闫彩虹[1]（2020）在《江苏地区家禽4种免疫抑制病病原检测及致瘤病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用》文中研究表明免疫抑制病病原既可引起家禽发生原发性感染甚至死亡,也可损伤其免疫系统,导致机体抵抗力下降,并发或继发感染其他病原,造成家禽生产能力下降和较高的病死率。鸡传染性贫血病毒（CIAV）、马立克病病毒（MDV）、网状内皮组织增生症病毒（REV）和禽白血病病毒（ALV）是4种常见的可导致家禽免疫抑制的病毒,在我国养鸡场中检出率较高,且常以亚临床感染的形式出现。目前关于这几种免疫抑制病的流行病学调查研究主要集中在广西、安徽、山东、河南等地区,而关于江苏地区家禽这方面的流行病学研究资料较少。由MDV、REV和J亚群禽白血病病毒（ALV-J）感染引起的肿瘤疾病在临床诊断过程中因症状相似而较难确诊,而且这3种病原的实验室检测还是以常规PCR为主,因此建立一种特异、灵敏、快速的检测方法,用于病原检测和临床诊断,同时为疾病的防控和净化提供帮助是非常有必要的。本研究应用PCR方法对来自江苏地区的病禽进行4种免疫抑制病病原的检测,建立了同时检测3种致瘤病毒MDV、REV和ALV-J的三重TaqMan荧光定量PCR方法,并应用于临床检测中,以期了解江苏地区家禽免疫抑制病病原的感染情况,并为临床上家禽肿瘤疾病的诊断提供一种快速、特异、敏感的新型技术手段。1 江苏地区家禽4种免疫抑制病病原检测为了解江苏地区家禽免疫抑制病病原的流行情况及其感染间相互作用的关系,应用PCR方法对2016-2019年来自江苏地区不同养殖群体的507只病鸡、80只病鸭、129只病鹅和42只病鸽进行CIAV、MDV、REV和ALV的核酸检测,结果显示病鸡样品总阳性检出率为66.07%,CIAV、MDV、REV和ALV的检出率分别为36.09%、25.84%、10.85%和32.94%,CIAV、MDV、REV和ALV的单一感染检出率分别为13.61%、8.88%、1.18%和12.03%,二重感染以CIAV+ALV最为常见,检出率为7.69%,三重感染以CIAV+MDV+ALV最为常见,检出率为3.94%,四重感染检出率为0.99%。不同日龄鸡检测结果显示,6月龄以上鸡CIAV的检出率显着降低,3～6月龄鸡MDV和ALV的检出率较高;不同品种鸡检测结果显示,蛋鸡MDV、REV检出率显着高于肉鸡、草鸡和三黄鸡;2016-2019年检测结果显示,江苏地区鸡群中免疫抑制病病毒仍呈现不同程度的流行,且部分病原的每年检出率存在差异性。4种免疫抑制病病原感染间相互作用的比较经统计学分析表明,CIAV和REV、CIAV和ALV感染间存在相互促进的趋势（P<0.01）。209份水禽样品均未检测出CIAV核酸,MDV、REV和ALV的检出率分别为0.96%、1.44%和3.35%,个别样品还存在REV和ALV的混合感染。病鸽样品中均未检测出这四种免疫抑制病病原。结果表明,鸡群中免疫抑制病病原的感染非常普遍,且存在多种病原的混合感染;水禽中免疫抑制病病原的检出率显着低于鸡群;鸽子感染这4种免疫抑制病病原的机率较低。2鸡致瘤病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立为建立同时检测MDV、REV和ALV-J的方法,本研究根据MDV meq基因、REV gp90基因和ALV-J env基因,合成特异性引物和TaqMan探针,建立和优化反应体系和条件,建立了鸡3种致瘤病毒的单个和三重TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,本研究建立的3种病毒的单个荧光定量PCR方法具有相同的反应体系和条件,操作方便,检测快速;单个和多重荧光定量PCR方法均仅特异性扩增MDV、REV和ALV-J,与鸡其它主要病毒无交叉反应,特异性较强;3种病毒的单个荧光定量PCR方法对MDV、REV和ALV-J的质粒标准品最低检出限分别为3.23×101拷贝/μL、3.23×100拷贝/μL和3.23×101拷贝/μL,敏感性较高,三重荧光定量PCR方法对MDV、REV和ALV-J的质粒标准品最低检出限分别为3.23×100拷贝/μL、3.23×100拷贝/μL和3.23×101拷贝/μL,与单个敏感性相似;三重荧光定量PCR方法组内与组间重复性试验的Ct值变异系数均小于5%,重复性良好。应用三重荧光定量PCR方法和普通PCR方法分别对来自江苏各地具有免疫抑制病表现的120份临床病鸡样品同时进行MDV、REV和ALV-J核酸的检测,两者的符合率为94.17%。