沈慧[1]（2020）在《泛素化修饰调控低氧性肺动脉高压的作用靶点及机制研究》文中研究指明肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）是严重危害人类健康易致死亡的心肺血管疾病,如果未及时诊断和积极治疗,患者早期中位生存期不超过3年。PAH主要特征为肺血管功能和结构发生进行性改变,可导致右心衰竭而死亡。低氧是诱发和加重PAH的常见致病因素之一,它能够导致肺血管内环境紊乱,发生严重的血管功能与结构的改变。在肺动脉血管重构过程中,PASMC（pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC）的表型转换、增殖、迁移和凋亡失衡是PAH发生发展的重要环节。作为典型的PAH保护性信号通路,BMP-Smadl/5-PPARγ的激活可以对抗PAH致病信号通路TGF-β-Smad3,发挥重要的血管保护作用。同时越来越多的研究证明血管保护因子的泛素化和去泛素化调控在PAH中也发挥着重要的作用。我们近来研究,腺苷酸激活蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）磷酸化血管紧张素转化酶2（Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）能够有效地抑制其泛素化降解而发挥PAH保护作用,但是其泛素化调控机制尚未明确。而我们同时证实了激活ANP-cGMP-PKG通路可有效抑制缺氧诱导的PAH形成,同时观察到给予cGMP处理可直接上调PASMC内去泛素化酶BRCC36表达,但上调的BRCC36是否参与调控低氧诱导的PAH及肺血管重构形成,目前国内外也尚未见有相关报道。因此,深入阐明肺血管重构中关键信号分子的泛素化修饰调控机制对深入了解PAH发生机制以及开发新的作用药物靶点具有十分重要的意义。BRCC36参与多种细胞生物学过程,在细胞信号传导、DNA损伤修复过程中均发挥重要作用,可特异性水解底物上赖氨酸残基63位点（K63）泛素链,从而降低底物的泛素化修饰水平。在对BRCC36基因整体功能研究中,Miskinyte等对三例家族性脑底异常血管网病（烟雾病）患者的基因分析证实,该疾病的发生与患者类淋巴母细胞系BRCC3基因的前3个外显子缺失突变而导致BRCC36表达缺失有关,同时这类患者还具有高血压,扩张型心肌病及早发冠心病等表现。而在斑马鱼的研究中观察到,敲除BRCC3基因可导致血管生成缺陷。这些研究提示BRCC36在调节血管结构及功能中可能具有重要作用。作为一种特异性去泛素化酶,BRCC36是否会影响上述经典的BMP/TGF-β-PPARγ通路,从而通过调控PASMC的生物学特性来参与慢性缺氧诱导的肺血管重构及PAH形成,有待进一步的实验研究。同时寻找有效的药物治疗PAH也是需要迫切解决的问题。丹皮酚（Paeonol,PAE）是从中草药毛茛科植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的干燥根皮中通过化学萃取的一种2’-羟基-4’-甲氧基苯乙酮。PAE具有镇痛解热、降压抗凝、抗炎抗氧化和抑制变态反应的作用,被临床广泛用于治疗心肌缺血、动脉粥样硬化、减少缺血再灌注损伤的脑梗死等心脑血管疾病。基于其抗炎抗增殖的特性及降血压作用,我们通过本项实验研究从多角度初步探讨PAE对慢性缺氧诱导的PAH和肺血管重构的疗效及潜在的机制。为此,我们通过信息学预测、大数据分析及收集临床患者标本研究ACE2的E3泛素连接酶MDM2在PAH中的表达情况及MDM2对ACE2的泛素化调控机制。用C57BL/6小鼠经过慢性缺氧（Chronic hypoxia）干预构建的慢性PAH模型,检测肺血管中去泛素化酶BRCC36、BMP信号通路因子,转化生长因子TGF-β1及下游细胞因子的表达变化;而后构建平滑肌特异性过表达BRCC36的转基因小鼠,探讨调节血管内BRCC36对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的影响及可能机制;其次通过原代培养大鼠的PASMC和调节细胞内BRCC36表达的重组腺病毒,在细胞水平直接探讨BRCC36与BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的相互作用及可能环节从而揭示BRCC36在调节PASMC增殖、迁移、凋亡和细胞外基质表达的作用及机制;最后,在整体动物水平,初步探讨PAE对慢性缺氧诱导的肺血管重构及肺高血压形成的作用及对BRCC36表达的影响。研究内容分为三章:第一章MDM2调控ACE2泛素化参与PAH及血管重构的病理过程目的:明确E3泛素连接酶MDM2调控ACE2在慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构中的具体作用。方法:通过生物信息学预测和大数据分析E3泛素连接酶MDM2在PAH中的表达情况和对血管舒张因子ACE2的调控作用。我们收集临床上特发性PAH患者的肺组织通过免疫印记的方法观察PAH患者肺组织的MDM2和ACE2的表达水平。同时检测MDM2和ACE2在实验性小鼠PAH发生过程中表达变化,并检测MDM2敲除或过表达对ACE2稳定性及泛素化的影响。最后通过慢性缺氧+Su5416构建野生雄性小鼠的慢性低氧PAH模型,进行右心室测压和相对右心室重量（Fulton Index）指标评估右心室功能和结构的改变。通过H&E染色和Angiogram血管造影评价MDM2抑制剂JNJ-165对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的保护作用。结果:生物信息学预测MDM2作为ACE2的泛素化E3连接酶得分最高,大数据显示MDM2在家族性PAH中高表达。同时在人肺组织临床标本和动物实验中,MDM2在PAH患者肺组织和实验性小鼠肺组织中表达明显上调。通过蛋白印迹分析MDM2可以调控血管舒张因子ACE2的稳定性及泛素化降解。对比各组小鼠的右心室收缩压及相对右心室重量结果,慢性缺氧后右心室压力增加及Fulton Index增加,组织染色显示肺血管重构,肺小血管闭塞减少肺血流灌注,而给予作为MDM2泛素化抑制剂JNJ-165可以明显减少右心收缩压、右心室肥厚及血管重构等病理改变。结论:在慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构过程中,E3泛素连接酶MDM2的过度活化和对ACE2泛素化降解调控使其失去PAH保护性作用是介导PAH发生过程的一个重要因素,提示泛素化调控参与了慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构。运用MDM2泛素化抑制剂JNJ-165可以有效地抑制PAH和肺血管重构,提示JNJ-165可以被进一步研究作为PAH的临床治疗药物而拓宽低氧性PAH的临床药品的应用。第二章BRCC36对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的作用及机制目的:1)观察实验动物低氧性PAH和临床患者肺组织标本中BRCC36蛋白表达的动态变化;2)明确平滑肌细胞特异性过表达BRCC36小鼠在慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构中的具体作用;3)探讨BRCC36对BMP/TGF-β-PPARγ及下游信号通路调控的分子机制。方法:利用慢性缺氧构建PAH模型,血流动力学和免疫染色实验来评估造模情况;免疫印迹用于检测实验小鼠肺组织中BRCC36、BMPRⅡ、TGF-β1、PPARγ及id1蛋白表达情况;通过收集临床上特发性PAH患者的肺组织及离体培养PASMC,检测BRCC36蛋白在患者体内的表达水平。构建平滑肌细胞特异性过表达BRCC36转基因小鼠并进行低氧性PAH造模,通过血流动力学及免疫染色来评价BRCC36对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的保护作用,通过免疫印迹来检测过表达BRCC36对肺组织内BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的影响,并检测相关凋亡蛋白的表达变化。细胞水平上,构建消减/过表达BRCC36的重组腺病毒体外感染原代培养的PASMC,采用qPCR、免疫印迹、免疫荧光染色、细胞增殖凋亡实验等,观察BRCC36对BMP2诱导的Smad1/5磷酸化及BMP通路的激活的影响,观察BRCC36对TGF-β1诱导的Smad3磷酸化、靶基因转录调控及对PASMC增殖、凋亡及迁移的影响,进一步探讨BRCC36对BMP/TGF-β-PPARγ及下游信号通路的具体调节机制。结果:对比低氧处理小鼠的血流动力学及血管染色情况,显示其右心室肥厚,肺小血管肌化,血管中膜增厚,肺动脉周围弹力纤维增加,凋亡减少,这些提示慢性缺氧诱导的PAH模型建立成功。蛋白印迹结果显示慢性缺氧后肺组织中BRCC36表达水平下降,同时观察到转化生长因子TGF-β1表达上调,PAH保护信号因子BMPRII,PPARγ及id1水平明显下调,并随缺氧持续时间的延长而更加明显,提示慢性缺氧可诱导TGF-β1信号通路过度激活及BMP信号通路的抑制,在这个过程BRCC36蛋白表达明显降低。同时发现BRCC36在特发性PAH患者肺组织和离体培养的PASMC中表达也明显降低。