张英,翟晓娜[1]（2020）在《精子发生相关基因SPATA功能的研究进展》文中认为SPATA基因是一类与精子发生相关的基因.精子发生依赖于一系列相关基因的正常表达与调控,SPATA基因在这个过程中起着一定的作用.本文通过参考大量SPATA基因相关文献,从SPATA基因在细胞增殖、细胞凋亡中的作用以及SPATA基因对多种相关疾病产生的影响和发病机理等多个方面,综述了精子发生过程中该类基因功能的研究进展,对于今后研究精子发生过程中有关特异基因的表达和细胞增殖、凋亡机理提供新思路;为研究精子发生的调控机制提供参考途径和方法;对于了解精子发生过程中产生的各种相关疾病的病因具有重要指导意义.
黄向月,熊显荣,张磊,马鸿程,海卓,李键[2]（2020）在《SPATA3基因克隆及其在牦牛和犏牛睾丸中的差异表达研究》文中研究指明旨在克隆牦牛精子发生蛋白3（spermatogenesis associated 3,SPATA3）基因,并检测其在牦牛不同组织及在不同发育时期牦牛和犏牛睾丸中的表达水平,探讨SPATA3对睾丸发育和精子成熟的影响,为进一步研究该基因在精子形成过程中的作用机制提供理论依据。本试验以牦牛为研究对象,利用RT-PCR克隆技术获取牦牛SPATA3 cDNA序列,使用生物信息软件分析其结构和功能,并检测其在牦牛心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠、卵巢、子宫和睾丸组织中的表达谱。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）检测SPATA3基因在牦牛和犏牛睾丸不同发育时期的表达规律;采用免疫组化技术检测SPATA3在牦牛和犏牛睾丸中的细胞定位及表达差异。结果显示,SPATA3基因CDS区为693 bp,编码230个氨基酸,与黄牛、野牦牛和水牛的同源性较高;SPATA3仅在耗牛睾丸组织中特异性表达,其它组织未见其表达。RT-qPCR结果显示,SPATA3基因在牦牛睾丸发育过程中均有表达,其中成年期（4～5岁）睾丸中的表达极显着高于胎牛时期（5～6月,P<0.01）,且其在牦牛不同发育时期睾丸中的表达均极显着高于犏牛（P<0.01）。免疫组化结果发现,SPATA3在圆形精子、长形精子细胞胞浆中均表达,且成年期牦牛睾丸中该基因的表达水平极显着高于犏牛（P<0.01）。综上表明,SPATA3在遗传进化中高度保守,且在牦牛和犏牛睾丸组织中差异表达,该基因低表达可能引起精子形成障碍,从而参与精子成熟进程,但具体功能有待进一步的研究。
王玉晶,温丽敏,白欣艳,曹睿,王海龙,郭睿[3]（2018）在《小鼠精子发生相关蛋白3基因在小鼠生精细胞的特异表达及对HEK 293T细胞凋亡和自噬的影响》文中研究说明目的检测小鼠精子发生相关蛋白3（spata3）基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spata3基因mRNA及蛋白产物在小鼠各组织中的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在生精细胞中的定位;借助脂质体将真核表达载体Plv-EGFP-2（a）purospata3瞬时转染HEK 293T细胞,进一步在蛋白水平分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）、BAX和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3A/B的变化。结果 Spata3基因及其编码产物在小鼠睾丸组织特异表达;粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞质与胞核均有显着SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞质也有大量分布;过表达spata3的HEK 293T细胞内活化型Caspase-3和PARP降解产物的含量较对照组差异无显着性,BAX表达量0.815±0.020较裸细胞组0.469±0.012和空载体转染组0.588±0.018均有所增高,Bcl-2含量0.214±0.020低于裸细胞0.507±0.021和空载体转染组0.545±0.024,LC3A/B-Ⅱ的表达量0.741±0.037则显着高于裸细胞组0.136±0.011和空载体转染组0.169±0.012。结论 Spata3基因在小鼠生精细胞特异表达,过表达spata3对HEK 293T细胞凋亡无明显影响,但可以促进细胞自噬。
陈宏波[4]（2017）在《睾丸特异表达新基因Spata34和Mage-k1的克隆及蛋白表达和分离纯化》文中研究指明近十年来,育龄夫妇中约有10-15%的不育,而男性不育约占33.15%,其中一个重要的原因是男方生精障碍,表现为无精或严重少精。多个与精子发生或生精细胞凋亡相关的基因已被鉴定,但这些已知的基因如何与其它的基因相互作用来调控精子的生成过程,以及是否存在其它未知的基因参与精子的发生目前尚不完全清楚。因此,发现和克隆新的睾丸生精细胞发生、发育、凋亡特异基因并研究其功能对阐明精子发生的生理和病理机制具有十分重要的意义。在本研究中,应用生物信息学和分子生物学技术相结合的方法克隆了两个睾丸特异表达新基因Spata34和Mage-k1,并分别对其功能进行了初步研究。主要方法及实验结果如下:1.克隆了两个睾丸特异表达新基因Spata34和Mage-k1,并对其进行了系统的生物信息学分析。结果表明大鼠Spata34的cDNA全长为1986 bp,定位于2号染色体2q24区,含有11个外显子,编码由415个氨基酸组成的分子量为46.47 kD的蛋白质,推测Spata34蛋白定位于细胞核。小鼠Mage-k1基因cDNA全长为1602 bp,定位于X号染色体XA6区,含有2个外显子,编码由320个氨基酸组成的分子量为35.04 kD的蛋白质,可能为一种胞浆蛋白。2.对大鼠生精细胞凋亡相关基因Spata34进行了初步的功能研究。