~(131)I人抗HBs Fab在人肝癌裸鼠模型中的定位

一、~(131)I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究（论文文献综述）

洪智慧^[1]（2011）在《131Ⅰ标记抗胃泌素释放肽前体单链抗体scFv的实验研究》文中提出研究目的:研究（131）I标记抗胃泌素释放肽前体( Pro-gastrin-releasing peptide（31-98）, ProGRP（31-98）)单链抗体scFv在正常昆明小鼠及荷小细胞肺癌裸鼠的体内分布规律,并对荷小细胞肺癌裸鼠进行初步显像,探讨（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv作为特定肿瘤显像剂的可能性。研究方法:1.利用流式细胞仪和免疫组化两种方法分别检测小细胞肺癌NCI-H446、宫颈癌Hela、大细胞肺癌H460和肺腺癌A549细胞株及其组织中的ProGRP表达情况。2.采用氯胺-T法标记制备（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv;凝胶柱分离法分离纯化标记产物;纸层析法测定标记产物的标记率、放化纯;将（131）I-anti-ProGRP（31-98）scFv分别置于37℃水浴箱及与正常人血清混合后在不同时间点测定放化纯以了解其稳定性;通过细胞结合分析法测定标记产物的免疫活性。3.自正常昆明小鼠尾静脉注射（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv后,于不同时间点剪断颈动脉处死小鼠,取血液及各主要脏器组织标本,计算每克组织注射百分剂量率（%ID/g）。利用NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型,自尾静脉注射（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv后,于不同时间点处死裸鼠并取血液、移植瘤及各主要脏器组织标本,计算不同时间点各脏器组织的%ID/g和瘤体/非瘤体组织放射性计数比值（T/NT值）。4.对小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型进行（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv初步显像,观察移植瘤的大体显像情况,利用ROI技术在显像图上勾画移植瘤轮廓并计算瘤体与对侧相同部位的T/B值。研究结果:1.流式细胞仪检测显示NCI-H446、Hela、H460及A549细胞株ProGRP的表达率分别为95%、77%、53%和4%。免疫组化检测结果显示,小细胞肺癌、宫颈癌及大细胞肺癌组织切片的细胞胞浆内均有二氨基联苯胺（DAB）染色阳性颗粒分布,而肺腺癌组织切片中未见明显染色阳性细胞。2. （131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv标记率为93.35±0.67%,标记产物纯化后即刻放化纯为98.49±1.21%;在37℃水浴箱中放置24 h后放化纯为94.30±0.41%,48 h后测定仍大于90%,与正常人血清充分混合在37℃水浴箱中放置24 h后放化纯为83.61±2.19%,48 h测定大于80%;（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv对NCI-H446和A549细胞株的免疫结合率分别为85.36%、21.02%。3. （131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv在正常昆明小鼠和小细胞肺癌荷瘤裸鼠体内主要通过肝脏、肾脏代谢,血液及各主要脏器组织的清除速度快,脑组织和肌肉组织摄取不明显,符合单链抗体在机体内的一般代谢分布规律。注射12 h后移植瘤体的%ID/g高于其他脏器及组织,24 h达到最高为5.38±0.92%。T/NT值随时间的延长逐渐升高,至注射后24 h基本达到最高。4.注射（131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv 1 h后,小细胞肺癌移植瘤部位出现放射性浓聚,随时间延长移植瘤部位的放射性浓聚程度逐渐增强,至24 h最为清晰。结论:1. （131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv标记简便,标记率及放化纯高,体内外稳定性好,主要通过肝肾代谢,血液及各主要脏器廓清速度较快。2. （131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv在小细胞肺癌荷瘤裸鼠体内的分布结果表明,它可在移植瘤组织内积聚,瘤体与主要器官的T/NT值随时间延长而上升,至24 h到达最高值。3. （131）I-anti-ProGRP（31-98） scFv有望成为一种新型的小细胞肺癌放射免疫显像剂,值得进一步深入的研究。