在平滑肌细胞特异性过表达BRCC36小鼠上,我们通过右心室收缩压的结果观察到,过表达BRCC36能够缓解慢性缺氧诱导的右心室压力增加。Fulton Index提示右心室肥厚得到有效抑制。H&E染色及弹力纤维染色显示肺动脉重构缓解,能够有效减少肺血管肌化因子α-SMA和I型胶原减少为主。免疫印迹结果显示上调肺组织内BRCC36的表达能够有效的降低慢性缺氧诱导的肺内TGF-β1的表达增加,增强BMP-PPARγ-id1通路的活化。此外,肺组织内过表达BRCC36可缓解慢性缺氧诱导的肺细胞凋亡抑制,抑制肺组织促增殖蛋白Bcl-XL的表达,增强促凋亡蛋白Bax、Bid和活化的Casβase3表达。在细胞分子水平上,我们证实,在低氧抑制BMP信号的同时也抑制了 BRCC36的表达,而给予BMP信号通路激活配体BMP2激活Smad1/5-PPARγ信号通路的同时,可诱导BRCC36表达升高,提示BRCC36可能是BMP-PPARγ信号通路的一种内源性正向调控因子。对比转染空载腺病毒的PASMC,细胞内过表达BRCC36能够增强BMP2诱导的Smad1/5磷酸化,激活下游信号因子PPARy,aβoE和id1的表达。有趣的是,BRCC36并不是直接通过增加BMPRII而是通过ALK2来调控BMP信号通路。同时BRCC36能够缓解低氧诱导的BMP信号通路抑制,抑制低氧诱导的凋亡因子Bax、Bid、Casβase3表达的下降。此外,TGF-β1诱导的PASMC增殖、迁移及细胞外基质的分泌也受到抑制。结论:在慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构过程中,TGF-β1的过度活化和BMP信号通路保护性作用的丢失是介导这一过程的重要因素,同时证实去泛素化酶BRCC36的表达发生了显着的动态变化,提示BRCC36可能参与了慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构,与BMP/TGF-β1-PPARγ信号通路关系密切。在IPAH患者的肺组织中BRCC36的表达明显下调,这为PAH的诊断和治疗提供新的参考方向。平滑肌特异性过表达BRCC36对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构具有保护作用,这一作用可能与激活BMP-PPARy通路以及抑制TGF-β-Smad3通路,促进细胞凋亡和减少细胞增殖有关。细胞实验表明了 BRCC36对BMP/TGF-β-PPARγ通路的具有重要的调控作用。去泛素化酶BRCC36增强BMP2诱导的Smad1/5磷酸化及降低TGF-β1诱导的Smad3的磷酸化,从而正向调控BMP/PPARγ信号通路的激活和负性调控TGF-β1/Smad3信号通路,可抑制TGF-β1诱导的PASMC的增殖、迁移及细胞外基质基因的表达。而BRCC36能够被BMP2诱导性表达升高,从而实现对BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的调节。第三章丹皮酚对PAH及肺血管重构的疗效及对BRCC36表达水平的影响目的:观察丹皮酚对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的疗效以及是否与调节BRCC36表达有关。方法:将C57BL/6小鼠随机分为常氧对照组、低氧对照组、低氧低剂量PAE干预组（100ug/kg/day）和低氧高剂量PAE干预组（200ug/kg/day）。通过右心室测压称重、H&E染色、弹力纤维染色、免疫组织化学染色、免疫印迹等方法评价PAE对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的疗效,初步探讨PAE的疗效是否与调节BRCC36表达有关。结果:与低氧PAH组相比,PAE可改善慢性缺氧诱导的右心室压力、右心室结构及功能变化;促进BMP信号通路的激活,抑制低氧诱导的PAH及肺血管重构,抑制增殖蛋白的表达及增加凋亡蛋白的表达;降低促纤维化因子TGF-β1及下游Smad3磷酸化水平的表达;同时检测到BRCC36表达水平的提高。结论:PAE可改善慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构,其机制可能与激活BMP-Smad1/5-PPARγ信号通路,抑制TGF-β1-Smad3 的表达有关。PAE对BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的调节作用与上调BRCC36的表达,增强BRCC36对BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的调控关系密切。
吕丽[2]（2017）在《基于PI3K/Akt/NF-κb信号通路槲皮素抗动脉粥样硬化作用研究》文中研究指明槲皮素（quercetin）是人类植物性食物和中草药成分中最常见的黄酮醇类化合物,可用于防治心脑血管疾病、骨质疏松症、呼吸系统疾病及某些肿瘤等多种疾病。动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是心脑血管疾病的主要病理学基础,控制其发生发展是治疗心脑血管系统疾病的关键环节,对降低心脑血管系统疾病的致死风险具有重要意义。本研究应用形态学、生物化学、免疫细胞化学、免疫组织化学、流式细胞术、Western blotting及RT-PCR等实验技术,通过体内、体外相互印证的研究路线,探讨了动脉粥样硬化大鼠胸主动脉病理变化及机制,并对体外培养的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）用槲皮素进行干预,检测了PI3K/Akt/NF-κb信号通路的主要蛋白表达,以期对槲皮素抗动脉粥样硬化作用及机制进行初步探讨。体内实验结果表明,腹腔注射维生素D3（vitamine D3,VD3）70 U/kg体重联合高脂饲料喂养可成功复制大鼠动脉粥样硬化模型,表现为胸主动脉出现动脉粥样硬化病变,而槲皮素干预可有效改善动脉粥样硬化引起的脂代谢紊乱,减轻动脉粥样硬化病理改变,改善动脉壁结构,同时可显着抑制动脉粥样硬化时VSMCs及成纤维细胞的增殖以及由二者的增殖导致的动脉壁胶原成分增加,延缓动脉粥样硬化的进展。VSMCs体外培养结果表明,槲皮素在体外可有效抑制VSMCs增殖,并抑制胶原的合成和分泌,其机制可能与槲皮素激活PI3K/Akt/NF-κb信号通路,上调磷酸化PI3K及Akt表达,进而抑制NF-κb向核内转运有关。总之,体内外实验结果均显示,动脉粥样硬化时,PI3K/Akt/NF-κb通路可能被激活,促进主动脉壁成纤维细胞、平滑肌细胞增殖及胶原等成分的合成与分泌,加速动脉硬化进程;而槲皮素治疗动脉粥样硬化除影响脂代谢途径外,也可能干预此通路中关键蛋白的活性、抑制NF-κb转移,抑制主动脉壁成纤维细胞、平滑肌细胞增殖及胶原等成分的合成与分泌,延缓动脉硬化进程。
闫文仲[3]（2016）在《四种靶向药物的发现、设计和优化》文中进行了进一步梳理本论文由四章组成,每一章各描述一种靶向型药物的先导化合物发现、衍生物设计及活性优化过程。第1章和第2章是通过靶向宿主蛋白CypA,发现和设计了两种抗病毒活性化合物。CypA作为一种宿主蛋白,凭借其肽基脯氨酸顺反异构酶活性与多种病毒的感染复制均密切相关,它帮助调节肠道病毒71型（EV71）感染入侵宿主细胞时的去衣壳过程,还通过催化调节丙肝病毒（HCV）NS5A蛋白的构象调控着病毒的RNA复制和蛋白的表达。CypA在病毒复制感染过程中的这些关键作用促使我们筛选了本实验室前期报导的一系列小分子CypA抑制剂,并发现了两个对两种病毒均具有强效抑制效果的化合物（14,15）。我们以这两个化合物为先导,通过两种不同的结构改造策略,设计合成了两系列分别对EV71和HCV具有强效抑制活性的化合物。在第1章所设计的25个衍生物中（A1-4、B1-19、C1-2）,化合物B2表现出了最强效的抗EV71活性,其EC50值达到了0.37μM,通过进一步的抗病毒机制验证,我们确认化合物B2是目前已知通过CypA抑制机制达到抑制EV71感染的最强效化合物。而在第2章所设计的的25个衍生物中（D1-12、E1-13）,化合物D11表现出了最强效的抗HCV活性,其 EC50值达到了0.19μM,进一步的机制验证初步证实了其是先导化合物15的前药分子。最后,化合物B2和D11均可以与其他抗病毒机制的药物在联合给药中表现出强效的协同作用,这些结果为病毒感染的治疗提供了新的策略和方法。第3章是靶向ATF6发现和设计了一类全新机制的抗Ⅱ型糖尿病活性化合物。内质网应激是导致胰岛细胞凋亡,胰岛素抵抗并诱发Ⅱ型糖尿病的一个重要因。ATF6足内质网中的一类膜转运蛋白。在负责缓解内质网应激的UPR作用中,ATF6通过向细胞核聚集并激活下游信号通路,对缓解解内质网应激发挥着关键性的作用。这一作用使其成为了治疗Ⅱ型糖尿的潜在靶点,并吸引我们筛选发现了一个具有促进ATF6入核的先导化合物22。经过后续的一系列结构改造、药理活性评估,我们共设计合成了31个衍生物（25-26、F1-5、G1-15、H1-9）并最终获得了一个可以促进ATF6入核、显着提高胰岛素信号通路敏感性和抑制糖异生功能的化合物H1,更为重要的是该化合物在动物水平上也表现出了强效的控制血糖稳态的活性,因此这一研究成果为Ⅱ型糖尿病的治疗开辟了新的途径。第4章是老药新用导向的靶向PDE2发现和设计肺动脉高压活性化合物。PDE2通过水解体内的两种第二信使cAMP和cGMP,参与调控了体内多种的生理功能。目前的研究结果详细地阐述了 PDE2与肺动脉高压病情发展之间的密切联系,并通过X射线晶体结构指出了其结合位点与其他PDE亚型的结构区别。这些研究结果为开发高选择性PDE2抑制剂作为新型肺动脉高压治疗药物提供了重大契机。在本章内容中,我们采取了老药新用导向的新药发现策略,从本实验室的老药库中发现了老药氯法拉滨对PDE2具有良好的抑制效果,并将其作为先导结构进行优化。经过合理药物设计和化学合成手段,共设计合成了 31个衍生物（29-32、11-6、J1-5、K1-16）。经过初步的活性测试,我们得到了两个强效的PDE2抑制剂K6和K16,其IC50值分别达到了 0.387 和0.334μM,并总结了初步的构效关系。本课题后续的结构优化和深入的药理活性评估目前正在进行中。
