Eotaxin 在过敏性炎症反应中的研究进展

一、Eotaxin在过敏性炎症反应中的研究进展（论文文献综述）

吴迪^[1]（2021）在《山姜素对卵清蛋白诱导过敏性哮喘小鼠体内外抗炎抗过敏作用的初步研究》文中研究指明过敏性哮喘是一种常见的慢性呼吸系统疾病,其特征在于出现各种不同的气喘、气短、胸闷或咳嗽症状,严重者甚至可以导致窒息。根据流行病调查学显示,在不同国家中,哮喘约占人口中的1-18%,约有3.34亿人,严重影响全球人健康,除此之外,哮喘在动物中也较为常见。尽管目前的一些药物如喘定片虽然治疗过敏性哮喘有效,但是会带来诸多副作用如头晕,心律失常以及引起胃肠道反应。目前,寻求安全、有效的治疗药物依然是防治过敏性哮喘重要途径,中药作为一种安全、无毒、副作用低的治疗药物进入了人们的视野,其中具有多种药理学功能的黄酮类化合物山姜素是重要代表之一。多种文献证明山姜素具有重要的生物学特性包括抗炎、抗氧化及抗肿瘤作用,同时在临床上也被证明具体降血压、降血脂、降血糖、止吐、镇痛等功能。但山姜素能否治疗过敏性哮喘尚未见报道。本文旨在初步为验证山姜素对过敏性哮喘保护效果,并且探究其作用机制,为过敏性哮喘提供有效药物治疗的研究基础。本实验利用OVA（卵清蛋白）诱导小鼠建立过敏性哮喘模型,在第1和第14天采用OVA滴鼻激发,在第21、22、23天利用OVA腹腔注射并采取不同浓度的山姜素（25、50、100 mg/kg）对该进行预处理。第24天处死小鼠后,首先取小鼠肺脏,并对其病理组织学HE和PAS染色进行观察;其次检测肺泡灌洗液（BALF）中的中性粒细胞、巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的数量;接下来利用酶联免疫吸附（ELISA）测定测定肺泡灌洗液中IL-5和IL-13以血清中的Ig E和IL-4等;最后蛋白免疫印记（Western Blotting）检测肺组织的NF-κB/PI3K/AKT和HO-1信号通路。实验结果显示,当山姜素处理浓度在25、50和100 mg/kg水平时,与OVA模型组相比,小鼠肺脏的HE和PAS染色切片显示小鼠肺部组织损伤程度减轻,如减少炎性细胞浸润和粘液分泌;血清中Ig E和IL-4,BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞细胞数目减少,IL-5和IL-13的含量明显降低,NF-κB,PI3K/AKT等蛋白磷酸化水平随着山姜素处理浓度的升高而降低。为了更进一步验证山姜素在体外的作用机制,我们采用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7构建体外模型用于接下来的研究。首先采取细胞毒性实验（CCK-8）筛选出山姜素浓度为15、30、60μg/m L,ELISA法检测细胞上清液炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6,利用Western blot检测NF-κB和PAKT/PI3K信号通路中蛋白的磷酸化水平探讨山姜素作用机制。结果显示,与生理盐水处理的空白对照组相比,山姜素预处理细胞后,TNF-α、IL-1β、IL-6的水平降低,并且山姜素可以有效抑制RAW264.7中NF-κB/PI3K/AKT信号通路来发挥抗炎作用。本论文利用OVA建立小鼠过敏性哮喘体内模型和LPS刺激RAW264.7细胞体外模型,运用病理组织切片、ELISA和Western Blot等检测方法探究山姜素对在体内和体外抗炎抗过敏效果以及作用机制,证实了山姜素25、50和100 mg/kg水平上对过敏性哮喘具有保护作用,为山姜素在治疗过敏性哮喘疾病以及后续相关原料药物研发提供理论及数据支持。

林裕庆^[2]（2021）在《脐带血IL-13、Eotaxin水平与早期婴儿湿疹的相关性研究》文中进行了进一步梳理婴儿湿疹是最常见的早期变态反应性皮肤病,遗传及免疫因素被视为是影响湿疹患病的重要因素。婴儿的免疫系统最早在母亲妊娠期宫内就开始发育,而脐带血的免疫炎性指标反应新生儿最早的免疫功能状态,因此,研究脐带血免疫相关的炎性因子等成分与婴儿湿疹发病的关系,有助于揭示婴儿湿疹的影响因素,对婴儿湿疹的早期防治具有积极意义。研究已证实IL-13、Eotaxin在湿疹发病机制中发挥关键的作用,湿疹患者血液中IL-13、Eotaxin水平显着升高,然而目前关于脐带血IL-13、Eotaxin水平与婴儿湿疹关系的研究甚少。本课题研究分析脐带血IL-13、Eotaxin水平与早期婴儿湿疹的关系,并探讨影响婴儿湿疹的相关因素。本研究的入选对象来源于2018年10月至2020年05月在中国人民解放军空军特色医学中心妇产科出生且符合纳入标准的264例新生儿,在其出生后采集5ml脐带血放入采血管中,在我院临床医学实验室进行离心后分离上层血浆,采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测脐带血IL-13、Eotaxin水平。记录264例新生儿出生基本信息、问卷调查母亲孕期情况及家族有无相关过敏性疾病史。在婴儿出生后42天进行随访了解是否患有湿疹,对湿疹患儿评估其严重程度,询问母亲哺乳期饮食情况及喂养方式。运用SPSS25.0统计软件进行数据分析,以P<0.05差异具有统计学意义。本次研究的264名新生儿中,脐带血IL-13水平为15.35±11.66pg/ml、Eotaxin水平为107.59±66.32 pg/ml,生后42天随访时有151例婴儿患有湿疹,113例婴儿无湿疹,湿疹患病率为57.2%。根据婴儿是否患有湿疹分为湿疹组和无湿疹组,两组在有无家族过敏史、喂养方式、母亲哺乳期是否进食海鲜、坚果、花生、豆制品、牛羊肉类食物等方面比较差异有统计学意义（P<0.05）,而在婴儿的性别、出生身长及体重、胎龄、分娩方式、父亲年龄、母亲年龄及孕期是否体健方面比较差异均无统计学意义（P>0.05）。湿疹组脐带血IL-13、Eotaxin水平均明显高于无湿疹组,差异具有统计学意义（P<0.05）,说明脐带血IL-13、Eotaxin水平与婴儿湿疹的发生密切相关。脐带血IL-13、Eotaxin水平在有无家族过敏史两组比较差异有统计学意义（P<0.05）,说明家族过敏史对脐带血IL-13、Eotaxin水平有一定的影响。脐带血IL-13与Eotaxin之间无明显相关性（P>0.05）。采用非参数检验（Kruskal-Wallis test）分析轻度、中度、重度湿疹脐带血IL-13、Eotaxin水平比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。根据42天婴儿湿疹起病时间进行分为两组,分为1-3周组、3-6周组,两组之间脐带血IL-13、Eotaxin水平差异无统计学意义（P>0.05）。将脐带血IL-13、Eotaxin、家族过敏史作为自变量进行logistic逐步回归分析,结果表明脐带血IL-13、Eotaxin高表达水平及过敏性家族史均是影响湿疹发生的重要危险因素,差异有统计学意义（P<0.05）。脐带血IL-13、Eotaxin水平与婴儿湿疹密切相关,脐带血IL-13、Eotaxin高表达水平是影响婴儿患有湿疹的危险因素。脐带血IL-13、Eotaxin表达水平与婴儿湿疹严重程度之间无明显相关性。家族有过敏史、混合喂养、母亲哺乳期进食海鲜、坚果、花生、牛羊肉、豆制品类食物是影响湿疹发病的重要危险因素。

