状腺激素(T3)含量的放射免疫法检测 |
| 2.2.4 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响的检测 |
| 2.2.4.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数影响的检测 |
| 2.2.4.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中 CD4~+、CD8~+和 CD19~+淋巴细胞含量影响的测定 |
| 2.2.4.3 TCDCA 对热应激小鼠小肠sIgA 含量影响的测定 |
| 2.2.4.4 TCDCA 对热应激小鼠小肠血清中IgG 含量影响的测定 |
| 2.2.5 TCDCA 对热应激小鼠肝脏HSP70 表达量影响的实时荧光定量检测 |
| 2.2.5.1 小鼠肝脏总m RNA 的提取 |
| 2.2.5.2 引物设计及RT-PCR 扩增 |
| 2.2.5.3 HSP70 和1851RNA 基因的Real Time PCR 检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素(T3)和皮质醇的影响 |
| 3.2 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响 |
| 3.2.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数的影响 |
| 3.2.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中CD4~+、CD8~+和CD19~+淋巴细胞含量影响 |
| 3.2.3 TCDCA 对热应激小鼠肠分泌型免疫球蛋白A(sIgA) 的影响 |
| 3.2.4 TCDCA 对热应激小鼠血清中IgG 含量影响的检测 |
| 3.4 TCDCA 对热应激小鼠肝脏HSP70 表达量影响 |
| 3.4.1 总RNA 提取的完整性及纯度检测 |
| 3.4.2 HSP70 基因和1851RNA 基因表达实时荧光定量RT-PCR 扩增曲线、熔解曲线、扩增效率曲线 |
| 3.4.3 HSP70 Real Time PCR 的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 TCDCA 对热应激小鼠血清甲状腺激素(T3)和皮质醇的影响 |
| 4.2 TCDCA 对热应激小鼠免疫功能影响 |
| 4.2.1 TCDCA 对热应激小鼠脾脏指数的影响 |
| 4.2.2 TCDCA 对热应激小鼠外周血中 CD4~+和 CD8~+淋巴细胞影响 |
| 4.2.3 TCDCA 对热应激小鼠肠分泌型免疫球蛋白 A(sIgA) 的影响 |
| 4.2.4 TCDCA 对热应激小鼠血清中 IgG 含量影响的 |
| 4.3 TCDCA 对热应激小鼠肝脏组织 HSP70mRNA 的表达量的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 热休克蛋白70(HSP70)及其功能 |
| 1.1.1 分子伴侣功能 |
| 1.1.2 细胞保护功能 |
| 1.1.3 抗细胞凋亡作用 |
| 1.1.4 减轻细胞过氧化及炎症性损伤 |
| 1.2 HSP70 在动物体内表达的影响因素 |
| 1.2.1 诱导HSP70 在生物体内过表达的因素 |
| 1.2.2 抑制HSP70 在生物体内过表达的因素 |
| 1.3 热应激和HSP70 对鸡肠道结构和消化吸收功能的影响 |
| 1.3.1 热应激与肠道营养 |
| 1.3.2 HSP70 与肠道营养 |
| 1.3.3 热应激及HSP70 对鸡血液生化指标的影响 |
| 1.4 存在的问题 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 1.7 技术路线 |
| 1.8 小结 |
| 第二章 热应激条件下HSP70 对鸡肠道结构和消化功能的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 环境控制舱中鸡笼的摆放 |
| 2.1.2 试验动物与饲养条件 |
| 2.1.3 试验设计 |
| 2.1.4 样品采集 |
| 2.2 测定指标及方法 |
| 2.2.1 空肠黏膜HSP70 |
| 2.2.2 空肠黏膜HSP70mRNA |
| 2.2.3 血清中皮质酮 |
| 2.2.4 白细胞总数及嗜中性粒细胞/淋巴细胞(H/L)比值 |
| 2.2.5 空肠黏膜碱性磷酸酶活性 |
| 2.2.6 空肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度及绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值 |
| 2.2.7 空肠食糜淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性 |
| 2.3 数据分析 |
| 2.4 结果分析 |
| 2.4.1 热应激条件下试验处理和热应激时间对鸡肠黏膜HSP70 表达规律的影响 |