张浩然^[2]（2010）在《131I-chTNT靶向治疗分化型甲状腺癌肺转移瘤的临床应用研究》文中进行了进一步梳理分化型甲状腺癌肺转移瘤患者目前主要采用大剂量131I内照射治疗。但部分患者由于肺内转移灶较少摄取131I或接受131I内照射治疗后丧失再摄取131I能力,导致治疗失败。针对这一问题,本研究采用放射性核素碘[131I]肿瘤细胞核人鼠嵌合单克隆抗体(131I-chTNT)对不摄取131I的分化型甲状腺癌肺转移瘤实施靶向内照射治疗。10例分化型甲状腺癌肺转移患者按（5±0.7）MBq/kg剂量单次静脉注射131I-chTNT后,采集不同时间的血、尿标本,经HPLC检测发现:至注射后72小时血清中131I-chTNT仍超过95%,168h仍达到88%,表明131I-chTNT在人体体内稳定;不同时间血、尿标本药代动力学分析发现:T1/2为65.28±14.83h;给药后2周累计有占注入剂量31%的放射性物质随尿液排出,其代谢产物为游离131I。2例分化型甲状腺癌肺转移瘤注射131I-chTNT后24小时穿刺获取肿瘤组织行放射自显影技术检查证实:131I-chTNT结合到变性坏死细胞的细胞核区域。应用SPECT评估肿瘤和其他主要器官的摄取情况,表明131I-chTNT对分化型甲状腺癌肺转移瘤具有较高靶向性;并通过Olinda软件估算肿瘤及全身主要器官吸收剂量,按（29.6±3.7）MBq/kg治疗剂量单次静脉给药计算,肿瘤最小吸收剂量达40 Gy。基于上述基础,应用131I-chTNT治疗不摄取131I的分化型甲状腺癌肺转移患者16例,治疗总有效率达到62.5%,未见严重的局部及全身副作用。

贾海威,聂青^[3]（2009）在《实体瘤的放射免疫治疗》文中研究指明放射免疫治疗是众多免疫靶向治疗的一种,在恶性肿瘤的治疗中具有独到的优势,目前主要应用于淋巴瘤以及部分实体瘤的治疗。关于前者的综述较多,而鲜见有关实体瘤的放射免疫治疗综述。现就实体瘤的基础研究及临床应用作一全面综述。

徐礼源^[4]（2008）在《大肠杆菌f2噬菌体多克隆抗体的研制及应用》文中研究表明大肠杆菌f2噬菌体是一种RNA病毒,其有些特性与肠道病毒极为相似,能像粪大肠菌群那样在人和动物的肠道中存在,且其在水中的存活时间、对氯消毒的抵抗力也与脊髓灰质炎病毒相近。因此,国内外研究人员认为,大肠杆菌f2噬菌体是一种比较理想的水中肠道病毒污染的指示物,并将它广泛用于饮用水消毒效果评价,污水与环境水体中肠道病毒浓度、存活状况评估,环境监测方法与技术研究等方面。传统的f2噬菌体检测方法有浊度比色、空斑实验等,后者既可定性也可定量,是一种常用的实验方法。但是,它需要培养宿主菌和严格的无菌操作等繁琐过程。寻找更加简单、快捷、经济、可靠的f2噬菌体检测方法,是研究者不懈努力的方向。大量研究资料表明,能够满足上述检测要求的可行方法,有免疫层析、ELISA等免疫学方法。但是到目前为止,针对f2噬菌体相关报道几乎未见。因此,本研究尝试制备兔抗f2噬菌体多克隆抗体,以摸索出一条制备其抗体的方法和途径,为相关的单克隆抗体制备及f2噬菌体的检测研究提供最基础的实验素材。f2噬菌体为不含包膜的病毒颗粒,核衣壳表面含有丰富的抗原决定簇,用它免疫动物,不同的抗原决定簇能刺激不同的淋巴细胞而产生针对不同决定簇的抗体。通过筛选可以获得具有高亲和力多克隆抗体。本研究以大肠杆菌f2噬菌体为免疫原,以日本大白兔为受试动物,采用皮下多点注射的方式制备多克隆抗体,并通过纯化,获得了高浓度、高效价的兔抗f2噬菌体IgG。初步探讨了将多克隆抗体与微磁珠结合,浓集、分离水中大肠杆菌f2噬菌体的过程,为水中病毒检测提供相关参考数据。第一部分大肠杆菌f2噬菌体多克隆抗体的研制目的:制备大肠杆菌f2噬菌体多克隆抗体,分离纯化抗体。方法:增殖f2噬菌体,利用超速离心的方法纯化f2噬菌体,选择3只8周龄纯种大白兔,采用皮下注射法,多次多点注射纯化的大肠杆菌f噬菌体,用血清中和试验与间接ELISA法检测抗血清效价,当效价在1:3200以上时从主动脉收集血液。分离血清,用饱和硫酸铵、离子交换层析法（DEAE-纤维素,DE52）进一步纯化,得到IgG;并通过紫外分光光度计扫描测定纯化的IgG浓度。结果:受试动物经过全程免疫,获得高效价多克隆抗血清,血清中和试验效价大于1:16000,间接ELISA检测效价达到1:5000。结合离子交换层析和饱和硫酸铵纯化获得高浓度、高效价的IgG;经过血清中和试验与间接ELISA检测纯化后的抗血清IgG效价没有降低,保留了较好的活力;利用紫外分光光度计扫描测定的IgG浓度达到23.11mg/ml,满足了后续试验的基本要求。结论:成功制备兔抗f2噬菌体多克隆抗体并纯化为IgG,抗体具有较好的效价和特异性,为进一步开展对大肠杆菌f2噬菌体的检测研究提供了重要技术支持。第二部分构建免疫磁珠浓集分离水中大肠杆菌f2噬菌体目的:构建免疫磁珠,为检测水中f2噬菌体及相关研究提供一种新的浓集、分离水中病毒的方法。方法:将兔抗f2噬菌体IgG与微磁珠化学偶联构建免疫磁珠,吸附水中f2噬菌体,磁性分离免疫磁珠-噬菌体复合物,然后洗脱免疫磁珠结合的噬菌体,空斑实验检测f2噬菌体。改变洗脱液pH,观察不同pH对免疫磁珠捕获病毒洗脱效果的影响。结果:通过化学偶联方法将抗体包被到磁珠上效果良好,免疫磁珠对f2噬菌体的吸附效率约50%以上,但洗脱效率存在差异,约30%的f2噬菌体可从免疫磁珠上洗脱下来;不同pH值洗脱液洗脱效果不一样,在pH值接近2.7时效果较好。结论:本实验通过化学偶联法成功构建免疫磁珠,并获得了较好的捕获病毒效果,但洗脱解离效率偏低,因此洗脱液及洗脱条件的选择是本研究提高病毒回收率关键因素之一。

