李进[1]（2020）在《海藻来源黄杆菌水解昆布多糖和琼脂糖的途径研究》文中研究表明海藻多糖种类众多、化学结构复杂,在海洋生物化学循环中被丰富的碳水化合物活性酶分解,形成地球碳循环中最大的循环之一。而海洋生态系统自身就存在最大的海藻多糖裂解酶基因库,即CAZymes基因库。而构成该CAZymes基因库的主要微生物来源是海洋黄杆菌。本课题组分离了大量的能利用不同海藻多糖的海洋黄杆菌。以Tamlana属菌株为研究对象,通过生物信息学分析预测了Tamlana属菌株的海藻多糖代谢途径;并通过蛋白组学等方法探究了菌株T.laminarinivorans PT2-4水解昆布多糖的分子机制。同时以课题组已有的黄杆菌A.agarilytica ZC1为研究对象,通过对目的基因的原核表达和产物验证等方法证实该菌株中的琼脂糖分解代谢途径。主要获得了如下结果:（1）、从不同地点采集到丰富的大型海藻样品,筛选出近400株菌,其中黄杆菌共24个属80个种。对其中的三株黄杆菌CW2-9、PT2-4和62-3进行鉴定发现菌株CW2-9与T.sedimentorum JCM 19808的16S r RNA基因序列相似度为96.3%,菌株PT2-4和62-3与T.sedimentorum JCM 19808的16S r RNA基因序列相似度分别为98.4%和97.99%;三株菌的主要脂肪酸为iso-C15:0、iso G-C15:1和iso-C17:0 3-OH,呼吸醌为MK6。这三株菌分别被命名为Tamlana fucoidanivorans CW2-9、Tamlana laminarinivorans PT2-4和Tamlana sargassums 62-3。（2）、Tamlana属的菌株根据亲缘关系分析,在基因组水平上明显分为两支。Tamlana sp.EP2-2、T.crocina HST1-43、T.carrageenivorans UJ94、T.agarivorans JW-26和T.fucoidanivorans CW2-9这一支的基因组的保守性较低,水解酶的种类丰富,含有水解甘露聚糖、鼠李聚糖、木聚糖等杂多糖的水解酶。而T.laminarinivorans PT2-4、T.sargassums 62-3、Tamlana sp.S2-14、T.nanhaiensis FHC16和T.sedimentotum JCM 19808这一支保守型较高,具有保守的昆布多糖PUL和海藻酸盐PUL。（3）、T.laminarinivorans PT2-4具有较强的昆布多糖利用能力。通过蛋白组分析和RT-q PCR验证发现菌株PT2-4中的基因1092明显上调表达,重组表达的1092蛋白能将昆布四糖和昆布六糖水解为二糖和单糖;初步阐明了菌株PT2-4中低聚昆布多糖的代谢途径。通过基因截短和定点突变方法,发现基因1092的GH16结构域中Asn364、Arg400和Glu452为基因1092与底物结合的关键结合位点,当它们被替换成丙氨酸,基因1092完全失去了水解昆布四糖和昆布六糖的活性。基因1092的GH16结构域中的Gly361和His466两个位点被替换成丙氨酸后,基因1092的水解产物明显发生变化。（4）、通过菌株A.agarilytica ZC1的胞外寡糖聚合度分析、琼胶酶的信号肽预测、细胞定位预测等,预测了菌株A.agarilytica ZC1中存在的琼脂糖代谢的四个途径。从菌株ZC1中克隆基因Aga575和NH852,并进一步构建了工程菌E.coli Rosetta（DE3）-p ET22b（+）-Aga575-NH852;工程菌水解琼脂糖的产物为不同聚合度的新琼寡糖及3,6-内醚-L-半乳糖和D-半乳糖。
常怡[2]（2020）在《玛咖多糖的制备、理化特性及对CD4+ T细胞免疫调节作用的研究》文中研究表明目的:以玛咖为原料,通过分级醇沉法提取四种不同分子量的玛咖多糖组分。对比性研究玛咖多糖组分之间理化性质的差异,以及对CD4+T细胞增殖和分泌细胞因子的影响,从而推进玛咖多糖的构效关系研究;以前述实验结果为基础,确定活性最高的玛咖多糖组分,将该组分进行荧光标记并探究玛咖多糖作用于CD4+T细胞的方式。方法:（1）运用分级醇沉法从玛咖中提取出四种不同分子量的玛咖多糖组分（MCP1、MCP2、MCP3、MCP4）,分别计算提取率,测定总糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量。运用尺寸排阻色谱法和高效液相色谱法测定玛咖多糖各组分的分子量和单糖组成,利用紫外分光光度计和红外光谱仪分别测定玛咖多糖的紫外光谱和傅立叶变换红外光谱,分析其化学结构。（2）免疫磁珠法分离小鼠脾脏的CD4+T细胞,经玛咖多糖作用后,CFSE法检测CD4+T细胞的增殖情况,ELISA法检测IFN-γ和IL-4的分泌水平。以上述实验为基础,选择活性最强的组分（MCP2）进行荧光标记。（3）MCP2与酪胺和硼氰化钠反应之后,再与FITC反应,从而将FITC结合于MCP2。将FITC标记后的MCP2用Sephadex G-200层析柱纯化,收集多糖和FITC含量均最高的洗脱液。将洗脱液冷冻干燥得到MCP2-Tyr-FITC并测定荧光标记效率。将MCP2和MCP2-Tyr-FITC分别加入CD4+T细胞的培养体系,CCK-8法测定细胞的增殖情况,激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测MCP2-Tyr-FITC与CD4+T细胞的作用方式。结果:（1）MCP1和MCP2具有相似的提取率、总糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量,而MCP2与MCP3、MCP4的提取率,糖醛酸含量和蛋白质含量存在明显差异。玛咖多糖组分（MCPs）自MCP1至MCP4的分子量呈现明显的由高到低的趋势。此外,MCP2的纯度高于MCP1、MCP3和MCP4。MCPs均由半乳糖醛酸（GalUA）、氨基半乳糖（GalN）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）和阿拉伯糖（Ara）等单糖组成,但是单糖组成的比例不完全相同,其中MCP2中GalN的含量明显高于其他三种组分。MCPs中仅存在微量蛋白质,并且其所含官能团的种类无明显差别。（2）MCPs均具有促进CD4+T细胞增殖以及IFN-γ分泌的功能,最佳浓度为50μg/mL。此外,MCP2促进CD4+T细胞增殖以及IFN-γ分泌的活性高于MCP1、MCP3和MCP4。然而MCPs对于IL-4的分泌无明显影响。（3）MCP2-Tyr-FITC的荧光标记效率为4.9%。与MCP2相比,浓度为50μg/mL的MCP2-Tyr-FITC对于CD4+T细胞增殖的影响无明显差异。此外,实验结果表明MCP2-Tyr-FITC能够结合于CD4+T细胞的膜表面。结论:（1）运用分级醇沉法成功得到了玛咖多糖的四种组分（MCPs）。MCPs的分子量和单糖组成均有所差异,其中MCP2的纯度最高,并且其GalN的含量明显高于其他三种组分。（2）MCPs均具有促进CD4+T细胞增殖和IFN-γ分泌的功能（p<0.01）,最佳浓度为50μg/mL,其中MCP2促进CD4+T细胞增殖和IFN-γ分泌的功能明显强于其他三种组分。（3）MCP2-Tyr-FITC能够结合于CD4+T细胞的膜表面。
焦润苗[3]（2020）在《两个新型硫酸皮肤素裂解酶的鉴定和应用》文中认为硫酸软骨素/硫酸皮肤素（Chondroitin Sulfate/Dermatan Sulfate,CS/DS）是一类直链线性聚阴离子多糖,由重复二糖单位组成。CS二糖单位的结构为由β-1,3糖苷键连接的葡萄糖醛酸（GlcUA）和N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）,二糖单位之间由β-1,4糖苷键连接而成CS的基本糖链骨架;当CS二糖单位中的GlcUA在C-5差向异构酶的作用下变为艾杜糖醛酸（IdoUA）时,形成了 DS二糖单位。其中,GlcUA或IdoUA的C-2、C-3位和GalNAc的C-4、C-6位在硫酸基转移酶的作用下会发生不同程度的硫酸化而形成不同硫酸化模式的二糖单位,从而产生结构高度复杂的CS/DS糖链结构。CS/DS是一类重要的糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）,作为蛋白聚糖（Proteoglycans,PGs）的侧链而存在。CS/DS链的结构高度复杂性赋予了其不同的生物活性,如参与细胞生长,细胞粘附,病毒的侵染,神经系统的发育等等。序列的不均一性,二糖排列的多变,糖醛酸的异构化尤其是硫酸化模式的不同使得CS/DS的结构与功能的研究面临巨大的挑战。CD/DS特异性降解酶作CS/DS结构和功能研究必不可少的工具酶,目前可利用的种类和数量极为有限,尤其是专一性降解DS的酶仅一种被报道,被称作 Chondroitinase B（CSase B）。在本研究中,我们发现并鉴定了两个新型DS特异性裂解酶（DS lyase,DLase）DLase 1和DLase 2。这两个酶与已知CSase B同源性较低,均为内切型裂解酶,最适条件下的酶活远高于CSase B。此外,本课题还首次从比目鱼,绿鳍马面鲀和龙利鱼皮中分离纯化了三种新型的CS/DS,并利用新鉴定DLase对其组成结构进行了分析。具体研究成果如下:1.利用生物信息学方法从GenBank数据库中发现了两个潜在的DS特异性裂解酶疑似基因dlase1（GenBankTM 编号:WP013634816.1）和dlase2（GenBankTM编号:SCH13530.1）,与CSase B的相似度分别为57%和43%。对两个疑似基因及其编码蛋白序列的分析表明:dlase1基因全长为1473 bp,GC含量为49.08%,编码的蛋白包含491个氨基酸,理论分子量为55.35 kDa,pI为8.60,其N端信号肽包含21个氨基酸;dlase2基因全长为1401 bp,GC含量为48.61%,编码的蛋白含有467个氨基酸,理论分子量为52.00 kDa,pI为6.18,其N端信号肽包含19个氨基酸。