程实[1]（2021）在《逍遥片真菌毒素和吡咯里西啶类生物碱的安全性评价研究》文中提出目的:逍遥片是根据经典名方逍遥丸加减化裁而来,功效为疏肝健脾,养血调经,用于肝郁脾虚所致的郁闷不舒,月经不调等症状,具有抗抑郁作用。逍遥片由炙甘草、柴胡、炒白术、当归、白芍五种药材组成,药材经过提取后制成提取物1和提取物2后,加入辅料制成逍遥片制剂。同时,逍遥片作为天士力医药集团股份有限公司申报欧洲药品管理局的项目,需除保证其质量安全之外,还需满足欧洲药典（European Pharmacopoeia,EP）的标准规定。本课题建立逍遥片的安全质量控制的检测标准,主要包括真菌毒素中的赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及32种吡咯里西啶类生物碱的检测,可以为中药制剂建立质量控制提供参考和方法,也为中医药走出国门夯实基础,为中医药国际化作出贡献。方法:1.样品用80%甲醇溶液超声提取,离心,免疫亲和柱富集,UPLC-FLD分析检测,Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离,流动相A为0.5%冰醋酸溶液（p H=2.97）,流动相B为乙腈,梯度洗脱。激发波长310 nm,发射波长465 nm,柱温30℃,体积流量0.4 m L/min,进样体积2μL。2.样品用70%甲醇溶液超声提取,离心,免疫亲和柱富集,旋蒸浓缩,利用UPLC-FLD对黄曲霉毒素B1B2G1G2分析定量,建立检测方法。流动相A为超纯水,流动相B为甲醇-乙腈（1:1）,梯度洗脱。激发波长365 nm,发射波长456 nm,柱温30℃,体积流量0.4 m L/min,进样体积2μL。3.样品用1%甲酸溶液超声提取,离心,PCX固相萃取柱纯化,UPLC-MS/MS分析检测,Thermo Hypersil Gold C18色谱柱分离,流动相A为0.05%甲酸溶液（含2.5 m M/L甲酸铵）,流动相B为甲醇-0.05%甲酸溶液（含2.5 m M/L甲酸铵）,柱温40℃,流速0.4 m L/min,进样体积2μL,多反应监测模式测定,外标法定量,同时分离32种结构相近的吡咯里西啶类生物碱。结果:1.OTA在1.5-37.5 ng/m L显示良好的线性关系,相关系数r=0.999。OTA加标回收率为92.4%-119.9%,RSD为2.5%-9.1%。样品在48 h内稳定。共检测42批次样品,33批呈阳性,柴胡和炙甘草呈阳性。在此结果基础上于市场购买18批次柴胡,15批呈阳性,2批超过EP 20μg/kg的限度值,最高水平达101.97μg/kg。2.提取物1、提取物2的黄曲霉毒素B1B2G1G2线性关系良好,相关系数r=0.999,4种AFT加样回收率在90.9%-128.4%之间,重复性RSD%在2.6%-9.9%之间,样品在48h内稳定,方法学项目均满足要求。共检测24批次样品,无黄曲霉毒素检出。3.建立的32种PAs的检测方法,线性关系良好,相关系数r均大于0.994;在10μg/kg-2000μg/kg不同水平下的回收率在73.3%-118.5%之间,RSD%为2.1%-15.4%。逍遥片LOD在0.13μg/kg-21.39μg/kg,所有基质的LOQ在7.61μg/kg-114.40μg/kg。样品在48小时内稳定。均得到良好的重复性和准确度,回收率在可接受范围内,重复性良好。共24批次,均未有32种PAs的检出。结论:1.本研究建立了一种IAC-UPLC-FLD方法,可用于中药以及其提取物的真菌毒素检测,建立的方法快速、结果准确,符合样品中痕量检测的要求,补充了中间提取物真菌毒素检测的空白。前处理中使用表面活性剂减少基质的干扰;免疫亲和柱特殊的抗体填料与真菌毒素特异性结合,降低了假阳性的结果的出现;UPLC-FLD检测避免了柱后衍生,缩短了检测时间。此方法需要进一步试验是否满足更广泛的中药及相关提取物的检测。2.本文通过1%甲酸溶液提取,PCX固相萃取柱净化,LC-MS/MS检测,外标法定量,同时分析测定药材、提取物和制剂中的32种PAs。目前检测PAs的方法所测的种类较少,通常是7、8种生物碱的检测,且多集中在蜂蜜、中药、植物上,中药制剂的检测未见报道。本文建立同时分离定量32种PAs,适用于基质复杂的中药制剂。该方法灵敏度高,操作简单,为检测基质复杂的样品提供了参考,对保证药品质量安全有着重要意义。3.基于逍遥片的药材-提取物-制剂的生产过程,从全产业链的角度,建立逍遥片的安全性质量控制策略。根据相关法规,欧洲药典0277甘草项下规定OTA≤20μg/kg。EP规定AFB1≤2μg/kg,AFT≤4μg/kg。荷兰药监局要求控制药物PAs及其氮氧化物每日最大剂量0.35μg/day/50 kg。逍遥片的安全性控制策略中,OTA在药材和提取物中控制,其中柴胡和炙甘草、提取物1、提取物2严格控制标准在2μg/kg以内,若超过,每份样品≤20μg/kg且平均值≤10μg/kg才允许使用。黄曲霉毒素B1B2G1G1,在提取物中控制,需满足AFB1≤2μg/kg,AFT≤4μg/kg。吡咯里西啶类生物碱,在逍遥片制剂中控制,共32种PAs需控制在350μg/kg以内。
李春玲[2]（2021）在《淡豆豉炮制中黄曲霉毒素B1的产毒菌和拮抗菌》文中研究表明目的通过检测淡豆豉自然炮制中不同时间点黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFT）含量、筛选鉴定和定量产AFT菌（简称产毒菌）并测定其产毒能力,考察黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）拮抗菌的拮抗能力,初步分析产毒菌和拮抗菌在AFB1消长中的作用,为探讨淡豆豉炮制中黄曲霉毒素消长机制奠定基础,并为淡豆豉或其它发酵中药和食品中黄曲霉毒素的防控措施提供科学依据。方法一、淡豆豉自然炮制中AFT含量测定1、淡豆豉自然发酵炮制:本实验室前期按2020年版《中华人民共和国药典》简称《中国药典》已建立规范的淡豆豉炮制工艺,本研究按此工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉不同炮制时间点的样本和成品淡豆豉。2、建立超高效液相色谱串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,UPLC–MS/MS）,测定淡豆豉不同炮制时间点样本中AFT的含量。二、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选、鉴定、定量和产毒能力1、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选和鉴定（1）产毒菌的筛选和菌落计数:根据AFT在紫外光照射下可发生蓝紫色或绿色荧光的原理,筛选分离出产生蓝紫色或绿色荧光的微生物并进行菌落计数。将产荧光菌初步定义为产毒菌。（2）产毒菌的初步鉴定:通过肉眼观察菌落形态和显微镜观察镜下形态结构初步鉴定产毒菌。（3）产毒菌的分子生物学鉴定:提取各产毒菌的DNA,应用18Sr DNA序列进行PCR扩增、对扩增产物进行基因测序分析,查找模板基因序列,构建系统发育树,对产毒菌进行鉴定。2、产毒菌的产毒能力考察应用UPLC–MS/MS法测定产毒菌发酵液中AFT含量,比较它们产AFT的能力。