本研究建立的鸡致瘤病毒三重TaqMan荧光定量PCR方法为临床样品中MDV、REV和ALV-J核酸的检测及流行病学调查提供了一种快速、特异、敏感的新型技术手段。3两例疑似肿瘤病鸡三重荧光定量PCR检测及马立克病病毒鉴定分析研究为进一步检验三重荧光定量PCR方法的临床应用性,应用建立的三重荧光定量PCR方法对江苏两个鸡场送检的疑似感染肿瘤性病毒的病鸡组织样品进行了检测,并同时进行病毒分离,然后对分离出的MDV野毒株进行meq和pp38两个主要致病基因的序列分析。三重荧光定量PCR结果显示送检病鸡样品MDV核酸均呈阳性,REV和ALV-J核酸均呈阴性,病毒分离鉴定结果显示从两个鸡场的病鸡抗凝全血中各分离到了 1株MDV Ⅰ型毒株,未分离到REV和ALV毒株。核苷酸同源性和遗传进化分析结果显示,JS0316毒株与江苏分离株Js201801关系最近,而JS0424毒株则与近年国内流行毒株亲缘相近。meq基因编码的氨基酸序列结果显示,2个MDV分离株缺乏弱毒疫苗株的特征（A71S,P194-）,具有MDV强毒分离株的分子特征（D80Y,V115A,T139A,P176R）,JS0316分离株meq基因除了具有以上强毒分离株的分子特征外,还与Js201801存在相同的突变（Q93R）,该突变其余参考毒株均未发生,这可能是MDV江苏分离株新的分子生物学特征。除此之外,JS0316和JS0424分离株meq基因分别出现了其他参考毒株均未发生的氨基酸突变（V123A）和（A/P217T）,JS0316和JS0424分离株pp38基因推导的氨基酸序列也分别出现了特有的氨基酸突变（L981,F240S）和（W67G,V210A）。结果表明三重荧光定量PCR检测结果和病毒分离结果一致,发病鸡均感染了马立克病毒,且分离毒株均具有强毒的分子特征。因此,所建三重荧光定量PCR方法可用于临床检测。
费强[2]（2018）在《病鸡的剖检程序及诊断方法》文中研究指明在鸡病诊断中,剖检是最常用的方法,通过对病死鸡的剖检,了解各组织器官的病理变化,结合疾病的流行特点,根据鸡群的发病死亡情况,进行综合分析判断,即可做出初步诊断。在条件允许的情况下,有目的地采取病料,进行实验室检验,对于鸡病的防治会有更大的帮助,并可使鸡病得到最终的确诊。1剖检前的准备工作在进行病死鸡剖检之前,首先应了解被检鸡群的一些情况,如饲养数量、品种、日龄、采食量、饮水量、死淘数、死淘原因、发病症状、防疫用药情况等。
梁雄燕[3]（2018）在《髓细胞瘤相关A和K亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性》文中指出禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）是一种重要的致瘤性反转录病毒,可以引起鸡的多种肿瘤,严重威胁养殖业健康发展。鸡源禽白血病病毒包括AE,J和K 7个亚群。不同亚群的禽白血病病毒常常具有不同的致病性和致瘤谱,A、B亚群病毒主要诱发经典的鸡淋巴细胞瘤,J亚群病毒主要诱发鸡髓细胞瘤,尽管有时它们也诱发其他类型的肿瘤。近20年来,我国报道和研究了大量的ALV-J引起的髓细胞瘤和血管瘤型禽白血病。然而,对其他亚群的禽白血病的相关报道则相对较少,目前尚未见关于ALV-K诱发的肿瘤病变报道和ALV-A诱发髓细胞瘤的自然病例报道。本研究对湖北某蛋鸡群和某地方品种鸡群的肿瘤病鸡进行了病理学观察、病原分离鉴定和病毒全基因特征分析。在此基础上,通过反向遗传操作技术,拯救出基因背景清楚的病毒并研究病毒的致病性和致瘤特征,通过转录组测序分析,了解ALV-A诱发鸡髓细胞瘤的机制,结果如下:1.自然病例病理学观察及病原检测对病鸡进行了组织学观察和病原学检测。ELISA结果显示,商品蛋鸡场和地方品种鸡自然病例的泄殖腔拭子均呈ALV P27阳性;病理组织学观察显示,来自商品蛋鸡场和来自地方品种鸡养殖场的病鸡均为髓细胞瘤混发淋巴细胞瘤。用ALV-A/B/J的特异性引物进行Multi-PCR检测,蛋鸡病料中扩增出与ALV-A对应的核酸片段,但地方品种鸡病料未扩增出片段。以ALV-env的通用引物进行PCR,从地方品种鸡病料扩增出了相应的片段,测序显示扩增出的env与ALV-K原型株JS11C1高度同源。2.病毒分离鉴定与分离株培养特性取两个鸡群中病变典型的病鸡肝脏组织,制备组织悬液接种DF-1细胞进行病毒分离培养,分别以抗ALV-A的单抗AF3、抗ALV-J的单抗JE9和抗ALV-K SU的单因子血清为一抗进行间接免疫荧光试验。结果,以AF3为一抗,用蛋鸡肝脏组织悬液处理的DF-1细胞和以抗ALV-K SU单因子血清为一抗,用地方品种鸡肝组织悬液处理的DF-1细胞呈亮绿荧光,表明从蛋鸡中分离的病毒为ALV-A,命名为HB2015012;从地方品种鸡中分离的病毒为ALV-K,命名为HB2015032。