236例慢性粒细胞白血病细胞遗传学特征观察

一、236例慢性粒细胞白血病患者细胞遗传学特性观察（论文文献综述）

王志清^[1]（2020）在《芪附扶正合剂联合低剂量传统化疗方案治疗老年急性髓系白血病（非M3）的疗效分析及机制研究》文中提出研究目的本研究通过比较传统低剂量化疗方案联合和不联合芪附扶正合剂（Modified Qifu Fuzheng Decoction,QFFZD）治疗老年急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia,AML）（非M3）的相关临床指标,包括缓解率、中医症候积分、复发率、生存率及感染发生率等,客观评价QFFZD在老年AML治疗中的临床疗效和安全性。再通过体外实验探讨QFFZD协同阿糖胞苷（Cytarabine,Ara-C）对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响,并探寻其分子学作用机制,为临床QFFZD辅助治疗AML提供科学依据。研究方法临床研究方法:根据患者治疗期间是否联合口服芪附扶正合剂中药,将58例老年AML患者分为观察组（30例）和对照组（28例）,观察组予低剂量传统化疗方案联合QFFZD口服,对照组仅予低剂量传统化疗方案治疗。比较两组患者的CR率、诱导治疗后中医症候积分变化情况、复发率、中位生存期、总生存率;同时比较两组患者诱导期感染发生率及远期感染发生率。实验研究方法:（1）采用20只SD雄性大鼠,适应性饲养后随机分为对照组与QFFZD治疗组,分别予2mL生理盐水和2mL生药浓度为1.68 g/mL QFFZD灌胃,连续7天。第8天麻醉后主动脉取血,分离得到上层血清,-80℃保存备用;2.采用MTT比色分析法检测不同浓度QFFZD含药血清、Ara-C单用和联合干预HL-60细胞24h和48h后对其的增殖抑制作用;（3）PI单染流式细胞术（FCM）用于检测QFFZD含药血清、Ara-C单用以及联合使用对HL-60细胞细胞周期的影响;（4）Annexin V/PI双染流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测QFFZD含药血清、Ara-C单用以及联合使用对HL-60细胞的凋亡诱导作用;（5）免疫印迹实验（Western Blot,WB）检测QFFZD含药血清、Ara-C单用以及联合使用对HL-60细胞凋亡相关蛋白兔Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）及其剪切体cleaved caspase-3、cleaved PARP以及Akt/p53信号通路相关蛋白的表达情况;（6）免疫印迹实验被用于检测Akt特异性抑制剂MK-2206 2HCL干预HL-60细胞后凋亡相关蛋白的表达情况。结果临床研究结果:观察组和对照组的CR率分别为66.7%、60.7%,差异无统计学意义（p>0.05）;在诱导化疗结束后改善中医症候积分方面,观察组明显优于对照组（p<0.05）;观察组的复发率略低于对照组,分别为55.0%和58.8%,但差异无统计学意义（p>0.05）;在远期生存方面,观察组和对照组的估计中位生存期分别为21.818.7个月和16.8±5.7个月,1年生存率分别为（60.3±9.4）%和（56.7±9.4）%,3年生存率分别为（39.0±9.8）%和（27.2±9.6）%,5年生存率分别为（27.9±9.7）%和（20.4±9.3）%,均未达到统计学差异（P=0.213）;在不良反应方面,观察组诱导期感染发生率（46.7%）与对照组（46.4%）相差不大;观察组远期的感染发生率（28.0%）低于对照组（34.9%）,差异有统计学意义（p<0.05）。实验研究结果:1.MTT比色分析法结果显示,相同干预时间下,QFFZD含药血清（2%、4%、6%、8%、10%）和 Ara-C（0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L）单用以及联合使用对HL-60细胞的增殖抑制作用均呈浓度依赖性,与对照组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）;不同浓度QFFZD含药血清和Ara-C单独和联合干预HL-60细胞24h和48h后,其对细胞的增殖抑制作用随着干预时间的延长而增强,差异具有统计学意义（p<0.05）;此外,相同干预时间下,二者联合使用对HL-60细胞的增殖抑制作用与二者单独使用对细胞的增殖抑制作用相比,差异具有统计学意义（p<0.05）。2.PI单染流式细胞术结果显示,与对照组相比,QFFZD含药血清（10%）和Ara-C（8μmol/L）单独以及联合干预HL-60细胞24h后,均能将HL-60细胞阻滞于G1期,两药联合时对HL-60细胞的周期阻滞作用更加明显（p<0.05）。3.流式细胞术检测QFFZD含药血清（10%）和Ara-C（8μmol/L）单独以及联合干预HL-60细胞24h后细胞的凋亡率。结果显示,单用以及联合使用均能诱导细胞发生凋亡,并且两药合用时凋亡效果更加明显（p<0.05）。4.QFFZD含药血清（10%）和Ara-C（8μmol/L）单独以及联合干预HL-60细胞24h后,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况,结果显示,促凋亡蛋白Bax以及执行凋亡程序的关键蛋白cleaved caspase-3、cleaved PARP的表达均明显高于空白组（p<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平则低于空白组（p<0.05）。与此同时,Akt/p53信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平各给药组明显低于空白组（p<0.05）,而p53的表达水平各给药组则明显高于空白组（p<0.05）。5.在用QFFZD含药血清（10%）和Ara-C（8 μmol/L）共同干预HL-60细胞前,予Akt特异性抑制剂MK-2206 2HCL（5 nmol/L）预处理24h后,以Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果显示,Akt特异性抑制剂预处理后,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP的表达明显降低（p<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则有所升高（p<0.05）。结论临床研究表明,QFFZD联合低剂量传统化疗方案治疗老年AML较单纯应用化疗有一定优势,尤其体现在可以改善中医症候积分,降低远期感染发生率;随着服药时间的延长,一定程度上可延长中位生存期,提高3年及5年生存率的趋势（虽未达到统计学差别）。实验研究表明,1.芪附扶正合剂含药血清和阿糖胞苷在体外单用和联合使用均能以浓度和时间依赖的方式有效地抑制HL-60细胞的增殖,而且表现出两者之间可能存在协同或叠加效应。2.芪附扶正合剂含药血清和阿糖胞苷在体外单用和联合使用均能明显地提高处于G1期的HL-60细胞比率,同样表现出明显的协同作用。3.芪附扶正合剂含药血清和阿糖胞苷可诱导HL-60细胞发生凋亡,其过程可能是通过调控Akt/p53信号通路从而启动内源性细胞凋亡途径发挥作用。