多组织RT-PCR结果显示:在已检测组织中,Spata34基因在正常大鼠睾丸组织中高表达,在卵巢组织中有微弱表达,而在其他组织中未检测到表达。原位杂交结果显示:Spata34在睾丸组织的精母细胞、精子中高表达,而在精原细胞中弱表达,提示Spata34基因可能在睾丸生殖细胞的发育过程中扮演着重要的角色。构建了原核表达载体pET28b/Spata34,并诱导Spata34基因在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白。亚细胞定位结果显示:pEGFP-C3/Spata34质粒转染COS-7细胞后,绿色荧光出现在胞核和胞浆,表明Spata34蛋白主要在胞核和胞浆中表达。3.对小鼠睾丸特异表达新基因Mage-k1进行了初步的功能研究。多组织RT-PCR结果显示:Mage-k1基因在正常小鼠睾丸组织中特异性高表达,而在其他组织中未检测出表达。小鼠不同发育时期睾丸组织RT-PCR结果显示:Mage-k1基因在睾丸中的表达呈发育阶段特异性,其在小鼠出生后1-4周低表达,此后随着睾丸的发育其表达量逐步上升,并在性成熟时保持稳定表达。原位杂交结果显示:Mage-k1基因在睾丸组织的精母细胞、精子中高表达,而在精原细胞中不表达。成功构建出原核表达载体pGEX-4T-2/Mage-k1及pET28b/Mage-k1,并诱导了Mage-k1基因在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,用亲和层析法纯化了蛋白质,为后续Mage-k1基因功能的深入研究奠定了良好的基础。以上实验结果表明Spata34和Mage-k1基因与精子发生及生精细胞凋亡有关,可能在精子发生、睾丸发育以及生精细胞凋亡中起重要作用。克隆Spata34和Mage-k1基因并研究其功能,将有助于探明精子发生的分子机制,并为男性不育患者的的诊治以及新型避孕药物的研制提供了新的靶标。
徐帅[5]（2017）在《小鼠新基因Dnajc5b的克隆表达及Rcet1敲除后表型的检测研究》文中提出小鼠Dnajc5b和Rcet1基因是我们克隆的分别在小鼠睾丸和生殖域特异表达的新基因。Dnajc5b是DNAJ（HSP40）的同源物,亚家族C,成员5中的第二个,故命名Dnajc5b,该基因位于小鼠第三号染色体,含五个外显子,总长度为947bp,开放阅读框为597bp,共编码199个氨基酸。通过多组织RT-PCR检测,Dnajc5b在小鼠睾丸组织中特异表达;小鼠睾丸不同时期RT-PCR检测出,Dnajc5b在小鼠出身后第一周、第二周弱表达,第三周开始表达增强,第八周性成熟时表达最大。同时,原位杂交结果表明,Dnajc5b基因在小鼠精原细胞中特异表达。pEGFP-C3/Dnajc5b转染实验表明Dnajc5b蛋白在细胞质中表达。Dnajc5b原核表达得到了25KD左右的融合蛋白,利用His抗体通过Western Blot检测正确;同时对Dnajc5b融合蛋白进行分离纯化,得到纯化后的Dnajc5b蛋白,经6his抗体检测正确。通过点突变内含子和外显子之间的剪接位点gt和ag,致使内含子无法剪切而得不到成熟的mRNA,本实验室得到了敲除Rcet1的小鼠模型;检测结果表明:敲除Rcet1雄性小鼠完全不育;睾丸和附睾不能正常发育,睾丸萎缩,附睾囊肿;曲精小管中精母细胞核变大、出现多核细胞、精子严重不足;附睾管管腔变大、柱状细胞脱落、精子数量极少。Dnajc5b研究表明,Dnajc5b在睾丸组织中特异表达,其表达量与睾丸发育时期呈正相关;由于Dnajc5b含有Dnaj结构域和HSP40的结构位点,其亚细胞定位在细胞质中,Dnajc5b可能具有分子伴侣或热休克蛋白的功能。Rcet1敲除小鼠表明,缺乏Rcet1的小鼠睾丸和附睾不能正常发育,显示少精或者无精,表现为雄性不育。本文对Dnajc5b和Rcet1的研究结果,为进一步研究其生精过程中的分子机制打下了一定的基础。
温丽敏[6]（2017）在《spata3基因参与小鼠生殖细胞发育及其初步功能研究》文中认为目的:明确spata3基因m RNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的特异表达特性;运用分子克隆技术构建spata3的真核表达质粒并建立spata3过表达HEK293T细胞模型;分析spata3过表达HEK293T细胞中细胞凋亡和细胞自噬相关蛋白的表达;进一步构建spata3过表达慢病毒载体并建立稳定表达GC2-spd细胞模型;分析spata3稳定表达GC2-spd细胞中细胞自噬相关蛋白的表达;为进一步探究在精子发生过程中spata3所发挥的的作用及意义奠定基础。方法:1.采用RT-PCR分析spata3基因m RNA在小鼠各组织中的表达;2.利用Western blotting分析SPATA3蛋白在小鼠各组织中的表达;3.应用免疫组织化学染色检测SPATA3蛋白在小鼠睾丸组织中的细胞定位;4.通过间接免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在小鼠生精细胞中的定位分布;5.利用分子克隆技术构建spata3真核表达重组质粒p LV-EGFP（2A）Purospata3;6.采用RT-PCR和Western blotting分析重组质粒p LV-EGFP（2A）Puro-spata3转染HEK293T细胞后spata3 m RNA和蛋白的表达水平;7.采用间接免疫荧光染色检测SPATA3蛋白在过表达HEK293T细胞中的定位分布;8.采用Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、PARP、Bax和Bcl-2以及细胞自噬相关蛋白Lc3A/B的表达水平;9.过表达慢病毒载体瞬时感染HEK293T细胞;采用RT-PCR和Western blotting检测spata3在HEK293T细胞中的瞬时表达;10.建立稳定表达spata3的GC2-spd细胞模型;采用RT-PCR和Western blotting检测spata3在GC2-spd细胞中的稳定表达;11.