祁有朝[1]（2019）在《TCDCA对TGR5受体介导的cAMP-PKA-CREB信号转导通路的影响》文中研究表明牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）作为胆汁酸（bile acids,BAs）的主要活性成分之一,可通过多种信号通路对炎症与免疫功能发挥调节作用;然而,TCDCA是否经由TGR5受体介导cAMP-PKA-CREB及Raf-1-CREB信号通路发挥抗炎免疫调节作用的分子机制尚不清楚。为此,本研究采用肺癌细胞H1299为研究对象,通过构建TGR5基因敲低H1299细胞（TGR5 knockdown,TGR5-KD）开展了TCDCA对cAMP含量、PKA及CREB基因和蛋白表达量影响的研究,旨在深入揭示TCDCA是否能够激活TGR5受体,进而调节cAMP、PKA及CREB信号分子;采用大鼠肺泡巨噬细胞NR8383作为研究对象,开展了 TCDCA对cAMP-PKA-CREB与Raf-1-CREB信号通路及NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12影响的研究,旨在阐明TCDCA是否通过TGR5受体介导的PKA-CREB及Raf-1-CREB信号通路发挥抗炎免疫调节作用。具体的研究内容如下:（1）TCDCA对TGR5受体的激活作用采用CRISP/Cas9技术在H1299细胞上进行TGR5基因编辑;采用qPCR法检测了H1299细胞与TGR5-KD H1299细胞中PKA、CREB的基因表达量;采用Western blot法检测了 H1299细胞与TGR5-KD H1299细胞中PKA、CREB的蛋白表达量;采用ELISA法检测了 H1299细胞与TGR5-KD H1299细胞中的cAMP含量的影响。结果显示如下:TGR5基因编辑的结果显示,TGR5基因在TGR5-KD H1299细胞中的敲除率达96.91%,表明TGR5基因在H1299细胞中编辑成功。TCDCA对H1299细胞与TGR5-KD H1299中cAMP的影响结果显示,与H1299细胞组相比较,TGR5-KD H1299细胞低、高浓度给药组的cAMP含量均显着降低（P<0.05）;而中浓度给药组的cAMP含量极显着降低（P<0.01）。与H1299细胞相比较,TCDCA作用于TGR5-KD H1299细胞10 min、15 min和20 min时的cAMP的含量均极显着降低（P<0.01）,且在15 min时最低,然后随着时间的推移逐渐下降。TCDCA对H1299细胞和TGR5-KD H1299细胞中PKA与CREB基因和蛋白表达影响的结果显示,TCDCA在作用TGR5-KD H1299细胞3 h时PKA基因表达量极显着降低（P<0.01）;CREB基因和蛋白表达量均显着降低（P<0.05）或极显着降低（P<0.01）。TCDCA在作用TGR5-KD H1299细胞6 h时PKA基因和蛋白的表达量均极显着降低（P<0.01）;CREB蛋白的表达量极显着降低（P<0.01）。（2）TCDCA对NR8383细胞中cAMP-PKA-CREB信号通路的影响采用腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）特异性抑制剂SQ22536、蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）特异性抑制剂H89及Raf-1特异性抑制剂Dabrafenib开展了TCDCA对下游信号分子PKA和CREB基因和蛋白表达量影响的研究。采用qPCR法检测了 NR8383细胞及NR8383-TGR5中PKA和CREB基因表达量;采用Western blot法检测了 NR8383细胞及NR8383-TGR5细胞中PKA和CREB蛋白表达量。TCDCA对经AC特异性抑制剂SQ22536处理后NR8383细胞中PKA基因和蛋白表达量影响的结果显示,分别与NR8383细胞组及NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383细胞给药组与NR8383-TGR5细胞给药组的PKA基因和蛋白的表达量均极显着增加（P<0.01）;与NR8383细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组PKA基因和蛋白表达量显着（P<0.05）或极显增加（P<0.01）。与经抑制剂处理的NR8383细胞给药组相比较,NR8383细胞给药组PKA蛋白的表达量显着增加（P<0.05）;与经抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组PKA基因和蛋白的表达量显着增加（P<0.05）或极显着增加（P<0.01）。TCDCA对PKA处理后NR8383细胞中CREB基因和蛋白表达量影响的结果显示,与NR8383细胞组相比较,NR8383细胞给药组的CREB蛋白表达量增加显着增加（P<0.05）;与NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB基因和蛋白的表达量均极显着增加（P<0.01）;与NR8383细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组CREB基因和蛋白的表达量显着增加（P<0.05）或极显着增加（P<0.01）。与经抑制剂处理的NR8383细胞给药组相比较,NR8383细胞给药组CREB蛋白表达量显着增加（P<0.05）;与经抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组CREB的蛋白表达量显着增加（P<0.05）。TCDCA对Raf-1处理后NR8383细胞中CREB基因和蛋白表达量影响的结果显示,与NR8383细胞组相比较,NR8383细胞给药组的CREB蛋白表达量极显着增加（P<0.01）;与NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB基因和蛋白的表达量显着增加（P<0.05）或极显着增加（P<0.01）;与NR8383细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组CREB基因和蛋白的表达量显着增加（P<0.05）或极显着增加（P<0.01）。与经抑制剂处理的NR8383细胞组相比较,NR8383细胞给药组的CREB蛋白的表达量显着增加（P<0.05）;与经抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB蛋白的表达量极显着增加（P<0.01）。TCDCA对NR8383细胞中PKA和Raf-1处理后CREB基因和蛋白表达影响的结果显示,与NR8383细胞组相比较,NR8383细胞给药组的CREB蛋白表达量极显着增加（P<0.01）;与NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB基因和蛋白的表达量均极显着增加（P<0.01）;与NR8383细胞给药组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB基因和蛋白的表达量显着增加（P<0.05）或极显着增加（P<0.01）。与经抑制剂处理的NR8383细胞组相比较,NR8383细胞给药组的CREB蛋白的表达量极显着增加（P<0.01）;与经抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞组相比较,NR8383-TGR5细胞给药组的CREB蛋白的表达量极显着增加（P<0.01）。（3）TCDCA对NR8383细胞中抗炎免疫相关细胞因子的影响采用 qPCR 法检测了 NR8383 细胞及 NR8383-TGR5 细胞中 NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12基因表达量;采用Western blot法检测NR8383细胞及NR8383-TGR5细胞中NF-κB蛋白表达量;采用ELISA法检测了 NR8383细胞及NR8383-TGR5 细胞中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 及 IL-12 的蛋白表达量。经LPS刺激的NR8383细胞给药组与NR8383细胞LPS刺激组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-12基因的表达显着降低（P<0.05）或极显着降低（P<0.01）;经LPS刺激的NR8383-TGR5细胞给药组与NR8383-TGR5细胞LPS刺激组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12的基因表达量均极显着的降低（P<0.01）;经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383细胞给药组与经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383细胞组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-12的基因表达量显着降低（P<0.05）或极显着的降低（P<0.01）;经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞给药组与经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12的基因表达量均极显着性的降低（P<0.01）。