陈民[1]（2020）在《草苁蓉两种主要活性成分分离及其对小鼠肾阳虚证的初步研究》文中提出草苁蓉（Boschniakia rossica（Cham.et Schlecht.）Fedtsch.）为列当科草苁蓉属植物。草苁蓉是一种民间用药,主要用于治疗肾虚阳痿、腰关节冷痛、便秘等。草苁蓉具有多种生物活性如抗衰老、抗肿瘤、抗炎、免疫系统调节、抗肝纤维化、保肝作用和提高记忆力等。因此本论文以草苁蓉为研究对象,通过制备液相色谱对其中主要成分进行分离提取,在此基础上建立HPLC发对其中两种主要成分进行定量分析;探讨了草苁蓉提取物对对氢化可的松诱导的肾阳虚小鼠模型的影响。研究结果表明:1.采用制备液相分离技术对草苁蓉中的主要活性成分进行制备,并对分离出的化合物进行13C谱和1H谱测定,最终确定分离化合物为草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B。2.开发建立了 HPLC同时检测分析草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B的方法:色谱柱 Klimail 100-5 C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相:乙腈（A）-0.05%甲酸水（B）;流速:1 mL/min;柱温:30℃;检测波长:260 nm;进样量:20 μL;梯度洗脱条件:0-12 min,15%（A）;12-30 min,15-20%（A）;30-40 min,20-25%（A）;40-45 min,25-30%（A）;45-60 min,30-100%（A）。结果表明方法灵敏、准确、稳定,为草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B的定量提供了方法。3.本研究通过大剂量腹腔注射氢化可的松诱导肾阳虚证小鼠动物模型。以草苁蓉提取物高、中、低剂量和金匮肾气丸口服灌胃对比他们治疗肾阳虚证的效果:以小鼠血清中超氧化歧化酶、丙二醛含量为指标,考察小鼠肾阳虚治疗过程中氧自由基反应情况;测定小鼠血清中睾酮、卵泡刺激素、cAMP和cGMP含量,考察动物的性激素变化;测定血清中ActR2A和BMP-5含量,检查肾阳虚小鼠骨骼变化。结果表明,金匮肾气丸、草苁蓉高剂量组能明显使肾阳虚证小鼠血清中超氧化歧化酶活力增强、丙二醛含量降低、血清中睾酮、cAMP明显升高,cGMP含量降低,ActR2A和BMP-5含量升高,肾阳虚证明显好转。由以上结果可知,本论文完成了对草苁蓉中主要成分的分离提取;开发并建立了HPLC同时检测分析草苁蓉中的两种主要化合物（草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B）;分析了草苁蓉提取物对氢化可的松致肾阳虚证小鼠的治疗效果。本研究为草苁蓉的开发和利用提供了理论依据和科学支持。
蔡羽[2]（2018）在《桑瓜饮干预2型糖尿病大鼠的作用及其PI3K/Akt信号通路机制研究》文中认为研究目的通过研究桑瓜饮（Sangguayin,SGY）对2型糖尿病大鼠的血糖、血脂、组织病理、氧化应激指标、肝脏PI3K/Akt信号通路的影响,以期探讨桑瓜饮对2型糖尿病大鼠的干预作用及对PI3K/Akt信号通路的影响,为该方治疗2型糖尿病提供科学依据。研究方法以高脂高糖饲料及小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导,建立2型糖尿病大鼠模型。将大鼠分为四组,即正常对照组（给予生理盐水剂量:3ml/kg b.w.）、模型对照组（给予生理盐水剂量:3ml/kg b.w.）