杜阳峰^[5]（2008）在《核素标记不同性质单抗联合索拉非尼治疗肝癌的动物实验研究》文中研究指明肝细胞癌（HCC）是全世界范围内常见的恶性肿瘤之一，发病率高，预后较差，死亡率高，自然生存期短。手术彻底切除是最佳治疗，然而大多数肿瘤（75％以上）发现时已是中晚期，肿块太大或弥散，无法完全切除，传统的化疗和放疗对无法切除的原发性肝癌治疗效果不佳，放射免疫治疗是近年比较推崇的治疗晚期肝癌方法，其利用具有特异导向能力的单克隆抗体为载体，耦联放射性核素能有效的杀伤肿瘤细胞。国内外已有多种单克隆抗体做为载体应用于放射免疫实验研究，但由于单克隆抗体的自身特性、肿瘤抗原表达的异质性、抗原调变、肿瘤血管的特殊屏障作用、给药途径等多种因素，放射免疫治疗疗效受到很大影响。为增强放射免疫治疗的疗效，既往的研究主要是应用某些细胞因子、增强血管通透性等手段来加强标记抗体与肿瘤细胞抗原的结合能力。目前，运用两种或多种靶向性不同的抗体联合导向治疗、增强放射性核素在瘤体内浓聚和作用时间已经成为放射免疫治疗研究的新热点。抗HBsAg Fab是一种以乙肝表面抗原为靶点的完全人源化Fab片段，可特异结合于细胞膜分泌的HBsAg，而流行病学表明我国肝癌的发生与HBsAg关系密切，某种意义上可称之为肝癌的“肿瘤相关抗原”；chTNT则是人／鼠嵌合的抗细胞核的单克隆抗体，能特异性结合肿瘤细胞坏死后暴露出来的细胞的核蛋白（DNA组蛋白H1复合体），研究表明131I标记的chTNT对多种实体瘤均具有抑制作用，已被中国药品食品管理局（SFDA）批准用于晚期肺癌的治疗。索拉非尼（sorafenib）是一种小分子的多靶点口服抗癌新药，临床前研究和临床实验提示索拉非尼有广泛的抗肿瘤作用，既能抑制肿瘤血管的形成又能直接抑制肿瘤细胞的增殖，已被美国食品药品管理局（FDA）批准用于治疗晚期肾癌及肝癌，并且在其他实体瘤的Ⅱ／Ⅲ期研究中取得令人鼓舞的结果。我们的目的是研究131I-chTNT联合131I-抗HBsAg Fab片断对荷人肝癌HepG2．2．15移植瘤生长抑制的效果，以及应用sorafenib抑制肿瘤微血管生成对131I-chTNT体内分布的影响，为临床提供实验数据，并为肝癌的多种抗体联合放射免疫治疗及与小分子药物的配合治疗提供理论基础。第一部分抗乙肝表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗动物实验一、方法1．建立人肝癌细胞HepG2．2．15裸鼠皮下移植瘤模型：0．2ml（含活细胞1×107）人肝癌HepG2．2．15细胞（对数生长期）悬液接种裸鼠，注射部位为裸鼠右腋下部皮下。待裸鼠成瘤后剥取瘤体周围鱼肉状组织（活性好）为瘤源，分割成1-2cm3小块，种植于其他裸鼠右侧腋窝下部皮下。2．131I标记抗HBsAg Fab、chTNT和无关抗体IgG（Idogen法）。测量标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及免疫结合率。3．实验分组：将25只荷HepG2．2．15移植瘤裸鼠按瘤体积随机分成131I-抗HBsAg Fab组、131I-chTNT组、联合用药组、131I-无关抗体组(131I-IgG)、空白对照组共五组，每组5只。4．给药：①131I-抗HBsAg Fab组：131I-抗HBsAg Fab，14．8MBq／40ul，瘤内注射，（A组）；②131I-chTNT组：131I-chTNT，14．8MBq／40ul，瘤内注射，（B组）；③联合用药组：131I-抗HBsAg Fab 7．4MBq／20μl+131I-chTNT 7．4MBq／20μl，瘤内注射；（C组）；④阳性对照组：131I-IgG，14．8MBq／40μl瘤内注射，（D组）；⑤阴性对照组：生理盐水40μl瘤内注射（E组）。5．给药前测量每只裸鼠体重和肿瘤大小，给药后每天观察裸鼠的生长、生活情况，测量肿瘤的长径、短径，每周两次，按公式移植瘤体积=（长径×短径2）／2计算瘤体积。6．瘤内注射后第1、4、7天将荷瘤裸鼠麻醉后进行SPECT显像，计算瘤体放射性占全鼠放射性的比值和肿瘤与周围组织放射性比值（T／NT），观察标记抗体在裸鼠体内的分布及代谢情况。第28天处死全部实验裸鼠，计算肿瘤抑制率并取移植瘤行病理形态学观察。7．统计处理：实验数据均采用SPSS11．5软件进行统计处理，定量资料数据以（?）±S表示。标记抗体的免疫结合率比较采用两独立样本的t检验：抗体在裸鼠体内T／NT比值和用药前后对照组与各处理组移植瘤体积比较采用重复测量的方差分析，两两比较采用LSD法，方差不齐时采用Welch和Tambane’s T2检验，P≤0．05为差异统计学意义。二、结果1．三氯醋酸法测得抗HBsAg Fab、chTNT、IgG平均标记率分别为60％、50％和58．3％，经纯化后测得放化纯度分别为100％、99％和99．3％；平均放射性比活度分别为22．2MBq／mg、30．8MBq／mg和19．5MBq／mg，结合分析法测定131I-抗HBsAgFab与HepG2．2．15免疫结合率为68．3％，与HepG2免疫结合率为10．9％，两者之间有显着性差异（P<0．001）。2．瘤内注射标记抗体后第1天，各处理组T／NT比值均较高，组间无显着差异（P>0．05）。第7天，联合抗体组与131I-抗HBsAg Fab组、131I-chTNT组T／NT比值均有显着差异，P值分别为0．005和0．029，131I-抗HBsAg Fab组与131I-chTNT无显着差异（P=0．