三、考察淡豆豉炮制中AFB1拮抗菌的拮抗能力（本实验室前期从淡豆豉炮制中分离鉴定出已报道能抑制AFT产生的5株有益菌（简称拮抗菌）如枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,JX2）、鲑色锁掷酵母菌（Sporidiobolus salmonicolor,EJ1）、黑曲霉菌（Aspergillus niger,FC2）、屎肠球菌（Enterococcus faecium,BR5）、鸟肠球菌（Enterococcus avium,9R2）,分别考察这5株菌抑制产毒菌生长和降解AFB1的的拮抗能力）1、5株待测菌对产AFT黄曲霉标准菌生长繁殖的影响平板对峙法检测待测菌对产AFT黄曲霉生长的影响:取待测菌的种子液分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）等距的四端,在平皿中央接种黄曲霉标准株孢子悬浮液,以只接种黄曲霉标准株孢子悬浮液的平皿作对照,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。2、5株待测菌发酵上清液对产AFT黄曲霉标准株生长的影响取各待测菌的发酵上清液分别PDA培养基混匀倒入平皿中,以未加发酵上清液的PDA培养皿作为对照组,待凝固后于平皿中央接种等量的产AFT黄曲霉标准株孢子悬浮液,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。3、5株待测菌对AFB1的降解能力在培养液中分别接种5株待测菌与相同浓度AFB1标准品进行摇床培养（以只加相同浓度AFB1标准品、未接种待测菌的培养液作对照）,摇床培养一定时间后,离心,取上清液,用UPLC–MS/MS检测上清液中的AFB1含量。AFB1降解率（%）=（对照组AFB1含量-试验组AFB1含量）/对照组AFB1含量×100%。结果一、淡豆豉炮制和取样淡豆豉炮制过程中每3天取样一次,“黄衣上遍”阶段分别为记为发酵0天、发酵3天、发酵6天,“再闷”阶段分别记为再闷3天、再闷6天、再闷9天、再闷12天、再闷15天和蒸后成品,编号分别为F0、F3、F6、Z3、Z6、Z9、Z12、Z15和Z蒸。二、淡豆豉自然炮制中不同时间点4种AFT（黄曲霉毒素B1,AFB1;黄曲霉毒素B2,AFB2;黄曲霉毒素G1,AFG1;黄曲霉毒素G2,AFG2）含量测定结果使用UPLC–MS/MS法测定4种AFT含量,方法学考察良好,表明此方法适合于淡豆豉中的AFT含量测定;测定结果表明AFT的含量在淡豆豉自然炮制过程中呈动态变化。1、建立了淡豆豉中4种AFT含量测定的UPLC–MS/MS方法样品处理和免疫吸附前处理请加上去使用超声提取法提取样品中的黄曲霉毒素以及使用免疫亲和柱对样品进行净化。（1）线性关系考察:以各浓度（ng/m L）标准品为横坐标x,对应的峰面积为纵坐标y,计算得出AFB1的标准曲线方程为y=402087x+7996.2,r=0.9998;AFB2的标准曲线方程为y=58257x+1241.8,r=0.9997;AFG1的标准曲线方程为y=331396x-6075.6,r=0.9999;AFG2的标准曲线方程为y=29342x+92.996,r=0.9998。表明标准品浓度在0.05–20 ng/m L之间线性关系良好。（2）重复性考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）（n=6）分别为0.40%,0.43%,0.93%,0.49%,表明重复性良好（3）精密度考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）（n=6）分别为0.67%,2.01%,0.77%,2.59%,说明精密度良好。（4）加样回收率考察:AFB1、AFG1加入量为5 ng/g,AFB2、AFG2加入量为1.25 ng/g时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为97.5%,99.5%,98.2%,99.2%,RSD分别为2.32%,2.70%,0.5%,2.64%（n=6）;AFB1、AFG1加入量为1.16 ng/g,AFB2、AFG2加入量为0.29 ng/g时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为102%,94%,92%,90.6%,RSD分别为2.24%,1.33%,1.83%,1.56%（n=6）,表明回收率良好。2、4种AFT含量测定:淡豆豉自然炮制过程中各样本AFT含量呈先上升后下降的趋势:从发酵第3天开始逐渐上升,到再闷第6天达到最高值,为6.95μg/kg,之后开始下降,在再闷第9天下降至1.2μg/kg,再闷第12天后各样本的AFT含量均为0。三、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选、鉴定、定量和产AFT能力筛选出15株产毒菌,经形态学和分子生物学鉴定分别为黄曲霉和溜曲霉;对产毒菌进行菌落计数,结果显示淡豆豉炮制过程中产AFT菌数量呈动态变化,在发酵第6天达到最大值;淡豆豉炮制过程中各产毒菌的产毒能力较弱（小于5ng/m L）,远低于黄曲霉标准株的产毒能力（654.90 ng/m L）,并且15株产毒菌的产AFT能力各不相同。1、产毒菌的筛选与菌落计数:根据AFT在紫外光照射下可发生蓝紫色或绿色荧光的原理,筛选分离出产生蓝紫色的微生物共15株,分别为黄曲霉和溜曲霉。产毒菌菌落数呈先上升后下降的趋势,从发酵第3天开始逐渐上升,到发酵第6天菌落数最多,为1x106.30CFU/g,之后开始减少,从再闷第9天开始没有检测到产荧光反应微生物。2、产毒菌的鉴定（1）传统微生物学方法鉴定:对筛选到产毒菌进行平板培养,肉眼和显微镜观察其形态结构,初步鉴定为黄曲霉与溜曲霉。（2）分子生物学方法鉴定:对产毒菌进行鉴定,鉴定结果:F6–1d、F6–2d、F6–3d、F6–4d、F6–5d、F6–6d（为发酵第6天样本中筛选到的产生荧光反应的菌株）、F3d（发酵第3天筛选到的产生荧光反应菌株）、Z6d（为再闷第6天筛选到的产荧光反应菌株）、Z3–5d、Z3–2d为黄曲霉（Aspergillus flavus）,Z3–1d、Z3–3d、Z3–4d、Z3–6d、Z3–7d（为再闷第3天筛选到的产荧光反应菌株）为溜曲霉（Aspergillus tamarii）。3、各产毒菌株的产毒能力（1）建立了发酵液中AFT含量测定的UPLC–MS/MS检测方法线性关系考察:以各浓度（ng/m L）标准品为横坐标x,对应的峰面积为纵坐标y,AFB1的标准曲线方程为y=402087x+7996.2,r=0.9998;AFB2的标准曲线方程为y=58257x+1241.8,r=0.9997;AFG1的标准曲线方程为y=331396x-6075.6,r=0.9999;AFG2的标准曲线方程为y=29342x+92.996,r=0.9998。重复性考察:AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的相对标准偏差（Relative standard deviation,RSD）分别为2.08%、3.50%、1.18%、1.66%（n=6）,表明重复性良好。加样回收率考察:AFB1、AFG1加入量为5 ng/m L,AFB2、AFG2加入量为1.5 ng/m L时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为94.53%、92.53%、94.87%,91.47%,RSD分别为1.01%,1.80%,1.60%,2.20%（n=3）;AFB1、AFG1加入量为2 ng/m L,AFB2、AFG2加入量为0.6 ng/m L时,AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为92.83%、93.33%、92.83%、92.0%,RSD分别为1.12%、2.47%、1.89%、2.17%（n=3）,表明回收率良好。