体外培养试验表明,HB2015012和HB2015032与ALV-J参考毒株HB2010001和HB2015029复制特性相似,且HB2015032可以感染荆江麻鸭鸭胚原代成纤维细胞（DEF）。3.病毒分离株基因组特征测序结果显示,HB2015012和HB2015032的前病毒基因组全长分别为7735bp和7703bp,二者均具有典型的C型反转录病毒结构。序列分析显示,HB2015012和HB2015032的gag和pol基因核苷酸序列均相对保守,但HB2015032的pol基因区域（前病毒基因组第5345位碱基）发生了一个C-T突变,提前形成了一个TAA终止密码子,使得其pol基因编码的蛋白与J亚群禽白血病病毒一样,相对于其他亚群的毒株短22aa;HB2015012和HB2015032的UTR+LTR区核苷酸序列与ALV-J相应区域高度相似,二者的3’UTR+LTR区均包含有完整的DR1,E原件,U3,R和U5区,且U3区均具有2个CAAT boxes、2个Y boxes、2个CArG boxes和2个PRE boxes及1个NFAP-1和TATA box,几乎含有ALV-J原型株HPRS-103 U3区所有的调控序列,另外HB2015032的E原件中（前病毒基因组7250位与7251位碱基间）相对与HPRS-103基因组的7388位碱基处具有1个碱基缺失,形成了一个仅在蛋鸡血管瘤型ALV-J毒株中存在的与血管内皮细胞分化相关的c-Ets-1位点。这些结果表明,HB2015012是由ALV-A与ALV-J重组产生的具有ALV-J3’UTR+LTR的自然重组病毒;HB2015032是ALV-K与ALV-J重组产生的以ALV-J为骨架的K亚群禽白血病病毒,且其E原件可能源自致血管瘤型ALV-J。4.病毒反向遗传体系的建立及病毒拯救将HB2015012和HB2015032前病毒基因全长DNA插入pTopo-Blunt simple载体,构建感染性克隆,转化DF-1细胞,进行病毒拯救。结果成功拯救出了具有感染性的病毒rHB2015012和rHB2015032。体外培养试验显示rHB2015012和rHB2015032均与母本病毒具有相似的体外复制能力。5.rHB2015012和rHB2015032的致病性将rHB2015012和rHB2015032以2×103TCID50接种SPF鸡进行病毒致病性试验。rHB2015012接种的试验鸡,肿瘤发生率为65%,其中髓细胞瘤发生率为40%;rHB2015032接种的试验鸡,肿瘤发生率为75%,其中髓细胞瘤发生率为50%。水平传播感染rHB2015012的对照组鸡的肿瘤总体发生率为35%,髓细胞瘤发生率为15%,水平传播感染rHB2015032的对照组鸡的肿瘤总体发生率为55%,髓细胞瘤发生率为20%。表明rHB2015012和rHB2015032均可诱发鸡的髓细胞瘤,且rHB2015032的水平传播及致瘤能力强于rHB2015012。6.ALV-A/J/K及ALV-A、ALV-K自然重组病毒Multi-PCR检测方法建立ALV-K是近年从中国地方鸡群中分离鉴定的一个新亚群,可能由于常常不引起临床症状或仅引起鸡的亚临床症状而被长期忽视。目前尚未见关于其PCR检测方法的报道,本研究建立了针对ALV-A/J/K的Multi-PCR检测方法和针对具有J亚群LTR的重组ALV-A/K毒株的Multi-PCR检测方法。特异性试验和灵敏性试验结果表明,所建立的Multi-PCR检测方法特异性和灵敏性良好,灵敏性均可达102copies/μL,可用于临床样本检验。7.rHB 2015012感染及肝脏转录组学分析rHB2015012感染鸡肝脏组织RNA-Seq高通量测序转录组分析,共筛选到1825个差异表达基因（DEG）,其中1288个为上调表达基因,537个为下调表达基因。GO和KEGG Pathway注释和富集结果显示,部分差异基因与细胞过程、生物调节、代谢过程及免疫应答反应等重要功能相关。进一步分析显示这些基因主要参与的信号通路有癌症相关通路、破骨细胞分化通路、JAK-STAT信号通路、PI3K-Akt信号通路等。具体而言,癌症相关通路富集到85个DEG,PI3K-Akt信号通路富集到76个DEG,破骨细胞分化通路富集到72个相关的DEG,与造血细胞系相关（Hematopoietic cell lineage）DEG有30个,细胞粘附分子相关（Cell adhesion molecules（CAMs））DEG有36个。其中,破骨细胞分化通路富集的72个DEG使与髓细胞瘤密切相关的JAK-STAT信号通路被激活,Acute myeloid leukemia通路里富集了17个DEG,大多数与阻碍造血细胞分化（block of differentiation）相关,也可能与髓细胞瘤的形成有关。MAPK signaling pathway中P53 signaling pathway处于抑制状态,而PI3K-Akt signaling pathway呈激活状态,可促进细胞原癌基因myc（c-myc）的增殖,促进髓细胞瘤形成。