值得注意的是,尽管两个新酶与CSase B（55.20 kDa）分子量相近,但pI值较低,尤其是DLase2。通过全基因合成,我们对两个疑似基因进行了异源重组表达,SDS-PAGE电泳分析表明,两个蛋白都可以被很好的水溶性表达,表达量分别达到300mg/L和100mg/L,经Ni柱亲和纯化,重组蛋白DLase 1和DLase 2的纯度均大于95%。2.对DLase 1和DLase 2进行底物降解特异性研究、基本酶学性质分析和酶活测定等,发现DLase 1和DLase2与CSaseB相同,只能专一性降解DS。DLase 1的最适反应缓冲液为50 mM Tris-HC1 10.0,最适反应温度为40°C,Ca2+可以显着促进其活性,将不同浓度的Ca2+加入到反应体系中发现,当Ca2+浓度为20mM时对DLase 1活性的促进最强,使之达到未加Ca2+活性的155%;DLase 2的最适反应缓冲液为50 mM Tris-HCl 9.0,最适反应温度为40℃,与DLase 1相似,Ca2+可以显着促进其活性,当Ca2+浓度为20 mM时DLase 2的降解活性达到未加金属离子活性的191%;而CSase B反应的最适缓冲液为50 mM Tris-HCl 8.0,与DLase 1和DLase 2相近,反应的最佳温度为30℃,比DLase 1和DLase 2低。在最适条件下测得DLase 1和DLase 2的酶活分别为911 U/mg和1630 U/mg,远高于CSase B的84.6 U/mg。除此以外,我们还测定了其它GAGs对DLase 1和DLase 2降解DS活性的影响,发现透明质酸（Hyaluronic Acid,HA）、肝素（Heparin,Hep）、硫酸乙酰肝素（Heparan Sulfate,HS）、CS-A 和 CS-C 均可以竞争性抑制DLase 1和DLase 2对DS的降解作用,其中,Hep对其抑制作用最强,这可能是因为Hep富含IdoUA残基的原因。通过对DLase 1和DLase 2的抗性结构分析可知,DLase 1和DLase 2不能降解DS链中含有少量CS结构。3.为了发现和鉴定更多新型的CS/DS,本研究利用蛋白酶解、乙醇沉淀和柱层析等技术从比目鱼,绿鳍马面鲀和龙利鱼皮中分离纯化得到三种新型的CD/DS多糖。凝胶过滤层分析表明:龙利鱼皮CS/DS的平均分子质量为56.24 kDa,绿鳍马面鲀鱼皮CS/DS的平均分子质量为60.52kDa,比目鱼皮CS/DS的平均分子质量为65.19 kDa。进一步,利用CS特异性降解酶CSase AC II和本研究发现的DS专一性降解酶DLase 1对三种新型CS/DS糖链中CS和DS的二糖组成和比例进行了分析。结果表明,尽管三种鱼皮来源的新型CS/DS均含有较高含量的A-unit（GlcUAβ1-3GalNAc（4S））和 iA-unit（IdoAα1-3GalNAc（4S））,但 CS和DS的含量和二糖组成显着不同,为新型CD/DS生物活性研究和开发利用奠定了基础。总之,本研究发现和鉴定了两个新型的DS特异性降解酶,两者的异源表达效率和酶活远高于目前唯一已被报道的DS专一性降解酶CSase B,无疑,在CS/DS结构和功能研究和活性寡糖制备中具有重要的应用价值。同时,三种鱼皮来源新型CS/DS的分离纯化和组成结构分析,为进一步的生物活性研究和相应的资源开发利用提供了可能。
王宇[4]（2020）在《聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸跨Caco-2细胞单层的转运机制》文中进行了进一步梳理海藻酸钠降解得到的聚甘露糖醛酸（Polymannuronic acid,PM）和聚古罗糖醛酸（Polyguluronic acid,PG）具有优良的生物活性。二者生物活性的发挥与其给药方式密切相关,而口服给药系统是各种给药途径中最广泛使用的方式,因此阐明PM和PG的口服转运过程对其生物活性的发挥具有重要意义。药物的口服转运途径主要包括跨细胞途径和细胞旁途径:多糖由于分子量（Molecular weight,Mw）大,难以透过细胞间的紧密连接（Tight junction,TJ）,因此细胞旁途径严重限制了其口服转运过程。而多糖的跨细胞途径包括:从顶膜内吞的多糖分子在细胞中内化,并最终从基底外侧膜中胞吐。为了研究PM和PG的口服转运机制,本实验采用异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate,FITC）标记的方法合成FITC-PM和FITC-PG,然后在Caco-2细胞单层模型上研究了二者的转运机制。具体研究内容包括以下几个方面:1、PM和PG的荧光标记及验证采用酪胺化学修饰与FITC缀合的方法合成FITC-PM和F.ITC-PG,琼脂糖凝胶电泳法和荧光分光光度计法的结果表明PM和PG已成功被FITC标记;高效凝胶渗透色谱法的结果显示荧光标记后的PM和PG的Mw有稍微增加,这可能是酪胺和FITC基团缀合在PM和PG分子上的结果;荧光强度的测量实验结果表明FITC-PM和FITC-PG的荧光标记率分别为12.66%和9.52%。2、FITC-PM和FITC-PG在Caco-2细胞单层模型的转运机制使用0.4 μg/mL嘌呤霉素建立7天Caco-2细胞单层模型,然后在此模型上考察了时间、浓度、温度、抑制剂等对样品转运的影响。转运时间考察结果表明二者转运量随时间延长而增加,240 min时转运和外排速率相对平衡。转运浓度的考察结果显示二者的转运量不随浓度变化而变化,且表观渗透系数（Apparent permeability coefficient,Papp）值与转运量和浓度均呈负相关,这表明二者的转运有载体饱和性。温度的考察结果显示低温能显着抑制二者的转运（相对转运量分别降低90%和81%）,这表明二者的转运是能量依赖性的。转运抑制剂的考察结果显示随着氯丙嗪,dynasore,甲基-β-环糊精（Methyl-β-cyclodextrin,MβCD）或 5-（N-乙基-N-异丙基）阿米洛利（5-（N-ethyl-N-isopropyl）amiloride,EIPA）的加入,FITC-PM 的转运量降低了 19%、65%、34%和 61%,FITC-PG 的转运量降低了 58%、47%、22%和 20%。这表明二者通过巨胞饮途径、网格蛋白介导的内吞途径和小窝（或脂筏）介导的内吞途径进入Caco-2细胞。使用siRNA技术沉默网格蛋白重链、发动蛋白-Ⅱ或小窝蛋白-1后,药物转运实验结果显示FITC-PM的转运量降低了 19%、80%和27%,FITC-PG的转运量降低了 66%、30%和24%,这表明网格蛋白、发动蛋白-Ⅱ和小窝蛋白参与了二者的转运。细胞内抑制剂实验结果表明当添加莫能菌素和巴弗洛霉素A1时,FITC-PM的转运量降低了 66%和54%,FITC-PG的转运量分别降低了 40%和64%,这表明内体成熟过程对PM和PG的运输至关重要。诺考达唑的添加使得FITC-PM的转运量降低了 39%,但对FITC-PG的相对转运量无影响,表明微管参与PM在Caco-2细胞的运输,但可能不参与PG的转运。3、吸收促进剂对FITC-PM和FITC-PG转运的影响。壳聚糖（Chitosan,CS）对TJ的影响实验表明CS可以可逆打开细胞间的TJ。随后将Caco-2细胞与CS合用,结果显示合用之后二者的Papp值分别比对照组高1.9倍和2.6倍,表明添加CS会显着增加二者在Caco-2细胞的转运。Western blotting实验结果显示CS打开TJ可能与CS会导致TJ相关蛋白（主要是CLDN4和occludin蛋白）的表达降低有关。综上所述,本课题以FITC荧光标记了 PM和PG,然后研究了 FITC-PM和FITC-PG跨肠上皮细胞单层的转运机制,结果表明FITC-PM和FITC-PG的转运是时间和能量依赖性的,其内吞途径包括巨胞饮途径、网格蛋白介导的内吞途径和小窝（或脂筏）蛋白介导的内吞途径;二者在Caco-2细胞中的运输过程取决于内体的酸化;同时微管介导FITC-PM的转运,但不介导FITC-PG的转运。此外,CS通过可逆打开TJ的方式促进了 FITC-PM和FITC-PG的转运量。本研究提供了一份关于小肠上皮细胞中PM和PG的吸收转运机制的详细报告。
刘文强[5]（2020）在《低分子红藻硫酸多糖制备及其对小鼠细菌性与过敏性腹泻的抑制作用》文中研究指明近年来,由于抗生素滥用、环境污染以及工作压力等因素,肠道菌群紊乱人群越来越多,进而导致细菌性与过敏性腹泻易感人群快速增加。本文从红藻中提取和制备低分子量硫酸半乳聚糖,对其抗菌活性的构效关系及作用机理进行了研究,并在动物水平上进一步探讨肠道菌群调节与抑制细菌性、过敏性腹泻的关系。主要研究结果如下:1.低分子量硫酸多糖的制备及构效关系研究。通过水提醇沉法从麒麟菜（Eucheuma serra）和龙须菜（Gracilaria lemameiformis）中提取硫酸半乳聚糖,并采用EDTA离子螯合-超滤技术脱除金属离子;麒麟菜硫酸半乳聚糖（ESP）和龙须菜硫酸半乳聚糖（GSP）中的半乳糖含量分别为93.4%和93.5%,硫酸根含量分别为30.0%和15.4%,总灰分分别为8.2%和6.7%;121℃下降解1 h,ESP和GSP的粘度分别降到0.02 dL/g和0.05 dL/g。傅里叶红外光谱分析表明,降解后的多糖在1265 cm-1、933 cm-1具有硫酸基团、3,6-内醚半乳糖的特征吸收峰。以产毒大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）K88为受试菌,分子量﹤6 kDa的麒麟菜硫酸多糖（DESP）和龙须菜硫酸多糖（DGSP）的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration,MIC）分别为15.0 mg/mL和25.0 mg/mL;进一步采用阴离子交换树脂DEAE-cellulose 52分级纯化,DESP与DGSP的MIC值可分别达到8.0 mg/mL和10.0 mg/mL。