采用Western blotting检测自噬相关蛋白Lc3A/B在spata3稳定表达GC2-spd细胞中的表达水平。12.采用间接免疫荧光染色检测自噬相关蛋白Lc3A/B在spata3稳定表达GC2-spd细胞中的分布。结果:1.RT-PCR结果显示spata3基因m RNA在小鼠睾丸组织特异表达;2.Western blotting结果显示SPATA3蛋白在小鼠睾丸组织特异表达;3.免疫组织化学染色结果表明SPATA3蛋白主要定位在曲精小管内圆形精子细胞、粗线期精母细胞和长形精子细胞中,间质细胞、支持细胞、精原细胞、前细线期精母细胞中未见SPATA3明显阳性信号;4.免疫荧光分析显示粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞浆与胞核均有显着SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞浆也有大量分布;5.DNA测序结果表明重组质粒p LV-EGFP（2A）Puro-spata3构建成功;6.重组质粒转染HEK293T细胞后,经RT-PCR和Western blotting检测表明spata3基因在HEK293T内过表达;7.细胞免疫荧光染色分析显示在HEK293T细胞内过表达的SPATA3蛋白分布广泛,但核周荧光信号明显强于胞核;8.Western blotting结果表明过表达spata3的293T细胞中细胞凋亡相关蛋白及自噬相关蛋白Caspase3、PARP无明显变化,Bax、Lc3A/B蛋白水平高于对照组（P<0.01）,而Bcl-2蛋白含量低于对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义;9.RT-PCR和Western blotting结果表明spata3慢病毒载体在HEK293T细胞中过表达,表明慢病毒载体构建成功;10.RT-PCR和Western blotting结果表明spata3慢病毒载体在GC2-spd细胞中过表达,spata3过表达GC2-spd稳定细胞模型构建成功;11.Western blotting结果表明过表达spata3的GC2-spd稳定细胞中自噬相关蛋白Lc3A/B蛋白含量高于对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义。12.细胞免疫荧光染色分析显示过表达spata3的GC2-spd稳定细胞中自噬相关蛋白Lc3A/B荧光信号在核周呈点状广泛分布;结论:1.spata3基因在小鼠睾丸组织大量表达,并具有生精细胞定位特异性。2.成功建立了spata3稳定过表达GC2-spd细胞模型。3.spata3基因过表达具有促进HEK293T细胞自噬的作用,而与细胞凋亡没有直接关系。spata3基因过表达能够促进GC2-spd细胞自噬,可能与哺乳类动物精子发生期间的生精细胞自噬密切相关。
李颖[7]（2012）在《小鼠精子发生相关基因spata3的表达分析》文中进行了进一步梳理研究目的：分析小鼠精子发生相关基因spata3mRNA及其编码蛋白产物的表达特性,揭示该基因在精子细胞变态成形过程中的作用,为深入理解男性不育症的发病机理积累实验室资料。研究方法：1.应用半定量RT-PCR技术分析spata3mRNA的组织表达特异性；2.利用实时荧光定量PCR方法分析spata3mRNA在不同周龄小鼠睾丸组织中的差异性表达；3.通过分子克隆技术构建spata3原核表达载体,并实现spata3在大肠杆菌中的可溶性表达；通过亲和层析纯化获得GST-SPATA3融合蛋白并利用Western blot印迹杂交加以验证；以纯化的融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗SPATA3多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性；4.利用免疫组织化学染色分析SPATA3蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位；5.利用多重间接免疫荧光技术分析SPATA3蛋白在精子细胞内的亚细胞定位；6.通过免疫共沉淀技术分析SPATA3蛋白与微管蛋白a-tubulin的相互作用。研究结果：1.半定量RT-PCR分析表明spata3mRNA具有显着的睾丸组织特异性表达特征；2.实时荧光定量PCR结果显示spata3mRNA在5周龄及8周龄雄性小鼠睾丸组织中高表达,可能与精子发生后期密切相关；3.酶切图谱分析与DNA序列测定表明spata3原核表达载体构建成功,经诱导表达及亲和层析纯化后获得融合蛋白GST-SPATA3, Western blot印迹杂交证明纯化的重组蛋白具有高度的特异性。ELISA测定显示抗SPATA3多克隆抗体效价可达1:102,400, Western blot显示该抗体可与SPATA3蛋白特异结合,具有识别特异性；4.免疫组织化学染色结果显示SPATA3蛋白在小鼠曲精小管中主要定位在圆形精子细胞和长形精子细胞内；5.多重间接免疫荧光染色分析表明SPATA3蛋白与精子细胞变态成形过程出现的精子领结构共定位在圆形及长形精子细胞核表面,并伴随精子细胞核的改变而出现形态及定位的动态变化；6.免疫共沉淀实验尚未证明SPATA3与a-tubulin能够在体外形成免疫沉淀复合物,需利用其他方法进一步验证。研究结论：1. spata3mRNA在小鼠睾丸组织中高表达,具有显着的组织表达特异性。在5周龄及8周龄小鼠睾丸组织中spata3mRNA处于高水平转录状态,具有显着的阶段特异性表达,提示该基因与精子发生后期过程密切相关；2. SPATA3蛋白定位在圆形精子细胞和长形精子细胞核周,并且与精子领结构在形态改变及发育时间上具有高度的吻合性,提示该蛋白可能与精子领共同参与了精子细胞核的浓缩变形过程；3. SPATA3蛋白与a-tubulin能够在体外形成免疫沉淀复合物,说明二者之间存在一定的相互作用,但仍需进一步证明该作用属直接作用还是间接作用。4.实验证实本课题制备的抗SPATA3多克隆抗体能特异识别细胞内SPATA3蛋白,为后期进一步从蛋白水平研究spata3的功能及作用机制提供了实验材料。