程开林[4]（2018）在《浅析土鸡疾病临床诊断及防治技术》文中认为土鸡疾病临床诊断是感知鸡病的第一步,是及时正确判断鸡病、找出病因、提出有效防治措施的基础性工作。为此,笔者结合多年兽医临床实践经验,提出土鸡疾病临床诊断技术,以提供从事土鸡养殖业的同仁参考和借鉴,并期望取得较好的诊治效果。1兽医临床诊断方法对土鸡疾病的诊断主要通过"听、问、看、闻、摸"五大要素即可初
栾宏梁[5]（2015）在《禽病辅助诊断与管理信息系统的研制》文中研究表明进入21世纪至今,伴随着人们对生活质量要求以及对健康生活标准的增高,人们对动物疫病的防范意识越来越强。虽然近年来我国在禽病诊断和控制技术方面的研究和实践有了较大的进展,但由于我国规模化养禽起步较晚,地区发展不平衡,另外鸡病又是长期困扰我国养鸡业的关键问题之一,严重影响了我国养禽业的持续发展。鉴于当前基层家禽养殖场内具有丰富疾病诊断经验的专家比较缺乏,鸡病种类呈多样化,新发病种类增多,本研究旨在通过信息技术研究的最新成果的应用来改善我国的养禽业生产和管理现状,提高家禽疾病诊断的准确性。禽病辅助诊断与管理信息系统采用B/S结构模式进行设计,应用Visual Basic.NET、Asp.NET开发语言与SQL Server 2005数据库等实验工具进行构建。禽病辅助诊断专家系统在知识获取时,采用人工获取知识方式,将禽病领域内专业知识和专家诊断经验进行归纳、整理,并转移到禽病辅助诊断专家系统数据库中,形成完整的疾病辅助诊断数据库,运用正向推理和反向推理两种推理机制,按照贝叶斯冲突消解策略最终完成疾病辅助诊断。在禽病辅助诊断与管理信息系统设计之初,为避免信息的重复录入,该系统数据库采用关系型数据库模式进行设计,最终实现以下功能:（1）禽病辅助诊断与管理信息系统实现了家禽疾病辅助诊断、病案资料库、病历管理、病例统计、免疫管理、驱虫管理、远程视频平台、疾病预防方案管理、养殖场信息管理和鸡群信息管理等十项功能,并向用户提供病例统计与管理信息,辅助用户进行管理。（2）禽病辅助诊断与管理信息系统能利用后台数据库配备的家禽疾病知识数据库库和家禽疾病诊断,依据用户对怀疑疾病的描述或者对实际症状的描述,自动生成疾病诊断结果,并向用户提供合理治疗方案。（3）禽病辅助诊断与管理信息系统实现病案资料库功能,给用户提供学习机会,增加自身知识储备,同时,本系统的病历管理功能可适时对养殖场病例进行录入和管理,帮助用户积累家禽疾病诊疗经验,提高用户疾病诊治水平。（4）禽病辅助诊断与管理信息系统中每个模块相对独立,方便用户对各个模块信息的录入与管理,同时,系统每个模块间的部分共享数据信息又存在横向联系,避免信息的重复录入,向用户提供准确、方便的服务。禽病辅助诊断与管理信息系统经验证性测试和专家评估,表明该系统设计合理、诊断准确,满足鸡病临床诊断和鸡场管理的需求,具有良好的实用性和可操作性。
瞿春蕾,金凌艳,李坚[6]（2014）在《青浦区近五年常见鸡病诊治体会》文中指出青浦区位于上海市西部,太湖下游,黄浦江上游,东部河江交错,西部湖荡群集,淀山湖更是上海最大的淡水湖泊。为全面加强淀山湖水质保护,防止畜禽养殖污染,同时为了防止畜禽疫病对人民群众的身体造成危害,我区已于2007年底全面关闭并禁止新建规模化养禽场。近年来,我区的农业生产布局也发生了变化,林地及粮食种植大户增多,养禽方式随之悄然改变,除了传统的闲散屋舍室内圈养外,出现了林地散养及农田大棚饲养。随着养禽
陆新浩,陈秋英,刘鸿,黄建勇,吴勇,任祖伊[7]（2012）在《近期宁波地区鸡病发生及流行规律分析》文中研究说明根据最近21个月余姚市禽畜病防治研究所诊疗中心就诊禽病病例进行统计,接待门诊病例5430例,发病鸡约310万羽,发病率约10%左右。据调查,宁波市常年鸡的饲养量约1950万羽,鸡病的发病率约为5%左右。近年来,鸡病虽严防,但各种类型的鸡病仍不断发生,严重危害着养鸡业的健康发
费强[8]（2012）在《鸡病临床用药的注意事项》文中研究说明随着集约化养殖的普及,鸡病的危害也日益复杂、严重,为了减少疾病给养鸡业带来的损失,使用药物预防和治疗鸡病显得尤为重要。由于养鸡人员的专业水平较低,且基层兽医对药物的临床使用不能科学把握,给鸡病的防治带来许多困难。和其它动物不太一样,鸡只有其独特的生理、药理学特性,鸡病临床用药除了要掌握各种药物的药理作用、正确
