牛玉虎[1]（2021）在《人间充质干细胞外泌体对海马神经再生及阿尔兹海默症动物模型治疗效应及机制的研究》文中研究表明背景:神经退行性疾病是一类以衰老为诱因的,进行性不可逆并严重影响相应神经系统功能的疾病。以阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）为代表,由于病人海马及皮层区的大量神经元死亡导致的脑萎缩,AD病人呈现了逐步退化的学习记忆能力并严重影响了其认知功能及身体健康。到目前为止,由于AD病因尚未明确,因此针对其病因进行治疗的手段尚未得到显着突破。而在哺乳动物脑内,本身存在一批特异性的成体神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）,这些干细胞持续分裂分化以维持生理水平的神经可塑性。因此,如何利用这类NSCs使其成为神经修复及神经再生的资源并完成对AD及其他神经退行性疾病的治疗任务是目前学界急需进一步解决的科学问题之一。间充质干细胞（MSCs）是一类以免疫调控、稳定自我更新及多向性分化为特征的成体干细胞。目前越来越多的研究认为MSCs外泌体是其行使细胞治疗功能,实现远端细胞细胞交互作用的重要细胞学基础。而是否MSCs外泌体能够达到调控神经再生,启动神经修复并恢复AD动物模型行为学的功能目前尚未可知。理解MSCs外泌体对AD动物模型的治疗效应及相关的生物学机制能够为未来神经退行性疾病的新药开发及相关分子靶点的选择提供新的理论依据。目的:外泌体是间充质干细胞行使其治疗学功能的关键生物学基础。本研究为探索人间充质干细胞（Human umbilical cord meschenymal stem cells,h UC-MSCs）来源的外泌体所富集的蛋白组学成分及相关功能,同时为了进一步研究其神经生物学意义,拟解决以下科学问题:1.MSCs外泌体的蛋白质组学成分及功能有哪些?2.MSCs外泌体是否具有促进神经分化的作用?3.MSCs外泌体是否能够改善动物在神经损伤后的行为学变化?4.MSCs外泌体对阿尔兹海默症（AD）动物模型是否具有治疗学效应?5.MSCs外泌体是否能够恢复AD动物模型的海马功能?6.MSCs外泌体对AD动物模型治疗效应的分子机制为何?方法:1.在本研究中,通过制备人脐带间充质干细胞,获得其外泌体并通过蛋白组学分析其主要蛋白及多肽的成分和功能。2.利用流式细胞仪检测了人脐带间充质干细胞关键生物学标记物的表达。通过蛋白免疫印迹,酶联免疫吸附等手段检测目标蛋白在不同处理中的表达。3.以小鼠为模型,通过行为学检测及脑片免疫荧光染色探索外泌体处理对小鼠认知,情绪行为的调控及海马神经再生的调控能力。4.利用链脲佐菌素（STZ）及Abeta淀粉样蛋白海马定点注射手段,构建急性海马损伤及AD模型。5.进一步通过siRNA敲降实验研究MSCs外泌体对AD神经保护的分子机制。结果:通过分离人脐带以制备人脐带间充质干细胞获得MSCs外泌体,流式细胞检测显示,MSCs高表达了MSCs特异性的生物标记物CD105,CD44和CD29低表达CD35,CD45,并同时具备MSCs的脂肪及骨分化功能。同时,通过蛋白质组学分析发现MSCs外泌体包含942中蛋白成分,主要富集调控代谢功能的蛋白及多肽成分。其中67中此前未见报道。通过外泌体注射发现,MSCs外泌体能够调控外周及中枢关键代谢因子脂联素的水平并同时能够改善小鼠海马区神经干细胞的生长及分化功能,而在生理状态下MSCs外泌体未能显着影响小鼠行为学。同时,MSCs外泌体能够对STZ导致的急性海马损伤具有显着的行为学保护效应,并能够相应的增强STZ处理小鼠海马区神经再生。在Abeta海马注射诱导的AD模型中,MSCs外泌体注射有效缓解了认知功能的减退及伴随的抑郁及焦虑情绪。同时,MSCs外泌体有效加速了AD模型海马组织新生神经元的生长及分化速度。通过ELISA实验发现,MSCs处理后的小鼠海马脑源性神经营养因子BDNF水平显着提高。同时,通过Dil染色结合BDNF抗体免疫荧光发现BDNF存在于MSCs外泌体中。而BDNF敲降后导致了MSCs外泌体对AD模型认知功能及情绪行为改善作用的下调。结论:MSCs外泌体富含大量代谢调控相关功能的蛋白及多肽成分,这些成分可能是有效促进海马神经再生的关键。在急性脑损伤状态下,MSCs外泌体能够有效促进海马神经再生并保护小鼠认知功能及抗抑郁能力免受STZ损伤。在AD模型导致的海马功能损伤中,MSCs外泌体具有显着的行为学保护作用,而MSCs外泌体对海马神经再生的促进作用是这种保护作用的神经生物学基础。同时,神经营养因子BDNF及相关的分子通路是MSCs外泌体对AD行为学保护效应的关键分子机制。
马灵志[2]（2021）在《CSF sTREM2在临床前阿尔茨海默病中的动态变化：CABLE研究》文中研究表明研究目的:近期的神经病理学,流行病学和遗传学等各方面的研究结果均表明,在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的发生、发展中先天免疫系统起着至关重要的作用。髓样细胞触发受体2（Triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2）是由TREM2基因表达产生的,是小胶质细胞在大脑中进行选择性表达的关键受体。TREM2的功能缺失可以促进AD的发生和进展。先前对晚期AD患者的研究报道称脑脊液（Cerebrospinal fluid,CSF）可溶性TREM2蛋白（Soluble TREM2protein,s TREM2）的浓度在疾病各个阶段呈现依赖性增加,并在早期症状阶段达到顶峰。但是,在尚未出现认知下降的临床前AD阶段,TREM2基因表达水平是否已经发生了病理水平上的改变,以及s TREM2与包括β-淀粉样蛋白（Amyloidβ,Aβ）、tau蛋白沉积以及神经退行性变在内的AD主要病理过程是否有关,这些问题目前仍不清楚。研究方法:本研究纳入对象来自中国老年人阿尔茨海默病生物标志物和生活方式研究（Chinese Alzheimer’s Biomarker and Lifestyl E,CABLE）队列。美国国立老年-痴呆协会研究所（National Institute on Aging-Alzheimer’s Association,NIA-AA）在2011年提出了一个基于AD生物标记物的描述性分类方案的研究框架,也就是AD的A/T/N分类体系。且有研究表明具有正常认知能力的成年人中有三分之一已经存在AD相关病理改变。根据以上提到的ATN研究框架和假设,我们将纳入研究的659例认知正常的参与者分为了4组即:0期（Stage 0）,正常CSF Aβ1-42、T-tau和P-tau组;1期（Stage1）,低CSF Aβ1-42、正常T-tau和P-tau组;2期（Stage2）,低CSF Aβ1-42、高T-tau和P-tau组;可疑的非AD病理组（Suspected non-AD pathology,SNAP）,正常CSF Aβ1-42、高T-tau和P-tau组。我们通过上述4个分组,探究临床前AD阶段CSF sTREM2的浓度变化。使用卡方检验或方差分析进行组间差异的检验,探究CSF sTREM2与AD的CSF核心生物标志物之间的关联时通过多元线性回归进行。研究结果:与Stage0相比,Stage1的CSF sTREM2水平降低（P<0.001）,然后在Stage2阶段升高（P=0.008）。SNAP组的CSF sTREM2也显着增加（P<0.001）,这表明升高的CSF sTREM2水平是对tau病理或神经元损伤（通过CSF P-tau或T-tau水平反映）的反应,与淀粉样变性过程无关。多元线性回归结果还显示,CSF sTREM2与Aβ1-42（β=0.192,P<0.001）,T-tau（β=0.215,P<0.001）和P-tau（β=0.123,P<0.001）呈正相关。按参与者的Aβ病理(Aβ1-42)和tau病理状态（P-tau）划分或参与者的Aβ病理(Aβ1-42)和神经退行性变状态（T-tau）划分的分组中重复上述分析,均得到类似结果。SNAPs指具有tau病理学/神经退行性变,无明显淀粉样变性的认知正常个体。我们将SNAPs与其余无症状的认知正常个体进行了比较,包括HC（Stage0）和临床前AD（Stage1和Stage2）。结果表明,与HC（P<0.001）和临床前AD（1期,P<0.001;2期,P=0.017）组相比,SNAP组中的CSF sTREM2水平明显增高。在控制了年龄之后,结果仍然存在。这些发现表明,升高的CSF sTREM2水平是对tau病理或神经元损伤（通过CSF P-tau或T-tau水平进行检测）的反应,与淀粉样变性无关。结论及意义:我们的研究表明CSF sTREM2水平在临床前AD阶段是动态变化的。在没有tau沉积和神经退行性变的情况下,Aβ病理与CSF sTREM2的减少有关。tau病理和神经变性与CSF sTREM2的增加有关。未来的研究应使用生物标志物进一步对临床前AD阶段进行分期,并探讨CSF sTREM2动态变化的生物学机制。