LPS刺激的NR8383-TGR5细胞给药组与经LPS刺激的NR8383细胞给药组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-8的基因表达量显着的降低（P<0.05）或极显着降低（P<0.01）。经LPS刺激的NR8383细胞给药组与NR8383细胞LPS刺激组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-6、及IL-12的蛋白表达量显着降低（P<0.05）或极显着降低（P<0.01）;经LPS刺激的NR8383-TGR5细胞给药组与NR8383-TGR5细胞LPS刺激组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12的蛋白表达量均极显着的降低（P<0.01）。经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383细胞给药组与经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383细胞组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-6、及IL-12的蛋白表达量显着性降低（P<0.05）或极显着性降低（P<0.01）;经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞给药组与经LPS刺激和抑制剂处理的NR8383-TGR5细胞组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8以及IL-12的蛋白表达量均极显着的增加（P<0.01）或极显着性的降低（P<0.01）;LPS刺激的NR8383-TGR5细胞给药组与经LPS刺激的NR8383细胞给药组相比较,NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8以及IL-12的蛋白表达量显着降低（P<0.05）或极显着降低（P<0.01）。通过本研究可主要得出以下结论:（1）TCDCA能够激活TGR5受体,极显着上调TGR5-KD H1299细胞中的cAMP含量;TCDCA可极显着增加cAMP含量、PKA与CREB的活性。（2）TCDCA可以通过激活TGR5受体增加PKA和CREB蛋白磷酸化水平,且在SQ22536、H89及Dabrafenib作用下均可显着或极显着的降低PKA和CREB磷酸化水平,TCDCA可通过TGR5受体介导cAMP-PKA-CREB及Raf-1-CREB信号通路。（3）TCDCA可显着或极显着降低由LPS刺激引起的NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及IL-12基因和蛋白的表达量,TCDCA经由TGR5受体介导的cAMP-PKA-CREB 信号通路下调 NR8383 细胞中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 及 IL-12 的表达,从而发挥抗炎免疫调节作用。
李炎桂[2]（2019）在《貉胆生药学鉴定、成分分析及其抗炎抑菌作用的研究》文中进行了进一步梳理熊胆为熊科动物黑熊Ursus thibetanus的干燥胆,是我国传统名贵动物药材,有1300多年的医药学应用历史,历代中医古籍中含熊胆的方剂多达396首。本品为不规则碎片、颗粒和粉末,黄色至深棕色,有的呈深绿色或淡红色,半透明,有玻璃样光泽,质脆,易吸潮,气清香微腥,味极苦微回甜,有清凉感。熊胆初次记载于《新修本草》,气味苦寒、无毒,入肝胆心经,具有清热、平肝、明目功能,常用于惊风抽搐、目赤肿痛、咽喉肿痛等病症。熊胆的资源极其短缺,其研究和应用受到严重障碍。因此,寻找熊胆替代品中药材新资源,开展其临床前研究具有重要的社会、经济及生态意义。考虑熊胆粉来源性质,其可能替代品首先考虑动物胆类中药。貉是皮毛动物养殖品种中最容易饲养的品种,貉养殖规模较大。打皮完成后,大部分貉胆被丢弃,能否将貉胆变废为宝代替熊胆,有待于进一步研究。本文通过来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定、红外光谱、UPLC-MS/MS等方法对貉胆进行鉴别,比较貉胆和熊胆之间的异同点;通过对比分析貉胆粉和熊胆粉活性成分的异同,对比分析貉胆粉和熊胆粉抗炎抑菌药理作用的异同,为貉胆粉是否有代替熊胆粉的可行性提供依据和参考。具体结果如下:1.本文通过来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定、IR、UPLC-MS/MS等方法对貉胆进行鉴别。发现貉胆粉极容易获取,来源于犬科动物貉。貉胆胆仁脆,半透明,表面有光泽,断面光滑,光泽明显,粉末黄色、黄绿色,有腥气。显微镜下可观察到貉胆粉末有无色或黄色的透明或半透明晶体存在,棱角分明,有明显条纹。紫外光下可观察到貉胆粉末有明亮黄绿色荧光。通过TLC实验,发现貉胆粉可在对应胆酸和鹅去氧胆酸标准品位置找到对应斑点;通过UPLC-MS/MS实验,发现貉胆粉可在对应胆酸和鹅去氧胆酸标准品位置找到胆酸的6种离子碎片以及鹅去氧胆酸的5种离子碎片,确定貉胆粉具有胆酸和鹅去氧胆酸两种成分。通过IR实验,发现貉胆粉共有图谱特征吸收峰如下:1070cm-1、1669cm-1、2924cm-1、2997cm-1,和熊胆粉红外光谱一致,说明貉胆粉和熊胆粉中物质成分的化学键以及官能团组成相似。2.本文采用紫外可见分光光度计,对貉胆粉总胆酸含量测定,发现貉胆粉中的总胆酸含量远高于熊胆粉的。以胆酸和熊去氧胆酸含量计总胆酸,貉胆粉总胆酸含量分别为39.80%、36.06%,熊胆粉总胆酸含量分别是14.00%、14.73%。3.本文采用HPLC法对貉胆粉中21种氨基酸进行测定,发现貉胆粉共有16种氨基酸,熊胆粉中共有14种氨基酸。其中貉胆粉有7种人体必需氨基酸,熊胆粉中有6种人体必需氨基酸。貉胆粉中有药用氨基酸9种,熊胆粉中有8种药用氨基酸。二者共有的14种氨基酸中,貉胆粉中天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、丝氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的含量均高于熊胆粉中对应氨基酸的含量。4.本文采用ICP-MS对貉胆粉和熊胆粉中65种无机元素含量进行测定,发现貉胆粉和熊胆粉共有的64种无机元素,其中貉胆粉中有44种元素含量不低于熊胆粉中的含量。貉胆粉中不含镍元素。5.本文通过药理实验证明貉胆粉具有显着抑制二甲苯诱发的小鼠耳肿胀的作用。貉胆粉和熊胆粉实验组中,发现抗炎效果随两种胆粉药液浓度的增加而增加。高、中剂量的貉胆粉和熊胆粉抗炎作用显着,同剂量间无显着差异。浓度为0.14g/ml的貉胆粉对沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌无明显体外抑制作用,抑菌作用达不到熊胆粉的效果。
冯娜[3]（2018）在《鸭胆膏中鹅去氧胆酸提取及熊去氧胆酸合成》文中进行了进一步梳理鹅去氧胆酸（CDCA）存在于多种动物胆汁中,如鸡、鸭、猪等。它是临床上常用的治疗肝胆疾病的药物,也是熊去氧胆酸（UDCA）的一种原料。目前市售的CDCA主要是从鸡胆汁中提取,随着CDCA市场需求的增加,生产商要抢占原材料资源,导致鸡胆汁价格持续上涨。为了降低生产成本,许多生产商希望通过技术创新,利用廉价的鸭胆和猪胆作为原料生产CDCA。UDCA可用于治疗各种胆石疾病,是一种作用广泛、临床效果好的药物。从熊胆中提取的传统方法,来源有限,而且有违于动物保护,因此化学合成UDCA具有重要的意义。本论文从三个方面展开研究:鸭胆膏中CDCA的提取、粗品CDCA的纯化和UDCA的合成。具体开展的工作和取得的成果如下:采用结晶法从鸭胆膏中提取CDCA,研究结晶溶剂、液固比（V/W）、提取时间、提取温度、浓缩液固比（V/W）五个因素对CDCA提取率的影响。通过单因素和响应面实验,得到CDCA提取的最优工艺参数为:乙酸乙酯为提取溶剂,液固比8,温度78 ℃,时间1h,浓缩液固比3.5,该条件下CDCA的提取率为80.2%。将提取的粗品进行纯化,研究重结晶溶剂种类、重结晶溶剂添加量、浓缩液固比（V/W）、重结晶温度四个因素对CDCA纯化综合值的影响。通过单因素和响应面实验,得出最佳纯化工艺条件为:乙酸乙酯为重结晶溶剂,液固比12,浓缩液固比3,重结晶温度0 ℃,该条件下CDCA纯化综合值为76.5%。所得物质经1HNMR和IR确定为纯度较高的CDCA,其熔点是168.5 ℃-169.5 ℃,比旋光度是11.25°,HPLC确定CDCA的纯度是98.1%。以CDCA为原料合成UDCA,研究NBS添加量、丙酮与水比例、KBH4添加量、反应时间及乙醇添加量五个因素对UDCA合成与纯化的影响,通过单因素实验得到最佳合成与纯化条件为:NBS与CDCA摩尔比1.2,丙酮:水=3:1,KBH4与7-酮石胆酸摩尔比3.5,时间3 h,UDCA粗品与乙醇和水（1:1）固液比（W/V）1:8,该条件下,相对于CDCA,UDCA产率为71.2%。应用IR、1HNMR对合成产物结构进行表征,其熔点是204.5 ℃-205.5 ℃,比旋光度是59.7°,HPLC确定UDCA的纯度是97.9%。
