王博[1]（2021）在《疏肝化症方治疗三阴性乳腺癌临床疗效及其作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过临床回顾性队列研究、荷瘤小鼠体内实验和乳腺癌细胞体外实验,初步探究疏肝化症方治疗TNBC临床疗效及其作用机制,为疏肝化症方的进一步研究提供循证医学和基础研究证据,拓宽其临床应用空间。方法:1.应用回顾性队列研究方法,设立对照组和观察组,比较两组患者近期疗效、肿瘤标志物变化、功能状态改善、远期存活和毒副反应发生情况。2.应用乳腺癌4T1细胞构建小鼠乳腺癌模型,设立对照组及疏肝化症方各剂量组,对比各组小鼠的瘤体体积、食量、体质量变化,观察小鼠肿物的病理形态。3.培养乳腺癌4T1细胞,设立正常对照组和疏肝化症方各剂量组:观察疏肝化症方对4T1细胞形态的影响;细胞计数法检测疏肝化症方对4T1细胞生长数量的影响;MTT比色法检测疏肝化症方对4T1细胞增殖抑制率的影响;划痕实验检测疏肝化症方对4T1细胞侵袭能力的影响;PI染色流式细胞术检测疏肝化症方对4T1细胞周期的影响;Annexin V-PI染色流式细胞术检测疏肝化症方对4T1细胞凋亡的影响;RT-PCR检测疏肝化症方对4T1细胞PI3K/AKT/Bax通路相关基因m RNA表达的影响;Western Blot检测疏肝化症方对4T1细胞PI3K/AKT/Bax通路相关基因蛋白表达的影响。结果:1.与对照组比较,观察组患者近期疗效稳定率、肿瘤标志物（CEA、CA125及CA153）总改善率、功能状态总改善率均显着升高（P<0.05）,而远期存活及毒副反应发生情况未见显着差异（P>0.05）。2.疏肝化症方各剂量组作用荷瘤小鼠一定时间,结果发现:第21d时,0.10、1.00和10.00g/kg剂量组小鼠抑瘤率显着增加（P<0.05或P<0.01）;各剂量组小鼠每日进食量未见显着差异（P>0.05）;第14d和21d时,10.00g/kg剂量组小鼠体质量显着增加（P<0.01）;各剂量组小鼠瘤体较小,其血管逐渐减少、出血及坏死面积逐渐增大,差异显着（P<0.01）;肿瘤细胞的形态逐渐消失,核分裂相逐渐减少,且可观察到显着细胞碎裂。3.疏肝化症方各剂量组作用4T1细胞后一定时间,结果发现:各剂量组细胞体积缩小、凝集和碎裂,且与药物浓度存在依赖关系;各剂量组细胞生长数量:正常对照组>低剂量组>中剂量组>高剂量组,差异显着（P<0.01）;各剂量组细胞增殖抑制率显着增加（P<0.05）,且与药物浓度和时间存在依赖关系;各剂量组细胞划痕修复率显着减少（P<0.05）,且与药物浓度和时间存在依赖关系;中、高剂量组G0/G1期、G2/M期细胞DNA含量显着升高,S期细胞DNA含量均显着降低（P<0.05或P<0.01）,且与药物浓度存在依赖关系;各剂量组早期及晚期凋亡率显着升高（P<0.05或P<0.01）,且与药物浓度存在依赖关系;各剂量组PI3K、Akt、caspase-3和Bax的m RNA表达显着上升,而Bc1-2的m RNA表达显着下降（P<0.05或P<0.01）,且与药物浓度存在依赖关系;各剂量组PI3K和Akt的蛋白表达无显着变化,p-PI3K、p-Akt和Bcl-2的蛋白的表达显着下降,而Bax和caspase-3的蛋白的表达显着上升（P<0.05或P<0.01）,且与药物浓度存在依赖关系。结论:1.疏肝化症方对晚期TNBC患者具有治疗作用,可提高肿瘤近期治疗稳定率,降低肿瘤标志物水平,提升功能状态,且无毒副反应。2.疏肝化症方对乳腺癌荷瘤小鼠具有抑瘤作用,可减缓瘤体生长,破坏瘤体组织结构,提高小鼠体质量,且不影响小鼠进食量。3.疏肝化症方对乳腺癌4T1细胞具有抑制作用,可诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,抑制细胞侵袭能力,其机制可能通过调节PI3K/AKT/Bax信号通路上相关基因来实现。
张嘉鑫[2]（2021）在《基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究》文中认为背景:肝硬化（Hepatic cirrhosis,HC）为肝脏受各种损伤因素侵袭,出现以肝纤维化、假小叶为特点的疾病,由乙肝病毒、丙肝病毒、酒精等一种或多种病因引起。5年生存率为14-35%,已成为全球成人死亡率第14高的病因。目前的治疗主要集中在病因与并发症防治方面,肝硬化本身能否被逆转一直存在争议。国内外学者认为,肝硬化实现逆转必然涉及以下三方面环节:细胞外基质（extracellular matrix,ECM）降解,肝细胞再生及肝小叶结构重建。其中,ECM降解为重要前提。近年研究提示,弹性蛋白合成、降解及其交联阻碍了 ECM降解,进而影响逆转过程。弹性蛋白是由肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分泌的,为ECM重要组分。其在正常肝脏中也存在,但含量极低,在肝硬化阶段,沉积迅速。目前,中药单体、复方研究多集中于抗纤维化领域,对早期肝硬化关注较少,需要更多基础研究及高质量的临床试验进一步证实中药疗效优势,并对其相关机制进行深入挖掘。中药复方具有多层次、多靶点的先天优势,但现有研究多聚焦于抑制HSCs活化、促进胶原降解或抗肝窦毛细血管化等方向,尚未对中医药潜在的调控弹性蛋白合成及降解的相关机制进行探索。目的:基于益肝消积方对弹性蛋白合成及降解的调控作用,探索在四氯化碳（CCl4）诱导的肝脏发生损伤形成早期肝硬化病变后,该复方干预早期肝硬化的效果及其可能的机制,以期为益肝消积方进一步成果转化提供理论支撑,同时亦为其它防治早期肝硬化药物的研发提供方向。方法:通过给予SPF级雄性Sprague Dawley大鼠（200±10g）1ml/kg腹腔内注射50%CCl4和橄榄油混合液,2次/周,共6周,构建早期肝硬化模型。7周始,予益肝消积方、阳性对照药（安络化纤丸）,1ml/100g剂量灌胃。空白对照、模型对照组予等剂量蒸馏水灌胃,日1次,持续6周。用生化法检测ALT、AST评估肝功能;行组织病理学染色（HE染色、天狼猩红染色及Masson染色）评估早期肝硬化病变进展、检测肝脏胶原沉积;用弹性纤维染色评估肝脏的弹性蛋白沉积;免疫组织化学染色、免疫荧光染色观察肝组织中TGF-β1、CD68、CD80、CD163和α-SMA表达情况;用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）分析以及实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-βR-Ⅱ、Smad2/3、P-Smad2/3、Smad4、Smad7、Sp1、TNF-α、Ras、MEK1/2、ERK1/2、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1的蛋白水平及bFGF、弹性蛋白（Elastin）的mRNA水平变化,进而对益肝消积方干预早期肝硬化的作用及其相关机制进行初步探索。结果:1.模型制备:予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周。造模6周后,组织病理染色发现,模型组大鼠肝脏出现大量纤维增生,汇管区增宽,形成假小叶,说明模型制备成功。2.一般情况:益肝消积方治疗组及阳性对照安络化纤丸组大鼠毛色、精神状态、进食量等方面均优于模型组。体重上,治疗组大鼠体重均明显高于模型组（P<0.01）;体重增长趋势上,益肝消积方组优于安络化纤丸组。3.肝功能:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST含量升高显着（P<0.01）。益肝消积方和阳性对照组（安络化纤丸）较模型组显着下降（P<0.05或P<0.01）。与安络化纤丸相比,益肝消积方在改善ALT方面疗效较优。4.肝组织病理学表现:从肝脏外观看,模型组大鼠颜色变暗,体积缩小,表面粗糙,边缘较钝,质地较硬韧,部分肝脏在剥离时与胸膜腔其他组织相粘连,难以剥离。益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝体积缩小不明显,表面粗糙不明显,质地较柔韧,未发现与胸腔其他组织粘连,较易剥离。此外,通过组织学染色（HE染色、Masson染色、天狼猩红染色）发现,与模型组大鼠相比,益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝脏炎性细胞浸润程度减轻,病变范围减小,汇管区及周围纤维增生程度减轻,假小叶数量明显减少,且胶原纤维等细胞外基质成分沉积减少（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方抑制胶原沉积的效果较好。