蒋学余[3]（2021）在《电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛模型大鼠中枢神经元-胶质细胞-趋化因子镇痛机制的研究》文中研究说明目的:本研究通过电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛模型大鼠进行干预,观察其损伤的神经元功能状态,及脊髓背角神经元-胶质细胞-趋化因子网络信号系统关键子的表达,探讨电针镇痛机制,为电针颈夹脊穴治疗神经根型颈椎病提供实验依据。方法:本研究分两部分实验进行。第一部分实验通过结（Sprague-Dawleg-SD）大鼠颈神经根建立神经根型颈椎病（Cervical Spondylotic Radiculopathy-CSR）神经病理性疼痛模型,在模型建立后通过检测其一般行为学表现及热刺激、机械刺激诱发痛、诱发电位来验证造模成功。然后将造模成功的48只大鼠分为4组,空白组、模型组、假手术组、电针组,术后2周电针组大鼠在绑缚下予以电针颈夹脊穴干预,模型组与假手术组予以同样绑缚,观察并记录各组大鼠热痛阈值及生化检测谷氨酸、前列腺素、NO含量,检测脊髓背角CGRP受体、AC、VGCC的表达。第二部分在第一部分造模基础上在颈神经根加置鞘内置管。将72只大鼠,分为空白组、模型组、假手术组、电针组、LAA星形胶质细胞抑制剂组（LAA组）及LAA+电针组,LAA组予以鞘内注射星形胶质细胞抑制剂LAA（L-α-aminoadi Pate）对星形胶质细胞进行抑制,免疫荧光法检测各组模型大鼠C6、C7脊髓背角CD11b/CR3、GFAP、CX3CR1受体、CCR2受体、TLR4、P38-MAPK、NF-κB表达,免疫组化检测C6、C7脊髓背角IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α的表达,并运用RT-PCR检测及Western blot检测丘脑、大脑皮层水平检测兴奋性氨基酸、炎症因子等含量及NMDA、AMPA表达。结果:第一部分结果显示:电针组能有效减轻CSR模型大鼠疼痛,降低电针组大鼠神经元中谷氨酸、前列腺素、NO含量均较模型组有明显改善（P<0.05）,观察脊髓背角脊髓背角CGRP受体、AC、VGCC表达量有明显降低（P<0.05）。第二部分结果显示:电针夹脊穴和鞘内注射LAA星形胶质细胞抑制剂均能有效减轻CSR模型大鼠疼痛,减少胶质细胞上CX3CR1受体、CCR2受体、TLR4的生成（P<0.05）,减少GFAP、CD11b/CR3表达（P<0.05）,能有效抑制各类神经炎症介质IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的合成和分泌（P<0.05）,可有效减低脊髓背角水平NMDA、AMPA的表达（P<0.05）。LAA组较电针组效果明显（P<0.05）。结论:1、电针颈夹脊穴能有效改善CSR模型大鼠神经病理性疼痛。2、电针夹脊穴能够有效减少CSR大鼠模型脊髓背角神经元神经递质的释放,减少神经肽、神经递质表面受体表达。3、电针夹脊穴能够在抑制胶质细胞激活与趋化因子生成的基础上,抑制各类神经炎症介质的合成和分泌。
李榕[4]（2021）在《体感与运动诱发电位联合监测技术用于术中脊髓损伤精准诊断的实验研究》文中认为目的:脊柱外科手术是目前治疗各种脊柱脊髓病变的有效手段。由于在手术中经常需要对脊柱施加敲击（挫伤）、撑开（牵拉）或推移（错位）等操作,有可能造成脊髓神经损伤,此外脊髓血供不足也是一个危险因素。目前术中神经电生理监测可以在术中检测到神经功能损害,对脊髓神经功能的整体性进行监测,但对判断脊髓损伤原因和位置指向性尚不明确。本研究旨在采用体感和运动诱发电位变化模式以及组织学评估相结合的方式用于识别术中医源性脊髓损伤的原因和位置。方法:本研究针对术中不同机械性脊髓损伤,设计了新型的脊髓损伤装置和特制椎夹建立挫伤、错位和牵拉脊髓损伤动物模型,并通过组织学和电生理进行验证。此外,在颈椎、胸椎、腰椎节段分别建立错位、牵拉和挫伤脊髓损伤模型,评估诱发电位变化模式判定脊髓损伤位置的价值。最后通过分析不同模式脊髓损伤体感和运动诱发电位变化特征,并结合组织学探讨神经病理学机制,进一步评价诱发电位模式变化识别脊髓损伤原因的价值。结果:1、挫伤导致脊髓组织出现明显的破坏和出血;脊髓牵张后未见明显的结构破坏,但可见散在的斑片状出血灶,主要集中在灰质边缘,涉及部分白质;脊髓错位导致组织明显破坏,轻微萎缩,导致灰质和腹侧白质的斑片状出血;同时三种不同机械性脊髓损伤均导致体感和运动诱发电位波幅降低和潜伏期延长。2、不同节段脊髓挫伤后均出现明显裂隙伤伴有空洞形成和出血。快蓝染色结果显示胸髓挫伤对皮质脊髓束和灰质组织破坏更严重。颈髓挫伤相比腰髓挫伤对灰质损害更严重。诱发电位结果显示颈髓挫伤后,上下肢体感和运动诱发电位均消失;胸髓挫伤以下肢体感诱发电位波幅降低和运动诱发电位潜伏期延长和波幅降低为特征;而腰椎挫伤以下肢运动诱发电位潜伏期和波幅的显着变化为主。颈椎牵拉以上肢和下肢运动诱发电位衰减为主;胸椎牵拉显示以下肢体感诱发电位潜伏期明显延长伴下肢运动诱发电位消失主要改变;而腰椎牵拉表现以下肢运动诱发电位潜伏期出现极大值分布为特点。但组织学染色仅见散在点状出血不伴有明显的组织破坏。颈椎错位损伤以上肢运动诱发电位衰减同时伴下肢运动诱发电位消失为特征;胸椎错位以下肢体感诱发电位波幅明显衰减伴运动诱发电位消失为主;此外,腰椎错位表现为下肢体感诱发电位波幅延长以及运动诱发电位波幅降低和潜伏期延长为主要改变。苏木素伊红染色显示不同节段的脊髓错位伤均导致脊髓组织出现萎缩、破裂和丢失。快蓝染色显示胸髓错位导致皮质脊髓束和白质丢失最严重的,而腰椎和颈椎错位以灰质的丢失更显着。3、挫伤、牵拉和错位机械性脊髓损伤导致原发性脊髓组织损害出现不同的空间分布和诱发电位模式差异,其中挫伤造成最大的组织损伤,表现为体感和运动诱发电位更明显的潜伏期延长和波幅降低;错位损伤导致白质组织（尤其是外侧白质）整体损失最多,表现出比挫伤更严重的运动诱发电位波幅降低;而牵拉损伤观察到细胞外间隙扩大,表现出体感诱发电位波幅轻微下降,但伴有运动诱发电位消失。此外,组织学评价和诱发电位结果之间也呈现显着的相关性。结论:本研究设计了新型的脊髓损伤装置和特制夹具建立了不同机械脊髓损伤动物模型,脊髓组织出现明显的破坏,符合临床相关机制的脊髓损伤过程。同一模式脊髓损伤在不同节段下表现出不同的病理表现,同时诱发电位模式的参数分布也出现相应的改变,进一步表明在术中联合判定体感和运动诱发电位的变化模式对判断和识别脊髓损伤位置有潜在价值。此外,三种不同机械性脊髓损伤导致脊髓组织损害出现不同的空间分布,同时诱发电位的变化模式也出现差异,这些结果表明综合分析体感和运动诱发电位的模式变化可用于鉴别不同原因的脊髓损伤。
努尔比亚·阿布拉[5]（2021）在《腰椎间孔狭窄症临床与影像特征及中药用药规律研究》文中认为背景:神经根型腰椎疾病是临床常见的腰椎退行性疾病。其中,腰椎间孔狭窄症（Lumbar foraminal stenosis,LFS）是主要的临床诊断之一。由于LFS缺乏特异性临床和影像学表现,临床对其认识不足,易引起漏诊误诊。因此,进一步探索临床和影像学特征及其诊断价值,准确鉴别LFS是腰椎退行性疾病病因诊断和精准医疗不可或缺的一部分。LFS通常因致狭窄因素导致椎间孔区域解剖结构的改变,并压迫脊神经根背根神经节引起下肢神经根性症状。其中,背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）压迫损伤的病理生理及其相关分子机制在LFS中具有重要临床意义。神经根性疼痛作为周围神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）,仍缺乏有效的治疗措施。目前,较低的临床诊断率和疗效对LFS患者的身心健康造成了重大损害,给社会带来了沉重的负担。一、腰椎间孔狭窄症的临床特征及其诊断价值研究目的:分析LFS患者的临床症状、体征和中医证型及其临床诊断价值,旨在为提高LFS的诊断水平,加强LFS对中医证型的认识,为合理制定治疗方案提供理论依据。方法:本研究针对2015年01月至2020年2月在中日友好医院疼痛科收入院并接受腰椎脊柱内镜手术治疗的328例腰腿痛患者的临床资料进行回顾性分析。根据患者术前诊断、术中探查和术后疗效选取符合纳入标准的LFS、LCCSLLRS和LDH患者,并分为LFS、LCS和LDH组。收集并整理一般资料、症状、体征、术前NRS评分、术前JOA评分、中医证型等临床指标,并进行各项临床指标的组间差异性,与LFS的相关性,及其诊断价值评价。结果:（1）三组患者中,根据单因素logistic回归分析发现,Kemp征（+）、梨状肌紧张试验（+）与LFS显着相关（P<0.01）。根据多因素logistic回归分析发现,Kemp征（+）是影响LFS诊断的独立影响因素（95%CI 1.579-10.773,P=0.004）。Kemp征（+）诊断LFS的ROC分析结果显示,其ROC曲线下面积为0.667,敏感性为73.3%、特异性为60%。（2）在LSS患者中,根据单因素logistic回归分析发现,坐位时疼痛（+）、卧位时疼痛（+）、间歇性跛行（+）、Kemp征（+）、梨状肌紧张试验（+）等与LFS显着相关（P<0.05）。