李欣[4]（2017）在《牛磺鹅去氧胆酸对大鼠脂肪代谢的影响》文中进行了进一步梳理胆汁酸（blie acid）是动物体内胆汁中的主要成分,直接参与体内脂类代谢过程。牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA）是胆汁酸中主要的生物活性物质,主要存在于鸡胆汁中,具有抗氧化、解热、抗炎、免疫、镇痛等多种生物功能。为了深入了解TCDCA的生物活性,本课题针对TCDCA对脂肪代谢的影响进行了试验研究。研究内容包括:经口服给予不同剂量的TCDCA 21d后,采用全自动生化分析仪检测TCDCA对大鼠脂肪代谢的相关生理生化指标;分别采用TBA法、WSF-1法和分光光度法测定血清中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;采用组织病理学方法检测大鼠肝脏组织形态和细胞结构;采用免疫组化方法检测法尼醇X受体（FXR）在大鼠肝脏的表达位置;分别采用荧光定量PCR和Western blot技术检测大鼠肝脏中FXR基因、蛋白的表达量。研究结果表明:中剂量组的大鼠体重及增重均显着低于阴性对照组（P＜0.05）;低、中、高三个剂量组肝体比极显着大于阴性对照组（P＜0.01）;与阴性对照组相比,TCDCA低、中、高三个剂量组的TC、TG、HDL-C,LDL-C水平、肾体比、体脂肪率、料肉比以及各项血液生理生化指标均无显着性差异（P＞0.05）;中剂量TCDCA可显着性降低大鼠血清中MDA含量,TCDCA处理组的大鼠血清中S0D和GSH-Px活力虽有升高,但差异不显着（P＞0.05）;TCDCA给药组的大鼠肝脏与其正常组织形态结构相比均无显着变化（P＞0.05）;免疫组化结果显示,FXR在大鼠肝脏细胞核上均有表达,但TCDCA给药组的大鼠肝脏中FXR的表达量较多;TCDCA低剂量组的大鼠肝脏中FXR mRNA表达量极显着高于阴性对照组（P＜0.01）,Western blot结果显示TCDCA低剂量组FXR蛋白表达量显着高于阴性对照组（P＜0.05）。结论:中剂量TCDCA显着降低大鼠体质量,显着抑制大鼠增重;FXR在大鼠肝脏中有较高效表达,且TCDCA处理组的大鼠肝脏中FXR表达量明显高于阴性对照组:低剂量TCDCA能够显着性升高FXR的蛋白和基因的表达量。
臧臻臻[5]（2017）在《鸡胆汁中鹅去氧胆酸的提取及熊去氧胆酸合成》文中研究说明随着鹅去氧胆酸与熊去氧胆酸的临床需求量逐年增加,国内原有的生产企业的产量已不能满足市场需求。新上马的生产企业也主要是采用会产生环境污染的钡盐法生产鹅去氧胆酸。针对此种情况,本论文开展结晶法生产鹅去氧胆酸和以鹅去氧胆酸为原料合成熊去氧胆酸的工艺研究。本论文从碱加入量、反应温度、反应时间几个方面,研究影响鸡胆膏品质的因素;从溶剂的种类、溶剂的添加量等方面探究鸡胆膏中鹅去氧胆酸的提取效率;从溶剂的种类、溶剂的用量、回流溶解时间、结晶温度等几个方面探究影响鹅去氧胆酸结晶效率和纯度的因素;应用TLC、HPLC、1HNMR确定鹅去氧胆酸的纯度、杂质种类、杂质含量等;研究NBS作氧化剂、碱金属钠作还原剂、水/醇作结晶溶剂合成与纯化熊去氧胆酸的工艺。得到的结果如下:鸡胆汁皂化的最优条件是氢氧化钠用量为胆汁质量的10%,皂化温度110°C,皂化时间18h时,胆膏得率为12.6%。鸡胆膏中鹅去氧胆酸的提取,乙酸乙酯是最优的提取溶剂,鸡胆膏与乙酸乙酯固液比（W/V）为1:10,回流时间2h;鹅去氧胆酸的纯化,乙酸乙酯是最优的重结晶溶剂,鹅去氧胆酸粗品与乙酸乙酯固液比（W/V）为1:10;经此工艺,相对于鸡胆汁,鹅去氧胆酸产率可以达到3.8%,经过重结晶后,鹅去氧胆酸纯度可以达到98.2%,熔点是168.6-169.4℃,比旋光度是12.5°。熊去氧胆酸合成步骤中,鹅去氧胆酸的氧化应用溶剂为丙酮/水（3/1）,氧化剂NBS用量为鹅去氧胆酸物质的量的1.2倍,7-氧代-石胆酸还原步骤中,金属钠的物质的量为7-氧代-石胆酸的10倍,溶剂为正丁醇,温度为105℃。熊去氧胆酸重结晶步骤中,粗品与水/乙醇（1/1）的固液比（W/V）为1:8。相对于鹅去氧胆酸,熊去氧胆酸的产率是60%,纯度96.7%,熔点是205.3-206.5℃,比旋光度是59.7°。
王建敏[6]（2017）在《猪胆膏中鹅去氧胆酸的提取及纯化》文中研究表明鹅去氧胆酸存在于人和鸡、鸭、猪等多种动物胆汁中,是临床上治疗肝胆疾病的常用药物,也是合成治疗胆固醇型胆结石疾病用量最大的药物熊去氧胆酸的原料。尽管鸡、鸭胆汁中的鹅去氧胆酸含量相近,猪胆汁来源丰富,其中鹅去氧胆酸含量可观,但是由于技术限制,临床应用的鹅去氧胆酸主要是从鸡胆汁中提取的。随着鹅去氧胆酸市场需求不断增加,生产厂家抢占原料资源,导致鸡苦胆价格持续升高。为降低生产成本,众多生产厂家希望通过技术创新,应用价格低廉的鸭胆汁和猪胆汁为原料生产鹅去氧胆酸。此外,鸡、鸭、猪屠宰企业的苦胆资源常常是通过中间商转化为胆膏后上市销售。针对此种情况,本论文研究从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的技术,以期产业化应用。为了获得有效的从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法,本文从三个方面开展研究工作:①钙盐法从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸工艺条件;②鹅去氧胆酸精制;③溶剂对鹅去氧胆酸结晶形态的影响。具体开展的工作和取得的成果如下:（1）研究甲醇用量、反应温度、氯化钙用量和溶液pH四个因素对鹅去氧胆酸提取率的影响。通过单因素和正交实验,得到鹅去氧胆酸提取的最优工艺参数为:甲醇用量（V）为胆膏（m）的10倍,反应温度为55℃,20%氯化钙水溶液的用量（V）是猪胆膏（m）的3.5倍,溶液pH为13。在最佳工艺条件下,提取率可达到82.23%。（2）采用重结晶法纯化鹅去氧胆酸,研究了单一溶剂和混合溶剂的效果,确定了最优的重结晶溶剂是乙酸乙酯。通过液固比、回流时间、浓缩液固比和结晶温度四个方面进行单因素和正交实验,得到鹅去氧胆酸最优的纯化工艺参数为:12倍乙酸乙酯回流,回流时间为2h,浓缩液固比为4倍,0℃下结晶。此条件下所得的鹅去氧胆酸结晶产率为42.97%,纯度是98.61%,熔点是168.2℃-168.6℃,比旋光度是11.75℃。（3）研究了溶剂对鹅去氧胆酸结晶形态的影响。结果显示:在乙酸乙酯中,鹅去氧胆酸结晶得到的晶体为表面和截面都有孔的六棱柱;在乙腈中,鹅去氧胆酸结晶得到的晶体为颗粒状;在乙酸乙酯-乙腈混合溶剂中,鹅去氧胆酸结晶得到的晶体为片层状;在乙酸乙酯-氯仿的混合溶剂中,鹅去氧胆酸结晶得到的晶体为表面光滑的中空六棱柱;在乙酸乙酯-正己烷的混合溶剂中,鹅去氧胆酸的结晶为表面光滑的实心六棱柱。不同晶形鹅去氧胆酸的IR图谱,X-衍射图以及DSC图有较明显的差别。
王旭东[7]（2015）在《TCDCA对NR8383细胞中TGR5介导的Ca2+-CaM信号途径的影响》文中研究表明牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid,TCDCA）作为动物胆汁酸的主要有效成分,在胆汁发挥其生理作用的过程中具有重要的作用。大量研究发现,TCDCA具有显着的抗炎和免疫调节作用。为了深入探讨TCDCA在发挥抗炎免疫调节调节作用时,对免疫细胞中TGR5受体介导的Ca2+-CaM信号途径的影响,本研究以大鼠肺泡巨噬细胞NR8383为研究对象,采用脂质体转染法将已经成功构建的pcMV-TGR5质粒转染到大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中,采用荧光定量PCR和Western Blot技术检测了转染pcMV-TGR5质粒的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5的表达;采用ELISA技术检测了TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中三磷酸肌醇（IP3）含量的影响;采用荧光探针法检测了TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中Ca2+浓度的影响;采用荧光定量PCR和Western Blot技术检测了TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中CaM表达的影响。结果显示,转染pcMV-TGR5质粒的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5受体的表达均高于未转染细胞,TGR5受体在大鼠肺泡巨噬细胞NR8383成功表达;TCDCA可通过与TGR5受体结合进而使大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中IP3的浓度显着升高,大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中Ca2+浓度显着提高;TCDCA还能够促进大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞中CaM基因和蛋白的表达。以上结果提示,TCDCA产生的抗炎免疫调节作用与其激活TGR5受体介导的Ca2+-CaM信号途径有关。