说明益肝消积方能够有效抑制炎细胞浸润,减少胶原纤维过度沉积,从而发挥干预早期肝硬化的作用。5.弹性纤维染色结果:为观测弹性纤维变化,我们对其进行了特殊染色。实验发现,在早期肝硬化阶段,模型组弹性纤维含量增多迅速,显着高于空白对照组（P<0.01）。益肝消积方、安络化纤丸治疗组与模型组相比,弹性纤维含量显着减少（P<0.01）,且益肝消积方效果较明显。6.免疫组化、免疫荧光染色结果:与空白对照组相比,模型组TGF-β1、α-SMA、CD68、CD80、CD163阳性表达区域明显增多。与模型组相比,益肝消积方、安络化纤丸组阳性区域明显减少。7.qRT-PCR结果:模型组与空白对照组相比,ElastinmRNA表达量显着升高（P<0.01）。与模型组相比,益肝消积方治疗组ElastinmRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方减少ElastinmRNA表达更显着;模型组bFGF mRNA较正常组升高显着（P<0.01）。对比模型组,益肝消积方治疗组bFGF mRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方下调bFGF mRNA表达更显着。8.Western blot 结果:与空白对照组相比,模型组 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显升高（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2 蛋白表达含量明显下降（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,益肝消积方治疗组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显降低（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2蛋白表达含量明显上升（P<0.05或P<0.01）。结论:1.予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周,共6周,可成功制备早期肝硬化大鼠模型。予益肝消积方干预后,可改善早期肝硬化大鼠体重、肝功能;有效抑制早期肝硬化大鼠肝脏炎性细胞浸润,肝细胞变性、坏死,胶原纤维（Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ）、弹性纤维等ECM沉积,改善病变程度。2.益肝消积方可抑制α-SMA表达,下调CD68、CD80、CD163表达量,抑制CCL2-CCR2通路,进而具有抑制HSCs激活,抑制单核/巨噬细胞浸润,及向M2型巨噬细胞极化,阻止单核/巨噬细胞向损伤肝组织部位迁移,减少Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和Elastin含量,发挥干预早期肝硬化的作用。3.益肝消积方能通过 TGF-β1/Smads、TGF-β1/Ras/ERK 和 bFGF、TNF-α/MEK/ERK信号转导通路抑制胶原纤维、弹性纤维等ECM合成,发挥干预早期肝硬化的作用。4.益肝消积方可通过调节MMPs/TIMPs酶系,促进胶原纤维、弹性纤维等ECM降解,达到干预早期肝硬化的作用。
王晗栋[3]（2021）在《地龟线粒体基因组全序列分析及龟鳖类系统发生的探讨》文中指出早在两亿年前的三叠纪晚期,巨大的恐龙在陆地上横行的时候就已经出现了龟鳖类动物的影子。根据爬行动物数据库（reptile-database）的记录来看,已记载并被命名的龟鳖类动物共361种。龟鳖类动物的栖息地随着人类对环境的大肆破坏而渐渐消失,又因为其他种种原因,诸如作为食物或是作为宠物这样的理由,可怜的龟鳖类动物无法逃脱被人类疯狂捕获的命运。保护龟鳖类种质资源也是刻不容缓,因此人类对龟鳖类动物有必要进行深入研究,包括但不限于对龟鳖类动物的系统发生关系以及物种分类作更进一步了解。典型的脊椎动物线粒体基因组是序列总长度在大约16Kb-20Kb的共价闭合的双链环状DNA。由于线粒体基因组具有结构简单、呈母性遗传且较少发生基因重排等相对来说优于核基因组的特点,被广大研究人员在进行动物遗传进化以及系统发生关系的相关研究时作为关键的研究对象。截至目前（2021年3月）,在NCBI正式公布出的龟鳖类动物的完整的线粒体基因组中一共包含了132个物种,这意味着远超过一半的龟鳖类,人类尚未能测得其完整的线粒体基因组。而在龟鳖目中物种数量最多的就是地龟科了。然而,71种地龟科里仅36种被测得了线粒体全基因组。显然,利用线粒体全基因组数据来研究龟鳖目动物的系统发生关系还需要我们做许多工作。本研究中获得了地龟（Geoemyda spengleri）线粒体基因组全序列,并对其氨基酸组成、相关同义密码子使用偏好性等参数进行了统计分析。地龟线粒体基因组全长为17448 bp,共38个基因,其中23个t RNA比典型的脊椎动物线粒体基因组多了1个t RNA-Glu假基因,13个蛋白编码基因（Protein Coding Genes,PCGs）和2个r RNA及一个D-环区（D-loop region）。其基因组结构、基因排列顺序和碱基组成均与典型的脊椎动物略有区别,存在基因重排现象,并提出了演化假说。地龟NADH3基因的第215位点存在额外核苷酸G插入。地龟的控制区序列长度分别为1937bp,在靠近5’端的位置发现了3个保守序列框（CSB1-3）;在地龟控制区的5’端,存在一个基序（motif）长为23 bp（ATATTATTATATTATTATATATC）的长片段串联重复序列（重复3次）,在其3’端发现有AT含量丰富的微卫星序列。本文结合从NCBI上检索到的另外22种龟鳖动物线粒体全基因组序列,以一种鳄及一种蜥蜴做外群,基于线粒体的13个蛋白编码基因的合并序列数据,采用最大似然法（maximum likelihood method,ML）,并选用GTR+G+I作为最佳的碱基替换模型,重建了龟鳖类动物的系统发生树,从而探讨地龟在龟鳖目动物中的系统进化地位。ML树显示缅甸棱背龟（Batagur trivittata）和阿萨姆棱背龟（Pangshura sylhetensis）先构成姐妹群,再与地龟聚为一支,之后再与地龟科下的另外六个属的龟并为一支从而组成地龟科。结合龟类的栖息地分布等信息确定了地龟属与潮龟属的亲缘关系最近。
张林,周剑光,张涛,何力[4]（2020）在《3个不同品系中华鳖间外形、核型以及乳酸脱氢酶同工酶表达的差异》文中认为为丰富中华鳖（Pelodiscus sinensis）淮河品系、黄河品系及日本品系的种质资源资料,以淮河品系、黄河品系和日本品系中华鳖为研究对象,开展了三者间形态学指标、核型和乳酸脱氢酶（LDH）同工酶表达差异的研究。结果表明:3个不同品系中华鳖的形态特征、核型及同工酶表达均存在着品系差异性。雌性黄河鳖的背甲宽/背甲长比值明显比其他鳖大,而雄性淮河鳖此比值最小。雌性淮河鳖体高/背甲长明显较其他鳖偏大。3个品系中华鳖体细胞染色体数均为2N=66,未发现性染色体。黄河品系组型公式为2N=16M+10SM+8ST+12T+20MC,NF=92;日本品系组型公式为2N=16M+12SM+8ST+16T+14MC,NF=94;淮河品系组型公式为2N=4M+8SM+20T+34MC,NF=78。淮河品系组型及臂数与黄河品系及日本品系差异极显着（P<0.01）;日本品系与黄河品系差异不显着（P>0.05）。肌肉组织中乳酸脱氢酶可作为各自的遗传标记,由Ldh-A、Ldh-B和Ldh-C 3个基因编码,第1条酶带表现较弱活性,其他酶带活性较强。淮河品系表达最丰富,检测到9条酶带。淮河品系与日本品系及黄河品系肌肉LDH条带数及迁移率差异极显着（P<0.01）,日本品系与黄河品系差异不显着（P>0.05）。3个品系差异性可能由其特异性的遗传基因调控。本研究可为中华鳖种质资源评估、种质标准制定、种质鉴定及新品种（系）的选育提供参考依据。[中国渔业质量与标准,2020,10（6）:59-67]