根据多因素logistic回归分析发现,梨状肌紧张试验（+）是LFS的独立影响因素（95%CI 2.464-40.786,P=0.001）。梨状肌紧张试验（+）诊断LFS的ROC分析结果显示,其ROC曲线下面积为0.726,敏感性为56.7%、特异性为88.5%。（3）在LFS和LDH患者中,根据单因素logistic回归分析发现,年龄、前倾疼痛缓解（+）、Kemp征（+）、直腿抬高试验（+）等与LFS显着相关（P<0.05）。根据多因素logistic回归分析发现,前倾疼痛缓解（+）（95%CI 1.202-15.195,P=0.025）、Kemp 征（+）（95%CI 1.767-27.538,P=0.006）、直腿抬高试验（+）（95%CI 0.047-0.647,P=0.009）均为 LFS的独立影响因素。取各项独立影响因素ORs值的整数作为风险评分,制定简易诊断量表。根据总风险评分诊断LFS的ROC分析结果显示,其最佳诊断临界值为6分,曲线下面积为0.793,敏感性为63%、特异性为88%。结论:LFS具有特异性临床症状和体征,并在不同类型腰椎疾病中具有鉴别诊断价值。中医证型在一定程度上为LFS提供鉴别诊断依据。本研究结果可提高LFS的临床诊断水平,为合理、精准及个体化的诊疗提供依据。二、腰椎间孔狭窄症常规影像学特征及其与临床特征的相关性研究目的:分析LFS患者的影像学特征,评估椎间孔形态学改变程度及其与临床特征的关系,旨在为LFS的诊断和精准个体化的治疗提供理论依据。方法:本研究针对2015年01月至2020年2月在我院疼痛科收入院并接受腰椎脊柱内镜手术治疗的328例腰腿痛患者的影像和临床资料进行分析,经术前诊断、术中探查和术后疗效选取符合纳入标准的LFS和LCCSLLRS患者,并分为LFS和LCS组。收集并整理X线、CT和MRI相关影像学指标,并进行各项影像学指标的组间及组内差异性分析,定量影像学特征的诊断价值评价,不同影像学特征的相关性分析,以及影像特征与临床特征的相关性分析。结果:（1）LFS在神经根型腰椎退行性疾病中较常见,其中椎间孔狭窄最常受累节段为L4-5（53.3%）。（2）根据X线测量指标分析LFS组脊柱排列特征发现,与LCS组相比,LFS组矢状面运动范围在L5-S1椎间孔水平明显增大（P<0.001）、背伸角在L3-4/L4-5椎间孔水平明显减小（P<0.05）,动力移位距离和冠状位Cobb角明显增大（P<0.01）。（3）根据CT测量指标分析椎间孔区域形态特征发现,与LCS组相比,LFS组椎间孔面积明显减小,椎间孔高度、椎间隙高度、椎体高度、椎弓根高度均明显降低,上关节突关节面积和N-E角明显增大,小关节退变分级和椎间盘真空征发生率明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）分析MRI测量指标发现,在责任椎间孔节段LFS组椎间孔狭窄分级、腰椎间盘退变分级、Modic改变和许莫氏结节发生率高于LCS组,差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）LFS组不同影像学指标之间存在显着相关性（相关系数在-0.824至+0.886）。其中,椎间孔高度与椎间孔面积呈显着正相关（r=0.554）,与N-E角呈低度负相关（r=-0.368）。椎间孔宽度与椎间孔面积呈低度正相关（r=0.444）。小关节退变分级与上关节突关节面积呈高度正相关（r=0.886）。椎间盘退变分级与中、后-椎间隙高度呈高度负相关（r=-0.775,r=-0.824）。椎间盘退变分级与真空征呈低度正相关（r=0.420）。椎间盘退变分级与椎间楔形角呈低度正相关（r=0.498）。（6）根据ROC分析发现,椎间孔高度诊断LFS的最佳临界值为<9.34mm、曲线下面积为0.971、敏感度为91.3%、特异度为87.7%;椎间孔面积诊断LFS的最佳临界值为<36.95mm2、曲线下面积为0.904、敏感度为91.0%、特异度为80.0%。（7）基于logistic回归分析发现,臀部疼痛（+）、坐位时疼痛（+）、卧位时疼痛（+）、间歇性跛行（+）、梨状肌紧张试验（+）与LFS的影像学特征之间存在相关性（P<0.05）。结论:LFS具有特异性影像学特征,定量影像指标的诊断临界值为LFS提供诊断依据;影像学特征之间存在相关性,提示不同退变因素的相互作用关系构成了较复杂的椎间孔狭窄体系,其中纵向狭窄因素较为关键;影像学特征与临床特征之间的关系为LFS的特异性临床症状提供了客观依据。综上,通过结合常规影像学检查评估责任椎间孔的异常解剖学特征对LFS具有重要的诊断价值。三、腰椎间孔狭窄症的差异表达基因和关键通路鉴定及中药用药规律研究目的:基于生物信息学和网络药理学的方法,对椎间孔狭窄模型（CCD模型）中DRG损伤性NP的差异表达基因及其功能通路和作用于靶点的中药进行全面分析,旨在为明确LFS的DRG压迫损伤机制,为LFS的诊断和中医药治疗提供分子生物学依据。方法:本研究针对来自GEO数据库的基因芯片数据,进行数据处理和差异表达基因的筛选,并对差异表达基因进行生物信息学分析,构建核心基因的PPI网络,并以核心基因（靶点）作为切入点进一步进行候选组分及关键组分的筛选,根据获得的组分列表收集作用于靶点的中药,最终成功构建靶点—组分—中药网络,并系统地分析靶点、组分与中药之间的复杂关系。结果:（1）对CCD大鼠模型和假手术组大鼠差异表达基因数据进行标准化及处理,共筛选出1510个差异表达基因,其中上调基因有892个,下调基因有618个,考虑差异表达基因可能是DRG损伤性NP的潜在靶点。通过主成分分析（PCA）两组基因数据具有可比性,经热图分析发现样本重复性好,可用于后续研究。（2）根据差异表达基因的生物信息学分析发现,上调基因的重要通路、生物学过程、细胞组分和分子功能主要涉及细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、细胞黏附因子通路、PI3K-Akt信号通路、趋化因子信号通路、TNF信号通路、细胞因子和免疫应答等。下调基因的重要通路、生物学过程、细胞组分和分子功能主要涉及,神经活性配体受体相互作用通路、谷氨酸能突触通路、PPAR信号通路、cAMP信号通路、AMPK信号通路、突触间信号传递、跨突触膜通道、门控通道活动、钙离子结合等。（3）通过构建PPI网络并利用cytoHub插件筛选出10个核心基因,其中CASP3、IL-6、TP53、MMP9、IGF1在NP中的作用机制相对明确。（4）本研究通过核心基因获得的关键组分包括槲皮素、山奈酚、木犀草素、熊果酸、齐墩果酸、芹菜素等。（5）通过靶点-组分-中药网络获取的关键中药包括沙棘、麻黄、紫苏、芫荽、金银花、柴胡等。（6）根据候选中药的药味和归经进行分析发现,药味多属苦、甘。归经则以肝经居多。结论:本研究认为,CASP3、IL-6、TP53、MMP9、IGF1等核心基因及其免疫炎症和神经传导相关信号通路在DRG损伤性NP的发生、发展中有重要作用,为LFS的分子诊断开发和治疗靶点提供了理论依据;槲皮素、山奈酚、木犀草素、熊果酸、齐墩果酸、芹菜素等关键组分,以及沙棘、麻黄、金银花、柴胡、黄芩等中药在DRG损伤性NP中具有潜在的临床应用价值,为LFS的处方探索和后续实验研究提供了参考。
王亚[6]（2021）在《臭氧暴露所致小鼠呼吸道炎症和中枢神经系统退行性改变研究》文中指出研究背景地表臭氧（Ozone,O3）污染在我国呈逐年加重趋势。大量流行病学证据显示O3吸入暴露可引起机体多系统损伤。近年来O3暴露所致中枢神经系统退行性改变受到高度关注,但作用机制尚不清楚。我国已经进入老龄化社会,老年群体是空气污染以及神经退行性病变的易感群体。呼吸道是机体暴露O3的主要通道,本研究主要探索O3对小鼠呼吸道尤其是中枢神经系统的影响。研究目的以C57BL/6N小鼠为动物模型,应用微生物组学、转录组学、免疫组织化学和分子生物学等方法,研究O3暴露所致小鼠呼吸道和中枢神经系统毒性效应,为进一步阐明O3所致中枢神经退行性样变机制提供实验依据。研究方法将23只9月龄雄性C57BL/6N小鼠随机分为2组:过滤空气（对照）组和O3组,其中空气组11只,O3组12只。两组小鼠在相同暴露条件下,分别暴露过滤空气和1 ppm O3,每天暴露4小时,连续8周。暴露过程中观察记录小鼠生长状况和精神状态,定期测量体重。暴露结束后,Morris水迷宫测试小鼠空间学习记忆能力;旷场实验测试小鼠探索和焦虑情况;用BCA试剂盒分别测定肺灌洗液、血清和脑组织上清中总蛋白浓度;ELISA试剂盒测定肺泡灌洗液中炎症因子巨噬细胞炎性蛋白（MIP-2）和肿瘤坏死因子（TNF-α）表达水平;16S扩增子测序分析小鼠肠道微生态和肺灌洗液微生态;免疫组化法检测脑组织中p-Tau和Tau表达水平;Western blot法测定脑皮质中α-Synuclein、p-Tau和Tau蛋白水平;用转录组测序检测嗅球和海马组织差异基因表达,并用荧光定量q PCR对差异基因进行验证。用SPSS22.0软件,R和Graphpad5.0对数据进行方差分析、两独立样本t检验、单因素方差分析和Spearman相关性分析。检验水准P=0.05。研究结果1.小鼠暴露期间生长状况:一般生长状况良好,体重和精神状况在暴露期间均无明显变化。