李磊[8]（2014）在《TCDCA与糖皮质激素受体的相互作用及其对活化蛋白-1的影响》文中研究指明牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic Acid, TCDCA）广泛存在于动物胆汁中,是动物胆汁酸的有效成分之一,具有显着的抗炎及免疫调节作用。TCDCA在结构上具有环戊烷多氢菲的基本母核,与甾体激素具有相似的化学结构。为了更加深入揭示TCDCA的抗炎免疫调节作用机制,本研究以佐剂性关节炎（Adjuvant arthritis,AA）模型大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes,FLS）为研究对象,探讨了TCDCA与糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor,GR）的相互作用及其对转录因子活化蛋白1（Activator protein-1,AP-1）和AA大鼠FLS细胞凋亡的影响。具体研究内容如下：（1） TCDCA与GR的相互作用采用Autodock软件将TCDCA与GR进行分子对接研究；采用萤光素酶报告基因法检测GR的激活情况：采用荧光显微镜追踪GR核移位。研究结果显示,TCDCA能够与GR732位上的亮氨酸以氢键发生相互作用,其结合吉布斯自由能变为-4.51kcal/mol,解离常数Kd=498.39μM;与对照组相比,1×10-4M TCDCA能够显着激活GR并发生核移位。（2） TCDCA对AP-1及细胞间粘附分子-1表达与活性的影响采用western blot法检测了AA大鼠FLS中c-Fos、c-Jun、磷酸化c-Jun（p-c-Jun （Ser63））的表达；采用ELISA法检测了AP-1的DNA结合活性活性。研究结果显示,1×10-6～1×10-4M TCDCA均能够显着降低c-Fos、c-Jun、p-c-Jun（Ser63）蛋白表达量及AP-1DNA结合活性。采用qPCR法检测了AA大鼠FLS中细胞间粘附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1） mRNA的表达量；采用ELISA法检测了AA大鼠FLS中ICAM-1蛋白表达量。研究结果显示,1×10-6～1×10-4mol/L TCDCA均能够显着抑制ICAM-1mRNA和蛋白的表达（P<0.05）,且该抑制作用可被GR阻断剂米非司酮（RU486）所拮抗。（3） TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡的影响采用流式细胞术检测了TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡率的影响：采用qPCR法检测了TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡相关基因caspase-3、caspase-8mRNA表达量的影响,并采用ELISA法检测了TCDCA对AA大鼠FLS细胞Caspase-3、Caspase-8活性的影响。结果显示,TCDCA （400μg/mL）与对照组相比,可极显着增加FLS凋亡的百分率（P<0.01）; TCDCA （400μg/mL）与对照组相比,可显着提高caspase-8基因表达水平（P<0.05）; TCDCA （400μg/mL）与对照组相比,可极显着提高caspase-3基因表达水平（P<0.01）；TCDCAC（50～200μg/mL）与对照组相比,可显着提高Caspase-8活性（P<0.05）；TCDCA （100～200jig/mL）与对照组相比,可显着提高Caspase-3活性（P<0.05）,TCDCA（400μg/mL）可极显着提高Caspase-3活性（P<0.01）。本研究的主要结论如下：（1） TCDCA能够与GR结合并激活GR；（2） TCDCA能够显着抑制c-Jun、p-c-Jun、c-Fos蛋白表达并抑制AP-1DNA结合活性；（3） TCDCA能够显着抑制AA大鼠FLS细胞ICAM-1基因与蛋白的表达；（4） TCDCA能够显着增加AA大鼠FLS细胞Caspase-3、Caspase-8的基因表达及其活性,并促进FLS细胞凋亡。（5） TCDCA的抗炎免疫调节作用与其影响糖皮质激素受体介导的基因组学信号通路有关。
史琳凯[9]（2014）在《TCDCA与TGR5相互作用的研究》文中认为TCDCA作为胆汁酸的主要成分,已被证实可介导多种信号通路,从而发挥其抗炎免疫调节的作用。本研究旨在深入探讨TCDCA能否与TGR5受体发生相互作用,继而参与由TGR5受体介导的信号转导通路。本研究构建了TGR5真核表达载体,并在293T细胞中进行了表达,在此基础上,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR技术、western blotting技术,鉴定了TGR5受体在293T细胞中的表达。采用荧光显微镜观测法,检测了293T细胞受体内陷;采用ELISA法,测定了293T细胞内cAMP含量,分析了TCDCA的量效关系,293T细胞中荧光素酶报告基因活性。结果显示,TGR5真核表达载体构建成功,并能够在239T中表达。TCDCA作用TGR5后,可引起转染TGR5受体的293T细胞内陷反应,细胞内cAMP和萤光素酶含量显着升高（P<0.01）,且呈现剂量依赖性关系（r2=0.9958）。结论:TCDCA能够与TGR5发生相互结合。
周德方[10]（2014）在《牛磺鹅去氧胆酸对抗地塞米松致小鼠脑损伤的组织病理学影响》文中认为糖皮质激素类药物因为其具备良好的抗炎、抗过敏和抗内毒素等药理作用，被广泛应用于兽医和人医的临床上。但近些年发现该类药物对神经系统可产生严重的不良反应，包括脊髓梗死、皮质盲、中风、癫痫、神经损伤、脑水肿和死亡等。最近美国食品药品监督管理局局（FDA）要求在糖皮质激素注射剂标签中加入这些新的警告内容。因此寻找一类可以减轻或对抗糖皮质激素类不良反应的药物变得越为重要。胆汁酸及其有效成分的研究一直是国内外研究的热点领域之一。牛磺鹅去氧胆酸（TaurochenodeoxycholicAcid，TCDCA）是胆汁酸中一种重要有效成分，以往研究发现其能够对小鼠机体下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）有调节作用，并能对抗地塞米松不良反应。在以往研究工作的基础上，本课题采用大剂量地塞米松（Dexamethasone，DEX）给药制备小鼠脑组织损伤模型，并同时灌服TCDCA，通过对其大脑内各个部位的组织学观察，了解大剂量糖皮质激素类药物对脑各区域损伤情况，并探讨TCDCA能否在小鼠脑内对抗地塞米松不良反应，为今后将其用于减轻糖皮质激素类药物不良反应或开发成为脑组织保护性药物提供依据。本论文主要研究内容及结果如下：将200只小鼠，雌雄各半，随机分为10组，即正常组，不同剂量DEX诱导的三个模型组，其中DEX的给药剂量分别为20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg，对每种剂量DEX模型组又设高、低TCDCA两个模型给药组，其中TCDCA高、低给药剂量分别为50mg/kg、100mg/kg。DEX采用腹腔注射给药方式，TCDCA口服给药，二者同时给药，连续给药7天。采用HE染色法检测小鼠大脑皮层、胼胝体、海马、第三脑室脉络丛、丘脑、下丘脑各区域的病理组织变化。病理图片显示：在大脑皮层区，与正常对照组相比，20mg/kg剂量DEX模型组皮层区出现细胞皱缩、水肿并伴有内皮细胞肿胀现象，具体表现为细胞周围有空隙、血管周间隙增宽；40mg/kg地塞米松模型组皮层区出现水肿，严重淤血现象；80mg/kg剂量下地塞米松模型组皮层区出现淤血，水肿。低剂量给药组和高剂量给药组皮层区淤血、水肿现象均有所减轻，其中高剂量给药组更为显着。在胼胝体区，与正常对照组相比，各剂量DEX模型组与各剂量TCDCA给药组的胼胝体均无显着变化。在海马区，与正常对照组相对比，20mg/kg地塞米松模型组海马体内出现水肿现象，并伴随有淤血形成；低剂量给药组海马体淤血减轻，但还有轻微水肿；高剂量模型给药组海马体内淤血、水肿消失，基本恢复正常。各组的海马齿状回细胞均无显着差别。40mg/kg剂量下地塞米松模型组海马体内出现大量淤血、水肿，细胞出现皱缩，海马齿状回细胞轮廓模糊，界限不明显，着色变浅，空泡增多，有的核仁消失形态，一些细胞处于崩解状态；低剂量给药组淤血消失，水肿减弱，但其海马齿状回细胞依旧空泡化明显，细胞界限模糊，着色较浅；高剂量给药组淤血、水肿消失并且海马齿状回细胞恢复正常。80mg/kg剂量下地塞米松模型组海马体内出现大量淤血、水肿现象，海马齿状回有的细胞核仁形态消失，出现空泡化，轮廓模糊，界限不明显处于崩解状态；低剂量给药组细胞与高剂量给药组海马体内水肿、淤血和细胞空泡化现象均有所减轻，但其细胞轮廓依旧模糊，界限不明显；高剂量给药组更为恢复效果较显着，其海马齿状回细胞空泡化消失，核仁明显，轮廓清晰，恢复正常水平。在第三脑室脉络丛区，与正常对照组相对比，20mg/kg剂量下的地塞米松模型组、低剂量给药模型组和高剂量模型给药组的脉络丛在组织结构方面差异不大，细胞形态正常；40mg/kg地塞米松模型组脉络丛形态结构上无显着变化，但低剂量给药组和高剂量给药组脉络丛血管周间隙均所扩张，出现水肿，其中高剂量给药组更为严重；80mg/kg地塞米松模型组脉络丛出现明显水肿，表现为血管间隙增宽；低剂量给药组与高剂量给药组脉络丛血管间隙均有所恢复，其中以高剂量给药组效果更为显着。在丘脑区，与正常对照组相对比，20mg/kg地塞米松模型组丘脑内出细胞皱缩、水肿现象；80mg/kg地塞米松模型组丘脑内出现淤血，细胞皱缩现象；80mg/kg地塞米松模型组丘脑内出现水肿，血管周隙明显增宽；各模型组的低剂量给药组与高剂量模给药组丘脑区血管周隙均恢复正常、水肿均有所减轻，其中高剂量给药组效果更为显着。在下丘脑区，与正常对照组相对比，20mg/kg地塞米松模型组下丘脑内出现轻微水肿现象；40mg/kg地塞米松模型组下丘脑内出现水肿，表现为血管周隙增加；80mg/kg地塞米松模型组下丘脑内出现严重瘀血。低剂量给药组与高剂量给药组丘脑内瘀血均消失，组织均恢复正常。综上所述，本课题可得出如下结论：大剂量的地塞米松对小鼠脑组织造成的损伤主要表现为淤血、水肿、细胞皱缩，其损伤主要部位出现在大脑皮层、海马、丘脑和下丘脑部位。牛磺鹅去氧胆酸能够有效的对抗地塞米松对小鼠大脑造成的不良反应，其中TCDCA的给药剂为100mg/kg时的效果更为显着。