庞玲玲^[3]（2021）在《芹菜素上调miR-503-5p水平抑制慢性哮喘气道炎症反应的机制研究》文中进行了进一步梳理背景:支气管哮喘是多种炎性细胞和细胞组分参与的慢性气道炎症疾病,涉及各个年龄段,由于工业化国家大气污染严重、细颗粒浓度增高等原因导致慢性呼吸系统疾病特别是哮喘的发病率逐年升高。目前,全球约有3亿人患有哮喘,成人哮喘患病率为1.2%至25.5%,儿童哮喘患病率为3.3%至29.0%,已成为严重的公共卫生问题。截止目前,对哮喘发病机制的广泛研究表明,气道慢性炎症、气道高反应性以及气道重塑是哮喘的重要特征。因此,研究哮喘发病过程中这三个重要特征的发生、发展以及病理和分子特征,对于揭示哮喘发病的病因、治疗和寻找有效的治疗哮喘的药物或方法具有重要意义。黄酮类化合物是植物的次生代谢物,其在日常生活中常见的食物中含量丰富,广泛存在于水果、蔬菜、香料、草药、坚果、和蔬菜等作物中。芹菜素（Apigenin,API）,又称芹黄素、洋芹素,是日常食物中常见的黄酮类成分,因其在芹菜中含量最高而得名,除此之外,在温热带的蔬菜和水果中含量丰富,如马鞭草科、于瑞香科、卷柏科植物中。以往的大量研究报道表明芹菜素在抗氧化、抗炎方面起作用。在单核巨噬细胞RA W264.7细胞中,芹菜素衍生物Apigenin-7-O-glucoside（AG）可以抑制H2O2诱导活性氧生成从而降低氧化应激水平;在细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）处理后的RAW264.7细胞中,芹菜素衍生物AG显着抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路,降低细胞炎性因子分泌从而降低炎症反应。在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）中,芹菜素显着抑制肝脂肪沉积和细胞增殖,通过降低IL-8、TNF-α、GLUT-4和IR的合成和分泌,从而有效抑制NASH模型中的炎症反应。芹菜素在抗炎症反应中起重要作用,对芹菜素发挥作用的分子机制已有多个研究学者进行了深入研究。在缺血再灌注损伤模型中,缺血病灶炎性细胞被激活,浸润缺血组织,分泌多种炎性因子,包括白细胞介素如IL-1β、IL-6、和TNF-α、一氧化氮（NO）以及前列腺素E2（PGE2）等。而芹菜素处理能够显着降低体内iNOS、COX-2、NO以及PGE2的含量,证明其在缺血再灌注导致的炎症损伤中发挥抗炎作用。在丙烯腈（ACN）诱导的生殖细胞炎症和凋亡中,芹菜素上调乳酸脱氢酶同工酶（LDH）和山梨醇脱氢酶（SDH）含量,下调白细胞介素β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）的表达,从而减轻ACN引起的炎症反应。此外,在白血病、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤等中,芹菜素通过阻滞细胞周期起抗肿瘤效应。MicroRNA,即miRNA,是广泛存在于动、植物等中参与转录后调控的长度22 nt的单链RNA分子。以往的文献报道,芹菜素通过干预miRNA发挥各种生物学功能。在高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞（MMCs）中,芹菜素处理下调miR-34a表达,促进细胞增殖并抑制其凋亡,从而抑制小鼠腹膜间皮细胞纤维化。根据Wang等研究者,芹菜素处理处理脑胶质瘤U87细胞,显着上调miR16表达水平,通过抑制BCL2蛋白和NF-κB/MMP9信号通路,诱导肿瘤细胞凋亡。在慢性哮喘模型中,目前的研究主要集中于炎症反应、气道高反应性以及气道重塑的研究,但是对于信号转导通路,尤其是miRNA/mRNA信号通路的研究甚少。目的:本研究拟通过芹菜素对OVA（Ovalbumin,卵清蛋白）慢性哮喘小鼠模型进行干预,探索芹菜素在治疗慢性哮喘小鼠模型中的作用,以及其通过miRNA/mRNA发挥作用的分子机制。方法:筛选生长状态良好、体型大小接近的6-8周龄SPF Balb/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、OVA慢性哮喘小鼠模型组、15 mg/kg芹菜素治疗组和30 mg/kg芹菜素治疗组,采用OVA法建立慢性哮喘小鼠模型,同时芹菜素治疗组分别给予15 mg/kg芹菜素治疗组和30 mg/kg芹菜素。体外培养ASMCs（Airway Smooth Muscle Cells,气道平滑肌细胞）,采取PDGF-BB进行干预。OVA慢性哮喘小鼠模型建立完成后取肺组织,HE染色观察各组小鼠肺部组织病理特征、炎症细胞浸润的情况;PAS染色观察各组小鼠气道粘液分泌情况;ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）和PDGF-BB诱导的ASMCs中炎性因子INF-γ,IL-2和IL-12以及氧化应激蛋白ROS、SOD和MDA含量;Western-blot检测炎症相关蛋白p-AKT、NF-κB、IRF-3和IRF-7蛋白表达水平;CCK8实验分析PDGF-BB诱导的ASMCs细胞在不同浓度芹菜素处理后细胞增殖能力。miRNA芯片法筛选PDGF-BB诱导的ASMCs中差异表达miRNA;根据获得的多个miRNA,查阅相关研究文献和报道,筛选与哮喘或细胞增殖最为密切相关的miR-503-5p;RT-qPCR法检测芹菜素处理后miR-503-5p基因表达水平;通过microRNA.org筛选miR-503-5p靶基因STAT3;LUC荧光报告系统分析miR-503-5p对STAT3 3’UTR区结合及调控作用。在PDGF-BB诱导的ASMCs中抑制miR-503-5p表达,并通过RT-qPCR和Western blot检测芹菜素处理后STAT3 mRNA和蛋白水平;在ASMCs中抑制miR-503-5p或过表达STAT3,并通过ELISA检测炎症细胞因子INF-γ、IL-2和IL-12的含量;在PDGF-BB诱导的ASMCs中,通过CCK8检测过表达STAT3或抑制miR-503-5p对芹菜素抑制ASMCs细胞增殖效应的影响。结果:模型小鼠肺组织HE染色显示,气道炎症浸润明显,粘液分泌程度高,ELISA结果显示哮喘模型组小鼠肺泡灌洗液中INF-γ、IL-2和IL-12炎性细胞因子分泌增加;氧化应激蛋白ROS和MDA含量增加,而氧化应激负调控蛋白SOD含量降低;Western blot结果显示炎症相关蛋白p-AKT、NF-κB、IRF-3和IRF-7表达水平均显着升高,提示OVA慢性哮喘小鼠肺组织炎症反应和氧化应激水平显着增高,OVA慢性哮喘小鼠模型建立成功。以上述构建成功的哮喘模型小鼠为研究对象,研究芹菜素在哮喘中的作用和价值。15 mg/kg和30 mg/kg芹菜素治疗均能够有效缓解哮喘模型组小鼠哮喘症状、肺部粘膜水肿、气道阻塞、炎症细胞浸润,降低炎性因子INF-γ、IL-2和IL-12和炎症相关蛋白p-AKT、NF-κB、IRF-3和IRF-7以及氧化应激蛋白ROS和MDA的表达水平,增加氧化应激信号通路负调控因子SOD蛋白的表达水平。在PDGF-BB诱导的ASMCs中细胞炎性因子INF-γ、IL-2 和 IL-12,炎症反应相关蛋白 p-AKT、NF-κB、IRF-3 和 IRF-7,氧化应激蛋白ROS和MDA表达水平增加,而氧化应激通路负调控因子SOD蛋白水平降低。同样,芹菜素处理能够显着抑制PDGF-BB诱导的ASMCs细胞炎症反应和氧化应激水平,炎性细胞因子INF-γ、IL-2和IL-12,炎症反应相关蛋白p-AKT、NF-κB、IRF-3和IRF-7以及促氧化应激反应蛋白ROS和MDA表达水平降低,而氧化应激信号通路SOD蛋白水平则增加。上述结果表明芹菜素治疗或处理有效降低炎症反应和氧化应激水平,在慢性哮喘模型中起作用。此外,CCK8实验结果表明芹菜素处理能够显着抑制ASMCs细胞增殖,芹菜素可能通过抑制小鼠气道重塑缓解哮喘症状。miRNA芯片分析筛选到PDGF-BB诱导的细胞和正常对照细胞中差异表达的miRNAs,我们将上调最为显着的10个miRNA 展示在热图中,分别为 miR-196a-5p、miR-107、miR-4640、miR-6838、miR-497、miR-424、miR-374b、miR-367b、miR-203-5p 和 miR-228;下调最显着的 10 个 miRNA 展示在热图中,分别为 miR-199-3p、miR-1285、miR-536-3p、miR-141、miR-9、miR--20b、miR-19a、miR-251、miR-503-5p 和 miR-288。根据文献报道,miR-503-5p通过下调VEGF-A表达,抑制结肠癌的发生、血管生成和淋巴管生成,在癌症发生过程中起重要作用。且在进一步研究分析中,PDGF-BB刺激下ASMCs以及慢性哮喘模型小鼠肺组织中我们发现,miR-503-5p表达水平显着下调,采用芹菜素处理后,无论是PDGF-BB刺激下的ASMCs抑或慢性哮喘模型肺组织,miR-503-5p的表达有所回复,因此推测miR-503-5p可能在慢性哮喘过程中起作用,且是芹菜素的作用靶点。RT-qPCR筛选miR-503-5p在PDGF-BB诱导的ASMCs中表达降低,LUC荧光报告实验表明miR-503-5p能够特异性结合STAT3 3’UTR区并抑制其表达,而当突变掉STAT3 3’UTR区miRNA结合位点后,该抑制效应消失。在PDGF-BB诱导的ASMCs中STAT3蛋白水平升高,芹菜素处理能够下调该增加效应,抑制miR-503-5p表达则增加STAT3蛋白水平。此外,PDGF-BB诱导增加ASMCs细胞中炎性细胞因子INF-γ、IL-2和IL-12含量,芹菜素处理能够下调PDGF-BB诱导的增加效应,抑制miR-503-5p或过表达STAT3能够抑制芹菜素对于INF-γ、IL-2和IL-12表达的抑制效应。此外,CCK8结果显示在ASMCs中过表达STAT3或抑制miR-503-5p的表达,能够逆转芹菜素对于ASMCs细胞增殖的抑制效应。结论:芹菜素能够有效缓解OVA慢性哮喘小鼠模型哮喘症状,减轻慢性哮喘的气道炎症反应,其机制可能是芹菜素通过miR-503-5p/STAT3通路,从而进一步抑制慢性哮喘的气道炎症反应、氧化应激水平以及气道重塑。