2.低分子硫酸多糖的抑菌机理研究。分别以ETEC-K88、金黄色葡萄球菌（Staphylococcu saureus）和3种肠道益生菌为研究对象,探讨DESP与DGSP对不同肠道微生物的影响。结果表明,在25.0 mg/mL的浓度下,DESP和DGSP对革兰氏阴性病原菌ETEC-K88的抑制率为100%,但对革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）、凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的生长均无明显影响;采用2-AMAC荧光标记技术发现,DESP与DGSP均能够通过ETEC-K88细胞膜进入细胞内,破坏细胞膜的流动性和通透性;扫描电镜观察发现,DESP与DGSP使ETEC-K88细胞膜表面发生皱缩以及宿主细胞表面附着能力明显减弱。3.低分子硫酸多糖对细菌性腹泻的影响。通过链霉素干扰肠道菌群的方式构建小鼠细菌性腹泻模型:ICR小鼠服用含有5 g/L的链霉素水溶液36 h后,肠道菌群发生紊乱,菌群中拟杆菌科（Bacteroidaceae）的比例上调,乳酸细菌科（Lactobacillaceae）、双歧杆菌科（Bifidobacteriaceae）破坏严重;紧接着给小鼠每天灌胃剂量为109 CFU/kg的ETEC-K88,1天后小鼠出现腹泻、发抖、被毛蜷缩等症状,解剖发现小鼠小肠绒毛破坏严重,肠道内肠杆菌科（Enterobacteriaceae）、拟杆菌科细菌比例大幅增加,成为优势菌群。采用低（50 mg/kg）、中（100 mg/kg）、高（200 mg/kg）剂量的DESP对正常小鼠连续灌胃7天（预防组）,DESP能够明显降低肠道菌群中拟杆菌科细菌的数量,提高普氏菌科（Rikenellaceae）、胃瘤菌科（Ruminococcaceae）、双歧杆菌科等细菌的丰度。继续给预防组小鼠灌胃ETEC-K88和DESP,3天后高剂量组小鼠血清IgA水平为1235.75 ng/mL,显着（P﹤0.01）低于模型组的2177.83 ng/mL;且肠道菌群中的肠杆菌科、拟杆菌科细菌的丰度明显低于模型组,而乳酸细菌科、双歧杆菌科细菌丰度接近正常菌群水平。4.低分子硫酸多糖对过敏性腹泻的影响。以卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）诱导的食物过敏模型中,小鼠血清IgE、IgA、mMCP-1和TNF-α水平分别为1399.9 ng/mL、2358.3ng/mL、3228.8 pg/mL、992.5 pg/mL,小肠绒毛末端溃烂,肠壁变薄,肠道微生物组成发生改变。通过灌胃100 mg/kg（低剂量）、200 mg/kg（中剂量）和300 mg/kg（高剂量）的DESP,均能有效缓解小鼠的过敏症状,减轻小鼠肠道炎症的发生,且高剂量组血清中IgE、IgA、mMCP-1和TNF-α水平分别降到了698.6 ng/mL、1280.8 ng/mL、1122.6pg/mL、488.3 pg/mL。从肠道菌群结构来看,致敏小鼠的肠道菌群中乳酸细菌科丰度上升,螺旋杆菌科比例显着下降;灌胃DESP后,仍然能够提高乳酸细菌科的比例,同时有效恢复螺旋杆菌科、毛螺杆菌科的丰度,降低S24-7比例。
项清芳[6]（2020）在《富硒灰树花多糖在Caco-2细胞模型中的吸收及在大鼠体内代谢动力学研究》文中研究说明灰树花（Grifola frondosa）富含蛋白质、膳食纤维、多糖和微量元素等多种营养成分,其中多糖是其主要活性物质,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、降血糖和降血脂等生物活性。富硒灰树花多糖是一种有机硒化合物,兼具多糖和硒的双重生物活性。本课题组前期研究发现,从富硒灰树花子实体中提取分离纯化得到的富硒灰树花多糖（Se-GFP）具有较好的体内抗肿瘤活性,可以增强免疫抑制小鼠的免疫活性和抗氧化活性,而目前对Se-GFP在体外吸收和体内代谢动力学研究尚未见报道。因此本文通过建立结肠癌细胞（Caco-2）单层培养模型,研究Se-GFP在体外的转运和摄取;采用异硫氰酸荧光素（FITC）通过还原胺化反应对Se-GFP进行荧光标记,进行大鼠体内的代谢动力学研究,本研究可为多糖类化合物的吸收和代谢动力学研究与应用提供基础,具有较重要的理论和实际意义。主要研究内容如下:（1）采用Caco-2单层细胞培养模型,从富硒灰树花中多糖和硒两个方面研究富硒灰树花多糖（Se-GFP）的转运与摄取。结果表明,富硒灰树花多糖Se-GFP在Caco-2细胞中的转运具有时间和浓度依赖型,在肠腔侧（AP侧）比基底侧（BL侧）更容易转运,表观通透系数（Papp值）和转运率测定结果表明,Se-GFP是一种中等吸收的生物大分子,主要通过与内吞作用相同的途径穿透Caco-2细胞;Se-GFP在Caco-2细胞中的摄取具有时间和浓度依赖型,AP侧的摄取率显着高于BL侧;Se-GFP的摄取可能是一种大胞饮途径,是从细胞质到细胞核过程的积累;硒含量测定表明,有机硒Se-GFP较无机硒对照组（亚硒酸钠）更容易被吸收。（2）采用异硫氰酸荧光素对富硒灰树花多糖（Se-GFP）进行荧光标记,研究荧光标记富硒灰树花多糖（Se-GFP-FITC）在生物样品中的稳定性。实验结果表明,富硒灰树花多糖通过还原胺化反应连接上氨基,获得多糖-酪胺化合物（Se-GFP-Tyr）;采用异硫氰酸荧光素对胺化后的多糖-酪胺化合物（Se-GFP-Tyr）进行荧光标记,获得荧光标记富硒灰树花多糖（Se-GFP-FITC）,FITC的取代度为0.96%。Se-GFP-FITC纯化组分较为均一,峰型对称,分子量基本无变化,且没有游离的荧光素存在,表明富硒灰树花多糖荧光标记成功;体外稳定性试验结果表明,Se-GFP-FITC在磷酸盐缓冲溶液（PBS）中、大鼠空白血浆和尿液等体外介质中都具有良好的稳定性。可见,荧光标记富硒灰树花多糖可用于后续实验研究。（3）采用荧光定量分析检测方法,研究荧光标记富硒灰树花多糖（Se-GFP-FITC）在大鼠体内的代谢动力学。非房室模型拟合大鼠体内Se-GFP-FITC的血药浓度-时间数据结果表明,Se-GFP-FITC在大鼠体内的半衰期(t1/2)为16.92 h,达峰迟缓,且达到最大血药浓度所需时间(Tmax)、平均滞留时间（MRT）、表观分布容积（V）、清除率（CL）和t1/2值均与给药剂量无关,其中最大血药浓度(Cmax)和药时曲线面积（AUC（0-∞））分别与各剂量组成正相关,表明Se-GFP-FITC在大鼠体内呈线性代谢动力学特征;组织分布实验表明灌胃1 h后,Se-GFP-FITC能分布到大部分组织中,肠道中浓度最高,其次为胃和肝脏,灌胃24 h后Se-GFP-FITC在肝组织中的浓度最高,其次为肾、肌肉、肠道、胃和脑;排泄实验结果表明,大鼠经单次灌胃72 h后有83.87%的Se-GFP-FITC随粪便和尿液排出体外,且大多数是以粪便的形式排出。可见,该方法适用于Se-GFP-FITC大鼠体内代谢动力学的研究。综上所述,本文基于Caco-2细胞对富硒灰树花多糖Se-GFP在体外吸收进行研究,对还原胺化后的富硒灰树花多糖进行异硫氰酸荧光标记,研究荧光标记富硒灰树花多糖（Se-GFP-FITC）在大鼠体内的代谢动力学,可为多糖类化合物的吸收以及代谢动力学研究与应用提供基础。
章柏钰,涂晶晶,刘萌萌,周本宏[7]（2021）在《多糖的口服吸收研究进展》文中研究指明多糖因具有广泛的生物活性和药用价值已成为国内外各科学领域研究的热点。一些具有抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力等药理活性的多糖被广泛应用于生化和医学领域。多糖有望成为治疗人类疾病的新药物。对近年来关于多糖的口服吸收研究进行综述,旨在为多糖的成药性提供理论参考。
赖戈娜[8]（2020）在《猪苓多糖指纹图谱分析及在Caco-2细胞单层中的吸收特征研究》文中提出目的:1、建立不同来源猪苓药材粗多糖紫外吸收光谱（UV）、红外吸收光谱（IR）、高效凝胶渗透色谱（HPGPC）和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮-高效液相色谱（PMP-HPLC）指纹图谱,为猪苓药材的质量控制提供参考。2、对总多糖进一步分离纯化,以异硫氰酸荧光素（FTIC）为探针,对猪苓多糖进行荧光标记。建立Caco-2细胞单层模型,探讨猪苓多糖在肠道中的吸收特征。方法;1、购买11批不同来源猪苓药材,粉碎后过60目筛,以1:10（g:mL）料液比加水煎煮,水提液加入无水乙醇至乙醇终浓度为80%制备总多糖,Sevage法脱蛋白后冷冻干燥备用,采用苯酚硫酸法和考马斯亮蓝法分别测定猪苓粗多糖中的总糖含量和蛋白含量。2、采用UV、IR、HPGPC-RID、HPLC技术分析1 1批次的猪苓粗多糖,建立粗多糖的多重指纹图谱。采用Chempattern软件以夹角余弦法和相关系数法计算IR指纹图谱的相似度,并进行主成分分析。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版）”计算HPGPC指纹图谱和PMP衍生化后的HPLC指纹图谱的相似度。结合已知分子量葡聚糖标准品,确定猪苓多糖主要多糖分子量范围。建立PMP柱前衍生HPLC法,测定总多糖主要单糖组成和单糖含量,采用SPSS22.0软件进行聚类分析。4、采用DEAEE-sephose-Fast Flow离子交换层析和G-100凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,制备目标多糖组分/均一多糖。