睡眠剥夺机制及中医药干预研究进展

一、睡眠剥夺机制和中医药干预的进展（论文文献综述）

王雪娇^[1]（2021）在《基于线粒体节律的四逆酸枣仁汤干预失眠症日间疲劳疗效和机理研究》文中研究说明目的失眠症是典型的节律紊乱疾病,发病率高达48%,损害患者身心健康。安眠药如艾司唑仑等苯二氮草类药物可延长睡眠时间,但存在困倦、疲劳等日间功能损害。最新研究提示,线粒体能量代谢具有显着的近日节律,其功能失调与睡眠-觉醒节律及能量代谢关系密切。中医学认为“昼精夜瞑”是人体良好的睡眠节律,当机体失眠时,会伴随睡眠节律紊乱如入睡难、早醒和日间功能不足的症状。课题组发现,基于“从肝论治失眠症”处方的四逆酸枣仁汤具有较好疗效,不仅有助于夜间睡眠质量的改善,而且较艾司唑仑等苯二氮草类安眠药物在改善日间功能方面也有优势。综上,结合《素问·五藏生成篇》“卧则血归于肝”及中医理论对人体能量节律的认识,提出“基于肝藏血、主疏泄调节机体睡眠-觉醒节律干预失眠症以达到‘昼精夜瞑’的治疗目标是中医的特色优势,其现代生物学基础与线粒体能量调节机制的昼夜节律有关”的假说。本研究拟以线粒体动力学指标节律变化为核心,临床试验与基础实验研究相结合,综合运用核心体温、红外、CPC心肺耦合、基因蛋白检测等技术,以艾司唑仑为对照药,探讨四逆酸枣仁汤调节睡眠-觉醒节律紊乱的疗效和机理。方法文献研究:通过计算机检索Cochrane、Pubmed、中国知网数据库,检索时限为建库至2021年4月30日,纳入艾司唑仑相较于安慰剂或空白组治疗失眠症的随机对照试验,采用Cochrane推荐的偏倚风险评估工具Risk of bias 2对纳入的研究进行方法学质量评价,然后使用Revman 5.4、Stata MP14进行Meta分析,对于不能合并的研究采用描述性分析。主要结局指标:疲劳、日间功能、不良反应;次要结局指标:睡眠潜伏期、睡眠效率等睡眠因子。并且,通过检索中国知网回顾性分析2011-2021十年中全国范围内医疗机构使用的第二类精神药品中艾司唑仑片的使用状况,对用药频度（DDDs）、处方占比、研究地区等指标进行汇总分析。临床试验:通过横断面临床试验设计,于北京中医药大学第三附属医院、北京中医药大学房山医院、北京中医药大学国医堂门诊部招募失眠患者,基于CPC心肺耦合技术、FS-14量表（Fatigue Scale-14）、匹兹堡睡眠质量指数量表（Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI）、对失眠患者的日间疲劳及夜间睡眠质量进行评估,采用SPSS 20.0对数据进行描述性统计、相关性分析及回归分析,以期掌握失眠患者日间功能的状况及可能的影响因素。并且通过病例系列临床试验设计,对失眠就诊患者日间疲劳、睡眠质量进行干预前后对照（0周、2周、4周）,并于8周时进行随访。采用SPSS 20.0对数据进行独立样本t检验、方差分析,比较和监测失眠患者日间功能的改善效果。实验研究:通过腹腔注射PCPA复制失眠症大鼠模型,通过翻正实验评价失眠模型。此后给予艾司唑仑阳性对照药和四逆酸枣仁汤进行干预,通过核心体温（昼夜取6个时间点测量）、红外热成像（昼夜取11个时间点测量）技术评价大鼠的睡眠-觉醒情况与宏观能量代谢昼夜节律的相关性;通过蛋白印记表达法、实时荧光定量PCR、荧光素酶法,探讨大鼠12:00及24:00下丘脑周期基因Per1、Per2、Bmal1与全脑ATP、线粒体动力学蛋白（Mfn1、Mfn2、Opa1、Drp1、Fis1）昼夜表达的相关性并评价四逆酸枣仁汤的干预作用;并联合全自动生化分析仪,检测艾司唑仑及四逆酸枣仁汤干预后大鼠24:00前额叶线粒体动力学及血清LDH、CK、BUN的含量变化。结果文献研究:关于艾司唑仑与安慰剂的对照研究发现,疲劳、运动减退、嗜睡是最常见的不良反应。1项研究指出,与安慰剂相比,艾司唑仑治疗失眠症后吞咽功能下降,表现为服用艾司唑仑后洼田饮水试验评分上升,EAT-10评分上升,VFSS评分下降。2项研究的Meta分析结果发现,艾司唑仑不良反应发生率高于安慰剂组（P<0.05）,1项研究指出艾司唑仑1mg组的不良反应发生率54%高于安慰剂组43%。关于夜间睡眠情况的数据3项研究无法进行META分析,3项研究提示艾司唑仑组对于睡眠质量的疗效优于安慰剂组。1项关于艾司唑仑与空白组对照的实验指出,艾司唑仑可以有效降低老年睡眠障碍伴高血压患者的次日血压,包括收缩压和舒张压,且对于患者失眠治疗有效率88%高于空白对照组68%（P<0.05）。（2）近十年国内艾司唑仑的使用量居高不下,处方量大、占比高,处方占比排序在二类精神药品中多处于前列（排序在第1、2位）,处方占比多超过10%,甚至部分研究占比量高达80%。临床试验:（1）横断面结果显示,87%的失眠患者存在不同程度的脑力疲劳,98%的失眠患者存在不同程度的体力疲劳,90.32%的患者存在不同程度的日间功能损害;PSQI日间功能因子和FS-14关系紧密（509,P<0.01）;PSQI日间功能因子和CPC睡眠质量评估系统获取的熟睡时间（即稳定睡眠期,对应CPC分析中的高频部分）密切相关（.851,P<0.01）,FS-14脑力疲劳因子与睡眠总时间密切相关（.508,P<0.01）、REM（.488,P<0.01）密切相关。（2）四逆酸枣仁汤对失眠症患者干预4周,并于8周随访:FS-14总得分逐渐减小,干预2周后得分5.63分降至4.83（P>0.05）、4周2.91分（P<0.01）、8周1.54分（P<0.01）。脑力疲劳因子得分范围为0-6分,干预2周后得分从2.83分下降至2.28分（P>0.05）,第4周1.75分（P<0.01）,8周0.81 分（P<0.01）。体力疲劳因子得分范围为0-8分,干预2周后得分从5.63分降至4.83分（P>0.05）,第4周2.91分（P<0.01）,第8周1.55分（P<0.01）。日间功能因子得分范围0-3分,干预2周后得分从2.03分下降至1.45分（P<0.05）,干预4周后降至1.00分（P<0.01）,8周随访时1.09分（P<0.01）。实验研究:（1）大鼠宏观能量指标（核心体温、红外热成像）的昼夜变化监测:昼夜24小时平均取6个时间点（4:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00）进行核心体温测量,正常组大鼠核心体温存在昼（睡眠期）低夜（活动期）高的趋势,与既往研究规律一致,即核心体温下降则诱导入睡,核心体温上升则诱导觉醒:12:00四组大鼠体温达到昼夜最低值,正常组36.93℃,和正常组相比,模型组核心体温升高（P>0.05）,和模型组相比,西药组体温降低（P<0.05）,中药组体温降低（P<0.01）。8:00、16:00时,和正常组相比,模型组体温升高（P>0.05）,和模型组相比,西药组、中药组体温降低,仅8:00西药组与模型组有显着差异（P<0.05）。4:00、20:00时,和正常组相比,模型组体温上升趋势减缓,体温低于正常组。24:00时,和正常组相比,模型组体温低于正常组（P<0.01）,和模型组相比,西药组、中药组体温上升（P>0.05）。昼夜24小时取11个时间点进行尾部红外测量,正常组大鼠尾部温度处于动态平衡状态,与其它时间点基本无统计学差异（P>0.05）。模型组尾部温度呈现昼夜振荡,即以12:00为波谷、以24时为周期的类余弦曲线,12:00大鼠尾部温度出现最低值25.00℃,和12:00相比,大鼠尾部2:00、20:00、22:00温度升高（P<0.05）。12:00各组大鼠尾部温度处于最低值,正常组尾部温度26.88℃,和正常组相比,模型组大鼠尾部温度降低（P>0.05）。（2）大鼠全脑节律基因、ATP和线粒体动力学指标的昼夜表达变化:正常组大鼠下丘脑Per1、Per2、Bmal1 mRNA表达量呈现昼（睡眠期）低夜（活动期）高的趋势,失眠模型大鼠Per1、Per2、Bmal1 mRNA表达量发生节律紊乱,经药物干预后,节律恢复。节律基因表达的组间比较:24:00和正常组大鼠相比,模型组Per1、Per2、Bmal1 mRNA的表达有下降趋势（P>0.05）;和模型组大鼠相比,西药组Per1、Per2、Bmal1 mRNA表达有增加的趋势（P>0.05）,中药组大鼠Per1、Per2、Bmal1 mRNA表达增加（P<0.01）。12:00和正常组大鼠相比,模型组Per1、Bmal1 mRNA表达有升高的趋势（P>0.05）,Per2表达增加（P<0.01）;和模型组大鼠相比,西药组和中药组 Per1、Per2、Bmal1 mRNA 表达均下降（P<0.05）。节律基因表达的昼夜比较:大鼠下丘脑Per1正常组,24:00表达量高于12:00（P<0.05）;模型组24:00表达量低于12:00（P<0.01）,西药组和中药组的24:00表达量高于12:00（P<0.01）,且中药组趋势更加明显。Per 2正常组24:00表达量高于12:00（P>0.05）;模型组24:00表达量低于12:00（P<0.01）,西药组和中药组的24:00表达量高于12:00（P<0.05）,且中药组趋势更加明显（P<0.01）。Bmal1正常组的24:00表达量相较于12:00有升高趋势（P>0.05）,模型组24:00表达量低于12:00（P<0.01）,西药组和中药组的24:00表达量高于12:00（P<0.05）,且中药组趋势更加明显（P<0.01）。ATP含量组间比较:24:00和正常组大鼠相比,模型组大鼠全脑ATP的含量降低（P>0.05）,和模型组相比,西药组、中药组全脑ATP水平均有上升趋势,且中药组有显着性差异（P<0.05）。12:00和正常组大鼠相比,模型组大鼠全脑ATP的含量升高（P>0.05）,和模型组相比,西药组含量降低（P>0.05）,中药干预后ATP含量降低且低于正常组（P>0.05）,且中药干预后ATP含量降低且低于正常组。线粒体动力学蛋白组间比较:正常组大鼠全脑线粒体动力学蛋白表达量呈现昼（睡眠期）低夜（活动期）高的趋势,而失眠模型大鼠线粒体动力学蛋白昼夜差异趋势不变,差异量增加,药物干预后,差异量减小。24:00和正常组大鼠相比,失眠模型大鼠Opa1、Fis1、Mfn2表达量有升高趋势（P>0.05）,和模型组相比,中药组和西药组表达量降低（P<0.01）。12:00各组线粒体相关蛋白Drp1、Fis1、Mfn1、Mfn2、Opa1的表达量趋势平稳（P>0.05）。线粒体动力学蛋白昼夜比较:大鼠全脑Opa1、Fis1、Mfn2蛋白表达量正常组,24:00表达量高于12:00（P>0.05）;模型组24:00表达量仍高于12:00,节律趋势更加明显（P<0.05）,西药组和中药组的24:00表达量均高于12:00,但差异量变小（P>0.05）。Mfn1、Drp1正常组、模型组、中药组的24:00表达量高于12:00（P>0.05）,西药组的24:00表达量高于12:00（P<0.05）。（3）失眠大鼠活动期疲劳指标的测定:24:00和正常组相比,模型大鼠前额叶Opa1、Fis1、Mfn2、Drp1的蛋白表达量有上升趋势（P>0.05）,Mfn1蛋白表达量增加（P<0.05）;和模型组相比,西药组Opa1、Fis1、Mfn2、Drp1蛋白表达量有上升趋势（P>0.05）,Mfn1蛋白表达量增加（P<0.05）;中药组Opa1、Fis1、Mfn1、Drp1蛋白表达量有下降趋势（P>0.05）,甚至低于正常组（Drp1）。24:00和正常组相比,模型组血清LDH、CK含量升高（P<0.05）,BUN含量有上升趋势（P>0.05）;和模型组相比,西药组血清CK、BUN含量有上升趋势（P>0.05）,LDH含量有下降趋势（P>0.05）;中药组LDH、CK、BUN含量有明显下降趋势,且LDH与模型组有显着差异（P<0.05）。结论从人体昼夜节律和能量代谢的角度可以发现“从肝论治失眠”的潜在机制。其机制在于中医肝对于能量代谢节律的调控,通过这种多靶点、多层次的治疗进而明显改善睡眠质量外也明显改善患者日间疲劳。（1）失眠症患者存在日间功能损害,表现为不同程度的脑力疲劳和体力疲劳。PSQI日间功能与CPC深睡眠时间有关,脑力疲劳与REM和浅睡眠时间有关。（2）基于“从肝论治失眠”出发的四逆酸枣仁汤干预失眠症后可以达到“昼精夜瞑”的疗效,具有可观的远期疗效。（3）PCPA失眠核心体温昼夜节律的振幅减小,相位不变,活动期功能受到损害,四逆酸枣仁汤干预后,宏观层面紊乱的能量代谢节律得到恢复。（4）PCPA失眠大鼠在四逆酸枣仁汤干预后可通过干预下丘脑节律基因的昼夜表达进而调控全脑微观线粒体动力学的昼夜节律,使得ATP供能重回平衡,以恢复正常的睡眠-觉醒节律。（5）四逆酸枣仁汤可以消除失眠大鼠活动期的脑力与体力疲劳水平,其机制或是调节线粒体动力学蛋白的表达。

