张华[1]（2021）在《含非共价网络的多糖水凝胶设计及用于组织修复研究》文中提出高分子水凝胶是富含水的聚合物交联材料,类似细胞外基质结构,在组织修复与再生、组织工程、3D生物打印等领域具有突出的应用优势。然而,水凝胶材料往往存在凝胶化与自愈合慢,刚度、强度、韧性不够,易蠕变等问题,难以满足细胞生长、3D打印以及组织修复的力学性能与粘弹性需求。研究发现,向水凝胶网络中建立“非共价作用”是提高凝胶化速率、增强力学性能和改善粘弹性响应的有效策略。但如何在水凝胶网络中合理利用非共价作用来满足生物医用的性能需求,是发展生物活性水凝胶新材料的重要挑战。本论文选择生物活性多糖水凝胶为研究基体,通过向网络中引入含疏水缔合、氢键等非共价作用组分,发展了力学性能增强、粘弹性能可控的生物相容水凝胶材料,并尝试用于3D生物打印、软骨和皮肤修复等生物医学领域。核心研究内容与结论如下:（1）采用光引发聚合制备了疏水缔合丙烯酰化F127（F127DA）胶束交联的甲基丙烯酰化透明质酸（Me HA）水凝胶。F127DA胶束的可逆形变为网络抵抗应力破坏提供了能量耗散。当F127DA胶束与Me HA的含量分别为15 wt.%和1.5 wt.%时,水凝胶的压缩强度、模量和韧性分别达到3.44 MPa,312 k Pa和～407.5 k J·m-3,接近于部分软骨组织的力学性能。胶束与Me HA分子间的共价交联赋予网络良好的耐溶胀性。水凝胶在磷酸盐缓冲液中体积轻度溶胀1.3倍,削弱了网络非共价作用,导致其压缩强度、模量和韧性降低至0.59MPa,55 k Pa和81.8 k J·m-3,但溶胀前后均表现出良好的抗疲劳和网络自恢复能力。针对溶胀后力学性能下降的问题,进一步向水凝胶中引入二甲基亚砜/水（DMSO/H2O）混合溶剂,增强了Me HA分子内与分子间的氢键作用,为凝胶网络提供了更多可逆交联点。随着DMSO在双溶剂中所占含量的增加,凝胶从平整孔结构逐渐转变为具有微相分离结构,其压缩力学性能相应增强。当DMSO体积分数为0.6时,凝胶的压缩强度,模量和韧性分别达到10.12 MPa,106.8 k Pa和742.1 k J·m-3。并且,疏水缔合作用和氢键作用赋予凝胶网络优异的抗疲劳和自恢复性能。胶束交联透明质酸水凝胶可降解并具有良好的生物相容性,植入体内喉软骨缺损表现出促进软骨修复的潜能。（2）胶束共价交联透明质酸水凝胶网络一旦破坏,不具备自愈合性能,难以满足3D打印要求。因此,进一步将F127DA胶束引入到动态酰腙键交联的透明质酸水凝胶中,发现胶束作为抗形变单元不仅提高了凝胶的力学刚度,而且胶束与透明质酸分子通过亲疏水作用形成复合体,缩短了水凝胶的凝胶化时间。当F127DA含量从0%增大到7%（wt./v）时,动态凝胶的储能模量从60 Pa增大到180 Pa,凝胶化时间从60～300 s缩短到15 s以内。光引发胶束网络共价交联可进一步将凝胶模量提升至1 k Pa。动态酰腙键和亲疏水作用同时赋予水凝胶快速可逆的凝胶-溶胶转变与自愈合性能,可作为直写式3D打印“墨水”构建立体三维结构。该水凝胶生物相容,植入关节软骨缺损处能显着提升新生软骨生成,促进胞外基质氨基聚糖和II型胶原蛋白表达,展现出促进关节软骨损伤愈合的潜能。（3）透明质酸/胶束宏观水凝胶在3D打印过程中线条结构扭曲,导致精度和分辨率低。此外,研究证实多细胞聚集体对组织修复具有促进作用,但以上水凝胶不具备调控细胞聚集的生物功能。为此,设计了化学交联的甲基丙烯酰化壳聚糖（CHMA）/聚乙烯醇（PVA）水凝胶,并通过剪切作用将其转化为微凝胶。微凝胶间通过CHMA和PVA分子间的可逆氢键作用二次组装为“墨水”,既具有一定的屈服强度,又可在剪切作用下呈现塞流流动,当应力撤去后立即自愈合,并保持良好的抗蠕变性能。应用CHMA/PVA微凝胶“墨水”实现了类血管、人耳、股骨等大长径比仿生结构的高保真构建。并且,该水凝胶的化学微环境可调节干细胞聚集成高活性生长的细胞球,这对组织修复具有重要意义。（4）为了进一步探明水凝胶刚度对细胞球粘附骨架和组织修复的影响,采用光聚合和定向梯度冷冻法制备了组分恒定、化学环境稳定的CHMA/PVA水凝胶,实现了水凝胶模量从14 k Pa至61 k Pa的连续分布。成纤维细胞在CHMA/PVA水凝胶表面形成细胞聚集体,并且在高刚度（43-61 k Pa）水凝胶表面的粘附骨架比在低刚度（14-35 k Pa）水凝胶表面的大。CHMA/PVA水凝胶具有良好的体内生物相容性,14 k Pa和61 k Pa水凝胶作为敷料均显着促进皮肤表皮与真皮的生长,降低疤痕形成,缩短皮肤愈合时间近4天,但61 k Pa水凝胶较14 k Pa水凝胶更有利于胶原蛋白成熟。该生物相容水凝胶在细胞行为调控与皮肤修复方面具有潜在的应用价值。
崔文平[2]（2021）在《松花粉多糖活性组分及其靶向纳米药物抗ALV-J活性研究》文中指出ALV-J作为一种典型的反转录病毒,近些年来在鸡群中多次爆发,给养殖业造成了巨大损失。目前防控ALV-J的种鸡群净化措施存在投入大,周期长等缺点,迫切需要寻求新的方法进行有效防控。前期研究显示松花粉多糖在抗ALV-J试验中具有一定活性,但由于尚未进行深入研究,松花粉多糖抑制ALV-J复制的物质基础尚不清楚,无法解释其抗ALV-J的机制,也难以对其活性和质量进行评价控制。同时,作为一种大分子多糖,在动物体内往往存在难以透过胃肠道黏膜吸收,易被免疫系统识别,导致代谢失活的缺点。因此,研究松花粉多糖抑制ALV-J复制的物质基础,阐释其构效关系,并进一步构建合适的药物递送系统,提高其体内生物利用度和抗ALV-J活性,为ALV-J防治提供新的方法,具有重要的科学意义和研究价值。一、松花粉多糖抗ALV-J活性单体分离鉴定及构效关系研究单因素试验筛选优化提取工艺,通过总多糖提取产率确定最佳提取条件:提取温度90℃,提取溶液p H 9.0,液固比30:1,获得总多糖的最终提取率为6.5±0.19%。通过DEAE离子交换柱和sephadex G-200分子排阻色谱柱分离多糖,得到三个单体组分（PPP-1、PPP-2和PPP-3）。CCK-8试验显示各组分在800μg/m L以下无明显细胞毒性,体外抗病毒试验表明三个组分抗ALV-J活性顺序为PPP-2>PPP-3>>PPP-1。为进一步研究三个组分抗ALV-J活性的构效关系,对其分子量、单糖组成及三螺旋构象进一步分析。结果表明三个组分分子量分别为463.70、99.41和26.97 k Da,差异显着;PPP-2和PPP-3的单糖组成接近,葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸的含量高于PPP-1,而葡萄糖含量显着偏低;刚果红试验显示只有PPP-2具有三螺旋结构,破坏PPP-2三螺旋结构后其活性明显下降。结合文献报道,初步推测松花粉多糖抗ALV-J活性构效关系如下:单糖组成是影响松花粉多糖活性的主要因素,含有酸性单糖的单体组分显示出较好的抗ALV-J活性,空间构象也是影响其活性的重要因素,三螺旋结构的保持可以提高PPP-2抗ALV-J效果,同时分子量也可能对其活性具有一定影响。本部分实验研究了松花粉多糖抑制ALV-J复制的物质基础,阐释其构效关系,为进一步研究松花粉多糖抗ALV-J活性提供了物质基础。二、松花粉多糖壳聚糖纳米药物制备及其抗ALV-J活性研究为改善松花粉多糖在体内易代谢失活的缺点,实验借助松花粉多糖和壳聚糖间的静电作用,以及壳聚糖纳米粒自组装原理,制备了松花粉多糖壳聚糖纳米药物（CS-PPPs NPs）来延长松花粉多糖在鸡体内作用时间,提高抗ALV-J活性。通过包封率、载药量及粒径对CS-PPPs NPs的制备条件进行筛选,得出最优制备工艺:壳聚糖浓度为2 mg/m L、多聚磷酸钠与壳聚糖的比例为1:8,多糖占壳聚糖的浓度10.00%,所制备的CS-PPPs NPs包封率可达91.2%,载药量达8.2%,平均粒径264 nm,PDI=0.21。体外释放实验显示所制备CS-PPPs NPs在96 h累计释放率为90%,具有较好的缓释效果;细胞实验表明,纳米粒可以携带药物进入细胞并可以缓慢释放,低于400μg/m L时,对DF-1细胞没有明显毒性作用;体外抗ALV-J活性结果表明,CS-PPPs NPs通过缓释作用延长了作用时间,提高了抗病毒效果。进一步开展实验结果表明,空白壳聚糖纳米粒没有明显的抗病毒效果,松花粉多糖溶液在短期内有较好的抗ALV-J复制的效果,但在长期实验中,PPPs组因代谢排泄效果明显下降。CS-PPPs NPs在体内显示出较好的缓释作用,在长期抗ALV-J复制中具有较好的效果,可以长时间保护鸡体,提高鸡只的免疫力和生长速度。三、基于抗体靶向的壳聚糖纳米药物递送系统增强松花粉多糖抗ALV-J活性研究为提高药物在动物体内抗病毒活性,同时减小对动物本身的毒性,本实验以松花粉多糖（PPPs）作为模型药物,以JE9抗体作为抗ALV-J指示剂,构建了新型靶向抗ALV-J纳米药物递送系统（Ab-CS-PPPs DDS）。实验通过EDC和NHS催化合成连接抗体的纳米药物（Ab-CS-PPPs NPs）,通过红外光谱、透射电镜和粒度分析仪进行表征,结果显示JE9抗体成功与壳聚糖连接,纳米药物连接抗体后,粒径、包封率、载药量及体外释放度均无显着变化。使用FITC荧光探针,考察其在细胞和动物体内对病毒的靶向性,结果显示,感染ALV-J的细胞对Ab-CS-PPPs NPs摄取更快,持续时间更长。体内实验显示,Ab-CS-PPPs NPs在感染ALV-J鸡的肝脏、肾脏、胸腺、脾脏及法氏囊上具有明显的富集性。体内外抗ALV-J实验均显示,偶联抗体后,纳米药物抑制ALV-J复制的效果提高,说明纳米递送系统对ALV-J具有较好的分布和抑制靶向性。毒理研究表明低于400μg/m L时,对DF-1细胞没有明显毒性作用;体内代谢显示偶联抗体后,纳米药物仍然具有良好的缓释作用,体外抗病毒实验结果表明,在100μg/m L的浓度下,Ab-CS-PPPs NPs可以持续抑制ALV-J的复制,在体外显示出良好的抗病毒效果。最后建立后天感染ALV-J雏鸡模型,肌肉注射CS-PPPs NPs及Ab-CS-PPPs NPs,定期观察各组鸡的临床表现及剖检病理变化,对相关指标检测表明在病毒感染的早期,Ab-CS-PPPs NPs可以持续缓慢的释放,维持稳定的药物浓度,通过药物干预可以显着降低组织的病毒载量并对感染ALV-J雏鸡的生长发育有一定的促进作用。总之,该研究通过对松花粉多糖中的单体多糖及单糖组成进行分离鉴定,研究了其抗ALV-J的活性成分,对其构效关系进行了初步分析;借助静电作用和自组装原理制备了包封率和载药量较高、具有缓释长效作用的松花粉多糖壳聚糖纳米药物;同时以松花粉多糖作为抗病毒模型药物,构建了基于抗体靶向的纳米药物递送系统,进一步提高了松花粉多糖抗ALV-J活性,为ALV-J的防治提供了新的思路和方法,同时为其它靶向抗病毒药物的研制及评价提供了参考。
张轩[3]（2021）在《产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用》文中指出枯草芽孢杆菌广泛存在于传统发酵食品内,可产生多种对人体有益的生物活性物质。枯草芽孢杆菌发酵的纳豆因其富含具有抗血栓功能的纳豆激酶（Nattokinase）,作为一种风味食品受到部分消费者的青睐。枯草芽孢杆菌液体发酵生产的纳豆激酶也已被用于抗血栓功能食品或药品的制备。另外,也有报道,口服枯草芽孢杆菌可调节机体肠道菌群和免疫功能,发挥抗炎、抗肿瘤以及延缓衰老等作用。目前,纳豆激酶口服产品的剂型单一,且耐胃酸和肠道缓释能力较差;枯草芽孢杆菌益生菌制剂主要为冻干菌粉,食用人群局限。上述产品的局限性,限制了其应用范围。本研究针对上述产品的不足,利用筛选的同时产生纳豆激酶和凝乳酶的枯草芽孢杆菌菌株,研制了一种新型的枯草芽孢杆菌功能发酵乳和一种纳豆激酶口服缓释制剂,对其制备工艺和相关功能进行了系统研究。主要研究内容和结果如下:首先,用从自然界采集的稻草作为发酵菌种的来源制作纳豆,从自制纳豆浸出液中分离、筛选出产双酶（纤维蛋白溶解酶和凝乳酶）的菌株。通过对菌株形态观察和生化特性检测,结合16S rDNA基因序列测定结果,确定此菌株为枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis JNFE0126。在优化后的培养条件下,该菌株产纳豆激酶活性最高达14512.4IU/mL,产凝乳酶活性最高达875.5 SU/mL,可以满足中性条件下制备凝固型发酵乳的要求。酶抑制剂试验结果表明,发酵液纤溶活性来源于丝氨酸蛋白酶,凝乳活性来源于金属蛋白酶。提取该菌株的DNA,根据基因库中已经报道的纳豆激酶和凝乳酶（金属蛋白酶M4）的基因序列设计引物进行PCR基因调取扩增后测序,结果表明该菌株具有上述两种酶的基因,其序列分别与已经报道的纳豆激酶和金属蛋白酶M4具有高度相似性（同源性分别为99.1%和97.6%）。其次,分别收集B.subtilis JNFE0126纳豆激酶和凝乳酶最高产酶期的发酵液,采用硫酸铵沉淀、离子交换色谱及凝胶过滤色谱分别对纳豆激酶和凝乳酶进行分离纯化,然后用SDS-PAGE检验样品纯度及测定其相对分子质量。结果表明,纯化的纳豆激酶和凝乳酶的相对分子质量分别为27 KD和42 KD左右。纳豆激酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,pH 6.0-9.0条件下具有较高的酶活和较好的稳定性。凝乳酶的最适作用温度为55℃,最适pH值为6.5,在pH 6.0-8.0条件下具有较高的酶活,在pH 5-10条件下有较好的的稳定性。在此基础上,研究并优化了B.subtilis JNFE0126发酵鲜牛乳制作凝固型发酵乳的配方和发酵条件,评价了所得产品的品质特性和抗血栓功能。优化的配方和发酵条件为:鲜牛乳,大豆蛋白2%,蔗糖4%,羟丙基二淀粉磷酸酯1.5%,果胶0.1%,藻酸丙二醇酯（PGA）0.1%,发酵温度41℃,发酵时间8 h。得到发酵乳为软嫩的乳白色凝乳块,奶香浓郁,口感爽滑,无明显不良风味。扫描电镜观察表明,凝乳块内部呈现海绵状微观结构,酪蛋白胶束及亚胶束相互交联形成整体的三维结构,胶束间仍然存在大量微细孔隙,这些孔隙起着保持水分的作用。发酵乳的纤溶活性达215.1 U/mL,4℃储藏14天酶活性可保留66%,储藏60天活性仍保留43%;小鼠黑尾试验表明,口服该发酵乳具有显着的体内抗血栓效果。应用Dextran sulfate sodium salt（DSS）诱导性炎症性肠病动物模型评价了上述发酵乳对肠道菌群的调节作用和对炎症性肠病的防治效果,并探讨了其作用机制和实际应用前景。动物疾病症状观察和肠道组织病理分析结果表明,口服B.subtilis JNFE0126发酵乳可明显减轻DSS诱导性炎症性肠病动物的疾病严重程度,减轻动物的肠道粘膜的出血、炎症和溃疡等病理损伤;动物肠道菌群的检测分析和和肠粘膜内炎症相关因子和上皮再生相关蛋白表达水平的测定结果表明,口服B.subtilis JNFE0126菌株发酵乳可调节动物的肠道菌群,增加菌群的多样性,抑制有害菌生长;该发酵乳可抑制肠道粘膜内炎症因子表达水平,提高炎症抑制因子表达水平,因而减轻肠粘膜的炎症性损伤。与此同时,B.subtilis JNFE0126发酵乳可促进肠粘膜上皮干细胞的增殖分化,促进粘膜细胞的粘液蛋白和上皮连接蛋白的表达,加速肠粘膜屏障和上皮屏障的修复,从而抵御有害菌和炎症因子的侵入。最后,研制了一种具有双层壳-核结构（壳聚糖核-纳豆激酶-酪蛋白）的纳豆激酶口服缓释颗粒,并通过动物试验评价其在体内抗血栓作用。采用壳聚糖为核心,京尼平为壳聚糖核-纳豆激酶交联剂,牛乳酪蛋白为颗粒外层保护材料,TG酶为保护层的交联剂,按照分步交联的程序制备纳豆激酶缓释颗粒。用扫描电子显微镜对获得的缓释颗粒进行形态学分析,并使用纳米金交联的IgG作为模型药物验证了酪蛋白保护层的包埋效果,确定其形成了双层壳-核结构。通过体外模拟胃、肠液消化试验测定了该缓释颗粒的释放动力学特征,结果表明该颗粒在胃酸中能有效保护纳豆激酶活性,并在肠液中缓释达12小时。最终对该缓释颗粒进行动物口服试验,动态观察颗粒内纳豆激酶的体内缓释过程及其抗血栓效果。结果表明,上述纳豆激酶口服缓释颗粒具有很强的抗胃酸能力,并在肠道内可缓慢释放出纳豆激酶及其不同大小相对分子质量的具有纤维蛋白溶解活性的降解产物,缓释过程超过12小时。小鼠黑尾模型动物口服该颗粒,可明显抑制小鼠尾部血管内的血栓形成并促进血栓溶解,效果显着优于口服游离纳豆激酶。综上所述,本研究利用筛选的B.subtilis JNFE0126制备的发酵乳具有抗血栓和调节肠道功能的作用,有良好的应用前景。本研究开发的纳豆激酶口服缓释颗粒具有耐胃酸能力和肠道缓释功能,可提高纳豆激酶的口服利用度,有望作为功能食品添加剂用于研制抗血栓功能食品。