通过HPGPC-RID色谱验证其纯度,测定其分子量,通过TFA（三氟乙酸）水解,PMP柱前衍生化HPLC分析其单糖组成。5、以FITC为荧光探针,采用末端胺化还原反应得到荧光多糖。建立Caco-2细胞单层模型,通过测定细胞电阻值Teer、碱性磷酸酶活性AKP、荧光素的渗透率来评价模型的完整性和紧密性。进行猪苓多糖在AP→BL,BL→AP两个方向的转运实验,采用荧光分光光度法进行定量分析,计算表观渗透系数Papp,外排比PDR和转运量。结果:1、11批猪苓粗多糖的总糖含量为430.031-608.492 mg/g,蛋白含量为15.059-37.608 mg/g。2、不同来源猪苓药材粗多糖HPGPC指纹图谱相似度大于0.80,11批样品具有相似的分子量分布,猪苓水煎液中粗多糖的分子量范围可分为5个级分:<10KDa;10-35KDa;35-150KDa;150-450KDa;450-5000KDa,主要多糖的分子量分布于450-5000KDa范围内。IR指纹图谱的平均R值为0.982;平均cos θ值为0.981,不同来源样品红外光谱具有很强的的相似性,结合主成分分析（PCA）能基本区分产地。单糖组成HPLC指纹图谱相似度均在0.94以上,聚类分析将11批猪苓多糖分为三类。S1、S2、S3、S4、S5、S6、S8 聚为一类,S7、S10、S11 聚为一类,S9 单独聚为一类,产地因素对多糖的单糖组成影响较小。样品单糖组成均为甘露糖、葡萄糖和半乳糖。11批多糖的单糖含量差异较大,甘露糖含量为1.571～8.771 mg/g、葡萄糖含量为26.072～132.194 mg/g、半乳糖含量为 3.420～36.593 mg/g。3、通过分离纯化获得PPS1-1、PPS2-1两种均一多糖,测定PPS1-1重均分子量2208.895KDa,PPS2-1重均分子量为3724.346KDa,单糖组成均为甘露糖、葡萄糖和半乳糖。4、以FITC为荧光探针,成功得到两种荧光标记的猪苓多糖,荧光取代度分别为0.058%、0.428%。Caco-2 细胞单层模型的电阻值>1500 Ω·cm2,AKP（AP/BL）>1,荧光素的渗透率<2%。PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC在膜两侧的累积转运量具有浓度和时间依赖性;在AP→BL侧的转运过程中,PPP1-Tyr-FITC的Papp小于1×10-6,PPP2-Tyr-FITC的Papp介于10×10-6-1×10-6之间,两者的外排率PDR均小于0.5。结论:不同来源的猪苓药材采用传统水煎工艺提取的总多糖中主要多糖分子量范围在450-5000KDa,单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖。猪苓多糖的IR、HPGPC、HPLC指纹图谱具有较高的相似度,可作为猪苓多糖的鉴别依据,IR指纹图谱结合主成分分析可基本区分猪苓多糖产地。所建立的Caco-2细胞模型可用于研究药物的肠道吸收,PPP1-Tyr-FITC在肠道中属于难吸收药物,PPP2-Tyr-FITC属于中等吸收药物,小分子量多糖更容易被肠道吸收,猪苓多糖在肠道中的吸收大于外排。
孙檬檬,郝鲁江[9]（2018）在《FITC标记多糖的研究进展》文中提出多糖具有抗肿瘤、提高免疫力等多种生物学活性,是国内外研究的重要药物来源。由于多糖没有光吸收的基团,无法直接通过荧光分光光度计等设备检测,因而将多糖进行荧光标记成为检测多糖的重要方法。荧光标记技术分析多糖能够具有较高的灵敏度和选择性,其中异硫氰酸荧光素（FITC）在生化研究中应用较为广泛。目前关于FITC标记多糖的研究颇为丰富,本文对相关研究进展进行了综述。
李继平[10]（2017）在《红芪多糖抗肝损伤和体外抗肿瘤与荧光标记研究》文中研究指明红芪是甘肃的道地药材。本文研究产自甘肃8批不同产地红芪药材中提取的多糖对四氯化碳（CCl4）所致小鼠肝损伤的作用。通过30%四氯化碳-花生油溶液皮下注射建立小鼠肝损伤模型,同时给予8批红芪多糖,5周后测定小鼠血清指标天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）及脏器指数;然后对8批红芪多糖的含量、单糖组成、分子量进行分析;用灰色关联度法将血清指标与多糖的单糖基进行谱效相关分析。结果显示8批红芪多糖药抗肝损伤作用显着（P<0.05）。相比较,武都米仓山的红芪多糖抗肝损伤作用较强,而陇西首阳镇的作用较弱。8批红芪多糖单糖基比例、多糖含量和分子量不同。多糖含量、分子量均与药效强弱相关。通过MTT法对比研究红芪多糖3（HPS-3）硫酸酯前后对肺癌A549和人肝癌细胞Hep G2抑制率变化。结果表明HPS-3硫酸酯化修饰前后对人肺癌A549与Hep G2均具有抑制活性,并且酯化修饰可以提高HPS-3对上述两种细胞株的抑制活性。用荧光物质8-氨基芘-1,3,6三磺酸（ANTS）对HPS-3进行标记。用紫外分析仪、荧光光度计及高效液相凝胶色谱检测。结果被标记HPS-3在紫外灯下呈现黄绿色荧光,在发射波长513nm处有荧光;高效液相凝胶色谱荧光检测器能检测到荧光信号。HPS-3可以在一定条件下被标记。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 大型海藻多糖的结构和多糖水解酶 |
| 1.1.1 褐藻多糖 |
| 1.1.1.1 昆布多糖 |
| 1.1.1.2 海藻酸盐 |
| 1.1.1.3 岩藻多糖 |
| 1.1.2 红藻多糖 |
| 1.1.2.1 琼脂糖 |
| 1.1.2.2 卡拉胶 |
| 1.1.2.3 紫菜聚糖 |
| 1.1.3 绿藻多糖 |
| 1.1.3.1 石莼聚糖 |
| 1.2 多糖利用基因座的研究现状 |
| 1.2.1 PULs的基本组成原件 |
| 1.2.2 利用昆布多糖的保守性PULs |
| 1.3 大型海藻多糖的代谢途径的研究现状 |
| 1.3.1 琼脂糖的代谢途径 |
| 1.3.2 石莼聚糖的代谢途径 |
| 1.4 蛋白组学的应用 |
| 1.5 本论文研究目的和意义 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究意义 |
| 第二章 海藻表面来源黄杆菌的筛选与鉴定 |
| 引言 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 常用材料 |
| 2.1.2 常用溶剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 黄杆菌的分离 |
| 2.2.2 菌株形态 |
| 2.2.3 菌株生理生化特性 |
| 2.2.4 菌株亲缘关系 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 海藻表面黄杆菌的分离、筛选 |
| 2.3.2 Tamlana属三株菌株CW2-9、PT2-4和62-3 的鉴定 |
| 2.3.2.1 菌株的形态特征 |
| 2.3.2.2 菌株的生理生化特性 |
| 2.3.2.3 菌株的亲缘关系分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 Tamlana属的CAZymes分析及海藻多糖的利用 |
| 引言 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 常用材料 |
| 3.1.2 常用仪器 |
| 3.1.3 主要培养基 |
| 3.1.4 分析软件 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 基因组组装拼接和注释 |
| 3.2.2 泛基因组分析 |
| 3.2.3 碳水化合物酶的注释分析 |
| 3.2.4 Tamlana属菌株的多糖利用 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Tamlana属的基因组序列分析 |
| 3.3.2 Tamlana属的系统发育分析 |
| 3.3.3 Tamlana属菌株的比较基因组分析 |
| 3.3.4 Tamlana属菌株的CAZome分析 |
| 3.3.5 Tamlana属菌株PULs的预测与分析 |
| 3.3.5.1 昆布多糖PULs的预测 |
| 3.3.5.2 海藻酸盐PULs的预测 |
| 3.3.5.3 岩藻多糖PULs的预测 |
| 3.3.5.4 甘露聚糖PULs的预测 |
| 3.3.5.5 β-木聚糖PULs的预测 |
| 3.3.5.6 硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖PULs的预测 |
| 3.3.6 Tamlana属的海藻多糖代谢途径预测 |
| 3.3.7 Tamlana属菌株的海藻多糖利用 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 T.laminarinivorans PT2-4 水解昆布多糖的研究 |
| 引言 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 常用材料 |
| 4.1.2 常用溶剂 |
| 4.1.3 主要培养基 |
| 4.1.4 常用质粒和菌株 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 菌株PT2-4 的生长曲线绘制 |
| 4.2.2 菌株PT2-4 的蛋白组样品制备 |
| 4.2.3 菌株PT2-4 的蛋白组测序的方法 |
| 4.2.4 水解酶基因RT-qPCR验证 |
| 4.2.4.1 RNA的提取 |
| 4.2.4.2 RT-qPCR反应 |
| 4.2.5 基因克隆 |
| 4.2.5.1 细菌基因组提取 |
| 4.2.5.2 PCR扩增 |
| 4.2.5.3 原核表达系统的构建 |