2.空间学习记忆能力变化:定位航行实验中O3组小鼠的逃避潜伏期较空气组小鼠略长;空间探索实验中O3组小鼠游过平台位置的次数及相关相限停留时间略有减少,但无统计学差别。说明O3组小鼠空间学习和记忆能力有下降趋势。3.探索和焦虑情况改变:两组小鼠均未表现明显焦虑。4.脑皮质p-Tau、Tau和α-Synuclein蛋白表达水平:同空气组相比,O3组小鼠皮质中p-Tau（P=0.004）和α-synuclein（P=0.040）蛋白水平显着增加。Tau表达量两组间无统计学差异。5.肠道微生态改变:与空气组相比,O3暴露可影响肠道菌群的α多样性（P=0.013）和β多样性（P=0.016）。6.肺组织微生态改变:与空气组相比,O3可影响肺泡灌洗液菌群的α多样性（P=0.042）和β多样性（P=0.056）。7.肺灌洗液炎症因子水平:与空气组相比,O3组肺灌洗液中的炎症因子MIP-2和TNFα浓度显着增加;总蛋白有增加趋势,但无统计学意义。对属水平差异菌和炎症因子表达水平进行Spearman相关分析,发现MIP-2与Aerococcus有显着相关性。8.脑组织基因差异表达:与空气组相比,O3组嗅球组织的差异表达基因143个,其中130个表达上调,13个基因表达下调;海马组织69个差异表达基因,其中64个基因表达上调,5个基因表达下调。O3组海马差异基因功能与42条代谢通路关联,嗅球差异基因功能与46条代谢通路关联。对筛选出的16个差异基因进行了q PCR验证,结果与转录组测序结果一致。结论1.C57BL/6N小鼠暴露1 ppm O3 8周学习记忆能力呈轻微减退趋势。2.O3暴露可引起神经退行性病变相关蛋白α-synuclein高表达和Tau蛋白磷酸化。3.O3暴露可影响嗅球和海马基因表达。4.O3暴露可引起肠道菌群及肺菌群紊乱,其中肺菌群失调与肺炎症反应有关。
张鹏飞[7]（2021）在《大鼠脑缺血后TDP-43变化及人参皂苷Rg1对其调节机制研究》文中研究说明[目 的]1.观察大鼠脑缺血后皮质区TDP-43的变化,探明其变化规律及机制;2.探究人参皂苷Rg1对脑缺血后TDP-43表达的调节作用及机制,为防治脑缺血提供理论基础。[方 法]本实验用SD雄性成年大鼠96只,随机分为Sham组、脑缺血（MCAO）组、生理盐水治疗（NS）组、人参皂苷Rg1治疗（Rg1）组四个大组,各大组再根据取材时间分为3d、7d和14d组（n=4）。经神经功能评价和MRI检测后,各组在相应时间点灌注取脑后,留取脑缺血皮质区脑组织,应用Western blot法检测TDP-43、p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白的变化。运用QPCR检测TDP-43 mRNA的变化。运用免疫组织化学染色观察TDP-43的分布变化。应用IBM SPSS Statistics 25对数据进行单因素方差分析及两两比较,P<0.05时,差异就有统计学意义。[结 果]1.经Bederson神经功能缺失评分可见MCAO组神经功能缺失明显,Rg1组神经功能恢复更快;头颅核磁共振成像T2WI显示MCAO组出现明显的高信号影及脑肿胀,Rg1组较NS组减轻;2.采用Western blot、免疫组化和QPCR检测大鼠永久性脑缺血后缺血皮质区TDP-43变化如下:与Sham组相比,MCAO组和NS组各时间点TDP-43表达水平明显增加,有统计学意义（P<0.05）;与NS组相比,Rg1组在各时间点的TDP-43表达下降,具有统计学意义（P<0.05）。3.p-ERK变化如下:Western blot显示,与Sham组比较,MCAO组和NS组各时间点p-ERK蛋白表达降低,具有统计学意义（P<0.05）;与NS组相比,Rg1组p-ERK表达增加,具有统计学意义（P<0.05）。4.p-JNK变化如下:Western blot显示,与Sham组比较,MCAO组和NS组各时间点p-JNK蛋白表达上调,具有统计学意义（P<0.05）;与NS组相比,Rg1组p-JNK表达下调,具有统计学意义（P<0.05）。5.p-p38 变化如下:Western blot 显示,与 Sham 组比较,MCAO组和NS组各时间点p-p38蛋白表达明显增加,具有统计学意义（P<0.05）;与NS组相比,Rg1组p-p38表达明显降低,具有统计学意义（P<0.05）。[结 论]1.大鼠永久性脑缺血后的神经功能下降可能与TDP-43过度表达相关;2.人参皂苷Rg1可能通过下调TDP-43减轻永久性脑缺血所致的神经退变及神经功能障碍;3.人参皂苷Rg1可能经MAPK信号通路降低脑缺血后TDP-43的过表达。
郑超然[8]（2021）在《Sigma1R对大鼠脊髓运动神经元的功能影响及肝细胞癌中SNHG1基因调控网络的研究》文中研究指明肌萎缩性脊髓侧索硬化症（Amyotrophiclateral sclerosis,ALS）,是一种影响脊髓和大脑运动神经元（Motorneuron,MN）的神经退行性疾病。其特征是在疾病过程中患者上（UMN）、下（LMN）运动神经元发生退行性变性,可导致多个脑区（包括大脑皮层运动区、脑干和脊髓部分）中的运动神经元丧失功能,进而影响肌力、呼吸、吞咽等功能,最终致使患者瘫痪以及死亡。ALS引起的神经元功能障碍导致的突触传递异常,神经元兴奋-抑制平衡失衡对于神经元影响深远,因此,了解在ALS病程中脊髓运动神经元是如何受到影响,能否通过其他途径来弥补以改变疾病的病程,能为推进疾病治疗方法的进步提供思路。Sigma1R是一种较小的（仅28 KDa）、高度保守的跨膜蛋白,位于运动神经元突触后C-终末的下池（Subsurfacecisternae）,通常特异性地在线粒体相关膜（MAM）区域的内质网膜上富集。在动物体内,Sigma1R选择性高表达于神经系统,尤其是脊髓的运动神经元中。研究显示Sigma1R的缺失突变可导致一种被称为ALS16的神经退行性疾病或者其它类似的运动神经元缺陷。此外,即使在非Sigma1R突变的病例中,Sigma1R也被发现参与ALS的发病。我们认为,Sigma1R在神经系统中可能参与介导神经发生等一系列过程的调节,并广泛参与疾病病程中的各种细胞过程。我们的前期实验已经验证Sigma1R敲除的大鼠表现出神经损伤相关的表型,随后我们分离大鼠背部的脊髓,采用RNA-seq技术进行对照组（野生型组）和基因敲除组（Sigma1RKnockout组）的转录组学研究。最终得到在Sigma1R-/-中上调的基因为551个,下调的基因为674个。通过Sigma1R敲除后上调基因的KEGG功能富集分析我们发现HVP感染过程和PI3K-Akt信号通路相关基因功能的富集。通过Sigma1敲除后分析下调基因的KEGG功能富集发现钙信号通路和γ-氨基丁酸等相关功能的富集。通过Sigma1R敲除后上调基因的GO功能富集分析我们发现,神经元鞘和轴突鞘相关功能的富集。通过Sigma1R敲除后下调基因的GO功能富集分析可以检测到大量神经递质和突触相关功能的富集。在对Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元的影响进行研究的过程中,我们以脊髓腹角运动神经元的数量作为体现相应的脊髓目标脑区的功能受损程度的重要指标。尼氏染色结果显示,在敲除Sigma1R基因后,大鼠脊髓运动神经元在六月龄时就已经存在数量减少,细胞体积萎缩的现象,该现象会随着年龄的增加而愈趋严重,在一年龄时神经元的数量显着降低,神经元的胞体体积也显着降低,提示敲除Sigma1R基因后,大鼠脊髓运动神经元会发生进行性的退行,这种现象可能是Sigma1R基因参与神经退行性疾病的病理生理过程的重要证据之一。通过对突触囊泡糖蛋白（SV2B）的标记显示,在敲除Sigma1R基因后,大鼠脊髓运动神经元胞体上的兴奋性突触连接数量显着减少,其原因可能与神经元的数量整体减少有关;同时神经元的突触发生和损伤修复功能的弱化也有可能导致神经元突触末梢的发育和维持发生障碍,从而无法将兴奋性突触的数量维持在原本的水平。随后我们使用透射电镜方法对脊髓运动神经元突触的超微结构进行了观察,结果显示,在敲除Sigma1R基因后,大鼠脊髓运动神经元突触中突触前活性带的长度没有显着变化,突触间隙变宽,突触后致密区显着增厚,提示Sigma1R敲除对神经元突触前释放递质的能力影响不大,但会使突触可塑性降低。电生理技术是研究神经元生理学活动的直接手段。通过对急性分离脊髓脑片进行膜片钳记录,我们得出以下结论,Sigma1R敲除大鼠和野生型大鼠相比:（1）脊髓腹角运动神经元的兴奋性明显增高,静息膜电位明显降低,膜电阻无显着变化,被给予电流刺激之后所产生的动作电位的最大幅度明显增高。（2）动作电位的幅度略小,峰型更宽,复极化所需要的时间更长,并且后超极化电位更小,指示钾离子流出过程的减慢。（3）激发动作电位的频率普遍更高,指示Sigma1R敲除能使神经元更易兴奋,且兴奋水平更高。（4）PSC频率显着更高,说明在正常生理条件下其囊泡释放的数量更多,提示更频繁的突触前活动;而PSC的幅度在两者间没有显着差异,说明两者在正常生理条件下突触后受体水平方面差别不大。（5）mEPSC频率略高于野生型,说明在没有动作电位的作用下其囊泡释放的数量更多,提示更频繁的突触前活动;mEPSC幅度显着升高,说明缺失Sigma1R基因的神经元的兴奋性突触后受体水平和反应能力的升高;电流峰面积更大,说明突触后对信号接受能力更强。在上述研究之外,我们对肝细胞性肝癌（HCC）患者的GDC数据进行了整理和挖掘,寻找其中关键的lncRNA-miRNA-mRNA网络和竞争性内源RNA（ceRNA）。我们发现SNHG1在HCC患者中过表达。SNHG1的上调与几种主要生物学功能的富集有关,包括细胞增殖,转录和蛋白质结合。小核仁RNA宿主基因1（SNHG1）,E2F8（E2F转录因子8）,FANCE（FA互补组E）和LMNB2（编码lamin B2）的表达趋势相似。在与SNHG1相关的网络中,SNHG1（对数秩p值=0.0643）,E2F8（对数秩p值=0.000048）,FANCE（对数秩p值=0.00125）和LMNB2（对数秩p）的高表达水平值=0.0392)与低生存率显着相关。单细胞分析表明,E2F8可能参与肿瘤发生或癌症发展。