刘丽[4]（2016）在《野百合碱肺动脉高压大鼠模型中NF-κB信号转导通路变化的试验研究》文中进行了进一步梳理目的:肺动脉高压是一种以肺血管阻力持续增加为特征的临床病症,往往导致右心衰竭,病死率高,然而其发病机制到目前为止尚未完全清楚。众多的研究表明炎症因子对PAH的发生、发展起重要作用,可以引起肺血管收缩、肺血管重塑等。核因子-кB（NF-кB）作为一种转录因子,在机体免疫应答、炎症反应方面发挥重要作用,NF-кB激活后,可启动和调控一系列参与炎症反应的炎症因子的表达。既往研究显示NF-кB信号转导通路在动脉粥样硬化、特发性肺纤维化、COPD、癌症等发病机制上起重要作用,而在肺动脉高压中的研究却很少。既往的研究发现野百合碱可诱导炎症反应,而这一系列的反应是否通过激活NF-KB信号转导通路启动最终导致的肺动脉高压值得探讨。本实验探讨NF-кB信号转导通路在肺动脉高压的形成过程中肺动脉压力、NF-кB表达、炎症因子的变化及其相关关系,研究NF-кB信号转导通路在肺动脉高压形成过程中变化及其意义,为肺动脉高压形成机制提供新思路。方法:将成年雄性SD大鼠随机分成对照组（N=24）及模型组（N=24）,模型组皮下注射野百合碱60mg/kg,对照组皮下注射相同量的生理盐水,在饲养第7d、14d、21d、28d两组分别每次各取大鼠6只,经右心导管测得肺动脉压力数值（m PAP）后处死大鼠,经右心测得得肺动脉压力数值m PAP作为判断肺动脉高压模型建立是否成功的指标;测定右心室游离壁（RV）和左心室加室间隔（LV+S）的重量比,RV/（LV+S）%判断右心肥厚的指标;经RT-PCR测定肺动脉NF-кBp65基因表达情况,判断肺动脉高压模型具体的分子机制;同时经由HE染色经光镜（×100、×400）通过涂片直观观察肺动脉结构变化;免疫组化法SP法经病理涂片光镜下（×200、×400）直接观察炎症因子TGF-β1、ICAM-1的表达,Meta Morph/DPl0/BX51系统计算平均光密度值客观反映炎症因子TGF-β1、ICAM-1表达情况。结果:1.SD大鼠的一般情况注射野百合碱后7d,两组大鼠未见明显差别,从第14d开始模型组SD大鼠逐渐出现活动减少,反应迟缓,毛发松动、脱毛,劳累性呼吸困难,肝脾肿大、颈静脉怒张等充血性右心衰的表现,模型组大鼠解剖后肉眼可见明显的右心肥厚,模型组这种临床表现随实验天数的增加而更加明显。对照组的全部24只在实验28d内都存活,而MCT组从实验第18d开始死亡共死亡7只。2.m PAP值在实验第7d两组差异不明显（16.67±1.88vs17.31±1.99,P>0.05）,从实验第14d开始两组数据开始出现差异,对照组较模型组数值明显降低（22.26±2.37、30.06±1.67、33.05±1.87与对照组相比,P<0.01）,差异具有统计学意义。3.右心肥厚指标:处死大鼠后解剖心脏发现MCT组大鼠右室明显肥厚,右心肥厚指标RV/（LV+S）%从实验第14d两组比较,对照组较模型组数值明显降低（38.99±1.68、49.37±2.31、50.43±2.48与对照组相比,P<0.01）,差异有统计学意义。4.肺血管情况:HE染色显示对照组肺血管管壁薄,管腔较小。模型组肺中小型动脉血管管壁明显增粗,管腔明显减小,伴有明显的血管周围炎性细胞浸润。5.RT-PCR结果显示:NF-кBp65m RNA基因的表达在第7d时两组无明显变化（0.66±0.07vs0.67±0.09,P>0.05）,从实验第14d起两组比较,对照组较模型组明显降低（1.13±0.23、1.25±0.11、1.41±0.13分别与对照组相比,P<0.01）,差异有统计学意义。在NF-кBp65m RNA与m PAP相关关系时发现,随m PAP值增加NF-кB表达随之增强（相关系数分别为r=0.803）。6.TGF-β1、ICAM-1表达:免疫组化SP染色显示:对照组TGF-β1、ICAM-1镜下未发现明显棕黄色颗粒。模型组SD大鼠TGF-β1切片在血管全层细胞的胞质中发现大量棕黄色颗粒,而ICAM-1切片在血管内皮细胞的胞质中发现大量棕黄色颗粒。通过计算TGF-β1、ICAM-1平均光密度值显示对照组较MCT组大鼠表达分别明显降低（P<0.01,P<0.01）,并且随NF-кBp65m RNA蛋白的增加,TGF-β1、ICAM-1也随之表达增强（相关系数分别为r=0.72、r=0.81）。在m PAP值与TGF-β1、ICAM-1相关关系的研究中发现,m PAP值分别与TGF-β1、ICAM-1正相关（相关系数分别为r=0.831、r=0.903）。结论:1.NF-кB信号转导通路参与了肺动脉高压的形成过程。2.野百合碱可能通过诱导NF-кB信号转导通路上调下游的炎症因子TGF-β1、ICAM-1导致肺动脉高压的形成。
孙印石[5]（2014）在《虎杖花对丝光绿蝇毒杀活性成分及致毒机理研究》文中研究说明丝光绿蝇（Lucilia sericata）,俗称绿豆蝇,能传播痢疾、伤寒、霍乱、结核等多种疾病。在对其进行化学防治过程中常造成食品、环境污染及人体中毒等事故,同时随着化学药剂的长期大量地连续使用,蝇类已对诸多化学杀虫剂产生了抗药性。因此,从天然产物中寻找新的杀虫活性物质是开发绿色新型杀虫剂以减少害虫抗药性的有效途径之一。课题组发现,丝光绿蝇对活体虎杖花具有和天然除虫菊相似的中毒症状,表现为吸引、取食、兴奋、瘫软麻痹（麻醉）、死亡等系列行为。经进一步药化实验,研究发现虎杖花甲醇提取物的乙醚部位和甲醇部位具有较强的毒杀活性同时具有和活体花类似的中毒症状。为此,本文采用生物活性跟踪法对其中的杀虫活性成分进行提取、分离、纯化及结构鉴定,并初步探讨其毒杀作用机制。以期寻找和发现防治丝光绿蝇的天然活性物质和先导化合物,为植物源农药的开发利用提供理论依据和技术支持。1虎杖花对丝光绿蝇毒杀现象生物学观察本文通过现场和实验深入观察了虎杖对丝光绿蝇成虫具有的特异毒杀现象。在虎杖未开花之前,丝光绿蝇对其没有任何兴趣,但一到虎杖花开花之时,丝光绿蝇就会受到虎杖花气味的吸引陆续从四面八方大量聚集于花头上进行吸食。吸食一段时间后丝光绿蝇进入为兴奋状态,表现为乱飞、乱撞、不断搓动前足、并伴有流涎、抽搐等症状。随着取食时间的延长和取食量的增大,丝光绿蝇逐渐进入抑制状态,表现为行动缓慢、麻醉等中毒症状,最终死亡。活体花对丝光绿蝇的毒力曲线为Y=2.1534X-8.8414,相关系数r=0.9872,其LTso为27.32h。2虎杖花对丝光绿蝇引诱物质的化学分析在全面观察了虎杖花对丝光绿蝇特异毒杀现象基础上,应用气相色谱质谱联用仪测定了引诱丝光绿蝇取食的挥发性成分。从虎杖花中鉴定出21个化合物,占总峰面积的99.29%。2-己烯酸甲酯,苯戊酮,4-己烯酸甲酯,顺-3-己烯酸甲酯,2-甲基-6-次甲基-1,7-辛二烯-3-醇等5种物质是虎杖花头香的主要成分,占总挥发性成分的63.23%。从成分的类别来看,酯类成分占总挥发性成分的52.09%,以己烯酸甲酯类衍生物为最多,己烯酸甲酯占总酯类成分的85.66%,其中2-己烯酸甲酯的相对百分含量为24.41%；另外一类挥发性成分为苯戊酮和苯乙酮,含量分别为16.30%和4.33%,占挥发性成分总量的20.63%。3虎杖花杀虫活性物质的分离为了寻找和明确虎杖花对丝光绿蝇的杀虫活性成分,对虎杖花甲醇提取物的石油醚、乙醚、正丁醇、甲醇和水部位进行杀虫实验。石油醚、乙醚和甲醇部位具有较好的杀虫活性,其LC50分别达到1.31,0.30,0.64mg/mL。而正丁醇和水提取部位没有检测到杀虫活性。为了进一步探明杀虫活性物质,作者对其中两个杀虫活性较强的乙醚部位和甲醇部位的化学成分进行了分离。从乙醚部位分离得到7个天然产物,从甲醇部位分离得到22个天然产物。其中芦荟大黄素、山奈酚、根皮苷、木犀草素、橙皮素、4-羟基苯乙酮、蔗糖、染料木素、橙皮苷、表儿茶素、1-苯乙基-葡萄糖苷等11个化合物为首次从植物虎杖中分离得到。4单体化合物的杀虫活性为了寻找真正的杀虫物质和先导化合物,作者对分离得到的大部分天然产物均进行了杀虫活性筛选。研究中发现以芦荟大黄素为代表的蒽醌类化合物具有较好的杀虫活性,从试虫的中毒症状来看和提取物相近。大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚在5h的击倒作用随着试药浓度的增大而增大,但仅芦荟大黄素的击倒率超过50%。丝光绿蝇在用药10h的死亡头数（死亡率）均有较大幅度提升,尤其是大黄酚和芦荟大黄素最为明显,死亡率达到了56.67%和86.67%。