| 2.4.2 热应激条件下试验处理和热应激时间对鸡肠黏膜HSP70mRNA 表达规律的影响 |
| 2.4.3 热应激条件下试验处理和热应激时间对血清皮质酮含量的影响 |
| 2.4.4 热应激条件下试验处理和热应激时间对血液中白细胞总数及嗜中性粒细胞/淋巴细胞(H/L)比值的影响 |
| 2.4.5 热应激条件下试验处理和热应激时间对碱性磷酸酶活性的影响 |
| 2.4.6 热应激条件下试验处理和热应激时间对鸡空肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度及绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值的影响 |
| 2.4.7 热应激条件下试验处理和热应激时间对空肠食糜淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 热应激条件下试验处理和热应激时间对肠黏膜HSP70 表达规律的影响 |
| 2.5.2 热应激条件下试验处理和热应激时间对肠黏膜HSP70mRNA 表达规律的影响 |
| 2.5.3 热应激条件下试验处理和热应激时间对血清皮质酮含量的影响 |
| 2.5.4 热应激条件下试验处理和热应激时间对血液中白细胞总数及嗜中性粒细胞/淋巴细胞(H/L)比值的影响 |
| 2.5.5 热应激条件下试验处理和热应激时间对碱性磷酸酶活性的影响 |
| 2.5.6 热应激条件下试验处理和热应激时间对空肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度及绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值的影响 |
| 2.5.7 热应激条件下试验处理和热应激时间对空肠食糜淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性的影响 |
| 2.5.8 HSP70 及其mRNA 与鸡肠道结构和消化功能的相关性 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 全文结论 |
| 3.1 结论 |
| 3.2 创新与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 环控舱中各处理组试验动物分组 |
| 附录二 日粮组成及营养水平 |
| 附录三 白细胞总数计数方法 |
| 附录四 鸡血清中皮质酮含量测定方法 |
| 附录五 白细胞分类计数方法 |
| 附录六 肠黏膜碱性磷酸酶活性测定方法 |
| 附录七 空肠食糜淀粉酶活性测定方法 |
| 附录八 空肠食糜脂肪酶活性测定方法 |
| 附录九 空肠食糜胰蛋白酶活性测定方法 |
| 附录十 肠黏膜HSP70 测定方法 |
| 附录十一 肠黏膜HSP70mRNA 测定方法 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 热休克蛋白 |
| 2 HSP70 家族的分类 |
| 3 HSP70 的分子结构 |
| 4 HSP70 的生物学功能 |
| 4.1 细胞保护作用 |
| 4.2 分子伴侣功能 |
| 5 HSP70 的基因调控 |
| 5.1 转录水平的调控 |
| 5.2 翻译水平的调控 |
| 6 HSP70 在动物热应激中的作用 |
| 6.1 保护细胞作用 |
| 6.2 使生物获得耐热性 |
| 6.3 抗氧化作用 |
| 7 HSP70 及其mRNA 的检测方法 |
| 7.1 HSP70 的检测方法 |
| 7.2 HSP70m RNA 的检测方法 |
| 8 HSP70 的应用和展望 |
| 9 本研究的目的和意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| 试验一 不同热应激强度（时间）对大鼠血清抗氧化能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验处理 |
| 1.2.1 不同热应激强度 |
| 1.2.2 不同热应激时间 |
| 1.3.3 样品采集 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 测定指标与方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同热应激强度下大鼠血清中的抗氧化指标 |
| 2.2 不同热应激时间下大鼠血清中的抗氧化指标 |
| 3 讨论 |
| 试验二 不同热应激强度（时间）对大鼠肝脏HSP70 表达的动态研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验处理 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 试验试剂 |
| 1.4.1 药品和酶 |
| 1.4.2 常规溶液及试剂配制 |
| 1.5 方法与步骤 |
| 1.5.1 肝脏蛋白样品的制备 |
| 1.5.2 样品总蛋白浓度测定 |
| 1.5.3 SDS-PAGE 电泳 |
| 1.5.4 免疫转印 |
| 1.5.5 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 样品上样量 |