卢俊^[2]（2020）在《地西他滨治疗儿童R/R-AML和MDS的疗效观察及DUSP16在儿童AML中的机制研究》文中研究表明一、地西他滨治疗儿童R/R-AML和MDS的疗效观察目的:儿童难治/复发急性髓细胞白血病（refractory/relapsed acute myeloid leukemia,R/R-AML）和骨髓增生异常综合征（myelodysplasticsyndromes,MDS）是国际治疗难题,治疗后完全缓解率低,且目前关于儿童髓系肿瘤的靶向治疗研究较少。目前关于地西他滨在儿童R/R-AML和MDS治疗中的报道较少,本研究将评估地西他滨联合低剂量化疗在儿童R/R-AML和MDS治疗中的治疗效果,为R/R-AML和MDS治疗提供参考。方法:回顾性分析以地西他滨联合低剂量化疗作为诱导缓解治疗方案的21例R/R-AML和MDS患儿的临床资料,评估该方案的治疗反应率、治疗相关毒副作用。不良反应分级根据美国国立肿瘤研究所常见毒性标准（Version4.0）进行判定。结果:21例患儿,包括MDS 3例,MDS转化为AML 4例,AML 14例（6例为2个标准诱导缓解治疗没有达到完全缓解,8例为AML复发）。诱导治疗一疗程后,15例获得缓解（CR/Cri）,4例部分缓解（PR）,2例未缓解（NR）,总有效率（ORR）为90.47%。常见不良反应为全血细胞减少及感染,未见脏器不可逆性损伤。结论:地西他滨联合低剂量化疗治疗儿童R/R-AML和MDS疗效显着,且不良反应较小,具有临床推广价值。二、异常甲基化基因DUSP16在儿童急性髓细胞白血病中的作用机制研究目的:基因甲基化修饰在儿童急性髓细胞白血病（Acute myeloid leukemia,AML）的发生和发展中起重要作用。基因启动子CpG岛异常甲基化是抑癌基因失活的重要方式之一,双特异性蛋白磷酸酶16（dual specificity phosphatases,DUSP16）是在儿童AML大样本中成功筛选出的异常甲基化基因,且DUSP16基因在AML患儿中的作用尚未被阐明,因此,本研究将探索DUSP16基因启动子异常甲基化在儿童AML中发挥的作用及机制,为儿童AML的诊断和治疗奠定新的基础。方法:本研究采用自主设计的“三步法”策略,在儿童AML样本和对照组中筛选异常甲基化基因。使用细胞增殖、凋亡、细胞周期实验和动物实验评估DUSP16基因的功能。通过CpG岛预测软件methprimer分析DUSP16基因启动子区域的CpG岛分布情况;运用MSP（methlation specific PCR）和RT-PCR技术检测白血病细胞株和对照样本中DUSP16启动子区域的甲基化状态及其表达水平,共同分析DUSP16基因在AML细胞株中的异常甲基化情况。MSP和RT-PCR实验评估儿童AML和对照组骨髓细胞中DUSP16启动子区域的甲基化状态及其表达水平;RT-PCR检测经去甲基化药物地西他滨处理后儿童AML原代细胞中DUSP16的表达水平,并检测地西他滨处理后儿童AML原代细胞的增殖能力;对DUSP16基因在儿童AML中异常甲基化及其临床意义进行分析。聚类分析凋亡PCR芯片检测DUSP16过表达可能影响的凋亡相关基因,并进行IPA（Ingenuity Pathway Analysis）分析,寻找重要信号调节通路。构建GST-DUSP16融合蛋白表达载体,并运用免疫共沉淀技术检测DUSP16蛋白与组蛋白H3之间的相互作用;Western-blot检测组蛋白H3磷酸化位点的磷酸化水平。结果:“三步法”策略成功筛选出儿童AML中异常甲基化基因DUSP16。DUSP16功能实验结果显示DUSP16可以抑制MV4-11细胞的增殖;促进MV4-11细胞的凋亡;将MV4-11细胞的细胞周期阻滞于G1期;并能抑制小鼠的肿瘤负荷,延长小鼠生存期。CpG岛预测结果显示,DUSP16基因启动子区域存在2个明显的CpG岛;多株AML细胞株中DUSP16启动子呈现高甲基化状态,且DUSP16的表达量很低。儿童AML细胞中DUSP16启动子呈现高甲基化的频率明显高于对照组;定量PCR分析显示DUSP16在儿童AML中表达明显低于对照组;高度甲基化的AML样本中DUSP16表达量低于低甲基化的样本;RT-PCR检测显示6例儿童AML原代细胞经地西他滨处理后3例儿童AML原代细胞中DUSP16基因明显上调,且3例DUSP16明显上调的儿童AML原代细胞的增殖能力明显下降;分析儿童AML总生存时间显示,AML患儿DUSP16启动子高甲基化者,其生存时间明显短于非甲基化患儿组。聚类分析结果显示DUSP16上调后有34个基因明显上调,28个基因明显下调;IPA分析显示DUSP16基因对凋亡一系列相关基因的调节极有可能通过ERK、JUN（JNK）信号通路发挥作用。使用针对组蛋白H3和磷酸化组蛋白H3（针对Ser10磷酸化）的抗体均可以将DUSP16蛋白共同沉淀;Western-blot实验显示,DUSP16基因上调表达后细胞内磷酸化的组蛋白H3（Ser10磷酸化）明显降低,而对MAPKs（ERK1/2、JNK、p38）的去磷酸化作用不明显。结论:DUSP16基因是一个AML相关的肿瘤抑制基因,在儿童AML样本中呈高甲基化状态,影响AML患儿的生存时间;地西他滨能明显上调AML细胞中DUSP16基因表达和抑制DUSP16高甲基化AML细胞的增殖能力;DUSP16基因可能是通过对组蛋白H3的去磷酸化修饰作用来发挥功能。

陈海琳^[3]（2019）在《基于Breg/KIR探讨骨髓增生异常综合征“劳毒致病”病机理论及健脾补肾解毒方的干预研究》文中指出目的:1.观察健脾补肾解毒方治疗骨髓增生异常综合征（MDS）患者的临床疗效。2.通过观察调节性B细胞（Breg）、细胞因子IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ、杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）、探索Breg/KIR免疫异常在MDS发病中的致病作用及“劳毒致病”的免疫学内涵。3.通过观察健脾补肾解毒方联合西医治疗前后细胞因子IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ表达水平变化及杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与疗效相关性分析,探讨健脾补肾解毒方治疗MDS可能的作用机制。方法:1.临床观察:按照纳排标准收集MDS患者45例,数字表法随机分为中西医结合治疗组30例,西药治疗对照组15例。其中中西医结合治疗组正虚毒蕴型17例,毒盛正虚组13例,对照组采用西医常规方法治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用健脾补肾解毒方随证加减。所有患者均治疗3个月为1疗程,观察2个疗程以上进行临床评价,观察治疗前后血常规细胞计数、西医临床疗效、中医证候积分、中医证候改善情况和感染、出血等并发症、不良反应等指标。2.实验检测:（1）对入组MDS患者45例（正虚毒蕴组26例、毒盛正虚组19例）、健康对照者15例,取外周血,分离单个核细胞,以CD25+CD86+作为Breg标记,流式细胞仪检测CD25+CD86+细胞占外周血比例。（2）MDS患者45例（正虚毒蕴组26例、毒盛正虚组19例）及健康对照者15例,采用ELISA法检测外周血IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ水平。（3）对入组MDS患者45例,随机分为中西医结合治疗组30例,西药治疗对照组15例,治疗组又分为正虚毒蕴组17例、毒盛正虚组13例。经6月治疗后,ELISA法检测各组患者治疗前后外周血IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ水平。（4）MDS患者45例（正虚毒蕴组26例、毒盛正虚组19例）及健康对照者15例,取抗凝静脉血,提取DNA,运用序列特异性引物聚合酶链法检测KIR基因分型。结果:1.临床疗效:1)血象变化:（1）治疗组与对照组疗效比较:治疗组治疗后白细胞计数由2.67±2.09×10^9/L上升至3.73±3.65×10^9/L（P<0.05）,血红蛋白浓度由61.59±22.70g/L上升至84.10±27.51g/L（P<0.05）,血小板计数由74.83±96.22×10^9/L上升至112.70±136.68×10^9/L（P<0.05）。对照组治疗后血常规各项指标变化无明显统计学差异（P>0.05）。（2）不同证型疗效比较:治疗组正虚毒蕴型MDS治疗后白细胞计数由3.08±2.37×10^9/L上升至4.23±3.44×10^9/L（P<0.05）;血小板计数由105.41±118.71×10^9/L,上升至141.76±163.76×10^9/L（P<0.05）。血红蛋白浓度由61.49±22.18g/L上升至83.28±28.25g/L（P<0.05）,毒盛正虚组治疗后血红蛋白浓度由61.72±24.28g/上升至85.17±27.60g/L（P<0.05）,不同证型MDS经中西医结合治疗前后血红蛋白差值比较未见明显差异（P>0.05）。2)西医疗效:治疗组总有效率86.67%,对照组总有效率73.33%;但两组治疗有效率无明显统计学差异（P>0.05）。治疗组正虚毒蕴型MDS治疗总有效率94.12%,毒盛正虚型MDS总有效率76.92%,经比较,治疗组不同分型MDS西医疗效也无统计学差异。3)中医疗效:（1）中医证候积分:治疗组治疗后中医证候积分由9.10±2.29分降低至2.93±2.59（P<0.01）,对照组治疗后中医证候积分由8.40±2.80分降低至5.80±3.42分（P<0.05）。正虚毒蕴组MDS治疗后中医证候积分由8.71±2.49下降至2.06±1.66（P<0.05）,毒盛正虚组MDS治疗后中医证候积分由9.62±1.98下降至4.08±3.15（P<0.05）。（2）中医证候疗效:治疗后治疗组中医证候疗效临床痊愈4例、显效11例、有效13例、无效2例,总反应率93.33%。西医对照组15例患者,临床痊愈0例、显效3例、有效6例、无效6例,总反应率62.50%,治疗组中医证候疗效明显优于西医对照组（P<0.05）。正虚毒蕴组临床痊愈3例、显效7例、有效7例、无效0例,总反应率100%,毒盛正虚组MDS临床痊愈1例、显效4例、有效6例、无效2例,总反应率84.62%,两组比较无明显统计学差异（P>0.05）。4)并发症观察:治疗组治疗期间感染发生率23.33%,明显低于对照组73.33%（P<0.05）;治疗组治疗后出血等级改善率40.00%,明显高于对照组20.00%（P<0.05）。5)不良反应观察:治疗组消化道症状、皮肤黏膜反应等不良反应发生率均明显低于对照组（P<0.05）,提示治疗组安全性优于对照组。2.实验结果:1)Breg、细胞因子、KIR在MDS患者及正常对照者比较（1）MDS组CD25+CD86+表型Breg比例0.1904（0.0400,2.5200）%,正常对照组0.0214（0.0000,0.1056）%,MDS组比例明显高于正常对照组（P<0.05）;正虚毒蕴组0.1630（0.0199,2.8264）%,毒盛正虚组0.2869（0.1019,2.5399）%,两组CD25+CD86+表型Breg比例无明显差异（P>0.05）。（2）MDS组外周血细胞因子IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ分别为52.65（38.64,104.35）、210.60（153.70,429.97）pg/ml、235.73（148.04,497.21）pg/ml、99.30（71.06,255.54）pg/ml;正常对照组IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ分别为30.05（22.98,41.12）pg/ml、124.42（105.17,139.48）pg/ml、116.74（96.05,139.51）pg/ml、44.68（40.06,65.72）pg/ml;MDS患者IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ水平明显高于正常对照组（P<0.01）;IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ水平随MDS危度增加而增加,正虚毒蕴组IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ水平分别为48.13（36.52,76.24）pg/ml、190.36（148.68,281.28）、190.21（116.48,296.10）pg/ml、85.68（61.18,115.04）pg/ml;毒盛正虚组对应分别为87.98（46.00,215.44）pg/ml、374.60（163.74,946.08）pg/ml、319.54（172.62,956.92）pg/ml、266.11（76.62,419.05）pg/ml,毒盛正虚组IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ显着高于正虚毒蕴组MDS患者<0.05)。（3）MDS患者KIR各基因频率与正常组比较:MDS患者较正常对照2DS3、2DS4显着较高（P<0.01）;正虚毒蕴组、毒盛正虚组MDS患者各基因频率分别与正常组比较,正虚毒蕴型MDS中2DS3显着较高（P<0.01）,毒盛正虚组MDS患者2DS4显着较高,2DS1显着较低,有统计学意义（P<0.01）;正虚毒蕴组与毒盛正虚组MDS患者比较,其中正虚毒蕴组2DS1显着高于毒盛正虚组（P<0.01）。2)治疗组及对照组治疗后细胞因子变化及KIR疗效相关性分析（1）45例MDS患者分组治疗前后外周血细胞因子比较:治疗后治疗组IL-10由69.06（47.07,119.77）pg/ml下降至48.41（30.66,103.49）pg/ml（P<0.05）,IL-4由238.77（166.20,531.26）pg/ml下降至180.25（133.86,318.50）pg/ml（P<0.05）,IFN-γ由116.91（79.12,274.90）pg/ml下降至84.34（53.45,199.76）pg/ml（P<0.01）;但治疗后MDS患者IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ仍显高于正常对照组（P<0.05）。治疗组治疗前后TGF-β1未见无明显变化（P>0.05）;对照组治疗前后IL-10、TGF-β1、IL-4、IFN-γ均无明显变化（P>0.05）。（2）KIR疗效相关性分析:经6月治疗后,45例MDS患者中有37例为治疗应答组（疗效为HI以上）,8例为治疗无应答组（疗效为PD）,两组基因频率比较,应答组2DS1显着较高,差异显着（P<0.05,OR>1）。26例治疗组应答患者与4例治疗组无应答患者比较,2DS1显着较高,差异显着（P<0.05,OR>1）。结论:1)健脾补肾解毒方治疗MDS疗效良好,联合西医基础治疗可有效改善临床症状,控制感染、改善出血等并发症,明显优于单纯西医基础治疗,且可降低不良反应发生率,这在一定程度上验证了MDS“劳毒致病”的理论和应用价值。2)免疫抑制性Bregs参与了MDS发病的负调控机制,MDS患者CD25+CD86+表型Breg数量增高可触发异常克隆造血细胞的免疫逃逸。3)Bregs的负调控作用引起IL-10、TGF-β1、IL-4、IFNγ等细胞因子的释放增多,可致无效造血以及造血细胞过度凋亡。MDS毒盛正虚型患者外周血IL-10、IL-4、TGF-β1、INFγ显着高于正虚毒蕴型,在一定程度上反映了病情的危度及预后。4)KIR基因的多态性与MDS发病有关,KIR活化型基因2DS3、2DS4高表达,易导致对NK、T细胞传递激活信号异常,这可能是MDS造血干细胞无效造血的重要因素和“劳毒致病”的物质基础之一。5)健脾补肾解毒方治疗MDS作用机制之一可能为通过降低IL-10、IL-4、IFNγ等细胞因子释放,双向调节NK细胞数量及活化、抑制功能,发挥免疫调控作用,从而有利于恢复正常造血及清除造血干细胞的恶性克隆。