| 4.2.5.4 感受态细胞的制备 |
| 4.2.5.5 转化以及阳性克隆筛选 |
| 4.2.6 蛋白诱导表达及纯化 |
| 4.2.6.1 蛋白诱导表达 |
| 4.2.6.2 蛋白纯化 |
| 4.2.7 薄层层析分析寡糖水解产物 |
| 4.2.8 荧光辅助糖蛋白电泳分析寡糖水解产物 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 菌株PT2-4 的生长情况 |
| 4.3.2 菌株PT2-4 的蛋白组样品制备 |
| 4.3.3 菌株PT2-4 水解昆布多糖的蛋白水平分析 |
| 4.3.3.1 菌株PT2-4 蛋白组的注释 |
| 4.3.3.2 菌株PT2-4 蛋白组的结构域分析 |
| 4.3.3.3 菌株PT2-4 水解昆布多糖的差异表达蛋白分析 |
| 4.3.3.4 菌株PT2-4 的差异水解酶分析 |
| 4.3.4 菌株PT2-4 的水解酶基因的RT-q PCR验证 |
| 4.3.5 菌株PT2-4 的基因1092 克隆表达和水解产物分析 |
| 4.3.5.1 基因1092 的克隆 |
| 4.3.5.2 基因1092 的表达和纯化 |
| 4.3.5.3 基因1092 的水解产物的验证 |
| 4.3.6 菌株62-3 的基因0661 克隆表达和水解产物分析 |
| 4.3.6.1 基因0661 的克隆表达 |
| 4.3.6.2 基因0661 的水解产物验证 |
| 4.3.7 菌株PT2-4 中昆布多糖的代谢途径 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 菌株PT2-4 的基因1092 催化结构域特性分析 |
| 引言 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 常用材料 |
| 5.1.2 常用溶剂 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 基因1092 的截短 |
| 5.2.2 基因1092 的关键氨基酸位点的预测 |
| 5.2.3 定点突变体的构建 |
| 5.2.3.1 定点突变引物的设计 |
| 5.2.3.2 PCR法定点突变 |
| 5.2.4 突变体水解产物的检测 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 基因1092 的截短片段克隆与水解产物分析 |
| 5.3.1.1 基因1092UC和1092C的克隆 |
| 5.3.1.2 基因1092UC和1092C的水解产物验证 |
| 5.3.2 基因1092 突变体的构建与水解产物分析 |
| 5.3.2.1 关键氨基酸位点的预测 |
| 5.3.2.2 突变体的构建 |
| 5.3.2.3 突变体的水解产物检测 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 菌株A.agarilytica ZC1 中琼脂糖的代谢途径研究 |
| 引言 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 常用材料 |
| 6.1.2 常用网址 |
| 6.1.3 主要培养基 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 菌株ZC1 的生长曲线绘制 |
| 6.2.2 菌株ZC1 胞外寡糖的测定 |
| 6.2.3 碳水化合物活性酶的注释及分析 |
| 6.2.4 菌株ZC1 的琼脂糖代谢通路示意图 |
| 6.2.5 基因Aga575 和NH852 的共表达菌株构建 |
| 6.2.6 共表达菌株的水解产物检测 |
| 6.2.6.1 薄层层析法 |
| 6.2.2.2 ELSD法 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 菌株ZC1 的生长和寡糖分泌情况 |
| 6.3.2 菌株ZC1 中的碳水化合物活性酶分析 |
| 6.3.3 菌株ZC1 的琼脂糖代谢途径的预测 |
| 6.3.4 基因Aga575 和NH852 异源共表达菌株的构建及功能验证 |
| 6.4 讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 博士期间获得奖励、申请专利及发表文章情况 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 植物多糖 |
| 1.1.1 植物多糖的分类及提取方法 |
| 1.1.2 植物多糖的纯化方法 |
| 1.1.3 植物多糖的生物学活性 |
| 1.1.4 植物多糖的构效研究概况 |
| 1.2 玛咖多糖的研究进展 |
| 1.3 多糖的荧光标记 |
| 1.3.1 常用的荧光染料 |
| 1.3.2 多糖荧光标记位点 |
| 1.4 本研究的目的、方法、实验设计及意义 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究方法 |
| 1.4.3 实验设计 |
| 1.4.4 研究意义 |
| 第二章 玛咖多糖的提取及理化性质检测与分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与仪器设备 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要仪器及设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 玛咖的基本化学组成测定 |
| 2.3.2 玛咖多糖的提取流程 |
| 2.3.3 玛咖多糖的提取率计算 |
| 2.3.4 苯酚-硫酸法测定各玛咖多糖组分的总糖含量 |
| 2.3.5 硫酸-咔唑法测定各玛咖多糖组分的糖醛酸含量 |
| 2.3.6 考马斯亮蓝法测定各玛咖多糖组分的蛋白质含量 |
| 2.3.7 尺寸排阻法测定各玛咖多糖组分的分子量 |
| 2.3.8 高效液相色谱法测定各玛咖多糖组分的单糖组成 |
| 2.3.9 各玛咖多糖组分的紫外光谱扫描 |
| 2.3.10 红外光谱检测各玛咖多糖组分的化学结构 |
| 2.3.11 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 玛咖基本化学组成分析 |
| 2.4.2 各玛咖多糖组分提取率计算 |
| 2.4.3 各玛咖多糖组分总糖含量测定结果 |
| 2.4.4 各玛咖多糖组分糖醛酸含量测定结果 |
| 2.4.5 各玛咖多糖组分蛋白质含量测定结果 |
| 2.4.6 各玛咖多糖组分分子量测定结果及分析 |
| 2.4.7 各玛咖多糖组分单糖组成测定结果及分析 |
| 2.4.8 各玛咖多糖组分紫外光谱检测结果及分析 |
| 2.4.9 各玛咖多糖组分红外光谱检测结果及分析 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 玛咖多糖对CD4~+T 细胞的增殖及细胞因子分泌的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器设备 |
| 3.2.1 实验原料 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器及设备 |
| 3.2.4 实验动物 |
| 3.2.5 主要溶液的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 免疫磁珠法分离小鼠脾脏中的CD4~+T 细胞 |
| 3.3.2 流式细胞术检测CD4~+T 细胞的纯度 |
| 3.3.3 CFSE法检测CD4~+T 细胞的增殖 |
| 3.3.4 ELISA法检测CD4~+T 细胞分泌IFN-γ和 IL-4 的水平 |
| 3.3.5 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 CD4~+T 细胞纯度检测 |
| 3.4.2 MCPs促进CD4~+T 细胞的增殖 |
| 3.4.3 MCPs促进CD4~+T 细胞分泌IFN-γ |
| 3.4.4 MCPs对于CD4~+T 细胞分泌IL-4 无明显影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 MCP2-Tyr-FITC的制备及其与CD4~+T 细胞作用方式的检测 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与仪器设备 |
| 4.2.1 实验原料 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器及设备 |
| 4.2.4 实验动物 |
| 4.2.5 主要溶液的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 玛咖多糖的荧光标记 |
| 4.3.2 MCP2-Tyr-FITC的纯化 |
| 4.3.3 MCP2-Tyr-FITC荧光取代度测定 |
| 4.3.4 免疫磁珠法分离小鼠脾脏中CD4~+T 细胞 |
| 4.3.5 CCK-8 法检测CD4~+T 细胞的增殖 |
| 4.3.6 激光共聚焦显微镜观察MCP2-Tyr-FITC与 CD4~+T 细胞的作用方式 |
| 4.3.7 流式细胞术检测CD4~+T 细胞的荧光强度 |
| 4.3.8 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 MCP2-Tyr-FITC的制备 |
| 4.4.2 MCP2-Tyr-FITC的纯化 |
| 4.4.3 MCP2-Tyr-FITC的荧光取代度 |