| 2.2 不同热应激条件下HSP70 的检测结果 |
| 2.2.1 不同热应激强度时HSP70 的检测结果 |
| 2.2.2 HSP70 表达量测定结果 |
| 2.2.3 不同热应激时间时HSP70 的检测结果 |
| 2.2.4 HSP70 表达量测定结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 HSP70 在热应激中的表达 |
| 3.2 不同热应激条件对大鼠肝脏HSP70 表达规律的分析 |
| 3.3 热应激时肝脏HSP70 的表达的原因分析 |
| 试验三 不同热应激强度（时间）对大鼠肝脏HSP70mRNA 定量研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验处理 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 试验试剂 |
| 1.4.1 药品和酶 |
| 1.4.2 常规溶液及试剂配制 |
| 1.5 相关容器的处理 |
| 1.6 试验方法与步骤 |
| 1.6.1 总RNA 的提取 |
| 1.6.2 总RNA 的分析和定量 |
| 1.6.3 总RNA 的纯化 |
| 1.6.4 合成cDNA 第一链 |
| 1.7 半定量RT-PCR |
| 1.7.1 引物设计 |
| 1.7.2 PCR 反应体系 |
| 1.7.3 控制引物对之间竞争 |
| 1.7.4 确定循环数 |
| 1.7.5 电泳及光密度值分析 |
| 1.8 Real-time PCR |
| 1.8.1 引物设计 |
| 1.8.2 标准曲线模板制备 |
| 1.8.3 荧光定量PCR 反应体系 |
| 1.8.4 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA 提取与检测结果 |
| 2.2 半定量RT–PCR 检测结果 |
| 2.2.1 引物间扩增竞争对PCR 的影响 |
| 2.2.2 循环数对平台期影响 |
| 2.2.3 以β-Actin 为内标对HSP70 基因定量的结果 |
| 2.3 Real-time PCR 检测结果 |
| 2.3.1 Real-time PCR 标准曲线的建立 |
| 2.3.2 以β-Actin 为内标对HSP70 基因定量的结果 |
| 2.3.3 HSP70mRNA 转录量检测结果 |
| 2.4 Real-time PCR 和半定量RT-PCR 基因检测结果的比较 |
| 2.5 HSP70m RNA 转录量与HSP70 表达量的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 半定量RT-PCR 检测基因表达 |
| 3.2 Real-time PCR 检测基因表达 |
| 3.3 对不同热应激处理大鼠肝脏HSP70mRNA 定量的分析 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 营养因素对种公猪繁殖性能的影响 |
| 1.2 夏季高温环境对种公猪繁殖性能的影响 |
| 1.3 高温环境下机体的调节机制 |
| 1.4 反映热应激的指标(HSP70) |
| 1.5 展望 |
| 第2章 绪论 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 试验动物 |
| 3.2 试验时间和地点 |
| 3.3 试验设计 |
| 3.4 饲粮 |
| 3.5 饲养管理 |
| 3.6 精液和血样的采集 |
| 3.7 测定指标 |
| 3.8 数据处理 |
| 第4章 结果与分析 |
| 4.1 圈舍环境参数 |
| 4.2 饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪日增重的影响 |
| 4.3 饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪性欲的影响 |
| 4.4 饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪精液品质的影响 |
| 4.5 饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪内分泌的影响 |
| 4.6 饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪血清生化指标的影响 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 热应激条件下饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪日增重的影响 |
| 5.2 热应激条件下饲粮消化能、蛋白质水平对种公猪繁殖性能的影响 |
| 5.3 热应激条件下消化能、蛋白质水平对种公猪内分泌的影响 |
| 5.4 热应激条件下消化能、蛋白质水平对血清生化指标的影响 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表文章及参加课题一览表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一篇 文献综述 |