李凌香^[2]（2021）在《失眠症状群及其方证相应的分子网络关联机制研究》文中提出研究目的从“疾病-症状群表型网络-中药靶标网络-分子网络相互关联”的角度,利用失眠临床实际诊疗数据,探索症状群分类方法、有效核心方发现方法和失眠症状群的分子网络关联机制等研究,以阐释“病-证-治-效”（方证相应）的科学内涵,为中医药领域开展相关研究提供方法学参考。研究方法（1）失眠临床实际诊疗数据中有效病例数据判断方法:应用已有的结构化失眠临床诊疗数据,采用统一的疗效评价标准与质量控制方法,对多个医师队列的失眠患者人群特点进行分析与疗效评价,并采用倾向性评分匹配的方法消除年龄、病程、文化程度、合并疗法等混杂因素得到了均衡的有效病例样本亚群。（2）失眠症状群分类与有效核心方药挖掘方法:采用文本挖掘方法对失眠有效病例的刻下症和辨证论治清单进行处理,提取高质量规范化症状谱,再将高频症状导入孔明灯软件进行隐结构分析,探究失眠症状群分类及辨识规则。采用Gephi软件对处方进行社区划分,然后用复杂网络分析软件Liquorice中的层次核心结构网络提取算法挖掘有效核心方药;采用比值比和卡方检验统计分析方法,判断有效核心方药与症状群的对应情况。（3）失眠症状群与有效核心方药网络药理学分析方法:参照UMLS进行相关术语规范,然后整合生物医学数据库中失眠疾病基因、症状基因、中药-化合物-靶标,再导入STRING平台中构建PPI网络,采用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化展示和拓扑结构分析,并在DAVID平台对网络模块中的Hub节点进行KEGG和GO功能富集分析,确定其主要的功能特征。并对数据挖掘结果进行初步验证,验证方法有:①症状群-基因、有效核心方药-靶标与失眠西药靶标取交集;②有效核心方药-靶标映射失眠西药作用通路;③失眠症状群-基因网络与有效核心方药-靶标网络,二者的Hub节点富集的KEGG通路取交集。共3种方式对症状群-有效核心方药的分子网络关联机制进行初步验证。（4）失眠症状群差异基因分析方法:采用转录组高通量测序分析,分析具有失眠典型症状群的患者与健康人群的基因差异性表达情况;采用cluster Profiler对差异基因进行KEGG和GO功能富集分析,探索失眠症不同症状群的分子网络关联机制是否一致,并采用转录组测序分析结果与网络药理学数据挖掘结果相互佐证的方式进行双重验证。研究结果（1）多个医师队列失眠患者人群特点分析与疗效评价:分析各个医师队列失眠患者基线特征（性别、失眠症状特点、伴随焦虑与抑郁情况等）,结果9个队列共有994例患者,2697诊次数据。失眠患者均呈现出性别的差异,为女性多于男性,多见于脑力劳动群体,文化程度以中、高级居多,多数人居住情况为同住。失眠患者普遍存在不同程度的焦虑和抑郁的情绪问题,日间功能均有不同程度的受损。按照治疗前后PSQI与SE的改善情况制定疗效评价标准,结果显示医师Ⅰ队列的有效率最高为91.9%,其次是医师H为63.5%、医师F为62.4%和医师D为62.1%,共有500例有效病例与471例无效病例,经倾向性评分1:1匹配后得到了相匹配的340个疗效有效和340个疗效无效的样本亚群。（2）失眠症状群分类与有效核心方药发现研究:通过对失眠有效病例的症状群分类和相应有效核心处方的挖掘分析,得到失眠常见的5个症状群及其相应的核心方药:①症状群Ⅰ（反映心脾两虚病机）:眩晕、纳少、嗳气、心悸、神疲乏力等,相应核心方药为黄芪、当归、白芍、百合、酸枣仁等。②症状群Ⅱ（反映肝郁化火病机）:神疲乏力、烦躁易怒、头重、头痛、小便黄等,相应核心方药为香附、栀子、郁金、黄芩、珍珠母等。③症状群Ⅲ（反映心肾不交病机）:眩晕、腰膝酸软、口干、耳鸣等,相应核心方药为百合、知母、首乌藤、酸枣仁等。④症状群Ⅳ（反映血瘀病机）:头晕、舌瘀点瘀斑、心悸、不思饮食、噩梦等,相应核心方药为柴胡、生地、当归、赤芍、牛膝等。⑤症状群V（反映痰热病机）:口苦、眩晕、胸闷、痰多、舌红、小便黄等,相应核心方药为黄连、青礞石、法半夏、竹茹、枳实等。（3）失眠症状群-有效核心方药的分子网络关联机制发现研究:通过整合生物医学数据库,构建了含有320个基因的症状群Ⅰ（心脾两虚）-分子网络模块,相应有效核心方-化合物-靶标网络,包含60个化合物和932个靶标;初步验证结果表明:症状群Ⅰ（心脾两虚）与相应有效核心方药,相同靶标为33个、共同通路为95个;症状群Ⅰ（心脾两虚）-有效核心方药与失眠西药,共同靶标有9个;症状群Ⅰ（心脾两虚）-有效核心方药主要作用于GABA能突触,苯丙氨酸代谢通路,酪氨酸代谢通路。症状群Ⅱ（肝郁化火）-分子网络模块包含基因430个,相应有效核心方药-化合物-靶标网络,包含化合物124个,靶标1221个;初步验证结果表明:症状群Ⅱ（肝郁化火）与相应有效核心方药相同靶标为32个、共同通路108个;症状群Ⅱ（肝郁化火）-有效核心方药与失眠西药,共同靶标有16个;症状群Ⅱ（肝郁化火）-有效核心方药主要作用于5-羟色胺能突触,亚油酸代谢,色氨酸代谢通路。（4）失眠症状群小样本健康对照的转录组测序分析研究:共纳入健康对照者22例,症状群Ⅰ（心脾两虚）患者21例,症状群Ⅱ（肝郁化火）患者11例进行转录组测序分析。分析获得症状群Ⅰ（心脾两虚）独有的差异基因为67个,其GO terms主要涉及水和电解质的跨膜转运、骨骼肌的发育及氨基酸代谢过程等,KEGG通路主要涉及昼夜节律夹带,脂肪与蛋白质等营养物质消化吸收,血小板活化及唾液与胰岛素的分泌调节等。症状群Ⅱ（肝郁化火）独有的差异基因为149个,其GO terms主要涉及细胞分化、性别分化与NOS活性调节等,KEGG主要涉及钙信号通路、昼夜节律、5-羟色胺能突触等通路。（5）转录组测序分析与网络药理学数据挖掘结果相互佐证:症状群Ⅰ（心脾两虚）差异基因集与数据挖掘基因集取交集,共有基因为7个。症状群Ⅰ（心脾两虚）-有效核心方药中的黄芪、当归、酸枣仁、白芍等11味中药,包含的黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ）、阿魏酸（ferulicacid）、枣苷 A（Jujuboside A）、芍药苷（paeoniflorin）等 17 种化合物,映射了症状群Ⅰ（心脾两虚）的9个差异基因。症状群Ⅰ（心脾两虚）差异基因与数据挖掘基因的Hub节点富集的KEGG通路取交集,共同通路为72条。症状群Ⅱ（肝郁化火）差异基因集与数据挖掘基因集取交集,共有基因为8个。症状群Ⅱ（肝郁化火）-有效核心方药中的黄芩、栀子、酸枣仁、珍珠母、香附等13味中药,包含的黄芩苷（Baicalein）、栀子甙（geniposide）、枣苷A（JujubosideA）、香附酮（Cyperolone）等43种化合物,映射了症状群Ⅱ（肝郁化火）28个差异基因。症状群Ⅱ（肝郁化火）差异基因与数据挖掘基因的Hub节点富集的KEGG通路取交集,共同通路为54条。研究结论本研究突破了传统的证候分子生物学机制研究思路,借鉴《伤寒论》“方证相应”思想,引入国际通用的症状群概念,采用相对固定和高度概括的症状群,将证候进一步客观化;并利用网络药理学方法和临床转录组测序分析相互佐证的方式,构建了探索症状群与相应核心方药分子网络关联机制的方法,为开展阐释病-证-治-效（方证相应）科学内涵的研究,奠定了方法学基础:（1）基于失眠真实世界临床诊疗数据,严格按照疾病公认的疗效评价标准,筛选出有效病例数据,并采用倾向性评分匹配方法消除混杂因素,可为分析挖掘医师有效核心处方和症状群的特点提供方法学。（2）症状群分类是实现症状群-有效核心方药分子网络机制研究的关键环节,隐结构分析法可较好地实现失眠症状群的分类,为症状群的客观性和稳定性提供了相对成熟的模型和算法。（3）采用网络药理学方法建立中医症状群-基因关联关系的研究方法,突破了目前中医症状群与基因缺少对应关系的瓶颈,结合临床转录组测序分析相互佐证的方法,证实了失眠症状群与相应有效核心方药分子网络相互关联的研究路径基本可行。（4）本研究初步发现失眠不同的症状群,具有不同的分子网络关联机制,相关分子网络的改变与脏腑的生理病理功能有关,一定程度上能够阐释中医病机的科学内涵;表明以相对固定的症状群及其分子网络关联机制结合“病机”指导辨证论治的探索,是“病-证-治-效”相互关联研究思路的进一步深化。