（2）产毒菌发酵液中AFT含量测定采用UPLC–MS/MS法检测产荧光现象微生物在发酵液中AFT的含量,结果显示,15株产荧光反应的微生物中有5株不产生AFT,10株产生AFT,AFT含量在2.0–4.10 ng/m L之间。四、淡豆豉炮制中AFB1拮抗菌的拮抗能力本实验室前期从淡豆豉炮制中分离鉴定出文献已报道能抑制AFT产生的5株菌（简称拮抗菌）如枯草芽孢杆菌（JX2）、鲑色锁掷酵母菌（EJ1）、黑曲霉菌（JC2）、屎肠球菌（BR5）、鸟肠球菌（9R2）,考察这5株AFB1拮抗菌的拮抗能力。结果显示这5株菌对产AFT黄曲霉标准株生长均有一定的抑制作用,其中鲑色锁掷酵母菌的抑制作用最强;鲑色锁掷酵母菌对AFB1的降解作用最强。1、5株待测菌种子液对产毒黄曲霉标准株生长的影响:结果显示5株菌种子培养液对产毒黄曲霉生长均有一定的抑制作用,其中鲑色锁掷酵母菌对黄曲霉生长的抑制作用最强,抑制率达64.29%,屎肠球菌、鸟肠球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉对黄曲霉生长的抑制率均在30%左右。2、5株待测菌发酵上清液对产毒黄曲霉菌生长的影响:结果显示,5株待测菌发酵上清液对产毒黄曲霉生长均有一定的抑制作用,其中屎肠球菌的抑制作用最强,抑制率为29.63%。3、5株待测菌对AFB1的降解作用:结果显示5株菌发酵菌液均对AFB1有一定的降解作用,其中鲑色锁掷酵母菌对AFB1的降解作用最强,达43.65%,黑曲霉菌的降解作用最弱。结论1、建立了UPLC–MS/MS法测定淡豆豉中AFT含量,该方法简单,快速,灵敏度高。淡豆豉炮制过程中AFT含量呈动态变化,进一步证实了淡豆豉“再闷”的重要性和“再闷”时间的合理性,2、淡豆豉炮制过程中存在产AFT的曲霉菌,为黄曲霉和溜曲霉,黄曲霉占大多数。产AFT菌呈动态变化,呈现先升高后下降的趋势。3、淡豆豉炮制过程中存在抑制产AFT的产毒菌生长和降解AFB1的拮抗菌。4、淡豆豉炮制过程中产AFT菌和拮抗菌相互作用,交替更迭,导致淡豆豉炮制过程中AFT呈动态变化,炮制至再闷后期和淡豆豉成品不含AFT,为揭示淡豆豉炮制中黄曲霉毒素消长机制奠定基础,并为淡豆豉黄曲霉毒素的防控措施提供科学依据。
任显凤[3]（2020）在《粮油黄曲霉与毒素同步检测及木霉阻控技术研究》文中指出黄曲霉毒素（Aflatoxin）是目前发现毒性最强的一类真菌毒素,能引起肝脏的急性或慢性损害,对人和动物具有严重的致癌、致畸、致突变作用。黄曲霉毒素主要由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（A.parasiticus）代谢产生,在世界范围内广泛污染花生、玉米、小麦、大米、棉花、坚果等农产品,其中以花生和玉米受污染最为严重。在我国黄曲霉污染广泛,而寄生曲霉污染罕见。农产品黄曲霉及其毒素污染不仅会对人、畜的健康构成威胁,还会大大降低农产品的营养价值和经济价值,严重损害经济效益,是农产品质量与安全的重大风险隐患。本文研究建立了粮油类农产品黄曲霉及其毒素快速同步检测和基于木霉菌的高效生物防控技术,对及早发现污染并科学监管,保障粮油质量安全具有重要意义。检测技术是及时发现污染、采取有效防控的“眼睛”,目前已有许多检测农产品中黄曲霉毒素的技术方法,如高效液相色谱分析、酶联免疫吸附分析、免疫传感器分析、免疫层析等,但是多组分同步检测尤其是小分子污染物与食源性微生物同步检测技术相对十分缺乏。生物防控具有环境友好、高效、安全等特点,近年来在食物病原菌及毒素污染防控领域备受青睐。但是,现阶段粮油产品黄曲霉及其毒素污染的生物防控领域仍面临诸多挑战,如缺乏高效的生防菌剂、生防作用机理不明、缺失实践应用等。针对以上问题,本论文作了如下研究,具体研究内容和结论如下:1.建立了RT-PCR同步检测粮油产品中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的技术方法。依据免疫反应中纳米抗体V2-5和V8#分别与黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮竞争结合单克隆抗体1C11和2D3的原理;首先,依据编码纳米抗体的特异DNA序列设计引物,实现噬菌体中特异DNA序列扩增;然后,将免疫反应和PCR扩增反应相结合,建立了RT-PCR同步检测黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的技术。研究结果显示,该方法检测黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的检测限分别为0.03 ng/mL和0.09 ng/mL,加标回收率分别为80–118%和76.7–111%。最后,该检测技术被成功应用到玉米、大米、小麦、饲料中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的同步检测,且样品中毒素的检测结果与高效液相色谱法的检测结果一致。研究结果表明,通过纳米抗体噬菌体建立的两种毒素RT-PCR同步检测技术可为粮油产品污染物同步检测分析提供新的途径。2.创建了RT-PCR同步检测玉米中黄曲霉毒素及其产毒菌的技术方法。黄曲霉毒素属于剧毒、致癌的小分子物质,主要由曲霉属、黄绿组的黄曲霉和寄生曲霉代谢产生。噬菌体V2-5展示的纳米抗体可特异性识别黄曲霉毒素的单克隆抗体1C11,黄曲霉毒素合成关键基因nor-1（aflD）可作为黄曲霉、寄生曲霉的生物标志物,基于RT-PCR中Taqman检测原理并根据噬菌体V2-5和nor-1特异基因序列设计两对特异引物,最终实现黄曲霉毒素及其产毒菌的RT-PCR同步检测。结果显示该方法检测黄曲霉毒素及黄曲霉菌的检测限分别为0.02 ng/mL和8×102孢子/g。进一步用该检测方法检测了25份自然污染的玉米中黄曲霉素及其产毒菌的含量,检测结果与高效液相色谱法和平板计数法的检测结果一致。研究结果表明,以黄曲霉毒素与黄曲霉为例创建的RT-PCR同步检测技术,首次突破了粮油产品中小分子污染物与食源性微生物一直难以同步测定的瓶颈难题。3.筛选了可高效抑制黄曲霉生长和产毒的木霉菌株T60和T44,并初步探明其抑制机理。通过双重培养实验和木霉菌代谢产物的抑菌活性研究,评估了20株不同来源的木霉菌对黄曲霉的拮抗活性及其代谢产物对黄曲霉生长和产毒的抑制效果。首先,双重培养实验的研究结果发现深绿木霉（T.atroviride）T32和T50、哈茨木霉（T.harzianum）ITEM908和T61、多孢木霉（T.polysporum）T60和绿色木霉（T.viride）T62生长迅速,可通过对营养物质的竞争、生存空间的竞争和重寄生作用,完全抑制黄曲霉菌生长。其次,通过木霉菌代谢产物抑菌活性研究发现:CDA（Czapex Dox Agar）培养基培养木霉菌3–5天后,有15株木霉菌分泌到CDA中的代谢产物显着抑制黄曲霉生长,T60分泌的代谢产物可完全抑制黄曲霉生长,抑制率为100%;用花生培养基培养木霉菌株3–5天后,有14株木霉菌分泌到花生培养基中的代谢产物显着抑制黄曲霉产生黄曲霉毒素B1（AFB1）,哈茨木霉（T.harzianum）T44分泌的代谢产物抑制黄曲霉产毒的抑制率高达85±6%。研究结果表明:木霉菌可通过其拮抗活性和其代谢产物的抑菌活性抑制黄曲霉;其中部分木霉菌的代谢产物对黄曲霉具有很强的抑制作用,作为候选生防菌剂具有很高的应用价值。4.筛选出可高效降解黄曲霉毒素的里氏木霉（T.reesei）CGMCC3.5218,初步探明木霉菌降解黄曲霉毒素的作用机制并成功应用到粮油产品中黄曲霉毒素的降解。