、二甲双胍组（给予二甲双胍剂量:150mg/kg b.w.）、桑瓜饮组（给予桑瓜饮剂量:1240mg/kg b.w.）。灌胃给予相应的药物或生理盐水42d,每日1次。给药第35d,进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）。给药第42d处死大鼠,检测空腹血糖（FBG）、空腹血胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肝糖原、糖化血红蛋白（GHb）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。进行胰腺、肾脏及肝脏组织HE染色切片病理学分析。用实时定量荧光PCR（Real-time PCR）法检测大鼠肝脏组织胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）的mRNA表达情况。蛋白质印迹法（Western blot,WB）检测肝脏组织InsR、IRS-2、PI3K、Akt、p-Akt和GLUT-4蛋白表达。研究结果糖代谢指标:较模型对照组,桑瓜饮组的FBG、FINS、HOMA-IR与OGTT值均显着减少（P<0.05或P<0.01）。生化指标:相比于模型对照组,桑瓜饮组血清TC、TG、LDL-C、GHb水平明显减少,HDL-C与肝糖原水平明显增加（P<0.05或P<0.01）。HE染色病理切片:相比于模型对照组,桑瓜饮组的胰腺、肝脏及肾脏组织病理改变明显减轻。氧化应激指标:较模型对照组,桑瓜饮组MDA含量显着减少（P<0.01）,SOD、CAT与GSH-Px活性明显增加（P<0.05或P<0.01）。PI3K/Akt信号通路:较模型对照组,桑瓜饮组大鼠肝脏组织InsR、IRS-2、PI3K、Akt、GLUT-4的mRNA及InsR、IRS-2、PI3K、Akt、p-Akt、GLUT-4的蛋白表达量显着上调（P<0.05）。研究结论1.桑瓜饮能降低2型糖尿病大鼠血糖,改善糖代谢,提高胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗。2.桑瓜饮可以调节2型糖尿病大鼠血脂水平,改善脂代谢。3.桑瓜饮能够减少2型糖尿病大鼠胰岛β细胞的损伤,减轻肝脏、胰腺和肾脏组织的病变,对胰腺、肝脏及肾脏组织起到一定的保护作用。4.桑瓜饮可提高2型糖尿病大鼠抗氧化应激能力,改善氧化应激状态。5.桑瓜饮能上调2型糖尿病大鼠肝脏组织PI3K/Akt信号通路中的关键分子（InsR、IRS-2、PI3K、Akt、p-Akt和GLUT-4）的mRNA及蛋白表达,可能是其发挥抗2型糖尿病作用的内在分子机制。
刘欢[3]（2017）在《芹菜素抗非小细胞肺癌作用及协同增敏顺铂抗肺癌作用机制初步研究》文中认为首先,采用MTT法研究了芹菜素、顺铂单独和联用对六种人非小细胞肺癌细胞株（A549、SPC-A-1、H1299、H1650、LTEP-a2、H460）的增殖抑制作用,结果表明,芹菜素对于A549、H460、H1650、H1299、SPC-A-1、LTEP-a2细胞作用不同时间（24 h、48 h、72 h）,其IC50分别是55.17、34.58、26.41μM,47.37、33.28、23.94μM,67.72、34.11、22.87μM,130.98、50.07、34.36μM,125.25、55.11、28.00μM,60.26、37.19、20.85μM,说明其具有较好的抗非小细胞肺癌细胞增殖的作用,且呈一定的剂量和时间依赖性;与顺铂单独作用肺癌细胞相比,芹菜素与顺铂联用具有很好的协同增敏效果。