闫冰^[3]（2021）在《“逆针法”对睡眠剥夺的临床效应及免疫蛋白调节机制》文中研究表明目的:评估“逆针法”对健康男性青年24h完全睡眠剥夺后的临床效应,同时观察其对完全睡眠剥夺24 h期间情绪体验及疲劳感、嗜睡状态所产生的临床效应,并通过其对人体血浆样本中免疫相关差异蛋白及相关通路改变的结果,初步阐释其针刺预防性治疗睡眠剥夺的生物学效应机制。方法:临床试验研究1.健康受试者基线期评估:采用TPF健康睡眠智能管理系统筛选符合要求的健康受试者对象,观察比较试验基线期内,穴位组、非穴位组、空白组三组年龄、体温、身高、体质量、BMI、PSQI评分、收缩压、舒张压、呼吸、静息心率、SAS、SDS评分、每日睡眠时间、TPF睡眠评分的差异。2.“逆针法”对TSD24h脑神经化学递质影响研究:采用ET脑功能分析仪观察穴位组、非穴位组、空白组三组在不同时间点受试者脑神经化学递质GABA、Glu、5-HT、Ach、NE、DA含量与正常值范围比较的差异。3.“逆针法”对TSD24h疲劳及嗜睡状态影响研究:采用ET脑功能分析仪观察穴位组、非穴位组、空白组三组在不同时间点受试者脑部疲劳程度、脑部缺血缺氧状态、脑部兴奋抑制状态情况差异。观察三组预后在多个不同时间点受试者FSS量表评分、BFI量表评分、SSS量表评分情况的差异。4.“逆针法”对TSD24h情绪影响研究:采用ET脑功能分析仪观察穴位组、非穴位组、空白组三组受试者在不同时间点受试者控制情绪能力的差异。采用Face Reader面部表情分析系统观察三组人体基本情绪值、PANAS量表正性情绪、负性情绪评分值在多个不同时间点的差异。效应机制研究基于“4D Label-free”蛋白质组学技术筛选人体外周血的血浆样本中差异蛋白,运用KEGG数据库以及Inter Pro数据库对其分子功能、蛋白通路等进行功能富集。比较各组免疫相关差异蛋白及富集通路情况,探讨其“逆针法”免疫调节效应的物质基础与分子机制。结果:临床试验研究1.健康受试者基线期评估:三组受试者基线期年龄,身高、体质量、体温、BMI、呼吸、静息心率、血压数据值两两比较,无统计学差异（均P>0.05）。情绪状态方面,三组SAS分值、SDS分值两两比较,无统计学差异（均P>0.05）;睡眠时间及质量方面,三组PSQI评分、深度、中度、浅度睡眠时间方面,两两比较,无统计学差异（均P>0.05）。2.“逆针法”对TSD24h脑神经化学递质影响研究:TSD24h后,空白组GABA值较基线值、正常值相比均呈现升高,存在统计学差异（P<0.05）。穴位组与非穴组比较呈现降低（P<0.05）。穴位组与空白组比较呈现降低（P<0.05）。常值比较:三组Glu、5-HT、Ach、NE、DA含量值较正常值相比,无统计学意义（均P>0.05）,三组两两比较,无统计学差异（均P>0.05）。3.“逆针法”对TSD24h疲劳及嗜睡状态影响研究:TSD24h后,空白组脑部缺血缺氧值、疲劳值较基线值相比均呈现升高（P<0.05）,脑部兴奋抑制值呈现下降（P<0.05）。穴位组与非穴组缺血缺氧值、脑部疲劳值相比呈现降低（P<0.05）,脑部兴奋抑制值比较呈现升高（P<0.05）。空白组SSS、FSS、SSS量表评分与基线值相比呈现升高（均P<0.05）。穴位组与空白组BFI、FSS评分值相比呈现降低（均P<0.05）。穴位组与非穴组FSS评分值相比呈现降低（P<0.05）。4.“逆针法”对TSD24h情绪影响研究:情绪控制能力方面:TSD24h后,空白组较基线值相比呈现下降（P<0.05）。穴位组与空白组比较呈现升高（P<0.05）。穴位组与非穴组比较呈现升高（P<0.05）。情绪检测方面:TSD24h后,三组两两比较不存在统计学差异（均P>0.05）。正负性情绪值方面:TSD24h后,空白组PANAS正性情绪值较基线值相比呈现下降（P<0.05）,负性情绪分值较基线值相比呈现升高（P<0.05）。正性情绪方面:穴位组与空白组比较呈现升高（P<0.05）。穴位组与非穴组比较呈现升高（P<0.05）。负性情绪方面:穴位组与空白组比较呈现降低（P<0.05）。穴位组与非穴组比较呈现降低（P<0.05）。效应机制研究共鉴定到1563个可定量的蛋白质。TSD24h前后,免疫相关的蛋白数量比较:空白组30个,非穴组36个,穴位组45个。穴位组与空白组比较,有36个蛋白存在差异;非穴位组与空白组比较,有31个蛋白存在差异;非穴位组与穴位组比较,有9个蛋白存在差异。富集到9个关键蛋白质。穴位组TSD24h前后差异蛋白富集到8条通路,空白组1条通路,非穴组2条通路。以上差异比较,均p<0.05。结论:1.TSD24h可对人体疲劳、嗜睡、情绪产生重要影响,主要表现为人体脑疲劳程度、脑缺血缺氧程度、脑抑制状态、嗜睡程度增加、情绪控制能力减弱、正性情绪降低、负性情绪升高。2.“逆针法”对TSD24h后人体脑部GABA含量具有正向调节作用,可延缓TSD24h后人体脑部GABA值升高趋势,且针刺穴位效果优于非穴位。3.“逆针法”对TSD24h后引发的疲劳嗜睡程度增加、情绪控制能力减弱、正性情绪降低、负性情绪升高的不良反应具有调节作用,可有效降低其发生的程度,且针刺穴位效果优于非穴位。4.从蛋白质组学角度分析,证明了健康人体TSD24h后,Fatty acid biosynthesis、P latelet activation、ABC transporters通路可发生改变。“逆针法”可引起免疫相关的差异蛋白含量及AMPK signaling pathway、Toll-like receptor signaling pathway等蛋白质通路发生改变,这些蛋白和蛋白质通路可能是“逆针法”产生作用的重要关键蛋白和关键通路。