386）。阳性对照组第1天可见显影，第7天可见放射浓聚明显减低；阴性对照组肿瘤内始终未见放射性浓聚。3．各处理组给药前后不同时间内裸鼠瘤体积有明显差异（F=477．615；P<0．001），且各组间肿瘤大小差异显着（F=14．287、P<0．001），终止观察时，131I-chTNT组与联合组有显着差异（P=0．003），131I-HBsAg Fab组与联合组同样有显着性差异（P<0．001），131I-chTNT组与131I-HBsAg Fab组无明显差异（P=0．325），联合组的抑瘤率为84．32％，明显高于131I-chTNT组的63．86％、131I-抗HBsAg Fab组的51．49％及无关抗体组的14．87％。4．肿瘤组织经HE染色，与对照组相比，三种用药处理组瘤体内坏死组织多，肿瘤细胞核明显固缩，结构破坏，部分区域肿瘤细胞全部坏死，联合抗体组最明显。三、结论1．131I标记抗HBsAg Fab和chTNT具有良好的免疫活性和稳定性。2．采用瘤内注射，核素标记抗体不需要血液循环，直接进入肿瘤组织，可明显增加标记抗体在肿瘤内的浓聚，提高导向治疗效果。3．与单药相比，131I-抗HBsAg Fab联合131I-chTNT瘤内注射，放射性核素能更持久的存在于肿瘤组织，具有更强的肿瘤杀伤能力。第二部分索拉非尼对131I-chTNT裸鼠体内分布及抑制肿瘤生长能力的影响一、方法1．建立人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型：0．2ml（含活细胞2×106）人肝癌HepG2细胞（对数生长期）悬液接种裸鼠，注射部位为裸鼠右腋下部皮下。待裸鼠成瘤后剥取瘤体周围鱼肉状组织（活性好）为瘤源，分割成1-2cm3小块，种植于裸鼠右侧腋窝下部皮下。2．131I标记chTNT（方法同第一章）。3．索拉非尼对肿瘤微血管生成的作用及对131I-chTNT裸鼠体内分布的影响：将33只荷瘤雄性BALB／c裸鼠随机分为3组，第一组12只，按40mg／kg给予sorafenib灌胃，第二组12只、第三组9只，均给予同等剂量生理盐水灌胃，持续14天。第15天于第一组和第二组各取3只裸鼠，处死，取出皮下瘤，免疫组织化学法行移植瘤微血管密度（MVD）检测。余下裸鼠均给予131I-chTNT14．8 MBq／40ul，瘤内注射后，第二组按40mg／kg给予sorafenib灌胃，其他两组给予同等剂量生理盐水。瘤内注射131I-chTNT后第1、4、7天每组各取三只裸鼠，行放射免疫显像后脱颈处死，取出每只裸鼠瘤体、心、肝、肾、血、肺和脾，分别称取重量（g），并放入井型定标仪中测量放射性计数（D），计算每克组织的放射性计数（D／g），并计算瘤／非瘤（T／NT）比值。4．索拉非尼联合131I-chTNT对裸鼠移植瘤的抑制作用：25只荷瘤裸鼠分为5组，每组5只。①sorafenib组：sorafenib，40 mg／kg，0．1ml灌胃，持续14天+瘤内注射生理盐水40ul d1；②chTNT组：131I-chTNT 14．8 MBq／40ul，瘤内注射d1+0．1ml生理盐水灌胃，持续14天；③序贯联合组：sorafenib，40 mg／kg，0．1ml，持续14天后瘤内注射131I-chTNT 14．8 MBq／40ul；④同时联合组：sorafenib，40mg／kg，0．1ml持续14天+瘤内注射131I-chTNT 14．8 MBq／40ul d1；⑤对照组：生理盐水0．1ml灌胃，持续14天+生理盐水40ul瘤内注射，d1。观察裸鼠移植瘤生长情况，4周后处死裸鼠，称重并测量瘤体积，计算肿瘤抑制率，并行病理形态学观察。5．实验数据均采用SPSS 11．5软件进行统计处理，定量资料数据以（?）±S表示，两处理组MVD的比较采用两独立样本的t检验；抗体在裸鼠体内T／NT比值比较和用药前后对照组与各处理组移植瘤体积比较采用重复测量的方差分析，两两比较采用LSD法，方差不齐时采用Welch和Tambane’s T2检验，P≤0．05为差异统计学意义。二、结果1．索拉非尼能明显抑制肿瘤微血管生成。经sorafenib灌胃14天后，裸鼠肿瘤组织MVD明显低于对照组（P=0．004）。2．肿瘤微血管密度减少能明显提高131I-chTNT在瘤内的浓聚程度，延长瘤内浓聚时间。经过sorafenib灌胃14天后的序贯给药组T／NT比值明显高于给予生理盐水灌胃的同时给药组和chTNT组，有显着性差异，均为P<0．01，从瘤内注射131I-chTNT后第1天到第7天均如此，同时给药和chTNT组间无显着差异，第1天和第7天P值分别为0．187和0．933。3．序贯联合给药组与同时联合给药组两者抑制肿瘤能力无显着差异，但是两组分别与其他组肿瘤大小比较均出现显着性差异，均为P<0．05。序贯联合组的抑瘤率为85．02％，同时联合给药组为89．05％，明显高于131I-chTNT组的57．64％和sorafenib组的56％，4．与对照组比较，其他处理组可见大片细胞凝固性坏死，细胞与细胞间质无明显分界，细胞壁遭到破坏，细胞核固缩、碎裂，序贯联合组和同时联合组最明显。三、结论1．索拉非尼能明显抑制肿瘤的新生血管生成。2．肿瘤的微血管密度减少能够延长瘤内注射131I-chTNT的代谢时间，提高肿瘤组织的131I-chTNT浓度，减少其他器官的131I-chTNT浓度。3．联合运用sorafenib和131I-chTNT比单用sorafenib或131I-chTN具有更强的肿瘤杀伤效果。