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本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 胆汁酸的研究进展 |
| 1.1.1 胆汁酸的合成以及体内过程 |
| 1.1.2 胆汁酸的作用 |
| 1.1.3 胆汁酸受体的研究进展 |
| 1.1.4 胆汁酸与其受体相互作用的研究方法 |
| 1.1.5 胆汁酸抗炎免疫调节作用的相关信号通路研究进展 |
| 1.1.6 TCDCA的药理学研究进展 |
| 1.2 本研究的目的与意义 |
| 2 TCDCA对TGR5受体激活的效应 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验药品与试剂 |
| 2.1.2 试验细胞和质粒 |
| 2.1.3 试验仪器设备 |
| 2.2 试验内容与方法 |
| 2.2.1 TGR5基因敲低H1299细胞的构建和鉴定 |
| 2.2.2 TCDCA对H1299细胞毒性作用的测定 |
| 2.2.3 TCDCA对H1299细胞中cAMP的影响 |
| 2.2.4 TCDCA对TGR5-KD H1299细胞中PKA和CREB影响 |
| 2.3 数据处理与统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 TGR5受体在H1299细胞中的表达 |
| 2.4.2 TCDCA对H1299细胞毒性作用的测定结果 |
| 2.4.3 TCDCA对H1299细胞中cAMP的影响 |
| 2.4.4 TCDCA对PKA基因和蛋白表达量的影响 |
| 2.4.5 TCDCA对CREB基因和蛋白表达量的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 H1299细胞系中TGR5受体的敲除 |
| 2.5.2 TCDCA对TGR5受体的激活作用 |
| 2.6 小结 |
| 3 TCDCA对NR8383细胞中cAMP-PKA-CREB信号转导通路的影响 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 药品试剂 |
| 3.1.2 试验细胞系 |
| 3.1.3 试验设备和仪器 |
| 3.2 研究内容和方法 |
| 3.2.1 NR8383-TGR5细胞系的构建 |
| 3.2.2 NR8383细胞系和NR8383-TGR5细胞系的培养 |
| 3.2.3 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞的冻存 |
| 3.2.4 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞的复苏 |
| 3.2.5 TCDCA对AC处理后NR8383细胞中PKA的影响 |
| 3.2.6 TCDCA对PKA处理后NR8383细胞中CREB的影响 |
| 3.2.7 TCDCA对Raf-1处理后NR8383细胞中CREB的影响 |
| 3.2.8 TCDCA对PKA和Raf-1共同处理后NR8383细胞中CREB的影响 |
| 3.3 数据处理与统计学分析 |
| 3.4 试验结果 |
| 3.4.1 TCDCA对PKA基因和蛋白表达量的影响 |
| 3.4.2 TCDCA对CREB基因和蛋白表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 TCDCA对NR8383细胞中PKA的影响 |
| 3.5.2 TCDCA对NR8383细胞中CREB的影响 |
| 3.6 小结 |
| 4 TCDCA对NR8383细胞中抗炎免疫相关细胞因子的影响 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验药品与试剂 |
| 4.1.2 试验细胞系 |
| 4.1.3 试验仪器与设备 |
| 4.2 研究内容与方法 |
| 4.2.1 NR8383细胞系和NR8383- TGR5细胞系的培养 |
| 4.2.2 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞的冻存 |
| 4.2.3 NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞的复苏 |
| 4.2.4 TCDCA对PKA处理后NR8383细胞中对NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-12的影响 |
| 4.3 数据处理与统计学分析 |
| 4.4 试验结果 |
| 4.4.1 TCDCA对NF-κB基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.4.2 TCDCA对TNF-α基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.4.3 TCDCA对IL-1β基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.4.4 TCDCA对IL-6基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.4.5 TCDCA对IL-8基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.4.6 TCDCA对IL-12基因和蛋白表达量的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 全文讨论 |
| 全文结论 |
| 本课题创新之处 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 动物胆类中药材鉴定的研究现状 |
| 1.1 来源(原植物、动物和矿物)鉴定 |
| 1.2 性状鉴定 |
| 1.3 显微鉴定 |
| 1.4 理化鉴定 |
| 1.5 讨论 |
| 第二章 动物胆类中药材化学成分研究现状 |
| 2.1 动物胆中胆汁酸类成分 |
| 2.2 动物胆中氨基酸类成分 |
| 2.3 动物胆中胆色素类成分 |
| 2.4 动物胆中无机元素 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 动物胆药理作用研究现状 |
| 3.1 动物胆类中药材药理作用研究现状 |
| 3.2 动物胆中有效成分药理作用研究现状 |
| 3.3 讨论 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 貉胆的生药学鉴定研究 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果与分析 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 貉胆粉和熊胆粉中总胆酸含量比较 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 貉胆粉和熊胆粉中氨基酸成分比较 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 貉胆粉和熊胆粉中无机元素含量比较 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 貉胆粉和熊胆粉的抗炎抑菌作用比较 |
| 5.1 实验材料与仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 胆汁酸的研究概述 |
| 1.1.1 胆汁酸的结构与分类 |
| 1.1.2 胆汁酸生理功能 |
| 1.1.3 胆汁酸合成 |
| 1.1.4 胆汁酸应用 |
| 1.2 胆汁酸物性测定方法 |
| 1.2.1 熔点的测定 |
| 1.2.2 比旋光度的测定 |
| 1.2.3 薄层色谱法 |
| 1.2.4 红外光谱法 |
| 1.2.5 核磁共振氢谱 |
| 1.2.6 高效液相色谱 |
| 1.2.7 扫描电镜 |
| 1.3 鹅去氧胆酸研究概述 |
| 1.3.1 鹅去氧胆酸结构与性质 |
| 1.3.2 鹅去氧胆酸用途 |
| 1.3.3 鹅去氧胆酸毒副作用 |
| 1.3.4 鹅去氧胆酸应用 |
| 1.3.5 鹅去氧胆酸制备方法 |
| 1.4 熊去氧胆酸 |
| 1.4.1 中药熊胆 |
| 1.4.2 熊去氧胆酸简述 |
| 1.4.3 熊去氧胆酸的结构与性质 |
| 1.4.4 熊去氧胆酸作用机制 |
| 1.4.5 熊去氧胆酸制备方法 |
| 1.5 本论文研究目的和思路 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究思路 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 鹅去氧胆酸的提取方法 |
| 2.3.1 鸭胆膏中鹅去氧胆酸含量的测定 |
| 2.3.2 鸭胆膏中鹅去氧胆酸的提取 |
| 2.3.3 提取鹅去氧胆酸粗品的单因素实验 |
| 2.3.4 提取鹅去氧胆酸粗品的响应面实验 |
| 2.3.5 鹅去氧胆酸粗品纯化的单因素实验 |
| 2.3.6 鹅去氧胆酸粗品纯化的响应面实验 |
| 2.3.7 鹅去氧胆酸的检测 |
| 2.4 熊去氧胆酸的化学合成 |