王琪^[4]（2021）在《柴胡加龙骨牡蛎汤改善围绝经期睡眠剥夺小鼠睡眠机制的研究》文中研究说明目的围绝经期是指女性从45岁左右开始至停经后12个月内时期。失眠是围绝经期伴随的最为常见的神经精神症状之一,亦是围绝经期女性寻求治疗的核心症状之一。鉴于镇静催眠药的不良反应,多数女性并未采取有效的干预措施治疗围绝经期失眠。中医药通过辨证论治,在治疗围绝经期失眠中具有明显的优势。中医多从肝论治围绝经期综合征,多采用疏肝解郁安神方剂治疗围绝经期失眠。柴胡加龙骨牡蛎汤为疏肝解郁的代表方剂,出自于东汉张仲景的《伤寒论》,具有疏通肝郁、和解少阳,重镇安神等功效,在中医临床中常用于改善女性围绝经期伴随的失眠和负性情绪等症状。本实验室前期研究结果显示,柴胡加龙骨牡蛎汤可延长去卵巢动物的睡眠时间,其物质基础70%醇提有效部位（CJLM70E）。但机理作用并不十分清楚。因此本实验研究了,柴胡加龙骨牡蛎汤对围绝经期小鼠睡眠时长和觉醒-睡眠节律的改善以及相关机制的探讨。方法8周龄ICR小鼠随机分为4组,即空白组,VCD组,CJLM70E组和雌二醇组。空白组腹腔注射芝麻油,其余组均分别腹腔注射VCD（160 mg/kg,5 d/w,共4 w,即共注射20 d）,于注射VCD或芝麻油的第35 d CJLM70E组灌胃给予CJLM70E（48 mg/kg,0.2 mL/10g）、雌二醇组灌胃给予雌二醇（0.13 mg/kg,0.2 mL/10g）及空白组灌胃给予同体积1%CMC-Na连续14 d。并于注射VCD或芝麻油的第49 d进行实验动物监测系统检测,来观察各组小鼠的静息-活动节律、24 h睡眠时间以及睡眠-觉醒节律变化。8周龄ICR小鼠随机分为5组,分别为VCD组,VCD+SD（sleep deprivation）组,CJLM70E组,LY294002组和CJLM70E+LY294002组。以VCD致围绝经期合并跑步机睡眠剥夺小鼠（3 s运动,12 s停止,2.5 m/min,连续14 d）为围绝经期睡眠剥夺模型。睡眠剥夺期间,围绝经期睡眠剥夺小鼠分别灌胃给予CJLM70E（48 mg/kg,0.2 mL/10g）、腹腔注射LY294002溶液（0.3mg/kg,0.2mL/10g）、灌胃给予CJLM70E（48 mg/kg,0.2 mL/10g）加腹腔注射LY294002溶液（0.3mg/kg,0.2 mL/10g）及同体积1%CMC-Na。VCD致围绝经期无睡眠剥夺小鼠,仅在围绝经期连续14 d给予同体积1%CMC-Na。各组均于注射VCD第49 d进行HE染色观察测定各组小鼠的卵巢形态和闭锁卵泡数目,测定子宫系数和卵巢系数,酶联免疫法测定血清GABA和E2水平,免疫荧光法测定小鼠下丘脑内ERα、PI3K、Akt、GABA表达。结果注射VCD第49天,与Control组小鼠相比,VCD组小鼠24 h活动次数显着升高（p<0.001）;与VCD组小鼠相比,CJLM70E组和E2组小鼠24 h活动次数显着降低（p<0.001）。与Control组小鼠相比,VCD组小鼠24 h睡眠时间显着降低（p<0.05）;与VCD组小鼠相比,CJLM70E组和E2组小鼠24 h睡眠时间显着升高（p<0.001）。与围绝经期模型相比,围绝经期睡眠剥夺小鼠的卵巢形态受到损伤,闭锁卵泡数量明显增加（p<0.05）,卵巢系数明显降低（p<0.05）,血清GABA、E2水平明显降低（p<0.05）,下丘脑ERα、PI3K、Akt、GABA面密度明显下降（p<0.05）。与围绝经期睡眠剥夺小鼠相比,围绝经期睡眠剥夺给予CJLM70E小鼠的卵巢内卵母细胞形态较好,闭锁卵泡数量明显降低（p<0.001）,卵巢系数明显升高（p<0.05）,血清GABA、E2水平明显升高（p<0.01）,下丘脑ERα、PI3K、Akt、GABA面密度明显升高（p<0.05）。与围绝经期睡眠剥夺小鼠相比,围绝经期睡眠剥夺给予LY294002小鼠的卵巢内卵母细胞固缩,透明带膨胀,闭锁卵泡数量增加（p<0.05）,子宫系数与卵巢系数降低（p<0.05）,血清GABA、E2水平明显降低（p<0.05）,下丘脑ERα、PI3K、Akt、GABA面密度明显下降（p<0.05）。与围绝经期睡眠剥夺给予CJLM70E小鼠相比,围绝经期睡眠剥夺给予CJLM70E加LY294002小鼠子宫系数与卵巢系数明显降低（p<0.001）,血清GABA、E2水平明显降低（p<0.05）,下丘脑ERα、PI3K、Akt、GABA面密度明显下降（p<0.05）。结论CJLM70E可显着增加围绝经期小鼠的睡眠时间,改善围绝经期小鼠的片段化睡眠。CJLM70E通过调节ERα/PI3K/Akt/GABA信号通路改善围绝经期小鼠的睡眠。

纪可^[5]（2021）在《中药安神方治疗慢性失眠的临床研究及机制探讨》文中研究表明目的:以知识图谱的方式直观展现国内中医治疗失眠相关研究的历史路径、研究现状、研究热点以及科研力量的合作分布关系,为研究者了解中医治疗失眠的应用现状及发展趋势提供参考。对中药安神方治疗慢性失眠的有效性及安全性进行初步评价,为开展多中心、大样本临床试验奠定基础。观察中药安神方对睡眠剥夺模型大鼠自主活动、学习记忆、脑内神经递质水平及星形胶质细胞相关蛋白表达的影响,由此探讨中药安神方治疗慢性失眠可能的作用机制。方法:1.文献研究:基于中国知网（CNKI）检索2001年1月1日-2020年12月31日“中医药治疗失眠”研究领域的文献,采用Cite Space软件对中医治疗失眠相关文献中的作者、机构、关键词等数据进行可视化共现分析。通过时间线视图展示不同聚类的相互影响及时间跨度。2.临床研究:收集湖北省中医院脑病科、神志病科门诊接诊的慢性失眠患者,开展随机、双盲、安慰剂对照临床试验。按照纳入和排除标准将符合条件的患者分为试验组和对照组,两组患者均接受睡眠卫生教育,试验组给予中药安神方,对照组给予安慰剂。收集相关病情资料,治疗前后予以疲劳量表-14（FS-14）、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD-24）、汉密尔顿焦虑量表（HAMA-14）评估及安全性指标检测,对该药临床疗效及安全性进行分析。3.实验研究:将50只雄性大鼠随机分为5组,每组10只。除空白组常规饲养外,其他4组通过多平台水环境法建立慢性睡眠剥夺模型。每天连续睡眠剥夺12小时,持续剥夺21天。睡眠剥夺2周后开始灌胃给药,1天1次,连续灌胃2周。空白组、模型组给予等容0.9%Na Cl灌胃。西药组给予艾司唑仑0.09mg/kg/d灌胃。中药安神方高剂量组给予中药安神方颗粒2.97g/kg/d。中药安神方低剂量组给予中药安神方颗粒1.49g/kg/d。末次灌胃后,次日开始采用自主活动分析仪记录动物在不同时间点、固定时间段内的运动路程、运动时间等数据,观察各组动物自主活动度的变化情况。采用Morris水迷宫对各组大鼠进行获得性训练,记录90秒内大鼠找到圆形平台的游泳时间、游泳路程和游泳轨迹,每天训练4次,连续5天,第6天休息,第7天上午进行定位航行实验,检测动物的学习能力。第7天下午撤掉圆形平台,进行空间探索实验,计算机记录90秒内大鼠穿越原平台的次数、目标象限停留时间、游泳路程及游泳轨迹,检测动物的记忆能力。采用ELISA法检测大鼠皮质GABA、Glu的表达水平。采用免疫荧光检测大鼠海马NDRG2、GFAP阳性细胞表达量及共定位情况。采用实时荧光定量PCR检测皮质、海马NDRG2、GLT-1、GAD65、GAD67、Glu NR2A、Glu NR2B m RNA相对表达量。采用Western Blot检测大鼠皮质、海马中NDRG2、GLT-1、GAD65、GAD67、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果:1.文献研究:（1）中医治疗失眠相关文献的年发文量呈上升趋势,近几年发文量趋于稳定,并维持较高水平。（2）中医药大学及其附属医院是研究中医药治疗失眠的主要力量。研究团队内部合作较为紧密,但团队之间尚未形成广泛合作,仅有少数学术机构存在跨区域合作。（3）关键词聚类分析结果显示,中医药治疗失眠的研究主要围绕辨病、辨证、治疗方式、数据挖掘及临床疗效评价等五个方面展开。2.临床研究:（1）治疗前两组患者基线情况基本一致,无显着差异。（2）试验组（中药安神方）总有效率为73.3%,对照组（安慰剂）总有效率为38.7%。（3）两组患者治疗后PSQI评分较治疗前均有所降低,试验组治疗后PSQI总分显着低于对照组（P<0.01）。（4）试验组治疗后FS-14评分较治疗前显着降低（P<0.01）,对照组治疗后FS-14评分与治疗前有下降趋势,差异无统计学意义（P>0.05）。（5）试验组与对照组治疗后HAMA评分较治疗前均显着降低（P<0.01）,试验组治疗后HAMA评分显着低于对照组（t=-3.23,P<0.01）。（6）试验组治疗后HAMD评分较治疗前显着降低（P<0.01）,对照组治疗后HAMD评分与治疗前比较有下降趋势,差异无统计学意义（P>0.05）。（7）两组患者治疗前后检测的安全性指标无显着差异,无不良事件发生。3.实验研究:（1）自主活动分析:在光照/黑暗环境中,与空白组相比,模型组大鼠活动路程较空白组均明显增加（P<0.05）。在活动时间方面,除0点外,模型组大鼠活动时间较空白组均明显增加（P<0.05）。与模型组相比,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠活动路程及活动时间均有不同程度减少（P<0.05）。（2）定位航行实验:与空白组相比,模型组大鼠上平台的潜伏期、游泳总路程明显增加（P<0.01）;与模型组相比,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠上平台的潜伏期、游泳总路程均明显缩短（P<0.01）。空间探索实验:与空白组相比,模型组大鼠穿越目标象限总路程、越目标象限时间、穿越平台次数显着减少（P<0.01）;与模型组相比,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠穿越目标象限总路程、越目标象限时间、穿越平台次数均有不同程度增加（P<0.01）。（3）与空白组比较,模型组大鼠皮质内GABA浓度显着下降,Glu浓度显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠皮质内Glu浓度降低（P<0.05）,西药组、中药安神方高剂量组大鼠皮质内GABA浓度升高（P<0.05）。（4）与空白组比较,模型组大鼠皮质内NDRG2 m RNA相对表达量及蛋白水平显着升高（P<0.01）,GLT-1、GAD65、GAD67m RNA相对表达量及蛋白表达水平显着下降（P<0.01）;与模型组比较,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠皮质内NDRG2 m RNA相对表达量及蛋白表达水平显着降低,GLT-1、GAD65、GAD67m RNA相对表达量及蛋白表达水平均有不同程度升高（P<0.05）。（5）与空白组相比,模型组大鼠海马CA1区NDRG2、GFAP阳性细胞数量显着增加（P<0.01）。与模型组比较,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠海马CA1区NDRG2、GFAP阳性细胞数降低（P<0.01）,NDRG2与GFAP存在较好的共定位。（6）与空白组比较,模型组大鼠海马内NDRG2、Glu NR2B m RNA相对表达量、NDRG2蛋白表达水平显着升高（P<0.01）,GLT-1、Glu NR2Am RNA相对表达量、GLT-1蛋白表达水平显着下降（P<0.01）;与模型组比较,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠海马内NDRG2、Glu NR2B m RNA相对表达量、NDRG2蛋白表达水平降低,GLT-1、Glu NR2A m RNA相对表达量及GLT-1蛋白表达水平升高（P<0.05）。（7）与空白组相比,模型组大鼠皮质及海马内p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显着降低（P<0.01）;与模型组相比,西药组、中药安神方低剂量组、中药安神方高剂量组大鼠皮质及海马内p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论:1.中医药干预失眠具有独特优势,是失眠领域的主要研究方向之一,知识图谱直观展现了该领域发展脉络、研究热点及前沿趋势,为科研人员提供研究方向。2.中药安神方具有较好的安全性,能提高患者夜间睡眠质量,减轻日间疲劳,对患者的焦虑抑郁情绪亦有改善作用,疗效显着优于安慰剂。3.中药安神方能改善睡眠剥夺大鼠的昼夜节律和学习记忆,其机制可能与调控星形胶质细胞,并对其脑内的神经递质产生影响有关。