吕云飞^[4]（2019）在《外泌体miRNAs在急性髓系白血病中的检测与其表达量的临床意义》文中研究说明目的:分析初诊急性髓系白血病患者外泌体及其中miRNAs,利用荧光定量PCR检测外泌体及其中的miRNAs表达与AML患者预后之间的关系,以期找到AML新的分子靶标用于临床诊断和预后评估。方法:本研究收集2014年3月至2018年5月间我院收治的初发AML（非APL）病例289例的血浆标本。使用exoRNeasy试剂盒提取AML患者血浆标本中外泌体,使用荧光定量qRT-PCR方法检测外泌体中miRNAs的表达量,结合患者的临床特征（性别、年龄、外周血象、骨髓原始细胞计数、FAB分型、血清LDH等）,和常见基因突变（NPM1、FLT3-TID、IDH1、IDH2、CEBPA、DNMT3A 等）情况,分析表达量与患者总生存期（OS）、无事件生存期（EFS）之间的关系。结果:本研究提取粒径分布在50-150nm的外泌体囊泡,使用qRT-PCR技术测定miRNAs的相对表达量。通过文献调研,本课题研究分析AML患者血浆外泌体let-7b,miR-532、miR-660三种miRNAs与预后关系。结果显示miRNAs的高低表达组间临床特征、基因突变等均无显着差异（p>0.05）,且miRNAs的相对表达量与患者的CR率、复发率、异基因骨髓移植比例无显着差异（p>0.05）。血浆外泌体中的let-7b高表达的AML患者具有较长的OS（P=0.012）和EFS（P=0.022）。多因素分析提示let-7b高表达是AML患者预后的独立保护因素（HR 0.532,95%CI 0.312-0.909,P=0.021,for OS;HR 0.473,95%CI 0.276-0.810,P=0.031,for EFS）;血浆外泌体中的miR-532高表达患者OS（P=0.004）与EFS（P=0.014）时间较长,预后较好。多因素分析显示miR-532高表达是患者预后的独立保护因素（HR 0.471,95%CI 0.277-0.800,P=0.005,for OS;HR 0.531,95%CI 0.312-0.903,P=0.020,for EFS）;miR-660 高表达患者具有较长的 OS（P=0.005）和 EFS（P=0.004）。多因素分析结果显示miR-660表达上调患者预后良好,但统计学不显着（P=0.054,HR:0.583,95%CI 0.337 1.009）。结论:（1）AML患者外周血外泌体含量高,可通过荧光定量qRT-PCR技术检测外泌体中miRNAs表达量。（2）AML患者外周血外泌体let-7b、miR-532、miR-660表达水平与预后相关,相比于低表达水平,高表达水平患者OS与EFS更长。多因素分析显示AML患者外周血外泌体let-7b、miR-532高水平表达是预后的独立保护因素。（3）let-7b在AML患者和正常对照外周血外泌体表达存在差异。根据外泌体miRNAs表达水平与患者年龄及相关检查结果构建模型可预测患者生存率。本研究结果为外泌体miRNAs表达水平可作为预测AML预后指标提供数据支持,同时提示let-7b、miR-532、miR-660可能是AML潜在的治疗靶点。