| 2.4.1 熊去氧胆酸的化学合成路线图 |
| 2.4.2 7-酮石胆酸制备方法 |
| 2.4.3 熊去氧胆酸制备方法 |
| 2.4.4 熊去氧胆酸的检测 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 鸭胆膏中鹅去氧胆酸含量的测定结果 |
| 3.1.1 鹅去氧胆酸标准品与鸭胆膏的液相图 |
| 3.1.2 标准曲线测定结果 |
| 3.1.3 样品含量的测定 |
| 3.2 鸭胆膏中鹅去氧胆酸的提取优化实验结果 |
| 3.2.1 单因素实验 |
| 3.2.2 响应面法优化提取工艺结果 |
| 3.3 鹅去氧胆酸粗品纯化实验结果 |
| 3.3.1 单因素实验 |
| 3.3.2 响应面法对粗品纯化实验的优化结果 |
| 3.4 鹅去氧胆酸的检测结果 |
| 3.4.1 熔点 |
| 3.4.2 比旋光度 |
| 3.4.3 薄层色谱 |
| 3.4.4 红外光谱 |
| 3.4.5 核磁共振氢谱 |
| 3.4.6 高效液相色谱 |
| 3.4.7 扫描电镜 |
| 3.5 熊去氧胆酸合成结果 |
| 3.5.1 7-酮石胆酸合成与检测结果 |
| 3.5.2 熊去氧胆酸合成与检测结果 |
| 4 结论 |
| 4.1 全文总结 |
| 4.2 论文的创新点 |
| 4.3 论文的不足之处 |
| 5 展望 |
| 6 参考文献 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 8 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 胆汁酸的研究概况 |
| 1.1.1 胆汁酸的组成 |
| 1.1.2 胆汁酸与疾病 |
| 1.1.3 胆汁酸受体 |
| 1.1.4 胆汁酸与能量代谢 |
| 1.2 TCDCA的研究概况 |
| 1.2.1 TCDCA的理化性质 |
| 1.2.2 TCDCA的抗炎免疫调节作用 |
| 1.2.3 TCDCA其他生物学作用 |
| 1.3 FXR的研究概况 |
| 1.3.1 FXR与胆汁酸 |
| 1.3.2 FXR与生理病理过程 |
| 1.3.3 FXR与脂类代谢 |
| 1.4 脂类代谢的研究概况 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 TCDCA对大鼠体重等生理生化指标的影响 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试剂与仪器 |
| 2.2 数据统计与分析 |
| 2.3 研究内容和方法 |
| 2.3.1 TCDCA对大鼠体重及肝脏组织结构的影响 |
| 2.3.2 TCDCA对大鼠血清生理生化指标的影响 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 TCDCA对大鼠体重和增重的影响 |
| 2.4.2 TCDCA对大鼠脏器体重比值的影响 |
| 2.4.3 TCDCA对大鼠肝脏组织结构的影响 |
| 2.4.4 TCDCA对大鼠血脂水平的影响 |
| 2.4.5 TCDCA对大鼠血液常规指标的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 TCDCA对大鼠血中MDA和SOD、GSH-Px的影响 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 药品与试剂 |
| 3.1.2 主要试验仪器 |
| 3.2 数据统计与分析 |
| 3.3 实验内容与方法 |
| 3.3.1 TCDCA对大鼠血清中MDA含量的影响 |
| 3.3.2 TCDCA对大鼠血清中SOD活力的影响 |
| 3.3.3 TCDCA对大鼠血清中GSH-Px活力的影响 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 TCDCA对MDA含量的影响 |
| 3.4.2 TCDA对SOD和GSH-Px活力的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 TCDCA对大鼠肝脏组织中FXR表达的影响 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试剂与药品 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.2 数据统计与分析 |
| 4.3 研究内容与方法 |
| 4.3.2 TCDCA对FXR mRNA表达量的影响 |
| 4.3.3 TCDCA对FXR蛋白表达量的影响 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 FXR的表达位置 |
| 4.4.2 溶解曲线和qPCR扩增效率曲线 |
| 4.4.3 FXR mRNA表达量 |
| 4.4.4 样品蛋白浓度 |
| 4.4.5 FXR蛋白表达量 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5 全文结论 |
| 6 本课题主要创新之处 |
| 致 谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 胆汁酸的概述 |
| 1.1.1 胆汁酸的发展历史 |
| 1.1.2 胆汁及胆汁酸 |
| 1.1.3 胆汁酸的分类 |
| 1.1.4 胆汁酸的生物合成 |
| 1.1.5 胆汁酸生理功能 |
| 1.2 鸡胆汁 |
| 1.2.1 鸡胆汁概述 |
| 1.2.2 鸡胆汁的药理作用 |
| 1.3 鹅去氧胆酸 |
| 1.3.1 鹅去氧胆酸的理化性质 |
| 1.3.2 鹅去氧胆酸制取方法综述 |
| 1.3.3 鹅去氧胆酸药理作用 |
| 1.4 熊去氧胆酸 |
| 1.4.1 熊去氧胆酸的理化性质 |
| 1.4.2 熊去氧胆酸的生物合成途径 |
| 1.4.3 熊去氧胆酸的制备方法 |
| 1.4.4 熊去氧胆酸的临床应用 |
| 1.5 胆汁酸物性的测定方法 |
| 1.5.1 熔点的测定 |
| 1.5.2 比旋光度的测定([α]) |
| 1.5.3 薄层色谱法(TLC) |
| 1.5.4 红外光谱法(IR) |
| 1.5.5 核磁共振氢谱(~1HNMR) |
| 1.5.6 高效液相色谱(HPLC) |
| 1.6 立题意义与研究内容 |
| 1.6.1 立题意义 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验原材料与试剂 |
| 2.1.1 实验原材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 鸡胆汁中鹅去氧胆酸的提取 |
| 2.3.2 由鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 鸡胆汁中鹅去氧胆酸的提取 |
| 3.1.1 破胆与皂化 |
| 3.1.2 柱色谱法分析鸡胆膏成分 |
| 3.1.3 鸡胆膏中鹅去氧胆酸的提取 |
| 3.1.4 粗品鹅去氧胆酸的纯化 |
| 3.1.5 鹅去氧胆酸的结构表征 |
| 3.2 熊去氧胆酸的合成结果 |
| 3.2.1 不同条件下实验结果 |
| 3.2.2 熊去氧胆酸的结构表征 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 6 参考文献 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 8 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 胆汁酸的研究概述 |
| 1.1.1 胆汁酸的结构、分类 |
| 1.1.2 胆汁酸的合成 |
| 1.1.3 胆汁酸的生理功能 |
| 1.1.4 胆汁酸的应用 |
| 1.2 动物胆汁研究概况 |
| 1.2.1 畜类动物胆汁研究概况 |
| 1.2.2 禽类动物胆汁的研究概况 |
| 1.2.3 其他动物胆汁的研究概况 |
| 1.3 鹅去氧胆酸 |
| 1.3.1 鹅去氧胆酸的结构及性质 |
| 1.3.2 鹅去氧胆酸药理作用 |
| 1.3.3 鹅去氧胆酸制取方法综述 |
| 1.3.4 鹅去氧胆酸的衍生物 |
| 1.4 胆汁酸物性的测定方法 |
| 1.4.1 熔点的测定 |
| 1.4.2 比旋光度的测定 |
| 1.4.3 薄层色谱法 |
| 1.4.4 红外光谱法 |
| 1.4.5 核磁共振氢谱(~1HNMR) |
| 1.4.6 高效液相色谱(HPLC) |
| 1.4.7 光学显微镜 |
| 1.4.8 扫描电镜 |
| 1.5 立题意义与研究内容 |
| 1.5.1 立题意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验原材料与试剂 |
| 2.1.1 实验原材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 猪胆膏中鹅去氧胆酸含量测定 |
| 2.3.2 猪胆膏中鹅去氧胆酸的提取工艺 |
| 2.3.3 鹅去氧胆酸粗品的纯化 |
| 2.3.4 鹅去氧胆酸的检测 |
| 2.3.5 溶剂对鹅去氧胆酸结晶形态的影响 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 猪胆膏中鹅去氧胆酸含量测定结果 |
| 3.2 猪胆膏中鹅去氧胆酸提取优化实验结果 |
| 3.2.1 单因素实验 |