谢光璟^[6]（2021）在《从“脑为元神之府”探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠能量代谢的影响及机制》文中研究表明目的:本文在团队前期研究基础上,围绕安寐丹对睡眠剥夺（SD）大鼠的作用机理,从理论部分和实验部分两个层面进行研究。理论部分将基于中医学“脑为元神之府”观点,从中医学对脑的认识,元神的认识,以及脑、元神、睡眠三者之间的关系进行梳理和挖掘,进而提出“元气-阴阳-五藏神”的失眠防治理论体系并阐述其中医内涵。实验部分通过建立SD大鼠模型,确立培元安神方安寐丹为实验用药,主要围绕安寐丹对SD大鼠能量代谢的作用机制,包括代谢水平、活动强度、线粒体生物学功能、能量代谢通路蛋白表达特征以及睡眠与能量的关系等开展相关研究,以期阐释SD发生后能量代谢的变化情况以及安寐丹调控的作用机理,为中医药防治睡眠障碍性疾病提供新思路和新方法。方法:理论探讨:通过文献检索、古籍整理、系统总结等多种方法,从“脑为元神之府”观点出发,挖掘其理论内涵,分析中医学对“脑”“元神”的理解,从其概念、发展演变、生理功能,引申内涵等进行深入阐析,探讨关于脑、元神和睡眠关系的中西医认识,并进一步提出“元气-阴阳-五藏神”的失眠防治体系,分析其合理性和科学性,为我们确立培元安神治法及方药奠定基础,也为丰富中医药失眠防治理论提供支撑。实验研究:健康Sprague Dawley雄性大鼠,体质量220±10g,实验过程中控制温度、湿度及光照在正常范围,食物、垫料等灭菌处理,先进行1周环境适应后随机分为空白组（Ctrl）、模型组（SD）、安寐丹组（AMD）及褪黑素组（MT）。每日灌胃一次,连续给药4周。采用改良多平台水环境法制备睡眠剥夺模型。实验一检测各组体质量、摄食量及运动耐力,血糖及血脂水平,糖脂代谢相关基因,ATP、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP水平。实验二用HE染色及超微电镜观察大鼠下丘脑形态及线粒体等细胞器结构,Western blotting检测线粒体关键蛋白TFAM、Nrf1、Drp1和Mfn2表达以及免疫荧光（双标）检测四种蛋白在线粒体的靶向定位;ROS染色以及ELISA检测SOD、MDA、GSH-Px水平共同评价线粒体氧化应激程度。实验四运用免疫荧光检测腺苷受体A1R、A2AR以及神经递质受体mGluR5、PTGDR、GABAA1α的表达及共表达。实验三分组同实验一,每组再分4个亚组（n=5）:ZT0组、ZT6组、ZT12组、ZT18组。SD模型建立及给药方式同实验一。运用自主活动视频分析系统监测各组自发活动,Real Time-q PCR检测AMPK/PGC-1α/Nrf-1通路及生物钟基因Per1、Cry1、Bmal1、Clock转录水平,Western blotting检测p-AMPK、PGC-1α、Nrf-1蛋白翻译水平,免疫组化检测节律基因的表达。结果:理论探讨:关于“脑为元神之府”,中医学有非常丰富的理论渊源,中医学对脑和元神从功能的角度认识地较为全面,且二者联系体现在精神情志思维活动上,睡眠调节属于其中范畴。元神是化生五脏神的基础,五脏神的功能通过脑整合,脑的功能集中通过五脏神体现,表现在精神、情志、思维等多个维度,睡眠与脑的联系通过协调五脏阴阳发生联系。故“元气-阴阳-五脏神”的失眠防治体系符合中医学对睡眠与脑、神关系的定位,元气是根柢,阴阳是纲领,五脏神是核心。培元安神治法是我们防治失眠的一种重要的治疗方法。基于该种治法本课题组确立了古方安寐丹并开展相关实验研究,阐明安寐丹对SD大鼠的作用机制,为指导临床提供新思路和新方法。实验研究:实验一,（1）各组大鼠体质量随时间增加,Ctrl组增长明显,SD增长率缓慢。与Ctrl组比较,SD组体质量从第7天降低,并在其后较Ctrl组显着下降;与SD组比较,AMD组从第14天体重增加,并在随后增长。摄食情况显示SD组在4小时内总的摄食量增加,同时前2小时与后2小时SD大鼠进食量均较Ctrl组显着性增加;安寐丹干预后0-2h及2-4h的摄食量较SD组并未见统计学差异。（2）糖脂代谢结果显示,与Ctrl组比较,SD组FBS、TG、TC、LDL-C水平显着升高,HDL-C含量则显着下降;与SD组对比,AMD显着降低了FBS、TG、TC、LDL-C水平,同时增加了HDL-C。肝脏中糖脂代谢相关基因mRNA结果显示,与Ctrl组比较,SD大鼠FAS、ACC1基因表达上调,PPARγ、GLUT4表达下调;AMD能够不同程度下调FAS、ACC1基因而上调PPARγ、GLUT4,说明安寐丹改善糖脂代谢与调节FAS、ACC1、PPARγ、GLUT4基因表达相关。（3）力竭性游泳显示SD大鼠游泳时间、游泳速度及游泳总路程均显着下降,经安寐丹干预后以上三项指标均有明显提升,提示安寐丹能够改善SD导致的活动下降,提高大鼠的运动量。（4）ATP水平及ATP酶结果显示SD组ATP水平、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶均显着下降,AMD组ATP、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶均增加,说明安寐丹可以改善SD导致的高代谢状态,纠正代谢紊乱。实验二:（1）HE染色结果显示,Ctrl组细胞结构完整,形态正常,胞浆丰富,胞核清晰,核浆比大;SD组细胞数量明显减少,形态不规则,胞浆浓缩,核固缩。AMD干预后细胞形态结构改善,少量核固缩和细胞坏死。超微电镜结果显示,Ctrl组细胞形态基本正常,线粒体形态规则;SD组细胞核不规则,线粒体肿胀变形,嵴断裂或消失。AMD干预后细胞形态改善,部分线粒体肿胀及空泡现象。（2）Western blotting结果显示,与Ctrl组相比,SD大鼠下丘脑TFAM、Nrf1、Drp1、Mfn2蛋白相对表达均显着减少;与SD组比较,AMD升高了TFAM、Nrf1、Drp1、Mfn2表达,说明安寐丹可以改善SD大鼠下丘脑线粒体生物合成、融合及分裂功能,维持线粒体结构和功能稳定。（3）免疫荧光显示,TFAM、Nrf1、Drp1及Mfn2与VDAC1之间均存在共表达,Ctrl组有大量的阳性细胞共存;SD组共表达减少。经过AMD干预TFAM、Nrf1、Drp1、Mfn2与VDAC1共表达增多,结果与前面WB一致。（4）ROS染色显示Ctrl组IOD较低,SD大鼠IOD升高;与SD组比较,AMD显着降低IOD,但AMD与MT组比较无差异。SD组SOD及GSH-Px水平下降,MDA增加;AMD升高SOD及GSH-Px水平并降低MDA表达。说明安寐丹缓解了氧化应激失衡,并可能通过改善活性氧代谢影响线粒体功能。实验三:（1）Ctrl组的CAMKKβ、AMPK、PGC-1α、Nrf-1的mRNA呈现一定节律特征,四种基因有光期下降,暗期上升的趋势。与Ctrl组比较,SD组节律出现紊乱,CAMKKβ在ZT18,PGC-1α在ZT0与Ctrl比较无统计学意义;CAMKKβmRNA在ZT0表达下调,在ZT6、ZT12表达上调;AMPKmRNA在ZT0、ZT6、ZT12表达上调,在ZT18表达下调;PGC-1αmRNA在ZT6、ZT12表达上调,在ZT18表达下调;Nrf-1mRNA在ZT6表达上调,在ZT0、ZT12、ZT18表达下调。与SD组比较,AMD干预后大鼠节律改善,有光期表达减少暗期增加的趋势,CAMKKβmRNA在ZT0、ZT18及PGC-1αmRNA在ZT0与SD组无统计学意义,AMPKmRNA、Nrf-1mRNA在四个时间节点均较SD组有显着改善。（2）进一步使用Western blotting方法检测了AMPK的磷酸化水平及PGC-1α、Nrf-1在不同节点的翻译水平。结果显示,与Ctrl组比较,SD组p-AMPK、PGC-1α及Nrf-1蛋白相对表达量不规律,总体表达量下降,p-AMPK在ZT12表达上升,PGC-1α、Nrf-1在4个节点表达均下降;与SD组比较,AMD干预p-AMPK、PGC-1α、Nrf-1总体表达上调,其中p-AMPK在ZT12节点无统计学差异,PGC-1α在ZT12表达降低,Nrf-1在ZT18表达降低,其余节点蛋白表达增加。（3）Ctrl大鼠Bmal1、Cry1及Per1基因表现一定节律特征,Bmal1在光期降低并逐渐到暗期增加,Cry1、Per1在光期增加暗期降低。Clock尚未有显着节律特征。与Ctrl组比较,SD组未出现节律特征,Bmal1mRNA在ZT0、ZT12、ZT18下调、ClockmRNA在ZT6、ZT12下调,Cry1mRNA在ZT0上调而在ZT6、ZT12、ZT18下调;Per1mRNA在4各节点表达均下调。与SD对比,AMD干预后Bmal1、Cry1及Per1基因在不同节点改善,其中Bmal1、Cry1在4个时间节点上与SD组均有统计学意义,Bmal1mRNA除在ZT6表达下调,其余较SD组表达上调;同时,Clock、Per1仅在ZT6、ZT12上调了Clock、Per1。（4）选择差异最显着ZT6、ZT12检测四种基因蛋白表达。与Ctrl组比较,SD组Bmal1、Clock、Cry1、Per1蛋白表达在ZT6、ZT12均显着降低;与SD组比较,AMD干预后Bmal1、Clock、Cry1、Per1蛋白表达在ZT6、ZT12增加,IOD显着升高。（5）Ctrl组呈现较好昼夜节律特征,而SD组昼夜节律相对紊乱,TT、LT、DT均明显延长。SD除20:00及8:00外,其余6个节点时间较Ctrl组增加;安寐丹显着缩短了TT、LT及DT;在11:00至20:00的4个节点与SD组比较有统计学意义。光暗条件下各组大鼠白天活动速度、活动次数较夜间均显着减少;与Ctrl组比较,SD组在白天夜间活动速度、活动次数均增加;与SD组比较,AMD降低了SD大鼠夜间活动的平均速度,以及降低日间及夜间活动次数。实验四:（1）与Ctrl组比较,SD组中A1R、mGluR5荧光强度升高,A2AR、PTGDR、GABA1α荧光强度显着下降;与SD组比较,AMD干预后A1R、mGluR5荧光强度均降低,A2AR、PTGDR、GABA1α荧光强度显着增强,蛋白表达量升高。（2）免疫荧光观察蛋白共表达。A1R与mGluR5可见明显共表达,SD组较Ctrl组明显,共表达为黄色或橙色。但SD组及AMD组中A2AR与mGluR5的共表达很低甚至无共表达,提示A1R可能更密切与mGluR5结合发挥睡眠调节作用,而A2AR与mGluR5的作用并不显着。A1R与PTGDR之间未见有共表达,A2AR与PTGDR可见显着共表达,SD组共表达减少,AMD可见部分共表达。A1R、A2AR与GABAA1α均有明显共表达,Ctrl组明显,SD组较低,AMD干预后共表达增加。结论:（1）失眠中医称“不寐”,总由心神不安导致的睡眠质量下降。中西医都认为脑都是十分重要的脏腑,在精神情志等高级生命活动中发挥关键作用。基于中医学“脑为元神之府”理论,吸收《内经》睡眠“三大学说”——阴阳理论、营卫理论、脏腑理论的思想,我们进一步总结归纳出以“元气-阴阳-五脏神”为核心的失眠防治体系,认为元气是睡眠的根柢,阴阳是睡眠的纲领,五脏神是睡眠的核心,从整体的、功能的、系统的层面认识了失眠的病因病机,基于该理论体系我们确立培元安神治法为失眠治疗的重要方法,培元安神代表方安寐丹为其代表方。（2）SD与能量代谢紊乱相关,常相互作用,互为因果。SD发生后能量代谢出现明显异常,故能量代谢紊乱参与了SD发生发展过程,从能量代谢角度着手防治睡眠障碍可能成为一种新的思路。（3）安寐丹能够改善SD大鼠能量代谢紊乱,纠正糖脂代谢异常,提高活动度及ATP水平。（4）安寐丹可以通过改善线粒体结构损伤,改善线粒体生物合成、分裂及融合等功能,缓解SD导致的能量代谢紊乱。（5）安寐丹改善AMPK/PGC-1α/Nrf-1通路蛋白节律性表达进而调节线粒体生物学功能,安寐丹同时影响生物钟基因的节律特征,使得AMPK作为细胞能量状态传感器可能从能量和节律两个层面参与SD大鼠的代谢过程。（6）安寐丹可以改善A1R及A2AR表达,并调节其与mGluR5、PTGDR、GABAA1α共表达水平,并可能从该途径发挥改善SD大鼠睡眠的作用。