费强[9]（2012）在《鸡病的基本诊断技术》文中指出近二十年间,我国养鸡业迅猛发展,饲养规模不断扩大,鸡病的流行也愈演愈烈,不仅种类和病因多种多样,而且症状和病变十分复杂,兽医工作者必须从流行病学调查、鸡群观察、病理剖检、实验室检查等方面对鸡病做出综合性诊断,才能有效地
韩晓堂,费强[10]（2012）在《鸡病临床用药分析》文中指出随着集约化养殖的普及,鸡病的危害也日益复杂、严重,为了减少疾病给养鸡业带来的损失,使用药物预防和治疗鸡病显得尤为重要。由于养鸡人员的专业水平较低,且基层兽医对药物的临床使用不能科学把握,给鸡病的防治带来许多困难。和其它动物不太一样,鸡只有其独特的生理、
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一篇 文献综述 |
| 1 家禽免疫抑制病概述 |
| 1.1 鸡传染性贫血 |
| 1.2 马立克病 |
| 1.3 网状内皮组织增生症 |
| 1.4 禽白血病 |
| 1.5 我国家禽免疫抑制病病原感染现状 |
| 2 免疫抑制病病原检测方法的研究概况 |
| 2.1 病毒分离 |
| 2.2 血清学检测技术 |
| 2.3 分子生物学检测技术 |
| 3 本研究的目的和意义 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 江苏地区家禽4种免疫抑制病病原检测 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料来源 |
| 1.2 毒株来源 |
| 1.3 主要试剂与仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 引物设计与合成 |
| 2.2 样品处理 |
| 2.3 样品DNA的提取 |
| 2.4 样品RNA的提取和反转录 |
| 2.5 样品PCR检测 |
| 2.6 数据整理与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 病原的PCR检测结果 |
| 3.2 感染类型分析 |
| 3.3 不同日龄鸡免疫抑制病病原检测结果分析 |
| 3.4 不同品种鸡免疫抑制病病原检测结果分析 |
| 3.5 江苏地区鸡2016-2019年免疫抑制病病原检测结果分析 |
| 3.6 4种免疫抑制病病原感染间相互作用的比较 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 鸡致瘤病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株来源 |
| 1.2 临床样品来源 |
| 1.3 主要试剂与仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 引物和探针的设计 |
| 2.2 病毒核酸提取 |
| 2.3 荧光定量PCR质粒标准品的制备与鉴定 |
| 2.4 单个荧光定量PCR方法的建立 |
| 2.5 三重荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 2.6 临床样品的检测和验证 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组质粒PCR鉴定结果 |
| 3.2 重组质粒测序鉴定结果 |
| 3.3 质粒标准品的制备 |
| 3.4 单个荧光定量PCR方法的建立 |
| 3.5 三重荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 3.6 临床样品的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 两例疑似肿瘤病鸡三重荧光定量PCR检测及马立克病病毒鉴定分析研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 发病鸡背景资料及流行病学调查 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸡致瘤病毒三重荧光定量PCR检测 |
| 2.2 MDV分离培养 |
| 2.3 REV和ALV分离培养 |
| 2.4 间接免疫荧光试验(IFA) |
| 2.5 致病相关基因的PCR扩增、测序及序列分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 发病鸡的组织病变 |