袁家胜^[4]（2021）在《下调CCR3基因调控PI3K/AKT信号通路对变应性鼻炎小鼠的作用研究》文中研究表明目的:1、应用骨髓CCR3基因条件性敲除小鼠,构建变应性鼻炎模型。体内观察各组小鼠鼻部症状和鼻黏膜组织病理形态改变,比较血清中Th1/Th2炎症因子的含量和鼻黏膜中CCR3蛋白、PI3K/AKT信号通路转导蛋白的水平;2、使用抑制剂对PI3K/AKT信号通路进行干预,同前构建变应性鼻炎模型,并检测上述炎症指标,以期了解CCR3基因和PI3K/AKT信号通路在变应性鼻炎发病中的作用机制,为变敏性鼻炎的基因治疗奠定基础。方法:1、在SPF（Specific Pathogen Free）条件下,繁殖骨髓CCR3基因条件性敲除种鼠,通过PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳对仔鼠进行基因型鉴定;实验分组:野生型空白对照组（WT-NC组）、野生型变应性鼻炎组（WT-OVA组）、敲除CCR3基因空白对照组（KO-NC组）、敲除CCR3基因变应性鼻炎组（KO-OVA组）。2、通过腹腔注射联合鼻部滴入卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）方案构建变应性鼻炎小鼠模型,对照组用无菌生理盐水代替。末次滴鼻后观察10 min内小鼠行为学变化。苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察小鼠鼻黏膜组织病理学变化。3、采用蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠鼻黏膜中CCR3、AKT和P-AKT蛋白的水平。酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测小鼠血清中IL-4、IL-5和IFN-γ的蛋白含量。4、另使用PI3K特异性抑制剂Ly294002对野生型小鼠进行腹腔注射以干预PI3K/AKT信号通路激活程度;实验分组:空白对照组（Normal组）、变应性鼻炎溶剂组（OVA-DMSO组）、变应性鼻炎低剂量PI3K抑制组（OVA-1.5mg/kg Ly294002组）、变应性鼻炎中剂量PI3K抑制组（OVA-3.0mg/kg Ly294002组）、变应性鼻炎高剂量PI3K抑制组（OVA-6.0mg/kg Ly294002组）。同前检测上述炎症指标。结果:1、条件性敲除骨髓CCR3基因对变应性鼻炎小鼠的实验研究（1）PCR检测结果示:SPF条件下繁殖骨髓CCR3基因条件性敲除种鼠,可以获得骨髓CCR3基因缺陷纯合子子代小鼠。（2）行为观察结果示:条件敲除骨髓CCR3基因,显着改善变应性鼻炎小鼠抓鼻、打喷嚏等鼻部症状。（3）HE染色结果示:条件敲除骨髓CCR3基因,改善变应性鼻炎小鼠鼻黏膜的组织病理结构,减轻局部黏膜肿胀及嗜酸性粒等炎细胞的浸润,从而降低鼻黏膜的破坏程度。（4）ELISA检测结果示:条件敲除骨髓CCR3基因,降低变应性鼻炎小鼠血清中IL-4、IL-5的含量而提高IFN-γ的含量,进而调节小鼠的Th1/Th2免疫失衡。（5）Western Blot检测结果示:条件敲除骨髓CCR3基因,同时下调变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中CCR3和P-AKT的蛋白水平,提示PI3K/AKT信号转导通路可能介导CCR3基因对变应性鼻炎的致病过程。2、CCR3基因调控PI3K/AKT信号转导通路对变应性鼻炎小鼠的实验研究（1）行为观察结果示:腹腔注射PI3K特异性抑制剂Ly294002,可改善小鼠抓鼻、打喷嚏等鼻部症状,并随浓度的递增,症状改善更为明显。（2）HE染色结果示:增加Ly294002腹腔注射的浓度,逐渐改善变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织病理学结构,降低小鼠鼻黏膜的破坏程度。（3）ELISA检测结果示:增加Ly294002腹腔注射的浓度,逐渐降低变应性鼻炎小鼠血清中Th2炎症因子（IL-4、IL-5）的水平,而升高Th1炎症因子（IFN-γ）的水平,从而调节变应性鼻炎小鼠Th1/Th2的炎症失衡。（4）Western Blot检测结果示:腹腔注射PI3K特异性抑制剂Ly294002,有效地下调了鼻黏膜中PI3K/AKT信号通路的激活水平,但是不影响CCR3蛋白在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达水平。结论:条件性敲除骨髓CCR3基因,通过下调CCR3的表达降低了PI3K/AKT信号通路的激活水平,改善了鼻黏膜组织病理学结构,并通过调节小鼠Th1/Th2免疫失衡,缓解了变应性鼻炎小鼠症状。前期实验研究已发现:下调CCR3基因通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制嗜酸性粒细胞的体外增殖、迁移及脱颗粒功能。结合前期实验研究结果表明:下调CCR3基因可通过抑制PI3K/AKT信号通路,对变应性鼻炎的发病机制产生作用,从而减轻变应性鼻炎的症状。

邢江楠^[5]（2021）在《基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究》文中研究说明目的:围绕CCL24/CCR3嗜酸细胞活化途径的变化,以小鼠嗜酸性粒细胞为研究对象,从细胞-分子水平中观察疏风通络方含药血清调控小鼠嗜酸性粒细胞活化CCL24/CCR3的通路影响嗜酸性粒细胞中CCR3受体蛋白含量、细胞总ERK磷酸化水平以及嗜酸细胞CCR3基因表达水平、ERK基因水平表达的变化,为今后疏风通络方的临床治疗提供一定的依据。方法:1.本实验选取64只平均体重为18-22g（8-12周龄）SPF级雄性野生型C57BL/6小鼠,并将64只小鼠随机划分为空白对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。每组16只,适应性喂养2周后除空白对照组,其余各组用疏风通络方进行灌胃,每天一次,连续灌胃7天,制备相应的含药血清。空白组给予生理盐水灌胃,中药组则给予小鼠不同浓度的疏风通络方进行灌胃。2.对嗜酸性粒细胞进行原代培养并建立体外实验模型。3.通过瑞氏染色法观察嗜酸性粒细胞形态学的特征。4.各组分别给予相应拮抗剂干预处理,加入趋化因子CCL24诱导1小时后,最后加入不同剂量含药血清后,将实验进行分组:将体外培养的嗜酸性粒细胞分为空白对照组、CCL24+空白血清组、CCL24组、CCL24+中药低剂量血清组、CCL24+中药中剂量血清组、CCL24+中药高剂量血清组、CCL24+SB328437组（CCR3受体拮抗剂）、CCL24+SB203580组（P38蛋白激酶拮抗剂）、CCL24+PD98059组（MEK1/MEK2激酶拮抗剂）、CCL24+Wortmannin（PI3K蛋白拮抗剂）。5.检测:采用Western blot法测定嗜酸性细胞CCR3受体蛋白含量、细胞总ERK磷酸化水平;采用RT-PCR测定小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3、ERK基因水平表达。结果:1)Western blot检测结果显示:（1）嗜酸性粒细胞中CCR3蛋白受体的含量比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组中CCR3蛋白受体含量表达增高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低剂量血清组中CCR3蛋白受体含量表达增高,中药中、高剂量血清组中蛋白表达降低,其中低、高剂量血清组与其对比有意义（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3蛋白受体含量表达均降低,与其对比,皆有统计学差异（P<0.05）。与CCL24组相比,中药低剂量血清组中CCR3蛋白表达含量升高,而中药高剂量血清组中CCR3蛋白含量降低（P<0.05）;拮抗剂组SB203580组、SB328437组、Wortmannin组中CCR3蛋白表达含量降低,对比具有统计学差异（P<0.05）,而PD98059组中蛋白含量的表达与其对比无显着性差异（P>0.05）。（2）ERK磷酸化水平的比较:1)ERK水平:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中的ERK水平增高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低、中、高血清组中ERK水平的表达均降低,对比统计学具有差异（P<0.05）,拮抗剂组中ERK水平都降低（P<0.05）。与CCL24组相比,中药含药血清组中ERK水平表达均降低,统计学具有差异（P<0.05）,各拮抗剂组中ERK水平降低（P<0.05）。2)p-ERK水平比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中水平升高（P<0.05）。与CCL24+空白血清组和CCL24组相比,中药低、中、高剂量血清组中p-ERK水平升高,组间对比无明显差异（P>0.05）,而拮抗剂组中SB203580组、SB328437组以及Wortmannin组分别与其对比p-ERK统计学无差异（P>0.05）。2)RT-PCR检测结果比较:（1）CCR3m RNA表达水平的比较:与空白对照组相比,CCL24+空白血清组、CCL24组中CCR3m RNA表达水平上升（P<0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药低、中、高剂量血清组中CCR3m RNA表达水平降低,其中中药低、高剂量含药血清组与其对比有明显差异（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3m RNA表达水平都降低,其中SB203580组、PD98059组对比有显着差异（P<0.05）。与CCL24组相比,中药低、中、高剂量血清组中CCR3m RNA表达水平降低,其中中药低、高剂量含药血清组与其对比有明显差异（P<0.05）;拮抗剂组中CCR3m RNA表达水平都降低,其中SB203580组、PD98059组对比有显着差异（P<0.05）。（2）ERKm RNA水平比较:CCL24+空白血清组、CCL24组ERKm RNA水平较空白对照组上调（P>0.05）。与CCL24+空白血清组相比,中药中剂量血清组中ERKm RNA水平表达降低,其余组中基因表达水平上升,与其对比统计学无明显差异（P>0.05）。与CCL24组相比,含药血清组中低、中剂量组、PD98059组中ERKm RNA水平表达降低,其他组基因水平表达上涨,组间对比无统计学差异（P>0.05）。结论:1.疏风通络方能够降低嗜酸性粒细胞中CCR3蛋白含量的表达以及ERK的水平。2.疏风通络方能够降低小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3基因表达的水平。3.疏风通络方对小鼠嗜酸细胞中p-ERK水平和ERK基因水平无影响。4.疏风通络方能够通过降低小鼠嗜酸性粒细胞中CCR3及ERK的水平表达,从而调节CCL24/CCR3通路,减轻或抑制哮喘的发作,改善哮喘气道的炎症。