| 4.4.4 MCP2-Tyr-FITC结合于CD4~+T 细胞膜表面 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 结论、创新点与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的文章 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 糖胺聚糖 |
| 1.1.1 透明质酸 |
| 1.1.2 肝素/硫酸乙酰肝素 |
| 1.1.3 硫酸角质素 |
| 1.1.4 硫酸软骨素/硫酸皮肤素(CS/DS) |
| 1.2 CS/DS的研究概述 |
| 1.2.1 CS/DS的结构 |
| 1.2.2 海洋动物来源的CS/DS研究现状 |
| 1.2.3 CS/DS的生物学功能 |
| 1.2.4 CS/DS的结构分析 |
| 1.3 CS/DS裂解酶的研究现状 |
| 1.3.1 CSase ABC |
| 1.3.2 CSase AC |
| 1.3.3 CSase B |
| 1.4 选题意义 |
| 第二章 新型硫酸皮肤素裂解酶(DLase1和2)的发现和克隆表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株与质粒 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 |
| 2.1.5 软件工具和数据库 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.2.1 硫酸皮肤素降解酶候选基因的发现 |
| 2.2.2 DLase 1和DLase 2的基因和蛋白序列分析 |
| 2.2.3 重组DLase 1和DLase 2的异源表达和纯化 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 DLase 1和DLase 2基因和蛋白信息 |
| 2.3.2 DLase 1和DLase 2在E.coli中的异源表达和纯化 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 DLase 1和DLase 2的酶学性质和作用模式研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器和设备 |
| 3.2 实验步骤 |
| 3.2.1 DLase 1和DLase 2的底物降解特异性研究 |
| 3.2.2 DLase 1和DLase 2的酶学性质分析 |
| 3.2.3 DLase 1和DLase 2酶活的测定 |
| 3.2.4 其它GAGs对DLase 1和2的降解DS活性影响分析 |
| 3.2.5 DLase 1和DLase 2的底物降解模式分析 |
| 3.2.6 DLase 1和DLase 2的抗性四糖的鉴定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 DLase 1和DLase 2的底物降解特异性 |
| 3.3.2 DLase 1和DLase 2的酶学性质 |
| 3.3.3 DLase 1和DLase 2的酶活力 |
| 3.3.4 不同GAGs对DLase 1和DLase2的活性影响 |
| 3.3.5 DLase 1和DLase 2的底物降解模式 |
| 3.3.6 DLase 1和DLase 2的抗性四糖 |
| 3.4 分析与讨论 |
| 第四章 三种海洋鱼类来源新型CS/DS的制备及新型DLases在其组成分析中的应用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 材料与试剂 |
| 4.1.2 各反应试剂的配制 |
| 4.1.3 仪器与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 鱼皮CS/DS的提取 |
| 4.2.2 鱼皮CS/DS粗品的纯化 |
| 4.2.3 纯化CS/DS分子量的测定 |
| 4.2.4 纯化CS/DS的纯度和二糖组成分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 鱼皮CS/DS的提取与纯化 |
| 4.3.2 纯化CS/DS的分子量 |
| 4.3.3 三种鱼皮CS/DS的纯度 |
| 4.3.4 三种鱼皮CS/DS的二糖组成 |
| 4.4 分析与讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间研究成果及参与项目 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语词汇表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 海藻酸钠低聚糖简介 |
| 1.2 海藻酸钠低聚糖的生物活性 |
| 1.2.1 抗肿瘤活性 |
| 1.2.2 免疫调节活性 |
| 1.2.3 抗氧化活性 |
| 1.2.4 抗凝血活性 |
| 1.2.5 抗病毒活性 |
| 1.2.6 治疗代谢综合征 |
| 1.3 多糖类生物大分子口服吸收研究现状 |
| 1.3.1 多糖类生物大分子口服吸收研究方法 |
| 1.3.2 多糖类生物大分子的口服转运机制 |
| 1.3.3 物质的内吞作用及内化过程 |
| 1.4 课题研究目的及意义 |
| 第2章 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的荧光标记及验证 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的荧光标记 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳法验证荧光标记产物 |
| 2.2.3 荧光分光光度计法验证荧光标记产物 |
| 2.2.4 荧光标记前后分子量的测定 |
| 2.2.5 荧光标记率的测定 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 琼脂糖凝胶电泳法验证荧光标记结果 |
| 2.3.2 荧光分光光度计法验证荧光标记结果 |
| 2.3.3 荧光标记前后分子量的测定结果 |
| 2.3.4 荧光标记率的测定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸在Caco-2细胞单层模型的转运机制研究 |
| 3.1 实验材料与仪器设备 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 主要溶液配制方法 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 Caco-2细胞单层模型的建立及验证 |
| 3.2.2 MTT法检测样品对Caco-2细胞的毒性 |
| 3.2.3 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的跨膜转运实验 |
| 3.2.4 siRNA转染实验及药物摄取实验 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Caco-2细胞单层模型的建立与验证 |
| 3.3.2 MTT法检测药物对Caco-2细胞的毒性 |
| 3.3.3 聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的跨膜转运实验 |
| 3.3.4 siRNA转染实验及药物摄取实验 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 吸收促进剂对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的转运影响 |
| 4.1 实验材料与仪器设备 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 主要溶液配制方法 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 壳聚糖对Caco-2细胞单层模型跨膜电阻值的影响 |
| 4.2.2 壳聚糖对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的转运影响 |
| 4.2.3 壳聚糖对紧密连接相关蛋白表达影响 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 壳聚糖对Caco-2细胞单层模型跨膜电阻值的影响 |
| 4.3.2 壳聚糖对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的转运影响 |
| 4.3.3 壳聚糖对紧密连接相关蛋白表达影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 论文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 多糖的提取、纯化及鉴定 |
| 1.1.1 海藻硫酸多糖的提取 |
| 1.1.2 海藻多糖的纯化 |
| 1.1.3 多糖的组成及构效关系 |
| 1.1.4 多糖的降解和分级 |
| 1.2 多糖抑菌机理及调节菌群作用 |
| 1.2.1 多糖抑菌活性研究 |
| 1.2.2 多糖抑菌机理研究 |
| 1.2.3 多糖调节肠道菌群 |
| 1.3 细菌性腹泻的研究 |
| 1.3.1 腹泻的危害 |
| 1.3.2 细菌性腹泻的机制 |
| 1.3.3 细菌性腹泻的治疗 |
| 1.4 多糖对食物过敏的防治作用 |