| 1 热应激产生机制 |
| 2 热应激对奶牛生产性能和生理生化指标的影响 |
| 2.1 对生产性能的影响 |
| 2.1.1 采食量 |
| 2.1.2 产奶性能 |
| 2.1.3 繁殖性能 |
| 2.1.4 疾病发生率 |
| 2.2 对生理生化参数的影响 |
| 2.2.1 生理指标 |
| 2.2.2 酶活力 |
| 2.2.3 血糖 |
| 2.2.4 血液蛋白质及其代谢产物 |
| 2.2.5 血液无机物 |
| 2.2.6 内分泌机能 |
| 2.2.7 免疫功能 |
| 3 娟姗牛和荷斯坦牛的习性 |
| 3.1 娟姗牛的主要生产性能 |
| 3.1.1 高乳脂率和乳蛋白率 |
| 3.1.2 高湿热环境的适应性 |
| 3.1.3 繁殖效率高 |
| 3.1.4 饲料利用效率高 |
| 3.1.5 济效益高 |
| 3.1.6 娟姗牛的杂交利用 |
| 3.2 中国荷斯坦奶牛的主要习性 |
| 3.2.1 泌乳性能 |
| 3.2.2 繁殖性能 |
| 3.2.3 适应性能 |
| 3.2.4 杂交效果 |
| 4 有关热应激细胞免疫调控及分子机理研究进展 |
| 4.1 细胞凋亡的基因调控 |
| 4.2 奶牛热休克蛋白的热应激调控机制 |
| 4.2.1 热应激蛋白基本特点 |
| 4.2.2 热休克蛋白的热应激调控机制 |
| 4.2.3 热应激蛋白在奶牛抗热应激中热耐力的特点 |
| 4.2.4 热应激蛋白在热应激中的作用机理 |
| 4.2.5 奶牛热应激条件下HSP70的检测方法 |
| 4.3 Bcl-2/Bax基因与奶牛热应激 |
| 4.4 抗热应激奶牛分子遗传标记研究 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 第二篇 实验研究 |
| 实验一 娟荷杂交牛培育及与荷斯坦奶牛性能比较 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 娟荷杂交牛来源及实验动物 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 体尺体重测定 |
| 1.2.2 测定生产性能 |
| 1.2.3 环境温湿度的测定 |
| 1.2.4 体温、皮温和呼吸率 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛的体尺体重 |
| 2.2 娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛的泌乳性能比较 |
| 2.3 娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛的泌乳曲线 |
| 2.4 热应激期间牛舍温热环境的变化 |
| 2.5 热应激对奶牛直肠温度、皮温和呼吸率的影响 |
| 2.6 热应激对娟荷杂交牛和荷斯坦奶牛产奶量的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 娟荷杂交牛的耐热性能 |
| 3.2 娟荷杂交牛的产奶性能 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 实验二 热应激对奶牛血液流变学与生化指标的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物与处理 |
| 1.2 血液样本采集 |
| 1.3 测定方法 |
| 1.3.1 血液流变指标测定 |
| 1.3.2 血液生化指标测定 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 热应激对不同品种牛血液流变学的影响 |
| 2.2 热应激对奶牛血清无机离子浓度的影响 |
| 2.3 热应激对奶牛血清酶活性的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 实验三 热应激对奶牛抗氧化特性的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物与处理 |
| 1.2 血清制备 |
| 1.3 测定方法 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 血清中的NO浓度变化 |
| 2.2 血清中NOS活力变化 |
| 2.3 夏季奶牛血清中的抗氧化指标 |
| 2.4 冬季奶牛血清中的抗氧化指标 |
| 2.5 不同季节下奶牛血清中抗氧化指标的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 热应激与一氧化氮代谢的关系 |
| 3.2 热应激条件下自由基代谢变化 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 实验四 热应激对奶牛免疫功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 样本采集 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 测定方法 |