顾斌^[5]（2019）在《高危难治急性白血病实施单倍体造血干细胞移植的对比研究与移植后方案优化》文中提出第一部分 单倍体造血干细胞移植与HLA全相合移植治疗原发耐药急性髓系白血病的疗效对比[目的]总结成人原发耐药急性髓系白血病（primary refractory acute myeloid leukemia,PRR-AML）实施单倍体造血干细胞移植（haploidentical donor stem cell transplantation,Haplo-SCT）的临床疗效,并进一步分析影响预后的相关危险因素以及移植的时机。[方法]我们回顾性分析了 2010年1月至2016年12月期间我院诊治的98例成人PRR-AML患者。其中45名成人PRR-AML患者接受了 Haplo-SCT治疗,并将其与 53 例接受 HLA 全相合移植（HLA-matched donor stem cell transplantation,MD-SCT）患者的治疗结果进行了比较。分析3年的总生存率（overall survival,OS）、无白血病生存率（leukemia-free survival,LFS）、累积复发率（cumulative incidence of relapse,CIR）和非复发死亡率（non-relapse mortality,NRM）;并分析与其相关的危险因素。[结果]整组病例中截止至随访时间仍存活的患者的中位随访时间为33（12～64）个月。Haplo-SCT组 3 年 OS、LFS、CIR、NRM 分别为为 19.0±4.9%、16.5±4.6%、70.0±7.1%、35.2±7.8%,而 MD-SCT组分别为的 23.1±5.1%（P=0.379）、20.9±5.0%（P=0.345）、64.0±8.2%（P=0.152）、36.1±6.7%（P=0.471）;Haplo-SCT 组的 Ⅰ 至Ⅳ级和Ⅲ至Ⅳ级急性移植物抗宿主病病（graft-versus-host disease,GVHD）分别为 45.5±6.1%和 18.2±6.5%,而 MD-SCT组分别为 37.7±5.4%（P=0.931）和 18.9±5.2%（P=0.442）;均无显着性统计学差异。整组病例的多因素分析显示复杂核型伴del（7）和从诊断到移植的时间>6个月与较差的OS和LFS显着相关,而慢性GVHD者表现出更好的OS和LFS。复杂核型伴del（7）者CIR较高,而慢性GVHD者CIR较低。[结论]单倍体造血干细胞移植可以是使成人PRR-AML患者获得长期生存的另一种治疗策略,尤其是当患者没有HLA全相合供体的时候。第二部分单倍体造血干细胞移植与无关供体移植治疗Ph+急性淋巴细胞白血病的结果比较[目的]总结单倍体造血干细胞移植（haplo-identical donor stem cell transplantation,Haplo-SCT）治疗 Ph+急性淋巴细胞白血病（Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia,Ph+ALL）的疗效,并与无关供体全相合移植（matched unrelated donor stem cell transplantation,MUD-SCT）效果进行比较,分析影响预后的相关因素,探讨此类患者的移植选择。[方法]我们回顾性分析了 2012年1月至2015年8月期间我院诊治的58例Ph+ALL,其中42例患者接受了 Haplo-SCT治疗,16例为MUD-SCT。所有患者移植前后均接受了络氨酸激酶抑制剂的治疗,移植预处理均为清髓性方案。总结对比两组病例的 3 年总生存率（overall survival,OS）、无白血病生存率（leukemia-free survival,LFS）、累积复发率（cumulative incidence of relapse,CIR）和非复发死亡率（non-relapse mortality,NRM）。[结果]整组病例的中位随访时间为19个月（1～56月）,Haplo-SCT组和MUD-SCT组的3年OS、LFS、CIR、NRM分别为69.1 vs 67.4%,P=0.638;64.3 vs 62.9%,P=0.708;19.0±6.2%vs 6.3±5.9%,P=0.466;14.3±5.4%vs 18.8±9.6%,P=0.869;两组间均无显着性统计学差异。Haplo-SCT组并未显示出比MUD-SCT组更高的III～IV急性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）发生率（17.6±5.2%vs 20.0±10.0%,P=0.603）或慢性广泛型GVHD（19.5±7.1%vs 13.3±8.6%,P=0.637）。多因素分析显示Haplo-SCT组的慢性GVHD与较低的复发率显着相关。[结论]单倍体造血干细胞移植可以成为一种使Ph+ALL患者获得长期生存的移植方式,与MUD-SCT具有相似的疗效且并未增加治疗相关风险。尤其是当患者没有HLA全相合供体时,Haplo-SCT可以作为一种替代选择。第三部分 高危组急性髓系白血病患者异基因造血干细胞移植后预防性应用低剂量地西他滨的对照研究[目的]复发和移植相关并发症仍然是制约高危组急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）实施异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-SCT）疗效的主要原因。本研究针对高危组AML在Allo-SCT后给予预防性低剂量地西他滨治疗,希望在不增加移植相关毒性的基础上,降低移植后的复发率,从而改善移植后生存。[方法]我们展开了一项回顾性对照研究,比较下列两组的疗效:治疗组（Group T）:Allo-SCT后+55～+100天内开始低剂量地西他滨15mg/m2 qd×3d,每45天一疗程,用3～6疗程;对照组（Group C）:Allo-SCT后符合纳入标准但未使用该治疗方案者作为对照组。主要的纳入标准包括:1高危组AML,实施Allo-SCT后处于血液学完全缓解、供者植入良好且流式细胞仪证实微小残留病灶阴性的患者,同时无严重的合并症,无严重感染、无脏器功能衰竭;2.患者年龄16-60岁;3.东部肿瘤协作组（ECOG）的表现状态<2分;4.中性粒细胞计数绝对值>1,000/mm3。主要研究终点为移植后3年累积复发率（cumulative incidence of relapse,CIR）、无白血病生存率（leukemia-firee survival,LFS）、总生存率（overall survival,OS）;次要研究终点包括移植后+9月时孤立性血小板减少发生率和3年慢性GVHD发生率。[结果]从2013年1月至2017年12月期间我院实施Allo-SCT治疗的高危组AML共442例,其中Group T:86例移植后接受低剂量地西他滨预防性治疗,Group C:120例符合入组标准但未使用低剂量地西他滨预防性治疗作为对照组;另外236例不符合入组而被排除。Group T与Group C两组之间基线特征无显着性差异。Group T3 年 CIR 显着优于 Group C（22.1%±4.8%vs.37.8±4.9%,P=0.039）。Group T 的 3年 OS 和 LFS 较 Group C 呈现出一定的优势（62.6%±5.4%和 52.1%±4.7%,P=0.207;61.3%±5.2%和49.5%±4.6%,P=0.077）,但两者均无显着性统计学差异。Group T移植后+9月孤立性血小板减少症者有10/86例（11.6%）,Group C为33/120例（27.5%,P=0.011）。+9 月时 Group T 的血小板中位数为 110（10～350）×103/ul,Group C 为78（3～329）×103/ul,两组间存在显着性统计学差异（P=0.0007）。两组间3年慢性GVHD发生率分别为38.2%±7.2%和46.4%±6.8%（P=0.347）,亦无显着性差异。[结论]高危组AML实施Allo-SCT后预防性应用低剂量地西他滨有助于降低移植后复发率,降低移植后孤立性血小板减少的发生率,改善预后,值得进一步研究。

程雯艳^[6]（2019）在《AML中CRi的预后影响以及表观遗传学基因调控》文中研究指明本研究论文包括两部分内容:（一）血细胞恢复情况对化疗后获得形态学无白血病状态急性髓系白血病患者的影响;（二）急性髓系白血病表观遗传学相关基因MLL和DNMT3A突变对下游基因的调控。第一部分血细胞恢复情况对化疗后获得形态学无白血病状态急性髓系白血病患者的影响急性髓系白血病患者（AML）化疗后获得完全缓解（CR）与良好的长期预后密切相关,然而,有一部分AML患者只能获得完全缓解伴不完全血液学恢复（CRi）,CRi是一种次于完全缓解的化疗反应,它与患者临床特征的相关性以及其预后意义仍有待进一步研究。本研究共纳入了350例初发的成人AML（M3除外）患者,其中230例患者在前两个疗程化疗后获得了CR（179例）或CRi（51例）,我们主要分析比较了CR和CRi组患者的临床和实验室检查的特征,并做了两组患者的预后分析。我们发现,在诊断时,CRi组患者外周血的血小板计数明显比CR组患者低。此外,双等位CEBPA突变在CRi组更常见,而C-KIT突变在CRi组更少见。诱导化疗后,CRi组患者的微小残留病（MRD）水平与CR组患者相比显着升高。生存分析表明,化疗后获得CRi的患者相对于获得CR的患者有着更短的无复发生存（RFS）和总体生存（OS）,并且是RFS和OS的独立预后因素。而接受了造血干细胞移植（HCT）的患者中,CRi对患者预后的不良影响则明显减弱。此外,在多因素分析中,年龄、MLL融合基因、MLL-PTD,以及C-KIT突变也均是影响复发或生存的独立预后因子。综上所述,我们的研究表明,CRi作为一个单独分类的化疗反应具有重要的预后影响,在AML患者获得形态学无白血病状态（MLFS）后的治疗选择中应作为一个重要的考虑因素。第二部分急性髓系白血病表观遗传学相关基因MLL和DNMT3A突变对下游基因的调控随着二代测序技术（NGS）的发展,越来越多的基因突变和转录异常被发现与白血病的发病机制和预后相关,为急性髓系白血病（AML）进一步细化的预后分层提供了基础。表观遗传学基因改变在白血病细胞的恶性转化中起着重要作用,是AML中重要的高危因素。DNMT3A突变和MLL融合基因均是M4/M5亚型AML中发生率较高的表观遗传学基因异常,常互斥性存在,两者均与老年、发病时外周血高白细胞计数和不良预后有关。在本项研究中,我们收集了13例携带MLL融合基因和14例携带DNMT3A突变患者的骨髓标本进行全转录组测序（RNA-seq）,两组患者的基因表达谱有着各自的聚类特征。差异基因分析中,我们发现HOXB家族多个基因在DNMT3A突变患者中高表达,同一家族的两个基因PRDM16和MECOM基因分别在携带DNMT3A突变和MLL融合基因的患者中高表达,很有可能在这两种表观遗传学异常的下游途径中发挥着相似的作用。总之,DNMT3A突变和MLL融合基因在M4/M5亚型AML中存在互斥性富集,同时又表现出相似的临床和生物学行为,而它们下游发生转录调变的PRDM16和MECOM基因也具有高度同源性,意味着DNMT3A突变和MLL融合基因之间有着共同的作用通路。以PRDM16和MECOM基因为研究切入点的体内外功能实验可能成为研究DNMT3A突变和MLL融合基因致白血病作用具体机制的一个重要方向。