首先,实验比较了65株木霉菌对液体培养基中AFB1（50 ppb）的降解效果,筛选的CGMCC3.5218在含AFB1的液体培养基生长5天后,对浓度为50 ppb、500 ppb、10 ppm、15 ppm的AFB1的降解率分别为100%、95%、88%和66%;其在含浓度为500 ppb的AFB2、AFG1、AFG2的液体培养基生长7天后,对三种毒素的降解率分别为86%、88%和87%。进一步研究发现:CGMCC3.5218对AFB1的降解主要是细胞外代谢产物的酶促降解作用且活性酶为耐高温的非金属结合蛋白。最后,对CGMCC3.5218降解AFB1的培养条件进行优化,结果显示最适培养温度为28–37℃,培养基最适pH为4.5–8.3,多种含碳氮的培养基均适合做培养基质;在优化的培养条件下,CGMCC3.5218可高效降解花生粕、玉米和饲料中的黄曲霉毒素,可将自然污染的玉米中浓度为1657μg/kg的黄曲霉毒素降至安全水平（20μg/kg）。因此,里氏木霉CGMCC3.5218作为有效降解粮油产品中黄曲霉毒素的生物菌剂具有很高的应用价值。综上,本研究为粮油产品黄曲霉及其毒素污染的及时发现和有效防控提供了新方法,对抑制粮油产品黄曲霉及其毒素污染和保障消费安全具有重要理论意义与实用价值。
张博[4]（2019）在《人参再造丸的质量标准研究》文中研究说明人参再造丸是治疗中风的常用中成药,是由56味药组成的中药复方制剂。人参再造丸现行的质量标准比较简单,难以全面控制该制剂的质量。本研究的目的是提高人参再造丸的质量标准,保证该制剂的安全、有效。本文采用显微鉴定的方法对人参再造丸中桑寄生、大黄、青皮、豆蔻、麻黄、甘草、广藿香、肉桂、人参等9味药材进行了鉴别,并对人参再造丸中的大黄、制何首乌、醋香附药材增加了薄层鉴别。建立了多波长高效液相色谱法测定人参再造丸中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、葛根素、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、柚皮苷、橙皮苷、哈巴俄苷等11种指标性成分的含量。建立了气相色谱法测定人参再造丸中龙脑、桂皮醛、丁香酚和麝香酮含量的方法。安全性评价方面:建立了人参再造丸中铅、镉、砷、汞、铜5种有害元素的总量和可溶性汞含量的测定方法。建立了人参再造丸中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法。建立了人参再造丸中赭曲霉毒素A的测定方法。建立了人参再造丸中17种有机氯农药残留量的测定方法。本课题建立的分析方法为完善人参再造丸的质量标准提供了依据和参考,能较全面的控制该药质量。
申泽良[5]（2019）在《花生油加工过程中黄曲霉毒素的控制与脱除》文中研究指明花生油历来是我国居民喜爱的高端食用植物油,花生在生长和储藏期间极易吸湿霉变,致使黄曲霉毒素污染严重,作为其加工产物的花生油也存在被黄曲霉毒素污染的威胁,黄曲霉毒素具有“致畸、致癌、致突变”的三致毒性。因此采用有效的方法控制花生油中黄曲霉毒素污染,并对已经被黄曲霉毒素污染的花生油进行有效的脱毒工艺研究是非常必要。本文从花生仁的选料、毛油的制取以及花生油精炼三方面来研究花生油在加工过程中AFT的迁移规律以及脱除效果。（1）研究并优化了GB5009.22-2016《食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》中免疫亲和柱-高效液相色谱-柱后光化衍生-荧光检测器法的色谱条件,建立了一种检测时间短且准确度和精密度均符合检测标准的AFB1、AFB2、AFG1、AFG24种黄曲霉毒素。其加标回收率为86.0%96.4%,相对标准偏差在1.33%8.60%之间。（2）检测26个花生样品的AFT含量,对其中23个取自花生油厂的花生仁原料的检测发现,其中8个花生仁样品的AFB1含量超过国标20μg/kg的限量,超标率为34.78%。可见花生油厂收购的花生原料中AFT超标风险较高,对三个样品进行色选后,三个样品AFB1含量平均下降幅度为67.80%。由此可知在花生油加工过程中优选花生仁原料并严格进行色选,是防范花生原料中黄曲霉毒素超标的关键。（3）对AFT高、中、低含量不同的花生仁样品分别进行低温压榨、高温焙炒压榨和浸出制油,对9个花生毛油中AFT含量的检测结果显示,热榨、冷榨及浸出毛油中AFT含量平均值分别为13.97、18.06、4.71μg/kg,分别是原料花生仁AFT平均含量的27.10%、35.03%、9.14%。压榨毛油中AFB1和AFT含量明显高于浸出毛油。用品质较好的花生仁所制取的3个毛油中AFB1平均含量0.44μg/kg,仅为原料花生仁中AFB1含量的3.53%;用变色霉变花生仁所制取的3个毛油中平均含量为33.39μg/kg,为花生仁中含量的36.60%,含量超出国标限量1.62倍。花生热榨饼、冷榨饼及浸出粕中AFT含量分别为11.8257.96、9.5152.06、16.67100.00μg/kg,平均值分别为30.25、25.83、54.62μg/kg,分别是花生仁中AFT平均含量的58.68%、50.10%、105.96%,浸出花生粕中AFB1和AFT含量明显高于压榨花生饼。三个样品所制得毛油中VE、甾醇含量均为:冷榨毛油>热榨毛油>浸出毛油。品质较好的三个花生毛油中VE、甾醇含量均高于霉变花生所制得的毛油。综上压榨花生毛油中AFT含量明显高于浸出毛油,但压榨工艺可有效保留VE和甾醇。因此必须对花生原料进行色选除杂进而防范花生压榨毛油中AFT含量超标,提高其VE,甾醇含量。（4）采用碱液质量分数6.58%、超量碱0.4%、碱炼温度55℃、碱炼时间20 min的碱炼工艺,在对AFB1含量为21.1086.70μg/kg、AFT含量为22.7688.25μg/kg、酸价（以KOH计）为5.0911.37 mg/g的不同品质的花生毛油的碱炼脱酸过程中,碱炼油中AFB1和AFT降低至1μg/kg左右,达到国标限量和欧盟限量要求。通过单因素及正交试验,得到碱炼脱除极端酸价（31.96mg/g）花生油的最佳工艺条件,即:碱液质量分数:17.67%、超碱量:0.3%、时间:15 min、温度:60℃,可将花生油中AFT含量由:53.80μg/kg降至0.51μg/kg,脱除率高达99.1%。因此得出的两种碱炼脱酸工艺条件可有效脱除花生油中黄曲霉毒素。（5）当活性白土、Norit活性炭、硅胶以及飞洋9805活性炭四种吸附剂的添加量为1%时,除硅胶外,其他吸附剂均可以将AFB1含量脱除至国标限量要求以下。对花生油中AFT的脱除率分别为:86.4%、69.3%、41.9%、80.40%,活性白土与其他三种新型的吸附材料相比,对于花生油中AFT的脱除效果最佳。当活性白土添加量增加至4%时,AFB1与AFT的脱除率上升至最高,对花生油中AFT由31.2μg/kg降至2.32μg/kg,脱除率92.7%。AFB1由28.4μg/kg降至2.08μg/kg,脱除率为92.6%。对脱色花生油进行水蒸气蒸馏脱臭,当脱臭时间为100 min,温度260℃时,脱除率最高,为55.55%,当选用物理精炼脱除花生油中AFT时,吸附可将超标花生油中AFT脱除至安全含量,蒸馏脱臭脱除能力有限,因此主要考虑在吸附脱色的精炼环节对花生油中AFT进行脱除。
王文珺,孙双艳,叶金,王松雪,桑华春[6]（2019）在《我国现行真菌毒素检测标准概述》文中指出真菌毒素污染是一个世界性的公共安全问题,也是我国食品安全监管的重点,近年来我国多次修订该类标准。真菌毒素检测标准数量众多,标准的制定发展迅速。本文系统的描述了我国现行有效的各类真菌毒素检测标准:国家标准（GB）、行业标准（LS、NY、SN）及部分地方标准,通过对这些标准的检测方法和检出限的阐述和分析,从应用和市场的角度提出了一些建议和看法,以期能为质检部门监管及企业自检提供科学依据,同时,希望为我国标准的修订提供参考性建议。