张越[5]（2020）在《中华真地鳖血淋巴抑制红白血病HEL细胞凋亡的分子机制初步研究》文中认为中华真地鳖（Eupolyphaga sinensis Walker）是一种传统的中药材,在中药处方中得到广泛应用。长期的入药实践表明,其雌虫可以入药,具有镇痛、保健、增强人体免疫力等功效。现代药理研究又发现地鳖虫具有广泛的药理作用,具有抗血栓、抗氧化、抗肿瘤等功效。昆虫血淋巴是一种重要的生物材料,研究表明昆虫血淋巴中含有的抗菌肽具有抗细菌、抗真菌、抗癌的作用,且对哺乳动物的毒副作用小。因此,本研究探究了中华真地鳖血淋巴（E.sinensis Walker hemolymph,ESWH）的抗肿瘤活性,发现ESWH对人红白血病细胞株HEL表现出较强的增殖抑制作用。以HEL细胞为实验对象,研究ESWH对HEL细胞增殖、凋亡、周期、迁移的影响并探究其机制。期望为进一步研究ESWH抗肿瘤作用提供实验依据,同时为抗肿瘤药物开发提供一些新的思路。主要研究内容及结果如下:1.ESWH对肿瘤细胞的体外抑制作用的研究为了探究ESWH对癌细胞（人红白血病细胞HEL、人前列腺癌细胞PC3、人黑色素瘤细胞WM9、人乳腺癌细胞MDA-MB-231）体外生长的影响。本研究采用穿刺法收集ESWH及MTT法研究ESWH的抗癌活性。ESWH能抑制4种供试细胞的增殖,且呈浓度依赖性,在血淋巴浓度为100 mg/L时,对各细胞抑制最显着,各处理组相对于对照组的细胞活力分别为（16.40?0.72）%、（60.56?1.82）%、（49.72?4.59）%、（54.17?2.30）%,呈现出较好的抑制效果,其中ESWH对HEL细胞的增殖抑制最显着,因此,HEL细胞被选用为后续实验对象。2.ESWH对HEL细胞的体外抑制作用的研究为研究ESWH对人红白血病HEL细胞增殖及凋亡的影响,本研究采用不同质量浓度（0～80 mg/L）的ESWH体外作用于HEL细胞,利用MTT法测定ESWH对HEL细胞的存活的影响;Hoechst 33258和Annexin V-FITC荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化及定量检测凋亡细胞百分比;流式细胞术分析HEL细胞周期分布;Transwell小室模型检测ESWH对HEL细胞纵向迁移的影响。MTT结果显示,ESWH以剂量和时间依赖的方式抑制HEL细胞的体外增殖,24、36、48 h时ESWH对HEL细胞的IC50分别为22.72、20.78、16.96 mg/L,形态学观察表明,经过ESWH处理的HEL细胞发生了显着的形态学变化,其表现为HEL细胞密度降低、皱缩变小,细胞之间的粘附降低;Hoechst 33258凋亡染色观察结果表明,随着ESWH的作用浓度增加,HEL细胞出现明显的凋亡,高浓度下出现致密浓染。Annexin V FITC染色结果也显示凋亡细胞（呈现绿色荧光）随着血淋巴作用浓度增加而增加,流式细胞术定量分析结果表明经过ESWH处理后,HEL细胞发生较明显的早晚期凋亡;流式细胞术结果表明,ESWH能诱导HEL细胞发生周期G2/M阻滞;此外,ESWH明显抑制了HEL细胞迁移到Transwell下室。3.ESWH抑制HEL细胞增殖、诱导HEL细胞凋亡的分子机制研究为了探究ESWH抑制HEL细胞增殖、诱导HEL细胞凋亡的分子机制研究,本研究利用RT-PCR、荧光定量PCR（RT-q PCR）、Western blot等技术检测HEL细胞中相关基因和蛋白表达的变化。结果发现,ESWH能够上调HEL细胞内Caspase-3、Caspase-8、Bax、Cytc、P53基因的m RNA表达水平,并能显着下调HEL细胞内PARP1、Bcl-2的m RNA表达水平;接下来,我们从蛋白水平上探究了ESWH对HEL细胞内凋亡相关蛋白的影响,结果表明,ESWH处理组细胞促凋亡相关蛋白Bax、Cyt C、Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、Cleaved PARP1、P53的表达显着上调,而HEL细胞内Bcl-2与Fli-1的表达则显着下调;ESWH处理能引起HEL细胞发生G2/M期阻滞,于是我们探究了ESWH对HEL细胞内周期相关蛋白表达的影响,结果显示,Cyclin D1与CDK4蛋白的表达以剂量依赖性方式显着降低,ESWH高剂量组（40 mg/L）下Cyclin B1和Cdc2表达明显上调;我们探究ESWH对HEL细胞内迁移侵袭相关蛋白表达的调控,趋化因子CXCR4表达随着ESWH作用浓度的增加而下调,ESWH高剂量组（40 mg/L）MMP-2和MMP-9的表达显着下调;此外,我们还探究了ESWH对HEL细胞内MAPK信号通路中关键蛋白P38与ERK1及其磷酸化水平表达的影响,结果发现,随着ESWH作用浓度的增加,P-ERK1与P-P38表达水平以剂量依赖性方式显着上调,P-ERK1与P-P38在ESWH 10 mg/L或更高浓度时表达显着上调。
谢洪民[6]（2020）在《环太湖地区水生植物多样性和入侵植物凤眼蓝水位响应实验研究》文中进行了进一步梳理环太湖地区经济发达人口密集,近年来面临严重的富营养化、生境退化和外来水生物种入侵等环境问题。为明确环太湖地区河道和湖泊沿岸带本地和外来水生植物多样性现状,评估这一地区水生植物退化和外来植物入侵程度,于2018年开展水生植物多样性调查。在调查结果的基础上,发现入侵植物凤眼蓝在野外入侵严重,如部分河段的凤眼蓝出现了越冬现象和在部分水位出现了扎根定植现象,针对这两种在自然状态下产生的生存现象设置了两个受控实验,并引入本地同生态位的植物水鳖,探究水位对凤眼蓝生长和繁殖的影响。研究结果表明:1.（1）在环太湖地区共计进行了65个群落样方分析,记录到38种水生植物,分属22科29属;（2）环太湖地区31个河道样方中入侵沉水植物水盾草重要值最高,其次为另一种入侵漂浮植物凤眼蓝,在34个湖泊沿岸带样方中凤眼蓝重要值最高;（3）环太湖地区河道和湖泊沿岸带样方生物多样性分别随着水盾草和凤眼蓝盖度的增加而降低,显示外来入侵植物降低了水生植物多样性;（4）太湖湖区沿岸带目前尚未发现有入侵植物,但需加强防范凤眼蓝漂浮生长分布范围扩大和水盾草沿河道入侵太湖湖区。环太湖地区同时面临水生植物覆盖面积减少和外来植物入侵问题,建议这一地区加强对外来入侵植物传播的监控,并开展湖泊沿岸带水生植被修复工作。2.（1）在除水位外同样的实验条件下,经历越冬的凤眼蓝植株在同水位条件下,其生物量、叶、根系面积、叶根系重量和株数方面都要略高于未经历越冬的凤眼蓝植株,但在通过SPSS 19处理后,发现其差异并不显着。因而是否经历越冬对凤眼蓝的生长,影响不显着。（2）不同水位条件下,凤眼蓝植株的各项形态学指标（同结论1中所描述的各项生理指标）有显着差异,大致表现为随水位升高而降低。对比越冬组与非越冬组中,该表现相近。而对于叶片的Chl-a含量和总糖含量上,水位对凤眼蓝的影响与形态学指标上相近,即:随水位升高而降低。证明水深对于凤眼蓝的生长影响显着。（3）部分组中发现凤眼蓝的根系触碰到了底质,且发现触碰到底质的植株较根系未触碰到底质的植株生长繁殖更旺盛。在实验的数据分析上证明了这样的现象。凤眼蓝的根系会在较低水位的条件下,扎根于底质中,吸收底质中的营养,加速其生长。3.（1）不同水位对于凤眼蓝和水鳖植株的生长均具有显着的影响。大体上呈现出随水位降低,植物生长更加旺盛的特点。（2）凤眼蓝和水鳖为漂浮植物,但在特定的条件下,两者的根系可以接触底质并扎根于底质之中。（3）水位通过影响凤眼蓝和水鳖根系能否扎根于底质中,进而影响到两者的生长与繁殖。无论是凤眼蓝还是水鳖,扎根后的植株可以通过根系,吸收更多的营养从而加剧其生长与繁殖。由于实验桶的限制,两种植物在生长至水面全部覆盖状态的下,会继续在垂直方向上生长,凤眼蓝会挺立在水面之上,而水鳖因其茎叶无法像凤眼蓝一样坚挺,会使得新长出的叶片层层覆盖,位于上面的叶片会遮挡下面的叶片,从而影响到位于较低层的叶片生长。
赵衍东[7]（2020）在《升麻鳖甲汤加减方联合节拍式化疗维持治疗“正虚毒瘀型”老年AML的临床研究》文中研究指明目的:1.观察升麻鳖甲汤加减方联合节拍式化疗维持治疗“正虚毒瘀型”老年AML的临床疗效2.进行升麻鳖甲汤加减方联合节拍式化疗维持治疗“正虚毒瘀型”老年AML的安全性评价3.改善老年AML患者的生活质量及体力状况（ECOG）,改善患者的中医证候评分及老年综合评估（CGA）。方法:本研究选择符合纳入标准的老年AML患者,根据患者意愿分为治疗组和对照组,每组各15例患者。治疗组采用升麻鳖甲汤联合节拍式化疗。根据成人急性髓系白血病（非急性早幼粒细胞白血病）中国诊疗指南（2017年版）,对照组接受标准剂量阿糖胞苷（Ara-C）为基础的维持化疗方案,阿糖胞苷用量75-100mg/m2/d,可联合蒽环类药物（米托蒽醌、柔红霉素、去甲氧柔红霉素）,共4-6疗程。治疗前及4疗程后根据血常规、MRD、先令式分类、外周血流式细胞学及《Zubrod-ECOG-WHO评分》、《中医证候评分表》、老年综合评估量表（CGA）进行评分,通过对量表进行评分比较各组的临床疗效差异。结果:1.经过治疗后,两组患者均未出现复发,治疗组有1例患者经过治疗从CRi转变为CR,两组组间临床疗效对比未显示出统计学差异,两组治疗后MRD水平未见统计学差异。2.两组治疗后《Zubrod-ECOG-WHO评分》、《中医证候评分表》、老年综合评估量表（CGA）与治疗前比较均有改变,差异有统计学意义（P<0.05）,治疗组治疗后《中医证候评分表》、老年综合评估量表（CGA）等均优于对照组,具有统计学意义（P<0.05）。结论:升麻鳖甲汤联合节拍式化疗在老年AML患者的维持治疗中的疗效不劣于常规化疗,具有较好的安全性,与常规化疗相比能改善老年人的体能及生存状态,提高CGA评分,从而改善部分老年AML患者的预后。