杨思浪[9]（2021）在《HIV-1囊膜蛋白gp120诱导神经损伤的关键区筛选及其动物模型的建立》文中研究表明背景:艾滋病（HIV-1）患者逐年上升,虽然联合抗病毒治疗大大减少了HIV患者体内外周的病毒复制,但是在脑部区域,病毒的复制仍较为严重。在HIV-1患者中有部分会发展成HAND（HIV相关的神经认知障碍）。HAND的产生原因中HIV-1的病毒蛋白起到了重要作用。比如gp120、tat、vpr等蛋白,在中枢神经系统中通过直接或间接的方式损伤神经元,引起认知障碍。目前,尚无理想的神经艾滋病动物模型用来探索HAND的发生机制和开发有效的治疗方式。目的:将在EcoNDK病毒的基础上,构建携带HIV-1 gp120蛋白的且能够感染小鼠的嵌合病毒,感染小鼠构建HAND模型并探究gp120各区域在神经损伤过程中的重要性和作用机制,后续用于抗HIV神经损伤药物的筛选。方法:将gp120各段重新插入至EcoNDK病毒中gp70片段中的脯氨酸富集区,构建出具有感染力的EcoNDK-gp120病毒,在体外探索EcoNDK-gp120感染巨噬细胞后对相关细胞因子表达的影响。下一步通过EcoNDK-gp120感染小鼠构建HIV相关神经损伤小鼠模型,同时完成对小鼠模型的分子和动力学检测以及神经认知水平检测。结果:构建了EcoNDK-gp120病毒,其中EcoNDK-C2、V4、V5能在体外感染也原代巨噬细胞并造成促炎因子和趋化因子mRNA水平显着上调;EcoNDK-C2感染小鼠后,能引起体内在小鼠体内促炎因子和趋化因子mRNA水平的上调,并且EcoNDK-C2、V4、V5相比较于EcoNDK有明显高的错误次数,并且能检测到脑组织中P24蛋白的表达,同时发现大脑中存在的注射后导致的空泡化结构。随后以EcoNDK-V5病毒构建的HIV相关神经损伤模型,探究了小鼠体内EcoNDK-V5病毒的载量与感染时间和注射剂量的关系,完成了其动力学研究。在EcoNDK-V5基础上,进行了初步的机制研究,发现紧密连接蛋白（ZO-2）的mRNA水平上调,并发现CCL2抑制或敲除的条件下,EcoNDK-V5不足以引起小鼠行为上神经认知障碍。结论:在前人EcoNDK基础上,构建的含有不同大小gp120片段的EcoNDKC2、V4、V5病毒,具有感染小鼠的能力,并且感染小鼠相比于EcoNDK所造成的神经认知障碍有不同程度的加重。这充分说明gp120的表达能诱导小鼠的神经认知损伤,并且验证了EcoNDK-V5会导致小鼠血脑屏障紧密连接蛋白ZO-2的mRNA水平下降,且EcoDNK-V5引起神经损伤需要CCL2的协同。构建的EcoNDK-V5小鼠模型可以用来可作为神经艾滋病动物模型用于探索损伤分子机制和抗HAND药物的筛选。
王子钧[10]（2021）在《JNK抑制剂D-JNKI1缓解帕金森病多巴胺能神经退行性变和减少阿尔兹海默病的老年斑沉积》文中认为目的:神经退行性疾病是脑和脊髓中的神经元逐渐丢失所导致痴呆等症状的一类退行性疾病,好发于中老年人,包括阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease,AD）、帕金森病（Parkinson’s disease,PD）等,其病因尚不完全清楚。c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）通路在AD和PD的病理机制中发挥着关键作用,并日益被认为是其发病机制中的重要组成部分。因此,JNK抑制剂可能为神经退行性变提供有前景的防治策略。D-JNKI1是一种新型JNK抑制剂,具有许多优点,是目前为止最具特异的JNK抑制剂。本实验采用C57BL/6小鼠和SHSY-5Y细胞构建的PD模型以及APPswe/PS1E9双转基因小鼠AD模型为研究对象,采用形态学实验、行为学实验以及分子生物学实验等研究方法,探究D-JNKI1对PD和AD模型中神经元的作用及其所涉及的分子机制,为D-JNKI1成为防治PD和AD中的潜在药物提供实验依据。研究方法:采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）诱导的亚急性C57BL/6小鼠PD模型和1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridiniumion,MPP+）诱导的SH-SY5Y细胞PD模型为研究对象,探讨D-JNKI1对PD神经退行性变的影响;同时采用APPswe/PS1E9双转基因小鼠探讨D-JNKI1对AD大脑皮层和海马β淀粉样蛋白（Amyloid beta,Aβ）沉积的影响。1.使用旷场实验和牵引试验检测PD小鼠行为学的变化。2.使用免疫组化和Western blotting检测D-JNKI1对MPTP/MPP+诱导的PD模型多巴胺能神经元的保护作用及其机制。3.使用试剂盒检测SH-SY5Y细胞中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平和线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）。4.使用CCK-8试验和TUNEL检测SH-SY5Y细胞活力和凋亡情况。5.使用免疫组化检测APPswe/PS1E9双转基因小鼠大脑皮层和海马中Aβ沉积。6.使用Western blotting分别检测D-JNKI1对大脑皮层和海马淀粉样前体蛋白（amyloid precusor protein,APP）裂解、神经元凋亡和Tau蛋白磷酸化的影响及机制。结果:一、D-JNKI1在PD细胞和动物模型中的作用:1.D-JNKI1缓解MPTP诱导的PD行为学症状。2.D-JNKI1缓解MPTP诱导的黑质（substantia nigra,SN）和纹状体（corpus striatum,CPU）中多巴胺能神经元和神经纤维数量的减少,并使MPTP诱导的酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）和多巴胺转运体（dopamine transporter,DAT）表达水平的下降得到缓解;D-JNKI1缓解MPP+诱导的SH-SY5Y细胞TH表达水平的下降。3.D-JNKI1抑制MPTP诱导的小鼠脑内JNK磷酸化;并使MPP+诱发的SH-SY5Y细胞中JNK和c-Jun磷酸化水平受到显着抑制;D-JNKI1抑制MPTP诱发的ERK磷酸化但不影响p38磷酸化水平。D-JNKI1抑制MPP+诱发的p38磷酸化水平的增高,但不影响ERK磷酸化水平。4.D-JNKI1抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞中ROS的产生,并使MPP+诱导的SH-SY5Y细胞MMP降低得到缓解。5.D-JNKI1抑制MPTP/MPP+诱导的Bcl-2/Bax比值的降低和caspase-3及cleaved-caspase-3水平的升高;TUNEL显示D-JNKI1缓解MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。二、D-JNKI1在AD动物模型中的作用:1.D-JNKI1减少AD小鼠大脑皮层和海马中Aβ阳性产物覆盖的区域;降低大脑皮层和海马中APP的磷酸化水平和s APPβ/s APPα比值。2.D-JNKI1对脑中APP水解酶α-分泌酶解整合素金属蛋白酶（α-disintegrin and metalloproteinase-10,ADAM10）、β-分泌酶（β-site amyloid cleavage enzyme-1,BACE1）和早老素1（presenilin 1,PS1）的表达水平无显着影响。3.D-JNKI1抑制脑中JNK和c-Jun的磷酸化;抑制脑中ERK和p38的磷酸化。4.D-JNKI1升高大脑皮层中Bcl-2/Bax比值,但降低海马中Bcl-2/Bax比值,对大脑皮层和海马中caspase-3的表达水平无显着影响。5.D-JNKI1对脑中Tau蛋白磷酸化无显着影响。结论:1.D-JNKI1通过抑制JNK通路来缓解MPTP/MPP+诱导的PD模型中多巴胺能神经退行性变。2.D-JNKI1通过JNK通路减少AD小鼠大脑皮层和海马中β淀粉样蛋白的沉积。以上研究为D-JNKI1有望成为PD和AD的潜在防治手段提供了实验依据。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写中英文对照 |