夏琛[4]（2021）在《根皮素纳米粒子对糖尿病大鼠的肾脏保护作用研究》文中研究指明根皮素（Phloretin,Pht）为二氢查尔酮类化合物,主要存在于苹果、草莓、山茶等植物中,具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、抗肿瘤、降血糖等生理功能,安全无毒,可应用于食品、药品、化妆品等多个领域。但是存在水溶性差、生物利用率低以及稳定性差等问题,在实际应用中具有局限性,因此提高Pht的水溶性以及生物利用度显得尤为重要。为了解决疏水性小分子在应用中存在的问题,目前已经开发出多种性能不同的纳米载体,其中大豆卵磷脂（Soybean Lecithin,SL）与壳聚糖（Chitosan,CS）因其具有的生物相容性以及生物降解性等特性,被广泛应用于纳米粒子等新型药物递送系统。糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy,DN）是糖尿病患者死亡的主要原因之一。本文利用SL与CS之间的静电吸附作用,构建了负载根皮素大豆卵磷脂-壳聚糖纳米粒子（Phloretin-loaded Soybean Lecithin-Chitosan Nanoparticles,Pht-SL-CS NPs）,研究了 其结构与性能,探究了其对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并探讨可能机制,主要结论如下:（1）根据单因素实验以及正交实验,最终确定大豆卵磷脂-壳聚糖纳米粒子（Soybean Lecithin-Chitosan Nanoparticles,SL-CS NPs）的最优制备工艺:CS 浓度为0.10 mg/mL,CS/SL质量比为1:25,乙醇含量为8%,pH值为4,磁力搅拌时间为2 h,在该制备条件下,纳米粒子对3 mg Pht的包封率（Encapsulation Efficiency,EE）为 98.12%±0.10%。（2）探究了 Pht 的浓度对 Pht-SL-CSNPs 的 EE 和载药率（Loading Efficiency,LE）的影响,结果表明当Pht的浓度为250 μg/mL时,EE为92.71%±0.67%,LE为6.76%±0.06%,Pht水溶性提高了 9.97倍;对Pht-SL-CS NPs进行结构表征:傅里叶变换红外光谱（Fourier TransformInfrared Spectroscopy,FTIR）的结果表明Pht已经成功被包埋入纳米粒子的脂质内核;X射线衍射（X-ray Diffractometer,XRD）的结果表明,Pht以非结晶（无定型）态存在于Pht-SL-CS NPs中,提高了 Pht的水溶性;外观形态及重复性考察表明制备的Pht-SL-CS NPs为类球状结构,粒径较小,无凝聚现象,分布均匀且工艺重复性好。（3）以粒径为指标,比较不同冻干保护剂对Pht-SL-CS NPs的复溶稳定性的影响,结果表明甘油的保护作用最佳,当甘油的添加量为4%（w/v）时,Pht-SL-CS+4%GNPs复溶时的粒径与冻干前无显着差异（p>0.05）;分别在25℃自然光、25℃避光以及4℃避光条件下探究各体系对Pht的保护效果,结果表明根皮素纳米粒子的光照稳定性以及贮藏稳定性明显提高;通过体外模拟消化实验探究各体系中Pht的生物可及度,包埋后的Pht生物可及度显着提高（p<0.05）,以甘油作为冻干保护剂后,能显着改善冻干复溶后生物可及度下降的问题（p<0.05）;探究了各体系对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,抑制活性大小依次为:Pht 的 1%DMSO 溶液>Pht-SL-CS+4%GNPs>Pht-SL-CS+4%GNPs 复溶>Pht-SL-CS NPs>Pht-SL-CS NPs 复溶>阿卡波糖。（4）通过腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）建立糖尿病大鼠模型,灌胃Pht-SL-CS+4%GNPs（简称Pht NPs）对糖尿病大鼠体重无显着影响（p>0.05）,且有一定的降血糖作用;低剂量的Pht NPs能显着减缓肾脏及肝脏增重（p<0.05）,这说明Pht NPs可能对糖尿病大鼠的肾脏及肝脏有一定保护作用;对糖尿病大鼠肾脏功能影响的结果显示,Pht NPs可以有效缓解肾脏损伤;肾脏组织病理学及纤维化观察结果显示,不同剂量的Pht NPs均能在一定程度上缓解肾脏病变并减轻纤维化程度;肾脏组织抗氧化作用结果表明Pht NPs具有抗氧化应激作用,可改善由氧化应激引发的肾脏损伤;对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1/Smad2信号通路影响的结果显示,Pht NPs的干预使得TGF-β1、Smad2蛋白的表达极显着下调（p<0.001）,说明Pht NPs可能通过调控TGF-β1/Smad2信号通路来改善糖尿病大鼠肾脏纤维化,进而发挥其肾脏保护作用。综上,Pht NPs不仅能显着改善Pht的水溶性、贮藏稳定性、光照稳定性以及生物可及度,并且仍具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。并通过腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,实验结果表明Pht NPs能够缓解肾脏病变并减轻纤维化程度,具体机制涉及改善肾脏组织氧化应激,抑制TGF-β1/Smad2信号通路。本文为Pht NPs在抑制α-葡萄糖苷酶、防治DN等方面的应用提供了一定理论依据。
许春丽[5]（2021）在《多功能农药载药体系设计与调控释放性能研究》文中研究说明农药是保障粮食安全与世界和平稳定的重要物质基础,人类对农药的刚性需求将长期存在。然而当前农药用量大和利用率低的问题仍客观存在,导致资源浪费和环境污染等问题。为实现农业可持续发展,我国提出了农药“减施增效”的战略需求,2021年中央1号文件再次强调农业绿色发展,持续推进化肥农药减施增效。利用功能材料改性与负载技术设计农药缓控释制剂,进行农药高效对靶沉积和可控释放,在促进农药减施增效方面展现出良好的应用前景。基于农药使用与防控剂量需求不匹配导致用药量大的问题,本研究以无机材料介孔二氧化硅和有机高分子材料多糖作为载体,创新农药负载方法,优化制备工艺,设计研发多功能性农药缓控释载药体系,并进行了释放特性及生物活性研究,旨在为农药新剂型的研发和农药减施增效提供理论指导和技术支撑。主要开展了以下工作:（1）二氧化硅及其界面修饰载药体系的设计和性能研究a)设计了碳量子点修饰的介孔二氧化硅/丙硫菌唑缓释纳米载药颗粒,缓释载药颗粒的生物活性效果优异,碳量子点赋予的荧光性有助于载药颗粒在植株中和菌丝体内的可视化观察,对于探究农药在作物体内的传输和分布具有潜在的应用前景;b)发展了基于乳液体系的同步羧甲基壳聚糖介孔二氧化硅界面修饰和嘧菌酯负载方法。相对于传统的改性后修饰载药,农药的载药量显着提高约6倍。未界面修饰的载药体系中有效成分嘧菌酯不具有敏感释放特性,而改性后载药体系具有p H敏感的释放特征:在弱酸性环境48 h累积释放量达到45%,而在中性和碱性条件下48 h内累积释放量可达到66%。改性修饰前后载药颗粒的有效成分释放均符合Korsmeyer-Peppas模型。改性功能材料的引入可使载药体系的生物活性提高约17%,纳米颗粒可实现在菌丝体和植株内传输;c)构建了界面多巴胺和金属铜离子修饰的介孔二氧化硅/嘧菌酯载药体系,以具有杀菌活性的金属铜离子可以作为药物分子和载体之间的“桥梁”,通过金属配位键调控农药分子的释放。金属配位纳米载药颗粒的释放为Korsmeyer-Peppas模型,金属配位调控后缓释效果更优异,在24h内累积释放分别达到59.8%,45.5%和56.1%。载体材料具有协同的杀菌活性,可以提高载药颗粒在靶标作物上的沉积效果。（2）天然多糖壳聚糖基载药体系的设计与性能研究a)通过自由基聚合反应制备壳聚糖聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯接枝共聚物,利用乳化交联法制备吡唑醚菌酯微囊。载体材料的p H和温度敏感特性赋予微囊环境响应释放特性,吡唑醚菌酯的释放随着p H的增加而降低,随着温度的升高而增加。微囊化后吡唑醚菌酯的光稳定性显着增高,对非靶标生物斑马鱼的急性毒性降低;b)通过离子交联法制备了金属锰基羧甲基壳聚糖基水凝胶,以丙硫菌唑为模式农药验证了负载不同的农药时所选用的金属离子具有特定性。通过单因素实验和正交实验,以载药量和包封率作为评价指标确定了水凝胶载药颗粒的最佳制备工艺:羧甲基壳聚糖的质量分数4%;油/水体积比1:10;Tween-80的质量分数2.0%;Mn2+的浓度0.2 M,载药量和包封率分别为22.17%±0.83%和68.38%±2.56%。水凝胶载药颗粒的溶胀和有效成分的释放具有p H敏感特性,碱性条件下有效成分释放较快,酸性条件下释放最慢。在相同的有效成分剂量下,水凝胶载药颗粒与丙硫菌唑原药相比可以增强对小麦全蚀病的杀菌能力。载药体系对小麦的生长具有营养功能,还可以促进种子的萌发,降低丙硫菌唑在土壤中的脱硫代谢;c)以农药分子恶霉灵作为凝胶因子,以具有表面活性的海藻酸钠和羧甲基壳聚糖为载体材料,通过静电作用创新制备了具有不同流变性能的水凝胶载药体系。通过改变材料的比例可以得到适用于不同应用场景的水凝胶。水凝胶的溶胀具有离子和p H敏感特性,适用于土壤撒施场景的水凝胶载药体系可降低恶霉灵土壤中的淋溶,适用于茎叶喷雾的水凝胶载药体系可提高在靶标作物界面的沉积性能。本论文从载药体系中载体材料的选择和设计作为切入点,使载体材料在实现有效成分负载和控制释放的基本功能基础上,又赋予载体材料荧光性能、营养功能、靶向沉积和植物保护等功能特性。无机载体材料纳米介孔二氧化硅在提高载药颗粒传输性能的基础上,其荧光性能可实现载药颗粒传输的可视化,界面修饰提高载药颗粒的生物活性,同时调控有效成分的环境响应释放特性;有机载体材料壳聚糖基载药体系可以赋予有效成分温度和p H双敏感释放特性,同时发挥协同增效的生物活性和营养功能,提高农药靶向沉积和抗雨水冲刷能力。本研究充分围绕绿色发展理念,通过界面修饰方法和高效的制备工艺,创新了农药负载方法,研发了功能型载药体系,为农药的减施增效和缓控释制剂的发展提供了研究思路和技术途径,对农药产品升级换代和利用率提升具有重要意义。
但凡[6]（2021）在《荷叶碱纳米粒子的构建与性能评价》文中进行了进一步梳理荷叶生物碱类物质具有降脂减肥、抑菌、抗氧化、抗病毒等功效,且作为天然产物的荷叶生物碱具有其他药物所不具备的安全性,这使得荷叶生物碱类物质极具应用潜力。但荷叶生物碱也存在溶解性差、生物利用率低等问题从而限制了其进一步利用,因此探索提高荷叶生物碱类物质的溶解性、稳定性和生物利用度的研究,具有十分重要的意义。本实验以荷叶碱为研究对象,制备了脂质体和磷脂-壳聚糖自组装纳米粒两种纳米载体以包埋荷叶碱。结合色谱、差示扫描量热法、红外光谱和透射电镜等技术方法对制备的纳米载体进行表征;设计贮藏稳定性实验,消化稳定性实验和体外模拟释放实验,研究包埋了荷叶碱的纳米粒的特性,并设计动物实验验证脂质体对于荷叶碱的口服生物利用度的改善。主要研究内容与结论如下:（1）荷叶碱脂质体的构建。直接构建脂质体包埋荷叶碱会有大量荷叶碱吸附镶嵌在脂质体外膜上,从而严重影响脂质体的特性。实验发现,在添加了与荷叶碱质量比为1:1的十二烷基磺酸钠（AS）或者聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）后荷叶碱能被脂质体包埋至中心,此时纳米粒子外形类似球形,添加十二烷基磺酸钠的纳米粒子平均粒径为85 nm,电位为-23.82 m V;当胆固醇浓度为1 mg/m L,荷叶碱浓度为1 mg/m L,大豆卵磷脂浓度为20 mg/m L时,荷叶碱脂质体具有最大包封率89.33%。（2）荷叶碱自组装纳米粒的构建。传统的溶剂注入法制备的荷叶碱自组装纳米粒的包封率只有20.08%;而采用改良的溶剂注入法,磷脂与壳聚糖的质量比为20:1,且壳聚糖水相中添加2%的水溶性维生素E时可制得具有最大包封率为51.13%的荷叶碱自组装纳米粒,显着提高了纳米载体对荷叶碱的包封率。此时纳米粒子外形呈球形,平均粒径为142.23 nm,电位为+24.57 m V。（3）荷叶碱、荷叶碱脂质体和荷叶碱自组装纳米粒的贮藏稳定性、消化稳定性和体外释放特性的评价。结果表明自组装纳米粒具有提高荷叶碱的贮藏稳定性的作用;胃环境是荷叶碱的主要破坏场所,而脂质体和自组装纳米粒均有提高荷叶碱在胃环境中的稳定性的作用;脂质体和自组装纳米粒均有缓释作用。（4）荷叶碱脂质体的代谢动力学和组织分布特性评价。脂质体将荷叶碱的口服生物利用提高了2.13倍,增加了荷叶碱在大鼠组织中的含量并降低了大鼠排泄物中荷叶碱的含量,表明脂质体能有效提高荷叶碱的生物利用度。本实验在制备荷叶碱脂质体时,采用添加十二烷基磺酸钠的方法,解决了荷叶碱吸附镶嵌在脂质体表面的问题,相比于采用聚乳酸-羟基乙酸共聚物,添加十二烷基磺酸钠的成本较低,效果显着。通过在无水乙醇中添加肉豆蔻酸异丙酯,显着提升了荷叶碱脂质体的稳定性。较好地解决了在用脂质体包埋荷叶碱时的包埋率和稳定性问题。在大鼠实验中,制备的荷叶碱脂质体也将荷叶碱的口服生物利用度提升了2.13倍,效果显着。在构建荷叶碱自组装纳米粒时,改良原始的溶剂注入法,并添加水溶性维生素E,从而大幅增加了磷脂-壳聚糖自组装纳米粒的包封率。