杜阳峰,罗荣城,李贵平,李爱民,丁雪梅,严晓,黄凯^[6]（2008）在《抗乙型肝炎表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗实验研究》文中指出目的探讨核素标记人源化抗（乙型肝炎）乙肝表面抗原Fab片段（抗HBsAgFab）联合核素标记抗细胞核单克隆抗体（chTNT）瘤内注射治疗荷人肝癌移植瘤裸鼠的可行性和优越性,为临床应用核素标记多种不同性质的单克隆抗体进行放射免疫治疗肝癌提供实验依据。方法荷瘤裸鼠分为五组,分别瘤内注射131I-抗HBsAgFab、131I-chTNT、131I-抗HBsAgFab联合131I-chTNT、131I-无关抗体（131I-IgG）及PBS。治疗后行SPECT显像观察标记抗体在肿瘤内的浓聚,并测量肿瘤大小变化,计算肿瘤抑制率。结果研究发现2种标记抗体联合应用组的肿瘤抑制率为73.09%,明显高于131I-抗HBsAgFab组的47.8%和131I-chTNT组的54.26%。联合应用组标记抗体在肿瘤组织/非肿瘤组织内的放射活度比值（T/NT值）大于单独应用组。结论131I-抗HBsAgFab联合131I-chTNT瘤内注射放射免疫治疗可增加标记抗体在肿瘤组织内的浓聚,并能提高放射免疫治疗效果。