其次,采用细胞计数法、平板克隆形成实验、Hoechst 33258染色、流式细胞术等方法分别检测芹菜素作用后非小细胞肺癌细胞株H460细胞增殖、凋亡和周期分布等的变化。细胞计数结果表明,用不同浓度（0、20、40、80μM）的芹菜素孵育肺癌细胞H460不同时间（24、48、72 h）后,细胞增殖抑制作用与作用剂量和作用时间呈正相关;同样,体外细胞克隆形成实验结果显示细胞集落形成数与作用剂量呈负相关。荧光染色结果显示,与阴性对照组（Control）相比,不同浓度的芹菜素（20、40、80μM）分别作用H460细胞株不同时间（6 h和12 h）后,明场下观察细胞会出现不同程度的细胞凋亡形态学变化,如出现皱缩的细胞核,边缘不清晰的细胞膜,甚至出现破碎的细胞核。在倒置荧光显微镜紫外波段的激发光下观察,肿瘤细胞染成蓝色,活细胞染色较浅,死细胞染色较深。随着芹菜素作用浓度增加和作用时间的延长,H460细胞染色逐渐加深,细胞数量逐渐减少,凋亡小体数量增加。AnnexinV-FITC/PI双染法检测芹菜素作用H460细胞凋亡率的影响,可发现H460细胞随着芹菜素作用浓度和作用时间增加而出现更多的凋亡细胞。细胞周期检测结果表明,H460细胞大部分处于G0/G1期。与Control组相比,随着芹菜素的浓度增加,细胞在G2/M期的数量增加,和芹菜素的剂量和时间呈一定的依赖性,说明芹菜素能通过阻滞细胞周期进程,从而影响H460细胞的增殖。最后,初步探究芹菜素协同增敏顺铂抗非小细胞肺癌的作用机制。采用western blot和qRT-PCR实验方法检测不同浓度（0、20、40、80μM）的芹菜素孵育H460细胞株24 h,从蛋白和mRNA表达水平变化等方面检测Nrf2、ARE抗氧化反应的元件（NQO1、HO-1、GSTA1）表达的变化（相对于骨架蛋白β-actin、骨架基因GAPDH）。此外,选取叔丁基对苯二酚（tert-butyl hydroquinone,t-BHQ）作为Nrf2的激动剂,增加t-BHQ 50μM,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM两组作用H460细胞株24 h。结果表明,芹菜素能下调H460细胞中Nrf2、NQO1、HO-1、GSTA1蛋白和mRNA的表达,且与作用剂量呈正相关。与Control组相比,t-BHQ 50μM组的Nrf2蛋白和mRNA表达上调,且差异有显着性（p<0.05）,其他的蛋白上调作用不明显,没有显着性差异,但是诱导了mRNA的表达。与t-BHQ 50μM组相比,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM组的Nrf2的蛋白和基因表达明显下调。与芹菜素40μM组相比,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM组Nrf2的蛋白和基因表达有些上调,说明t-BHQ能逆转芹菜素抑制Nrf2表达的作用。但是Nrf2下游的分子可能受多个核因子调控,故表现出不太一致或者趋势不明显的结果。以上结果说明芹菜素具有下调Nrf2表达的作用,其可能与芹菜素协同增敏顺铂抗非小细胞肺癌作用有关。综上所述,芹菜素具有抗肺癌细胞增殖的作用,并能阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡。小剂量的芹菜素还具有协同增敏顺铂抗肺癌作用,其可能与抑制Nrf2-ARE信号通路有关。本论文旨在研究芹菜素与顺铂化疗药物联用协同增强药物治疗效果,为肺癌的联合治疗提供新的方法。