张琳[7]（2021）在《功能性复合支架构建及其促进创伤修复的研究》文中研究指明组织或器官创伤严重危害了人们的身体健康和生活质量。自体组织/器官移植、药物治疗、手术救治等作为常规的治疗手段,取得了良好的创伤修复效果,但存在免疫反应严重、供体不足、药物副作用大等多种问题。当前,通过功能性支架制备、活性物质联用、细胞活性调节等方式发展的组织工程技术,有效促进了机体的创伤修复。在本论文中,应用组织工程方法成功制备了多种功能性复合支架,在无疤痕皮肤创伤修复、诱导组织再生、骨组织修复等方面取得了良好的治疗效果。全层皮肤创伤的修复过程往往伴随着疤痕的形成,极大地危害了人们的身体和心理健康。皮肤疤痕的产生原因及治疗手段,在临床探索上依然困难重重。本课题组前期研究发现,抗纤维化多肽（AF38pep）具有与整合素相似的功能区域,能竞争性结合纤连蛋白额外结构域A（EDA-FN）,有效阻止EDA-FN与整合素结合后触发的纤维化生物学信号的发生。在本文第一部分,通过京尼平交联,制备了负载AF38pep的羧甲基壳聚糖（CMCS）/γ-聚谷氨酸（γ-PGA）复合水凝胶（HSP）。HSP具有贯通的多孔结构、良好的生物相容性、有效的血液凝结能力和抗菌性;能有效抑制激活的成纤维细胞的增殖及迁移,下调纤维化相关基因与蛋白的表达;HSP快速释放AF38pep的行为,能有效调节皮肤的创伤修复过程,促进表皮和真皮的正常再生,调节胶原纤维的合理分布与成熟,加速炎症反应的消退,促进皮肤附属结构和血管化的生成;通过RNAseq分析发现,HSP有效的无疤痕皮肤再生效果与粘着斑信号（FA）的下调有关。总之,HSP能有效抑制疤痕的产生,促进正常皮肤再生。当前,牙周疾病的发病率在全球范围内持续增加,诱导组织再生（GTR）膜在治疗牙周疾病方面取得了良好的效果,但其存在功能单一、降解速度不适宜、力学性质较差等问题。壳聚糖（CS）具有良好的生物相容性、抑菌性、止血性等多种生物学功能,在创伤修复领域已有广泛应用。在本文第二部分,通过静电纺丝与冷冻干燥相结合的方法,制备了一种结合CS的“类三明治”结构聚己内酯（PCL）/明胶（GEL）纳米纤维复合膜,该复合膜具有均匀的纤维形貌,稳定的三层结构,合适的力学性质;通过调整PCL和GEL的比例,能实现可控的降解速率;该复合膜还具有良好的细胞相容性,能有效提高细胞活性,加速血液凝结;该复合膜在大鼠皮下埋植4 w后,仍具有良好的结构完整性,能有效阻止细胞的浸润。总之,这种结合CS的“类三明治”结构纳米纤维复合膜充分发挥了GTR膜的优势,改善了GTR膜存在的不足,在诱导组织再生领域具有良好的应用潜力。骨缺损修复治疗已成为当前一项巨大的临床挑战。骨组织工程支架的应用为骨修复带来了新的希望,但其存在生物活性低、力学稳定性差、骨诱导效果弱等问题。富血小板纤维蛋白（PRF）是一种从血液中获取的富含多种活性成分的凝胶状物质,具有多种生物学功能,在创伤修复领域已有广泛应用。本文第三部分,通过静电交联的方式,制备了CS/γ-聚谷氨酸（γ-PGA）/纳米羟基磷灰石（n HA）水凝胶（CPH）,将其填充在骨缺损处,能发挥骨引导的作用;通过静电纺丝法制备了PCL/GEL纳米纤维膜（P2G3）,将其贴附在软硬组织交界处,能有效阻止软组织浸润到骨组织;新鲜的PRF作为复合支架的中间层,能长效释放多种生长因子,具有骨诱导效果。此外,该复合支架具有良好的力学性质,有效的矿化活性;均匀稳定的分层结构,有利于个性化定制满足不同创伤部位的需要;良好的生物相容性,较高的细胞成骨诱导能力;能有效促进大鼠颅骨修复与家兔牙槽骨再生。总之,这种结合PRF的三层多功能复合支架,充分发挥了骨诱导、骨引导和骨整合的作用,能有效促进骨修复,在临床治疗骨缺损方面具有良好的应用前景。在本论文中,通过结合多种生物活性物质,制备了不同类型的多功能复合支架,有效促进了机体不同部位的创伤修复。本文所研究的多种复合支架在组织工程领域具有广泛的应用价值,为创伤修复提供了新的研究思路,在未来的临床应用中具有良好的发展前景。
高风坤[8]（2021）在《不同分子量磺化氧化壳聚糖的制备、表征及抗菌性能研究》文中认为壳聚糖由甲壳素脱去乙酰基得到,可从食品加工废弃物虾蟹壳中提取,是自然界唯一的天然碱性多糖。壳聚糖具有多种生物活性,但是其溶解性较差,使得壳聚糖的应用受到很大的限制。为改善壳聚糖的溶解性,本文对壳聚糖进行化学改性,以提高壳聚糖衍生物的溶解性,以小麦赤霉病（Fusarium graminearum）为研究对象,研究了壳聚糖及其衍生物的杀菌活性及其对小麦种子萌发的影响,为壳聚糖在农业领域应用提供技术支持,具体研究内容如下:使用NO2对7种不同分子量壳聚糖进行氧化,将壳聚糖C6位的醇羟基氧化为羧基,得到不同分子量的6-羧基壳聚糖,测定其氧化度,并对6-羧基壳聚糖进行磺化改性,制备出7种分子量的磺化6-羧基壳聚糖。采用X射线衍射仪（XRD）、场发射扫描电子显微镜（FESEM）、傅立叶变换红外光谱（FTIR）、热重、核磁共振谱仪等对样品进行了表征与分析。结果表明6-羧基壳聚糖的氧化度随着壳聚糖分子量的升高而增加,氧化度分别为18.28%,24.26%,32.85%,3 5.2 4%,3 9.9 4%,4 7.6 5%,5 3.5 9%。6-羧基壳聚糖的热稳定性相较壳聚糖变差,但将醇羟基氧化为羧基并未改变壳聚糖晶体无定型结构,磺化改性后使得结晶度变差。研究了6-羧基壳聚糖及磺化6-羧基壳聚糖在不同溶剂中的溶解性,结果表明6-羧基壳聚糖微溶于DMSO、苯、吡啶和氢氧化钠溶液中,可溶于水、稀乙酸中,分子量越大,溶解性越好。磺化6-羧基壳聚糖微溶于DMSO、DMF、苯和吡啶中,可溶于水、氢氧化钠和稀乙酸溶液中。磺化6-羧基壳聚糖溶解性优于6-羧基壳聚糖。研究了改性后壳聚糖及其衍生物的抗菌活性和对小麦种子萌发活性的影响。结果表明,与对照相比,6-羧基壳聚糖具有较好的抗菌活性,浓度越大,抑菌率越高,其中40 k Da分子量6-羧基壳聚糖的抗菌性能最好,EC50为581.68μg/mL。磺化6-羧基壳聚糖对小麦赤霉菌的抑制作用与浓度无线性关系,所有测定浓度均具有一定的抗菌活性。壳聚糖在酸性p H下,浓度为100μg/mL时抗菌活性最好。此外,壳聚糖、6-羧基壳聚糖的各个浓度都能提高小麦种子的发芽势、发芽率。
刘亦伦[9]（2021）在《壳聚糖/藻酸盐微凝胶包载双歧杆菌联合小分子PD-L1抑制剂对原位直肠癌的抗肿瘤研究》文中研究表明背景:随着癌症研究的不断深入和发展,免疫疗法,尤其是其中的免疫检查点抑制（Immune checkpoint blockade,ICB）疗法已经被证实在包括结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）在内的多种实体肿瘤的治疗中展现了显着的效果。然而,ICB疗法的有效性受到不同患者免疫应答的差异性和对肿瘤类型的敏感性的限制。因此,可以说真正可以从免疫疗法的治疗过程中获得益处的患者只是一小部分。然而随后的研究发现这种ICB疗法的限制性在某种程度上与人体内肠道细菌的数量与组分息息相关,即通过调控人体肠道内的菌群构成以及菌群数量可有望改善这种限制性。因此,肠道菌群与ICB疗法的联合应用受到了国内外广大学者的关注。传统的将细菌递送至体内的方式大致可以分为:静脉给药、灌注给药（肛门/尿道）、腹腔注射给药与口服给药等。相比于口服给药而言,注射的方式很可能会导致细菌进入血液,并随即造成如菌血症等一系列严重感染类疾病;而灌注给药的方式会降低患者的依从性。因此,口服给药可以说是目前患者依从性最高、方便性、安全性等最好的细菌递送方式。然而,由于胃的强酸性环境和肠道中胆汁盐的存在,直接将细菌经口腔递送会导致十分严重的细菌活性损失。因此,选择具有抗酸性,具有pH响应性释放特性的生物材料将这些细菌包封并制作成微胶囊是减少胃肠道通过期间细菌死亡并控制这些细菌在肠道中释放的有效的方法。目的:本研究选择双歧杆菌作为研究对象,为了更详细的了解这一细菌家族的特性与功能,从其亚种层面选择了长双歧杆菌、短双歧杆菌以及青春双歧杆菌分别进行研究。并制备了壳聚糖/藻酸盐微凝胶作为细菌载体用以递送双歧杆菌,从而在胃部保护细菌免受胃酸侵蚀,在到达结肠肠道后裂解并释放出包载的双歧杆菌。并且进一步将双歧杆菌微凝胶与小分子程序性细胞死亡配体1（Programmed cell death ligand 1,PD-L1）抑制剂联合应用,在Bal/bc小鼠原位直肠癌模型中从分泌物质以及免疫水平研究其抗肿瘤功效。我们分别从体外水平和动物体内水平对上述体系进行了探究。方法:在体外水平上,通过细菌菌液24 h MTT实验、菌液pH检测以及菌液短链脂肪酸（Short-chain fatty acid,SCFA）组分检测实验,对三种双歧杆菌菌液对肿瘤细胞抑制效果以及菌液性质、SCFA组分进行探究。微凝胶制备后,在体外水平上通过显微镜观察、共聚焦激光显微镜（confocal laser scanning microscope,CLSM）进行活死染色实验、扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope,SEM）观察以及初始微凝胶内细菌计数实验表征了微凝胶的外观及包载效率;随后通过微凝胶置于模拟胃液（Simulated gastric fluid,SGF）（37℃,2h）、模拟肠液（Simulated intestinal fluid,SIF）（37℃,直至破裂）体外模拟消化过程,并在这一过程中随时间推移检测细菌存活数和细菌释放数以绘制曲线,并计算微凝胶溶胀率与破裂率。在动物体内水平上,为了更加真实的模拟肿瘤生长环境,我们选择CT-26小鼠结肠癌细胞于Bal/bc小鼠直肠粘膜下构建原位直肠癌动物模型,于种瘤后14 d开始治疗,并记作D0。分别于D0,D5,D10,D15和D20采用小动物活体成像仪器观察小鼠体内肿瘤生长情况,同时于D0,D7及D14灌胃递送双歧杆菌微凝胶,对于联合治疗研究实验则在此基础上辅以腹腔注射的PD-L1小分子抑制剂,于D0,D4,D8,D12及D16给药。通过肿瘤解剖拍照、肿瘤称重、活体成像实验,对比治疗产生的肿瘤抑制效果。随即通过小鼠体重测量、肝功肾功检测验证治疗方案的生物安全性。而流式细胞术、肿瘤相关细胞因子以及分别SCFA检测则分别从免疫水平和分泌代谢水平分别检测了治疗所产生的抗肿瘤效果。此外,通过HE染色、Caspase-3、Ki67免疫荧光染色来探究肿瘤组织内部的坏死、增殖及凋亡状况。通过肿瘤组织PD-L1蛋白免疫荧光染色以及肿瘤远端、近端直肠粘膜双歧杆菌RNA Scope技术,我们对各实验组肿瘤内PD-L1含量进行了检测以研究双歧杆菌和PD-L1抑制剂的相互作用;同时,RNA Scope检测结果可以揭示肠道内双歧杆菌的分布情况,以研究双歧杆菌的聚集分布特征。结果:在体外水平上,我们通过对三种双歧杆菌菌液性质、成分的研究初步证实了三种双歧杆菌的菌液可以抑制CT-26小鼠结肠癌肿瘤细胞的生长,并证实了三种双歧杆菌的乙酸分泌功能。体外层面对制备的微凝胶相关表征证实了包载方案不会影响细菌的活性,可以高效对双歧杆菌进行包载。并且壳聚糖/藻酸盐微凝胶可以有效保护双歧杆菌免受胃酸的侵蚀,具有良好的包载性能以及高效的递送性能。相比于游离细菌在SGF中几乎全部死亡,微凝胶在体外模拟过程中可以在保护双歧杆菌18 h后完全破裂,以保证细菌安全的到达结肠部位,具有很好的细菌递送性能。而在体内动物模型上,相关实验证实了三种双歧杆菌单独使用可以抑制肿瘤的生长,而当其与PD-L1抑制剂联合使用时该效果会进一步加强。并且,我们证实了双歧杆菌微凝胶以及PD-L1小分子抑制剂均不会在体内产生明显的毒性,具有良好的生物安全性。而流式细胞术、肿瘤相关细胞因子以及粪便SCFA检测则分别从免疫水平和分泌代谢水平证实了治疗方案促进抗肿瘤免疫水平并且引起体内丁酸盐（抗肿瘤物质）的增多。随后通过HE染色、Caspase-3、Ki67免疫荧光染色证实了该治疗方案抑制肿瘤的增殖且促进肿瘤细胞内的坏死及凋亡。通过肿瘤组织PD-L1蛋白免疫荧光染色以及肿瘤远端、近端直肠粘膜双歧杆菌RNA Scope技术证实了双歧杆菌可以促进PD-L1的高表达进而提高PD-L1抑制剂的疗效,并且双歧杆菌在结肠内的分布具有一定程度的肿瘤周围聚集情况,具有一定的肿瘤靶向性。结论:1.我们通过表面涂层法制备的具有壳核结构的壳聚糖/藻酸盐微凝胶作为双歧杆菌的细菌微载体在制备途中可以保持绝大多数细菌的活性,并可以分别在SGF与SIF环境下对细菌起到明显的保护作用,在本研究中最多可以维持18h后方才完全破裂。该包载方案保证了细菌安全,高效的到达结肠部位,具有很好的细菌递送性能。2.从动物水平上,我们构建了小鼠原位直肠癌模型,研究双歧杆菌微凝胶单独使用或联合PD-L1小分子抑制剂的抗肿瘤效果。实验结果证实了每种双歧杆菌微凝胶均具备一定程度的抗肿瘤功效,以长双歧杆菌组尤为明显,并且与PD-L1抑制剂联合会进一步提高抗肿瘤效果。其抗肿瘤功效表现在免疫细胞水平变化、抗肿瘤相关细胞因子的增多以及细菌的抗肿瘤代谢产物。同时,其二者的联合应用存在内部关联并具备良好的生物安全性。3.体内相关实验证实了小分子PD-L1抑制剂的抗肿瘤效果,其功效与目前应用于实验或临床的单克隆抗体类免疫检查点阻滞剂（immune checkpoint inhibitors,ICIs）相近。而由于小分子 ICIs 具有价格低廉、吸收性好等优势可以更好的推广使用。而本研究的结果为目前较少使用的小分子类ICIs的功效做出了一定程度的证实。综上所述,三种双歧杆菌微凝胶单独或分别联合PD-L1小分子抑制剂用于原位直肠癌动物模型的治疗能够有效抑制肿瘤生长,并从分泌物层面以及免疫调控层面对肿瘤组织产生杀伤作用。可以明显抑制肿瘤增殖,促进肿瘤的凋亡,具有良好的生物安全性以及推广价值。同时,双歧杆菌微凝胶与PD-L1抑制剂还存在着内在关联,有着联合应用的理论基础,能够为肿瘤治疗提供新的思路。