| 3.2 鸡致瘤病毒三重荧光定量PCR检测结果 |
| 3.3 REV和ALV分离结果 |
| 3.4 MDV分离结果 |
| 3.5 间接免疫荧光试验 |
| 3.6 致病相关基因的PCR扩增及序列分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 本文第二章120份临床病鸡样品的流行病学背景资料 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 1 剖检前的准备工作 |
| 2 体表检查 |
| 2.1 体表羽毛检查 |
| 2.2 体况姿势检查 |
| 2.3 皮肤黏膜检查 |
| 3 剖检程序 |
| 3.1 皮下检查 |
| 3.2 胸腺检查 |
| 3.3 肌肉检查 |
| 3.4 骨关节检查 |
| 3.5 腹腔检查 |
| 3.6 心脏检查 |
| 3.7 肝脏检查 |
| 3.8 脾脏检查 |
| 3.9 肾脏检查 |
| 3.1 0 腔上囊检查 |
| 3.1 1 呼吸器官检查 |
| 3.1 2 消化道检查 |
| 摘要 Abstract 第1章 绪论 |
| 1.1 禽白血病研究进展 |
| 1.1.1 禽白血病及病原研究的历史回顾 |
| 1.1.2 禽白血病病原学 |
| 1.1.3 禽白血病流行病学 |
| 1.1.4 禽白血病危害及临床病理学 |
| 1.1.5 禽白血病致病机制 |
| 1.1.6 禽白血病检测与防控 |
| 1.1.7 我国鸡群禽白血病研究历史与现状 |
| 1.2 本研究的目的和意义 第2章 病毒分离鉴定及分离株分子生物学特征研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 病料及来源 |
| 2.1.2 细胞及主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 临床检测 |
| 2.1.5 病毒分离鉴定 |
| 2.1.6 病毒分离株的体外培养特性 |
| 2.1.7 前病毒全基因克隆与测序 |
| 2.1.8 前病毒基因序列拼接与分析 |
| 2.1.9 ALV-A/J/KMulti-PCR检测方法的建立 |
| 2.1.10 具有ALV-J3′LTR的A、K亚群重组ALVMulti-PCR检测方法的建立 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 病鸡临床症状及病理变化 |
| 2.2.2 ELISA和PCR结果 |
| 2.2.3 地方品种鸡病例中ALV-env的定序 |
| 2.2.4 病毒分离与鉴定 |
| 2.2.5 分离病毒的体外培养特性 |
| 2.2.6 病毒分离株全基因克隆与测序结果 |
| 2.2.7 病毒分离株基因特性分析 |
| 2.2.8 ALV-A/J/KMulti-PCR建立 |
| 2.2.9 具有ALV-JLTR的A、K亚群禽白血病病毒检测方法的建立 |
| 2.3 小结与讨论 第3章 致髓细胞瘤型ALV-A、ALV-K分离株反向遗传体系的建立及拯救病毒的致病性研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试剂与材料 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 病毒基因酶切位点分析与感染性克隆构建策略 |
| 3.1.4 感染性克隆构建 |
| 3.1.5 细胞转染与病毒拯救 |
| 3.1.6 拯救病毒的检测与鉴定 |
| 3.1.7 拯救病毒的体外培养特性 |
| 3.1.8 拯救病毒的致病性研究 |
| 3.1.9 感染鸡组织带毒检测 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 PCR扩增结果 |
| 3.2.2 感染性克隆质粒构建与鉴定 |
| 3.2.3 细胞转染与拯救病毒的鉴定 |
| 3.2.4 拯救病毒的体外培养特性 |
| 3.2.5 鸡只带毒与排毒监测 |
| 3.2.6 鸡只病变监测 |
| 3.2.7 感染鸡组织带毒检测 |
| 3.3 小结与讨论 第4章 致髓细胞瘤性型ALV-A感染鸡的肝脏组织转录组学分析 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 肝脏组织 |
| 4.1.3 仪器设备 |
| 4.1.4 RNA提取与质控 |
| 4.1.5 文库构建与测序 |