鲍静^[7]（2019）在《MiR-141-5p靶向RAB32在慢性粒细胞白血病中的作用与机制研究》文中研究说明慢性粒细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）是一种以髓系前体克隆扩增为特征的恶性骨髓增生性肿瘤,是研究最广泛的肿瘤之一。CML的细胞遗传学特征是费城染色体（Ph）,由t（9;22）（q34.1;q11.21）易位产生,包括位于9号染色体长臂上的Abelson白血病病毒（CABL）致癌基因和位于22号染色体长臂上的断点簇区域（BCR）重组导致融合基因的形成,即所谓的致癌基因BCR-ABL1。伊马替尼是首个用于CML治疗的BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂（TKI）,因其高效和特定的作用机制而被广泛用于治疗CML。但随着广泛应用,副作用也随之出现,并且1/5的CML患者出现了耐药。因此,深入探讨其可能的发病机制,寻求新的治疗方法显得尤为迫切。已证实非编码RNA在肿瘤的发生发展中具有重要作用,作为非编码RNA中的一种,微小RNA（microRNA,miRNA）是广泛表达于原核和真核细胞内的一类小分子非编码RNA（22个核苷酸左右）,通过与靶基因mRNA的3’untranslation region（3’-UTR）特异性相互作用来调控基因表达,参与机体多种病理生理过程（分化、增殖、生长、迁移、存活等）,发挥重要作用。miR-141是miR-200家族成员之一,主要参与上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）、增殖、迁移、侵袭、耐药等多种细胞过程。Edurne San等发现hsa-miR-141在耐药的CML患者中表达降低。课题组前期预实验中也发现miR-141-5p在初治CML患者和K562细胞株中显着低表达,在健康对照和CML患者治疗后表达上调,然而关于miR-141-5p在CML中生物学效应的认识仍不够深入。生物信息学软件预测miR-141-5p可靶向RAB32。RAB32是小型GTPases Ras超家族成员,调控多种细胞类型的细胞内膜转运事件。RAB32的高表达缩短了神经突长度,改变了线粒体形态,加速了人原代神经元和细胞系的凋亡/坏死。在CML中,miR-141-5p能否通过靶向RAB32对慢性粒细胞白血病细胞生物学产生影响,以及相关机制尚不清楚。本论文首次通过体内和体外实验观察miR-141-5p在CML中的表达和作用,并进一步探讨其可能的作用机制,为CML的诊断提供新的线索,为CML临床治疗寻找新的靶点。主要研究内容概括如下:1.MiR-141-3p和miR-141-5p在CML患者和CML K562细胞中的表达情况实验首先检测新诊断CML患者、健康人骨髓标本、K562、K562/G细胞和CD34+细胞中miR-141-3p和miR-141-5p的表达情况。q-PCR证实miR-141-3p和5p在CML患者、K562和K562/G细胞中存在低表达现象,且miR-141-5p低表达更为显着。18例新诊断的CML患者接受TKI治疗后,通过回访发现,14例患者一年后BCR-ABL拷贝数明显下降,4例CML患者未出现显着下降。q-PCR再次检测miR-141-3p和5p在治疗后三个月CML患者中的表达水平,发现两者的表达水平较治疗前均有显着上调。提示低表达的miR-141可能在CML的发生、发展中发挥作用。2.MiR-141-5p在CML K562细胞株中的生物学效应鉴于miR-141-5p在CML患者中低表达更为显着,故进一步选取miR-141-5p作为研究对象,用阳离子脂质体法在K562细胞中分别转染miR-141-5p inhibitor&negative control和miR-141-5p mimics&negative control,下调或上调miR-141-5p的表达,Western blotting和q-PCR检测K562细胞中相关基因的表达情况,PI法染色后用流式细胞仪检测转染后细胞周期变化,Annexin V/PI法检测K562细胞株的凋亡情况。实验结果发现,转染miR-141-5p inhibitor后显着抑制了K562细胞中miR-141-5p的表达,同时K562细胞中c-Myc、Cyclin D1、MMP-3、MMP-9蛋白和mRNA表达水平显着增高,K562细胞的S期和G2/M期比例增高,提示miR-141-5p的低表达能够增强K562细胞的增殖、迁移能力;而转染miR-141-5p mimics后则显着上调K562细胞中miR-141-5p的表达,c-Myc、Cyclin D1、MMP-3、MMP-9蛋白和mRNA表达水平显着降低,cleaved caspase-3蛋白表达水平上调,S期和G2/M期的细胞比例降低,细胞凋亡比例显着增加,提示过表达miR-141-5p能显着抑制K562细胞的增殖、迁移能力,促进细胞的凋亡。3.MiR-141-5p对裸鼠成瘤能力的影响构建稳定表达miR-141-5p mimics negative control&mimics的K562细胞株,成功建成CML裸鼠移植瘤模型,观察并测量移植瘤的体积和重量。动物实验结果显示,与体内细胞的生长结果一致,miR-141-5p mimics组的肿瘤生长速度、体积和重量均明显低于对照组,提示miR-141-5p可能在CML中发挥抑癌基因的作用。4.MiR-141-5p靶向RAB32在CML中的机制研究MiRanda、Targetscan等软件预测,双荧光素酶报告基因法证实RAB32是miR-141-5p的直接靶基因。为探讨miR-141-5p靶向RAB32的作用机制,实验进一步研究了miR-141-5p对K562细胞RAB32表达的调控作用。Western blotting、q-PCR检测结果证实抑制或过表达miR-141-5p,RAB32蛋白和mRNA水平会出现相应的升高或降低。进一步分析miR-141-5p与RAB32表达水平在CML患者中的相关性,结果同样显示低表达miR-141-5p的CML患者中RAB32蛋白和mRNA呈现高水平;反之,高过表达miR-141-5p的健康对照和CML治疗后患者中RAB32蛋白和mRNA呈现相对低表达。提示miR-141-5p能够调控CML中RAB32的表达。使用RAB32 siRNA沉默RAB32表达后,能够抑制K562细胞的增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。miR-141-5p mimics和空白质粒共转染进K562细胞,结果发现过表达miR-141-5p后,能够显着抑制K562细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡,而同时共转染RAB32过表达质粒（RAB32-N1）不能改变miR-141-5p mimics对K562细胞的增殖、迁移和凋亡的影响。提示miR-141-5p可能通过靶向RAB32在CML中发挥作用。