杨海东,罗傲雪,范益军,秦之香^[7]（2007）在《单克隆抗体在治疗肿瘤中的研究进展》文中认为综述了单克隆抗体在治疗肿瘤中的研究进展。单克隆抗体在肿瘤的诊断和治疗方面得到了广泛的应用,其技术研究和临床应用取得了明显的突破。

郑媛媛^[8]（2006）在《肿瘤的单抗靶向疗法在国内的研究和应用进展》文中研究说明随着生物技术的发展,单抗靶向治疗肿瘤显示了良好前景。在基础研究领域,主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒素和生物诱导剂等偶联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。在临床已有多种单抗药物投入使用,其中用于造血系统肿瘤的治疗效果较好,治疗实体肿瘤方面也取得了进展。

戴垚^[9]（2005）在《抗Ⅳ型胶原酶单抗及其Fab’片段的免疫显像以及与平阳霉素新型免疫偶联物的制备和抗肿瘤活性研究》文中研究指明Ⅳ型胶原酶作为基质金属蛋白酶（MMPs）家族的成员之一，在肿瘤细胞的生长、侵袭转移和肿瘤组织内部血管生成等多个环节发挥着重要的作用。以其为靶点研制的许多小分子抑制剂已在临床显示了确切的疗效。单抗因具有高度特异性、高度多样性和可定向制备的特点已成为肿瘤靶向治疗药物的首选，显示了广阔的发展前景。本室已针对Ⅳ型胶原酶建立了相应的单克隆抗体，该单抗可与抗原发生特异性结合并抑制抗原分子的活性，以该单抗为基础构建的靶向偶联物在小鼠实验肿瘤模型中显示了确切的疗效。本研究通过放射免疫显像考察了抗Ⅳ型胶原酶单抗3011及其Fab’片段在动物模型中的肿瘤定位状况，同时以多聚谷氨酸为中间载体制备了它们与平阳霉素的免疫偶联物，并对偶联物的抗肿瘤作用进行了研究。 一、抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其Fab’片段在动物实验肿瘤模型中的免疫显像和生物分布 同位素标记技术的发展为单抗的免疫学和药理学检测提供了可靠的方法。我们将单抗3G11及其Fab’片段进行放射性碘标记，在动物肿瘤模型体内进行免疫显像，以考察单抗的体内分布特性。 以辛酸—硫酸铵两步沉淀法和Protein G亲和层析法从小鼠腹水中纯化得到抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11，纯度达95％以上，将该单抗进行无花果蛋白酶消化和β-MeSH还原，可得到其Fab’片段。ELISA实验表明单抗3G11不仅对Ⅳ型胶原酶有较高的结合作用，对表达该抗原的多种肿瘤细胞也呈浓度依赖的免疫学阳性反应，明胶酶谱显示6μM的单抗可中度抑制明胶酶的表达。单抗的Fab’片段则保留了全抗的部分免疫反应性。 采用Iodogen法对单抗3G11及其Fab’片段进行同位素碘(131I及125I)标记，放射薄层层析检测标记物的放射性参数，四种标记单抗的放射化学纯度均大于90％，比活度均在37MBq／mg以上。碘标记对抗体的免疫活性略有影响，全抗和片段的活性在标记后下降了10％～30％。将131I标记抗体进行体外稳定性检测，72h后，标记抗体的放化纯