| 1.4.1 IgG,IgA和IgM的检测 |
| 1.4.2 淋巴细胞转化指数 |
| 1.4.3 玫瑰花环试验法检测免疫细胞变化 |
| 1.4.4 乳中体细胞数 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 热应激对奶牛各类免疫球蛋白量的影晌 |
| 2.2 热应激对乳中体细胞数的影响 |
| 2.3 热应激对淋巴细胞刺激指数、E-玫瑰花环形成率的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 热应激对奶牛淋巴细胞转化率、花环形成率的影响 |
| 3.2 热应激对奶牛体细胞数、免疫球蛋白的影响 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 实验五 奶牛HSP基因表达、多态性与耐热性的关系分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与测定条件 |
| 1.2 采集血样 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 生化及耐热性能指标的测定 |
| 1.5 引物设计和PCR扩增 |
| 1.6 PCR-SSCP检测 |
| 1.7 测序分析 |
| 1.8 血液淋巴细胞中热应激蛋白HSP70的表达 |
| 1.8.1 淋巴细胞内蛋白质的提取 |
| 1.8.2 样品总蛋白浓度测定及标准曲线制作 |
| 1.8.3 电泳 |
| 1.8.4 免疫印迹 |
| 1.9 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PCR-SSCP分析结果 |
| 2.2 序列分析结果 |
| 2.3 基因频率、基因型频率和遗传多态性分析 |
| 2.4 Hardy-Weinberg平衡的检验 |
| 2.5 HSP基因不同位点多态性与血清生化指标关联分析 |
| 2.6 HSPA1A 5’-侧翼区基因多态性研究 |
| 2.7 HSPA1A 5’-侧翼区基因SSCP多态性与耐热性能之间的关系 |
| 2.8 不同季节对荷斯坦奶牛血液淋巴细胞热应激蛋白HSP70表达的影响 |
| 2.9 热应激对荷斯坦牛和娟荷杂交F_1牛血液淋巴细胞热应激蛋白HSP70表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 奶牛HSP基因多态性与血清生化指标的相关性分析 |
| 3.2 奶牛HSPA1A基因SSCP多态性与耐热性能的相关分析 |
| 3.3 热应激蛋白在奶牛处在热应激时的作用 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 实验六 热应激奶牛肝脾HSP70的表达特征及细胞凋亡观测 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及热应激条件 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 组织样本制备 |
| 1.5 细胞凋亡透射电子显微镜观察 |
| 1.6 热应激奶牛肝脏和脾脏组织中HSP70检测 |
| 1.6.1 组织包埋及切片 |
| 1.6.2 染色程序 |
| 1.7 图象分析 |
| 1.8 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同热应激条件下犊牛脾脏显微组织结构变化 |
| 2.2 HSP70免疫组化定位及热应激奶牛组织中HSP70含量变化 |
| 2.3 细胞凋亡观察 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献(REFERENCES) |
| 全文结论 |
| 全文创新 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题研究的目的与意义 |
| 1.2 国内外在该方向的研究现状及分析 |
| 1.2.1 表达序列标签（EST） |
| 1.2.2 木霉在植物病虫害生物防治中的应用 |
| 1.2.3 几丁质酶研究进展 |
| 1.2.4 超氧化物歧化酶研究进展 |
| 1.2.5 热激蛋白研究进展 |
| 1.2.6 丝状真菌转基因研究进展 |
| 1.3 目前生物防治菌哈茨木霉应用中存在的问题 |
| 1.4 课题来源及主要研究内容 |
| 1.4.1 课题来源 |
| 1.4.2 主要研究内容 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 哈茨木霉功能基因真菌表达 |
| 2.1.1 真菌表达载体与菌株 |
| 2.1.2 真菌表达载体构建主要试剂 |
| 2.1.3 真菌表达载体构建实验方法 |
| 2.1.4 真菌转化实验方法 |
| 2.1.5 T88 及其转化子对峙实验方法 |
| 2.1.6 T88 及其转化子的逆境胁迫实验 |
| 2.2 哈茨木霉功能基因原核表达及酵母表达 |
| 2.2.1 原核表达载体与菌株及主要试剂 |
| 2.2.2 超氧化物歧化酶基因（sod）原核表达材料与方法 |