郭芳[10]（2021）在《冰温技术结合生物保鲜剂对中国对虾品质的影响》文中研究指明中国对虾,是我国分布十分广泛的一种水产品,因为其营养价值高且味道鲜美而深受国内外大众的喜爱。但由于其自身蛋白、水分含量较高,捕捞后又因微生物、内源酶以及化学作用极易腐败变质,限制了中国对虾的贮藏运输及加工产业的发展。传统的中国对虾贮藏方式虽然操作简便,成本低廉,却会造成中国对虾的营养及风味流失,影响食用价值。因此,需要开发一种新型保鲜技术来解决这一难题,以延长其货架期,来满足消费者和加工企业对于中国对虾的各种需要。目前,冰温技术作为第三代低温保鲜技术因具有可行性强及保鲜品质好等优点而成为热点研究方向,已被广泛应用于肉制品保鲜过程中。壳聚糖涂膜保鲜作为一种无毒且有效的新型保鲜技术,正在受到越来越多的关注,现在对于其保鲜研究主要集中于鱼类产品及特定鱼种中,缺乏对甲壳类水产品的研究,且两种保鲜技术相结合对甲壳类水产品贮藏品质的影响也有待进一步研究。本实验以中国对虾为原料,研究冰温技术结合生物保鲜剂对其贮藏品质的影响,从蛋白变性与降解、气味滋味变化等方面初步探讨该技术对中国对虾品质保持的内在原因,旨在为中国对虾及甲壳类水产品的贮藏、保鲜和品质控制提供一定的理论基础和参考。主要研究结果如下:（1）采用温度测量探针确定中国对虾的冰点温度,通过监测感官、理化、微生物指标比较了冰温与冷藏条件下中国对虾品质变化规律。结果表明:中国对虾的冰点温度约为（-2.2±0.1）℃;冷藏组的菌落总数（TVC）、挥发性盐基氮含量（TVB-N）、硫代巴比妥酸（TBARS）和汁液流失率等指标均高于冰温组;冷藏组感官评分低于冰温组;色差与质构特性（硬度、弹性、胶黏性、咀嚼性）也展现出不同的变化,冰温组的a*值、b*值和L*值与新鲜样品更为接近,硬度、弹性、胶黏性和咀嚼性更好;冷藏组的货架期为5 d-6 d,而冰温组的货架期达到8 d-10 d。冰温组在贮藏中后期出现了感官品质的劣变,说明冰温贮藏技术的保鲜效果仍需进行下一步研究。（2）为了进一步改善中国对虾在冰温条件下的贮藏品质情况,研究了壳聚糖复合涂膜结合冰温保鲜技术对中国对虾贮藏期间品质的影响变化情况。结果表明:当到达贮藏末期时,壳聚糖复合涂膜的中国对虾硫代巴比妥酸（TBARS）值较空白对照组下降约40%,中国对虾的脂肪氧化得到显着抑制;此外,其样品p H值、菌落总数（TVC）、挥发性盐基氮含量（TVB-N）、汁液流失率上升均缓慢,色差、感官评价与化学指标变化幅度更小;水分分布与质构特性变化也进一步发现壳聚糖复合涂膜能有效抑制虾体品质劣变。（3）以中国对虾基本营养成分、蛋白质功能特性、蛋白质变性及降解情况和肌肉组织结构的变化等为测定指标,研究了壳聚糖复合涂膜结合冰温技术对中国对虾质构特性保持的作用机制。结果表明:中国对虾体内的蛋白质含量为22.35%;蛋白质生化特性分析显示壳聚糖复合涂膜处理可以使中国对虾冰温贮藏期内肌动球蛋白的盐溶性、巯基含量和Ca2+-ATP活性上升速率得以延缓,有效控制蛋白质变性;SDS-PAGE凝胶电泳显示壳聚糖复合涂膜可以抑制蛋白质的降解;肌肉组织微观结构（MFI）出现变化,肌节间隙变大,肌肉组织面积的比例减小程度也低于单一涂膜组与空白对照组,表明虾体新鲜度处于较好状态。（4）通过测定中国对虾的风味感官评价及其气味与滋味分析,研究了壳聚糖复合涂膜结合冰温技术对中国对虾其保持作用的效果及机制。结果表明:壳聚糖复合涂膜的风味感官评分下降速度最慢。电子鼻分析发现,在Loading分析中,传感器R（7）W1W贡献率最大,R（2）W5S次之,而R（9）W2W和R（4）W6S两者贡献率相似。在主成分分析（PCA）和线性判别法（LDA）及雷达图分析表明到达贮藏末期时,壳聚糖复合组的气味特性与新鲜样品最为相似,可以有效维持其固有风味。此外,电子舌结果也显示滋味的变化主要由第一主成分贡献,各组滋味在0 d～4d内变化较小,随着贮藏时间的延长,鲜味与咸味出现不同变化趋势。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 多糖水凝胶概述 |
| 1.2 水凝胶粘弹性对细胞行为的影响 |
| 1.2.1 刚度 |
| 1.2.2 应力松弛 |
| 1.2.3 蠕变 |
| 1.2.4 耗散能 |
| 1.3 3D生物打印水凝胶的粘弹性特征 |
| 1.3.1 粘度与剪切变稀 |
| 1.3.2 溶胶-凝胶转变 |
| 1.3.3 屈服应力 |
| 1.3.4 凝胶-溶胶转变与自愈合 |
| 1.3.5 抗蠕变 |
| 1.4 水凝胶的3D打印性分析 |
| 1.4.1 微观结构分析 |
| 1.4.2 结合流变学参数分析 |
| 1.5 生物活性水凝胶在组织修复领域的应用 |
| 1.5.1 软骨损伤修复 |
| 1.5.2 皮肤创伤修复 |
| 1.6 本文研究意义和主要内容 |
| 2 胶束增强/增韧透明质酸水凝胶及其软骨修复研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与材料 |
| 2.2.2 分子修饰与水凝胶制备 |
| 2.2.3 分子与水凝胶的结构和性能表征 |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 甲基丙烯酰化透明质酸与丙烯酰化F127 的结构分析 |
| 2.3.2 胶束交联透明质酸水凝胶的制备与粘弹性 |
| 2.3.3 胶束交联透明质酸水凝胶的压缩力学性能与溶胀分析 |
| 2.3.4 DMSO/H_2O凝胶的溶胀行为与微结构 |
| 2.3.5 DMSO/H_2O对水凝胶粘弹性与力学性能的影响 |
| 2.3.6 水凝胶的体外降解与细胞相容性 |
| 2.3.7 水凝胶的皮下植入相容性 |
| 2.3.8 水凝胶原位诱导喉软骨创伤修复 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 酰腙键和亲疏水组装的透明质酸/胶束水凝胶及其软骨修复研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与材料 |
| 3.2.2 分子修饰与水凝胶制备 |
| 3.2.3 分子与水凝胶的结构与性能表征 |
| 3.2.4 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 功能化透明质酸分子的结构分析 |
| 3.3.2 不含胶束动态网络的凝胶化特征 |
| 3.3.3 含胶束动态网络的凝胶化特征 |
| 3.3.4 胶束与透明质酸的相互作用 |
| 3.3.5 动态水凝胶的挤出注射与3D打印 |
| 3.3.6 水凝胶三维负载细胞的相容性 |
| 3.3.7 水凝胶皮下植入相容性 |
| 3.3.8 水凝胶原位诱导膝关节软骨创伤修复 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 微凝胶组装的甲基丙烯酰化壳聚糖/聚乙烯醇水凝胶墨水 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂与材料 |
| 4.2.2 材料修饰与微凝胶制备 |
| 4.2.3 分子与微凝胶的结构与性能表征 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 甲基丙烯酰化壳聚糖的结构分析 |
| 4.3.2 微凝胶的制备与结构表征 |
| 4.3.3 微凝胶的屈服流动与蠕变恢复 |
| 4.3.4 微凝胶墨水的挤出流动模拟与3D打印 |
| 4.3.5 水凝胶诱导细胞聚集生长 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 甲基丙烯酰化壳聚糖/聚乙烯醇梯度水凝胶及其皮肤修复研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与材料 |
| 5.2.2 梯度水凝胶制备 |
| 5.2.3 梯度水凝胶的结构与性能表征 |
| 5.2.4 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 梯度水凝胶的制备与刚度分析 |
| 5.3.2 梯度水凝胶对细胞聚集生长的影响 |
| 5.3.3 皮下埋植水凝胶的组织相容性 |
| 5.3.4 水凝胶修复全层皮肤创伤 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 展望 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果 |
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 J亚群禽白血病病毒(ALV-J)研究进展 |
| 1.1 ALV-J流行病学特点 |
| 1.2 ALV的理化特征与基因结构特点 |
| 1.2.1 形态学特征 |
| 1.2.2 ALV的理化特性 |
| 1.2.3 ALV基因结构 |
| 1.3 ALV的复制 |
| 1.4 ALV-J的致瘤特点 |
| 1.5 ALV-J致病性及危害 |
| 1.6 ALV-J的检测和诊断 |
| 1.6.1 血清学检测 |
| 1.6.2 免疫荧光技术(IFA) |
| 1.6.3 免疫组化技术 |
| 1.6.4 病毒基因检测 |
| 1.7 ALV-J的防控 |
| 1.7.1 免疫接种 |
| 1.7.2 药物治疗 |
| 1.7.3 种群净化措施 |
| 2 松花粉概述 |
| 3 多糖 |
| 3.1 多糖提取方法 |
| 3.1.1 经典法 |
| 3.1.2 超声波法 |
| 3.1.3 酶法 |
| 3.1.4 其他方法 |
| 3.2 多糖分离纯化 |
| 3.2.1 分级沉淀 |
| 3.2.2 柱分离 |
| 3.2.3 膜分离 |
| 3.3 多糖的生理功能 |
| 3.3.1 抗肿瘤作用 |
| 3.3.2 免疫增强作用 |
| 3.3.3 抗病毒作用 |
| 3.3.4 其他功能 |
| 4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 松花粉多糖抗ALV-J活性单体分离鉴定及构效关系研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞与病毒 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 仪器与设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 马尾松花粉粗多糖提取 |
| 2.1.1 花粉除脂 |
| 2.1.2 多糖提取纯化 |
| 2.1.3 苯酚-硫酸法测定多糖含量 |
| 2.2 单体多糖分离纯化 |
| 2.3 单体多糖活性体外评价 |
| 2.3.1 细胞复苏及培养 |
| 2.3.2 细胞毒性试验 |
| 2.3.3 体外抗病毒活性 |
| 2.3.3.1 病毒TCID_(50)的测定 |
| 2.3.3.2 ELISA法检测细胞上清p27 抗原 |
| 2.3.3.3 qPCR方法检测病毒拷贝量 |
| 2.4 多糖及单体组分表征 |
| 2.4.1 单体多糖分子量测定 |
| 2.4.2 单体多糖红外光谱表征 |
| 2.4.3 单体多糖单糖组成测定 |
| 2.4.4 单体多糖三螺旋结构测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 脱蛋白纯化表征 |
| 3.2 总多糖提取条件筛选 |
| 3.3 单体多糖的分离纯化 |
| 3.4 不同pH条件下单体多糖提取效率比较 |
| 3.5 细胞毒性试验 |
| 3.6 多糖组分体外抗病毒活性评价 |
| 3.6.1 多糖组分对p27 抗原表达的影响 |
| 3.6.2 qPCR方法检测多糖组分病毒拷贝量 |
| 3.7 单体多糖分子量及其分布 |
| 3.8 单体多糖红外光谱分析 |
| 3.9 单糖组成的测定 |
| 3.10 单糖组成相对含量 |
| 3.11 三螺旋结构的测定 |
| 3.12 NaOH处理PPP-2 抗病毒活性研究 |
| 4 讨论 |
| 第三章 松花粉多糖壳聚糖纳米药物制备及抗ALV-J活性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞、病毒与动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 仪器与设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 松花粉多糖壳聚糖纳米药物(CS-PPPs NPs)制备 |
| 2.1.1 壳聚糖空白纳米药物(CS NPs)制备 |
| 2.1.2 载药纳米药物(CS-PPPs NPs)制备 |
| 2.2 CS-PPPs NPs体外表征 |
| 2.2.1 透射电镜表征 |
| 2.2.2 粒径及分布表征 |
| 2.2.3 包封率测定 |
| 2.2.4 载药量测定 |
| 2.2.5 体外释放试验 |
| 2.3 CS-PPPs纳米药物体外评价 |
| 2.3.1 细胞毒性试验 |
| 2.3.2 细胞荧光标记试验 |
| 2.3.3 体外抗病毒活性试验 |
| 2.4 纳米药物体内评价 |
| 2.4.1 纳米药物体内代谢行为研究 |
| 2.4.2 ALV-J体内感染模型建立及分组 |
| 2.4.3 泄殖腔排毒监测 |
| 2.4.4 大体剖检 |
| 2.4.5 组织病理观察 |
| 2.4.6 mRNA水平检测血浆病毒载量 |
| 2.4.7 免疫器官指数 |
| 2.4.8 白细胞检测 |
| 2.4.9 外周血淋巴细胞转换率(LTR)测定 |
| 2.4.10 血清中IL-2和IFN-γ分泌量测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 流出曲线图 |
| 3.2 制备工艺筛选 |
| 3.2.1 壳聚糖浓度筛选 |
| 3.2.2 TPP比例筛选 |
| 3.2.3 多糖占壳聚糖浓度筛选 |
| 3.3 体外释放试验 |
| 3.4 纳米药物体外评价 |
| 3.4.1 纳米药物细胞毒性试验 |
| 3.4.2 体外荧光标记 |
| 3.4.3 体外抗病毒活性试验 |
| 3.5 纳米药物体内试验 |
| 3.5.1 纳米药物体内代谢行为研究 |
| 3.5.2 临床症状 |
| 3.5.3 泄殖腔排毒监测 |
| 3.5.4 大体剖检 |
| 3.5.5 组织病理观察 |
| 3.5.6 纳米药物对ALV-J在鸡体复制的影响 |
| 3.5.7 免疫器官指数 |
| 3.5.8 白细胞检测 |
| 3.5.9 纳米药物对感染ALV-J鸡外周血淋巴细胞转换率测定 |