李美丽[8]（2009）在《猪TSARG7基因的结构及组织表达谱分析》文中进行了进一步梳理TSARG7 （testis spermato genesis cell apoptosis-related gene 7,睾丸生精细胞凋亡相关基因7）是酰基转移酶家族的成员之一,它的序列中存在一个高度保守的磷酸酰基转移酶（PlsC）区,酰基转移酶类蛋白家族都存在PlsC。最新研究表明,在人和小鼠上,TSARG7基因在精子发生与性成熟的过程中起重要作用。对TSARG7基因的克隆测序及初步分析,为研究猪的TSARG7基因生物学功能及品种改良提供基础的基因信息。本文采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和RACE技术,获得了猪TSARG7基因的cDNA全序列。利用生物信息学方法预测该蛋白的结构和功能,并进行同源序列多重比对和分子系统发生分析。利用实时荧光定量（Real-time） PCR技术分析猪TSARG7基因的mRNA在不同组织的相对表达水平。1 TSARG7基因的克隆测序用人的TSARG7基因的cDNA全序列作为电子探针,分别从NCBI的dbEST和UniGene数据库钓取公猪的EST序列,将其输入DNAstar-SeqMan程序,最后拼接出2个重叠群（Contig）序列。在此基础上,利用Oligo6.0软件手动设计引物,借助RT-PCR和RACE技术一方面验证了电子克隆的正确性；另一方面扩增出cDNA全序列两条,长度分别为2513bp和2634bp, GenBank登录号分别为FJ588001和FJ588002。2 TSARG7蛋白的生物信息学分析借助生物信息学网络资源与软件,预测出猪TSARG7剪接体1的开放阅读框的长度为1377bp,编码458个氨基酸残基,且两侧分别是930bp的5’UTR和207bp的3’UTR; TSARG7剪接体2的开放阅读框的长度为1371bp,编码456个氨基酸残基,且两侧分别是930bp的5’UTR和334bp的3’UTR。通过对蛋白序列相似性检索,预测出猪TSARG7蛋白含有一个信号肽,为分泌性蛋白质；含有跨膜区,N-端在膜内,为跨膜蛋白；不含明显的疏水区；定位于细胞质中,而且确定其含有：Acyltransferse, PlsC和Acyltransferse superfamily三个保守结构域。推测猪TSARG7蛋白参与精子的发生过程,在精原细胞和精母细胞中调节磷脂的合成。3 Real-time PCR分析TSARG7基因的组织表达谱利用Real-time PCR技术对猪各组织的TSARG7基因的mRNA进行定量分析,基因表达量使用2-△△CT法进行处理,其中△△CT=（CT目的基因-CT内参基因）,处理结果使用SPSS16.0进行单因素方差分析。结果表明：TSARG7基因在猪的不同组织中广泛表达,但表达水平存在差异。在骨骼肌、睾丸和心脏组织表达水平明显高于其它组织,推测TSARG7基因在猪骨骼肌、睾丸和心脏组织的发育和功能维持过程中具有重要作用。
李喜霞,张栋,崔慧林,郭睿[9]（2009）在《小鼠生精细胞发育特异基因spata3的表达分析和克隆纯化》文中认为背景:雄性哺乳动物生精细胞自发性或诱发性凋亡现象与细胞凋亡相关基因有着密切的联系。spata3是一个新发现的小鼠生精细胞凋亡相关基因。目的:探讨小鼠生精细胞发育特异基因spata3的表达特性,制备高纯度的可溶性GST-SPATA3融合蛋白。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室和组织学与胚胎学实验室完成。材料:pMD19-T Simple克隆载体及大肠杆菌菌株E.coli DH5α（TaKaRa公司）,表达载体pET-41a（+）plasmid DNA（Novagen公司）,大肠杆菌菌株E.coli BL21（DE3）（Solarbio公司）;1,2,3,5,8周龄雄性和8周龄雌性BALB/c小鼠。方法:麻醉后颈椎脱臼处死小鼠,取出各小鼠的睾丸组织和8周龄小鼠的大脑、心脏、肝脏、肺、肾脏、脾脏、卵巢、子宫,提取各组织总RNA。通过聚合酶链反应、定量聚合酶链反应和原位杂交研究spata3mRNA表达及定位;通过构建原核表达载体,诱导并纯化蛋白,制备抗体。主要观察指标:①反转录-聚合酶链反应分析spata3组织特异性表达。②荧光定量聚合酶链反应分析spata3的阶段特异性表达。③spata3mRNA细胞定位的杂交信号。④SPATA3重组蛋白在原核细胞的表达及其纯化。⑤重组蛋白的Western blot分析。结果:反转录-聚合酶链反应表明spata3具有显着的睾丸组织特异性表达特征;实时定量聚合酶链反应显示spata3在精子发生后期高表达,可能与精子细胞的变态成形过程密切相关;原位杂交证明spata3转录本主要定位在圆形和长形精子细胞内,进一步提示该基因参与了精子细胞发育后期的形态变化。DNA序列测定和SDS-PAGE分析证明spata3原核表达载体构建成功并可被高效诱导表达;Western blot印迹杂交显示纯化的SPATA3重组蛋白具有高度的特异性。结论:spata3是小鼠睾丸组织特异表达的精子发生相关基因,在圆形和长形精子细胞中处于高水平转录状态;实验获得的高纯度可溶性融合蛋白完全满足后期抗体制备的需要。