霍少芬[4]（2013）在《31种广东植物体外抗NPC活性的筛选及夹竹桃抗NPC作用和机制的初步研究》文中研究说明研究背景和目的：鼻咽癌（NPC）是广东省高发的头颈部恶性肿瘤之一,具有“广东癌”之称,易发生早期侵袭、转移,目前鼻咽癌的治疗以放疗和化疗为主[3-6],5年生存率维持在45-50%左右[6-10],且放化疗后毒副作用大,还存在远期效果不明显和耐药性等问题,因此,寻找有效的治疗药物对提高患者的生存期具有重要意义。本研究通过MTT法从31种广东省植物提取物中初步检测其抗鼻咽癌活性,通过分析比较他们的抗肿瘤活性大小后从这31种植物提取物中筛选出三种具有较强抗肿瘤活性植物提取物进行鼻咽癌凋亡检测,以进一步比较这三种提取物的抗鼻咽癌效果（这三种植物提取物分别是：夹竹桃、牛耳风、牡荆）。通过分析比较从这三种植物提取物中筛选出一种最佳的抗鼻咽癌药物--夹竹桃提取物,并对其抗鼻咽癌作用及机制进行进一步的研究。本研究在MTT法初步筛选具有抗鼻咽癌活性药物时以肺癌A549细胞作为阳性对照。方法：①采用MTT法检测31种来自于广东的植物提取物对鼻咽癌增殖的影响,并以肺癌A549细胞作为阳性对照。分析比较各植物提取物的抗鼻咽癌活性大小后选出三种具有较强抗肿瘤活性的植物提取物进行鼻咽癌凋亡检测。初步筛选出的三种植物提取物分别是：夹竹桃、牛耳风、牡荆。②采用流式细胞仪检测夹竹桃、牛耳风、牡荆三种植物提取物对鼻咽癌细胞凋亡的影响（PI和Annexin-V双标法）。通过分析比较从这三种植物提取物中筛选出一种最佳的抗鼻咽癌药物,并对其抗鼻咽癌作用及机制进行进一步的研究。经二重筛查后筛选出的最佳抗鼻咽癌药物是：夹竹桃提取物。③采用平板克隆形成实验检测夹竹桃提取物对鼻咽癌及肺癌细胞集落形成能力（增殖能力）的影响。④侧群细胞可作为肿瘤干细胞的新型代表,采用流式细胞仪检测夹竹桃桃提取物对鼻咽癌侧群（SP）细胞的影响。⑤肿瘤球含有肿瘤干细胞的多种特性,通过肿瘤球培养法（肿瘤球形成实验）观察夹竹桃提取物对肿瘤干细胞的影响,检测夹竹桃桃提取物对鼻咽癌原代肿瘤球及第二代肿瘤球的效应。⑥采用蛋白质免疫印迹技术（WESTERN BLOT）检测夹竹桃桃提取物抑制鼻咽癌的分子机制。⑦统计方法：本实验数据均采用graph prism5软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示。三个及三个以上药物浓度处理组的平板克隆形成数量、凋亡比例、侧群比例、肿瘤球直径、肿瘤球数量等数据均采用单因素方差分析（One-way ANOVA）比较各组差异。。P<0.05被认为有统计学差异。结果：一、MTT法初步比较31种植物提取物抗鼻咽癌活性大小。MTT法初步检测构树、水茄、鹅掌柴、猪屎豆、使君子、毛排钱树、山芝麻、木荷、对叶蓉、南板兰、马兰、鹊梅藤、龙须藤、醉鱼草、石岩枫、五月艾、八角枫、峨眉唐松草、潺槁树、土荆芥、山大颜、夹竹桃、牛耳风、牡荆、金腰箭、含羞草、小叶榕、黄花捻、杨梅、龙船花、广防风等31种植物提取物的抗鼻咽癌活性。通过分析比较这31种植物提取物抗鼻咽癌活性大小后从中选出三种在小剂量药物浓度下能显着抑制鼻咽癌增殖的植物提取物,这三种植物提取物分别是：夹竹桃、牛耳风、牡荆。二、比较牛耳风、牡荆、夹竹桃三种植物提取物抑制鼻咽癌CNE2细胞活性大小（以肺癌A549细胞作为阳性对照）。1、 MTT法比较：在通过MTT法从31种植物提取物中初步筛选出夹竹桃、牛耳风、牡荆三种具有较强抗鼻咽癌活性后,进一步缩小药物检测浓度范围,再次通过MTT法检测夹竹桃、牛耳风、牡荆三种的抗鼻咽癌活性,以进一步比较其抗鼻咽癌活性大小。结果显示：牛耳风提取物可抑制鼻咽癌CNE2（P=0.0357）和肺癌A549（P=0.0026）细胞生长,且具有剂量依赖性。