| 前言 |
| 第一章 人脐带间充质干细胞外泌体对小鼠海马损伤的改善作用及机制研究 |
| 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 研究材料 |
| 1.1.1 脐带来源 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要耗材 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.1.5 主要溶液配制 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 hUC-MSCs分离及培养 |
| 1.2.2 hUC-MSCs外泌体的分离 |
| 1.2.3 hUC-MSCs的鉴定 |
| 1.2.4 hUC-MSCs外泌体的电镜观测 |
| 1.2.5 hUC-MSCs外泌体的定量测定 |
| 1.2.6 免疫蛋白印迹实验 |
| 1.2.7 外泌体蛋白质组学分析 |
| 1.2.8 动物实验 |
| 1.2.9 酶联免疫吸附实验 |
| 1.2.10 行为学检测 |
| 1.2.11 免疫荧光实验 |
| 1.2.12 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 MSCs外泌体制备及蛋白质组学分析结果 |
| 2.2 hUC-MSCs外泌体对脂联素水平的调控 |
| 2.3 生理条件下hUC-MSCs外泌体对动物认知无显着影响 |
| 2.4 hUC-MSCs外泌体处理增强海马神经分化功能 |
| 2.5 hUC-MSCs外泌体增加海马DG区神经元再生 |
| 2.6 hUC-MSCs外泌体对STZ导致的脑损伤的治疗作用 |
| 2.7 基于蛋白质谱分析探讨hUC-MSCs外泌体其他神经保护效应的可能性 |
| 3 讨论 |
| 第二章 人脐带间充质干细胞外泌体对阿尔兹海默式症动物模型的保护作用及机制的研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 细胞及外泌体 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要耗材 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 实验动物处理 |
| 1.2.2 行为学检测 |
| 1.2.3 BrdU标记及神经再生免疫荧光检测 |
| 1.2.4 小鼠应激性压力水平检测 |
| 1.2.5 神经营养因子表达水平检测 |
| 1.2.6 细胞培养与细胞免疫荧光染色 |
| 1.2.7 hUC-MSCs脑源性神经营养因子siRNA处理 |
| 1.2.8 BDNF敲降外泌体对AD小鼠行为学保护效应的研究 |
| 1.2.9 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 hUC-MSCs外泌体对AD动物模型的行为学保护作用 |
| 2.2 hUC-MSCs外泌体对AD动物模型的神经再生促进作用 |
| 2.3 hUC-MSCs外泌体对细胞脑源性神经营养因子的促进功能 |
| 2.4 敲降脑源性神经营养因子水平阻止了hUC-MSCs外泌体对AD动物模型的行为学保护作用 |
| 3 讨论 |
| 研究总结 |
| 参考文献 |
| 综述 人间充质干细胞外泌体:神经再生及保护的新型载体 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 研究对象与方法 |
| 1 CABLE数据库 |
| 2 人群的选择 |
| 3 脑脊液各生物标志物的采集和测定 |
| 4 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 纳入人群的基本特征 |
| 2 不同生物标志物分组之间CSF sTREM2水平的差异 |
| 3 无症状认知正常SNAP组中的CSF sTREM2水平 |
| 4 CSF sTREM2与AD核心生物标志物之间的关系 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 sTREM2在阿尔茨海默病中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛大鼠伤害性感觉神经元兴奋性的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 大鼠模型建立 |
| 2.4 大鼠CSR模型造模评价标准 |
| 2.5 分组与处理 |
| 2.6 检测指标与方法 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠热刺激诱发痛、机械刺激诱发痛 |
| 3.2 大鼠脊髓神经潜伏期诱发电位 |
| 3.3 四组脊髓背角谷氨酸、前列腺素、NO含量比较 |
| 3.4 四组脊髓背角CGRP受体、AC、VGCC表达比较 |
| 4 小结 |
| 第二部分 电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛大鼠中枢(CNS)小胶质细胞激活-中枢敏化的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 大鼠模型建立 |
| 2.4 大鼠CSR模型造模评价标准: |
| 2.5 分组与处理 |
| 2.6 检测指标与方法 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠热刺激诱发痛、机械诱发痛 |
| 3.2 各组大鼠脊髓神经潜伏期诱发电位 |
| 3.3 各组大鼠C6、C7 脊髓背角CD11b/CR3、GFAP、CX3CR1 受体、CCR2 受体、TLR4、P38-MAPK、NF-κB表达比较 |
| 3.4 六组大鼠C6、C7 脊髓背角IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达比较 |
| 3.5 六组大鼠C6、C7 脊髓背角NMDA、AMPA表达比较 |
| 4 小结 |
| 第三部分 讨论分析 |
| 1 中医学对神经根型颈椎病的认识 |
| 1.1 病名及症状 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 颈椎病与经脉的关系 |
| 1.4 颈椎病与经筋的关系 |
| 1.5 中医治疗颈椎病的研究进展 |
| 2 现代医学对神经根型颈椎病的研究 |
| 2.1 现代医学对神经根型颈椎病研究 |
| 2.2 颈椎的解剖学构造 |
| 2.3 现代医学对颈椎病病因认识 |
| 2.4 现代医学对颈椎病的治疗 |
| 2.5 电针疗法与神经根型颈椎病 |
| 3 神经根型颈椎病与神经病理性疼痛 |
| 3.1 中枢敏化与神经病理性疼痛 |
| 3.2 “神经元-胶质细胞-趋化因子”网络信号系统与神经病理性疼痛 |
| 4 本次研究结果分析 |
| 4.1 电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛大鼠伤害性感觉神经元兴奋性的影响 |
| 4.2 电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛大鼠中枢(CNS)小胶质细胞激活-中枢敏化的影响 |
| 5 不足与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 神经根型颈椎病治疗进展及国内外研究现状及动态 |
| 参考文献 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 诱发电位概述 |
| 1.1.1 体感诱发电位 |
| 1.1.2 运动诱发电位 |
| 1.2 脊髓损伤模型的研究进展 |
| 1.2.1 挫伤模型 |
| 1.2.2 横切损伤模型 |
| 1.2.3 错位损伤模型 |
| 1.2.4 压迫损伤模型 |
| 1.2.5 牵拉损伤模型 |
| 1.2.6 化学损伤模型 |
| 1.3 不同模式脊髓损伤异质性研究现状 |
| 1.3.1 原发性生物力学机制 |
| 1.3.2 继发性分子学机制 |
| 1.3.3 病理学改变 |
| 1.3.4 临床诊断 |
| 1.4 本课题的研究内容 |
| 第二章 不同模式脊髓损伤模型的建立 |
| 2.1 控制挫伤动量建立大鼠脊髓挫伤模型 |
| 2.1.1 材料和方法 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.1.3 讨论 |
| 2.2 控制位移建立大鼠脊髓牵拉损伤模型 |
| 2.2.1 材料和方法 |