郭睿,李喜霞,王惠珍[10]（2009）在《小鼠睾丸特异基因在生精细胞中阶段性表达的定量分析》文中进行了进一步梳理在Balb/c小鼠精子发生过程中,许多基因都具有严格的时空表达特性。实验利用半定量RT-PCR验证了12个小鼠精子发生相关基因的组织学分布,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR分析了它们在不同发育阶段生精细胞中的差异表达。结果显示,所有基因仅在睾丸组织中高表达;Prm1、Prm2、Tnp1、Tnp2在长形精子细胞中的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9、2.8、3.2和2倍;Dnajb3呈上调表达,在长形精子细胞中的含量是粗线期精母细胞阶段的2.5倍;Akap4在长形精子细胞阶段的表达水平尤为突出,是粗线期精母细胞的5.5倍;Spata3和Spata4在圆形及长形精子细胞中的表达量相近,分别是粗线期精母细胞阶段的3倍和1.5倍;hils1和Tex24在圆形精子细胞阶段的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9和1.4倍;Spag4l和Papolb从粗线期精母细胞到长形精子细胞阶段呈明显的下调表达,分别下降了45%和34%。结果提示,被检测的基因具有明显的阶段特异性表达特征,为深入研究这些基因在小鼠精子发生过程中的作用提供了新资料,同时也为荧光定量PCR技术在精子发生相关基因定量表达研究中的可行性提供了充分例证。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 1 SPATA基因 |
| 2 SPATA基因在精子发生过程中的作用研究 |
| 2.1 SPATA基因在细胞增殖中的作用研究 |
| 2.1.1 SPATA基因对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 2.1.2 SPATA基因对生殖细胞增殖的影响 |
| 2.2 SPATA基因在细胞凋亡中的作用研究 |
| 2.2.1 SPATA基因对睾丸癌细胞凋亡的作用 |
| 2.2.2 SPATA基因对睾丸生精细胞凋亡的作用 |
| 3 SPATA基因与相关疾病的研究 |
| 3.1 与SPATA相关的肿瘤类疾病 |
| 3.2 与SPATA相关的雄性不育症 |
| 3.3 与SPATA相关的其他类疾病 |
| 4 讨论 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与仪器 |
| 1.2 样本采集及处理 |
| 1.3 牦牛各组织总RNA的提取及检测 |
| 1.4 目的基因的扩增与克隆 |
| 1.5 牦牛SPATA3基因生物信息学分析 |
| 1.6 牦牛SPATA3基因组织表达谱分析 |
| 1.7 RT-qPCR检测SPATA3基因在牦牛及犏牛睾丸发育过程中的表达 |
| 1.8 免疫组化分析SPATA3在成年期牦牛及犏牛睾丸中的定位及表达 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 牦牛SPATA3基因的克隆 |
| 2.2 牦牛SPATA3蛋白的结构和功能预测 |
| 2.3 牦牛SPATA3基因的组织表达谱 |
| 2.4 牦牛及犏牛睾丸发育过程中SPATA3基因的表达 |
| 2.5 成年期牦牛及犏牛睾丸中SPATA3的定位及表达 |
| 3 讨 论 |
| 4 结 论 |
| 材料和方法 |
| 1.实验动物 |
| 2.半定量RT-PCR |
| 3.Western blotting实验 |
| 4.免疫组织化学染色 |
| 5.间接免疫荧光染色 |
| 6.真核表达载体转染HEK 293T细胞 |
| 7.HEK 293T细胞凋亡及自噬的诱导 |
| 8.统计学处理 |
| 结果 |
| 1.Spata3在小鼠各组织中的表达情况 |
| 2.SPATA3蛋白在睾丸组织中的定位 |
| 3. SPATA3蛋白在生精细胞中的分布 |
| 4.Spata3真核表达载体转染HEK 293T细胞 |
| 5.细胞凋亡相关蛋白的检测 |
| 6.细胞自噬相关蛋白的检测 |
| 讨论 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 精子发生 |
| 1.2 生精细胞凋亡 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 |
| 1.3.1 表达载体 |
| 1.3.2 宿主细胞 |
| 1.3.3 诱导条件 |
| 1.4 Spata34和Mage-k1基因简述 |
| 1.4.1 Spata34基因简述 |
| 1.4.2 Mage-k1基因简述 |
| 1.5 研究背景及意义 |
| 第2章 实验材料与仪器 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 菌株 |
| 2.2.1 E.coli Top10 |
| 2.2.2 E.coli DH-5α |
| 2.2.3 BL21 |
| 2.2.4 Rosetta |
| 2.3 质粒载体 |
| 2.3.1 pMD18-T载体 |
| 2.3.2 pEGFP-C3载体 |
| 2.3.3 pGEX-4T-2 载体 |
| 2.3.4 pET28b载体 |
| 2.4 试剂 |
| 2.4.1 酶及主要试剂 |
| 2.4.2 试剂盒 |
| 2.4.3 分子量标准 |
| 2.5 主要仪器 |
| 2.6 PCR引物 |
| 2.6.1 GAPDH引物 |
| 2.6.2 基因克隆引物 |
| 2.6.3 基因表达引物 |
| 第3章 实验方法 |
| 3.1 Spata34和Mage-k1基因的生物信息学分析 |
| 3.1.1 蛋白同源性比对 |
| 3.1.2 核酸/蛋白相似性比对 |
| 3.1.3 阅读框识别 |
| 3.1.4 数字化表达谱分析 |
| 3.1.5 基因染色体定位 |
| 3.1.6 外显子分析 |
| 3.1.7 酶切位点分析 |
| 3.1.8 蛋白质理化性质分析 |
| 3.1.9 蛋白质跨膜区分析 |
| 3.1.10 蛋白质疏水性分析 |
| 3.1.11 信号肽分析 |
| 3.1.12 蛋白质亚细胞定位预测 |
| 3.1.13 蛋白质二级结构预测 |
| 3.1.14 蛋白质motif分析 |
| 3.1.15 蛋白质结构域分析 |
| 3.2 Spata34和Mage-k1基因的分子克隆 |