经计算,牛耳风提取物对CNE2和A549细胞的IC50分别为22.70931μg/ml和78.38118μg/ml牡荆提取物可抑制鼻咽癌CNE2（P<0.0001）和肺癌A549（P<0.0001）细胞生长,且具有剂量依赖性。经计算,牡荆提取物对CNE2和A549细胞的IC50分别为130.6466μg/ml和184.6874μg/ml。夹竹桃提取物可显着抑制鼻咽癌CNE2（P<0.01）和肺癌A549（P<0.01）细胞生长,且具有剂量依赖性。经计算,夹竹桃提取物对CNE2和A549细胞的IC50分别为3.082226μg/ml和5.04μg/ml。通过分析比较这三种植物提取物抗鼻咽癌的IC50值大小后发现夹竹桃IC50值最小。2、流式细胞凋亡检测法比较：采用流式细胞仪检测夹竹桃、牛耳风、牡荆三种植物提取物对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响（PI和Annexin-V双标法）。通过分析比较从这三种植物提取物中筛选出一种最佳的抗鼻咽癌药物,并对其抗鼻咽癌作用及机制进行进一步的研究。通过分析比较这三种植物提取物诱导鼻咽癌凋亡率大小后发现夹竹桃诱导鼻咽癌效果最显着。经MTT筛选及凋亡检测双重筛查后筛选出的最佳抗鼻咽癌药物是：夹竹桃提取物。（A）、牛耳风提取物显着诱导鼻咽癌CNE2细胞（F=30.85,P=0.0007）凋亡。取浓度分别为0μg/ml、12.5μg/ml、25μg/nd的牛耳风提取物作用于CNE2细胞24小时后,凋亡比例分别为：3.37±1.650,22.47±5.479、36.73±7.001,凋亡细胞比例随药物浓度的增加而显着增加。经单因素方差分析,各组凋亡率之间比较,差异具有统计学意义。（B）、牡荆提取物可诱导鼻咽癌CNE2细胞（F=27.95,P=0.0009）凋亡。取浓度分别为Opg/ml、75μg/ml、150μg/ml的牡荆提取物作用于CNE2细胞48小时后,凋亡比例分别为：3.37±1.650,12.37±±2.815、27.17±5.988,凋亡细胞比例随药物浓度的增加而显着增加。经单因素方差分析,各组凋亡率之间比较,差异具有统计学意义。（C）、夹竹桃提取物显着诱导鼻咽癌CNE2细胞（F=37.06,P=0.0004）凋亡。取浓度分别为0μg/ml、1.5μg/ml、3μg/ml的夹竹桃提取物作用于CNE2细胞18小时后,凋亡比例分别为：3.37±1.650,27.07±4.924、37.43±6.862,凋亡细胞比例随药物浓度的增加而显着增加。经单因素方差分析,各组凋亡率之间比较,差异具有统计学意义。三、夹竹桃提取物能显着抑制鼻咽癌CNE2细胞（F=153.6,P<0.0001）克隆形成。采用平板克隆形成实验检测夹竹桃提取物抑制鼻咽癌细胞克隆形成的情况,分别取0μg/ml、1.5μg/ml、3μg/ml夹竹桃提取物作用于鼻咽癌CNE2细胞2周后,克隆形成数量分别为：255.33±28.746、30.67±15.822、10.33±2.517。细胞克隆形成数量随着药物浓度的增加而减少,呈剂量依赖关系。经单因素方差分析,各浓度组别之间的差异具有统计学意义。四、夹竹桃提取物抑制鼻咽癌干细胞生长。1、夹竹桃提取物降低鼻咽癌CNE2侧群细胞比例（F=27.40,P=0.001）。取浓度分别为0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml的夹竹桃提取物作用于CNE2细胞48小时后,侧群细胞比例分别为：3.27±0.764、1.23±0.493、0.13±0.058。经单因素方差分析,各浓度组别之间的差异具有统计学意义。