严莹^[6]（2021）在《杨芽黄素对虾原肌球蛋白诱导的小鼠过敏性哮喘的保护作用研究》文中提出研究背景:哮喘是常见的慢性气道炎症性疾病。目前全球的患病人数约2.35亿人,我国成人哮喘患病率为4.2%,其中半数以上是由致敏原诱发的过敏性哮喘类型。其病理特征包括气道嗜酸性粒细胞炎症、气道高反应、气道上皮黏液分泌增多,进而发生气道重塑。目前临床主要采用吸入性糖皮质激素治疗,但长期应用存在影响骨发育等不良反应及部分患者激素抵抗等问题。因此,寻找可替代的治疗药物,减少糖皮质激素的用量是目前研究的重点问题。杨芽黄素（Tectochrysin,TEC）是一种来源于蜂胶、益智仁中的黄酮化合物,具有抗肿瘤、抗阿尔兹海默病、抗菌等药理作用。最近的研究结果表明,在脂多糖刺激的Raw 264.7巨噬细胞模型中,TEC能抑制炎症因子的分泌;还能减轻四氯化碳诱导的肝组织氧化损伤,提示TEC具有抗炎和抗氧化作用。目前TEC是否通过其抗炎和抗氧化作用改善过敏性哮喘尚有待探明。基于前期我们已建立的虾原肌球蛋白诱导的全身过敏反应模型,我们将以虾原肌球蛋白为致敏原诱导哮喘小鼠模型来探讨TEC抗哮喘的作用。目的:建立以虾原肌球蛋白为致敏原的过敏性哮喘小鼠模型;研究TEC对过敏性哮喘小鼠的作用。方法:1、建立虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠模型虾原肌球蛋白腹腔注射致敏C57BL/6小鼠,每周1次,连续3周,滴鼻激发诱导小鼠发生过敏性哮喘,每天1次,连续7天。采用ELISA法测定小鼠血清总IgE、抗原特异性IgE的水平及BALF中IL-4、IL-5的含量;肺功能仪测定小鼠肺气道阻力;HE染色观察小鼠肺组织形态学变化;PAS染色观察小鼠气道上皮细胞黏液分泌状态;计数BALF中的细胞总数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞术检测小鼠肺组织中CD45+CD4+的比例;分光光度法测定肺组织EPO活性。另外,采用滴鼻激发诱导小鼠气道重塑,每周2次,持续6周。采用HE染色法观察肺组织形态、Masson三色染色法观察胶原纤维增生,免疫组织化学法检测小鼠肺组织α-SMA的表达。2、TEC对过敏性哮喘小鼠的作用C57BL/6小鼠,分为对照组、模型组、阳性药物组、TEC给药组（5和2.5 mg/kg）。模型组和各给药组以虾原肌球蛋白诱导哮喘模型。阳性药物组和给药组分别腹腔注射给予地塞米松或TEC,对照组给予等体积生理盐水。末次激发24 h后,采用全血细胞分析仪检测外周血中白细胞总数及嗜酸性粒细胞占血液中白细胞总数的百分比;计数BALF中细胞总数;ELISA法检测血浆中IgE水平及BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ含量;ELISA法检测虾原肌球蛋白诱导脾细胞分泌Th2细胞因子的含量;HE染色法观察肺组织形态学变化,天狼星红染色观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润,PAS染色法观察气道上皮黏液分泌;分光光度法检测肺组织EPO、CAT和GPx活性;流式细胞术测定嗜碱细胞表面CD200R的表达。在虾原肌球蛋白诱导的RBL-2H3细胞中检测TEC对IL-4分泌的影响。结果:1、虾原肌球蛋白诱导的小鼠过敏性哮喘模型与对照组相比,模型组小鼠血清总IgE及抗原特异性IgE水平显着增高;小鼠BALF中IL-4和IL-5的水平升高显着;小鼠肺气道阻力升高;HE染色显示肺组织中支气管和血管周围有大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞为主;PAS染色显示气道上皮细胞黏液分泌旺盛;小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数和肺组织中CD45+CD4+T细胞的数量显着增加;小鼠肺组织EPO活性升高。此外,在气道重塑模型中,与对照组相比,模型组小鼠肺组织出现明显的结构性改变,表现为细支气管周炎症细胞浸润,黏膜上皮细胞增生肥大,黏膜下、气道壁周、肺间质可见有胶原沉积,细支气管平滑肌肥大（α-SMA阳性面积增加）。2、TEC改善虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症TEC能明显减轻嗜酸性粒细胞炎症。与模型组相比,TEC给药组小鼠外周血总白细胞总数下降,外周血总白细胞中嗜酸性粒细胞的百分比减少;血浆中总IgE水平降低;小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5的含量及IL-4/IFN-γ 比率下降,IFN-γ含量升高;虾原肌球蛋白诱导脾细胞分泌Th2细胞因子IL-4和IL-5的含量减少;组织学结果表明TEC组肺组织嗜酸性粒细胞数和黏膜上皮黏液分泌减少;肺组织EPO活性降低;TEC还抑制嗜碱性粒细胞活化,降低模型组小鼠外周血嗜碱性粒细胞CD200R的表达,在虾原肌球蛋白诱导的RBL-2H3细胞抑制IL-4的分泌。另外,TEC还能够提高模型小鼠肺组织中CAT和GPx活性。结论:1、成功建立虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠模型,小鼠表现为气道高反应、气道嗜酸性粒细胞炎症、上皮黏液分泌增加和气道重塑。2、TEC通过抑制Th2反应和氧化应激,改善虾原肌球蛋白诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症。