大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素的浓度均为3.75mg/mL时,丝光绿蝇在10h的死亡率分别为43.33%,20.00%,30.00%,56.67%和86.67%;在20h的死亡率分别为50.00%,30.00%,53.33%,70.00%和90.00%。丝光绿蝇成虫经大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素给药10h后,其LC50值分别为3.74,5.90,4.89,3.06,2.44mg/mL.给药20h后,其LC50值分别为3.36,5.29,3.17,1.90,2.26mg/mL5虎杖花中蒽醌类化合物对丝光绿蝇的毒杀机制杀虫活性实验证明蒽醌类化合物是虎杖花中起到杀虫作用的重要的物质,对丝光绿蝇成虫具有较强的神经毒杀作用。丛试虫的中毒症状推测虎杖花中的蒽醌类化合物可能作用于丝光绿蝇的中枢神经系统。在兴奋期,给药组和活体花相对于对照来说均显示乙酰胆碱酯酶活性降低,即酶比活力降低。大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素和活体花对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别为7.03%,8.59%,24.02%,11.13%,32.62%和36.13%。在此时期丝光绿蝇体内的神经递质乙酰胆碱含量快速升高,分别为同期对照组的9.45,8.41,9.24,8.98和3.23倍,这和活体化的趋势一致。丝光绿蝇在兴奋期由于乙酰胆碱酯酶酶活力被抑制而导致乙酰胆碱无法被乙酰胆碱酯酶迅速水解为乙酸和胆碱,这会使得大量乙酰胆碱蓄积而无法有效终止神经信号的传递。这时脑神经细胞处于持续兴奋之中,表现为乱飞、乱撞、不断搓动前足、并伴有流涎、抽搐等症状。随着取食时间的延长,取食量增大,乙酰胆碱酯酶酶活性升高,乙酰胆碱被迅速降解,乙酰胆碱释放不足,导致神经传递受阻,试虫由兴奋期转为抑制期（麻醉期）,从而表现为行动缓慢、麻醉等中毒症状。丝光绿蝇进入麻醉期至即将死亡期,行动迟缓,取食量进一步增大,蒽醌化合物对丝光绿蝇体内的乙酰胆碱酯酶表现出快速激活作用。在此时期,大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素处理的乙酰胆碱酯酶酶比活力分别为同期对照组的2.42、2.37、2.53、2.44和4.02倍。
崔振田[6]（2014）在《芪参益气滴丸预处理对瓣膜置换患者右室心脏功能影响的研究》文中研究表明背景及目的：目前对体外循环下心脏瓣膜置换手术患者心肌保护的研究很多，但多集中在心肌停搏液及各种添加剂的研究，本研究旨在探讨现代中药制剂芪参益气滴丸（Qishen Yiqi Pills）预处理对体外循环下心脏瓣膜置换手术患者的心肌保护以及对右室心脏功能的影响。方法：将我院心血管外科2012年5月-2013年5月间，需在体外循环下行瓣膜置换手术的患者120例随机分为两组：对照组（A组）60例和芪参组（B组）60例。术前：对照组常规治疗基础上，应用芪参益气滴丸安慰剂，餐后半小时服用，每次药物量为0.5g，每日3次，持续至研究结束；芪参组在常规治疗的基础上,应用芪参益气滴丸，餐后半小时服用，每次药物量为0.5g，每日3次，持续至研究结束。在麻醉前（T0）及主动脉开放后12h（T1）和24h（T2）两组患者分别抽血检测血清心肌损伤标志物磷酸肌酸酶同工酶（CK-MB）和肌钙蛋白I（nTnI）。于术前及术后第1周、第6周分别测量两组患者右室射血分数（RVEF）、右心室输出量（RVSV）、右心室舒张期末容积（RVEDV）和右心室收缩期末容积（RVESV）。并记录手术时体外循环时间、辅助循环时间、升主动脉阻断时间，开放升主动脉后心脏自动复跳情况、体外循环停止后多巴胺用量、心律失常发生情况、术后停留监护室（ICU）时间。结果：1.两组患者的体外循环时间、辅助循环时间、主动脉阻断时间的比较无显着差异性（P>0.05）；B组心律失常发生率低于A组，两组患者的心律失常均为阵发性房颤，但在统计学上无显着差异性（P>0.05）。2.两组患者升主动脉开放后B组14例患者除颤心脏复跳，明显低于A组32例，两组心脏复跳情况比较存在显着差异（P<0.05）。体外循环停止后平均多巴胺使用量A组平均在4.0±0.8μg/kg min，明显高于B组2.1±1.4μg/kg min，比较有显着差异（P<0.05）。患者在ICU病房的时间A组4.2±1.3d，高于B组2.5±0.9d，比较有显着差异（P<0.05）。术后两组患者cTnl浓度的是呈上升趋势，术后24小时A组cTnl为1.58±0.34ng/ml,B组cTnl为1.03±0.22ng/ml，两者比较有显着差异（P<0.05）。术后两组患者CK-MB浓度升高，术后12小时A组CK-MB为26.89±5.04U/L,B组CK-MB为17.32±6.01U/L，于术后24小时A组CK-MB为22.36±5.37U/L,B组CK-MB为14.13±5.28U/L，两者比较均有显着差异（P<0.05）。3.手术前两组患者右心室舒张期末容积（RVEDV）、右心室收缩期末容积（RVESV）、右心室输出量（RVSV）及射血分数（RVEF）比较无明显差异性（P<0.05）；手术后第1周及第6周时两组患者心脏超声显示右心室舒张期末容积（RVEDV）、右心室收缩期末容积（RVESV）、右心室输出量（RVSV）较术前均明显降低，而射血分数（RVEF）较术前明显升高，但B组术后右心室舒张期末容积（RVEDV）、右心室收缩期末容积（RVESV）、右心室输出量（RVSV）降低程度显着低于A组,差异具有统计学意义（P<0.05），而射血分数（RVEF）B组升高程度显着高于A组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：心脏瓣膜病患者术前常规治疗基础上加用芪参益气滴丸，可以增强心肌细胞抗缺氧能力，减少体外循环过程中缺血再灌注损伤的并发症,对改善术后患者右室心脏功能，促进术后恢复具有重要作用，对于体外循环下进行瓣膜置换手术后出现的心力衰竭的治疗开辟了新的途径，值得临床推广。
方瑜[7]（2014）在《九龙藤总黄酮对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制研究》文中认为目的：研究九龙藤总黄酮（Bauhinia championi（iBenth）Benth flavones, BCF）预处理对垂体后叶素（pituitrin, pit）致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制。方法：1.本实验根据留取心脏标本时间不同，将96只雄性SD大鼠随机分为两批（各48只），每批均随机分为生理盐水、模型、阳性药维拉帕米（8mg· kg-1）、BCF低、中、高剂量（60、120、240mg·kg-1）共6组（n=8）。除生理盐水组外各组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素（0.75U·kg-1）造模。2.观察造模前后大鼠Ⅱ导联心电图ST段和血流动力学指标心率（HR）、左心室舒张末期压（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（+dp/dtmax）和左心室内压最大下降速率（-dp/dtmax）的变化。记录心电图及血流动力学指标后，立即留取血液、心脏标本，紫外分光光度计法检测血清总抗氧化力（T-AOC）、组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力。3.注射pit6h.后，留取血液及心脏标本，Elisa法检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白（cTnI）和肌红蛋白（MyoG）的含量；运用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测目的基因Cyt-C、c-fos及CaSR表达的变化。结果：1.九龙藤总黄酮对急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图ST段、血流动力学参数及生化指标的影响与生理盐水组比较，模型组大鼠Ⅱ导联心电图出现ST段抬高，T波低平、倒置（P <0.05或P <0.01），HR、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显降低，LVEDP显着升高（P <0.01）, T-AOC、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力明显降低，大鼠血清CK-MB、cTnI和MyoG的含量升高；与模型组相比，BCF能剂量依赖性地抑制注射pit后15s、1min.心电图ST段抬高，减小HR、+dp/dtmax、-dp/dtmax降低和LVEDP升高的幅度，显着增加血清T-AOC，改善Na+-K+-ATP、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力，减少心肌损伤标志物CK-MB、cTnI和MyoG的漏出（P <0.05或P <0.01）。2.九龙藤总黄酮对大鼠急性缺血心肌Cyt-C、c-fos及CaSR基因表达的影响与生理盐水组比较，模型组Cyt-C、c-fos及CaSR三个基因的相对表达含量增加，且有统计学意义（P <0.05或P <0.01）；与模型组相比，BCF能降低目的基因Cyt-C、c-fos及CaSR的表达（P <0.05或P <0.01）。结论：九龙藤总黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血有明显保护作用，其机制可能与改善心肌收缩和舒张功能、抗氧化、抑制钙超载、减轻心肌损伤及抑制细胞凋亡有关。