李伟[8]（2020）在《含钙中药药性规律及在白虎汤中抗高热惊厥药效的作用研究》文中研究说明目的:系统分析含钙中药药性规律;研究白虎汤（Bai-Hu-Tang,BHT）对高热惊厥（Febrile seizures,FS）模型大鼠的作用;探讨不同含钙中药在BHT中对FS模型大鼠的影响。方法:第一章基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律查阅《中国药典》、《中华本草》、《中药大辞典》和《安徽省中药饮片炮制规范》统计主要含钙的中药29味,检索文献确定Ca2+含量和阴离子含量,制成含钙中药原始数据库。运用Clementine 12.0软件进行关联分析,SPSS 23.0软件进行聚类分析和主成分分析,探讨含钙中药的一般药性规律和主要成分。第二章白虎汤对高热惊厥模型大鼠的作用采用恒温45℃热水浴诱导幼年SD大鼠FS模型,实验大鼠分为7组,空白组,模型组,硫酸镁（Mg SO4）组、布洛芬组和BHT高、中、低剂量组,每组10只,共70只。称量大鼠实验前后体重;记录大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间;HE染色观察大鼠海马区损伤;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脑组织Glu、Asp、TNF-α及IL-1β含量和血清TNF-α及IL-1β含量;比色法检测血清和脑组织Ca2+含量;烘干法测量大鼠脑组织含水率,同时运用实验动物体组成测定分析仪检测大鼠总含水率（Total Body Water,TBW）,细胞外含水率（Extracellular Fluid,ECF）,细胞内含水率（Intracellular Fluid,ICF）,脂肪量（Fat Mass,FM）,除脂肪量（Free Fat Mass,FFM）和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）等生物电阻抗指标。第三章不同含钙中药在白虎汤中对高热惊厥模型大鼠的作用采用恒温45℃热水浴诱导幼年SD大鼠FS模型,实验大鼠分为空白组,模型组,Mg SO4组、布洛芬组,BHT组,BHT除石膏组,石膏组,BHT除石膏加Ca SO4·2H2O组,BHT除石膏加石决明组,BHT除石膏加鳖甲组,每组10只,共100只。称量大鼠实验前后体重;记录大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间;HE染色观察大鼠海马区损伤;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脑组织Glu、Asp、TNF-α及IL-1β含量和血清TNF-α及IL-1β含量;比色法检测血清和脑组织Ca2+含量;同时运用实验动物体组成测定分析仪检测总含水率（Total Body Water,TBW）,细胞外含水率（Extracellular Fluid,ECF）,细胞内含水率（Intracellular Fluid,ICF）,脂肪量（Fat Mass,FM）,除脂肪量（Free Fat Mass,FFM）和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）等生物电阻抗指标;Western blot检测不同含钙中药在BHT中对FS模型大鼠脑组织中钙调蛋白（Calmodulin,CaM）和水通道蛋白4（Aquaporin4,AQP4）的表达。结果:第一章基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律关联分析结果显示含钙中药多性寒,味咸,归肝经,主要功效平肝潜阳和安神镇惊;聚类分析结果表明含钙中药主要分为碳酸钙组、磷酸钙组和硫酸钙组,三者占含钙中药96.5%;由主成分分析结果推测含钙中药的主要成分为Ca2+、CO32-和PO43-离子。第二章白虎汤对高热惊厥模型大鼠的作用与模型组相比,Mg SO4组、布洛芬组、BHT高剂量组和BHT中剂量组大鼠体重显着升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,布洛芬组、Mg SO4组、BHT高剂量组和中剂量组大鼠惊厥潜伏期延长,惊厥持续时间逐渐缩短（P<0.01）。模型组大鼠海马各区神经元形态发生显着的病理改变,布洛芬组、Mg SO4组、BHT高剂量组和BHT中剂量组能显着改善模型大鼠海马区神经元损伤。布洛芬组、Mg SO4组、BHT高剂量组和BHT中剂量组大鼠脑组织Ca2+,Glu、Asp、TNF-α及IL-1β含量较模型组显着降低（P<0.01,P<0.05）;与模型组相比,BHT高剂量组和BHT中剂量组大鼠血清Ca2+含量显着升高（P<0.05）;Glu、Asp、TNF-α及IL-1β含量显着降低（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,布洛芬组、Mg SO4组、BHT高剂量组和BHT中剂量组大鼠脑组织含水率、TBW、ECF和FFM显着降低（P<0.01,P<0.05）,ICF、FM和BMI显着升高（P<0.01,P<0.05）。第三章不同含钙中药在白虎汤中对高热惊厥模型大鼠的作用与模型组相比,Mg SO4组、布洛芬组、BHT组、石膏组和BHT除石膏加Ca SO4·2H2O组大鼠体重显着升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,布洛芬组、Mg SO4组、BHT组和石膏组大鼠惊厥潜伏期延长,惊厥持续时间逐渐缩短（P<0.01,P<0.05）。模型组大鼠海马各区神经元形态发生显着的病理改变,布洛芬组、Mg SO4组、BHT组、石膏组和BHT除石膏加石决明组能显着改善模型大鼠海马区神经元损伤。与模型组相比,布洛芬组、Mg SO4组、BHT组大鼠脑组织Ca2+,Glu、Asp、TNF-α及IL-1β含量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,布洛芬组、BHT组、石膏组和BHT除石膏加石决明组大鼠血清Ca2+显着升高（P<0.01,P<0.05）;血清TNF-α及IL-1β含量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,布洛芬组、Mg SO4组和BHT组大鼠脑组织含水率、TBW、ICF和FFM显着降低（P<0.01,P<0.05）,ECF、FM和BMI显着升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,Mg SO4组、布洛芬组,BHT组,BHT除石膏组,BHT除石膏加Ca SO4·2H2O组,BHT除石膏加石决明组,BHT除石膏加鳖甲组CaM显着降低（P<0.01,P<0.05）。与模型组相比,Mg SO4组、布洛芬组,BHT组,BHT除石膏组,石膏组,BHT除石膏加Ca SO4·2H2O组,BHT除石膏加石决明组,BHT除石膏加鳖甲组AQP4显着降低（P<0.01）。结论:1.含钙中药多性寒、味咸、归肝经,主要功效为平肝潜阳和安神镇惊;主要分为碳酸钙、磷酸钙和硫酸钙三类;主要成分是Ca2+、CO32-和PO43-离子;对小儿FS和高血压有潜在的治疗效果。2.BHT中剂量组通过降低FS模型大鼠血清和脑组织炎症因子,升高血清Ca2+含量,降低脑组织细胞内Ca2+含量从而缓解模型大鼠惊厥症状和脑水肿现象,并预防FS的重复发作。3.BHT通过降低FS模型大鼠血清和脑组织炎症因子,升高血清Ca2+含量,降低脑组织细胞内Ca2+含量并降低CaM和AQP4表达,从而缓解模型大鼠惊厥症状和脑水肿现象,并预防FS的重复发作。不同的含钙中药不能互相替代入药,其具体作用机制有待进一步研究探索。