张云^[7]（2021）在《保健推拿手法对疲劳型亚健康模型大鼠β-内啡肽及HPA轴相关激素水平的影响》文中研究指明目的:观察保健推拿手法对疲劳型亚健康模型大鼠β-内啡肽及下丘脑-垂体-肾上腺皮质（hypothalamus-pituitary-adrenal axis,HPA）轴相关激素水平的影响。方法:60只SD大鼠随机分为3组:正常饲养组、模型组及推拿组,每组20只。模型组与推拿组均采用睡眠剥夺水箱进行每天不足6小时睡眠的睡眠剥夺,正常饲养组于每天同一时间放入模拟水环境水箱内,推拿组予以手法干预,连续14天。实验结束后,采集标本。ELISA法测垂体β-EP含量,免疫组化法测下丘脑CRH表达,ELISA法测血浆促肾上腺皮质素（ACTH）与皮质酮（CORT）水平。并对检测值进行统计分析。结果:（1）垂体β-EP含量结果:模型组与对推拿组垂体β-EP含量分别为（170.63±32.66）pg/mg与（221.57±40.54）pg/mg,均高于正常饲养组（143.52±26.71）pg/mg,差异均有统计学意义（P<0.05）;但推拿组明显高于模型组,且差异有显着性（P<0.05）。（2）下丘脑CRH表达结果:光镜下观察发现,模型组与推拿组中分布于下丘脑神经元胞浆的免疫组化阳性黄色反应物颜色均较正常饲养组深,但推拿组较模型组浅,即推拿组经推拿刺激后下丘脑CRH表达量升高放缓。（3）血浆ACTH水平结果:模型组与对推拿组血浆ACTH含量分别为（47.80±6.46）ng/L与（36.25±8.34）ng/L,均高于正常饲养组（29.13±1.67）ng/L,差异均有统计学意义（P<0.05）;但推拿组明显低于模型组,且差异有显着性（P<0.05）。（4）血浆CORT水平结果:模型组与对推拿组血清CORT含量分别为（8.23±2.34）μg/L与（5.52±0.92）μg/L,均高于正常饲养组（5.37±1.24）μg/L,差异均有统计学意义（P<0.05）;但推拿组明显低于模型组,且差异同样有统计学意义（P<0.05）。结论:保健推拿手法通过促进脑垂体β-EP释放,降低疲劳型亚健康模型大鼠下丘脑CRH、血浆ACTH及CORT含量,抑制HPA轴功能过度亢进,从而发挥其对疲劳型亚健康状态的调治作用。