| 4.1.6 数据处理与分析 |
| 4.1.7 差异表达验证 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 RNA提取及质量 |
| 4.2.2 数据产出及质量 |
| 4.2.3 CleanReads与参考基因组比对 |
| 4.2.4 转录本预测 |
| 4.2.5 差异剪切基因检测 |
| 4.2.6 基因表达量分析 |
| 4.2.7 样本间基因表达量相关分析 |
| 4.2.8 差异表达基因分析 |
| 4.2.9 差异表达验证 |
| 4.2.10 差异表达基因GO分析 |
| 4.2.11 差异表达基因pathway分析 |
| 4.2.12 差异表达基因TF编码能力预测 |
| 4.3 小结与讨论 第5章 结论 致谢 参考文献 附录 个人简介 |
| 1 兽医临床诊断方法 |
| 1.1 听 |
| 1.2 问 |
| 1.3 看 |
| 1.4 闻 |
| 1.5 摸 |
| 2 解剖诊断法 |
| 2.1 外部检查 |
| 2.2 内部检查 |
| 2.2.1 打开体腔检查 |
| 2.2.2 体内器官检查 |
| 2.2.3 头颈部检查 |
| 2.2.4 周围神经检查 |
| 3 鸡病诊断步骤 |
| 3.1 临床检查的方法 |
| 3.2 鸡病临床症状 |
| 3.3 病死鸡剖检病理变化 |
| 3.4 实验室检验 |
| 4 剖检病鸡识别鸡病 |
| 4.1 喙 |
| 4.2 眼 |
| 4.3 喉 |
| 4.4 食道管 |
| 4.5 气管 |
| 4.6 支气管 |
| 4.7 心脏 |
| 4.8 胆囊 |
| 4.9 肝脏 |
| 4.1 0 脾脏 |
| 4.1 1 肌胃 |
| 4.1 2 十二指肠 |
| 4.1 3 空回肠 |
| 4.1 4 泄殖腔 |
| 4.1 5 盲肠 |
| 4.16输卵管 |
| 4.18卵巢 |
| 4.19肺脏 |
| 4.20鸡脚 |
| 5 认真做好鸡病的综合防治 |
| 5.1 按照科学免疫程序进行土鸡疫病预防 |
| 5.2 采取药物预防 |
| 5.3 搞好饲养管理 |
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 专家系统的概述 |
| 1.2 我国家禽规模化养殖的现状及疾病流行趋势 |
| 1.2.1 生产经营规模 |
| 1.2.2 组织运行方式 |
| 1.2.3 2009年以来鸡病流行的主要特点 |
| 1.2.4 我国家禽疾病复杂的原因 |
| 1.2.5 我国家禽疾病的流行趋势 |
| 1.3 家禽疾病辅助诊断与管理信息系统在养殖业中的需求 |
| 1.4 课题研究的内容 |
| 1.5 课题研究的目的与意义 |
| 1.5.1 课题研究的意义 |
| 1.5.2 课题研究的目的 |
| 2 禽病辅助诊断与管理信息系统的构建 |
| 2.1 禽病辅助诊断与管理信息系统的构建条件 |
| 2.1.1 硬件环境 |
| 2.1.2 软件环境 |
| 2.1.3 系统开发工具 |
| 2.2 系统结构 |
| 2.3 疾病诊断专家系统的运行策略 |
| 2.3.1 禽病辅助诊断的推理策略 |
| 2.3.2 禽病辅助诊断的知识获取方式 |
| 2.3.3 禽病辅助诊断的解释机制 |
| 3 禽病辅助诊断与管理信息系统的设计 |
| 3.1 系统分析 |
| 3.2 系统技术路线 |
| 3.3 系统数据库的设计 |
| 3.4 系统功能的设计 |
| 3.4.1 疾病辅助诊断 |
| 3.4.2 免疫驱虫信息管理 |
| 3.4.3 病案资料库 |
| 3.4.4 病历管理 |
| 3.4.5 病例统计 |
| 3.4.6 远程视频平台 |
| 3.4.7 预防方案 |
| 3.4.8 用户管理 |
| 3.4.9 养殖场管理 |
| 3.4.10 后台维护 |
| 4 禽病辅助诊断与管理信息系统的实现 |
| 4.1 系统登陆界面 |
| 4.2 辅助诊断系统的实现 |
| 4.2.1 基于症状的诊断 |
| 4.2.2 基于疾病的诊断 |
| 4.2.3 基于病例的诊断 |
| 4.3 管理信息系统的实现 |
| 4.3.1 免疫管理 |
| 4.3.2 驱虫管理 |
| 4.3.3 病案资料库 |
| 4.3.4 病历管理 |
| 4.3.5 病例统计 |
| 4.3.6 视频交流平台 |
| 4.3.7 预防方案 |
| 4.3.8 用户管理 |
| 4.3.9 养殖场基本信息管理 |
| 5 讨论 |
| 5.1 家禽疾病的鉴别诊断 |