郑大勇^[10]（2004）在《完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究》文中研究说明目的： 1．在摇瓶水平上对可影响大肠杆菌生长及外源蛋白表达的因素进行多因素分析，明确这些影响因素对菌体生长及表达的影响程度。 2．在BioFlo110型发酵罐中摸索高密度发酵方法，确定合理的发酵路线； 3．探索具有可放大的、非特异性纯化目的抗体片段的工艺路线。 方法： 1．通过预实验及文献回顾，确定出需实验考察的可能影响大肠杆菌生长及外源蛋白表达的8个因素。采用Plackett-Burman多因素两水平分析法和Box-Behnken响应面分析法对这8个因素进行多因素交互作用的实验设计，随后按照设计要求在摇瓶水平上进行实验； 2．在BioFlo110型发酵罐中考察不同的补料模式可能实现的发酵水平及蛋白表达水平。考察3种补料模式：恒速补料、指数补料及溶氧反馈控制补料。 3．在纯化路线设计方面，先以经过Ni2+敖合层析的抗体为“标准品”，摸索阳离子交换柱和疏水层析柱的纯化条件；随后按照自行设计的组合层析策略，将获得的菌体冻融上清经预处理后按照弱阳离子CM柱、疏水phenyl柱及凝胶过滤S200柱的顺序依次纯化；最后将得到的抗体以非竞争性ELISA法测定与乙肝表面抗原的亲和活性。 结果： 1．在对影响基因工程重组菌Fab／pBAD／gⅢ TOP10生长特性的多因素分析中，对可能影响菌体生长的8因素两水平分析后重要性排列的结果依次为：发酵起始pH、微量元素、体系载液量的水平、培养初期体系葡萄糖浓度、摇床转速、发酵过程的温度控制、培养体系中乙酸水平、以及诱导剂对生长过程的影响。其中，控制培养体系的pH值及微量元素的含量对生长影响最重要。对可能影响重组菌表达特性的3因素多水平分析的结果表明:诱导剂作用的浓度、诱导时间以及两者的交互作用对目的抗体表达的影响最重要。考察恒速补料、指数补料及溶氧反馈控制补料3种补料方式对发酵及表达效果的结果表明:从获得的菌量来看，以溶氧反馈控制补料模式获得的菌体量最高，可达OD55.8左右（相当于湿菌重128岁L），发酵的时间最长，达10个小时，获得的抗体产量最高，达到125m叭（发酵液）水平。但是从产率来看，恒速补料的单位菌体产率可达1.23m留g，单位时间内的产率为13.48m留g。结合考虑发酵过程中的氧耗成本及补料成本进行综合分析，很难从单一指标断定哪种补料模式为最佳。从我们实验室的发酵罐的硬件配置来看，最优的选择似乎是恒速补料，尽管该模式的总体产量较低，但是其单位菌体产率及单位时间的产率较高，同时操作最简单而消耗的成本又最小。在纯化路线的设计中，我们以经过Ni2+敖合层析纯化的Fab为替代标准品，先后确定了CM柱及HIC柱的纯化条件，证实了采用CM柱及HIC柱的可行性。随后将预处理后的冻融上清顺次过CM层析柱、HIC柱及GF柱纯化，比较理想地获得了目的抗体。-在随后的重复实验中，我们测定了各个色谱柱的纯化效率，对于以替代标准品直接过柱而言，CM柱及GF柱的目的抗体纯化效率可以达到90%左右，而HIC柱则接近80%，整体效率约65%左右。抗原结合活性测定方面，我们采用的是非竞争性EUSA法，计算出Fab亲和常数在107一1护M一，水平，比完整抗体anti一HBsAgIgG亲和常数（108一1护M一‘）小约1一2个数量级，表明该Fab抗原结合能力较强，在经过3个层析柱的纯化后仍可以保持较好的抗原结合活性。结论: 我们在摇瓶水平上确定了能够影响宿主菌生长的最重要因素为培养一3一体系的pH值及微量元素的含量，可影响宿主菌表达目的抗体的重要因，素为诱导剂作用的浓度、诱导时间以及两者的交互作用;在发酵罐发酵水平上，比较了不同的补料发酵模式可以实现的工程菌高密度发酵及高效表达的水平，从我们实验室的发酵罐的硬件配置来看厂，最优的选择是恒速补料，尽管该模式的总体产量较低，但是其单位菌体产率及单位时间的产率较高，同时操作最简单而消耗的成本又最小;在纯化工艺探索方面，完成了以组合层析策略（弱阳离子CM、疏水柱phenyl以及凝胶过滤5200）纯化目标抗体路线的构建。实验结果表明，采用我们构建的发酵方法及纯化路线，获得的抗体产量及成本均比较满意，且活性良好。 我们的实验从实验室水平向工业生产过渡的角度，完成了anti一HBsAg Fab/P BAD/gl n TOPlo原核表达体系的大规模培养及目的抗体批量纯化工艺路线的构建，为基因工程抗体的表达和纯化从实验室水平向工业化生产的过渡奠定了基础。