| 3.2.1 睾丸组织RNA的抽提 |
| 3.2.2 半定量RT-PCR扩增 |
| 3.2.3 新基因克隆 |
| 3.2.4 新基因高保真克隆 |
| 3.2.5 新基因TA克隆 |
| 3.2.6 重组子转化 |
| 3.2.7 阳性克隆的筛选及鉴定 |
| 3.2.8 重组质粒抽提 |
| 3.3 Mage-k1基因的表达谱分析 |
| 3.3.1 多组织RT-PCR表达谱 |
| 3.3.2 小鼠不同发育时期睾丸组织RT-PCR表达谱 |
| 3.4 Spata34/pEGFP-C3真核表达载体构建 |
| 3.4.1 大鼠Spata34基因的PCR扩增 |
| 3.4.2 pMD18-T/Spata34的克隆、转化与鉴定 |
| 3.4.3 pMD18-T/Spata34和pEGFP-C3质粒双酶切 |
| 3.4.4 目的片段胶回收纯化 |
| 3.4.5 pEGFP-C3/Spata34重组质粒的连接与转化 |
| 3.4.6 pEGFP-C3/Spata34重组质粒的鉴定 |
| 3.5 Mage-k1/pGEX-4T-2 原核表达载体构建 |
| 3.5.1 小鼠Mage-k1基因的PCR扩增 |
| 3.5.2 pMD18-T/ Mage-k1的克隆、转化与鉴定 |
| 3.5.3 pMD18-T/ Mage-k1和pGEX-4T-2 质粒双酶切 |
| 3.5.4 Mage-k1/pGEX-4T-2 重组质粒的连接与转化 |
| 3.5.5 Mage-k1/pGEX-4T-2 重组质粒的鉴定 |
| 3.6 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 |
| 3.6.1 小鼠Mage-k1基因的亚克隆 |
| 3.6.2 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 |
| 3.7 组织原位杂交试验 |
| 3.8 Spata34蛋白的亚细胞定位 |
| 3.8.1 细胞培养 |
| 3.8.2 转染细胞 |
| 3.9 融合蛋白的表达和分离纯化 |
| 3.9.1 融合蛋白的诱导表达 |
| 3.9.2 SDS-PAGE电泳 |
| 3.9.3 融合蛋白的亲和层析纯化 |
| 3.9.4 融合蛋白的酶切纯化 |
| 第4章 结果与讨论 |
| 4.1 Spata34基因的克隆及功能的初步研究 |
| 4.1.1 Spata34基因的生物信息学分析 |
| 4.1.2 Spata34基因的分子克隆 |
| 4.1.3 Spata34基因的多组织RT-PCR验证 |
| 4.1.4 Spata34/pEGFP-C3真核表达载体构建 |
| 4.1.5 Spata34蛋白的亚细胞定位 |
| 4.1.6 Spata34基因组织原位杂交 |
| 4.1.7 pET28b/Spata34融合蛋白的表达和分离纯化 |
| 4.2 Mage-k1基因的克隆及功能的初步研究 |
| 4.2.1 Mage-k1基因的生物信息学分析 |
| 4.2.2 Mage-k1基因的分子克隆 |
| 4.2.3 Mage-k1基因的表达谱分析 |
| 4.2.4 Mage-k1/pGEX-4T-2 原核表达载体构建 |
| 4.2.5 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 |
| 4.2.6 Mage-k1基因组织原位杂交试验 |
| 4.2.7 Mage-k1/pET28b融合蛋白的表达和分离纯化 |
| 第5章 结语 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间主要的研究成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 热休克蛋白（HSPs）与Dnajc5b |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂与Rcet1 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 |
| 1.2.2 基因敲除Rcet1 |
| 1.3 蛋白质的分离纯化 |
| 1.3.1 根据蛋白质大小分离纯化蛋白 |
| 1.3.2 根据溶解度不同分离纯化 |
| 1.3.3 根据电荷不同进行分离纯化 |
| 1.3.4 利用对配体的特异亲和力进行分离纯化 |
| 1.4 研究背景及意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 菌株 |
| 2.1.3 质粒载体 |
| 2.1.4 引物 |
| 2.1.5.主要试剂和试剂盒 |
| 2.1.6 实验试剂配置 |
| 2.1.7 主要仪器 |
| 2.2 生物信息分析及实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学分析 |
| 2.2.1.1 生物信息学分析的主要数据库与分软件析 |
| 2.2.2 基因的克隆 |
| 2.2.2.1 小鼠睾丸组织RNA抽提 |
| 2.2.2.2 RT-PCR 扩增（Reverse ranscription-polymerase chain reaction） |
| 2.2.2.3 以cDNA第一链为模板扩增目的基因 |
| 2.2.2.4 高保真PCR克隆目的基因 |
| 2.2.2.5 T-A克隆 |
| 2.2.2.6 感受态细胞的制备 |
| 2.2.2.7 转化 |
| 2.2.2.8 阳性单克隆菌的筛选及鉴定 |
| 2.2.2.9 质粒抽提（以质粒抽提试剂盒操作说明书为准） |
| 2.2.2.10 胶回收操作（以胶回收试剂盒说明为准）及分析 |
| 2.3 Dnajc5b差异表达检测 |
| 2.3.1 小鼠不同组织的差异表达检测 |
| 2.3.2 不同发育时期的差异表达检测 |
| 2.3.3 检测小鼠睾丸组织中Dnajc5b的差异表达 |