王婉潇[8]（2014）在《白杨素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究》文中指出白杨素是由紫葳科千张纸属植物木蝴蝶中提取出来的一种黄酮类化合物,因为5位、7位连有羟基,所以又名5,7二羟基黄酮。具有极为广泛的生物学活性,抗氧化、抗病毒、抗过敏、抗炎、抗焦虑和抗肿瘤等药理学上的作用已被广为认知。特别是抗肿瘤活性,是现在白杨素研究的热点。但结构决定了白杨素是一种两性化合物,使其水溶性和脂溶性都很低,限制了其作用的发挥。所以之前的研究主要集中在增加白杨素的水溶性上面,本论文希望从增加其脂溶性上入手,试图找到新的衍生化方式。本论文通过乙酰化、苯甲酰化、羧化等方式对白杨素的两个羟基同时或者单个进行修饰,合成了单乙酰基白杨素（化合物2）、双乙酰基白杨素（化合物3）、双乙酸乙酯白杨素（化合物4）、双羧甲基白杨素（化合物5）、单苯甲酰基白杨素（化合物6）、双苯甲酰基白杨素（化合物7）、5-乙酸乙酯,7-苯甲基白杨素（化合物8）、5-羧甲基白杨素（化合物9）共八种化合物。反应进程通过薄层层析（TLC）进行跟踪监测,确定反应终点。目的产物经过硅胶柱层析分离纯化。分离纯化后得到的产物通过质谱、核磁共振碳谱、氢谱对化合物进行结构表征。通过MTT法,比较了八种衍生物的抗肿瘤活性。其中双乙酰白杨素（化合物3）对H22肿瘤细胞的抑制作用较白杨素有明显提高,抗肿瘤活性比白杨素提高91.56%,ICso值达到了141μM。其余7种化合物的抗肿瘤活性均有不同程度降低。说明白杨素的5,7位羟基并非活性位点,并且增加脂溶性的修饰也可以提高白杨素的抗肿瘤活性。利用流式细胞仪对对照组肿瘤细胞、白杨素对照组细胞、化合物3组细胞分别进行细胞周期分析。对照组细胞与白杨素对照组细胞的细胞周期没有明显变化,化合物3组细胞的细胞周期发生明显变化,G2/M期细胞大量增多,G1、S期细胞明显减少。说明化合物3是通过影响细胞周期的的方式抑制肿瘤细胞增殖的。
李彩霞[9]（2013）在《青心酮对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响》文中研究说明目的应用青心酮（3,4-dihydroxyacetophenone,DHAP）干预低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs）增殖，初步探讨其对HPASMCs增殖的抑制效果和机制。方法原代培养HPASMCs，随机分成：①常氧组、②低氧组、③DHAP1组(低氧+DHAP0.6×10-4mol/L)、④DHAP2组(低氧+DHAP3.3×10-4mol/L)和⑤DHAP3组(低氧+DHAP6.0×10-4mol/L)。应用流式细胞技术检测细胞周期，噻唑蓝（methylthiazolyl diphenyl tetrazolium bromide,MTT）比色法测定细胞增殖情况，细胞免疫组织化学技术检测细胞PCNA表达，Western-blot方法检测PCNA蛋白表达量，Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价DHAP对低氧诱导的HPASMCs增殖及HPASMCs[Ca2+]i调节的作用。结果流式细胞学显示：低氧组G0/G1期细胞比例为77.77±1.05（%），S期比例为14.39±1.73（%）；而常氧组G0/G1期细胞比例为92.46±0.87（%），S期比例为4.20±0.85（%）。缺氧24h，G0/G1期细胞比例减少，S期比例增高，与常氧组相比，差异具有统计学意义（P<0.01or0.05）。DHAP1组G0/G1期细胞比例为85.88±1.57（%），而S期细胞比例为9.63±1.99（%）；DHAP2组G0/G1期细胞比例为89.45±1.48（%），而S期细胞比例为4.05±0.77（%）；DHAP3组G0/G1期细胞比例为86.47±1.48（%），而S期细胞比例为2.00±0.08（%）。DHAP1、DHAP2、DHAP3组分别与缺氧组相比较，G0/G1期细胞比例增高，S期细胞比例降低，各组之间差异有统计学意义（P <0.05），且在一定范围内，随着DHAP浓度的增高，这种差异有增加的趋势，两两组间比较，差异均具统计学意义（P <0.05）（见图10，表2）。MTT法酶标仪在570nm处测各孔吸光度值（OD值）分别为，低氧组：0.250±0.028、DHAP1组：0.190±0.009、DHAP2组：0.170±0.015、DHAP3组：0.160±0.023。结果显示：DHAP各组OD值均低于低氧组（P <0.05），且在一定范围内，OD值随着DHAP浓度的增高呈下降趋势，两两比较差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学技术显示PCNA染色主要位于细胞核，Western-blot结果显示低氧组PCNA/Actin的比值为0.322±0.021，高于常氧组（0.025±0.002）（P <0.05）和DHAP1组（0.063±0.004）、DHAP2组（0.055±0.004）、DHAP3组（0.037±0.002）（P<0.05），提示在一定范围内，随着DHAP剂量的增加，PCNA/Actin的比值下降，组间差异具有统计学意义（P <0.05）。钙离子荧光探针（Fluo-3）与激光共聚焦显微镜显示各组间的[Ca2+]i荧光强度在常氧组、低氧组、DHAP1组、DHAP2组、DHAP3组分别为：25.0±8.9、64.0±10.2、30.0±9.5、23.0±8.4、17.0±3.5。结果显示低氧组[Ca2+]i荧光强度明显高于常氧组，两组比较，差异具有统计学意义（P <0.05）。DHAP各组[Ca2+]i荧光强度低于低氧组；在一定范围内，随着DHAP浓度的增加，[Ca2+]i荧光强度呈下降趋势，两两组间比较，差异有统计学意义（P <0.05）。说明低氧诱导HPASMCs内[Ca2+]i显着增加，在DHAP应用后，能拮抗低氧诱导的HPASMCs内[Ca2+]i升高，从而抑制HPASMCs的增殖。结论1.低氧刺激HPASMCs增殖。2.青心酮抑制低氧诱导的HPASMCs增殖。3.青心酮降低细胞内[Ca2+]i浓度增加，从而抑制低氧状态下HPASMCs的增殖。4.青心酮改善人肺循环的作用机制可能与其有关。
刘海涛[10]（2012）在《天然活性物质杨梅素及芒果苷结构修饰》文中研究说明本论文包括三部分：1.杨梅素水溶性结构修饰2.芒果苷的初步结构修饰3.R-甲氨蝶呤的合成1.杨梅素水溶性结构修饰杨梅素为杨梅树皮的主要化学成分,属于天然黄酮醇类化合物,是一种新型的血小板活化因子受体拮抗剂,可以保护心血管,治疗脑缺血。但其水溶性很小,影响了其作为注射剂型的开发利用。为增加其水溶性,本论文合成了杨梅素磺酸钠,收率为75%,纯度>98%；利用三羟基苯乙酮与没食子酸甲酯为起始原料合成了葡萄糖醛酸化杨梅素,总收率为16%,纯度>95%。结果显示杨梅素磺酸钠室温下水中溶解度为1g/500ml,水溶性没有明显提高,葡萄糖醛酸化杨梅素为1g/15ml,水溶性提高显着。2.芒果苷的初步结构修饰芒果苷,是从芒果叶以及知母提取出来的一种双苯吡酮类化合物,可通过抑制黄嘌呤氧化酶减少尿酸生成而发挥抗痛风活性作用。本论文以芒果苷为先导物,针对其溶解性差,脂水分配系数不理想等问题,对其进行初步结构修饰与优化。共合成目标化合物17个,其中全新结构化合物7个,所有目标化合物与中间体均经核磁共振氢谱、质谱等方法进行了结构确证。活性筛选正在进行中。3.R-甲氨蝶呤的合成甲氨蝶呤,是目前癌症化疗领域中广泛应用的药物之一,主要用于治疗各型急性白血病。临床上使用的甲氨喋呤为S-（+）-型异构体,而R-（一）-型甲氨蝶呤作为光学异构体杂质,欧洲药典7.0版规定其含量不得大于3.0%。由于国内没有R-甲氨蝶呤的标准品,为满足质量控制的需要,本论文对其合成进行了研究。合成R-甲氨蝶呤0.8g,总收率23%,纯度大于98%,ee%值95.1%,可作为甲氨蝶呤异构体杂质质量控制的对照品。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第1章 MDM2调控ACE2泛素化参与PAH的病理过程 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物、细胞 |
| 1.1.2 实验设备 |
| 1.1.3 主要实验试剂与抗体 |
| 1.1.4 实验试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 临床患者肺组织标本 |
| 1.2.2 HEK293细胞培养和siRNA转染 |
| 1.2.3 免疫共沉淀(CO-IP) |
| 1.2.4 实验动物分组 |
| 1.2.5 小鼠血流动力学检测步骤 |
| 1.2.6 右心室肥厚指标评估 |
| 1.2.7 肺组织与右心室取材与存放 |
| 1.2.8 苏木素-伊红染色步骤 |
| 1.2.9 肺组织蛋白提取步骤 |
| 1.2.10 肺组织蛋白定量步骤 |