二、~(131)I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、~(131)I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究（论文提纲范文）

（1）131Ⅰ标记抗胃泌素释放肽前体单链抗体scFv的实验研究（论文提纲范文）

（2）131I-chTNT靶向治疗分化型甲状腺癌肺转移瘤的临床应用研究（论文提纲范文）

（4）大肠杆菌f2噬菌体多克隆抗体的研制及应用（论文提纲范文）

（5）核素标记不同性质单抗联合索拉非尼治疗肝癌的动物实验研究（论文提纲范文）

（6）抗乙型肝炎表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗实验研究（论文提纲范文）

（7）单克隆抗体在治疗肿瘤中的研究进展（论文提纲范文）

（9）抗Ⅳ型胶原酶单抗及其Fab’片段的免疫显像以及与平阳霉素新型免疫偶联物的制备和抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）

（10）完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究（论文提纲范文）

四、~(131)I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究（论文参考文献）

• [1]131Ⅰ标记抗胃泌素释放肽前体单链抗体scFv的实验研究[D]. 洪智慧. 苏州大学, 2011(06)
• [2]131I-chTNT靶向治疗分化型甲状腺癌肺转移瘤的临床应用研究[D]. 张浩然. 吉林大学, 2010(08)
• [3]实体瘤的放射免疫治疗[J]. 贾海威,聂青. 肿瘤研究与临床, 2009(07)
• [4]大肠杆菌f2噬菌体多克隆抗体的研制及应用[D]. 徐礼源. 华中科技大学, 2008(05)
• [5]核素标记不同性质单抗联合索拉非尼治疗肝癌的动物实验研究[D]. 杜阳峰. 南方医科大学, 2008(06)
• [6]抗乙型肝炎表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗实验研究[J]. 杜阳峰,罗荣城,李贵平,李爱民,丁雪梅,严晓,黄凯. 南方医科大学学报, 2008(03)
• [7]单克隆抗体在治疗肿瘤中的研究进展[J]. 杨海东,罗傲雪,范益军,秦之香. 时珍国医国药, 2007(11)
• [8]肿瘤的单抗靶向疗法在国内的研究和应用进展[J]. 郑媛媛. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2006(01)
• [9]抗Ⅳ型胶原酶单抗及其Fab’片段的免疫显像以及与平阳霉素新型免疫偶联物的制备和抗肿瘤活性研究[D]. 戴垚. 中国协和医科大学, 2005(12)
• [10]完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究[D]. 郑大勇. 第一军医大学, 2004(04)