钱小丽^[8]（2019）在《TKIs治疗慢性髓性白血病后BCR-ABL的预后价值、疗效分析和ABL激酶结构域突变的意义》文中认为(一)伊马替尼治疗慢性髓性白血病后3、6个月BCR-ABL的预后价值目的:探讨伊马替尼治疗慢性髓性白血病（chronic myelocytic leukemia,CML）3、6个月后BCR-ABL转录本水平在疗效监测中的价值,为CML患者早期干预提供依据。方法:选取苏州大学附属第一医院血液科2009年9月—2017年4月期间收治的700例初诊慢性期CML患者作为研究对象,所有患者初诊使用伊马替尼进行治疗,且持续时间2年及以上,累积药物减量及停药时间在2周以内。患者均在治疗前全面检查,包括外周血细胞分类,骨髓细胞形态,常规骨髓染色体,qPCR检测BCR-ABL融合基因。根据年龄、脾脏大小、血小板计数及原始细胞数计算Sokal评分。患者口服伊马替尼400mg/d,每周检测1次血常规,血液学缓解后每2周检查1次,治疗开始后第3、6、12、18、24个月检测骨髓染色体及BCR-ABL融合基因。根据早期分子学反应（early molec-ular reaction,EMR:3 个月时的 BCR-ABL≤10%）分组,比较EMR与非EMR组间及非EMR组内不同亚组间的累积CCyR、MMR。结果:本组患者根据Sokal积分分析,164例（23.43%）系高危,348例（49.71%）中危,188例（26.86%）低危。本研究中369例（52.71%）达到EMR,331例（47.29%）未达到,以此把患者分为EMR组与非EMR组。检测CML患者在伊马替尼治疗后不同时间点的骨髓染色体,EMR组在3、6、12、18、24个月时累计分别有 176、219、336、347、358 例获得了 CCyR;非 EMR组在 3、6、12、18、24个月时累计分别有0、22、95、168、190例获得了 CCyR。EMR组10例,非EMR组130例在观察到24个月截止时间点仍未出现CCyR,图中以删失标示;EMR组与非EMR组比较在不同的时间点均有更多的患者达到CCyR,差异具有统计学意义（P<0.05）。qPCR检测CML患者在伊马替尼治疗后各时间点的BCR-ABL表达,EMR组在3、6、12、18、24个月时累计分别有0、64、224、305、332例获得了 MMR;非EMR组在3、6、12、18、24个月时累计分别有0、0、28、79、101例获得了 MMR。EMR组7例,非EMR组41例在观察到24个月时未出现MMR,图中以删失标示;两组比较,EMR组较非EMR组在后续的不同时间点有更多的患者达到MMR,差异具有统计学意义（P<0.05）。把未达EMR的患者按6个月时的BCR-ABL水平分为BCR-ABL≤1%（Ⅱ组）,1%～10%（Ⅲ组）,>10%（Ⅳ组）3个不同的亚组,与EMR组（Ⅰ组）比较12个月CCyR及18个月MMR。结果显示,未达EMR的患者中6个月BCR-ABL≤1%的患者12个月CCyR及18个月MMR与EMR组无统计学差异（P>0.05）,而BCR-ABL在1%～10%组及>10%组与EMR组比较均有显着性差异（P<0.05）。结论:CML慢性期患者伊马替尼治疗后的达EMR及EMR失败后6个月BCR-ABL≤1%能够预示良好的预后,推测可以作为早期干预的依据之一。（二）伊马替尼、尼洛替尼和达沙替尼对初诊慢性粒细胞白血病患者的临床分析目的:比较伊马替尼、尼洛替尼和达沙替尼对初诊慢性粒细胞白血病患者的疗效差异方法:选取苏州大学附属第一医院血液科2016年1月—2017年4月期间收治的314例CML患者,诊断标准参照2016年中国慢性髓性白血病诊断与治疗指南进行评定。依据治疗TKI药物不同分为三组,伊马替尼治疗组、尼洛替尼治疗组和达沙替尼治疗组。根据3个月获得完全血液学反应（CHR）,6个月获得部分细胞遗传学反应（PCyR）,12个月获得完全细胞遗传学反应（CCyR）和18个月获得主要分子学反应（MMR）,分析三组的疗效差异。同时分析三组的不良反应,用于评价药物的安全性。结果:尼洛替尼治疗组和达沙替尼治疗组中患者的完全细胞遗传学反应（CCyR）和主要分子学反应（MMR）,与伊马替尼治疗组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）,并且尼洛替尼的治疗效果优于达沙替尼。尼洛替尼治疗12和18月后慢性期患者的完全细胞遗传学反应（CCyR）百分比分别为87.21%和89.53%,与伊马替尼治疗组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）。同样尼洛替尼治疗组的主要分子学反应（MMR）,与伊马替尼治疗组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）。以上结果表明尼洛替尼治疗CML慢性期患者改善效果更加明显。同时尼洛替尼和达沙替尼的血液学不良反应累计发生率明显低于伊马替尼治疗组,差异具有统计学意义（p<0.05）。结论:尼洛替尼和达沙替尼对CML患者疗效要优于伊马替尼,同时有较少血液学不良反应发生。（三）ABL激酶区突变的检测及临床意义目的:探讨ABL激酶区突变的检测及临床意义方法:选取苏州大学附属第一医院血液科2014年1月—2017年4月期间收治的368例CML患者,其中CML中IM耐药的患者58例。共分为四组:IM耐药突变组、IM耐药无突变组、IM未耐药突变组和IM未耐药无突变组;q-PCR检测各组ABL激酶区突变和Sokal评分。分析ABL激酶区突变对患者耐药和生存的影响。结果:58例IM耐药患者中共检测出12例ABL激酶区突变,IM耐药突变组中3例疾病处于慢性期（CP）,4例疾病处于加速期（AP）和5例疾病处于急变期（BP）;与CP相比,AP/BP中KD突变的频率更高,并且随着疾病持续时间的增加而增加。12例患者的ABL激酶区突变类型,其中T315I突变发生率8.62%（5/58）,F317L、M244V、F359V 和 E255V 突变发生率 3.45%（2/58）,G250E、V299L、F359C、L384M、H396R、Y253H、E459K 和 M351T 突变发生率 1.72%（1/58）。ABL激酶区突变与Sokal评分正相关,并且未突变的患者有更好的无进展生存期。58例患者中位随访时间为40.5（6.0-108.0）个月,耐药突变组60个月EFS率和OS率分别为33.3%（4/12）和75%（9/12）,而耐药未突变组60个月EFS率和OS率分别为71.17%（33/46）和78.26%（36/46）。耐药突变组60个月EFS率与耐药未突变组相比,差异具有统计学意义（P=0.0432）。而耐药突变组60个月OS率与耐药未突变组相比,差异无统计学意义（P=0.6532）。结论:突变检测有利于部分患者的进行早期干预和TKI用药时机转变。对于疗效丧失、疗效不佳或有任何疾病进展迹象的患者进行突变检测具有非常大的临床意义。