| 2.3.3.1 设置Dnajc5b靶基因的mRNA序列 |
| 2.3.3.2 操作程序 |
| 2.3.4 亚细胞定位技术检测Dnajc5b的差异表达 |
| 2.3.4.1 构建pEGFP-C3/Dnajc5b真核表达载体 |
| 2.3.4.2 Lipofectamine2000介导的基因转染 |
| 2.3.4.3 pEGFP-C3/Dnajc5b 质粒瞬时转染卵巢癌细胞（SKOV3） |
| 2.4 Dnajc5b 蛋白诱导表达和分离纯化检测 |
| 2.4.1 Dnajc5b蛋白诱导表达及检测 |
| 2.4.1.1 Dnajc5b蛋白分析和基因合成改造 |
| 2.4.1.2 构建pET-28a/Dnajc5b原核表达载体 |
| 2.4.1.3 Dnajc5b蛋白的诱导表达 |
| 2.4.1.4 SDS-PAGE电泳检测Dnajc5b蛋白 |
| 2.4.1.5 Western Blot检测Dnajc5b蛋白 |
| 2.4.2 Dnajc5b目的蛋白的分离纯化及检测 |
| 2.4.2.1 可溶性Dnajc5b蛋白样品准备 |
| 2.4.2.2 可溶性Dnajc5b蛋白亲和层析纯化 |
| 2.5 基因敲除小鼠Rcet1检测 |
| 2.5.1 睾丸及附睾表型分析 |
| 2.5.2 睾丸及附睾组织切片的检测 |
| 第3章 结果与分析 |
| 3.1 小鼠Dnajc5b基因的生物信息学分析结果 |
| 3.1.1 EST |
| 3.1.2 基因序列的 |
| 3.1.3 同源性的比较 |
| 3.1.4 小鼠的Dnajc5b基因的外显子 |
| 3.1.5 小鼠Dnajc5b基因的染色体定位 |
| 3.1.6 小鼠Dnajc5b基因翻译氨基酸 |
| 3.1.7 Dnajc5b基因的剪切本的阅读框 |
| 3.1.8 小鼠Dnajc5b蛋白结构域 |
| 3.1.9 蛋白质二级结构 |
| 3.1.10 Dnajc5b蛋白质的亚细胞定位 |
| 3.1.11 小鼠Dnajc5b基因蛋白质的理化性质 |
| 3.1.12 小鼠Dnajc5b蛋白质疏水性 |
| 3.1.13 蛋白质的跨膜区 |
| 3.1.14 Dnajc5b基因的酶切位点 |
| 3.2 Rcet1生物信息学分析结果 |
| 3.2.1 小鼠Rcet1的基因序列 |
| 3.2.2 EST |
| 3.3 小鼠Dnajc5b基因的克隆 |
| 3.3.1 睾丸的RNA提取 |
| 3.3.2 RT-PCR扩增 |
| 3.3.3 Dnajc5b基因的扩增 |
| 3.3.4 以小鼠睾丸cDNA为模板高保真PCR克隆目的基因 |
| 3.3.5 阳性克隆的筛选及鉴定 |
| 3.3.6 阳性克隆的检测 |
| 3.4 Dnajc5b差异表达检测分析 |
| 3.4.1 Dnajc5b在小鼠不同组织中差异表达检测分析 |
| 3.4.2 Dnajc5b在小鼠睾丸不同发育时期的差异表达检测分析 |
| 3.4.3 检测睾丸中Dnajc5b差异表达分析 |
| 3.4.4 检测Dnajc5b蛋白的差异表达分析 |
| 3.4.4.1 pEGFP-C3/Dnajc5b融合载体的构建与检测 |
| 3.4.4.2 pEGFP-C3/Dnajc5b融合基因亚细胞定位检测 |
| 3.5 Dnajc5b蛋白的诱导表达和分离纯化检测分析 |
| 3.5.1 Dnajc5b蛋白的诱导表达及检测分析 |
| 3.5.1.1 PET-28a/Dnajc5b融合表达质粒的构建与鉴定检测分析 |
| 3.5.1.2 Dnajc5b基因蛋白的表达及检测分析 |
| 3.5.2 分离纯化制备Dnajc5b蛋白及检测分析 |
| 3.5.2.1 分离纯化制备Dnajc5b蛋白 |
| 3.5.2.2 Dnajc5b蛋白分离纯化产物的检测分析 |
| 3.6 基因敲除小鼠Rcet1的检测 |
| 3.6.1 睾丸及附睾组织器官的检测 |
| 3.6.2 睾丸及附睾组织切片检测 |
| 第4章 结语 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 spata3在小鼠睾丸组织中的表达及定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 半定量RT-PCR检测spata3基因m RNA在小鼠各组织中的表达情况 |
| 2.2 Western blotting检测SPATA3蛋白在小鼠各组织中的表达情况 |
| 2.3 免疫组织化学染色检测SPATA3蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位 |
| 2.4 间接免疫荧光染色检测SPATA3蛋白在小鼠生精细胞中的亚细胞定位 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 spata3功能的初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 RT-PCR扩增spata3基因 |
| 2.2 pMD?19-T-spata3质粒的构建与鉴定 |
| 2.3 真核表达重组质粒pLV-EGFP(2A)Puro-spata3的构建与鉴定 |
| 2.4 重组质粒pLV-EGFP(2A)Puro-spata3在HEK293T细胞中的表达 |
| 2.5 过表达spata3基因对HEK293T细胞凋亡和自噬的影响 |
| 2.5.1 免疫荧光检测过表达SPATA3在HEK293T细胞中的定位分布 |
| 2.5.2 过表达spata3基因后细胞凋亡以及自噬相关蛋白的表达 |
| 2.6 重组过表达慢病毒载体瞬时转导HEK293T细胞的鉴定 |
| 2.7 重组过表达慢病毒载体转导GC2-spd细胞 |
| 2.7.1 过表达spata3单克隆稳定细胞株的建立及鉴定 |
| 2.7.2 过表达spata3单克隆稳定细胞株中细胞自噬相关蛋白的检测 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 插图、附表清单 |