| 2.2.3 小热激蛋白基因（hsp24）原核表达材料与方法 |
| 2.2.4 酵母表达载体与菌株 |
| 2.2.5 酵母表达主要试剂及培养基 |
| 2.2.6 表达载体pYES2-sod、pYES2-hsp24 构建 |
| 2.2.7 重组表达载体酵母转化 |
| 2.2.8 酵母转化子的鉴定 |
| 2.2.9 转sod、hsp24 基因酵母逆境胁迫实验方法 |
| 第3章 哈茨木霉ChiⅤ基因在真菌中的表达研究 |
| 3.1 表达载体 pCA-G ChiV 构建 |
| 3.1.1 克隆载体pUC-GUS的构建 |
| 3.1.2 中间载体pUC-GC的构建 |
| 3.1.3 pUC18-G ChiⅤ的测序 |
| 3.1.4 真菌表达载体pCA-G ChiⅤ的构建 |
| 3.2 真菌转化实验 |
| 3.2.1 转化前T88 对潮霉素的敏感性测定 |
| 3.2.2 冻融法转化根癌农杆菌 |
| 3.2.3 根癌农杆菌转化真菌影响因素分析 |
| 3.2.4 转化pCA-G ChiⅤ及其初步鉴定 |
| 3.2.5 转化子T-ChiⅤ的Southern blot分析 |
| 3.2.6 转化子T- ChiⅤ的RT-PCR检测 |
| 3.2.7 转化子T-ChiⅤ的传代分析结果 |
| 3.3 对峙及胁迫实验 |
| 3.3.1 T88 及转化子T- ChiⅤ对立枯丝核菌室内拮抗实验 |
| 3.3.2 T88 及转化子T- ChiⅤ对尖孢镰刀菌的室内拮抗实验 |
| 3.3.3 T88 及转化子T- ChiⅤ和核盘菌室内拮抗实验 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 真菌表达载体的选择 |
| 3.4.2 真菌转化条件的优化 |
| 3.4.3 几丁质酶的应用 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 哈茨木霉Sod基因在真菌中的表达研究 |
| 4.1 sod真菌表达载体构建 |
| 4.1.1 克隆载体pUC-GUS的构建 |
| 4.1.2 中间载体pUC-GS的构建 |
| 4.1.3 pUC18-GSOD的测序 |
| 4.1.4 真菌表达载体pCA-GSOD的构建 |
| 4.2 真菌转化实验 |
| 4.2.1 冻融法转化根癌农杆菌 |
| 4.2.2 转化pCA-GSOD及其转初步鉴定 |
| 4.2.3 转化子T-SOD的Southern blot分析 |
| 4.2.4 转化子T-SOD的RT-PCR检测 |
| 4.2.5 转化子T-SOD的传代分析 |
| 4.3 对峙及胁迫实验 |
| 4.3.1 T88 及转化子T-SOD对立枯丝核菌室内拮抗实验 |
| 4.3.2 T88 及转化子T-SOD对尖孢镰刀菌的室内拮抗实验 |
| 4.3.3 T88 及转化子T-SOD和核盘菌室内拮抗实验 |
| 4.3.4 T88 及转化子T-SOD逆境胁迫及对峙实验 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 逆境条件下的T-SOD转化子 |
| 4.4.2 全长cDNA基因获取方法的选择 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 哈茨木霉菌功能基因原核及酵母表达研究 |
| 5.1 超氧化物歧化酶基因的原核表达研究 |
| 5.1.1 原核表达载体pET28-sod的构建 |
| 5.1.2 原核表达质粒pET28-sod在大肠杆菌中的表达 |
| 5.2 小热激蛋白基因的原核表达 |
| 5.2.1 原核表达载体pET28-hsp24 的构建 |
| 5.2.2 原核表达质粒pET28-hsp24 在大肠杆菌中的表达 |
| 5.3 酿酒酵母生长曲线 |
| 5.4 超氧化物歧化酶基因的酵母表达研究 |
| 5.4.1 重组酵母表达载体pYES2-sod的构建 |
| 5.4.2 sod基因酵母表达转录水平检测 |
| 5.4.3 转基因酵母胁迫实验 |
| 5.5 小热激蛋白基因的酵母表达 |
| 5.5.1 重组酵母表达载体pYES2-hsp24 的构建 |
| 5.5.2 hsp24 基因酵母表达转录水平检测 |
| 5.5.3 转基因酵母胁迫实验 |
| 5.6 原核表达及酵母表达的讨论 |
| 5.6.1 原核表达过程中出现的问题及解决办法 |
| 5.6.2 酵母转化子检测方法 |
| 5.6.3 酵母总RNA提取方法改进 |
| 5.6.4 酿酒酵母转化的影响因素分析 |
| 5.6.5 转基因酵母逆境胁迫实验中碳源的选择原则 |
| 5.7 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 1 热激蛋白的发现及研究历史 |
| 2 热激蛋白的分类与功能 |
| 2.1 分子伴侣 |
| 2.2 细胞内保护性 |
| 2.3 参与免疫应答 |
| 3 HSP70在应激反应中的作用 |
| 3.1 HSP70与热应激 |
| 3.2 HSP70与运输应激 |
| 3.3 HSPs对细胞的热调节功能 |
| 4 HSP70参与应激反应的分子机制 |
| 4.1 HSP70的转录与调控 |
| 4.2 HSP70的翻译调控 |
| 5 热激蛋白在动物应激中的应用 |