李志丹^[7]（2020）在《日本血吸虫感染对过敏性气道炎症的作用及机制研究》文中提出目的:探究不同时期日本血吸虫（Schistosome japonicum,Sj）感染及Sj虫卵排泌蛋白（E/S）对鸡卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的过敏性气道炎症（Allergic Airway Inflammation,AAI）的影响。方法:本研究分三部分:Sj肺期感染（先诱导后感染）免疫干预实验、Sj感染21天免疫干预实验（先感染后诱导）和SjE/S免疫干预实验。建立血吸虫感染和OVA诱导的过敏性气道炎症模型。Sj肺期和肺后期感染干预实验:首先,第0、14天腹腔注射10 μg OVA+2mg铝佐剂致敏,第21～24天给予1%OVA雾化处理。肺期和肺后期感染分别于OVA致敏第20天和第7天采用腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴,（15±2）条/鼠;E/S免疫干预于OVA致敏前2天、第13天和第21-24天分别腹腔注射E/S 100 μg/次,共6次。Sj感染21天免疫干预实验:先Sj感染,感染后第21、35天进行OVA致敏,第42～46天给予1%OVA雾化处理。所有小鼠末次雾化48 h后解剖,取肺灌洗液、肺和脾组织、肺引流淋巴结、采集不同时间点血清。第一部分Sj肺期感染干预实验（先诱导后感染）分为Sj肺期（感染6天）和肺后期（感染20天）感染的比较、OVA特异性CD4+T细胞（CD4）的过继转输、调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的清除和肺期Sj感染的肺转录组测序四部分。1)Sj肺期和肺后期感染比较部分分OVA组、OVA+INF（肺后期感染）组、OVA+INF（肺期感染）组、OVA+DXM（地塞米松）组、INF组和NOR组,5只BALB/c鼠/组。评价指标包括:肺灌洗液总细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的计数比例;HE和PAS染色显示肺组织血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞增生;ELISA检测血清总IgE和OVA特异性IgE水平;液相芯片检测肺灌洗液中哮喘炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、IFN-γ和IL-10水平及流式检测脾和肺组织CD4+CD25+Foxp3+Treg比例。2)过继转输部分分组为OVA+CD4（OVA诱导加过继转输）和OVA+CD4+INF（OVA诱导加过继转输加Sj感染）两组,8只C57BL/c鼠/组,评价指标包括:流式细胞术检测肺和肺引流相关淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg、CD4+IL-4+T和CD4+IFN-γ+T的比例。3)Treg清除验证部分分组为OVA+INF+αCD25（OVA诱导加Sj感染加CD25中和）和OVA+INF+IgG（OVA诱导加Sj感染加同型对照）两组,8只BALB/c鼠/组。评价指标包括:肺灌洗液炎细胞计数;HE和PAS染色观察肺组织血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞增生;ELISA检测血清OVA特异性IgE和IgG水平。4)肺转录组测序分组为OVA组、OVA+INF（肺期感染）组、OVA+DXM（地塞米松）组、INF组和NOR组,取各组肺组织,提RNA,建库测序,进行KEGG和GO分析。第二部分Sj感染21天免疫干预实验（先感染后诱导）分OVA组、OVA+INF组、INF组和NOR组,5只BALB/c鼠/组。评价指标包括:肺灌洗液总细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的比例;HE和PAS染色观察肺组织血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞增生;ELISA检测血清总IgE和OVA特异性IgE水平;液相芯片检测肺灌洗液中哮喘炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、IFN-γ和IL-10;流式检测脾和肺组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg比例。第三部分Sj虫卵E/S免疫干预实验分OVA组、OVA+E/S组、E/S组和NOR组,5只BALB/c鼠/组。评价指标包括:肺灌洗液总细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的比例;HE和PAS染色观察肺组织血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞增生;ELISA检测血清总IgE和OVA特异性IgE水平;液相芯片检测肺灌洗液中哮喘炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、IFN-γ和IL-10的水平;流式检测脾和肺组织CD4+CD25+Foxp3+Treg比例。结果:1 Sj肺期感染（先诱导后感染）免疫干预实验:1.1 肺期和肺后期Sj感染的比较部分:肺灌洗液计数结果显示,与正常组比,OVA致敏后Sj感染肺灌洗液中总炎细胞和嗜酸性粒细胞计数均显着升高（P<0.01）;与OVA组比,地塞米松处理后显着降低（P<0.01）,Sj肺期感染后肺灌洗液炎细胞和嗜酸性粒细胞计数也显着减低（P<0.01）,而Sj肺后期感染后差异无统计学意义（P>0.05）。病理学检测结果显示,与正常组比,OVA组肺血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞的糖原增生均显着加重（P<0.01,P<0.05）;与OVA组比,地塞米松处理后均显着减轻（P<0.01）;Sj肺期感染后,肺血管和支气管周围炎细胞浸润和上皮细胞增生显着减轻（P<0.01;P<0.05）,而肺后期Sj感染后差异无统计学意义（P>0.05）。ELISA结果显示,与正常组比,OVA致敏后血清IgE和OVA特异性IgE水平均显着升高（均P<0.01）;地塞米松处理后较OVA组均显着降低（均P<0.01）,肺期Sj感染后也降低（P<0.05;P<0.01）,而肺后期感染后差异无统计学意义（P>0.05）。液相芯片结果显示,较正常组,OVA致敏后IL-4、IL-5和Eotaxin显着增加（均P<0.01）;肺期感染后IL-5较OVA组则减低（P<0.05）,而IL-4和Eotaxin差异无统计学意义（P>0.05）;肺后期感染后IL-4和IL-5较OVA组升高（P<0.01;P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,OVA组和感染组肺和脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例较正常组差异均无统计学意义（P>0.05）;肺期感染后较OVA组增加（P<0.01;P<0.05）,而肺后期感染后仅脾组织Treg比例增加,肺组织中差异无统计学意义（P<0.05）。1.2 OVA特异性CD4+T过继转输:结果显示,OVA+CD4+INF组肺OVA特异性Treg（CD45.1+）的比例较OVA+CD4组显着上调（P<0.001）,总Treg比例较OVA+CD4组也升高（P<0.05）,而非特异性Treg（CD45.2+）比例较OVA+CD4组差异无统计学意义（P>0.05）;肺引流淋巴结中OVA特异性Treg（CD45.1+）比例较OVA+CD4组差异无统计学意义（P>0.05）,而OVA非特异性Treg（CD45.2+）和总Treg比例较OVA+CD4组均升高（均P<0.05）。肺组织中,OVA+CD4+INF组OVA特异性CD4+IL-4+T细胞比例较OVA+CD4组差异无统计学意义,CD4+IFN-γ+T细胞的比例则显着升高（P<0.05）,它们的比值CD4+IL-4+T/CD4+IFN-γ+T在Sj感染后显着降低（P<0.05）;肺引流淋巴结中,OVA特异性CD4+IL-4+T细胞在OVA+CD4+INF 组较 OVA+CD4 组显着降低（P<0.05）,CD4+IFN-γ+T 细胞的比例差异无统计学意义（P>0.05）,它们的比值CD4+IL-4+T/CD4+IFN-γ+T也显着降低（P<0.05）。进一步,相关性分析显示,肺组织Treg的比例和OVA特异性IgG和IgE呈明显的负相关关系。1.3 Treg体内清除部分:结果显示,OVA+INF+αCD25组肺灌洗液炎细胞计数较同型对照OVA+INF+IgG组升高（P<0.05）;支气管上皮糖原增生显着加重（P<0.001）,但肺血管和支气管周围炎细胞浸润情况较OVA+INF+IgG组差异无统计学意义（P>0.05）;血清OVA特异性IgE的吸光度（A450）值较OVA+INF+IgG组升高（P<0.05）,但OVA特异性IgG的吸光度（A450）值较OVA+INF+IgG组差异无统计学意义（P>0.05）。1.4 Sj肺期感染肺组织转录组测序部分:分析显示,OVA+INF组较OVA组有203个基因显着上调,279个基因显着下调（Pad<0.05）;两组差异基因的GO分析显示,明显聚集的通路中前3的是T细胞活化、淋巴细胞增殖和淋巴细胞增殖的调节（P<0.05）;差异基因的Panther分析显示,482个差异基因可分为免疫系统过程（84）、生物调节和生物黏附（86）、细胞和多细胞过程（78）、发育（11）、定位（14）、代谢过程（29）、对刺激物反应（21）和未注释的基因（159）等8个生物学过程,其中84个和免疫反应相关的基因中,70个在Sj感染后下调。进一步分析结果显示,两组差异基因中明显与Treg的增殖分化有关的基因包括Clec7a、CCR6、Spi-B、ADA、Ptgir、Ctss、Ctsk、Epor、ABCG1、CD46 和 Klral7（P<0.05）,与 B 细胞或浆细胞功能分化有关的基因包括 DOCK2、IRF4、Rac2、Lgals3、H2-Oa、Pdcdllg2、Sash3和Mzbl,与肺功能发育有关的基因包括FOXF1、ANO9、TRIM6、MMP27、Epor、Gatal和Serpina,与细胞结构完整性有关的基因包括Villin和CRB1。2 Sj感染21天（先感染后诱导）免疫干预实验:ELISA结果显示,感染后第35、42和49天,感染组小鼠血清IgE的吸光度（A450）值均显着高于健康对照组（均P<0.01）;OVA组第42和49天IgE 水平较健康对照组也升高（P<0.01）;而且,感染+OVA组IgE的A450均高于OVA组（均P<0.01）。感染后第35、42和49天,OVA组OVA特异性IgE的A450值均高于健康对照组（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;而感染+OVA组的A450值均低于OVA组（P<0.01,P<0.01,P<0.05）。感染后第49天的病理学检测结果显示,感染组和OVA组肺组织支气管和血管周围炎细胞浸润的炎症指数较健康对照组均升高（P<0.05,P<0.01）,而感染+OVA组较OVA组则减低（P<0.05）。此外,与健康对照组比,OVA组支气管上皮细胞的增生指数与健康对照组比升高（P<0.05）;而感染+OVA组较OVA组差异无统计学意义（P>0.05）。感染后第49天流式细胞术检测结果显示,感染组脾和肺组织Treg的比例均高于健康对照组（P<0.05）;OVA组较健康对照组差异无统计学意义（P>0.05）;感染+OVA组较OVA组脾组织Treg比例升高（P<0.01）,而肺组织差异无统计学意义（P>0.05）。3Sj虫卵E/S免疫干预实验:肺灌洗液炎细胞计数显示,OVA组肺灌洗液中总炎细胞计数和嗜酸性粒细胞比例较正常组显着增加（均P<0.01）,而OVA+E/S组较OVA组显着减低（P<0.01）。肺病理学检测结果显示,OVA组呈现明显的肺血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞糖原增生,较正常组均显着加重（P<0.01,P<0.05）;而OVA+E/S组较OVA组则减轻（均P<0.05）。ELISA结果显示,诱导后第20和26天,OVA组血清IgE的吸光度（A450）值较正常组均显着增加（均P<0.001）;而OVA+E/S组较OVA组均显着降低（均P<0.001）。在诱导后第20天,OVA+E/S组OVA特异性IgE较OVA组显着降低（P<0.01）;而诱导后第26天差异无统计学意义（P>0.05）,OVA+E/S组OVA特异性IgG1较OVA组也显着减低（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,OVA+E/S组脾组织中Treg比例较OVA组显着升高（P<0.01）,而肺组织中差异无统计学意义（P>0.05）。结论:Sj肺期感染免疫干预实验:Sj肺期感染显着改善了 OVA诱导的过敏性气道炎症,主要抑制了肺血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞糖原增生、抑制了 OVA特异性IgE的产生、减少了 OVA特异性Th2细胞因子分泌,而且该免疫干预作用通过上调OVA特异性Treg,抑制IgE分泌介导介导;进一步肺组织转录组测序说明了 Sj肺期感染在宿主肺组织局部形成了有利于Treg反应的微环境。Sj感染21天免疫干预实验:Sj感染（21 d）对OVA诱导的过敏性气道炎症有明显的调节作用,血吸虫感染可降低过敏性炎症致敏期和激发期OVA特异性IgE的水平,抑制OVA诱导的肺组织支气管和血管周围的炎细胞浸润,诱导脾组织Treg比例的升高。Sj虫卵E/S免疫干预实验:Sj虫卵E/S免疫改善了OVA诱导的过敏性气道炎症,虫卵E/S免疫可抑制OVA诱导的肺血管和支气管周围炎细胞浸润和支气管上皮细胞的糖原增生、降低致敏期和激发期OVA特异性IgE水平、上调脾组织中Treg的比例。