| 2.2.2 结果 |
| 2.2.3 讨论 |
| 2.3 控制位移建立大鼠胸脊髓错位损伤模型 |
| 2.3.1 材料和方法 |
| 2.3.2 结果 |
| 2.3.3 讨论 |
| 2.4 节段性腰动脉结扎建立大鼠缺血脊髓损伤模型 |
| 2.4.1 材料和方法 |
| 2.4.2 结果 |
| 2.4.3 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 诱发电位模式变化识别不同位置脊髓损伤 |
| 3.1 不同位置脊髓挫伤的诱发电位模式变化 |
| 3.1.1 材料和方法 |
| 3.1.2 结果 |
| 3.1.3 讨论 |
| 3.2 不同位置脊髓牵拉的诱发电位模式变化 |
| 3.2.1 材料和方法 |
| 3.2.2 结果 |
| 3.2.3 讨论 |
| 3.3 不同位置脊髓错位损伤的诱发电位模式变化 |
| 3.3.1 材料和方法 |
| 3.3.2 结果 |
| 3.3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 诱发电位模式特征识别不同模式脊髓损伤 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 文献综述 腰椎间孔狭窄症的解剖学基础与中西医临床应用研究进展 |
| 1. 腰椎间孔狭窄症致病因素与西医诊治现状 |
| 2. 腰椎间孔狭窄症的中医诊疗进展 |
| 参考文献 |
| 第一部分 腰椎间孔狭窄症的临床特征及其诊断价值研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1. 研究方法和研究对象 |
| 2. 分组依据 |
| 3.数据收集和观察指标 |
| 4. 统计分析 |
| 结果 |
| 1. 患者人口学和疾病特征 |
| 2. 临床症状、体征和中医证型差异性分析 |
| 3. LFS的临床特征分析及其诊断价值评价 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 腰椎间孔狭窄症常规影像学特征及其与临床特征的相关性研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1. 研究方法和研究对象 |
| 2. 分组及评价依据 |
| 3. 数据收集和观察指标 |
| 4. 手术方法和术后处理 |
| 5. 统计分析 |
| 结果 |
| 1. 人口学特征和疾病特征 |
| 2. LFS脊柱排列特征 |
| 3. CT测量指标分析 |
| 4. MRI测量指标分析 |
| 5. 不同影像学特征的相关性分析 |
| 6. 影像学特征的诊断价值评价 |
| 7. 临床表现与影像学特征的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1. LFS的常规影像学特征分析 |
| 2. 影像学特征与临床症状的相关性分析 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 腰椎间孔狭窄症差异表达基因和关键通路的鉴定及中药用药规律研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1. 基因芯片来源 |
| 2. 研究方法 |
| 结果 |
| 1. 数据处理和差异基因的筛选 |
| 2. 差异表达基因的生物信息学分析 |
| 3. PPI网络分析及核心基因筛选 |
| 4. 核心基因相关候选成分及关键成分筛选 |
| 5. 中药匹配并构建靶点-成分-中药网络 |
| 6. 中药特征分析 |
| 讨论 |
| 1. 上调基因功能富集分析 |
| 2. 下调基因功能富集分析 |
| 3. 核心基因与神经病理性疼痛 |
| 4. 核心成分及其镇痛作用机制 |
| 5. 中药及其镇痛作用机制 |
| 6. 本研究的创新性、不足与展望 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.实验材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 臭氧诱发神经系统损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 NLRP3炎性小体在中枢神经系统疾病中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 论文创新点 |
| Sigma1R 对大鼠脊髓运动神经元的功能影响 |
| 第一章 背景概述 |
| 1.1 肌萎缩性脊髓侧索硬化症概述 |
| 1.2 Sigma1R概述 |
| 1.2.1 Sigma1R的发现及其分子药理学特征 |
| 1.2.2 Sigma1R的结构和定位 |
| 1.2.3 Sigma1R的分子功能 |
| 1.2.4 Sigma1R作为配体伴侣 |
| 1.2.5 Sigma1R的人类遗传学研究 |
| 1.3 Sigma1R与神经退行性疾病 |
| 1.4 ALS与脊髓运动神经元 |
| 1.5 转录组分析 |
| 1.6 电生理记录在研究神经元特性中的应用 |
| 1.6.1 动作电位 |
| 1.6.2 mEPSC微小兴奋性突触后电流 |
| 1.7 神经元功能与神经元膜表面各种通道的关系 |
| 第二章 Sigma1R敲除影响脊髓运动神经元的转录组分析及验证 |
| 引言 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物及分组 |
| 2.1.2 主要实验仪器及耗材 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要试剂配制和用具预处理 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠组织样本转录组测序分析 |
| 2.2.2 大鼠脊髓组织实时荧光定量PCR |
| 2.3 分析结果 |
| 2.3.1 数据产出及质控 |
| 2.3.2 差异基因分析 |
| 2.3.3 上调基因功能注释 |
| 2.3.4 下调基因功能注释 |
| 2.3.5 Quantitative Real-time PCR验证 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 2.4.1 上调基因的KEGG富集功能促进神经损伤 |
| 2.4.2 下调基因的KEGG富集功能影响神经的兴奋和抑制过程 |
| 2.4.3 上调基因的GO富集功能增强神经元和外周神经发育 |
| 2.4.4 下调基因的GO富集功能影响神经递质水平和突触功能 |
| 第三章 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元的影响 |
| 引言 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验动物及分组 |
| 3.1.2 主要实验仪器及耗材 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验动物的基因组提取 |
| 3.2.2 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元数量的影响 |
| 3.2.3 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元兴奋性突触数量的影响 |
| 3.2.4 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元突触超微结构的影响 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Sigma1R敲除大鼠脊髓运动神经元数量和面积都存在变化 |
| 3.3.2 Sigma1R敲除大鼠脊髓运动神经元胞体兴奋性突触数量存在变化 |
| 3.3.3 Sigma1R敲除对脊髓运动神经元突触超微结构的影响 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第四章 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元电生理学功能特性的影响 |
| 引言 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验动物及分组 |
| 4.1.2 主要实验仪器及耗材 |
| 4.1.3 实验所需试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 大鼠脊髓脑片的制备和细胞活力评估 |
| 4.3.2 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元的基本电生理性质的影响 |
| 4.3.3 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元动作电位的影响 |