| 5.2 禽病辅助诊断与管理信息系统应用.NET软件构架及其新特性 |
| 5.3 基于B/S模式开发禽病辅助诊断与管理信息系统的优势 |
| 5.4 基于FMS视频直播方案开发远程视频交流平台的优势 |
| 5.5 禽病辅助诊断与管理信息系统的应用前景 |
| 5.6 需要注意的问题 |
| 6 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 1 常见鸡病 |
| 1.1 病毒性疾病 |
| 1.1.1 新城疫: |
| 1.1.2 传染性法氏囊病: |
| 1.2 细菌性疾病 |
| 1.2.1 大肠杆菌病: |
| 1.2.2 多杀性巴氏杆菌病 (禽霍乱) : |
| 1.2.3 沙门氏菌病: |
| 1.3 寄生虫病 |
| 1.3.1 球虫病: |
| 1.3.2 组织滴虫病: |
| 1.3.3 蛔虫病: |
| 1.4 真菌病 (曲霉菌病) |
| 2 病因分析 |
| 2.1 病毒病 |
| 2.2 细菌病 |
| 2.3 寄生虫病 |
| 2.4 真菌病 |
| 3 体会 |
| 1 鸡病的发病和流行规律分析 |
| 2 细菌性疾病的发病情况及规律 |
| 2.1 大肠杆菌病 |
| 2.2 沙门氏菌病 |
| 2.3 支原体病 |
| 2.4 包涵体肝炎 |
| 2.5 曲霉菌病 |
| 3 病毒性疾病的发病情况及规律 |
| 3.1 传染性支气管炎 |
| 3.2 低致病性禽流感 |
| 3.3 传染性法氏囊病 |
| 3.4 传染性喉气管炎 |
| 3.5 新城疫 |
| 3.6 鸡痘 |
| 4 寄生虫病的发病情况及规律 |
| 4.1 球虫病 |
| 4.2 盲肠肝炎 |
| 4.3 蛔虫病 |
| 4.4 异刺线虫病 |
| 4.5 住白细胞原虫病 |
| 5 小结与讨论 |
| 5.1 鸡病高发时期 |
| 5.2 病毒病的发病特点 |
| 5.2.1 免疫鸡群仍有发病 |
| 5.2.2 疫苗交叉保护力差 |
| 5.2.3 无有效治疗药物 |
| 5.3 细菌病的发病特点 |
| 5.3.1 条件性疾病发病严重 |
| 5.3.2 耐药性严重 |
| 5.3.3 疫苗免疫不理想 |
| 5.4 寄生虫病的发病特点 |
| 5.5鸡病综合防治建议 |
| 5.5.1科学饲养管理 |
| 5.5.2加强疫苗研制 |
| 5.5.3科学使用抗生素 |
| 5.5.4加强抗体制品研制 |
| 1 了解鸡只与临床用药有关的特殊生理构造 |
| 1.1 鸡味觉功能差 |
| 1.2 鸡无逆呕动作 |
| 1.3 鸡消化道短 |
| 1.4 鸡具有独特的气囊 |
| 1.5 鸡泌尿系统具有先天性缺陷 |
| 1.6 鸡没有汗腺 |
| 2 科学诊断鸡病 |
| 2.1 鸡病的调查 |
| 2.2 临床检查 |
| 2.3 病理剖检 |
| 2.4 实验室诊断 |
| 3 了解临床上鸡病常用药物的药理学 |
| 3.1 给药时间和给药次数 |
| 3.2 临床上常用药物的作用机理 |
| 3.3 药物的使用剂量及疗程 |
| 4 制定合理的用药方案 |
| 4.1 进行药敏试验 |
| 4.2 控制继发和并发感染 |
| 4.3 注意给药途径 |
| 5 用药档案妥善保存 |
| 1 流行病学调查 |
| 2 鸡群观察 |
| 2.1 群体检查 |
| 2.2 个体检查 |
| 3 病理剖检 |
| 3.1 病鸡的处死 |
| 3.2 体腔的剖开 |
| 3.3 各系统器官的检查 |
| 3.3.1 消化系统 |
| 3.3.2 呼吸系统 |
| 3.3.3 心脏 |
| 3.3.4 泌尿系统 |
| 3.3.5 免疫系统 |
| 3.3.6 神经系统与脑部 |
| 3.3.7 运动系统 |
| 3.3.8 生殖系统 |
| 4 实验室检查 |
| 5 全面分析诊断 |
| 1 了解鸡只与临床用药有关的特殊生理构造 |
| 1.1 鸡味觉功能差 |
| 1.2 鸡无逆呕动作 |
| 1.3 鸡消化道短 |
| 1.4 鸡具有独特的气囊 |
| 1.5 鸡泌尿系统具有先天性缺陷 |
| 1.6 鸡没有汗腺 |
| 2 科学诊断鸡病 |
| 2.1 鸡病的调查 |
| 2.2 临床检查 |
| 2.3 病理剖检 |
| 2.4 实验室诊断 |
| 3 了解临床上鸡病常用药物的药理学 |
| 3.1 给药时间和给药次数 |
| 3.2 临床上常用药物的作用机理 |
| 3.3 药物的使用剂量及疗程 |
| 4 制定合理的用药方案 |
| 4.1 进行药敏试验 |
| 4.2 控制继发和并发感染 |
| 4.3 临床上多尝试气雾给药 |
| 5 用药档案妥善保存 |