| 3.5.10 纳米药物对感染ALV-J鸡外周血中细胞因子浓度影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 基于抗体靶向的壳聚糖纳米药物递送系统增强松花粉多糖抗ALV-J活性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞、病毒与动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 仪器与设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 基于抗体靶向的松花粉多糖壳聚糖纳米药物(Ab-CS-PPPs NPs)制备 |
| 2.1.1 壳聚糖抗体(Ab-CS)复合物的制备 |
| 2.1.2 Ab-CS-PPPs NPs制备 |
| 2.2 Ab-CS-PPPs NPs理化表征 |
| 2.2.1 红外光谱表征 |
| 2.2.2 透射电镜(TEM)表征 |
| 2.2.3 粒径及分布表征 |
| 2.2.4 包封率及载药量测定 |
| 2.2.5 体外释放试验 |
| 2.3 Ab-CS-PPPs NPs体内外ALV-J靶向试验 |
| 2.3.1 Ab-CS-PPPs NPs细胞靶向研究 |
| 2.3.2 Ab-CS-PPPs NPs体内靶向组织分布研究 |
| 2.3.3 Ab-CS-PPPs NPs体内靶器官抑制ALV-J复制研究 |
| 2.4 Ab-CS-PPPs NPs毒理及代谢研究 |
| 2.4.1 细胞毒性研究 |
| 2.4.2 Ab-CS-PPPs NPs体内代谢研究 |
| 2.5 Ab-CS-PPPs NPs体内外抗病毒活性研究 |
| 2.5.1 Ab-CS-PPPs NPs体外抗病毒活性表征 |
| 2.5.2 ALV-J体内感染模型建立及分组 |
| 2.5.3 泄殖腔排毒监测 |
| 2.5.4 大体剖检及组织病理观察 |
| 2.5.5 血浆病毒载量检测 |
| 2.6 Ab-CS-PPPs NPs缓解ALV-J免疫抑制研究 |
| 2.6.1 免疫器官指数 |
| 2.6.2 白细胞及外周血淋巴细胞转换率(LTR)测定 |
| 2.6.3 血清中IL-2和IFN-γ分泌量测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 Ab-CS-PPPs NPs理化表征 |
| 3.1.1 Ab-CS复合物制备及红外表征 |
| 3.1.2 Ab-CS-PPPs NPs粒径、包封率及载药量表征 |
| 3.1.3 Ab-CS-PPPs NPs形态及粒径表征 |
| 3.1.4 体外释放试验 |
| 3.2 Ab-CS-PPPs NPs体内外ALV-J靶向试验 |
| 3.2.1 Ab-CS-PPPs NPs细胞靶向研究 |
| 3.2.2 Ab-CS-PPPs NPs体内靶向组织分布研究 |
| 3.2.3 Ab-CS-PPPs NPs体内靶器官抑制ALV-J复制研究 |
| 3.3 Ab-CS-PPPs NPs毒理及代谢研究 |
| 3.3.1 Ab-CS-PPPs NPs细胞毒性试验 |
| 3.3.2 Ab-CS-PPPs NPs体内代谢行为研究 |
| 3.4 Ab-CS-PPPs NPs体内外抗病毒活性研究 |
| 3.4.1 体外抗病毒活性 |
| 3.4.2 临床症状 |
| 3.4.3 泄殖腔排毒监测 |
| 3.4.4 大体剖检 |
| 3.4.5 组织病理观察 |
| 3.4.6 血浆病毒载量 |
| 3.5 Ab-CS-PPPs NPs缓解ALV-J免疫抑制研究 |
| 3.5.1 免疫器官指数 |
| 3.5.2 白细胞检测 |
| 3.5.3 抗体纳米药物对感染ALV-J鸡外周血LTR测定 |
| 3.5.4 纳米药物对感染ALV-J鸡外周血中细胞因子浓度测定 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 简写对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌简介 |
| 1.2 纳豆激酶的研究进展 |
| 1.2.1 纳豆激酶的酶学性质 |
| 1.2.2 纳豆激酶的功能及其应用前景 |
| 1.2.3 纳豆激酶与其它溶栓药物的比较及其溶栓优势 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌凝乳酶的研究进展 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌在发酵食品及益生菌制剂中的应用 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌对肠道菌群的调节作用和在医药保健领域的应用 |
| 1.5.1 肠道菌群及肠道菌群失调相关疾病 |
| 1.5.2 炎症性肠病的发病机制及治疗方法的研究进展 |
| 1.6 立题背景和研究意义 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第二章 产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株的分离、筛选及鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 主要试剂与材料 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 培养基配方 |
| 2.3.2 纤维蛋白溶解酶纤溶活力测定方法 |
| 2.3.3 凝乳酶活力测定方法 |
| 2.3.4 产纳豆激酶和凝乳酶双酶菌株的筛选及鉴定 |
| 2.3.5 产双酶菌株菌株的鉴定 |
| 2.3.6 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长特征检测 |
| 2.3.7 B.subtilis JNFE0126 株菌发酵液凝乳酶和纤溶酶活性的动态检测 |
| 2.3.8 B.subtilis JNFE0126 菌株产双酶能力的遗传稳定性测定 |
| 2.3.9 B.subtilis JNFE0126 菌株保藏 |
| 2.3.10 酶抑制剂抑制试验分析纤溶酶和凝乳酶的类型 |
| 2.3.11 B.subtilis JNFE0126 菌株的两种酶基因的PCR扩增和测序 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 产双酶(纳豆激酶和凝乳酶)菌株的筛选 |
| 2.4.2 B.subtilis nk1 菌株的鉴定 |
| 2.4.3 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长和产酶特性 |
| 2.4.4 蛋白酶抑制剂实验分析纤溶酶和凝乳酶类型 |
| 2.4.5 B.subtilisJNFE0126 的纳豆激酶和M4 金属蛋白酶基因PCR扩增和测序结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌产发酵液中纳豆激酶和凝乳酶的分离纯化及酶学性质研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 培养基 |
| 3.3.2 B.subtilis JNFE0126 菌株的活化 |
| 3.3.3 纳豆激酶、凝乳酶粗酶液的制备 |
| 3.3.4 蛋白质浓度的测定—Bradford检测法 |
| 3.3.5 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.3.6 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.3.7 纳豆激酶的酶学性质研究 |
| 3.3.8 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.4.2 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.4.3 纯化酶的SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.4.4 纳豆激酶的酶学性质 |
| 3.4.5 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4.6 纯化凝乳酶的凝乳效果及其潜在应用价值 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌发酵乳的研制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 主要试剂与材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 发酵乳制备方法 |
| 4.3.2 单因素实验和正交试验 |
| 4.3.3 发酵乳理化指标测定 |
| 4.3.4 发酵乳感官评定 |
| 4.3.5 发酵乳储藏过程中的品质变化观察 |
| 4.3.6 发酵乳的微观结构观察 |
| 4.3.7 发酵乳动物体内抗血栓作用 |
| 4.3.8 试验数据统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 单因素试验优化发酵乳配方和发酵条件 |
| 4.4.2 采用正交试验确定发酵乳最适发酵条件 |
| 4.4.3 正交试验确定稳定剂配方 |
| 4.4.4 发酵过程中菌量、p H和酶活的变化 |
| 4.4.5 发酵乳总蛋白和总糖含量 |
| 4.4.6 发酵乳感官评定结果 |
| 4.4.7 发酵乳的流变学特性 |
| 4.4.8 发酵乳的持水力和质构测定结果 |
| 4.4.9 发酵乳的微观凝胶结构 |
| 4.4.10 发酵乳储藏过程中的品质变化: |
| 4.4.11 小鼠黑尾模型验证发酵乳体内抗血栓效果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌发酵乳预防和治疗炎症性肠病 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 主要试剂与材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的制备及其CFU计数和革兰氏染色 |
| 5.3.2 DSS诱导性炎症性肠病动物模型的建立和动物分组 |
| 5.3.3 模型小鼠疾病活动指数(DAI)的测定 |
| 5.3.4 小肠和结肠的组织学切片观察和组织学评分 |
| 5.3.5 免疫组织化学染色 |
| 5.3.6 Western blotting检测蛋白表达水平 |
| 5.3.7 肠道菌群分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的外观、CFU计数及其Gram’s染色 |
| 5.4.2 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对DSS诱导性炎症性肠病动物DAI的影响 |
| 5.4.3 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对小肠和结肠病理变化的影响 |
| 5.4.4 枯草芽孢杆菌发酵乳对白细胞浸润和炎症因子、抗炎因子表达的影响 |
| 5.4.5 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对Lgr-5,CDX-2,Mucin-2 表达水平的影响 |
| 5.4.6 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对ZO1和Villin表达水平的影响 |
| 5.4.7 口服发酵乳对DSS诱导的IBD模型小鼠肠道菌群的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 纳豆激酶缓释颗粒的研制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料和设备 |
| 6.2.1 主要试剂与材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 缓释颗粒原材料的各种反应体系内纳豆激酶纤溶活性测定 |
| 6.3.2 双层壳-核结构的纳豆激酶缓释颗粒的设计和构建 |
| 6.3.3 纳豆激酶缓释颗粒的粒径和zeta电位测定 |
| 6.3.4 装载纳豆激酶和模型药物的缓释颗粒微观结构的显微镜观察 |
| 6.3.5 纳豆激酶缓释颗粒在储藏过程中的纤溶活性的动态测定 |
| 6.3.6 模拟消化液对缓释颗粒纤溶活性的影响 |
| 6.3.7 模拟消化液对缓释颗粒粒径、ζ-电位和表面结构的影响 |
| 6.3.8 荧光标记模拟药物(Ig G)缓释颗粒口服后在小鼠消化道内分布情况分析 |
| 6.3.9 口服纳豆激酶缓释颗粒后小鼠肠道内的活性酶的释放和吸收试验 |
| 6.3.10 口服纳豆激酶缓释颗粒对模型小鼠血栓治疗效果的评价 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 纳豆激酶缓释颗粒的设计与构建 |
| 6.4.2 颗粒双层壳-核结构的鉴定与验证 |
| 6.4.3 纳豆激酶缓释颗粒保藏过程中酶活的变化 |
| 6.4.4 缓释颗粒中纳豆激酶的体外释放特性 |
| 6.4.5 双层壳-核结构缓释颗粒所装载模型药物口服后在体内的释放 |
| 6.4.6 口服纳豆激酶缓释颗粒对黑尾模型小鼠的血栓治疗效果 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文的主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 根皮素功能研究进展 |
| 1.1.1 二氢查耳酮类化合物 |
| 1.1.2 根皮素的结构及性质 |
| 1.1.3 根皮素的生物学功效 |
| 1.2 根皮素的增溶方法研究进展 |
| 1.2.1 增溶方法分类 |
| 1.2.2 化学修饰法 |
| 1.2.3 物理修饰法 |
| 1.3 纳米粒子 |
| 1.3.1 纳米粒子的概述 |
| 1.3.2 大豆卵磷脂 |
| 1.3.3 壳聚糖 |
| 1.3.4 大豆卵磷脂-壳聚糖纳米粒子 |
| 1.3.5 冻干保护剂 |
| 1.4 糖尿病研究进展 |
| 1.4.1 糖尿病概述 |
| 1.4.2 糖尿病药物治疗研究进展 |
| 1.4.3 糖尿病肾病的研究现状 |
| 1.5 本文研究的依据、意义和主要内容 |