| 英文名称缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 菌株 |
| 1.3 质粒 |
| 1.4 工具酶及主要试剂 |
| 1.5 引物 |
| 1.6 主要仪器及器材 |
| 1.7 试剂配制方法 |
| 第二章 实验方法 |
| 2.1 小鼠组织总RNA的提取 |
| 2.2 半定量RT-PCR分析spata3 mRNA组织特异性表达 |
| 2.3 实时荧光定量PCR检测spata3 mRNA阶段特异性表达 |
| 2.4 pMD-19-T-spata3的克隆及鉴定 |
| 2.5 重组表达载体pGEX6P-1-spata3的构建及鉴定 |
| 2.6 重组蛋白的诱导表达 |
| 2.7 重组蛋白的亲和层析纯化 |
| 2.8 Western blot鉴定纯化蛋白 |
| 2.9 Bradford法测定纯化蛋白浓度 |
| 2.10 多克隆抗体的制备 |
| 2.11 ELISA测定血清效价 |
| 2.12 Western blot检测抗体的特异性 |
| 2.13 免疫组化分析SPATA3的细胞定位 |
| 2.14 多重间接免疫荧光染色分析SPATA3的亚细胞定位 |
| 2.15 免疫共沉淀分析SPATA3与α-微管蛋白的相互作用 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 组织样晶总RNA的提取及鉴定 |
| 3.2 RT-PCR验证spata3组织特异性表达 |
| 3.3 实时荧光定量PCR分析spata3阶段特异性表达 |
| 3.4 pGEX6P-1-spata3质粒构建过程 |
| 3.5 spata3编码序列的扩增 |
| 3.6 pMD-19-T-spata3质粒的PCR和酶切鉴定 |
| 3.7 重组表达载体pGEX6P-1-spata3的PCR和酶切鉴定 |
| 3.8 DNA序列测定 |
| 3.9 重组蛋白的诱导表达 |
| 3.10 重组蛋白的的纯化和Western blot鉴定 |
| 3.11 多隆抗体的制备与检测 |
| 3.12 免疫组织化学检测SPATA3在曲精小管中的细胞定位 |
| 3.13 多重间接免疫荧光检测SPATA3的亚细胞定位 |
| 3.14 免疫共沉淀分析 |
| 第四章 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 睾丸生精细胞凋亡的研究概况 |
| 1 生理状态下的生精细胞凋亡 |
| 1.1 精原细胞的凋亡 |
| 1.2 精母细胞的凋亡 |
| 1.3 精子细胞的凋亡 |
| 2 生精细胞凋亡的生化特性 |
| 3 生精细胞凋亡及其生理意义 |
| 4 生精细胞凋亡的影响因素 |
| 4.1 激素影响 |
| 4.2 基因调控 |
| 4.3 其它因素影响 |
| 5 生精细胞凋亡的规律 |
| 6 细胞凋亡的检测方法 |
| 7 细胞凋亡的信号转导途径及凋亡信号转导图 |
| 参考文献 |
| 第二章 利用EST序列和RACE技术克隆新基因 |
| 1 基于EST的电子克隆策略 |
| 1.1 电子克隆的基本策略 |
| 1.2 EST序列的获取 |
| 1.3 EST序列拼接软件 |
| 1.4 EST应用中应注意的问题 |
| 2 RACE技术 |
| 2.1 原理 |
| 2.2 特点 |
| 2.3 RACE的缺陷与改良 |
| 3 小结 |
| 4 本试验研究的目的和意义 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第三章 猪TSARG7基因的克隆测序 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 猪EST序列的获取 |
| 2.2 EST序列的拼接 |
| 2.3 RT-PCR扩增ORF区 |
| 2.4 S'RACE和3'RACE扩增 |
| 2.5 PCR产物克隆测序 |
| 3 讨论 |
| 3.1 电子克隆技术的优缺点 |
| 3.2 TA克隆技术 |
| 3.3 TSARG7基因的克隆 |
| 参考文献 |
| 第四章 蛋白质序列的生物信息学分析 |
| 1 方法 |
| 1.1 ORF区预测 |
| 1.2 蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 |
| 1.3 蛋白质疏水性分析 |
| 1.4 蛋白质信号肽预测 |
| 1.5 跨膜区预测 |
| 1.6 亚细胞定位预测 |
| 1.7 蛋白质功能结构域预测 |
| 1.8 蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 ORF分析 |
| 2.2 氨基酸组成、分子量和等电点 |
| 2.3 疏水性分析 |
| 2.4 信号肽分析 |
| 2.5 跨膜区分析 |
| 2.6 亚细胞定位预测 |
| 2.7 蛋白质结构域预测 |
| 2.8 蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 猪TSARG7基因的组织表达谱分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 RNA的纯度和浓度 |
| 2.2 β-actin检测反转录效果 |
| 2.3 β-actin和TSARG7基因的荧光定量 |
| 2.4 TSARG7基因的组织表达谱分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品处理 |
| 1.2 总RNA的提取和RT-PCR分析 |
| 1.3 生精细胞的分离和纯化 |
| 1.4 荧光定量PCR反应 |
| 2 结 果 |
| 2.1 RT-PCR分析组织特异性表达 |
| 2.2 荧光定量PCR分析阶段特异性表达 |
| 3 讨 论 |