熊磊[9]（2019）在《乌龟性别决定系统和性腺早期发育与成体功能维持表观遗传的研究》文中指出乌龟（Mauremys reevesii）是典型的具温度依赖性性别决定（TSD,Temperature-dependent sex determination）机制的物种,当受精卵孵化温度在32℃时,子代全为雌性;孵化温度在26℃时,子代全为雄性;孵化温度为29℃时,子代雌、雄比例约为1:1。迄今,有关TSD的分子机制研究成果丰硕,然而,具TSD的物种是否具有性染色体的分化一直存有争议,且外界信号究竟如何影响性别关键基因的表达尚不清晰。本文以乌龟为研究对象,采用性腺发育的形态学观察、RNA干涉、表观遗传分析、高通量测序等分子生物学技术研究了其性别决定系统和性腺早期发育与成体功能维持的表观遗传。主要研究结果如下:1.采用三个温度梯度孵化受精卵,鉴定胚胎发育温度敏感期性腺形态特征。通过雄性孵化温度（male producing temperature,MPT,26℃）、雌性孵化温度（female producing temperature,FPT,32℃）和关键温度（Pivotal temperature,PvT,29℃）下的乌龟受精卵孵化实验,比较结果显示胚胎性腺发育始于第15期,15期至21期雌、雄性腺发育并无明显差异,根据前人的研究,确定15期至21期为性腺发育温度敏感期。雌雄性腺发育在第23期开始出现不同的发育特征:雄性性腺呈椭圆形;而雌性性腺呈细长形,并伴有输卵管的分化,显示性腺已经分化完全。2.采用分子性别鉴定方法,研究了乌龟性别决定系统。乌龟雌雄个体来自本实验室PvT下孵化的四年龄龟,采用荧光定量PCR（qPCR）的方法比较18个与性染色体有关基因（ADARB2、ATP2A2、ENOX2、LPAR4、GPATCH8、CCDC92、MED13L、SP4、PEBP1、GAD2、ITGB1、ARMC4、DMRT1、SOX9、AMH、CYP19A1、WT1和SF1）的雌雄拷贝数差异,以中华鳖（ZZ/ZW型）为对照组,结果表明其中17个基因的雄性拷贝数是雌性的2倍,推测它们位于Z染色体上,有1个基因的拷贝数是1:1,推测其位于常染色体上。采用荧光原位杂交技术（FISH）对PvT孵化的子代性别决定相关基因AMH和WT1进行验证,结果显示在雄性个体中均存在2个杂交信号;而雌性个体中仅有1个杂交信号,首次证实乌龟为ZZ/ZW型性别决定系统。乌龟为典型的具TSD机制物种,后代性别比仍然受到温度的调控,推测乌龟虽有性染色体分化,但性别决定主要受到表观遗传的影响,其性别决定机制可能为GSD+TE类型。3.性腺发育温度敏感期DNA甲基化对性别决定相关基因表达的影响。采用亚硫酸氢盐修饰测序法比较分析了乌龟胚胎MPT和FPT的17期、19期和21期性腺性别相关基因（CYP19A1、FOXL2、DMRT1、SOX9和AMH）近端启动子区的DNA甲基化水平,同时采用qPCR技术检测了5个性别相关基因的mRNA表达水平。结果表明性别相关基因的mRNA表达水平与启动子区的CpG甲基化状态呈极显着负相关（CYP19A1:r=-0.98,P<0.001;FOXL2:r=-0.95,P<0.01;DMRT1:r=-0.87,P<0.001;SOX9:r=-0.82,P<0.01;AMH:r=-0.94,P<0.001）。CYP19A1和FOXL2的表达水平在FPT下显着高于MPT（P<0.0001）,DMRT1、SOX9和AMH的表达水平MPT下显着高于FPT（P<0.0001）。本研究还采用qPCR技术检测了MPT、PvT和FPT性腺的17期、19期和21期的DNA甲基化酶基因（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、TET1、TET2和TET3）以及组蛋白去甲基化酶基因（KDM5B、KDM1A、KDM6B、KDM8、KDM3B、NO66、JMJD6和PHF2）的mRNA表达。结果表明,NO66和KDM6B的表达随温度上升显着下降（P<0.0001）,且NO66和KDM6B的表达量与雄性性别相关基因DMRT1、SOX9和AMH的表达量极显着正相关（NO66-DMRT1:r=0.96,P<0.001;NO66-SOX9:r=0.87,P<0.001;NO66-AMH:r=0.9,P<0.001;KDM6B-DMRT1:r=0.94,P<0.001;KDM6B-SOX9:r=0.85,P<0.01;KDM6B-AMH:r=0.88,P<0.001）。该结果提示组蛋白去甲基化酶基因KDM6B和NO66均受到温度调控表达,它们的组蛋白去甲基化作用可促进雄性性腺发育。鉴于KDM6B基因的作用前人已经阐明,因此NO66基因如何发挥作用值得进一步研究。4.组蛋白去甲基化酶基因NO66对乌龟胚胎性腺发育的影响。采用携带NO66 mRNA特异性shRNA的慢病毒载体转染乌龟第14期胚胎,成功构建了NO66基因表达敲低模型。NO66的低表达能导致乌龟MPT胚胎雌性化。与对照组相比,第21期胚胎中,DMRT1基因启动子区甲基化程度显着上调（P<0.001）,而表达量显着下调（P<0.001）,DMRT1下游基因SOX9和AMH的表达量显着下调（P<0.001）,而CYP19A1和FOXL2的表达量显着上调（P<0.001）,但KDM6B的表达并没有显着降低。该结果提示,去甲基化酶基因NO66也可通过调控雄性性别发育关键基因DMRT1基因的表达,促进雄性性腺发育,推测其作用或是在KDM6B的下游,或是两者共同发挥作用。由于NO66和KDM6B基因双敲模型胚胎致死率过高,难以获得有效证据,需要采用免疫共沉淀等技术进一步验证NO66和KDM6B之间相互关系。5.高通量转录组测序比较睾丸和卵巢组织mRNAs和miRNAs的差异表达。通过比较转录组学分析,筛选了差异表达基因（DEGs,differentially expressed genes）,KEGG分析了与性腺维持相关的通路,推测了性别决定基因分子信号级联调控网络。本文还同时注释和分析了乌龟的miRNA及差异表达特征,并预测映射到相应靶基因。基于miRNAs和靶标基因调控网络,着重进行了性别决定相关基因靶标富集分析,初步构建了乌龟成体性腺配子发生和功能维持的关键分子机制和调控网络。本研究以具TSD机制的乌龟为对象,首次证实了乌龟具有ZZ/ZW性别决定系统,推测其性别决定机制可能为GSD+TE类型;探究了表观遗传对胚胎早期性腺发育的影响和在成体性腺功能维持的作用;采用基因操作技术,证明了NO66对MPT胚胎性腺发育的促进作用。本研究提供了表观遗传调控TSD的直接证据,对深入研究TSD的分子机制具有重要的科学意义。
朱双燕[10]（2019）在《叙事生命树研究方法的适用性探析 ——基于浙江当代异类婚故事文本的考察》文中提出2001年,刘魁立发表《民间叙事的生命树——浙江当代“狗耕田”故事情节类型的形态结构分析》一文,提出叙事生命树概念,旨在以科学的文本统计、比较、归纳工作修正阿尔奈、汤普森的“类型”概念。这一研究方法以“情节基干”作为判定类型的新标准,以“母题链”呈现类型变体之间的结构关系,引起了激烈的讨论,成为我国民间故事学近四十年来引用率最高的论文。然而,通过其他情节类型来验证这条思路适用与否的研究却很少。本文搜集96本《浙江省民间故事集成》（市、县卷本）中的296篇异类婚故事文本,将叙事生命树研究方法落实于各组文本的类型判定和结构分析中,系统地探讨了叙事生命树研究方法在类型形态学研究中的可行性、适用性及其与故事文化内涵研究结合的可能性,具体提出三点问题并得出相关结论。第一,情节基干标准是否适用于判定所有类型?本文将这一标准落实于全部文本组别后,成功识别出11个类型和5个准类型,但不能判断数量少于3则的文本组别的情况。可见,情节基干标准在文本数量充足的情况下是完全适用的,文本数量稀少时,需扩大材料范围或借助已有类型索引辅助判断。虽有一定的局限性,这一标准建立在客观统计学结果之上,操作过程科学,操作结果稳定,在故事分类工作中的优势极为明显,特别适宜于鉴定模棱两可的类型是否成立、明确类型的边界范围及辨别不同类型中相似叙事成分的关系。本文正是以此判定AT400D“其他动物变的妻子”故事类型不成立、明确螺女故事类型与其他异类妻故事类型相互独立的关系、考证龙女故事的范围大小,从而有效地厘清了异类婚故事类型群的分类体系及类型间的相互关系,修正了传统索引中不甚明确的部分。这些实践成果有力地证明了,情节基干标准是修正AT类型的有效方案。第二,叙事生命树以母题链为单位呈现类型内部各类变体的组织结构关系,这对于理解故事类型有何作用?