| 1.2.11 Western Blot步骤 |
| 1.2.12 Angiogram步骤 |
| 1.2.13 统计方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 UbiBrowser预测PPARγ和ACE2的E3泛素连接酶及BMPRII突变的家族性PAH大数据分析 |
| 1.3.2 临床患者和实验性小鼠PAH肺组织标本中MDM2和ACE2蛋白表达水平检测及MDM2对ACE2稳定性调控 |
| 1.3.3 E3泛素连接酶MDM2调控ACE2在低氧下的泛素化降解 |
| 1.3.4 MDM2抑制剂JNJ-165改善小鼠PAH及血管重构病理改变 |
| 1.4 讨论 |
| 第2章 BRCC36对慢性缺氧诱导的PAH及肺血管重构的作用及机制 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物、细胞、重组腺病毒 |
| 2.1.2 实验设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂与抗体 |
| 2.1.4 实验试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组及流程示意图 |
| 2.2.2 PAH缺氧模型建立 |
| 2.2.3 小鼠基因组DNA提取 |
| 2.2.4 SMA22α-BRCC36过表达转基因小鼠的鉴定 |
| 2.2.5 小鼠血流动力学检测步骤 |
| 2.2.6 右心室肥厚指标评估 |
| 2.2.7 肺组织与右心室取材与存放 |
| 2.2.8 肺组织石蜡切片制作步骤 |
| 2.2.9 苏木素-伊红染色步骤 |
| 2.2.10 Weigert弹力纤维染色步骤 |
| 2.2.11 免疫组织化学染色步骤 |
| 2.2.12 TUNEL细胞凋亡检测步骤(显色法) |
| 2.2.13 肺组织蛋白提取步骤 |
| 2.2.14 肺组织蛋白定量步骤 |
| 2.2.15 Western Blot步骤 |
| 2.2.16 临床患者肺组织标本 |
| 2.2.17 临床人肺动脉平滑肌细胞获取与培养 |
| 2.2.18 大鼠PASMC原代培养 |
| 2.2.19 PASMC传代步骤 |
| 2.2.20 PASMC鉴定 |
| 2.2.21 CCK-8法检测PASMC的增殖活力实验 |
| 2.2.22 TUNEL细胞凋亡检测(荧光法) |
| 2.2.23 Transwell迁移小室检测细胞迁移实验步骤 |
| 2.2.24 293A细胞复苏、传代、冻存步骤 |
| 2.2.25 重组腺病毒扩增及收集 |
| 2.2.26 细胞蛋白提取步骤 |
| 2.2.27 细胞蛋白定量步骤 |
| 2.2.28 细胞总RNA提取步骤 |
| 2.2.29 cDNA反转录合成步骤 |
| 2.2.30 RT-PCR步骤 |
| 2.2.31 统计方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 缺氧对C57BL/6野生型小鼠右心室压力和肺动脉病理性重构的影响 |
| 2.3.2 缺氧处理对野生小鼠肺组织中BRCC36等细胞因子表达水平的影响 |
| 2.3.3 临床PAH患者肺组织标本及离体培养的PASMC中BRCC36细胞因子表达水平检测 |
| 2.3.4 SMA22α-BRCC36特异性过表达小鼠鉴定结果 |
| 2.3.5 平滑肌细胞特异性过表达BRCC36对慢性缺氧小鼠PAH及肺动脉病理性重构的影响 |
| 2.3.6 过表达BRCC36对BMP/TGF-β-PPARγ信号通路的影响 |
| 2.3.7 大鼠PASMC原代培养及鉴定 |
| 2.3.8 探讨缺氧干预对PASMC内BMP-Smad1/5及PPARγ的调节效应及对BRCC表达的影响 |
| 2.3.9 探讨BMP-PPARγ-apoE通路的活化对BRCC36表达的调节效应 |
| 2.3.10 BRCC36重组腺病毒感染PASMC效果 |
| 2.3.11 探讨BRCC36对PASMC缺氧条件下BMP-PPA:Rγ-apoE轴的调节效应 |
| 2.3.12 探讨BRCC36对PASMC缺氧条件下TGF-β-Smad3-PPARγ信号通路的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 PAE对PAH及肺血管重构的疗效及对BRCC36表达水平的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物的来源 |
| 3.1.2 实验设备 |
| 3.1.3 主要实验试剂与抗体 |
| 3.1.4 实验试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 PAE溶液配制 |
| 3.2.2 实验动物分组 |
| 3.2.3 PAH缺氧模型建立 |
| 3.2.4 右心室测压检测步骤 |
| 3.2.5 右心室肥厚指标评估 |
| 3.2.6 肺组织与右心室取材与存放 |
| 3.2.7 肺组织右心室石蜡切片制作步骤 |
| 3.2.8 苏木素-伊红染色步骤 |
| 3.2.9 弹力纤维染色步骤 |
| 3.2.10 免疫组织化学染色步骤 |
| 3.2.11 TUNEL细胞凋亡检测步骤 |
| 3.2.12 肺组织蛋白提取步骤 |
| 3.2.13 肺组织蛋白定量步骤 |
| 3.2.14 Western Blot操作步骤 |
| 3.2.15 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 PAE可改善慢性缺氧所诱导的右心室压力增加和右心室肥厚 |
| 3.3.2 PAE可改善慢性缺氧诱导的肺血管重构 |
| 3.3.3 PAE可改善慢性缺氧诱导肺血管肌化、增殖和凋亡的影响 |
| 3.3.4 PAE对低氧诱导的BMP-PPARγ-id1信号通路下调的影响 |
| 3.3.5 PAE可抑制慢性缺氧诱导的TGF-β1-Smad3的激活 |
| 3.3.6 PAE可诱导去泛素化酶BRCC36在肺组织中的表达 |
| 3.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 槲皮素与动脉粥样硬化研究进展 |
| 1.1 槲皮素化学结构和理化性质 |
| 1.2 槲皮素吸收代谢 |
| 1.2.1 吸收 |
| 1.2.2 分布 |
| 1.2.3 排泄 |
| 1.2.4 与槲皮素代谢相关的酶类 |
| 1.3 槲皮素的生物学作用 |
| 1.3.1 槲皮素抗氧化作用 |
| 1.3.2 槲皮素抗肿瘤作用 |
| 1.3.3 槲皮素抗动脉粥样硬化作用 |
| 1.3.4 槲皮素与脂质代谢关系 |
| 1.3.5 槲皮素抗器官纤维化作用 |
| 1.3.6 槲皮素与高血压 |
| 第二篇 实验研究 |
| 第1章 槲皮素抗大鼠动脉粥样硬化作用研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 药品及试剂 |
| 1.1.2 仪器 |
| 1.1.3 实验动物 |
| 1.1.4 实验动物分组及给药 |
| 1.1.5 动物取材 |
| 1.1.6 各组大鼠血清脂蛋白水平检测 |
| 1.1.7 各组大鼠主动脉形态学检测 |
| 1.1.8 免疫组化检测 |
| 1.1.9 数据统计及分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠体重及一般状态的影响 |
| 1.2.2 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠肝脏、肾脏指数的影响 |
| 1.2.3 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠血脂水平的影响 |
| 1.2.4 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉组织结构的影响 |
| 1.2.5 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉Col I表达的影响 |
| 1.2.6 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉 α-SMA及Vimentin表达的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 高脂膳食结合VD3腹腔注射法复制大鼠动脉粥样硬化模型的特点 |
| 1.3.2 槲皮素的降血脂作用 |
| 1.3.3 槲皮素抑制平滑肌细胞及成纤维细胞的增殖作用 |
| 第2章 槲皮素动脉粥样硬化大鼠PI3K/Akt通路的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 药品及试剂 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.1.3 免疫组化检测 |
| 2.1.4 Western blotting分析 |
| 2.1.5 RT-PCR分析 |
| 2.1.6 数据统计及分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠主动脉NF-κb表达的影响 |