| 1.4.1 食物过敏反应 |
| 1.4.2 食物过敏与肠道菌群的关系 |
| 1.4.3 食物过敏的防治 |
| 1.5 论文立题依据、目的及主要内容 |
| 1.5.1 论文立体依据和目的 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第2章 硫酸多糖的提取 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 粗多糖提取 |
| 2.2.2 多糖金属离子的脱除 |
| 2.2.3 多糖降解 |
| 2.2.4 多糖理化性质鉴定 |
| 2.2.5 多糖特征峰扫描 |
| 2.2.6 多糖的单糖组成分析 |
| 2.2.7 多糖粘度计算 |
| 2.2.8 扫描电镜 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 粗多糖成分分析 |
| 2.3.2 金属离子的脱除 |
| 2.3.3 高压降解对多糖的影响 |
| 2.3.4 降解后多糖的电镜观察 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 不同理化性质多糖的制备及抑菌活性鉴定 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 供试菌种 |
| 3.1.3 主要实验试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 不同分子量硫酸多糖的制备 |
| 3.2.2 不同阴离子强度硫酸多糖的制备 |
| 3.2.3 抑菌实验 |
| 3.2.4 最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的确定 |
| 3.2.5 碳源利用度实验 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 降解与脱金属对抑菌活性的影响 |
| 3.3.2 分子量对硫酸多糖的影响 |
| 3.3.3 阴离子强度对硫酸多糖的影响 |
| 3.3.4 单糖组成对抑菌活性的影响 |
| 3.3.5 碳源转化能力试验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 硫酸多糖对大肠杆菌抑菌机理 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 供试菌株及培养基 |
| 4.1.3 主要实验试剂 |
| 4.1.4 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 硫酸多糖对肠道微生物生长的作用 |
| 4.2.2 硫酸多糖作用位点研究 |
| 4.2.3 细胞膜完整性测定 |
| 4.2.4 对细胞膜蛋白的影响 |
| 4.2.5 多糖对细胞膜通透性的影响 |
| 4.2.6 扫描电镜观察细菌表面 |
| 4.2.7 细菌在宿主细胞表面的定植能力 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 菌种对抑菌活性的影响 |
| 4.3.2 多糖作用位点研究 |
| 4.3.3 多糖对细胞膜完整性的影响 |
| 4.3.4 胞内核酸蛋白质分子泄露 |
| 4.3.5 细胞膜蛋白变化及微观结构损伤 |
| 4.3.6 硫酸多糖对粘附性的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 低分子硫酸多糖对小鼠细菌性腹泻的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 菌种活化与计数 |
| 5.1.3 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 动物模型 |
| 5.2.2 腹泻指数 |
| 5.2.3 小鼠肠HE染色切片和扫描电镜 |
| 5.2.4 小鼠血清因子测定 |
| 5.2.5 菌群 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 腹泻指数及体重 |
| 5.3.2 小鼠临床症状及解剖观察 |
| 5.3.3 体温及体重变化 |
| 5.3.4 血清变化 |
| 5.3.5 小肠绒毛SEM及 HE染色 |
| 5.3.6 多糖对腹泻小鼠微生物的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 低分子硫酸多糖对小鼠过敏性腹泻的影响 |
| 6.1 实验原料及试剂 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 动物模型 |
| 6.2.2 小鼠肠组织HE染色和扫描电镜 |
| 6.2.3 小鼠血清因子测定 |
| 6.2.4 菌群 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 小鼠体温、腹泻指数、过敏评分 |
| 6.3.2 小鼠临床症状及解剖观察 |
| 6.3.3 小鼠血清因子 |
| 6.3.4 小肠绒毛SEM及 HE染色 |
| 6.3.5 多糖对过敏小鼠肠道微生物的影响 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.1.1 多糖的提取纯化 |
| 7.1.2 多糖的构效关系及抑菌机理 |
| 7.1.3 多糖对细菌性腹泻的影响 |
| 7.1.4 多糖对食物过敏的影响 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果情况 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 多糖的肠道上皮细胞吸收研究进展 |
| 1.1.1 肠道概述 |
| 1.1.2 肠道吸收屏障结构 |
| 1.1.3 肠上皮细胞物质吸收转运途径 |
| 1.1.4 Caco-2 细胞模型概述 |
| 1.1.5 多糖在Caco-2 细胞模型中的吸收研究 |
| 1.2 多糖的代谢动力学研究进展 |
| 1.2.1 多糖的代谢动力学研究概况 |
| 1.2.2 多糖的代谢动力学研究方法 |
| 1.3 富硒灰树花多糖的研究进展 |
| 1.3.1 富硒灰树花多糖的结构 |
| 1.3.2 富硒灰树花多糖的生物活性 |
| 1.3.3 富硒灰树花多糖的吸收和代谢动力学研究进展 |
| 1.4 本课题的研究目的与意义 |
| 1.5 本课题研究的主要内容 |
| 第二章 富硒灰树花多糖在Caco-2 细胞模型中转运和摄取的研究 |
| 2.1 仪器、材料与试剂 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 材料与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Caco-2 细胞的培养 |
| 2.2.2 富硒灰树花多糖对Caco-2 细胞活力的影响 |
| 2.2.3 Caco-2 细胞吸收模型的建立 |
| 2.2.4 Caco-2 细胞吸收模型的评估 |
| 2.2.5 多糖和硒含量的测定 |
| 2.2.6 Caco-2 细胞的双向跨膜转运实验 |
| 2.2.7 Caco-2 细胞的摄取实验 |
| 2.2.8 数据处理和分析 |
| 2.3 结果和讨论 |
| 2.3.1 富硒灰树花多糖对Caco-2 细胞活力的影响 |
| 2.3.2 Caco-2 细胞吸收模型的评估 |
| 2.3.3 转运实验结果 |
| 2.3.4 摄取实验结果 |
| 2.3.5 富硒灰树花多糖在转运和摄取过程中硒含量的变化 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 富硒灰树花多糖的荧光标记及在生物样品中的稳定性研究 |
| 3.1 仪器、材料与试剂 |
| 3.1.1 仪器 |
| 3.1.2 材料与试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 富硒灰树花多糖荧光标记物的制备 |
| 3.2.2 Se-GFP-FITC的分析 |
| 3.2.3 Se-GFP-FITC的体外稳定性研究 |
| 3.3 结果和讨论 |
| 3.3.1 Se-GFP-FITC的荧光标记结果 |
| 3.3.2 Se-GFP-FITC的紫外可见光谱分析 |
| 3.3.3 Se-GFP-FITC的荧光光谱分析 |
| 3.3.4 Se-GFP-FITC中 FITC的取代度 |
| 3.3.5 Se-GFP-FITC的纯度分析 |
| 3.3.6 Se-GFP-FITC的红外光谱分析 |
| 3.3.7 Se-GFP-FITC的分子量分析 |
| 3.3.8 Se-GFP-FITC的体外稳定性 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 富硒灰树花多糖在大鼠体内的代谢动力学研究 |
| 4.1 仪器、材料与试剂 |
| 4.1.1 仪器 |
| 4.1.2 材料与试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 溶液的配制 |
| 4.2.2 Se-GFP-FITC定量分析方法的研究 |
| 4.2.3 Se-GFP-FITC在大鼠体内代谢动力学研究 |
| 4.3 结果和讨论 |
| 4.3.1 血浆中Se-GFP-FITC浓度的测定 |
| 4.3.2 尿液中Se-GFP-FITC浓度的测定 |
| 4.3.3 粪便中Se-GFP-FITC浓度的测定 |
| 4.3.4 组织样品中Se-GFP-FITC浓度的测定 |
| 4.3.5 体内代谢动力学研究 |