| 4.3.4 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元兴奋性特性的影响 |
| 4.3.5 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元突触后电流(PSC)的影响 |
| 4.3.6 Sigma1R敲除对大鼠脊髓运动神经元m EPSC的影响 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 总结与展望 |
| 肝细胞癌中SNHG1 的表达和基因调控网络的研究 |
| 第五章 背景概述 |
| 5.1 肝癌概述 |
| 5.1.1 肝癌的形成机制 |
| 5.1.2 肝癌相关的部分基因 |
| 5.1.3 肝癌的筛查 |
| 5.1.4 肝癌的治疗 |
| 5.2 肝癌发生与miRNA |
| 5.2.1 微小RNA |
| 5.2.2 miRNA沉默基因表达的机制 |
| 5.2.3 miRNA参与癌症发生的机制 |
| 第六章 肝细胞癌中SNHG1 的表达研究 |
| 引言 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要数据库 |
| 6.1.2 主要软件 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 数据下载和组织 |
| 6.2.2 基因表达分析 |
| 6.2.3 功能分析 |
| 6.2.4 代谢通路分析 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 RNA在 HCC中的表达 |
| 6.3.2 差异表达基因的功能注释和富集分析 |
| 6.3.3 差异表达基因的功能调控网络 |
| 6.3.4 肝癌中差异表达基因所影响的代谢通路 |
| 6.4 小结与讨论 |
| 第七章 肝细胞癌中SNHG1 的基因调控网络的研究 |
| 引言 |
| 7.1 实验材料 |
| 7.1.1 主要数据库 |
| 7.1.2 主要软件 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 数据下载和组织 |
| 7.2.2 ceRNA网络分析 |
| 7.2.3 单变量生存分析 |
| 7.2.4 单细胞分析 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.3.1 肝癌中的生物相互作用网络 |
| 7.3.2 肝细胞癌共表达基因的单因素生存分析 |
| 7.3.3 血管内皮细胞和巨噬细胞SNHG1 相关mRNA的表达 |
| 7.4 小结与讨论 |
| 总结与展望 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表的科研成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 HAND |
| 1.2 HAND的产生机制 |
| 1.3 gp120 |
| 1.3.1 gp120直接损伤神经元 |
| 1.3.2 gp120间接损伤神经元 |
| 1.4 EcoHIV/NDK |
| 1.5 研究意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验耗材 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 细菌、细胞、病毒和动物 |
| 2.1.4 实验试剂的配置 |
| 2.1.5 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因克隆 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 病毒包装及滴度测定 |
| 2.2.4 病毒感染巨噬细胞 |
| 2.2.5 病毒感染小鼠 |
| 2.2.6 小鼠行为学实验 |
| 2.2.7 石蜡切片 |
| 2.2.8 免疫组化 |
| 2.3 数据分析处理 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 EcoNDK-gp120载体构建 |
| 3.1.1 EcoNDK-gp120载体构建思路 |
| 3.1.2 病毒包装及感染力验证 |
| 3.1.3 EcoNDK-gp120能表达Hela-mCAT在细胞膜外表面 |
| 3.1.4 gp120感染巨噬细胞对基因表达的影响 |
| 3.2 EcoNDK-gp120感染小鼠构建HIV相关神经损伤动物模型 |
| 3.2.1 EcoNDK-gp120引起了小鼠体内炎症反应 |
| 3.2.2 EcoNDK-gp120感染小鼠诱导小鼠认知障碍加重 |
| 3.2.3 EcoNDK-gp120病毒在大脑中的分布 |
| 3.2.4 EcoNDK-C2在小鼠大脑引起了病变 |
| 3.3 EcoNDK-V5在小鼠体内的动力学检测 |
| 3.3.1 EcoNDK-V5造成的神经损伤程度与病毒剂量呈正相关 |
| 3.3.2 EcoNDK-V5造成的神经损伤程度与时间呈正相关 |
| 3.3.3 EcoNDK-V5侵入大脑随时间的进展 |
| 3.4 EcoNDK-V5小鼠神经损失模型机制初步研究 |
| 3.4.1 EcoNDK-V5破坏大脑血脑屏障的完整性 |
| 3.4.2 CCL2敲除小鼠抑制了EcoNDK-V5的神经损伤作用 |
| 3.4.3 CCL2抑制剂Bindarit抑制了EcoNDK-V5的神经损伤作用 |
| 第4章 讨论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:JNK抑制剂D-JNKI1 缓解MPTP/MPP+诱导的帕金森病模型多巴胺能神经退行性变 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物实验 |
| 2.2.2 细胞实验 |
| 2.2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 D-JNKI1 抑制MPTP诱导的小鼠行为学异常 |
| 3.2 D-JNKI1 抑制MPTP诱导的多巴胺能神经元死亡 |
| 3.3 D-JNKI1 抑制MPTP诱导的多巴胺能神经元JNK的激活 |
| 3.4 D-JNKI1 对多巴胺能神经元ERK和 p38 磷酸化的影响 |
| 3.5 D-JNKI1 缓解MPTP诱导的caspase-3及cleaved-caspase-3 水平和Bcl-2/Bax比值的改变 |
| 3.6 MPP~+和D-JNKI1 随浓度变化对SH-SY5Y细胞活力的影响 |
| 3.7 D-JNKI1 缓解SH-SY5Y细胞中MPP~+对TH表达的抑制 |
| 3.8 D-JNKI1 缓解SH-SY5Y细胞中MPP~+诱导的JNK和 c-Jun活化 |
| 3.9 D-JNKI1对SH-SY5Y细胞中MPP~+诱导的p38和ERK活性的影响 |
| 3.10 D-JNKI1 抑制MPP~+诱导的ROS产生 |
| 3.11 D-JNKI1 缓解MPP~+诱导的MMP下降 |
| 3.12 D-JNKI1对SH-SY5Y细胞中Bcl-2/Bax比值和caspase-3及cleaved-caspase-3 表达水平的影响 |
| 3.13 D-JNKI1 随浓度变化对MPP~+诱导的细胞毒性和凋亡的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:JNK抑制剂D-JNKI1 减少APPswe/PS1E9 双转基因小鼠的β淀粉样蛋白沉积 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 APPswe/PS1E9 双转基因小鼠分组与D-JNKI1 注射 |
| 2.2.2 Aβ免疫组化 |
| 2.2.3 Western blotting |
| 2.2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 D-JNKI1 对大脑皮层和海马中Aβ沉积的影响 |
| 3.2 D-JNKI1 对大脑皮层和海马中APP裂解的影响 |
| 3.3 D-JNKI1 对大脑皮层和海马中JNK及 c-Jun磷酸化水平的影响 |
| 3.4 D-JNKI1 对大脑皮层和海马中ERK和 p38 磷酸化水平的影响 |
| 3.5 D-JNKI1 对大脑皮层和海马中Bcl-2/Bax比值及caspase-3 表达水平的影响 |
| 3.6 D-JNKI1 对小鼠大脑皮层和海马中Tau蛋白磷酸化水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 JNK信号通路在帕金森病发病机制中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