| 2.2.2 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠主动脉PI3K/Akt蛋白表达的影响 |
| 2.2.3 槲皮素对动脉粥样硬化大鼠主动脉PI3K/Akt m RNA表达的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 槲皮素对ox-LDL刺激人主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 药品及试剂 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 人VSMCs细胞复苏及传代 |
| 3.1.4 实验分组及给药 |
| 3.1.5 MTT检测细胞增殖能力 |
| 3.1.6 Western blotting分析 |
| 3.1.7 RT-PCR分析 |
| 3.1.8 数据统计及分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 槲皮素对ox-LDL诱导人VSMCs增殖能力的影响 |
| 3.2.2 槲皮素对ox-LDL诱导的人VSMCs PI3K/Akt蛋白表达的影响 |
| 3.2.3 槲皮素对ox-LDL诱导的人VSMCs PI3K/Akt m RNA表达的影响 |
| 3.2.4 槲皮素对ox-LDL诱导的人VSMCs NF-κb蛋白表达的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 ox-LDL与VSMCs |
| 3.3.2 ox-LDL通过PI3K/Akt信号通路诱导VSMCs增殖 |
| 3.3.3 槲皮素对ox-LDL诱导的VSMCs过增殖的抑制作用机制 |
| 第三篇 结论与创新点 |
| 1.1 结论 |
| 1.2 创新点 |
| 1.3 工作展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 靶向CypA抗EV71手足口病活性化合物的发现研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.1.1 手足口病简介 |
| 1.1.2 手足口病治疗药物的发展现状及局限性 |
| 1.1.2.1 衣壳蛋白抑制剂 |
| 1.1.2.2 非结构蛋白NS2C抑制剂 |
| 1.1.2.3 非结构蛋白NS3A抑制剂 |
| 1.1.2.4 NS3C蛋白酶抑制剂 |
| 1.1.2.5 NS3D蛋白抑制剂 |
| 1.1.2.6 干扰病毒RNA复制的药物 |
| 1.1.3 亲环素A的简介 |
| 1.1.3.1 CypA结构介绍 |
| 1.1.3.2 与CypA相关的疾病简介 |
| 1.1.3.3 CypA在EV71感染过程中的作用 |
| 1.2 先导化合物的发现 |
| 1.3 衍生物的设计 |
| 1.4 衍生物的合成 |
| 1.5 衍生物的药理活性研究 |
| 1.5.1 衍生物抗EV71病毒活性的测试实验 |
| 1.5.2 衍生物对CypA酶活性百分抑制活性的测定实验 |
| 1.6 构效关系讨论 |
| 1.7 CypA酶抑制抗病毒机制的验证 |
| 1.8 联合给药实验 |
| 1.9 本章总结 |
| 1.10 实验部分 |
| 1.10.1 药理活性测试 |
| 1.10.1.1 衍生物抗病毒活性测试实验 |
| 1.10.1.2 衍生物对CypA酶百分抑制活性的测定实验 |
| 1.10.1.3 Western blot实验 |
| 1.10.1.4 荧光定量PCR病毒感染实验 |
| 1.10.1.5 联合给药实验 |
| 1.10.2 化合物合成 |
| 第2章 靶向CypA抗丙型肝炎活性化合物的发现研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.1.1 丙型肝炎简介 |
| 2.1.2 CypA与HCV复制 |
| 2.1.3 靶向CypA的丙肝治疗药物研究现状 |
| 2.2 先导化合物的发现 |
| 2.3 衍生物的设计及合成 |
| 2.4 衍生物的药理活性研究 |
| 2.4.1 衍生物抗HCV病毒活性的测试实验 |
| 2.4.2 衍生物对CypA酶百分抑制活性的测定实验 |
| 2.4.3 衍生物在体外生理条件下稳定性的测定 |
| 2.4.4 衍生物的初步药代动力学实验 |
| 2.5 联合给药实验 |
| 2.6 本章总结 |
| 2.7 实验部分 |
| 2.7.1 药理活性测试 |
| 2.7.1.1 衍生物抗病毒活性测试实验 |
| 2.7.1.2 衍生物对CypA酶百分抑制活性的测定实验 |
| 2.7.1.3 衍生物在体外生理条件下稳定性的测定实验 |
| 2.7.1.4 衍生物的初步药代动力学实验 |
| 2.7.1.5 联合给药实验 |
| 2.7.2 化合物合成 |
| 第3章 靶向ATF6抗Ⅱ型糖尿病活性化合物的发现 |
| 3.1 前言 |
| 3.1.1 糖尿病简介 |
| 3.1.2 胰岛素与胰岛素抵抗 |
| 3.1.3 内质网应激与未折叠蛋白反应 |
| 3.1.4 转录激活因子6(ATF6) |
| 3.2 先导化合物的发现 |
| 3.3 衍生物的设计 |
| 3.4 衍生物的合成 |
| 3.5 衍生物的药理活性研究 |
| 3.5.1 衍生物ATF6入核促进活性的测试实验 |
| 3.5.2 衍生物对胰岛素信号通路增敏实验 |
| 3.5.3 衍生物肝葡萄糖输出实验 |
| 3.5.4 动物实验 |
| 3.6 构效关系讨论 |
| 3.7 本章总结 |
| 3.8 实验部分 |
| 3.8.1 药理活性测试 |
| 3.8.1.1 材料与试剂 |
| 3.8.1.2 细胞培养 |
| 3.8.1.3 ATF6入核促进活性的测试实验 |
| 3.8.1.4 Western blot实验 |
| 3.8.1.5 肝葡萄糖输出实验 |
| 3.8.1.6 动物实验 |
| 3.8.1.7 数据分析 |
| 3.8.2 化合物合成 |
| 第4章 靶向PDE2抗肺动脉高压活性化合物的发现研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.1.1 肺动脉高压简介 |
| 4.1.2 磷酸二酯酶简介 |
| 4.2 老药新用导向的先导化合物的发现 |
| 4.3 衍生物的设计 |
| 4.4 衍生物的合成 |
| 4.5 衍生物PDE2抑制活性的初步测试 |
| 4.6 衍生物对PDE2抑制活性的初步构效关系总结 |
| 4.7 本章总结及工作计划 |
| 4.8 实验部分 |
| 4.8.1 衍生物的PDE2抑制活性测试 |
| 4.8.1.1 重组蛋白pET15b- PDE2A3(580-941)的纯化 |
| 4.8.1.2 PDE2酶抑制活性测试 |
| 4.8.2 化合物合成 |
| 参考文献 |
| 发表文章 |
| 专利 |
| 致谢 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肺动脉高压发病机制及治疗方案的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
| 致谢 |
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 虎杖的国内外研究进展 |
| 1.2.1 虎杖的植物学研究 |
| 1.2.2 虎杖的化学成分 |
| 1.2.3 虎杖的药理作用 |
| 1.3 丝光绿蝇的防治 |
| 1.4 研究前景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 丝光绿蝇的饲养 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 虎杖花化学成分的分离 |
| 2.5.2 丝光绿蝇成虫毒杀实验 |
| 2.5.3 乙酰胆碱酯酶(AChE)的测定方法 |
| 2.5.4 乙酰胆碱(Ach)的测定方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 生物学现象观察 |
| 3.1.1 虎杖花对丝光绿蝇毒杀现象的生物学观察 |
| 3.1.2 虎杖开花时间 |
| 3.1.3 虎杖花吸引蝇类昆虫的比例 |
| 3.1.4 虎杖花吸引丝光绿蝇的来去时间及温度 |
| 3.1.5 活体花杀虫活性 |
| 3.2 虎杖花对丝光绿蝇引诱物质的化学分析 |
| 3.2.1 GC-MS条件 |
| 3.2.2 分析方法 |
| 3.2.3 测定结果 |
| 3.3 虎杖花粗提物对丝光绿蝇的杀虫活性 |
| 3.4 虎杖花杀虫成分的寻找 |
| 3.4.1 乙醚部位化学成分的分离 |
| 3.4.2 甲醇部位化学成分的分离 |
| 3.5 单体化合物的杀虫活性 |
| 3.5.1 蒽醌类化合物的杀虫症状 |
| 3.5.2 蒽醌类化合物对丝光绿蝇的5 h击倒率 |
| 3.5.3 蒽醌类化合物对丝光绿蝇的10 h死亡率 |
| 3.5.4 蒽醌类化合物对丝光绿蝇在不同时间条件下的的杀虫活性 |
| 3.6 中毒试虫乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱的测定 |