通过对螺女、龙女、蛇郎、青蛙子等故事类型的重点考察,本文认为,母题链是类型讲述过程中自然形成的叙事段落,代表了故事内部某种相对独立的状态与矛盾。母题链不平衡地分布于生命树中,构成情节基干、积极母题链与消极母题链,区分了不同状态与矛盾在故事讲述中的先后顺序与主次关系,这对于理解故事类型的主题和深层内涵具有重要意义。以螺女故事类型为例,两段母题链分别解决了男子无偶和螺女身份不被认可的矛盾,实现了状态的新的平衡,通过矛盾解决方式,可以清晰地看到该类型所反映的异类观念及其现实所指。为进一步阐明母题链链接、内生和替代关系所蕴含的叙事逻辑,本文绘制模型,总结了通过这三种关系解析类型主旨的一般方法。这一模式特别适用于叙事线索较长、内部异变形式复杂的故事类型,如龙女故事、青蛙子故事等,对于后续研究有一定的参考价值。第三,叙事生命树研究方法能否及如何与故事文化研究进一步结合?首先,生命树研究方法依托于较小范围内的文本材料,可以落实于省级索引的编制和地方类型的识别。地方类型是类型和类型变体的区域性表达,通过这一概念,可以进一步分析区域历史文化的独特性。其次,生命树呈现的叙事结构与故事文化内涵研究具有多种结合的可能性。本文以蛇郎故事与狗耕田故事的结构比较研究为例,揭示了两个类型所反映的的性别观念和父权话语秩序,论证了这一研究方向的可行性。这一部分的探讨浅尝辄止,有待后续研究的补充。基于上述研究成果,本文认为,将叙事生命树研究方法进一步运用于故事分类工作和故事文化学研究中是可行且有价值的。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 疏肝化症方对三阴性乳腺癌的临床疗效研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 疏肝化症方对乳腺癌小鼠的抑瘤作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 疏肝化症方可通过PI3K/AKT/Bax通路抑制小鼠乳腺癌的发生和发展 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药防治肝硬化的研究现状 |
| 1 肝硬化病名渊源 |
| 2 中医对肝硬化病因病机的认识 |
| 3 中医治疗肝硬化思路 |
| 4 导师论治肝硬化的经验 |
| 5 中医药防治肝硬化的机制探讨 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 弹性蛋白及其调控因子在早期肝硬化中的作用 |
| 1 流行病学 |
| 2 肝硬化现代研究进展 |
| 3 弹性蛋白在肝硬化发生中的作用 |
| 4 调控弹性蛋白合成的细胞因子 |
| 5 调控弹性蛋白降解的细胞因子 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 研究一 益肝消积方对早期肝硬化的干预作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究二 益肝消积方调控弹性蛋白合成干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究三 益肝消积方调控弹性蛋白降解干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 龟鳖类线粒体基因组研究进展 |
| 1.1 线粒体基因组特点及其应用 |
| 1.1.1 脊椎动物线粒体基因组的结构特点 |
| 1.1.2 脊椎动物线粒体基因组的遗传特征 |
| 1.2 龟鳖类动物线粒体DNA的研究背景 |
| 1.2.1 龟鳖类简介 |
| 1.2.2 龟鳖类动物线粒体基因组的研究现状 |
| 第二章 地龟的线粒体全基因组序列分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 线粒体基因组总DNA的提取 |
| 2.1.2 引物设计和PCR扩增 |
| 2.1.3 纯化、测序和序列拼接 |
| 2.1.4 序列分析 |
| 2.2 地龟线粒体基因的结构特征 |
| 2.2.1 基因组成及其基因定位 |
| 2.2.2 tRNA 基因和rRNA 基因 |
| 2.2.3 蛋白编码基因 |
| 2.2.4 非编码序列 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 基于地龟线粒体序列探讨龟鳖类系统发生关系 |
| 3.1 方法 |
| 3.1.1 物种的选择 |
| 3.1.2 系统发生分析方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 形态学数据测量 |
| 1.3 数据分析 |
| 1.4 染色体的制备 |
| 1.5 染色体观察与指标测量 |
| 1.6 染色体配对 |
| 1.7 单态同工酶制备及测定 |
| 1.7.1 同工酶样本的制备 |
| 1.7.2 同工酶的筛选与电泳 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 3个品系中华鳖形态特征差异性比较 |
| 2.2 细胞遗传学性状 |
| 2.3 遗传学性状 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 活性成分 |
| 1.1.1 蛋白质和氨基酸 |
| 1.1.2 生物碱 |
| 1.1.3 脂溶性维生素与矿物元素 |
| 1.1.4 脂肪酸 |
| 1.2 抗肿瘤作用 |
| 1.2.1 地鳖虫活性蛋白对肿瘤细胞的毒作用 |
| 1.2.2 地鳖虫多糖提取物及醇提物抑制肿瘤细胞增殖 |
| 1.3 地鳖虫提取物抗肿瘤作用机理 |
| 1.3.1 地鳖虫提取物诱导细胞周期阻滞 |
| 1.3.2 地鳖虫提取物对肿瘤细胞转移的影响 |
| 1.3.3 地鳖虫提取物对肿瘤血管生成的影响 |
| 1.3.4 地鳖虫醇提物作用于MAPK信号通路 |
| 1.3.5 地鳖虫提取物作用于其他的信号通路 |
| 1.4 小结与展望 |
| 第二章 ESWH对肿瘤细胞的体外抑制作用的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要溶液的配置 |
| 2.1.4 细胞复苏 |
| 2.1.5 细胞传代 |
| 2.1.6 细胞冻存 |
| 2.1.7 细胞株及细胞培养 |
| 2.1.8 ESWH提取 |
| 2.1.9 MTT分析 |
| 2.1.10 Hoechst33258 染色 |
| 2.1.11 数据统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 ESWH对4种癌细胞活力的影响 |
| 2.3 结论与讨论 |
| 第三章 ESWH对 HEL细胞的体外抑制作用的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 MTT法测抑制率 |
| 3.1.4 细胞形态学观察 |
| 3.1.5 Hoechst33258 检测细胞凋亡情况 |
| 3.1.6 Annexin V FITC/PI双标记法检测细胞凋亡 |
| 3.1.7 流式细胞术分析细胞周期 |
| 3.1.8 细胞迁移实验 |
| 3.1.9 数据统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 ESWH对 HEL细胞的毒作用 |
| 3.2.2 ESWH诱导HEL细胞凋亡 |
| 3.2.3 ESWH对 HEL细胞的细胞周期的影响 |
| 3.2.4 ESWH对 HEL细胞迁移的影响 |
| 3.3 结论与讨论 |
| 第四章 ESWH抑制HEL细胞增殖、诱导HEL细胞凋亡的分子机制初步研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试剂 |
| 4.1.2 抗体 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 主要溶液的配置 |
| 4.1.5 JC-1检测线粒体膜电位 |
| 4.1.6 细胞总RNA的抽提 |
| 4.1.7 逆转录 |
| 4.1.8 引物设计 |
| 4.1.9 PCR(RT-PCR)扩增 |
| 4.1.10 实时定量荧光PCR(RT-qPCR) |
| 4.1.11 Western blot蛋白免疫印迹法分析蛋白表达情况 |