任小娟^[8]（2020）在《肾不藏志不寐的理论及实验研究》文中认为目的:（1）探讨肾不藏志不寐论治的理论依据、因机证治和常用安肾志方药。（2）采用D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸（PCPA）建立肾不藏志不寐大鼠模型,观察肾不藏志不寐模型大鼠衰老方面、睡眠方面和海马转录组变化,衰老方面包括记忆能力、氧化应激、凋亡基因,睡眠方面包括睡眠时间、脑电图、炎症因子和神经递质。（3）观察远志对肾不藏志不寐大鼠睡眠、神经递质和炎性因子的影响,以及远志对肾不藏志不寐大鼠海马转录组的影响。方方法:（1）收集、归纳和探讨肾不藏志不寐的理论依据和论治方药。（2）将实验动物随机分为空白对照组、D-半乳糖组、对氯苯丙氨酸组、肾不藏志不寐组,采用D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）通过Morris水迷宫（MWM）观察肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,检测肾不藏志不寐大鼠脑氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的含量,海马超氧化物歧化酶1（SOD1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）、CAT、B淋巴细胞瘤相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠衰老方面的变化。（4）采用戊巴比妥实验观察肾不藏志不寐大鼠睡眠情况,通过脑电图观察大鼠觉醒（Wake）、慢波睡眠I期（SWS1）、慢波睡眠II期（SWS2）、快速动眼睡眠（REMS）和睡眠总时间（TST）,检测肾不藏志不寐大鼠血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,脑5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量,海马白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）、5羟色胺1A受体(5-HT1AR)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)、代谢型谷氨酸受体2（m Glu R2）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠进行睡眠方面的变化。（5）对空白对照组和肾不藏志不寐组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。（6）观察远志对肾不藏志不寐大鼠的影响:将实验动物随机分为空白对照组、肾不藏志不寐组、远志低剂量组（0.0875g/kg）、远志中剂量组（0.175g/kg）、远志高剂量组（0.35g/kg）、地西泮组（0.92mg/kg）,通过MWM观察远志对肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力的影响,检测各组大鼠海马5-HT、Glu、GABA的含量,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）对空白对照组、肾不藏志不寐组、远志中剂量组、地西泮组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。结结果:（1）肾志对寐寤具有调节作用,肾不藏志不寐的主症为夜寐早寤,病位在肾,病因是肾脏虚损,肾志不入于舍是肾不藏志不寐的核心病机。肾不藏志不寐常见临床证型包括肾气不固型、肾精不足型、肾阳虚型、肾阴虚型、肾虚水泛型和肾不纳气型六种证型。远志、刺五加、人参、茯神、五味子、交泰丸、黄连阿胶汤、六味地黄丸、磁朱丸和孔圣枕中丹是治疗肾不藏志不寐常用方药。（2）D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型衰老方面的变化:与空白对照组比较,模型大鼠体重减轻,MWM中逃避潜伏期延长、穿台次数减少,脑SOD、CAT、GSH-px含量减少、MDA含量增加,海马SOD1、SOD2、CAT m RNA表达上调,海马Bax、Caspase-3 m RNA的表达上调、Bcl-2 m RNA表达下调。（4）肾不藏志不寐大鼠模型睡眠方面的变化:戊巴比妥实验发现肾不藏志不寐大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠时间缩短,肾不藏志不寐大鼠脑电图WAKE增加、SWS1、SWS2、REMS和TST减少,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加,脑5-HT、GABA含量减少、Glu含量增加,海马IL-6、TNF-αm RNA表达上调,海马5-HT1AR、GABAARα1m RNA表达下调、m Glu R2 m RNA表达上调。（5）肾不藏志不寐大鼠海马转录组分析结果:与空白对照组相比,肾不藏志不寐组的差异基因共有1628个,其中上调基因上调887个,下调741个;差异基因的功能涉及神经发育、细胞发育、甘油三酯代谢、核糖体、氧化应激、炎性因子;并与帕金森病、阿尔茨海默病、逆行神经的信号通路、慢性进行性舞蹈病有密切联系。通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析、蛋白互作分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组的关键差异基因并进行验证,发现肾不藏志不寐大鼠海马显着差异基因为Gnb3、Faah、Mmp9、Twist1。（6）远志可以提高肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,增加模型大鼠海马5-HT、GABA的含量、降低Glu的含量,降低血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）药物干预肾不藏志不寐大鼠的海马转录组分析结果:（1）与肾不藏志不寐组相比,远志组的差异基因共有663个,其中上调240个,下调423个;差异基因主要涉及神经发育、昼夜节律调控、细胞凋亡与增殖、氧化磷酸化、能量代谢、免疫调节;并与帕金森病、阿尔茨海默病、慢性进行性舞蹈病、非酒精性脂肪肝、I型糖尿病、哮喘的发生有密切联系。（2）与肾不藏志不寐组相比,地西泮组的差异基因共有1660个,其中上调基因732个,下调基因928个;差异基因主要涉及神经系统发育的调控、氧化磷酸化、神经元凋亡、氧化应激、能量代谢;并与帕金森病、慢性进行性舞蹈病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝有密切联系。（3）远志对肾不藏志不寐干预作用的差异基因235个,其中显着治疗作用的基因37个;差异基因的功能涉及神经元发育、γ-氨基丁酸信号通路、细胞生长调控、参与免疫球蛋白介导的免疫应答、能量代谢;并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、I型糖尿病、非酒精性脂肪肝等有关。（4）地西泮对肾不藏志不寐干预作用的差异基因753个,其中显着治疗作用的基因49个;差异基因涉及中枢神经系统发育、老化、突触的调节、凋亡的调控、多巴胺、糖原、脂肪酸、嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸代谢。并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝、心肌收缩、单纯疱疹病毒感染等有关。（5）肾不藏志不寐与远志、地西泮关联的靶标基因及分子通路分析:通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组、远志组和地西泮组的关键差异基因并进行验证,发现远志有效靶基因为Faim、Pcp2、Elovl6;地西泮有效靶基因为Npr3、Trh;两药共同作用的靶点为BDNF、Gabra6。结结论:（1）肾志与不寐有着密切联系,肾不藏志是肾不藏志不寐的核心病机,补益肾脏、安神定志为肾不藏志不寐的治疗原则,远志是归经入肾的的安肾志药物,具有安神、强志、益肾的功效,是治疗志异常的首选药物。（2）D-半乳糖联合PCPA可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型与衰老相关的学习记忆能力、氧化应激、凋亡记忆基因的表达发生了改变,与睡眠相关的睡眠时间、脑电图、神经递质和炎性因子的表达发生了改变。（4）肾不藏志不寐大鼠模型海马存在基因转录水平上的变化,显着差异基因功能涉及神经系统、代谢和炎症等。（5）远志可以改善肾不藏志不寐大鼠的睡眠、调节神经递质、降低炎性因子的表达。（6）远志和地西泮对肾不藏志不寐大鼠海马的神经系统和炎症相关基因具有一定的干预效应,远志更侧重对神经功能相关靶基因的调节。

王庆全^[9]（2020）在《心不藏神不寐的理论及实验研究》文中研究说明本研究是基于我们科研团队三项国家自然科学基金项目、二十余年临床实践及科研验证而总结提出的“依据单一症状的中医不寐五神分型病位诊断法”（简称“中医不寐五神分型”,包括心不藏神不寐、肝不藏魂不寐、肺不藏魄不寐、脾不藏意不寐、肾不藏志不寐5型）,选择其中之“心不藏神不寐”一型而进行的专项研究,涉及“心不藏神不寐”的理论研究、“心不藏神不寐”动物模型的构建及“心不藏神不寐”动物模型的药物干预研究三个部分。第一部分心藏神对寐寤具有重要的调节作用,心不藏神不寐的本质在于心神不安于舍,以入寐唯艰、迟寐、甚或彻夜不眠为主症,病位主要与心有关。心不藏神不寐的病因包括虚实两个方面,邪实多因心火、痰火、食滞和瘀血等,正虚多责之于心之气、血、阴、阳亏虚等;其病机主要是邪扰心神或心神失养。心不藏神不寐的治则有祛邪安心神（清心火安心神、祛痰热安心神、和胃气安心神、化瘀血安心神）、补益安心神（补心气安心神、养心血安心神、滋心阴安心神、温心阳安心神）和重镇安心神。临床多从心火亢盛、痰火扰心、心胃不和、瘀血阻心、心气亏虚、心血亏虚、心阴不足和心阳亏虚等方面进行辨治。治疗心不藏神不寐的安心神归经药物较多,然而每味药物又有其自身的特点,临床上可根据心不藏神不寐病机偏于心火盛、痰热、瘀血或心之气、血、津液不足等病理因素,在遣方用药时,有针对性的加入不同性能的安心神归经药物,从而有助于疗效的提高。文献报道心火亢盛是不寐病的常见病机,而黄连是清心火安心神诸药中最擅长治疗失眠的一味,古今文献报道较多;其发挥安心神作用的主要成分是小檗碱,而其它清心火安心神药则不含有这一成分;且火热之邪扰神为心不藏神不寐的常见致病因素,黄连清心火、安心神之功恰好针对火热之邪扰神这一致病因素。因此,本研究首选黄连进行心不藏神不寐的实验研究。第二部分目的:探索心不藏神不寐大鼠模型的造模方法和评价指标。方法:采用对氯苯丙氨酸联合咖啡因复制心不藏神不寐大鼠模型,并从一般情况、水迷宫实验、戊巴比妥钠致眠实验、心血管相关因子和脑电图等方面对模型进行评价。结果:与正常组比较,复合组大鼠体重明显减轻,心率、呼吸频率、收缩压明显升高。与正常组比较,复合组睡眠潜伏时间明显延长（P<0.01）,高于PCPA组、咖啡因组（P<0.01）;复合组睡眠持续时间明显缩短（P<0.01）,低于PCPA组、咖啡因组（P<0.01）。与正常组比较,复合组、PCPA组大鼠逃逸潜伏期明显延长（P<0.01）,复合组、PCPA组大鼠目标象限穿台次数均减少（P<0.01）。与正常组比较,复合组大鼠血浆、心肌及脑组织中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及LI-17A含量均有不同程度的升高,且高于PCPA组、咖啡因组。结论:PCPA联合咖啡因的造模方式可导致大鼠学习记忆能力下降,心血管功能异常,脑电特征出现TST明显减少,睡眠潜伏期明显延长,SWS明显减少,REMS减少,此与心不藏神不寐患者PSG特征类似,故以PCPA联合咖啡因可以构建心不藏神不寐大鼠模型。第三部分目的:基于转录组测序技术探索安心神归经药黄连的单体黄连素治疗心不藏神不寐的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分成正常组、模型组、地西泮组和黄连素低、中、高剂量组,每组10只。黄连素高、中、低剂量组分别灌胃给予黄连素200、100、50mg/kg;地西泮组给予0.92mg/kg地西泮水溶液灌胃;模型组和正常组灌胃给予同体积的生理盐水,连续灌胃给药7天,治疗结束后行戊巴比妥钠睡眠实验及水迷宫实验,并采用Elisa法检测血浆中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及IL-17A的含量。同时选取正常组、模型组、黄连素中剂量组和地西泮组大鼠海马组织进行转录组测序,按padj<0.05及|log2foldchange|≧2作为显着差异表达基因的筛选条件（其中log2foldchange≧2为显着上调基因,log2foldchange≦-2为显着下调基因）;以padj<0.05作为GO、KEGG显着富集的筛选标准。采用PCR、Western blot对关键基因进行验证。结果:与模型组比较,黄连素低、中、高剂量组及地西泮组大鼠睡眠潜伏时间均缩短、睡眠持续时间均延长（P<0.01）,大鼠逃逸潜伏期均明显缩短、穿台次数均增加（P<0.01）。与模型组比较,黄连素低、中、高剂量组及地西泮组均能降低血浆中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及IL-17A的含量,且黄连素中剂量组优于地西泮组（P<0.01）。与模型组比较,正常组筛选出显着差异表达基因164个,其中上调146个,下调18个;黄连素中剂量组筛选出显着差异表达基因164个,其中上调159个,下调5个;地西泮组筛选出显着差异表达基因123个,其中上调111个,下调12个。根据padj<0.05,并与模型组比较,正常组富集到显着上、下调GO条目分别为564个（BP 384个、CC 89个、MF 91个）和320个（BP 150个、CC 107个、MF 63个）;黄连素中剂量组,富集到显着上、下调GO条目分别为558个（BP 398个、CC 87个、MF 73个）和343个（BP 148个、CC 130个、MF 65个）;地西泮组富集到显着上、下调GO条目分别为830个（BP619个、CC 109个、MF 102个）和243个（BP 110个、CC 82个、MF 51个）。根据padj<0.05,并与模型组比较,正常组富集显着上、下调KEGG通路分别为84个和13个;黄连素中剂量组富集显着上、下调KEGG通路分别为88个和15个;地西泮组,富集显着上、下调KEGG通路分别为89个和14个。与正常组比较,模型组关键基因Ar、Erb B2、Erb B4和Grin2a表达量明显降低,经黄连素中剂量、地西泮治疗后Ar、Erb B2、Erb B4和Grin2a表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:安心神归经药黄连的单体黄连素治疗心不藏神不寐主要是通过上调相关基因实现的,其发挥作用的通路比较多,且上调通路多于下调通路。安心神归经药黄连的单体黄连素可促进心不藏神不寐大鼠海马中Ar、Erb B4、Erb B2、Grin2a基因的表达,并激活Erb B信号通路,这可能是其安心神作用的潜在有效靶点及通路。