王超^[9]（2018）在《慢性髓细胞白血病TKIs治疗不良反应与疗效的研究》文中研究说明一、单中心836例慢性髓细胞白血病（CML）患者酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）治疗不良反应的分析目的回顾性分析本中心2010-2016年CML患者的临床数据,总结本中心CML患者的临床特征,分析本中心CML患者TKIs治疗相关不良反应。方法1、收集本中心2010年1月至2016年12月共836例CML患者的临床数据,具体分析其基本临床特征、核型异常分布及融合基因类型等;2、对2010年1月至2016年12月836例CML患者进行电话随访,了解各类TKIs的使用及相关不良反应的发生情况,具体分析血液学（表现为各类血细胞计数下降）及非血液学不良反应（胃肠道不适,肝功能异常,水肿,皮疹及皮肤瘙痒等）在各类TKIs中的发生率及分布情况。结果1、2011-2016年本中心836例CML患者,中位发病年龄为44.5岁,男性明显多于女性（男:女=1.67:1）。染色体核型以单纯t（9;22）（q34;q11）为主;BCR-ABL1融合转录本类型以P210为主,P190等罕见类型1.1%。2、836例CML患者中,776例（占92.8%）患者确诊后1个月以内开始服用TKIs,仅3.6%的患者在确诊6个月以后开始服用。一线TKIs用药以伊马替尼为主,共654例（78.2%）;二代TKIs共122例（14.6%）,其中尼洛替尼103例（12.3%）,达沙替尼19例（2.3%）。3、836例CML患者在TKIs治疗过程中,未出现任何不良反应的患者共231例（27.6%）,明确出现不良反应的患者共579例（69.3%）,无法明确是否出现不良反应的患者共26例（3.1%）。4、810例能确定不良反应发生情况的CML患者中,曾接受伊马替尼治疗的患者共697例,曾接受尼洛替尼治疗的患者共294例,曾接受达沙替尼治疗的患者共107例。伊马替尼最常见的不良反应为水肿（21.7%）,其次为胃肠道不适（17.2%）,白细胞减少（13.9%）,血小板减少（13.1%）,皮疹、皮肤瘙痒（9.7%）,贫血（4.9%）,肌肉关节痛（4.9%）;尼洛替尼最常见的不良反应为皮疹、皮肤瘙痒（31.0%）,其次为肝功能异常（16.3%）,血小板减少（16.0%）,肌肉关节痛（9.5%）,白细胞减少（8.5%）,胃肠道不适（6.8%）;达沙替尼最常见的不良反应为血小板减少（29.9%）,其次为白细胞减少（14.0%）,贫血（12.1%）,浆膜腔积液（10.3%）,胃肠道不适（8.4%）,水肿（7.5%）。结论1、本中心2011-2016年836例CML患者的数据表明,CML患者以男性多见,发病年龄主要集中在31-60岁。2、染色体异常分布及BCR-ABL1融合转录本类型与文献报道基本一致,染色体核型以单纯t（9;22）（q34;q11）为主。BCR-ABL1融合转录本类型以P210为主。3、CML患者,90%以上的患者在确诊后1个月内即开始TKIs治疗。一线TKIs用药以甲磺酸伊马替尼（格列卫）为主,其次为国产伊马替尼与尼洛替尼。4、CML患者在TKIs治疗过程中,约70%的患者出现不良反应,仅有不足30%的患者未出现任何不良反应。伊马替尼、尼洛替尼及达沙替尼最常见的不良反应,分别是水肿、皮疹及皮肤瘙痒、血小板减少,浆膜腔积液仅多见于达沙替尼,其余各类不良反应在三类TKIs中均有出现。二、出现TKIs治疗相关不良反应CML-CP患者的治疗反应的影响因素分析;目的探讨CML-CP患者TKIs治疗相关不良反应与达到治疗反应（主要分子学反应MMR及完全细胞遗传学缓解CCy R）中位时间之间的相关性。方法分析一线使用伊马替尼CML-CP患者最常见的六种不良反应（胃肠道不适,白细胞减少,血小板减少,皮疹、皮肤瘙痒,贫血,肌肉关节痛）,一线使用尼洛替尼CML-CP患者最常见的六种不良反应（皮疹、皮肤瘙痒,肝功能异常,血小板减少,肌肉关节痛,白细胞减少,胃肠道不适）及年龄、性别、染色体核型、是否换药、不良反应能否耐受（无不良反应,有可耐受,有且不可耐受）、不良反应分类（无不良反应,非血液学不良反应、血液学不良反应、二者均有）等因素与随访观察期内（从疾病确诊到随访截止时间）或伊马替尼/尼洛替尼治疗期内（从疾病确诊到伊马替尼/尼洛替尼治疗结束）达到CCy R/MMR的中位时间的相关性。应用SPSS20.0软件进行统计学分析,分别采用Kaplan-Meier方法及Cox回归模型进行单因素及多因素分析,将伊马替尼/尼洛替尼治疗期内的各种有意义的（P<0.05）不良反应纳入多因素模型a进行分析,将所有单因素有意义的（P<0.05）纳入多因素模型b进行分析。取P<0.05为差异有统计学意义。结果1、随访观察期内,528例一线伊马替尼治疗的CML-CP患者可分析伊马替尼治疗期间不良反应与达到CCy R所需时间的相关性。单因素分析结果显示:服用印度版伊马替尼、有过换药、有不良反应且不可耐受、血小板减少和贫血的患者达到CCy R的中位时间较长（P值均<0.05）;有非血液学不良反应、胃肠道不适和水肿的患者达到CCy R的中位时间较短（P值均<0.05）。多因素模型a分析结果显示:有水肿（P=0.003）的患者达到CCy R的中位时间较短。多因素模型b分析结果显示:换药（P=0.014）和血小板减少（P=0.020）的患者达到CCy R的中位时间较长,而有非血液学不良反应（P=0.031）和水肿（P=0.020）的患者达到CCy R的中位时间较短。618例一线伊马替尼治疗的CML-CP患者可分析伊马替尼治疗期间不良反应与达到MMR所需时间的相关性。单因素分析结果显示:男性、服用印度版伊马替尼、有过换药、有不良反应且不可耐受、血小板减少和贫血的患者达到MMR的中位时间较长（P值均<0.05）;而有非血液学不良反应、胃肠道不适、水肿和皮疹皮肤瘙痒的患者达到MMR的中位时间较短（P值均<0.05）。多因素模型a分析结果显示:有胃肠道不适（P=0.005）、水肿（P=0.006）和皮疹皮肤瘙痒（P=0.004）的患者达到MMR的中位时间较短,而有血小板减少（P=0.041）的患者达到MMR的中位时间较长。多因素模型b分析结果显示:男性（P=0.005）、服用印度版伊马替尼（P=0.012）、有过换药（P<0.001）的患者达到MMR的中位时间较长,而有水肿（P=0.021）和皮疹皮肤瘙痒（P<0.001）的患者达到MMR的中位时间较短。2、伊马替尼治疗期内,528例一线伊马替尼治疗的CML-CP患者可分析伊马替尼治疗期间不良反应与达到CCy R所需时间的相关性。单因素分析结果显示:服用印度版伊马替尼、有不良反应且不可耐受和血小板减少的患者达到CCy R的中位时间较长（P值均<0.05）;有胃肠道不适和水肿的患者达到CCy R的中位时间较短（P值均<0.05）。多因素模型a分析结果显示:有水肿（P=0.003）的患者达到CCy R的中位时间较短,而有血小板减少（P=0.025）的患者达到CCy R的中位时间较长。多因素模型b分析结果显示:有非血液学不良反应（P=0.016）和水肿（P=0.007）的患者达到CCy R的中位时间较短,而有血小板减少（P=0.009）的患者达到CCy R的中位时间较长。618例一线伊马替尼治疗的CML-CP患者可分析伊马替尼治疗期间不良反应与达到MMR所需时间的相关性。单因素分析结果显示:男性、印度版伊马替尼、有不良反应且不可耐受、血小板减少的患者达到MMR的中位时间较长（P值均<0.05）;而有胃肠道不适和水肿的患者达到MMR的中位时间较短（P值均<0.05）。多因素模型a分析结果显示:有胃肠道不适（P=0.008）和水肿（P=0.006）的患者达到MMR的中位时间较短;有血小板减少（P=0.025）的患者达到MMR的中位时间较长。多因素模型b分析结果显示:男性（P=0.004）患者达到MMR的中位时间较长;有胃肠道不适（P=0.005）和水肿（P=0.001）的患者达到MMR的中位时间较短。3、尼洛替尼治疗期内,76例一线尼洛替尼治疗的CML-CP患者可分析尼洛替尼治疗期间不良反应与达到CCy R所需时间的相关性。单因素分析结果均无显着性。103例一线尼洛替尼治疗的CML-CP患者可分析尼洛替尼治疗期间不良反应与达到MMR所需时间的相关性。单因素分析结果显示:有非血液学不良反应和肝功能异常的患者达到MMR的中位时间较短（P值均<0.05）,而有血小板减少的患者达到MMR的中位时间较长（P<0.05）。多因素分析结果显示:有肝功能异常（P=0.016）的患者达到MMR的中位时间较短。结论1、在随访观察期内,一线伊马替尼治疗的CML-CP患者伊马替尼治疗期间不良反应与达到CCy R/MMR所需时间的相关性分析表明:换药和血小板减少的患者达到CCy R的中位时间较长,而有非血液学不良反应和水肿的患者达到CCy R的中位时间较短;男性和有过换药的患者达到MMR的中位时间较长,而有水肿和皮疹皮肤瘙痒的患者达到MMR的中位时间较短。2、在伊马替尼治疗期内,一线伊马替尼治疗的CML-CP患者伊马替尼治疗期间不良反应与达到CCy R/MMR所需时间的相关性分析表明:有非血液学不良反应和水肿的患者达到CCy R的中位时间较短,而有血小板减少的患者达到CCy R的中位时间较长;男性患者达到MMR的中位时间较长,而有胃肠道不适和水肿的患者达到MMR的中位时间较短。3、在尼洛替尼治疗期内,一线尼洛替尼治疗的CML-CP患者尼洛替尼治疗期间不良反应与达到CCy R/MMR所需时间的相关性分析表明:所有因素与患者达到CCy R的中位时间无相关性,有肝功能异常的患者达到MMR的中位时间较短。