| 3.2.2 正交实验结果 |
| 3.3 鹅去氧胆酸粗品的纯化 |
| 3.3.1 结晶溶剂筛选结果 |
| 3.3.2 鹅去氧胆酸粗品的纯化结果 |
| 3.4 鹅去氧胆酸的检测 |
| 3.4.1 熔点的检测 |
| 3.4.2 比旋光度的测定 |
| 3.4.3 TLC检测 |
| 3.4.4 红外检测 |
| 3.4.5 核磁检测 |
| 3.4.6 HPLC检测 |
| 3.5 溶剂对鹅去氧胆酸结晶形态的影响 |
| 3.5.1 晶体熔点、纯度和外观形态 |
| 3.5.2 晶体红外谱图分析 |
| 3.5.3 XRD测试分析 |
| 3.5.4 DSC测试分析 |
| 3.5.5 晶体的微观形态 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 6 参考文献 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 8 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 牛磺鹅去氧胆酸的研究概述 |
| 1.2 G蛋白胆汁酸偶联受体 5（TGR5）研究概述 |
| 1.3 Ca~(2+)-Ca M信号途径研究概述 |
| 1.4 本课题研究的目的和意义 |
| 2. TGR5受体在大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中的表达及检测 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 药品与试剂 |
| 2.1.3 试验仪器 |
| 2.2 数据处理与统计学分析 |
| 2.3 试验内容与方法 |
| 2.3.1 大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）的培养 |
| 2.3.2 TGR5受体在大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中的瞬时转染 |
| 2.3.3 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5受体基因的表达 |
| 2.3.4 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5受体蛋白的表达 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 TGR5受体和β-actin基因实时荧光定量RT-PCR扩增曲线及熔解曲线分析 |
| 2.4.2 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5受体基因的表达 |
| 2.4.3 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TGR5受体蛋白的表达 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3. TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞TGR5受体介导的IP3含量的影响 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验细胞 |
| 3.1.2 药品与试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 数据处理与统计学分析 |
| 3.3 试验内容与方法 |
| 3.3.1 试验分组 |
| 3.3.2 细胞培养及处理 |
| 3.3.3 大鼠肺泡巨噬细胞TGR5受体介导的IP3含量的检测 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4. TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞TGR5受体介导的Ca~(2+)-Ca M途径的影响 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验细胞 |
| 4.1.2 药品与试剂 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.2 数据处理与统计学分析 |
| 4.3 试验内容与方法 |
| 4.3.1 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养 |
| 4.3.2 TGR5受体在大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中的瞬时转染 |
| 4.3.3 Ca~(2+)浓度的测定 |
| 4.3.4 TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中CaM基因表达的影响 |
| 4.3.5 TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中Ca M蛋白表达的影响 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞及转染pc MV-TGR5细胞Ca~(2+)浓度的影响 |
| 4.4.2 TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 Ca M基因表达的影响 |
| 4.4.3 TCDCA对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 Ca M蛋白表达的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5. 全文讨论 |
| 6. 全文结论 |
| 7. 本课题的主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 插图和附表清单 |
| 缩略词表 |
| 第一章 引言 |
| 1 胆汁酸的研究概况 |
| 1.1 胆汁酸的来源与分类 |
| 1.2 BAs的代谢 |
| 1.3 BAs的生理功能 |
| 1.4 与BAs作用相关的受体 |
| 2 TCDCA的研究概况 |
| 2.1 TCDCA的理化性质 |
| 2.2 TCDCA的药理学研究概况 |
| 2.2.1 TCDCA的药效学研究概况 |
| 2.2.2 TCDCA的药动学研究概况 |
| 2.2.3 TCDCA的作用机制 |
| 3 GR的研究概况 |
| 3.1 糖皮质激素的概况 |
| 3.1.1 GCs的来源和分泌调节 |
| 3.1.2 GCs的药理作用 |
| 3.2 GCs的作用机制 |
| 3.2.1 GCs的抗炎作用机制 |
| 3.2.2 GCs的免疫抑制作用机制 |
| 4 分子对接的研究概况 |
| 4.1 分子对接的基本原理 |
| 4.2 分子对接方法的分类 |
| 4.3 分子对接软件 |
| 5 RA的研究概况 |
| 5.1 RA发病原因 |
| 5.2 成纤维样滑膜细胞在RA中的作用 |
| 5.3 免疫细胞在RA中的作用 |
| 5.4 ICAM-1在RA中的作用 |
| 5.5 RA的治疗 |
| 5.5.1 西医对RA的治疗 |
| 5.5.2 中医对RA的治疗 |
| 5.5.3 其他治疗方法 |
| 5.6 RA动物模型 |
| 6 细胞凋亡的研究概况 |
| 6.1 细胞凋亡发生的过程 |
| 6.2 细胞凋亡的分子机制 |
| 6.2.1 细胞凋亡相关基因 |
| 6.2.2 Fas与FasL在凋亡中的作用 |
| 6.2.3 Caspases依赖性的细胞凋亡 |
| 6.2.4 非Caspases依赖性的细胞凋亡 |
| 6.2.5 内质网介导的细胞凋亡信号转导途径 |
| 6.3 常用细胞凋亡的检测方法 |
| 6.3.1 细胞和亚细胞水平的形态学检测 |
| 6.3.2 DNA Ladder |
| 6.3.3 TUNEL |
| 6.3.4 Annexin V/PI |
| 6.3.5 检测Caspases活性 |
| 6.4 细胞凋亡与RA |
| 7 本研究的目的及意义 |
| 第二章 TCDCA与GR相互作用的研究 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 质粒与细胞 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 数据处理和统计分析 |
| 3 试验内容和方法 |
| 3.1 TCDCA与GR分子对接研究 |
| 3.1.1 准备受体文件 |
| 3.1.2 准备配体文件 |
| 3.1.3 准备Grid文件 |
| 3.1.4 分子对接 |
| 3.2 TCDCA对GR移位的观察 |
| 3.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建 |
| 3.2.2 细胞转染 |
| 3.3 TCDCA对GR活化的影响 |
| 4 结果 |
| 4.1 TCDCA与GR的分子对接 |
| 4.2 TCDCA对GR核移位的影响 |
| 4.2.1 重组真核表达质粒pEGFP-C1-GR的构建 |
| 4.2.2 TCDCA对GR核移位的观察 |
| 4.3 TCDCA对GR活化的影响 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第三章 TCDCA对AP-1及ICAM-1表达与活性的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 数据处理和统计分析 |