于姣姣^[10]（2020）在《薰衣草精油干预心理疲劳大鼠的疗效观察和生物学基础研究》文中研究说明目的:现代社会,由于生活节奏加快,工作压力增大,心理疲劳的发生率变得越来越高,患者常出现精神不集中,记忆力减退,情绪不佳、工作动力不足等表现,严重者可引发早老性痴呆、肿瘤等。因此本研究着眼于心理疲干预措施的开发,探讨薰衣草精油干预心理疲劳的作用机制,为临床改善心理疲劳提供新的治疗方法。方法:理论研究理论研究主要从以下几方面展开:一、芳香疗法的发展概况梳理;二、芳香疗法不同给药途径的作用机制及安全性对比;三、芳香药吸入疗法的中医理论和生理学基础研究。文献研究薰衣草改善疲劳的临床研究系统评价,计算机检索中国知网（CNKI）、万方（Wanfang Data）、维普（VIP）、PubMed,Web of Science数据库中关于薰衣草改善疲劳的临床研究,中文数据库检索主题词为:“疲劳”和“薰衣草”;英文数据库检索主题词为“fatigue”和“lavender”。对检索到的文献进行排重、阅读、对确定纳入的研究进行信息提取和质量评价,并对结局指标进行比较。实验研究采用改良多平台水环境法剥夺大鼠睡眠复制心理疲劳模型,将大鼠随机分为空白组、模型组、薄荷组和薰衣草组。除空白组外其他三组进行72h完全睡眠剥夺。造模成功后,空白组、模型组熏蒸去离子水、薄荷组和薰衣草组熏蒸1%浓度的精油进行治疗。实验结束后通过一般情况（精神状态、体重）和行为学实验（抓握力、旷场、高架十字迷宫）评价药效。然后通过ELISA实验检测大鼠血清中Ghrelin、Leptin、Orexin-A含量、HE染色观察大鼠海马及胃粘膜的损伤、免疫组化观察大鼠海马及胃GHSR、OBR、OX1R免疫阳性物表达、Western Blot实验检测大鼠海马及胃GHSR、OBR、OX1R蛋白表达、RT-PCR检测海马及胃中Ghrelin、Leptin、Orexin-A及其受体GHSR、OBR、OX1R的mRNA表达。探讨薰衣草精油改善心理疲劳的生物学机制。结果:理论研究认为,芳香疗法有深厚的中医理论基础,经对比认为吸入式疗法安全性高、起效快,更适合临床推广。文献研究发现,在纳入的14篇关于薰衣草干预疲劳的临床研究中,薰衣草精油的使用频率最高,有12篇之多,另外2篇分别使用了薰衣草花茶和薰衣草乳膏。在摄取方式上吸入方法使用频率最高,涉及10篇研究,其他4篇中有3篇采取了外用方式,剩余1篇是花茶口服。实验研究:抓握力测试,与空白组相比,模型组大鼠抓握力降低（P<0.01）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组大鼠抓握力值升高（P<0.01、P<0.01）;与薄荷组相比,薰衣草组大鼠抓握力值更高,有统计学差异（P<0.01）。旷场,总活动距离,总穿格数,直立次数,直立时间,与空白组相比,模型组大鼠总活动距离减少,有统计学差异（P<0.01、P<0.01、P<0.01、P<0.01）;与模型组相比,薄荷组大鼠总活动距离、总穿格数,直立次数,直立时间增加,有统计学差异（P<0.05、P<0.05、P<0.01、P<0.01）;薰衣草组大鼠总活动距离增加（P<0.05、P<0.05、P<0.05、P<0.05）;薄荷组与薰衣草组总活动距离无统计学差异。修饰时间与空白组相比,模型组大鼠修饰时间增加（P<0.01）;与模型组相比薄荷组大鼠修饰时间减少,但无统计学差异;与模型组相比,薰衣草组大鼠修饰时间减少,有统计学差异（P<0.05）。高架十字迷宫,开放臂停留时间百分比,与空白组相比,模型组大鼠开放臂停留时间百分比减少（P<0.05）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组大鼠开放臂停留时间百分比增加（P<0.01、P<0.01）。海马免疫组化阳性物表达GHSR、OX1R,与空白组相比,模型组表达升高（P<0.01、P<0.01）;与模型组相比,薄荷组表达降低（P>0.05、P<0.01）,薰衣草组表达降低（P<0.05、P<0.01）。OBR与空白组相比,模型组表达降低（P<0.01）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组表达升高（P<0.05、P<0.01）。胃免疫组化阳性物表达GHSR、OX1R,与空白组相比,模型组表达升高（P<0.01、P<0.01）;与模型组相比,薄荷组表达降低（P<0.01、P<0.01）,薰衣草组表达降低（P<0.01、P<0.01）。OBR与空白组相比,模型组表达降低（P<0.01）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组表达升高（P<0.01、P<0.01）。Western Blot实验发现,与空白组相比,胃组织中模型组OBR蛋白表达降低（P<0.01）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组的蛋白表达升高（P>0.05、P>0.05）。RT-PCR实验发现,海马组织中,与模型组比,薄荷组和薰衣草组Ghrelin的mRNA表达降低,（P<0.01、P<0.01）;与空白组相比,模型组Leptin的mRNA表达降（P<0.05）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组OX1R的mRNA表达降低（P<0.01、P<0.01）。胃组织中,与模型组相比,薰衣草组GHSR的mRNA表达降低（P<0.05）;与模型组相比,薄荷组、薰衣草组Orexin-A的mRNA表达降低（P<0.01、P<0.01）。结论:薰衣草干预疲劳最佳作用方式是精油吸入治疗,改良多平台水环境法（MMPM）72小时连续睡眠剥夺能很好的复制心理疲劳大鼠模型,使大鼠出现肌张力下降、旷场活动量下降、焦虑情绪增加、高架迷宫中开放臂活动量减少心理疲劳等表现。薰衣草精油香薰治疗能改善这些不良状态,治疗心理疲劳。而精油作用的机制,可能与调节体内胃饥饿素、瘦素、食欲素A的含量有关。

二、睡眠剥夺机制和中医药干预的进展（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、睡眠剥夺机制和中医药干预的进展（论文提纲范文）

（1）基于线粒体节律的四逆酸枣仁汤干预失眠症日间疲劳疗效和机理研究（论文提纲范文）

（2）失眠症状群及其方证相应的分子网络关联机制研究（论文提纲范文）

（3）“逆针法”对睡眠剥夺的临床效应及免疫蛋白调节机制（论文提纲范文）

（4）柴胡加龙骨牡蛎汤改善围绝经期睡眠剥夺小鼠睡眠机制的研究（论文提纲范文）

（5）中药安神方治疗慢性失眠的临床研究及机制探讨（论文提纲范文）

（6）从“脑为元神之府”探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠能量代谢的影响及机制（论文提纲范文）

（7）保健推拿手法对疲劳型亚健康模型大鼠β-内啡肽及HPA轴相关激素水平的影响（论文提纲范文）

（8）肾不藏志不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）

（9）心不藏神不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）

（10）薰衣草精油干预心理疲劳大鼠的疗效观察和生物学基础研究（论文提纲范文）

四、睡眠剥夺机制和中医药干预的进展（论文参考文献）

• [1]基于线粒体节律的四逆酸枣仁汤干预失眠症日间疲劳疗效和机理研究[D]. 王雪娇. 北京中医药大学, 2021(02)
• [2]失眠症状群及其方证相应的分子网络关联机制研究[D]. 李凌香. 中国中医科学院, 2021(02)
• [3]“逆针法”对睡眠剥夺的临床效应及免疫蛋白调节机制[D]. 闫冰. 长春中医药大学, 2021(01)
• [4]柴胡加龙骨牡蛎汤改善围绝经期睡眠剥夺小鼠睡眠机制的研究[D]. 王琪. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
• [5]中药安神方治疗慢性失眠的临床研究及机制探讨[D]. 纪可. 湖北中医药大学, 2021(01)
• [6]从“脑为元神之府”探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠能量代谢的影响及机制[D]. 谢光璟. 湖北中医药大学, 2021(01)
• [7]保健推拿手法对疲劳型亚健康模型大鼠β-内啡肽及HPA轴相关激素水平的影响[D]. 张云. 广西中医药大学, 2021(02)
• [8]肾不藏志不寐的理论及实验研究[D]. 任小娟. 新疆医科大学, 2020(02)
• [9]心不藏神不寐的理论及实验研究[D]. 王庆全. 新疆医科大学, 2020(02)
• [10]薰衣草精油干预心理疲劳大鼠的疗效观察和生物学基础研究[D]. 于姣姣. 北京中医药大学, 2020(04)