张小燕^[10]（2017）在《探讨IL-7在骨髓间充质干细胞促进慢粒白血病细胞对TKIs耐药中的作用及其机制》文中研究说明研究背景和目的:慢性粒细胞性白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是一种起源于造血干细胞的恶性克隆增殖性疾病,主要特点是具有BCR/ABL融合基因。酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKIs）伊马替尼,尼罗替尼等作为分子靶向药物,在治疗CML中已经取得了显着的效果。但是随着治疗的进行,约有15%-25%的病人逐渐对TKIs产生耐药。一些慢性期病人存在原发性耐药。存在BCR-ABL激酶位点突变时,特别是T3151突变,40%的病人对TKIs产生耐药。这些耐药现象的发生具体机制尚不十分清楚。近年来大量研究表明,骨髓微环境在白血病的耐药中发挥重要的作用。骨髓间充质干细胞是骨髓微环境中最重要的细胞之一,不仅可分化成各种各样的基质细胞如脂肪细胞、成纤维细胞等,而且可以分泌细胞外基质蛋白,细胞因子,生长因子等。IL-7是其分泌的细胞因子之一,能促进白血病细胞的DNA合成,与血液系统肿瘤的发生发展关系密切。本研究主要探讨慢性粒细胞白血病病人骨髓中IL-7的表达情况,并研究IL-7在骨髓间充质干细胞促进慢粒白血病细胞对TKIs耐药中的作用及其机制。方法:1.收集24例慢性粒细胞白血病耐药病人（RCML）、非耐药病人（SCML）和健康人（NC）的骨髓,通过采用高灵敏的IL-7 ELISA检测试剂盒检测骨髓中IL-7表达水平,并用荧光定量PCR检测骨髓单个核细胞中IL-7基因的表达。2.采用Ficoll密度梯度离心法原代分离和培养慢性粒细胞白血病耐药病人骨髓间充质干细胞（RMSCs）、非耐药病人骨髓间充质干细胞（SMSCs）和健康人的骨髓间充质干细胞（NCMSCs）,ELISA法检测RMSCs、SMSCs和NCMSCs培养液中IL-7表达水平。3.选用原代培养的NCMSCs、SMSCs和RMSCs在体外模拟健康人的骨髓微环境和CML病人的骨髓微环境,K562和BV173细胞株模拟CML白血病细胞,将白血病细胞与骨髓间充质干细胞共培养,构建出类似人体骨髓造血微环境对CML白血病细胞调控的模型。4.将NCMSCs,SMSCs和RMSCs按不同比例与K562/BV173细胞共培养,观察各组白血病细胞的增殖随MSCs浓度的变化。将NCMSCs,SMSCs和RMSCs与K562/BV173细胞共培养不同时间,观察各组白血病细胞的增殖随时间的变化。采用CCK8检测共培养的K562和BV173细胞的增殖。采用流式细胞仪检测细胞周期的变化。在共培养组分别加入伊马替尼和尼罗替尼药物干预,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡以及对TKIs敏感性的变化。采用Western blot检测BCR/ABL、PI3K/AKT和JAK/STAT信号通路相关蛋白分子的表达。5.在RMSCs+K562共培养组,加入IL-7抗体或敲降RMSCs的IL-7基因,观察K562细胞在伊马替尼和尼罗替尼药物处理后,细胞增殖和凋亡的变化以及JAK/STAT信号通路相关蛋白分子的表达。6.将NCMSCs,SMSCs和RMSCs与K562细胞共同接种到BALB/c-nu裸鼠体内,建立皮下移植瘤模型,观察三种不同的骨髓间充质干细胞在体内对白血病细胞增殖、凋亡和耐药性的影响以及JAK/STAT信号通路相关蛋白分子的表达。结果:1.成功分离培养原代的NCMSCs,SMSCs和RMSCs细胞。三种MSCs形态相似,均为长梭形,成纤维细胞样,并呈漩涡状生长。流式细胞术鉴定所得细胞的免疫表型符合骨髓间充质干细胞的特点。2.ELISA检测结果显示,RCML病人骨髓中IL-7水平明显高于SCML病人和NC组。RMSCs培养液中,IL-7明显高于相应NCMSCs组和SMSCs组。3.荧定光量PCR检测结果显示RCML组骨髓单个核细胞中的IL-7mRNA的表达量明显增高。而SCML组与NC组相比,无显着性差别。4.共培养实验发现,不同MSCs对白血病细胞的增殖抑制呈浓度依赖性。低浓度的骨髓间充质干细胞对白血病细胞增殖无明显影响,高浓度的骨髓间充质干细胞能够显着抑制白血病细胞的增殖,而且随着间充质干细胞比例的升高,抑制作用增强。MSCs对白血病细胞增殖的影响呈现时间依赖性。随着时间的延长,MSCs对白血病细胞增殖的抑制作用增强。但是三种不同的骨髓间充质干细胞对白血病细胞的增殖抑制率无明显差别。5.细胞周期检测发现,随着共培养时间的延长,细胞周期发生了明显阻滞,S期的比例减少,G0/G1期细胞比例增加。但在K562+NCMSCs,K562+SMSCs,K562+RMSCs三个共培养组之间,无明显差别。6.加入IM或NI药物干预后结果显示,随着IM或NI药物浓度的增加,白血病细胞的增殖率逐渐减弱,凋亡率逐渐增加,NCMSCs、SMSCs和RMSCs三组均呈现这种趋势。但观察同一药物浓度下,各共培养组的增殖率发现,K562+RMSCs组,K562细胞增殖率明显高于对照组、NCMSCs和SMSCs组,而凋亡率明显低于对照组、NCMSCs和SMSCs组。在K562+RMSCs组加入IL-7中和抗体和敲降RMSCs的IL-7基因后,其增殖率下降,凋亡率增高。这些结果表明,RMSCs可以促进了酪氨酸激酶抑制剂处理后的K562细胞的增殖,抑制其凋亡,对K562细胞起到保护作用,这种保护作用与IL-7有关。7.采用Western blot检测相关信号通路蛋白的表达,结果发现RMSCs诱导的IM/NI耐药是BCR/ABL非依赖性的,且PI3K/AKT信号通路未参与,而是IL-7/JAK1/STAT5信号通路介导了RMSCs引起的慢粒白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂耐药。8.裸鼠皮下移植瘤实验表明,RMSCs能够保护白血病细胞,使其细胞凋亡减少,细胞存活增加从而促进其耐药,这种保护作用与Caspase 3和Bcl-2相关。进一步检测相关的信号通路,发现pJAK1和pSTAT5蛋白水平在K562+RMSCs皮下瘤块组织中明显高于其他组。敲降了RMSCs的IL-7基因后,瘤块组织中pJAK1和pSTAT5蛋白水平表达下降,提示IL-7/JAK1/STAT5信号通路参与了体内RMSCs促白血病细胞耐药作用。结论:慢性粒细胞白血病耐药病人骨髓间充质干细胞分泌IL-7异常增高,可通过BCR/ABL非依赖的方式,激活白血病细胞JAK1/STAT5信号通路,从而促进其对酪氨酸激酶抑制剂耐药,这可能为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的靶点。

二、236例慢性粒细胞白血病患者细胞遗传学特性观察（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、236例慢性粒细胞白血病患者细胞遗传学特性观察（论文提纲范文）

（1）芪附扶正合剂联合低剂量传统化疗方案治疗老年急性髓系白血病（非M3）的疗效分析及机制研究（论文提纲范文）

（2）地西他滨治疗儿童R/R-AML和MDS的疗效观察及DUSP16在儿童AML中的机制研究（论文提纲范文）

（3）基于Breg/KIR探讨骨髓增生异常综合征“劳毒致病”病机理论及健脾补肾解毒方的干预研究（论文提纲范文）

（4）外泌体miRNAs在急性髓系白血病中的检测与其表达量的临床意义（论文提纲范文）

（5）高危难治急性白血病实施单倍体造血干细胞移植的对比研究与移植后方案优化（论文提纲范文）

（6）AML中CRi的预后影响以及表观遗传学基因调控（论文提纲范文）

（7）MiR-141-5p靶向RAB32在慢性粒细胞白血病中的作用与机制研究（论文提纲范文）

（8）TKIs治疗慢性髓性白血病后BCR-ABL的预后价值、疗效分析和ABL激酶结构域突变的意义（论文提纲范文）

（9）慢性髓细胞白血病TKIs治疗不良反应与疗效的研究（论文提纲范文）

（10）探讨IL-7在骨髓间充质干细胞促进慢粒白血病细胞对TKIs耐药中的作用及其机制（论文提纲范文）

四、236例慢性粒细胞白血病患者细胞遗传学特性观察（论文参考文献）

• [1]芪附扶正合剂联合低剂量传统化疗方案治疗老年急性髓系白血病（非M3）的疗效分析及机制研究[D]. 王志清. 南京中医药大学, 2020(02)
• [2]地西他滨治疗儿童R/R-AML和MDS的疗效观察及DUSP16在儿童AML中的机制研究[D]. 卢俊. 苏州大学, 2020(06)
• [3]基于Breg/KIR探讨骨髓增生异常综合征“劳毒致病”病机理论及健脾补肾解毒方的干预研究[D]. 陈海琳. 上海中医药大学, 2019(03)
• [4]外泌体miRNAs在急性髓系白血病中的检测与其表达量的临床意义[D]. 吕云飞. 浙江大学, 2019(03)
• [5]高危难治急性白血病实施单倍体造血干细胞移植的对比研究与移植后方案优化[D]. 顾斌. 苏州大学, 2019(04)
• [6]AML中CRi的预后影响以及表观遗传学基因调控[D]. 程雯艳. 上海交通大学, 2019(06)
• [7]MiR-141-5p靶向RAB32在慢性粒细胞白血病中的作用与机制研究[D]. 鲍静. 安徽医科大学, 2019(07)
• [8]TKIs治疗慢性髓性白血病后BCR-ABL的预后价值、疗效分析和ABL激酶结构域突变的意义[D]. 钱小丽. 苏州大学, 2019(02)
• [9]慢性髓细胞白血病TKIs治疗不良反应与疗效的研究[D]. 王超. 苏州大学, 2018(01)
• [10]探讨IL-7在骨髓间充质干细胞促进慢粒白血病细胞对TKIs耐药中的作用及其机制[D]. 张小燕. 南昌大学, 2017(05)