胡佳哲,赖宇红,陈浩桉[7]（2019）在《中药材中常见真菌毒素污染状况及分析方法研究进展》文中进行了进一步梳理随着我国中医药事业的不断发展,中药疗效在被认可、重视的同时,其安全性也受到广泛关注。真菌毒素污染导致的中药材霉变是影响中药材及其制品质量与使用安全的主要问题之一。目前,真菌毒素污染的研究多在谷类、饲料等食品领域,在中药材中研究较少,本文综述了中药材中常见真菌毒素污染状况及分析方法的研究进展,以期为同类研究提供参考。
董姣姣,范妙璇,陈炼明,傅欣彤,肖红斌[8]（2018）在《中药饮片中真菌毒素前处理方法进展》文中指出中药真菌毒素是真菌在中药中所产生的次生代谢产物,一般不表现出急性毒性,但具有较强的蓄积性。我国常用中药存在真菌毒素污染或潜在污染的情况。为了改善中药基质对真菌毒素检测结果的影响,提高中药真菌毒素检测灵敏度与准确度,保证人类健康,减少真菌毒素带来的经济损失,本文对现代中药真菌毒素提取和净化方法进行了总结和概括,主要包括高速均质提取、搅拌提取、超声提取、振荡提取及免疫亲和柱净化法、固相萃取柱净化法、QuEChERS净化法等,并对真菌毒素前处理方法进行展望,以供国内外同行参考借鉴。
张萍,彭西甜,冯钰锜[9]（2018）在《食品中黄曲霉毒素检测的样品前处理技术研究进展》文中研究说明黄曲霉毒素主要存在于发霉的粮食、豆类、坚果及与其相关的食品中,有极强的毒性和致癌性,因此建立食品中黄曲霉毒素的检测方法对于保障食品安全,保护人们身体健康具有重要的意义。目前食品中黄曲霉毒素的检测以色谱和质谱等仪器分析方法为主。由于食物样品基质复杂,而黄曲霉毒素浓度很低,在仪器分析前需采取适当的样品前处理技术对目标物进行富集和纯化。本文对近年来食品中黄曲霉毒素检测的样品前处理方法进行了综述。
熊欣[10]（2018）在《QuEChERS结合LC-MS/MS检测食品中多种真菌毒素的方法研究》文中进行了进一步梳理真菌毒素具有致畸、致癌、致突变等毒性作用,并且食品在供应链流程中很容易因为保存条件不当而引起真菌毒素的污染。为保证食品安全,真菌毒素污染的监测十分重要,已有多种检测技术被用于真菌毒素检测当中。QuEChERS技术具有快速（quick）、简单（easy）、便宜（cheap）、有效（effective）、可靠（rugged）、安全（safe）的特点,其吸附剂能有效吸附杂质,经净化提取后能获得较纯净的目标分析物,近年来被广泛运用于真菌毒素检测领域。本课题采用QuEChERS前处理技术,结合高效液相色谱-质谱联用,建立食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A、B、C的灵敏度高、重现性好、适合大批量样品筛查的快速检测方法。主要研究内容如下:1、选择葡萄酒作为基质,赭曲霉毒素A、B和C作为目标检测物,对QuEChERS净化条件和液相-质谱串联检测条件进行优化。最后,葡萄酒样品采用乙腈-冰乙酸（90:10,V/V）进行酸化稀释,离心后取上清液经C18+SiO2+MgSO4净化剂组合净化过滤,待测样液在液相色谱C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱梯度洗脱分离后,分别采用荧光检测器和串联质谱电喷雾技术,在多反应监测（MRM）模式下,实现同时对葡萄酒中OTA、OTB和OTC三种赭曲霉毒素的定性和定量分析。方法最低定量限（LOQ）均为2.0μg/kg,相对标准偏差（RSD）为2.01%7.52%（n=6）。2、选择谷物及其制品、烘焙食品、花生及其制品作为食品基质,黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B、赭曲霉毒素C作为目标检测物,对QuEChERS净化条件和液相-质谱串联检测条件进行优化。最后,样品用10%甲酸-乙腈作为提取剂,1.2 g MgSO4+0.25g C18+0.4 g PSA+0.25 g Al-N作为净化剂,待测样液在液相色谱柱(Agilent Poroshell 120-EC-C18柱)梯度洗脱分离,在多反应监测（MRM）模式下,实现同时对食品中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、OTA、OTB和OTC七种真菌毒素的定性和定量分析。方法最低定量限（LOQ）为0.252.0μg/kg,平均回收率为53.77%119.05%,相对标准偏差（RSD）为2.04%12.19%（n=6）。3、为给不同食品基质选择更适宜的前处理方法,用不同的前处理方法对五种食品基质进行净化处理,并用高效液相色谱-质谱串联方法（LC-MS/MS）检测,分析对比该7种真菌毒素分别经过2建立的QuEChERS净化法和Bond Elut Enhanced Matrix Removal-Lipid（EMR-Lipid）处理后的回收率、净化效果、检测成本,以此选择适合大批量样品筛查的前处理方法。结果表明,EMR-Lipid前处理方法在油脂富集食品基质中的真菌毒素回收率和净化效果优于常规的QuEChERS净化方法,更适合处理净化难度较大的富油食品基质;在综合考虑检测成本与检测效率时,可选择常规的QuEChERS净化方法对大批量样品进行筛查。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 逍遥片赭曲霉毒素质量标准建立 |
| 1 仪器与材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 逍遥片黄曲霉毒素质量标准建立 |
| 1 仪器和材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 4 小结 |
| 实验三 逍遥片32种吡咯里西啶类生物碱质量标准建立 |
| 1 仪器与材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 国内外中草药吡咯里西啶类生物碱控制情况浅析 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 一、课题研究背景 |
| 二、课题研究内容 |
| 三、课题研究目的及意义 |
| 文献综述 中药材的黄曲霉毒素污染和控制 |
| 1 黄曲霉毒素的危害 |
| 2 中药材的黄曲霉毒素的污染现状 |
| 3 中药材黄曲霉毒素的检测方法研究 |
| 4 中药材黄曲霉毒素的防控措施 |
| 5 结语 |
| 第一章 UPLC-MS/MS测定淡豆豉自然炮制过程中黄曲霉毒素的含量 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 淡豆豉自然发酵炮制 |
| 2.2 建立UPLC-MS/MS法测定各时间点样品中AFT的含量 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 淡豆豉自然发酵炮制不同时间点样品性状 |
| 3.2 UPLC-MS/MS检测方法学考察 |
| 3.3 淡豆豉自然炮制不同时间点样品4 种AFT的含量测定 |
| 3.4 UPLC-M/MS测定淡豆豉不同炮制时间点4种AFT含量总离子流图 |
| 4 讨论 |