| 第二章 大豆卵磷脂-壳聚糖纳米粒子的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料试剂及仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 HPLC分析 |
| 2.3.2 根皮素标准曲线的绘制 |
| 2.3.3 SL-CS NPs的制备 |
| 2.3.4 粒径、PDI与Zeta电位的测定 |
| 2.3.5 EE的计算 |
| 2.3.6 单因素实验 |
| 2.3.7 SL-CS NPs制备工艺优化 |
| 2.3.8 正交实验验证 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 Pht标准曲线 |
| 2.4.2 单因素实验结果 |
| 2.4.3 SL-CS NPs制备工艺优化结果 |
| 2.4.4 正交实验验证结果 |
| 2.5 本章结论 |
| 第三章 负载根皮素大豆卵磷脂-壳聚糖纳米粒子的制备与表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料试剂及仪器 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 Pht-SL-CS NPs的制备 |
| 3.3.2 Pht浓度对粒径、PDI的影响 |
| 3.3.3 Pht浓度对EE、LE的影响 |
| 3.3.4 负载根皮素的纳米粒子制备工艺的重复性考察及粒径分布 |
| 3.3.5 Pht-SL-CS NPs冻干品的制备 |
| 3.3.6 傅里叶变换红外光谱(FTIR) |
| 3.3.7 X射线衍射(XRD) |
| 3.3.8 纳米粒子的外观形态和微观形态分析 |
| 3.3.9 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Pht浓度对粒径、PDI的影响 |
| 3.4.2 Pht浓度对EE及LE的影响 |
| 3.4.3 傅里叶红外变换光谱分析 |
| 3.4.4 X射线衍射分析 |
| 3.4.5 外观形态和透射电镜分析 |
| 3.4.6 纳米粒子制备工艺的重复性考察及粒径分布 |
| 3.5 本章结论 |
| 第四章 根皮素纳米粒子冻干保护剂的选择及性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料试剂及仪器 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 根皮素纳米粒子复溶稳定性的研究 |
| 4.3.2 冻干保护剂的选择 |
| 4.3.3 根皮素纳米粒子贮藏稳定性的研究 |
| 4.3.4 根皮素纳米粒子生物可及度的研究 |
| 4.3.5 α-葡萄糖苷酶抑制活性反应体系酶浓度的确定 |
| 4.3.6 Pht及阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性 |
| 4.3.7 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 不同冻干保护剂对纳米粒子复溶稳定性的影响 |
| 4.4.2 根皮素纳米粒子贮藏稳定性的分析 |
| 4.4.3 生物可及度的分析 |
| 4.4.4 反应体系酶浓度的确定 |
| 4.4.5 Pht及阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 |
| 4.5 本章结论 |
| 第五章 根皮素纳米粒子对糖尿病大鼠的肾脏保护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料试剂及仪器 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 材料与试剂 |
| 5.2.3 仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 造模方法 |
| 5.3.2 分组与给药方式 |
| 5.3.3 生长状况检测 |
| 5.3.4 脏器系数 |
| 5.3.5 肾功能指标检测 |
| 5.3.6 肾脏组织病理观察 |
| 5.3.7 肾脏组织纤维化观察 |
| 5.3.8 肾脏组织抗氧化能力测定 |
| 5.3.9 肾脏组织TGF-β1/Smad2信号通路相关蛋白表达 |
| 5.3.10 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 对糖尿病大鼠体重的影响 |
| 5.4.2 对糖尿病大鼠血糖的影响 |
| 5.4.3 对糖尿病大鼠脏器系数的影响 |
| 5.4.4 对糖尿病大鼠肾脏功能的影响 |
| 5.4.5 对糖尿病大鼠肾脏组织病理学的观察 |
| 5.4.6 对糖尿病大鼠肾脏组织纤维化的观察 |
| 5.4.7 对糖尿病大鼠肾脏组织抗氧化能力的影响 |
| 5.4.8 对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、Smad2蛋白表达的影响 |
| 5.5 本章结论 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间论文发表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 农药发展与国家战略需求 |
| 1.1.1 我国农药使用现状 |
| 1.1.2 农药减施增效战略需求和零增长方案 |
| 1.2 农药损失途径与影响因素 |
| 1.2.1 农药损失途径 |
| 1.2.2 农药利用率的影响因素 |
| 1.3 农药载药体系设计与研究进展 |
| 1.3.1 农药载药体系的设计理念 |
| 1.3.2 农药载体材料的研究进展 |
| 1.3.2.1 无机材料 |
| 1.3.2.2 有机材料 |
| 1.4 农药控释放技术与研究进展 |
| 1.4.1 控制释放途径及其分类 |
| 1.4.2 控制释放技术存在的问题及发展趋势 |
| 1.5 释放机理研究 |
| 1.5.1 零级释放动力学模型 |
| 1.5.2 一级动力学模型 |
| 1.5.3 Peppas模型 |
| 1.5.4 Higuchi模型 |
| 1.5.5 Gallagher-Corrigan模型 |
| 1.6 选题依据及意义 |
| 1.6.1 立题依据 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 1.6.3 技术路线图 |
| 第二章 介孔二氧化硅基载药体系设计及性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 碳量子点修饰介孔二氧化硅载药体系的设计与性能研究 |
| 2.2.1 实验材料与方法 |
| 2.2.1.1 试剂与材料 |
| 2.2.1.2 仪器与设备 |
| 2.2.2 实验操作 |
| 2.2.2.1 荧光介孔二氧化硅纳米颗粒的制备 |
| 2.2.2.2 丙硫菌唑纳米载药颗粒的制备 |
| 2.2.2.3 纳米颗粒的表征 |
| 2.2.2.4 载药量与释放性能测定 |
| 2.2.2.5 对小麦赤霉病的抑菌活性测定 |
| 2.2.2.6 荧光介孔二氧化硅在菌丝体及小麦植株的传输情况 |
| 2.2.3 结果与分析 |
| 2.2.3.1 纳米颗粒表征 |
| 2.2.3.2 荧光介孔二氧化硅纳米颗粒载药量及缓释性能 |
| 2.2.3.3 荧光介孔二氧化硅纳米载药颗粒的杀菌活性 |
| 2.2.3.4 荧光介孔二氧化硅纳米载药颗粒的吸收传导性能 |
| 2.2.4 结论 |
| 2.3 羧甲基壳聚糖改性介孔二氧化硅载药体系的设计与性能研究 |
| 2.3.1 实验材料与方法 |
| 2.3.1.1 材料与试剂 |
| 2.3.1.2 仪器与设备 |
| 2.3.2 实验操作 |
| 2.3.2.1 介孔二氧化硅载药体系的制备 |
| 2.3.2.2 氨基化MSN的合成 |
| 2.3.2.3 乳化法同步包封改性介孔二氧化硅载药体系的制备 |
| 2.3.2.4 羧甲基壳聚糖改性介孔二氧化硅载药体系的表征 |
| 2.3.2.5 载药量测定 |
| 2.3.2.6 体外释放试验 |
| 2.3.2.7 杀菌活性测定 |
| 2.3.2.8 纳米载药体系在菌丝体及靶标作物的传输性能测定 |
| 2.3.3 结果与讨论 |
| 2.3.3.1 纳米颗粒的合成 |
| 2.3.3.2 纳米颗粒的表征 |
| 2.3.3.3 载药体系载药量及缓释性能研究 |
| 2.3.3.4 载药体系杀菌活性研究 |
| 2.3.3.5 载药体系吸收传导性能研究 |
| 2.3.4 结论 |
| 2.4 多巴胺铜离子改性介孔二氧化硅载药体系的设计与性能研究 |
| 2.4.1 实验材料与方法 |
| 2.4.1.1 材料与试剂 |
| 2.4.1.2 仪器与设备 |
| 2.4.2 实验操作 |
| 2.4.2.1 MSN的合成 |
| 2.4.2.2 PDA修饰MSN的制备 |
| 2.4.2.3 铜离子键合多巴胺改性介孔二氧化硅载药体系的制备 |
| 2.4.2.4 荧光标记功能化的纳米颗粒的合成 |
| 2.4.2.5 多巴胺和铜离子改性介孔二氧化硅载药体系的表征 |
| 2.4.2.6 载药量测定 |
| 2.4.2.7 体外释放性能测定 |
| 2.4.2.8 杀菌活性测定 |
| 2.4.2.9 靶标作物界面的接触角测定 |
| 2.4.2.10 菌丝体对载药纳米颗粒的吸收测定 |
| 2.4.3 结果与讨论 |
| 2.4.3.1 纳米颗粒的合成 |
| 2.4.3.2 纳米颗粒表征 |
| 2.4.3.3 载药体系载药量及缓释性能研究 |
| 2.4.3.4 载药体系杀菌活性研究 |
| 2.4.3.5 载药体系接触角研究 |
| 2.4.3.6 传输性能研究 |
| 2.4.4 结论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 壳聚糖基载药体系的设计及性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 温度和p H双重敏感壳聚糖微囊载药体系的构建及释放性能 |
| 3.2.1 材料和方法 |
| 3.2.1.1 材料和试剂 |
| 3.2.1.2 仪器和设备 |
| 3.2.2 实验操作 |
| 3.2.2.1 改性壳聚糖的制备 |
| 3.2.2.2 载药微囊的制备 |
| 3.2.2.3 载药微囊的表征 |
| 3.2.2.4 载药微囊的载药量和包封率的测定 |
| 3.2.2.5 环境响应型释放性能测定 |
| 3.2.2.6 载药微囊的光稳定性测定 |
| 3.2.2.7 载药微囊对斑马鱼的急性毒性测定 |
| 3.2.3 结果与讨论 |
| 3.2.3.1 改性壳聚糖的表征 |
| 3.2.3.2 载药微囊的表征 |
| 3.2.3.3 载药微囊配方优化结果 |
| 3.2.3.4 载药微囊环境响应性缓释性能研究 |
| 3.2.3.5 载药微囊光稳定性研究 |
| 3.2.3.6 载药微囊对斑马鱼急性毒性研究 |
| 3.2.4 结论 |
| 3.3 协同增效锰基羧甲基壳聚糖水凝胶载药体系的设计与性能研究 |
| 3.3.1 实验材料 |
| 3.3.1.1 材料与试剂 |
| 3.3.1.2 仪器与设备 |
| 3.3.2 实验操作 |
| 3.3.2.1 金属基羧甲基壳聚糖水凝胶的制备 |
| 3.3.2.2 单因素实验设计 |
| 3.3.2.3 正交实验设计 |
| 3.3.2.4 金属基羧甲基壳聚糖水凝胶的表征 |
| 3.3.2.5 载药量与包封率测定 |
| 3.3.2.6 水凝胶溶胀性能测定 |
| 3.3.2.7 水凝胶释放性能测定 |
| 3.3.2.8 水凝胶生物活性测定 |
| 3.3.2.9 丙硫菌唑凝胶颗粒在小麦植株中的剂量分布规律 |
| 3.3.2.10 样品准备 |
| 3.3.3 结果与讨论 |
| 3.3.3.1 水凝胶的制备 |
| 3.3.3.2 金属基羧甲基壳聚糖水凝胶的表征 |
| 3.3.3.3 不同条件对水凝胶微球成型的影响 |
| 3.3.3.4 单因素实验设计结果分析 |
| 3.3.3.5 正交实验设计结果分析 |
| 3.3.3.6 水凝胶溶胀性能研究 |
| 3.3.3.7 水凝胶释放性能研究 |
| 3.3.3.8 水凝胶生物活性研究 |
| 3.3.3.9 丙硫菌唑在植物体内的剂量分布情况研究 |
| 3.3.3.10 水凝胶营养功能研究 |
| 3.3.4 结论 |
| 3.4 农药作为凝胶因子的壳聚糖基水凝胶载药体系的设计与性能研究 |
| 3.4.1 材料与方法 |
| 3.4.1.1 材料与试剂 |
| 3.4.1.2 仪器与设备 |
| 3.4.2 实验操作 |
| 3.4.2.1 水凝胶制备 |
| 3.4.2.2 水凝胶表征 |
| 3.4.2.3 不同性质水凝胶的设计 |
| 3.4.2.4 水凝胶载药稳定性测定 |
| 3.4.2.5 水凝胶溶胀性能测定 |
| 3.4.2.6 水凝胶生物活性测定 |
| 3.4.2.7 水凝胶土壤保水性测定 |
| 3.4.2.8 水凝胶土壤淋溶性能测定 |
| 3.4.2.9 水凝胶界面持流量测定 |
| 3.4.2.10 水凝胶的接触角测定 |
| 3.4.2.11 水凝胶弹跳性能测定 |
| 3.4.3 结果与讨论 |
| 3.4.3.1 水凝胶的表征 |
| 3.4.3.2 不同性质水凝胶的制备影响因素 |
| 3.4.3.3 水凝胶中有效成分的稳定性测定 |
| 3.4.3.4 水凝胶溶胀性能研究 |
| 3.4.3.5 水凝胶生物活性研究 |
| 3.4.3.6 水凝胶土壤保水性研究 |
| 3.4.3.7 水凝胶在土壤淋溶性能研究 |
| 3.4.3.8 水凝胶界面持流量研究 |
| 3.4.3.9 水凝胶的接触角研究 |
| 3.4.3.10 水凝胶弹跳性能测定 |
| 3.4.4 结论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 全文总结与展望 |
| 4.1 全文总结 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 荷叶与荷叶生物碱概述 |
| 1.1.1 荷叶概述 |
| 1.1.2 荷叶生物碱概述 |
| 1.2 荷叶生物碱的代谢动力学研究进展 |
| 1.3 纳米载体概述 |
| 1.3.1 脂质体概述 |
| 1.3.2 自组装纳米粒概述 |
| 1.3.3 其他纳米载体 |
| 1.3.4 纳米药物的质量控制与技术要求 |