| 4.1.12 数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 ESWH对 HEL细胞线粒体膜电位的影响 |
| 4.2.2 ESWH对 HEL细胞内线粒体凋亡途径关键基因表达的调控 |
| 4.2.3 ESWH对 HEL细胞内凋亡相关蛋白表达的调控 |
| 4.2.4 ESWH对 HEL细胞内周期相关蛋白的调控 |
| 4.2.5 ESWH对 HEL细胞内迁移侵袭相关蛋白的调控 |
| 4.2.6 ESWH对 HEL细胞内MAPK信号通路的影响 |
| 4.3 结论与讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 主要研究结果 |
| 5.1.1 ESWH对肿瘤细胞的体外抑制作用的研究 |
| 5.1.2 ESWH对 HEL细胞的体外抑制作用的研究 |
| 5.1.3 ESWH抑制HEL细胞增殖、诱导HEL细胞凋亡的分子机制研究 |
| 5.2 论文创新点 |
| 5.3 不足及今后研究方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 图版 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 选题背景 |
| 1.1.1 湖泊富营养化及危害 |
| 1.1.2 水生植物对淡水生态修复的作用 |
| 1.1.3 生物入侵及入侵植物凤眼蓝概况 |
| 1.2 太湖地区水生植物研究现状 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 创新点及意义 |
| 1.5 技术路线图 |
| 第二章 环太湖地区湖泊沿岸带和河道水生植物多样性研究 |
| 2.1 研究区域与研究方法 |
| 2.1.1 研究区域概况 |
| 2.1.2 调查方法 |
| 2.1.3 数据处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 环太湖地区水生植物多样性现状 |
| 2.2.2 环太湖地区水生植物多样性和水体指标的关系变化STOP |
| 2.2.3 环太湖地区外来生物盖度与物种多样性的关系 |
| 2.3 讨论与分析 |
| 第三章 入侵植物凤眼蓝越冬和非越冬植株对水位响应实验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验设置 |
| 3.1.2 测定指标 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 越冬条件对凤眼蓝生长的影响 |
| 3.2.2 水位深度深对凤眼蓝生长的影响 |
| 3.3 讨论与分析 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 入侵植物凤眼蓝和本地植物水鳖对水位响应诱导扎根定植实验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验设置 |
| 4.1.2 实验数据 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 水体指标监测 |
| 4.2.2 水位对两种植物形态学指标的影响 |
| 4.2.3 水位对两种植物两生理指标指标的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论部分 |
| 1. 祖国医学对AML的诊治现状 |
| 1.1 中医学对AML的认识 |
| 1.2 中医药对于AML的治疗现状 |
| 2. AML的西医治疗进展 |
| 第二章 临床研究 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 病例脱落和剔除标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 治疗方案 |
| 2.3 观察指标及疗效评价 |
| 2.4 统计分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 基线比较 |
| 3.2 疗效比较 |
| 第三章 讨论 |
| 1. 本研究选用升麻鳖甲汤的理论依据 |
| 2. 本研究选用节拍式化疗的理论依据 |
| 3. 本研究选取老年人综合评估的理论基础来评估患者的生存状态 |
| 4. 结果讨论 |
| 4.1 疗效比较 |
| 4.2 安全性评价 |
| 5. 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词(Abbreviation) |
| 引言 |
| 第一章 基于数据挖掘探讨含钙中药药性规律 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 关联分析 |
| 1.3 聚类分析和主成分分析 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 排除标准 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 含钙中药数据库 |
| 2.2 关联分析结果 |
| 2.3 SPSS聚类分析结果 |
| 2.4 SPSS主成分分析结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 白虎汤对高热惊厥模型大鼠的作用 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 试剂和药材 |
| 2 方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 药物试验 |
| 2.3 记录大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间 |
| 2.4 BHT对海马区组织形态学影响 |
| 2.5 BHT对大鼠脑组织Ca~(2+)、Glu、Asp、TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 2.6 BHT对大鼠血清Ca~(2+)、TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 2.7 大鼠脑组织含水率的测定 |
| 2.8 动物体成分测定 |
| 3 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 BHT对大鼠形态和体重的影响 |
| 4.2 BHT对大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间的影响 |
| 4.3 BHT对海马区组织形态学影响 |
| 4.4 BHT对大鼠脑组织Ca~(2+)、Glu、Asp、TNF-α和 IL-1β含量影响 |
| 4.5 BHT对大鼠血清Ca~(2+)、TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 4.6 BHT对大鼠脑组织含水率的影响 |
| 4.7 BHT对大鼠TBW、ECF和ICF的影响 |
| 4.8 BHT对大鼠FM、FFM和 BMI的影响 |
| 5 讨论 |
| 第三章 不同含钙中药在白虎汤中对高热惊厥模型大鼠的作用 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 试剂和药材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 药物试验 |
| 2.3 记录大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间 |
| 2.4 对海马区组织形态学影响 |
| 2.5 对大鼠脑组织Ca~(2+)、Glu、Asp、TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 2.6 对大鼠血清Ca~(2+)、TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 2.7 大鼠脑组织含水率的测定 |
| 2.8 动物体成分测定 |
| 2.9 Western blot法检测脑组织CaM表达 |
| 2.10 Western blot法检测脑组织AQP4 表达 |