孔一卜^[8]（2020）在《基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制》文中进行了进一步梳理第一部分益气固本胶囊对过敏性哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响目的:通过体内实验探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制。方法:1.采用OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发的方法制备过敏性哮喘小鼠模型。2.Giemsa染色法检测各组小鼠BALF中炎症细胞分类与计数。3.各组小鼠肺组织进行HE、PAS及Masson染色,分别用来判断肺组织炎症浸润、气道杯状细胞化生和气道上皮下纤维化情况。4.ELISA检测各组小鼠BALF中IgE、IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4、TGF-β1、PDGF、MUC5AC含量。5.免疫组织化学染色观察各组小鼠肺组织中TLR4及α-SMA表达水平。6.RT-PCR检测各组小鼠肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1、PDGF、TLR4、MyD88、TRAF6、IκBα、p65的mRNA表达。7.Western Blot检测各组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、α-SMA、IκBα、p65及p-p65的蛋白表达。结果:1.OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发后,过敏性哮喘模型出现呼吸加快、点头呼吸、站立不稳及烦躁不安等哮喘发作时典型症状,BALF中EOS和IgE含量增高,肺组织炎症浸润明显,提示过敏性哮喘模型构建成功。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型呼吸加快、点头呼吸、站立不稳及烦躁不安等哮喘发作时典型症状明显减轻,BALF中EOS和IgE含量明显降低,肺组织炎症浸润明显减轻。2.过敏性哮喘模型BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13的mRNA水平明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13 mRNA水平明显降低。3.过敏性哮喘模型BALF中Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4含量明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4中含量明显降低。4.过敏性哮喘模型气道杯状细胞化生程度严重,BALF中MUC5AC含量明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型气道杯状细胞化生程度明显减轻,BALF中MUC5AC含量明显降低。5.过敏性哮喘模型肺组织上皮下纤维化程度严重,BALF中TGF-β1含量和肺组织中TGF-β1 mRNA表达明显升高,肺组织中E-cadherin蛋白表达明显降低,Vimentin、Fibronectin蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型肺组织上皮下纤维化程度明显减轻,BALF中TGF-β1含量和肺组织中TGF-β1 mRNA表达明显降低,肺组织中E-cadherin蛋白表达明显升高,Vimentin、Fibronectin蛋白表达明显降低。6.过敏性哮喘模型BALF中PDGF含量和肺组织中PDGF mRNA表达明显升高,肺组织中α-SMA蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中PDGF含量和肺组织中PDGF mRNA表达明显降低,肺组织中α-SMA蛋白表达明显降低。7.过敏性哮喘模型肺组织中TLR4、TRAF6及p65的mRNA表达明显升高,IκBα的mRNA和蛋白表达明显降低,p65及p-p65的蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型肺组织中TLR4、TRAF6及p65的mRNA表达明显降低,IκBα的mRNA和蛋白表达明显升高,p65及p-p65的蛋白表达明显降低。结论:1.采用OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发的方法成功构建过敏性哮喘模型。2.益气固本胶囊可以通过调节IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4含量和IL-4、IL-5、IL-13的mRNA表达来减轻过敏性哮喘模型的气道炎症。3.益气固本胶囊可以通过调节TGF-β1、PDGF、MUC5AC含量和TGF-β1、PDGF的mRNA表达及E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、α-SMA蛋白表达来减轻过敏性哮喘模型的气道重塑。4.益气固本胶囊减轻过敏性哮喘模型气道炎症和气道重塑的作用机制和调节TLR4/NF-κB信号通路有关。第二部分益气固本胶囊对PDGF-BB诱导气道平滑肌增殖和迁移的影响目的:通过体外实验探究益气固本胶囊对PDGF-BB诱导气道平滑肌增殖和迁移的影响。方法:1.采用PDGF-BB诱导ASMC构建气道平滑肌增殖和迁移模型。2.MTT法检测益气固本胶囊对ASMC药物毒性的影响及其对PDGF-BB诱导ASMC增殖的影响。3.流式细胞术检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC细胞周期的影响。4.Transwell实验检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC迁移的影响。5.细胞划痕实验检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC迁移的影响。6.ELSIA检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其分泌的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α及TGF-β1水平的影响。8.RT-PCR检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其IκBα、p65的m RNA表达水平的影响。9.Western blot检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其IκBα、p65、p-p65蛋白表达水平的影响。结果:1.0.05mg/m L、0.1mg/m L、0.2mg/m L、0.4mg/m L浓度的益气固本胶囊对ASMC的生存无明显影响,可用于后续实验研究。2.ASMC经PDGF-BB诱导24h、48h、72h后,其增殖能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的增殖能力明显减弱。3.ASMC经PDGF-BB诱导后,其细胞周期中的G0-G1期缩短,G2-M期延长。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的细胞周期中的G0-G1期延长,G2-M期缩短。4.ASMC经PDGF-BB诱导12h、24h后,其划痕修复能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的划痕修复能力明显减弱。5.ASMC经PDGF-BB诱导后,其迁移能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的迁移能力减弱。6.ASMC经PDGF-BB诱导后,其分泌的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1数量明显增加。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC分泌IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1的数量减少。7.ASMC经PDGF-BB诱导后,其IκBα的m RNA和蛋白表达降低,p65、p50的m RNA表达升高,p-p65的蛋白表达升高。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的IκBα的m RNA和蛋白表达升高,p65、p50的m RNA表达降低,p-p65的蛋白表达降低。结论:1.采用PDGF-BB诱导ASMC后,ASMC的增殖和迁移能力明显增强,提示ASMC增殖和迁移模型构建成功。2.益气固本胶囊可以抑制PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移。3.益气固本胶囊可以降低PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移过程中分泌IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1的数量。4.益气固本胶囊抑制PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移的作用机制和调节NF-κB信号通路有关。