| 3 试验内容和方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.1.1 AA大鼠模型的建立 |
| 3.1.2 滑膜组织的分离与采集 |
| 3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养 |
| 3.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1蛋白表达的影响 |
| 3.2.1 分组与给药 |
| 3.2.2 细胞蛋白提取 |
| 3.2.3 蛋白定量 |
| 3.2.4 Western blot |
| 3.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中AP-1 DNA结合活性的影响 |
| 3.3.1 分组与给药 |
| 3.3.2 细胞核蛋白提取 |
| 3.3.3 蛋白定量 |
| 3.3.4 AP-1活性检测 |
| 3.4 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1表达的影响 |
| 3.4.1 分组与给药 |
| 3.4.2 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS中ICAM-1 mRNA表达的影响 |
| 3.4.3 TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠FLS ICAM-1蛋白表达的影响 |
| 4 结果 |
| 4.1 AA大鼠模型的建立 |
| 4.2 AA大鼠FLS细胞的培养 |
| 4.3 蛋白浓度的测定 |
| 4.4 TCDCA对AP-1表达的影响 |
| 4.5 TCDCA对AP-1 DNA结合活性的影响 |
| 4.6 TCDCA对ICAM-1表达的影响 |
| 4.6.1 TCDCA对ICAM-1基因表达的影响 |
| 4.6.2 TCDCA对ICAM-1蛋白表达的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 AA大鼠模型的建立及FLS细胞的分离培养 |
| 5.2 TCDCA对FLS细胞中AP-1的影响 |
| 5.3 TCDCA对FLS细胞中ICAM-1的影响 |
| 6 小结 |
| 第四章 TCDCA对AA大鼠FLS细胞凋亡的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 数据处理和统计分析 |
| 3 试验内容和方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.1.1 AA大鼠模型的建立 |
| 3.1.2 滑膜组织的分离、采集 |
| 3.1.3 成纤维样滑膜细胞的分离培养 |
| 3.2 TCDCA对FLS细胞凋亡的影响 |
| 3.2.1 分组与给药 |
| 3.2.2 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响 |
| 3.2.3 TCDCA对caspase-3、caspase-8 mRNA表达量的影响 |
| 3.2.4 TCDCA对Caspase-3、Caspase-8活性的影响 |
| 4 结果 |
| 4.1 TCDCA对FLS细胞凋亡率的影响 |
| 4.2 TCDCA对FLS细胞中caspase-3、caspase-8基因表达量的影响 |
| 4.2.1 总RNA的电泳检测 |
| 4.2.2 β-actin、caspase-3、caspase-8扩增效率曲线情况 |
| 4.2.3 β-actin、caspase-3、caspase-8基因qPCR扩增曲线和溶解曲线 |
| 4.2.4 PCR产物电泳检测及测序结果 |
| 4.2.5 序列测定 |
| 4.3 TCDCA对FLS细胞中Caspase-3、Caspase-8活性的影响 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 全文讨论 |
| 全文结论 |
| 本课题主要创新之处 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 胆汁酸概况 |
| 1.1.1 胆汁酸来源及分类 |
| 1.1.2 胆汁酸生理作用 |
| 1.1.3 胆汁酸受体研究进展 |
| 1.1.4 TGR5受体研究概况 |
| 1.2 TCDCA研究概况 |
| 1.2.1 TCDCA的理化性质 |
| 1.2.2 TCDCA作用的研究概况 |
| 1.3 真核表达系统和 293T细胞 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞、组织 |
| 2.2 实验试剂、药品 |
| 2.3 试验仪器 |
| 3 数据处理和统计学分析 |
| 4 试验方法 |
| 4.1 TGR5真核表达载体的构建 |
| 4.1.1 引物设计与合成 |
| 4.1.2 PCMV-EGFP-TGR5真核表达载体构建 |
| 4.1.3 pCMV-TGR5载体构建构建 |
| 4.2 TGR5受体在细胞中的表达及其测定 |
| 4.2.1 293T细胞的培养 |
| 4.2.2 TGR5在 293T细胞中的瞬时转染 |
| 4.2.3 TGR5在 293T细胞中转染效果的测定 |
| 4.2.4 TGR5受体表达定位 |
| 4.2.5 293T细胞中TGR5基因mRNA表达量测定 |
| 4.2.6 293T细胞中TGR5蛋白表达 |
| 4.3 TCDCA与TGR5的结合活性的研究 |
| 4.3.1 TCDCA的量效关系分析 |
| 4.3.2 TGR5受体内陷 |
| 4.3.3 TCDCA对细胞内cAMP含量的影响 |
| 4.3.4 TCDCA对细胞内荧光素酶报告基因含量的影响 |
| 5 结果与讨论 |
| 5.1 含TGR5目的片段真核表达载体的构建 |
| 5.1.1 人TGR5基因扩增 |
| 5.1.2 重组质粒pMD19-T-TGR5鉴定 |
| 5.1.3 真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5的鉴定 |
| 5.1.4 pCMV-TGR5质粒鉴定 |
| 5.2 TGR5受体在细胞中的表达及其测定 |
| 5.2.1 TGR5在 293T细胞中转染效果的测定 |
| 5.2.2 TGR5受体定位 |
| 5.2.3 293T细胞细胞中TGR5基因mRNA表达量测定 |
| 5.2.4 293T细胞中TGR5蛋白表达 |
| 5.3 TCDCA与TGR5的结合活性的研究 |
| 5.3.1 TCDCA的量效关系分析 |
| 5.3.2 293T细胞内陷的测定 |
| 5.3.3 细胞内cAMP含量测定 |
| 5.3.4 荧光素酶报告基因含量测定 |
| 6 全文讨论 |
| 6.1 真核表达载体构建 |
| 6.2 TCDCA与TGR5相互作用 |
| 6.2.1 受体内陷的研究 |
| 6.2.2 TCDCA作用于TGR5后的量效关系分析 |
| 6.2.3 TCDCA与TGR5结合后的继发反应 |
| 6.3 TGR5介导的信号通路研究 |
| 7 全文结论 |
| 8 课题创新之处 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 糖皮质激素类药物的研究进展 |
| 1.1.1 糖皮质激素类药物的概况 |
| 1.1.2 糖皮质激素类药物临床作用的研究进展 |
| 1.1.3 糖皮质激素类药物不良反应的研究进展 |
| 1.1.4 糖皮质激素对 HPA 轴及脑不良反应的概况 |
| 1.1.5 对抗糖皮质激素不良反应的中药研究进展 |
| 1.2 胆汁酸及牛磺鹅去氧胆酸研究进展 |
| 1.2.1 胆汁的研究概况 |
| 1.2.2 胆汁酸的研究概况 |
| 1.2.3 TCDCA 的药理学研究进展 |
| 1.3 小鼠大脑横切面结构分布 |
| 1.4 课题研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验试剂 |
| 2.1.3 仪器设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验分组及处理 |
| 2.2.2 病理组织学检查方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 TCDCA 对抗地塞米松小鼠大脑皮层不良反应的病理组织学观察 |
| 3.2 TCDCA 对抗地塞米松对小鼠胼胝体不良反应的病理组织学观察 |
| 3.3 TCDCA 对抗地塞米松小鼠海马齿状回细胞不良反应的病理组织学观察 |
| 3.4 TCDCA 对抗地塞米松小鼠第三脑室脉络丛不良反应的病理组织学观察 |
| 3.5 TCDCA 对抗地塞米松小鼠丘脑不良反应的病理组织学观察 |
| 3.6 TCDCA 对抗地塞米松小鼠下丘脑不良反应的病理组织学观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于 TCDCA 对 DEX 诱导小鼠脑组织损伤影响的分析 |
| 4.2 关于 TCDCA 对脑组织发挥作用的可能机制探讨 |
| 4.3 关于 TCDCA 研究展望 |
| 5 结论 |
| 6 创新之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间论文发表情况 |