| 第二章 淡豆豉炮制中AFT产毒菌的筛选鉴定和产毒能力测定 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料及试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 淡豆豉自然发酵炮制过程中样本的制备 |
| 2.2 淡豆豉炮制过程中AFT产毒菌的筛选与计数 |
| 2.3 产AFT菌株的分离与鉴定 |
| 2.4 产毒能力的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 淡豆豉炮制过程中各样本产AFT菌的菌落计数 |
| 3.2 产AFT微生物的鉴定 |
| 3.3 UPLC-MS/MS检测方法学考察 |
| 3.4 各菌发酵液AFT的液质色谱图 |
| 4 讨论 |
| 第三章 淡豆豉炮制中AFB_1拮抗菌的拮抗能力 |
| 1 实验试剂与仪器 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验菌株 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 液质联用检测方法 |
| 2.2 5 株菌的拮抗能力测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 UPLC-MS/MS检测降解AFB_1方法学考察 |
| 3.2 5 株待测菌对AFB_1的降解作用 |
| 3.3 5 株待测菌对黄曲霉生长的影响 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简介 |
| 基本信息 |
| 教育经历 |
| 发表文章 |
| 荣誉奖励 |
| 博士学位论文评阅 人、答辩委员会签名表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 黄曲霉毒素概述 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素种类及其理化性质 |
| 1.1.2 黄曲霉毒素毒性及其危害 |
| 1.1.3 黄曲霉毒素限量标准 |
| 1.1.4 黄曲霉毒素生物合成 |
| 1.2 黄曲霉毒素检测技术研究进展 |
| 1.2.1 黄曲霉毒素薄层层析及仪器分析技术 |
| 1.2.2 黄曲霉毒素免疫分析技术 |
| 1.2.3 黄曲霉毒素生物传感器分析技术 |
| 1.2.4 黄曲霉毒素噬菌体展示介导免疫PCR检测技术 |
| 1.3 黄曲霉菌检测技术研究进展 |
| 1.3.1 黄曲霉菌概述 |
| 1.3.2 黄曲霉菌检测技术方法 |
| 1.4 黄曲霉及其毒素污染生物防控研究现状 |
| 1.4.1 生防微生物种类 |
| 1.4.2 生物防控作用机理 |
| 1.4.3 生防效果影响因子 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 |
| 1.6 本课题的主要研究内容 |
| 第二章 粮油黄曲霉毒素与玉米赤霉烯酮RT-PCR同步检测技术研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 仪器与耗材 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要缓冲液 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 纳米抗体噬菌体扩增 |
| 2.3.2 同步免疫反应条件优化 |
| 2.3.3 双重RT-PCR反应条件优化 |
| 2.3.4 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的技术评价 |
| 2.3.5 实际样品中AFT和 ZEN的 RT-PCR同步检测 |
| 2.3.6 样品中毒素的HPLC法测定 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的原理 |
| 2.4.2 同步免疫反应的条件优化 |
| 2.4.3 扩增效率评估 |
| 2.4.4 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的技术评价 |
| 2.4.5 实际样品中AFT和 ZEN的 RT-PCR同步检测 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 包被羊抗鼠抗体IgG的优势 |
| 2.5.2 噬菌体介导的RT-PCR同步检测技术优势及应用前景 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 玉米黄曲霉毒素及其产毒菌RT-PCR同步检测技术研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器与耗材 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要缓冲液及培养基 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 纳米抗体噬菌体扩增 |
| 3.3.2 Nor-1参考基因制备 |
| 3.3.3 双重RT-PCR的反应条件优化 |
| 3.3.4 玉米中黄曲霉毒素RT-PCR检测标准曲线建立 |
| 3.3.5 玉米中黄曲霉菌RT-PCR检测标准曲线建立 |
| 3.3.6 黄曲霉毒素检测可靠性验证 |
| 3.3.7 黄曲霉菌检测可靠性验证 |
| 3.3.8 实际样品分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 双重RT-PCR反应条件优化 |
| 3.4.2 双重RT-PCR扩增效率 |
| 3.4.3 RT-PCR检测黄曲霉毒素的技术评价 |
| 3.4.4 RT-PCR检测黄曲霉菌的技术评价 |
| 3.4.5 RT-PCR技术在实际样品中同步检测的应用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 基于nor-1基因检测黄曲霉菌的特异性和可靠性 |
| 3.5.2 噬菌体介导的RT-PCR同步检测小分子污染物和微生物的优势及应用前景 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 花生黄曲霉及其毒素污染木霉菌阻控技术研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 仪器与耗材 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 菌株来源及活化 |
| 4.3.2 木霉菌与黄曲霉菌相互作用关系研究 |
| 4.3.3 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌生长的影响研究 |
| 4.3.4 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌产毒的影响研究 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 木霉菌与黄曲霉菌生长速率 |
| 4.4.2 木霉菌与黄曲霉菌相互作用关系 |
| 4.4.3 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌生长的影响 |