| 3.6.1 乙酰胆碱酯酶(AChE)的测定 |
| 3.6.2 乙酰胆碱(Ach)的测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 虎杖花对丝光绿蝇的吸引、毒杀生物学现象 |
| 4.2 虎杖花中杀虫物质的寻找 |
| 4.3 虎杖花中蒽醌类化合物对丝光绿蝇的作用方式和作用机理 |
| 5 结论 |
| 5.1 虎杖花对丝光绿蝇毒杀现象生物学观察 |
| 5.2 虎杖花对丝光绿蝇引诱物质的化学分析 |
| 5.3 虎杖花杀虫活性物质的分离 |
| 5.4 单体化合物的杀虫活性 |
| 5.5 虎杖花中蒽醌类化合物对丝光绿蝇的毒杀机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 附图 |
| 中英文缩略语一览表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 选题缘由 |
| 1.2 研究背景 |
| 1.3 研究意义 |
| 1.4 研究理论依据及方法 |
| 第二章 研究和方法 |
| 2.1 研究准备 |
| 2.2 实验主要材料和设备 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 两组患者一般临床资料比较 |
| 3.2 两组患者术后 T0、T1、T2 三个时间段血清酶学指标的比较 |
| 3.3 两组患者治疗前后 RVEDV、RVESV、SV 及 RVEF 的比较 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 缺血再灌注的发生机制 |
| 4.2 药物预处理的提出及芪参益气滴丸在心肌缺血再灌注损伤中的作用 |
| 4.3 本临床研究中检测的指标及意义 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论 |
| 缺点与不足 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附图 |
| 在读硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 九龙藤总黄酮对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验药物与试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物筛选 |
| 1.2.2 动物分组与造模 |
| 1.2.3 指标检测 |
| 1.2.3.1 心电图和血流动力学 |
| 1.2.3.2 血清 T-AOC |
| 1.2.3.3 心肌组织 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶活力 |
| 1.2.3.4 血清 CK-MB、cTnI 和 MyoG 含量 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 BCF 对 pit 致急性心肌缺血大鼠心电图 ST 段的影响 |
| 2.2 BCF 对 pit 致急性心肌缺血大鼠血流动力学的影响 |
| 2.3 BCF 对 pit 致急性心肌缺血大鼠血清 T-AOC 的影响 |
| 2.4 BCF 对 pit 致急性心肌缺血大鼠心肌组织 ATP 酶活力的影响 |
| 2.5 BCF 对 pit 致大鼠心肌缺血损伤标志物 CK-MB、cTnI 和 MyoG 的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 九龙藤总黄酮对垂体后叶素致急性心肌缺血大鼠心电图 ST 段和血流动力学的影响 |
| 3.2 九龙藤总黄酮对垂体后叶素致急性心肌缺血大鼠心肌组织 ATP 酶活力的影响 |
| 3.3 九龙藤总黄酮对垂体后叶素急性心肌缺血大鼠血清抗氧化力和损伤标志物的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 九龙藤总黄酮对大鼠急性缺血心肌 Cyt-C、c-fos 及 CaSR 基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验药物与试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 提取心肌组织总 RNA |
| 1.2.1.1 裂解→纯化→分层→沉淀→洗涤→溶解 |
| 1.2.1.2 RNA 溶液的纯度和浓度检测 |
| 1.2.2 RNA 逆转成 cDNA |
| 1.2.3 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR） |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 BCF 对垂体后叶素致心肌缺血大鼠目的基因相对表达含量的影响 |
| 2.2 RT-PCR 检测急性心肌缺血大鼠心肌组织中 Cyt-C、c-fos 及 CaSR 目的基因的表达情况 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 1 前言 |
| 1.1 白杨素研究现状 |
| 1.1.1 天然产物中提取到的黄酮类物质介绍 |
| 1.1.2 白杨素的相关研究 |
| 1.2 白杨素衍生物合成研究现状 |
| 1.2.1 基于增强白杨素水溶性的修饰 |
| 1.2.2 非水溶性基团对白杨素的修饰 |
| 1.3 白杨素及其衍生物的生物活性研究现状 |
| 1.3.1 抗氧化 |
| 1.3.2 抗炎 |
| 1.3.3 对心血管疾病的作用 |
| 1.3.4 降血糖 |
| 1.3.5 提高机体免疫力 |
| 1.3.6 抗病毒 |
| 1.3.7 抗菌 |
| 1.3.8 抗抑郁 |
| 1.3.9 抗芳香酶活性 |
| 1.3.10 抗肿瘤活性 |
| 1.4 本论文研究的目的意义及主要内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究目的 |
| 1.4.3 研究的主要内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验原料与试剂 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 白杨素衍生物的合成 |
| 2.2.2 薄层层析 |
| 2.2.3 质谱 |
| 2.2.4 核磁共振 |
| 2.2.5 熔点测定 |
| 2.2.6 白杨素衍生物生物活性实验 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 白杨素衍生物的合成、最佳条件及结构表征 |
| 3.1.1 单乙酰基白杨素(2) |
| 3.1.2 双乙酰基白杨素(3) |
| 3.1.3 双乙酸乙酯白杨素(4) |
| 3.1.4 双羧甲基白杨素(5) |
| 3.1.5 单苯甲酰基白杨素(6) |
| 3.1.6 双苯甲酰基白杨素(7) |
| 3.1.7 5-乙酸乙酯,7-苯甲酰基白杨素(8) |
| 3.1.8 5-羧甲基白杨素(9) |
| 3.2 抗肿瘤活性的分析 |
| 3.2.1 白杨素衍生物在体外对小鼠H22细胞的IC_(50)值分析 |
| 3.2.2 流式细胞仪对有效合成衍生物影响H22细胞周期的分析 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 6 参考文献 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文和申请专利情况 |
| 8 致谢 |
| 主要英文缩略语索引 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 主要试剂及仪器 |
| 主要实验方法 |
| 统计分析 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文文章 |
| 发表文章及学术活动 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 杨梅素水溶性结构修饰 |
| 一 前言 |
| 二 立题依据与结构设计 |
| 三 实验方案及实验条件探索 |
| 1 杨梅素磺酸钠的合成 |
| 2 葡萄糖醛酸化杨梅素的合成 |
| 四 实验结果及讨论 |
| 五 化合物结构一览表 |
| 六 实验部分 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 芒果苷的初步结构修饰 |
| 一 前言 |
| 二 立题依据与结构设计 |
| 三 实验方案及实验条件探索 |
| 四 实验结果及讨论 |
| 五 化合物结构一览表 |
| 六 实验部分 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分 R-甲氨蝶呤的合成 |
| 一 前言 |
| 二 立题依据 |
| 三 实验方案探索 |
| 四 实验结果及讨论 |
| 五 化合物结构一览表 |
| 六 实验部分 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