纪雯婷^[9]（2020）在《麻芥巴布膏经皮给药多途径调控哮喘Th2型炎症并缓解AHR的机制研究》文中进行了进一步梳理哮喘日益危害我国人民健康,过敏性哮喘作为最常见的哮喘亚型应给予重点关注。中药贴敷治疗哮喘在发挥良好功效的同时,还具备安全、方便等优势,弥补了西药治疗多种副作用的缺点,在不断的医疗实践中被越来越多的人认可。本课题所使用的麻芥巴布膏是一种典型的贴敷治疗药物,其药物组成包含麻黄、白芥子、延胡索、苦杏仁以及生姜汁,临床应用于哮喘患者收效良好。之前的实验中,我们已经发现麻芥巴布膏可有效缓解过敏性哮喘模型动物气道高反应（airway hyperresponsiveness,AHR）,而过敏性哮喘呼吸道Th2型炎症是导致AHR的主要原因。我们猜测麻芥巴布膏或可通过调控Th2型炎症,减轻AHR。因此,本课题主要探讨麻芥巴布膏缓解过敏性哮喘Th2型炎症进而减轻AHR的作用机制。目的1.验证麻芥巴布膏对哮喘炎症的缓解。2.探究麻芥巴布膏能否直接调控Th1/Th2分化。3.探究麻芥巴布膏能否通过影响固有淋巴细胞,间接调控Th1/Th2分化。4.探究麻芥巴布膏能否通过影响神经肽,间接调控Th1/Th2分化。5.探究麻芥巴布膏能否通过调控IL-13诱导的粘液分泌,缓解AHR。6.探究麻芥巴布膏水提液对M1/M2分化的影响,验证其对Th1/Th2分化的调控。方法1.制备麻芥巴布膏,建立OVA哮喘模型小鼠,地塞米松与麻芥巴布膏分别干预后,ELISA检测血清IgE与HIS的含量,H&E染色检测肺组织炎症。2.制备麻芥巴布膏,建立OVA哮喘模型小鼠,地塞米松与麻芥巴布膏分别干预后,FCM检测脾脏IL-4+T细胞、IFN-γ+T细胞、Tregs与B10s的含量,qPCR检测肺组织中转录因子GATA-3 mRNA、STAT6 mRNA与T-bet mRNA的表达,WB检测肺组织中JAK2、STAT3与pSTAT3蛋白的表达。3.制备麻芥巴布膏,建立OVA哮喘模型小鼠,地塞米松与麻芥巴布膏分别干预后,FCM检测肺组织中ILC1s、ILC2s、ILC3s以及NKs的含量,炎症因子芯片试剂盒检测肺组织中40个炎症因子含量。4.制备麻芥巴布膏,建立OVA哮喘模型小鼠,地塞米松与麻芥巴布膏分别干预后,ELISA检测血清中CGRP与NKA的含量,IF检测肺组织中CGRP与CD3的表达,CGRP 与 neutrophil 的表达,qPCR 检测肺组织中 CGRP mRNA,SP mRNA,IL-5mRNA和IL-17mRNA的表达。5.制备麻芥巴布膏,建立OVA哮喘模型小鼠,地塞米松与麻芥巴布膏分别干预后,检测气道阻力,qPCR检测IL-13 mRNA、CLCA3 mRNA以及MUC5AC mRNA的含量,WB检测肺组织中PI3K与AKT蛋白的表达,PAS与IHC分别检测肺组织中粘液以及MUC5AC的分泌。6.制备麻芥巴布膏水提液,用CCK-8检测麻芥巴布膏水提液对Mφ的细胞毒性,建立体外M1与M2分化模型,FCM检测麻芥巴布膏水提液对体外诱导的M1/M2分化的影响,ELISA检测麻芥巴布膏水提液作用于M2分化后,细胞上清中IL-1β与IL-12p70的含量。结果1.与空白对照组相比,哮喘模型组IgE与HIS的含量增多（P<0.001,P<0.0001）。地塞米松减少了二者的含量（P<0.0001,P<0.001）,麻芥巴布膏干预后,IgE以及HIS的含量（P<0.001,P<0.01）也明显降低。H&E染色结果显示,与空白对照组相比,哮喘模型组小鼠肺组织中有部分实质化,血管内充血水肿,大量的炎性细胞出现在肺泡和细支气管壁。地塞米松组中,肺组织肺泡壁轻度增厚,肺间质存在少量的炎性细胞。麻芥巴布膏治疗后,肺组织炎症程度减轻,但效果不如地塞米松明显。2.FCM结果发现哮喘模型组中IFN-γ+T细胞与IL-4+T细胞的数量较空白对照组增多（P<0.0001,P<0.01）。地塞米松干预后,二者的数量明显降低（P<0.01,P<0.0001）,麻芥巴布膏干预后IL-4+T细胞数量减少,IFN-γ+T细胞的数量稍有降低（P<0.0001,P<0.05）。对于Tregs与B10s而言,与空白对照组相比,哮喘模型组中Tregs与B10s的含量明显增多（P<0.0001,P<0.001）。地塞米松干预后,Tregs的含量下降（P<0.0001）,但B10s仅有下降的趋势。麻芥巴布膏干预后,二者的数量明显下降（P<0.0001,P<0.01）。qPCR结果表明,在哮喘模型组中肺组织STAT6 mRNA与GATA-3 mRNA的表达较空白对照组增多（P<0.0001,P<0.001）,地塞米松和麻芥巴布膏可抑制STAT6mRNA表达（P<0.0001,P<0.0001）与 GATA-3 mRNA 的表达（P<0.05,P<0.01）。对 T-betmRNA而言,其含量在哮喘模型组与空白对照组中无显着性差异,在地塞米松组中表达降低（P<0.01）,而在麻芥巴布膏组中表达升高（P<0.0001）。WB结果表明,JAK2在哮喘模型组中的表达较空白对照组增多（P<0.01）,地塞米松和麻芥巴布膏都可抑制过量表达的JAK2（P<0.05,P<0.001）。各组中STAT3的表达差异不大。但对于pSTAT3而言,哮喘模型组中pSTAT3表达较空白对照组增多,而在地塞米松组和麻芥巴布膏组中,pSTAT3的表达降低。进一步比较pSTAT3/STAT3的比值发现,较空白对照组而言,哮喘模型组中pSTAT3/STAT3的比值升高（P<0.05）,而地塞米松与麻芥巴布膏均能减小pSTAT3/STAT3的比值（P<0.05,P<0.05）。3.FCM结果显示,在哮喘模型组中ILC1s、ILC2s以及ILC3s的含量与空白对照组相比没有明显改变,而地塞米松干预后,ILC1s、ILC2s以及ILC3s的含量上升（P<0.001,P<0.001,P<0.01）,麻芥巴布膏也有相似的作用（P<0.01,P<0.01,P<0.05）。对于NKs来说,其含量在空白对照组,哮喘模型组以及地塞米松组中均维持较低水平,未见明显差异。但在麻芥巴布膏中,NKs的含量较其他三组有显着增多（P<0.0001）。对于肺组织炎症因子而言,在哮喘模型组中,TNF-α、TNFR2、CXCL-9、CCL-12、CCL-9、CCL-2、CCL-5的含量较空白对照组增多,而GM-CSF与IL-1α的含量则较空白对照组减少。与哮喘模型组相比,地塞米松干预后G-CSF、CCL-9、CCL-5以及TNFR2的含量降低。麻芥巴布膏组中TNF-α、TNFR2以及CCL-9的含量较哮喘模型组减少,而IFN-γ、IL-1α、ICAM-1与IL-4的含量较哮喘模型组升高。4.ELISA结果显示,在哮喘模型组中,CGRP与NKA的含量均显着增多（P<0.01,P<0.01）,地塞米松与麻芥巴布膏干预后CGRP的分泌减少（P<0.05,P<0.0001）,NKA的分泌也减少（P<0.01,P<0.0001）。IF实验结果表明,对于CGRP与CD3染色而言,与空白对照组相比,哮喘模型组气管周围CGRP表达密度升高,且周围聚集大量CD3+T细胞,在某些细胞中,CD3与CGRP的表达存在重叠。地塞米松组和麻芥巴布膏组中均无明显的CD3+T细胞浸润,气管周围CGRP的分泌较模型组减少。对于CGRP与neutrophil染色而言,哮喘模型组视野所见气管周围的细胞中大量表达CGRP与neutrophil的细胞,在某些细胞中CGRP与neutrophil的表达存在重叠。地塞米松组中CGRP分泌减少,炎性细胞浸润减少,但视野局部仍明显可见共同表达CGRP与的neutrophil的细胞。麻芥巴布膏组中CGRP分泌较少,分泌CGRP的炎性细胞散在分布,但共同表达CGRP与的neutrophil的细胞明显减少。qPCR实验结果可知,哮喘模型组中 CGRP mRNA,SP mRNA、IL-5 mRNA 与 IL-17mRNA 的含量均升高（P<0.001,P<0.01,P<0.0001,P<0.001）,地塞米松干预后,四者的表达降低（P<0.001,P<0.0001,P<0.0001,P<0.01）,麻芥巴布膏也有相似的作用（P<0.01,P<0.0001,P<0.0001,P<0.001）。5.气道阻力结果显示,麻芥巴布膏与地塞米松可降低哮喘模型小鼠的高气道阻力,且二者的作用强度基本相同。与空白对照组相比,哮喘模型组小鼠肺组织MUC5AC mRNA、CLCA3 mRNA以及IL-13 mRNA水平均显着高于空白对照组（P<0.001,P<0.001,P<0.0001）。在地塞米松组中,三者的表达明显降低（P<0.001,P<0.01,P<0.001）。麻芥巴布膏也有相似的作用（P<0.001,P<0.01,P<0.001）。PI3K的表达在空白对照组、哮喘模型组以及地塞米松组中均无明显改变,但麻芥巴布膏干预后可降低PI3K的表达（P<0.05）。哮喘模型组中AKT的表达较空白对照组明显升高（P<0.01）,地塞米松和麻芥巴布膏干预后均可降低AKT的表达（P<0.05,P<0.05）。哮喘模型组中粘液以及黏蛋白MUC5AC的含量明显多于空白对照组,地塞米松和麻芥巴布膏的干预可明显减少二者的分泌。6.细胞毒性实验表明,浓度小于10mg/mL麻芥巴布膏水提液对Mφ细胞无明显细胞毒性,考虑到中药水提液可能对细胞形态产生影响,我们选用1 mg/mL的麻芥巴布膏水提液进行后续实验。LPS刺激后Mφ向M1分化（P<0.001）,麻芥巴布膏水提液的干预不能扭转这种变化。IL-4刺激诱导Mφ向M2分化（P<0.0001）,而麻芥巴布膏水提液的干预可促进M1的增多（P<0.0001）。IL-4干预后巨噬细胞分泌的IL-1β与IL-12p70的含量降低（P<0.05,P<0.01）,而经麻芥巴布膏水提液干预后,二者的含量增多（P<0.01,P<0.01）。结论1.麻芥巴布膏可较好的控制过敏性哮喘炎症。2.麻芥巴布膏可直接抑制Th2转录因子的表达,促进Th1转录因子表达,直接调控Th1/Th2分化。3.麻芥巴布膏可通过IFN-γ+NKs,促进机体Th1分化,间接调控Th1/Th2分化。4.麻芥巴布膏抑制过敏性哮喘相关神经肽,间接调控Th1/Th2分化。5.麻芥巴布膏抑制IL-13诱导的粘液分泌,缓解AHR。6.麻芥巴布膏水提液可促进M2模型中M1分化,具有促进Th1分化的潜力。