| 4.4.4 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌产毒的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 粮油黄曲霉毒素污染木霉菌降解技术研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 仪器与耗材 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要溶液和培养基 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 木霉菌株来源及鉴定 |
| 5.3.2 不同木霉菌降解AFB1的能力差异分析 |
| 5.3.3 超高效降解黄曲霉毒素的木霉菌株筛选 |
| 5.3.4 里氏木霉CGMCC3.5218降解黄曲霉毒素的作用机理研究 |
| 5.3.5 里氏木霉CGMCC3.5218 降解实际样品中AFT的应用研究 |
| 5.3.6 统计分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 不同木霉菌降解AFB1的能力差异 |
| 5.4.2 超高效降解AFB1的木霉菌株筛选 |
| 5.4.3 里氏木霉CGMCC3.5218降解黄曲霉毒素的作用机理 |
| 5.4.4 里氏木霉CGMCC3.5218降解粮油产品中黄曲霉毒素的应用 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 不同木霉菌降解AFB1的能力差异 |
| 5.5.2 里氏木霉CGMCC3.5218对AFB1的作用机理 |
| 5.5.3 里氏木霉CGMCC3.5218的应用前景 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 人参再造丸研究背景 |
| 1.2 人参再造丸历史沿革 |
| 1.3 人参再造丸组方简介 |
| 1.4 人参再造丸药理学和临床应用研究 |
| 1.5 人参再造丸质量标准研究现状与存在不足 |
| 1.6 立题依据与研究内容 |
| 第二章 人参再造丸的显微鉴别和薄层鉴别 |
| 2.1 显微鉴别 |
| 2.1.1 研究背景 |
| 2.1.2 样品与仪器 |
| 2.1.3 实验设计 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 实验结果 |
| 2.1.6 小结 |
| 2.2 薄层鉴别 |
| 2.2.1 研究背景 |
| 2.2.2 仪器和材料 |
| 2.2.3 人参再造丸中大黄和制何首乌的薄层鉴别 |
| 2.2.4 人参再造丸中香附的薄层鉴别 |
| 2.2.5 小结 |
| 第三章 人参再造丸中铅、镉、砷、汞、铜的总量和可溶性汞的测定 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 仪器与试药 |
| 3.2.1 实验仪器 |
| 3.2.2 样品与试药 |
| 3.3 方法与结果 |
| 3.3.1 仪器工作参数 |
| 3.3.2 溶液的制备 |
| 3.3.3 线性及检出限 |
| 3.3.4 重复性试验 |
| 3.3.5 精密度试验 |
| 3.3.6 随行回收试验与质控样试验 |
| 3.3.7 稳定性试验 |
| 3.3.8 样品测定 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 消解条件的优化 |
| 3.4.2 药物重金属风险分析 |
| 3.4.3 合理限量标准的制定 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 人参再造丸中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2和赭曲霉毒素A的含量测定 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 人参再造丸中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的含量测定 |
| 4.2.1 实验仪器与试药 |
| 4.2.2 方法与结果 |
| 4.2.3 阳性确证试验 |
| 4.2.4 讨论 |
| 4.2.5 小结 |
| 4.3 人参再造丸中赭曲霉毒素A的含量测定 |
| 4.3.1 实验仪器与试药 |
| 4.3.2 方法与结果 |
| 4.3.3 讨论 |
| 4.3.4 小结 |
| 第五章 人参再造丸中17种有机氯类农药残留量的测定 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 仪器与试药 |
| 5.2.1 实验仪器 |
| 5.2.2 样品与试药 |
| 5.3 方法与结果 |
| 5.3.1 GC条件 |
| 5.3.2 MS条件 |
| 5.3.3 内标溶液的制备 |
| 5.3.4 对照品溶液的制备 |
| 5.3.5 供试品溶液的制备 |
| 5.3.6 线性关系 |
| 5.3.7 精密度试验 |
| 5.3.8 随行回收试验、重复性试验、检出限 |
| 5.3.9 样品测定 |
| 5.3.10 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 HPLC-DAD法同时测定人参再造丸中11 个成分的含量 |
| 6.1 研究背景 |
| 6.2 仪器与试药 |
| 6.2.1 实验仪器 |
| 6.2.2 样品与试药 |
| 6.3 方法与结果 |
| 6.3.1 溶液的制备 |
| 6.3.2 色谱条件 |
| 6.3.3 线性关系 |
| 6.3.4 专属性 |
| 6.3.5 精密度试验 |
| 6.3.6 稳定性试验 |
| 6.3.7 重复性试验 |
| 6.3.8 加样回收率试验 |
| 6.3.9 样品测定 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 提取条件的选择 |
| 6.4.2 色谱条件的优化 |
| 6.4.3 结果分析与限度建议 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 气相色谱法同时测定人参再造丸中龙脑、桂皮醛、丁香酚和麝香酮的含量 |
| 7.1 研究背景 |
| 7.2 仪器与试药 |
| 7.2.1 实验仪器 |
| 7.2.2 样品与试药 |
| 7.3 方法与结果 |
| 7.3.1 气相色谱条件 |
| 7.3.2 溶液的制备 |
| 7.3.3 方法学验证 |
| 7.3.4 样品含量测定 |
| 7.4 讨论 |
| 7.4.1 提取条件的选择 |
| 7.4.2 色谱条件的选择 |
| 7.4.3 含量限度建议 |
| 7.5 本章小结 |
| 第八章 总结与展望(拟定的标准草案) |
| 8.1 研究成果 |
| 8.2 存在不足与研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
| 摘要 |
| abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 黄曲霉毒素的概述 |
| 1.2 黄曲霉毒素的理化性质 |
| 1.2.1 黄曲霉毒素的毒性及危害 |
| 1.2.2 花生及花生油中黄曲霉毒素的污染状况 |
| 1.2.3 国内外花生及花生油中黄曲霉毒素的限量标准 |
| 1.2.4 花生油中营养物质 |
| 1.3 黄曲霉毒素检测的检测方法 |
| 1.3.1 薄层色谱法(TLC) |
| 1.3.2 高效液相色谱法(HPLC) |