| 1.4 论文研究的意义和主要内容 |
| 1.4.1 研究的目的意义 |
| 1.4.2 研究的主要内容 |
| 第二章 荷叶碱脂质体的构建 |
| 2.1 材料试剂和仪器 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 标准曲线的建立 |
| 2.2.2 脂质体的制备 |
| 2.2.3 纳米载体表征 |
| 2.2.4 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 包封率测定方法的可行性检验 |
| 2.3.2 荷叶碱脂质体制备工艺分析 |
| 2.3.3 荷叶碱脂质体的外形观察 |
| 2.3.4 荷叶碱脂质体的热特性分析 |
| 2.3.5 荷叶碱脂质体的红外特性分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 荷叶碱自组装纳米粒的构建 |
| 3.1 材料试剂和仪器 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 传统溶剂注入法制备荷叶碱的磷脂-壳聚糖自组装纳米粒 |
| 3.2.2 改良制备法制备荷叶碱的磷脂-壳聚糖自组装纳米粒 |
| 3.2.3 包封率的测定 |
| 3.2.4 粒径、分布及电位的测定 |
| 3.2.5 外形观察 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 荷叶碱的磷脂-壳聚糖自组装纳米粒制备工艺分析 |
| 3.3.2 荷叶碱自组装纳米粒的平均粒径和电位分析 |
| 3.3.3 荷叶碱自组装纳米粒的外形分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 荷叶碱纳米载体的性质研究 |
| 4.1 材料试剂和仪器 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 贮藏稳定性的评价 |
| 4.2.2 消化稳定性的评价 |
| 4.2.3 体外释放特性评价 |
| 4.2.4 数据分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 贮藏稳定性评价 |
| 4.3.2 消化稳定性分析 |
| 4.3.3 体外释放特性分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 荷叶碱脂质体的代谢动力学研究 |
| 5.1 材料试剂和仪器 |
| 5.1.1 材料与试剂 |
| 5.1.2 主要仪器与设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 标准曲线的建立 |
| 5.2.2 代谢动力学评价 |
| 5.2.3 组织分布评价 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 荷叶碱脂质体的代谢动力学分析 |
| 5.3.2 荷叶碱脂质体的组织分布特性 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 研究生期间科研成果 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 第一节 组织工程支架在创伤修复领域的发展现状 |
| 1.1.1 组织工程策略促进创伤修复的研究背景 |
| 1.1.1.1 无支架组织工程策略 |
| 1.1.1.2 基于支架的组织工程策略 |
| 1.1.2 组织工程复合支架的设计理念 |
| 1.1.2.1 生物材料的分类 |
| 1.1.2.2 组织工程复合支架的制备技术与方法 |
| 1.1.3 复合支架在创伤修复领域的应用与挑战 |
| 第二节 皮肤创伤修复领域的发展现状 |
| 1.2.1 皮肤创伤修复的现状 |
| 1.2.2 创伤修复过程 |
| 1.2.2.1 炎症反应阶段 |
| 1.2.2.2 新组织形成 |
| 1.2.2.3 组织重塑 |
| 1.2.3 疤痕创伤治疗机理 |
| 1.2.3.1 疤痕降低与创伤修复炎症阶段的关系 |
| 1.2.3.2 调节组织增殖阶段减少疤痕形成 |
| 1.2.3.3 基于整合素与粘着斑相关信号的疤痕降低策略 |
| 1.2.4 组织工程中无疤痕修复策略 |
| 1.2.4.1 常见治疗手段 |
| 1.2.4.2 组织工程治疗手段 |
| 1.2.5 组织工程复合支架在皮肤创伤修复领域的展望 |
| 第三节 诱导组织再生材料在牙周修复领域的发展现状 |
| 1.3.1 牙周组织概述 |
| 1.3.2 常见的牙周疾病治疗手段 |
| 1.3.3 再生材料在牙周组织再生方面的应用 |
| 1.3.3.1 GTR在牙周组织再生方面的应用 |
| 1.3.3.2 GBR在牙周组织再生方面的应用 |
| 1.3.4 常见的牙周组织再生材料的制备 |
| 1.3.5 未来的挑战和展望 |
| 第四节 骨组织再生领域的发展现状 |
| 1.4.1 骨组织简介 |
| 1.4.2 骨修复过程及常用治疗手段 |
| 1.4.2.1 骨修复的过程 |
| 1.4.2.2 常用的治疗手段 |
| 1.4.3 骨组织工程的发展 |
| 1.4.3.1 支架 |
| 1.4.3.2 细胞 |
| 1.4.3.3 生物活性因子 |
| 1.4.3.4 力学环境 |
| 1.4.4 骨组织工程的挑战和展望 |
| 第五节 本课题的提出及研究意义 |
| 第二章 负载抗纤维化多肽的复合水凝胶在皮肤创伤修复中防疤痕的作用 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验部分 |
| 2.2.1 实验仪器与实验材料 |
| 2.2.1.1 实验仪器 |
| 2.2.1.2 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 复合水凝胶的制备 |
| 2.2.2.2 表面形貌观察 |
| 2.2.2.3 溶胀性 |
| 2.2.2.4 机械性能 |
| 2.2.2.5 化学结构表征 |
| 2.2.2.6 保湿性 |
| 2.2.2.7 降解性 |
| 2.2.2.8 多肽释放实验 |
| 2.2.2.9 流变性实验 |
| 2.2.2.10 细胞活性实验 |
| 2.2.2.11 细胞粘附实验 |
| 2.2.2.12 血液凝结实验 |
| 2.2.2.13 抗菌实验 |
| 2.2.2.14 细胞迁移实验 |
| 2.2.2.15 胶原沉积实验 |
| 2.2.2.16 免疫细胞荧光染色 |
| 2.2.2.17 Western blot检测α-SMA表达 |
| 2.2.2.18 通过qRT-PCR分析纤维化相关基因表达 |
| 2.2.2.19 兔耳疤痕皮肤创伤模型的建立 |
| 2.2.2.20 组织学染色实验 |
| 2.2.2.21 RNA测序 |
| 2.2.2.22 数据统计方法 |
| 第三节 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 复合水凝胶的理化性质结果分析 |
| 2.3.1.1 成胶性观察 |
| 2.3.1.2 复合水凝胶表面形貌观察 |
| 2.3.1.3 力学性质分析 |
| 2.3.1.4 流变学结果分析 |
| 2.3.1.5 表面化学结构分析 |
| 2.3.1.6 溶胀性、保水性和降解性分析 |
| 2.3.1.7 多肽释放动力学结果分析 |
| 2.3.2 体外实验结果分析 |
| 2.3.2.1 细胞相容性分析 |
| 2.3.2.2 细胞粘附形态分析 |
| 2.3.2.3 血液凝结效果分析 |
| 2.3.2.4 抗菌性结果分析 |
| 2.3.2.5 水凝胶浸提液对细胞迁移的影响 |
| 2.3.2.6 胶原沉积的定量结果分析 |
| 2.3.2.7 细胞中α-SMA和 F-actin表达分析 |
| 2.3.2.8 α-SMA的蛋白表达分析 |
| 2.3.2.9 与皮肤疤痕形成有关的m RNA表达分析 |
| 2.3.3 兔耳疤痕实验结果 |
| 2.3.3.1 皮肤创伤修复的形态观察 |
| 2.3.3.2 H&E染色结果 |
| 2.3.3.3 Masson三色染色结果 |
| 2.3.3.4 天狼猩红染色结果 |
| 2.3.3.5 CD31 染色结果 |
| 2.3.3.6 α-SMA染色结果 |
| 2.3.3.7 胶原染色结果 |
| 2.3.3.8 体内炎症反应结果 |
| 2.3.4 基因表达和生物学功能分析 |
| 2.3.4.1 关于HSF的 RNA测序分析 |
| 2.3.4.2 关于HaKF的 RNA测序分析 |
| 第四节 小结 |
| 第三章 结合壳聚糖的“类三明治”结构纳米纤维复合膜诱导牙周组织再生的研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器与实验材料 |
| 3.2.1.1 实验仪器 |
| 3.2.1.2 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.2.1 CS溶液的制备 |
| 3.2.2.2 PG纺丝液的制备 |
| 3.2.2.3 静电纺丝PG纳米纤维膜的制备 |
| 3.2.2.4 结合CS的PG纳米纤维多层复合膜材料的制备 |
| 3.2.2.5 表面形貌观察 |
| 3.2.2.6 化学结构表征 |
| 3.2.2.7 溶胀性实验 |
| 3.2.2.8 孔隙率实验 |
| 3.2.2.9 拉伸力学实验 |
| 3.2.2.10 水接触角实验 |
| 3.2.2.11 体外降解实验 |
| 3.2.2.12 复合膜结构稳定性实验 |
| 3.2.2.13 3T3 细胞相容性实验 |
| 3.2.2.14 HGF细胞活性实验 |
| 3.2.2.15 细胞粘附实验 |
| 3.2.2.16 天狼猩红染色 |
| 3.2.2.17 血液凝结实验 |
| 3.2.2.18 大鼠皮下埋植实验 |
| 3.2.2.19 体内降解实验 |
| 3.2.2.20 组织学染色实验 |
| 3.2.2.21 数据统计方法 |
| 第三节 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 CS-PG多层复合膜材料的理化表征结果分析 |
| 3.3.1.1 表观形貌观察结果 |
| 3.3.1.2 材料表面化学特征分析 |
| 3.3.1.3 溶胀率和孔隙率分析 |
| 3.3.1.4 力学性质分析 |
| 3.3.1.5 亲水性结果分析 |
| 3.3.1.6 材料体外降解性分析 |
| 3.3.2 体外实验结果分析 |
| 3.3.2.1 细胞相容性分析 |
| 3.3.2.2 细胞活性结果分析 |
| 3.3.2.3 细胞胶原沉积分析 |
| 3.3.2.4 细胞粘附形态分析 |
| 3.3.2.5 材料的血液凝结效果分析 |
| 3.3.3 大鼠皮下埋植实验结果 |
| 3.3.3.1 体内降解性分析 |
| 3.3.3.2 体内细胞浸润分析 |
| 第四节 小结 |
| 第四章 结合富血小板纤维蛋白的多功能复合支架诱导骨组织再生的研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验部分 |
| 4.2.1 实验仪器与材料 |
| 4.2.1.1 实验仪器 |
| 4.2.1.2 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 复合支架的制备 |
| 4.2.2.2 表面形貌观察 |
| 4.2.2.3 力学性质测试 |
| 4.2.2.4 水接触角实验 |
| 4.2.2.5 孔隙率测定 |
| 4.2.2.6 溶胀性测试 |
| 4.2.2.7 化学结构表征 |
| 4.2.2.8 体外降解实验 |
| 4.2.2.9 体外矿化实验 |
| 4.2.2.10 PRF中生长因子的释放实验 |
| 4.2.2.11 细胞相容性实验 |
| 4.2.2.12 细胞活性实验 |
| 4.2.2.13 HGF在P2G3 表面的浸润实验 |
| 4.2.2.14 细胞粘附实验 |
| 4.2.2.15 体外细胞成骨诱导实验 |
| 4.2.2.16 qRT-PCR探究成骨相关基因的表达 |
| 4.2.2.17 大鼠颅骨缺损模型的制备 |
| 4.2.2.18 组织学和免疫组织化学染色 |
| 4.2.2.19 兔牙槽骨缺损模型的制备 |
| 4.2.2.20 组织化学染色 |
| 4.2.2.21 数据统计方法 |
| 第三节 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 复合支架的表征分析 |
| 4.3.1.1 基本理化性质分析 |
| 4.3.1.2 亲水性结果分析 |
| 4.3.1.3 力学性质分析 |
| 4.3.1.4 表面化学特征分析 |
| 4.3.1.5 降解性结果分析 |
| 4.3.1.6 体外矿化活性结果分析 |
| 4.3.1.7 PRF中 PDGF和 TGF-β1 的释放规律 |
| 4.3.2 复合支架体外细胞行为分析 |
| 4.3.2.1 3T3 细胞的细胞相容性结果分析 |
| 4.3.2.2 HGF和 HDPSC的细胞相容性结果分析 |
| 4.3.2.3 细胞形貌观察 |
| 4.3.2.4 细胞浸润结果分析 |
| 4.3.2.5 ALP活性结果分析 |
| 4.3.2.6 HDPSC成骨分化结果分析 |
| 4.3.2.7 成骨相关基因的表达情况 |
| 4.3.3 大鼠颅骨缺损的骨再生实验结果 |
| 4.3.3.1 表观结果分析 |
| 4.3.3.2 Micro-CT结果 |
| 4.3.3.3 H&E染色结果 |
| 4.3.3.4 Masson三色染色结果 |
| 4.3.3.5 Goldner三色染色结果 |
| 4.3.3.6 OPN免疫组化结果 |
| 4.3.4 兔牙槽骨缺损模型的骨再生实验结果 |
| 4.3.4.1 表观结果分析 |
| 4.3.4.2 Micro-CT结果 |
| 4.3.4.3 H&E染色结果 |
| 4.3.4.4 Masson三色染色结果 |
| 4.3.4.5 Goldner三色染色结果 |
| 第四节 小结 |
| 第五章 全文结论 |
| 总结 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 壳聚糖的化学改性及其应用 |
| 1.2.1 烷基化改性及应用 |
| 1.2.2 酰基化改性及应用 |