穆莎莎^[10]（2020）在《Rho激酶抑制剂法舒地尔对过敏性哮喘的调节作用》文中研究指明目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔（Fasudil）和Th17细胞对尘螨（House dust mite,HDM）诱导的过敏性哮喘的影响。方法:将24只C57BL/6雌性小鼠,随机分成4组:哮喘组,法舒地尔干预组,PBS对照组,法舒地尔对照组。前两组于实验的第0、3、5、7天,气管内注射15g HDM（溶解于30l PBS）致敏,实验最后3天再气管内注射HDM液每日一次进行激发,共16天建立哮喘模型;后两组在相同时间气管内注射30ml PBS作为哮喘模型对照组。其中法舒地尔干预组和法舒地尔对照组每日腹腔注射30mg/kg剂量的法舒地尔,哮喘组和PBS对照组给予等量的PBS。末次激发24小时后,收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage,BAL）进行细胞计数和Kwik-Diff染色;肺组织制成石蜡切片,进行H&E和PAS染色作组织病理学观察,确定浸润细胞数量、类型及黏液分泌情况;采用酶联免疫吸附试验测定各组BAL液中气道炎症相关细胞因子IFN-g、IL-4、IL-5,IL-17及炎症趋化因子Eotaxin的变化;用实时荧光定量PCR检测上述细胞因子和Gob-5的m RNA表达水平;应用流式细胞术检测各组脾细胞中Th1、Th2、Th17、Treg细胞分别所占的比例。结果:1.两个哮喘模型组与两个对照组分别作比较,BAL细胞计数增多,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数目均显着增加（P<0.05）;法舒地尔干预组与哮喘组相比,BAL细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的浸润数目均减少,差异有统计学意义（P<0.05）。2.肺组织切片染色结果显示,法舒地尔干预组的支气管炎性症状较哮喘组轻,气管内黏液分泌比哮喘组少,但两组均比对照组严重。两个对照组的肺组织结构完整,无炎性变化。3.法舒地尔干预组BAL液中IL-4、IL-5、IL-17、Eotaxin含量比哮喘组明显降低,且均有统计学意义（P<0.05）,两个对照组含量最低,各组间IFN-g含量无明显差异（P>0.05）。4.肺组织实时荧光定量PCR检测结果同样显示法舒地尔干预组IL-4、IL-17、Eotaxin、Gob-5的m RNA表达水平显着低于哮喘组（P<0.05）。各组间IFN-g的m RNA表达水平无明显差异（P>0.05）。5.流式分析提示法舒地尔干预组Th2、Th17细胞数量百分比较哮喘组低（P<0.05）,Treg细胞数量增加（P<0.05）,各组间Th1细胞数目无明显变化（P>0.05）。6.以上结果在两个对照组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.新构建的HDM哮喘模型具有简单易行、实验时间短、重复性好等优点。2.法舒地尔可以通过抑制气道炎症细胞及相关细胞因子、趋化因子的产生从而降低HDM诱导的过敏性气道炎症性反应,减轻肺组织炎症性病理改变,减少支气管黏液分泌。同时法舒地尔在30mg/kg剂量下对小鼠无明显副作用,提示法舒地尔可以开发为治疗过敏性哮喘,特别是重症哮喘的新药这一广阔前景。3.抑制Rho A-ROCK信号通路伴随着Th17细胞数量及其效应因子IL-17表达水平降低。提示Rho A-ROCK信号通路可能通过调节Th17细胞从而在过敏性哮喘中发挥作用,本研究为过敏性哮喘和其它炎症性疾病的发病机制与治疗提供了新思路。

二、Eotaxin在过敏性炎症反应中的研究进展（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、Eotaxin在过敏性炎症反应中的研究进展（论文提纲范文）

（1）山姜素对卵清蛋白诱导过敏性哮喘小鼠体内外抗炎抗过敏作用的初步研究（论文提纲范文）

（2）脐带血IL-13、Eotaxin水平与早期婴儿湿疹的相关性研究（论文提纲范文）

（3）芹菜素上调miR-503-5p水平抑制慢性哮喘气道炎症反应的机制研究（论文提纲范文）

（4）下调CCR3基因调控PI3K/AKT信号通路对变应性鼻炎小鼠的作用研究（论文提纲范文）

（5）基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究（论文提纲范文）

（6）杨芽黄素对虾原肌球蛋白诱导的小鼠过敏性哮喘的保护作用研究（论文提纲范文）

（7）日本血吸虫感染对过敏性气道炎症的作用及机制研究（论文提纲范文）

（8）基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制（论文提纲范文）

（9）麻芥巴布膏经皮给药多途径调控哮喘Th2型炎症并缓解AHR的机制研究（论文提纲范文）

（10）Rho激酶抑制剂法舒地尔对过敏性哮喘的调节作用（论文提纲范文）

四、Eotaxin在过敏性炎症反应中的研究进展（论文参考文献）

• [1]山姜素对卵清蛋白诱导过敏性哮喘小鼠体内外抗炎抗过敏作用的初步研究[D]. 吴迪. 吉林大学, 2021(01)
• [2]脐带血IL-13、Eotaxin水平与早期婴儿湿疹的相关性研究[D]. 林裕庆. 河北北方学院, 2021(01)
• [3]芹菜素上调miR-503-5p水平抑制慢性哮喘气道炎症反应的机制研究[D]. 庞玲玲. 山东大学, 2021(11)
• [4]下调CCR3基因调控PI3K/AKT信号通路对变应性鼻炎小鼠的作用研究[D]. 袁家胜. 南昌大学, 2021(01)
• [5]基于CCL24/CCR3通路探讨疏风通络方对小鼠嗜酸细胞CCR3受体、ERK磷酸化及基因表达影响研究[D]. 邢江楠. 天津中医药大学, 2021(01)
• [6]杨芽黄素对虾原肌球蛋白诱导的小鼠过敏性哮喘的保护作用研究[D]. 严莹. 扬州大学, 2021
• [7]日本血吸虫感染对过敏性气道炎症的作用及机制研究[D]. 李志丹. 中国疾病预防控制中心, 2020(02)
• [8]基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制[D]. 孔一卜. 长春中医药大学, 2020(08)
• [9]麻芥巴布膏经皮给药多途径调控哮喘Th2型炎症并缓解AHR的机制研究[D]. 纪雯婷. 北京中医药大学, 2020(04)
• [10]Rho激酶抑制剂法舒地尔对过敏性哮喘的调节作用[D]. 穆莎莎. 江苏省血吸虫病防治研究所, 2020(09)