| 1.3.3 高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MC) |
| 1.4 黄曲霉毒素的控制及脱除方法研究进展 |
| 1.4.1 机械脱除法 |
| 1.4.2 物理脱除法 |
| 1.4.3 化学脱除法 |
| 1.4.4 生物学法 |
| 1.5 课题研究意义与内容 |
| 1.5.1 课题意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 2 AFT检测法的优化及验证 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.4 数据分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 AFT检测法的优化 |
| 2.3.2 AFT检测法的验证 |
| 2.4 小结 |
| 3 花生原料中AFT污染状况及向花生毛油中迁移规律的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.2.3 试验方法 |
| 3.2.4 数据分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 花生原料中AFT含量及色选对其的控制作用 |
| 3.3.2 花生品质与制油工艺对花生毛油中AFB1和AFT含量的影响 |
| 3.3.3 花生品质和制油工艺对花生油中综合品质的影响 |
| 3.3.4 花生品质和制油工艺对花生饼粕中AFB1和AFT含量的影响 |
| 3.4 小结 |
| 4 不同品质花生毛油中黄曲霉毒素的碱炼脱除效果 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验方法 |
| 4.2.3 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 低酸价花生毛油中AFT的碱炼脱除效果 |
| 4.3.2 高酸价花生毛油中AFT的碱炼脱除效果 |
| 4.3.3 黄曲霉毒素含量不同花生毛油的碱炼脱除效果 |
| 4.3.4 极端酸价花生油中AFT的碱炼脱除效果 |
| 4.4 小结 |
| 5 花生油中黄曲霉毒素的吸附脱除和蒸馏脱除研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 试验方法 |
| 5.2.3 数据分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 不同吸附剂对花生油中AFT的吸附脱除效果 |
| 5.3.2 水蒸气蒸馏脱臭对花生油中AFT的脱除效果 |
| 5.4 小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 1 引言 |
| 2 我国现行的食品中真菌毒素的标准 |
| 2.1 黄曲霉毒素 (AF) |
| 2.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 |
| 2.3 玉米赤霉烯酮 |
| 2.4 伏马毒素 |
| 2.5 赭曲霉毒素 |
| 2.6 T-2毒素 |
| 2.7 展青霉素 |
| 3 结论 |
| 1 中药材中常见真菌毒素种类及污染状况 |
| 1.1 黄曲霉毒素 |
| 1.2 赭曲霉毒素 |
| 1.3 伏马毒素 |
| 1.4 玉米赤霉烯酮类毒素 |
| 1.5 杂色曲霉毒素 |
| 2 中药材中真菌毒素分析方法概况 |
| 2.1 提取净化 |
| 2.2 检测方法 |
| 3 结语与展望 |
| 1 分类综述 |
| 1.1 提取方法 |
| 1.1.1 高速均质提取法 |
| 1.1.2 振荡提取法 |
| 1.1.3 超声提取法 |
| 1.1.4 搅拌提取 |
| 1.2 净化方法 |
| 1.2.1 特异性净化方法 |
| 1.2.2 非特异性净化方法 |
| 1.2.2. 1 固相萃取柱净化法 |
| 1.2.2. 2 QuEChERS法 |
| 2 小结 |
| 3 讨论 |
| 1 概述 |
| 2 黄曲霉毒素检测方法研究现状 |
| 3 食品中黄曲霉毒素检测的样品前处理方法 |
| 3.1 液-液萃取 |
| 3.2 固相萃取 |
| 3.3 免疫亲和柱 |
| 3.4 其他样品前处理方法 |
| 3.4.1 基质固相分散 |
| 3.4.2 凝胶渗透色谱 |
| 3.4.3 免疫磁珠 |
| 3.4.4 QuEChERS法 |
| 4 直接分析 |
| 5 结语 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 真菌毒素简介 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素 |
| 1.1.2 赭曲霉毒素 |
| 1.2 真菌毒素提取方法简介 |
| 1.2.1 液-液微萃取净化法(DPLLE) |
| 1.2.2 免疫亲和柱法(IAC) |
| 1.2.3 固相萃取净化法(SPE) |
| 1.2.4 QuEChERS净化法 |
| 1.3 真菌毒素检测方法简介 |
| 1.3.1 薄层色谱检测法(TLC) |
| 1.3.2 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 1.3.3 高效液相色谱法(HPLC) |
| 1.3.4 高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS) |
| 1.4 主要研究意义、研究内容和技术路线 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 1.4.4 主要创新点 |
| 第二章 QuEChERS结合LC-MS/MS检测葡萄酒中3 种赭曲霉毒素 |
| 前言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.1.3 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 前处理方法的优化 |
| 2.2.2 色谱-质谱条件的优化 |
| 2.2.3 方法的验证 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 QuEChERS结合LC-MS/MS检测食品中7 种真菌毒素 |
| 前言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 色谱-质谱条件的优化 |
| 3.2.2 QuEChERS净化条件的优化 |
| 3.2.3 方法的验证 |
| 3.2.4 筛查样品 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 食品中七种真菌毒素的QuEChERS前处理方法比较 |
| 前言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料与方法 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.1.3 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 方法的验证 |
| 4.2.2 两种前处理方法的比较 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表论文成果 |
| 致谢 |