| 3 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 对大鼠形态和体重的影响 |
| 4.2 对大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间的影响 |
| 4.3 对海马区组织形态学影响 |
| 4.4 对大鼠脑组织Glu、Asp、TNF-α和 IL-1β含量的影响 |
| 4.5 对大鼠血清TNF-α及 IL-1β含量影响 |
| 4.6 对大鼠脑组织含水率、脑组织和血清Ca~(2+)含量的影响 |
| 4.7 对大鼠TBW、ECF和ICF的影响 |
| 4.8 对大鼠FM、FFM和 BMI的影响 |
| 4.9 对大鼠脑组织CaM和 AQP4 表达的影响 |
| 5 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 白虎汤抗高热惊厥相关研究综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词对照表 |
| 第一章 爬行动物性别决定分子机制的研究进展 |
| 1 爬行动物性别决定模式的多样性 |
| 1.1 鳄目物种的性别决定机制 |
| 1.2 有鳞目物种的性别决定机制 |
| 1.3 龟鳖目物种的性别决定机制 |
| 1.4 喙头目物种的性别决定机制 |
| 2 爬行动物性别决定相关基因的研究 |
| 2.1 DMRT1 |
| 2.2 SOX9 |
| 2.3 AMH |
| 2.4 CYP19A1 |
| 2.5 FOXL2 |
| 2.6 WNT4 |
| 3 爬行动物性别决定的表观遗传机制 |
| 4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 乌龟胚胎发育温度敏感期性腺形态特征的观察 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 龟卵采集 |
| 1.2 龟卵孵化 |
| 1.3 胚胎发育时期的鉴定 |
| 1.4 胚胎的性腺组织观察 |
| 2 结果 |
| 2.1 乌龟胚胎15 期-25 期的个体形态特征 |
| 2.2 乌龟TSP期的性腺特征及性腺差异表型出现的时期 |
| 3 讨论 |
| 第三章 分子性别鉴定法研究乌龟的性别决定系统 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 样本采集 |
| 1.2 DNA提取 |
| 1.3 qPCR比较基因拷贝数鉴定Z特异性基因 |
| 1.4 细胞培养与制备 |
| 1.5 荧光原位杂交(FISH) |
| 2 结果 |
| 2.1 乌龟不同性别之间的基因拷贝数比较 |
| 2.2 乌龟AMH,WT1的FISH检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 发现乌龟存在性染色体 |
| 3.2 乌龟性别决定机制可能为GSD+TE型 |
| 3.3 尚需要进一步研究的问题 |
| 第四章 乌龟性腺发育温度敏感期DNA甲基化对性别决定相关基因表达影响的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料收集与动物伦理 |
| 1.2 性别决定相关基因启动子区域的克隆和序列分析 |
| 1.3 亚硫酸氢盐修饰测序法测定性别决定相关基因启动子区的DNA甲基化水平 |
| 1.4 性别相关基因及DNA甲基化酶基因和组蛋白去甲基化酶基因的表达分析 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 性别决定相关基因基因近端启动子结构分析 |
| 2.2 温度敏感期性腺中性别决定相关基因近端启动子的DNA甲基化水平 |
| 2.3 温度敏感期性腺中性别决定相关基因的mRNA表达分析 |
| 2.4 温度敏感期性腺中性别决定相关基因调控区的DNA甲基化水平与基因表达水平的关系 |
| 2.5 性腺中DNA甲基化酶基因以及组蛋白去甲基化酶基因的mRNA表达与性别相关基因表达的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 温度对TSP期性腺中性别决定相关基因表达的影响 |
| 3.2 DNA甲基化对TSP期性腺中性别决定相关基因表达的影响 |
| 3.3 组蛋白去甲基化酶基因对TSP期性腺中性别决定相关基因表达的影响 |
| 第五章 组蛋白去甲基化酶NO66的RNA干扰对乌龟MPT胚胎性腺发育的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料收集与动物伦理 |
| 1.2 慢病毒载体lentivector-NO66-shRNA的构建 |
| 1.3 龟胚感染 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 NO66 在乌龟胚胎早期性腺发育中的表达模式 |
| 2.2 乌龟胚胎NO66 敲低模型的构建 |
| 2.3 NO66 敲低模型胚胎的发育观察 |
| 2.4 NO66 敲低后对MPT胚胎性腺性别相关基因表达量的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 RNA干扰技术中提高龟卵存活率的创新 |
| 3.2 组蛋白去甲基化酶基因NO66 对性腺分化的影响 |
| 3.3 组蛋白去甲基化酶基因NO66和KDM6B的潜在关系 |
| 第六章 乌龟卵巢和睾丸MicroRNA和 m RNA表达谱的比较研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 伦理批准 |
| 1.2 样品收集和RNA提取 |
| 1.3 c DNA文库和小RNA测序文库的构建,测序 |
| 1.4 测序数据处理 |
| 1.5 RNA-seq注释及miRNA的鉴定 |
| 1.6 mRNA和 miRNA差异表达分析 |
| 1.7 miRNA预测靶mRNA和 miRNA-mRNA互作网络的构建 |
| 1.8 qRT-PCR验证mRNA和 miRNA的差异表达 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 RNA-seq测序及从头组装和miRNA测序数据分析 |
| 2.2 Unigene功能注释及miRNA的预测 |
| 2.3 mRNA和 miRNA的差异表达分析 |
| 2.4 差异表达mRNA的富集分析 |
| 2.5 miRNA靶基因的预测和富集分析 |
| 2.6 qRT-PCR验证RNA-seq和 miRNA数据 |
| 3 讨论 |
| 3.1 miRNA参与乌龟中性腺维持和配子发生的基因调控网络 |
| 3.2 性成熟时期参与睾丸和卵巢功能维持的信号通路 |
| 3.3 候选基因FANK1 可能与睾丸生精的调控有关 |
| 第七章 主要结论与展望 |
| 1 主要结论 |
| 2 创新点 |
| 3 研究展望 |
| 附件 |
| 附件1 |
| 附件2 |
| 附件3 |
| 附件4 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间发表学术论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 一、绪论 |
| (一)研究背景 |
| (二)研究现状 |
| (三)探讨内容 |
| (四)相关概念的界定与说明 |
| 二、浙江当代异类妻故事文本分析 |
| (一)螺女与男子婚配的故事 |
| (二)龙女与男子婚配的故事 |
| (三)虎女与男子婚配的故事 |
| (四)其他异类妻故事 |
| 三、浙江当代异类夫故事文本分析 |
| (一)蛇郎与小妹婚配的故事 |
| (二)青蛙子与女子婚配的故事 |
| (三)其他异类夫故事 |
| 四、叙事生命树的形态结构分析 |
| (一)情节基干与类型的判定 |
| (二)母题链与类型结构分析 |
| (三)类型结构分析的一般步骤 |
| 五、与故事文化研究结合的可能性 |
| (一)叙事生命树的独特性 |
| (二)地方类型与区域文化研究 |
| (三)叙事结构研究 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 (一) |
| 附录 (二) |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