| 1.2.3 羧基化改性及应用 |
| 1.2.4 磺化改性及应用 |
| 1.2.5 季铵化改性及应用 |
| 1.2.6 交联改性及应用 |
| 1.3 壳聚糖及其衍生物的生物活性 |
| 1.3.1 抗凝血活性 |
| 1.3.2 抗氧化活性 |
| 1.3.3 抗菌活性 |
| 1.3.4 抗肿瘤活性 |
| 1.3.5 抗炎活性 |
| 1.3.6 其他生物活性 |
| 1.4 壳聚糖及其衍生物在不同领域的应用 |
| 1.4.1 食品领域 |
| 1.4.2 环保领域 |
| 1.4.3 医药领域 |
| 1.4.4 农业领域 |
| 1.5 本文研究目的、意义和主要内容 |
| 1.5.1 研究目的和意义 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 第二章 不同分子量6-羧基壳聚糖的制备、表征及其溶解性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 原料与试剂 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 NO_2 气体的制备 |
| 2.3.2 6-羧基壳聚糖的制备 |
| 2.3.3 氧化度测定 |
| 2.4 表征手段 |
| 2.4.1 傅里叶红外光谱测定 |
| 2.4.2 热稳定性测定 |
| 2.4.3 紫外可见近红外光谱测定 |
| 2.4.4 核磁共振波谱测定 |
| 2.4.5 物相分析 |
| 2.4.6 形貌观察 |
| 2.4.7 能谱分析 |
| 2.5 溶解性研究 |
| 2.6 结果与分析 |
| 2.6.1 氧化度 |
| 2.6.2 红外光谱分析 |
| 2.6.3 热稳定性 |
| 2.6.4 紫外可见近红外光谱 |
| 2.6.5 核磁共振氢谱分析 |
| 2.6.6 物相分析 |
| 2.6.7 形貌分析 |
| 2.6.8 能谱分析 |
| 2.6.9 溶解性 |
| 2.7 本章小结 |
| 第三章 不同分子量磺化6-羧基壳聚糖的制备、表征及其溶解性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 6-羧基壳聚糖的制备 |
| 3.3.2 磺化试剂的制备 |
| 3.3.3 磺化6-羧基壳聚糖的制备 |
| 3.4 表征手段 |
| 3.4.1 傅里叶红外光谱测定 |
| 3.4.2 热稳定性测定 |
| 3.4.3 紫外可见近红外光谱测定 |
| 3.4.4 核磁共振光谱测定 |
| 3.4.5 物相分析 |
| 3.4.6 形貌观察 |
| 3.4.7 能谱分析 |
| 3.5 溶解性研究 |
| 3.6 结果与分析 |
| 3.6.1 磺化6-羧基壳聚糖的红外光谱分析 |
| 3.6.2 磺化6-羧基壳聚糖的热稳定性分析 |
| 3.6.3 磺化6-羧基壳聚糖的紫外可见近红外光谱分析 |
| 3.6.4 磺化6-羧基壳聚糖的核磁共振氢谱分析 |
| 3.6.5 磺化6-羧基壳聚糖的物相分析 |
| 3.6.6 磺化6-羧基壳聚糖的形貌分析 |
| 3.6.7 磺化6-羧基壳聚糖的EDS分析 |
| 3.6.8 磺化6-羧基壳聚糖的溶解性 |
| 3.7 本章小结 |
| 第四章 壳聚糖及其衍生物的抗真菌性能研究 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验步骤 |
| 4.2.1 马铃薯葡萄糖(PDA)培养基的制备 |
| 4.2.2 抗真菌活性测定 |
| 4.2.3 壳聚糖及6-羧基壳聚糖对种子萌发影响 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 壳聚糖的抗菌活性 |
| 4.3.2 6-羧基壳聚糖的抗菌活性 |
| 4.3.3 磺化6-羧基壳聚糖的抗菌活性 |
| 4.3.4 壳聚糖及其衍生物对种子萌发影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 肠道细菌通过影响免疫细胞调节免疫治疗 |
| 2.1.1 肠道细菌调控T细胞的变化 |
| 2.1.1.1 辅助性T细胞 |
| 2.1.1.2 Tregs |
| 2.1.1.3 细胞毒性T细胞 |
| 2.1.1.4 记忆性T细胞 |
| 2.1.2 肠道细菌对抗原呈递细胞(Antigen presenting cells,APCs)的调节 |
| 2.1.2.1 DCs |
| 2.1.2.2 巨噬细胞 |
| 2.1.2.3 B细胞 |
| 2.1.2.4 其他细胞 |
| 2.2 用以包载递送肠道细菌的生物材料 |
| 2.2.1 用于递送双歧杆菌的生物材料 |
| 2.2.2 用于递送鼠李糖乳杆菌的生物材料 |
| 2.2.3 用于递送大肠杆菌的生物材料 |
| 2.2.4 用于递送植物乳杆菌的生物材料 |
| 2.2.5 用于递送干酪乳杆菌的生物材料 |
| 2.2.6 用于递送其它细菌的生物材料 |
| 2.2.7 用于递送细菌DNA的生物材料 |
| 2.3 总结与展望 |
| 第3章 体外层面探究双歧杆菌抗肿瘤功效 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料及仪器设备 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.2.1 细胞培养 |
| 3.1.2.2 细菌培养 |
| 3.1.2.3 细菌菌落计数 |
| 3.1.2.4 细胞活力测定 |
| 3.1.2.5 液相色谱-质谱联用(Liquid Chromatography-massspectrometry,LC-MS)检测细菌菌液SCFA |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 双歧杆菌菌液杀伤肿瘤细胞功能的体外检测 |
| 3.2.2 双歧杆菌菌液SCFA检测 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 壳聚糖/藻酸盐微凝胶包载双歧杆菌的制备与表征 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料及仪器设备 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.2.1 细菌培养 |
| 4.1.2.2 细菌菌落计数 |
| 4.1.2.3 壳聚糖藻酸盐微凝胶制备 |
| 4.1.2.4 壳聚糖/藻酸盐微凝胶粒径与外观的表征 |
| 4.1.2.5 壳聚糖/藻酸盐微凝胶包载效果的表征 |
| 4.1.2.6 壳聚糖/藻酸盐微凝胶体外消化模拟实验 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 壳聚糖/藻酸盐微凝胶外观表征 |
| 4.2.2 壳聚糖/藻酸盐微凝胶包载效率的表征 |
| 4.2.3 壳聚糖/藻酸盐微凝胶体外模拟释放率及保护功效的表征 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 双歧杆菌MPs用于直肠癌治疗中抗肿瘤效果的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料及仪器设备 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.1.2.1 细胞培养 |
| 5.1.2.2 细菌培养 |
| 5.1.2.3 细菌菌落计数 |
| 5.1.2.4 Balb/c小鼠原位直肠肿瘤模型构建 |
| 5.1.2.5 双歧杆菌MPs治疗CT26 小鼠原位直肠癌方案 |
| 5.1.2.6 肿瘤组织HE染色 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 双歧杆菌对CT26 直肠癌小鼠的肿瘤生长抑制功能 |
| 5.2.2 双歧杆菌对肿瘤坏死的调控 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 双歧杆菌MPs联合PD-L1 小分子抑制剂进一步提高直肠癌免疫治疗的疗效 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验材料及仪器设备 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.1.2.1 细胞培养 |
| 6.1.2.2 细菌培养 |
| 6.1.2.3 细菌菌落计数 |
| 6.1.2.4 Balb/c小鼠原位直肠肿瘤模型构建 |
| 6.1.2.5 活体成像监测体内肿瘤生长 |
| 6.1.2.6 治疗方案 |
| 6.1.2.7 流式细胞术监测免疫细胞水平 |
| 6.1.2.8 双歧杆菌肠道内RNA scope检测 |
| 6.1.2.9 肿瘤组织HE染色 |
| 6.1.2.10 肿瘤组织免疫荧光染色 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 体内肿瘤生长情况检测 |
| 6.2.2 抗肿瘤相关细胞因子及粪便SCFA检测 |
| 6.2.3 生物安全性检测 |
| 6.2.4 免疫细胞流式细胞术检测 |
| 6.2.5 双歧杆菌体内定向聚集功能检测 |
| 6.2.6 双歧杆菌联合PD-L1抑制剂对肿瘤组织坏死的调控 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 中国对虾概述 |
| 1.1.1 生产现状及营养价值 |
| 1.1.2 中国对虾腐败机理 |
| 1.2 水产品保鲜技术研究进展 |
| 1.2.1 低温保鲜技术 |
| 1.2.2 气调保鲜技术 |
| 1.2.3 辐照保鲜技术 |
| 1.2.4 超高压保鲜技术 |
| 1.2.5 化学保鲜技术 |
| 1.2.6 生物保鲜技术 |
| 1.2.7 联合保鲜技术 |
| 1.3 冰温保鲜技术 |
| 1.3.1 冰温保鲜技术的概述及保鲜机理 |
| 1.3.2 冰温保鲜技术的优越性 |
| 1.3.3 冰温保鲜技术在食品保鲜中研究进展 |
| 1.4 主要生物保鲜剂概述 |
| 1.4.1 壳聚糖概述 |
| 1.4.2 ε-聚赖氨酸概述 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 1.6 主要研究内容 |
| 第二章 不同贮藏温度对中国对虾品质的影响 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 材料和试剂 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 原料选择与预处理 |
| 2.2.2 冰点测定 |
| 2.2.3 微生物评价指标 |
| 2.2.4 化学评价指标 |
| 2.2.5 物理评价指标 |
| 2.2.6 感官评价 |
| 2.2.7 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 冰点温度测定 |
| 2.3.2 微生物评价 |
| 2.3.3 化学评价 |
| 2.3.4 物理评价 |
| 2.3.5 感官评价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 冰温结合生物保鲜剂对中国对虾贮藏品质的影响 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 生物保鲜剂的制备及样品处理 |
| 3.2.2 微生物评价指标 |
| 3.2.3 化学评价指标 |
| 3.2.4 物理评价指标 |
| 3.2.5 感官评价 |
| 3.2.6 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 微生物评价 |
| 3.3.2 化学评价 |
| 3.3.3 物理评价 |
| 3.3.4 感官评价 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 冰温结合生物保鲜剂对中国对虾蛋白质生化特性及肌肉组织结构的影响 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器和设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 中国对虾样品处理 |
| 4.2.2 中国对虾肌肉营养成分测定 |
| 4.2.3 肌动球蛋白提取 |
| 4.2.4 肌动球蛋白盐溶性测定 |
| 4.2.5 巯基含量测定 |
| 4.2.6 Ca~(2+)-ATPase活性测定 |
| 4.2.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) |
| 4.2.8 微观结构的测定 |
| 4.2.9 数据处理 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 中国对虾肌肉营养成分 |
| 4.3.2 肌动球蛋白盐溶性变化 |
| 4.3.3 巯基含量变化 |
| 4.3.4 Ca~(2+)-ATPase活性变化 |
| 4.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) |
| 4.3.6 微观组织结构变化 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 冰温结合生物保鲜剂对中国对虾贮藏期间气味及滋味的影响 |
| 5.1 材料与仪器 |
| 5.1.1 材料与试剂 |
| 5.1.2 主要仪器和设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 生物保鲜膜的制备及样品处理 |
| 5.2.2 气味轮廓测定 |
| 5.2.3 滋味轮廓测定 |
| 5.2.4 感官评价 |
| 5.2.5 数据处理 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 气味轮廓图分析 |
| 5.3.2 滋味轮廓图分析 |
| 5.3.3 感官分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论与创新点 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