| 4.3.6 组织分布 |
| 4.3.7 排泄 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 |
| 1 多糖的生物学功能 |
| 2 多糖的口服吸收方式 |
| 2.1 通过小肠直接吸收 |
| 2.2 肠道菌群介导多糖的吸收 |
| 2.3 通过Peyer patch吸收 |
| 3 研究多糖口服吸收的模型 |
| 4 多糖的口服吸收的含量测定方法 |
| 4.1 比色法 |
| 4.2 生物测定法 |
| 4.3 免疫学测定法 |
| 4.4 同位素标记法 |
| 4.5 高效液相色谱法 |
| 4.6 荧光标记法 |
| 5 结语 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 中药多糖分离和药理活性研究现状 |
| 1.1.1多糖的提取 |
| 1.1.2 多糖的纯化 |
| 1.1.3 纯化多糖的结构分析 |
| 1.1.4 多糖的药理活性 |
| 1.2 多糖指纹图谱研究现状 |
| 1.2.1 光谱法 |
| 1.2.2 色谱法 |
| 1.3 多糖药代动力学研究概况 |
| 1.3.1 多糖药代动力学研究方法 |
| 1.3.2 多糖口服吸收研究现状 |
| 第二章 猪苓多糖多重指纹图谱的构建 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 药材样品信息 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 多糖的提取和纯化 |
| 2.2.2 基本组成测定 |
| 2.2.3 猪苓多糖的光谱分析 |
| 2.2.4 HPGPC测定猪苓多糖分子量分布 |
| 2.2.5 PMP柱前衍生HPLC法测定猪苓多糖单糖组成和含量 |
| 2.2.6 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 猪苓多糖的总糖含量和蛋白含量 |
| 2.3.2 猪苓多糖紫外光谱特征 |
| 2.3.3 猪苓多糖分子量分布及HPGPC指纹图谱构建 |
| 2.3.4 猪苓多糖IR指纹图谱和主成分分析 |
| 2.3.5 猪苓多糖单糖组成HPLC指纹图谱 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 猪苓多糖的分离纯化和荧光标记 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 多糖的纯化 |
| 3.2.2 多糖的结构解析 |
| 3.2.3 多糖的荧光标记 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 多糖分离纯化结果 |
| 3.3.2 多糖的结构测定 |
| 3.3.3 多糖荧光标记结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 不同分子量猪苓多糖在Caco-2细胞单层中的吸收特征 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要仪器 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养、传代和冻存 |
| 4.2.2 PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC对Caco-2细胞活力的影响 |
| 4.2.3 Caco-2细胞对PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC的摄取 |
| 4.2.4 荧光多糖标准曲线的建立、稳定性考察 |
| 4.2.5 Caco-2细胞单层模型的建立及评价 |
| 4.2.6 PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC跨膜转运研究 |
| 4.2.7 统计学数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC对Caco-2细胞活力的影响 |
| 4.3.2 Caco-2细胞对PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC的摄取 |
| 4.3.3 PPP1-Tyr-FITC、PPP2-Tyr-FITC标准曲线、稳定性考察 |
| 4.3.4 Caco-2细胞单层完整性检测结果 |
| 4.3.5 Caco-2细胞的跨膜转运实验 |
| 4.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 1 FITC标记菌类多糖 |
| 1.1 FITC标记脂多糖 |
| 1.2 FITC标记酵母聚糖 |
| 1.3 FITC标记虫草多糖 |
| 1.4 FITC标记树舌多糖 |
| 1.5 FITC标记小刺猴头菌多糖和黑木耳多糖 |
| 2 FITC标记海洋多糖 |
| 2.1 FITC标记褐藻多糖 |
| 2.2 FITC标记海胆多糖 |
| 2.3 FITC标记硫酸化乌贼多糖 |
| 3 FITC标记壳聚糖 |
| 4 FITC标记植物多糖 |
| 4.1 FITC标记红毛无加多糖 |
| 4.2 FITC标记枸杞多糖 |
| 4.3 FITC标记黄芪多糖 |
| 4.4 FITC标记麦冬多糖 |
| 4.5 FITC标记当归多糖 |
| 4.6 FITC标记灰树花多糖 |
| 4.7 FITC标记松花粉多糖 |
| 5 结语 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 红芪 |
| 1.2 多糖 |
| 1.2.1 多糖修饰 |
| 1.2.2 多糖抗肿瘤 |
| 1.2.3 多糖荧光标记 |
| 1.3 肝损伤 |
| 1.3.1 肝损伤病因 |
| 1.3.2 中药治疗肝损伤 |
| 1.3.3 研究肝损伤的模型 |
| 1.4 中药谱效相关 |
| 1.5 红芪多糖研究概况 |
| 1.6 立题依据 |
| 第二章 红芪多糖抗CCL_4所致小鼠肝损伤研究 |
| 2.1 药材 |
| 2.1.1 药材 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 8 批红芪多糖3的提取 |
| 2.2.2 8 批红芪多糖对肝损伤模型的药效实验 |
| 2.2.3 病理切片制作 |
| 2.2.4 实验数据处理 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 红芪多糖对肝损伤小鼠的血清指标影响 |
| 2.3.2 小鼠肝脏病理切片结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 CCL_4肝损伤模型的建立与药效指标 |
| 2.4.2 药材的选择与药效 |
| 第三章 8批红芪多糖理化性质对肝损伤小鼠药效的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 仪器 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 实验多糖 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 多糖含量测定 |
| 3.2.2 多糖分子量测定 |
| 3.2.3 多糖的单糖基测定 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 多糖分子量 |
| 3.3.2 多糖单糖组成 |
| 3.3.3 单糖基与药效谱效相关分析 |
| 3.3.4 多糖含量与单糖基组成比 |
| 第四章 酸酯化红芪多糖3(HPS-3)体外抗肿瘤实验 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 仪器 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 药材 |
| 4.1.4 菌株 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 HPS-3 提取分离与纯化 |
| 4.2.2 硫酸酯化修饰HPS-3 |
| 4.2.3 HPS-3中硫代度测定 |
| 4.2.4 电镜(SEM)扫描实验 |
| 4.2.5 体外抑制增殖实验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 HPS-3 硫酸酯化结果 |
| 4.3.2 硫代度测定结果 |
| 4.3.3 SEM扫描结果 |
| 4.3.4 体外抑制肿瘤细胞增殖结果 |
| 第五章 红芪多糖3(HPS-3)的荧光标记实验 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 仪器 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 试药 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 HPS-3 荧光标记实验 |
| 5.2.2 荧光检测实验 |
| 5.2.3 标记率测定实验 |
| 5.2.4 高效液相色谱测定 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 荧光检测结果 |
| 5.3.2 标记率测定结果 |
| 5.3.3 高效液相测定结果 |
| 第六章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 研究生期间的研究成果 |
| 致谢 |