2、夹竹桃提取物能抑制鼻咽癌CNE2肿瘤球直径大小（F=9.105,P=0.0023）。肿瘤球含有肿瘤干细胞的多种特性,通过肿瘤球培养法观察夹竹桃提取物对肿瘤干细胞的影响。细胞培养在无血清肿瘤球培养基中,取浓度分别为0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml的夹竹桃提取物处理CNE2细胞1-2周后检测肿瘤球直径,直径分别为：501.00±160.558μm、300.33±146.374μm、170.33±81.206μm、96.33±32.532μm、44.00±19.519μm。经完全随机设计的单因素方差分析,差异具有统计学意义。可以认为夹竹桃提取物能抑制鼻咽癌肿瘤球直径大小,药物浓度越大,肿瘤球直径越小。3、夹竹桃提取物抑制原代鼻咽癌CNE2肿瘤球成球数量（F=36.57,P<0.0001）。取浓度分别为0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mh、3μg/ml的夹竹桃提取物处理CNE2细胞1-2周后,肿瘤球形成数量（个）分别为：546.33±114.269、345.67±68.017、151.33±39.829、66.67±17.039、17.67±7.638。经完全随机设计的单因素方差分析,差异具有统计学意义。4、夹竹桃提取物抑制第二代鼻咽癌CNE2肿瘤球成球数量（F=13.88,P=0.0007）。第2代肿瘤球培养中,将经夹竹桃提取物处理后的原代肿瘤球再次消化,为单细胞悬液,重新进行肿瘤球培养,共7天,不加入任何药物处理。各组细胞再次形成肿瘤球的能力不同,各组第二代肿瘤球形成数量（个）分别为：273.00±98.686、172.33±39.004、95.67±28.537、33.67±6.658、16.33±4.163。经完全随机化设计的单因素方差分析,差异具有统计学意义。五、夹竹桃提取物抑制鼻咽癌细胞生长的分子机制取浓度为3μg/ml的夹竹桃提取物处理鼻咽癌CNE2细胞3天后westernblot检测PI3K/Akt信号通路及线粒体途径凋亡信号通路相关因子的表达水平。实验结果显示,与空白对照组相比,夹竹桃提取物处理组的PI3K和Akt磷酸化水平表达量降低,而总的PI3K和Akt蛋白表达量无明显变化,这表明夹竹桃提取物抑制鼻咽癌细胞生长的作用可能是通过P13K/Akt信号通路来实现的。另外,实验结果还显示,与空白对照组相比,夹竹桃提取物处理组的促凋亡因子Bad的表达水平明显上调,抑凋亡因子Bcl-2表达水平显着下调,而抑凋亡因子Bcl-XL的表达量未见明显变化,同时,具有活性的cleaved caspase-3表达水平明显上调,这表明,在夹竹桃提取物诱导鼻咽癌细胞发生凋亡的事件中,线粒体途径参与其中。综上所述,夹竹桃提取物抑制鼻咽癌细胞生长的分子机制可能是通过PI3K/Akt信号通路[21-35]来实现的,通过抑制PI3K和Akt磷酸化,进而上调促凋亡因子Bad的表达,下调抑凋亡因子Bcl-2的表达,并通过线粒体凋亡途径（内源性凋亡途径）[36-46]活化caspase-3,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。六、夹竹桃提取物抑制鼻咽癌干细胞生长的分子机制β-catenin、c-myc、nanog及oct4是维持肿瘤干细胞生长和维持干细胞特性的重要因子,也是重要的肿瘤干细胞标志物。本研究取浓度为3μg/ml的夹竹桃提取物处理鼻咽癌CNE2细胞3天后western blot检测干细胞相关因子的表达水平。实验结果显示,与空白对照组相比,夹竹桃提取物处理组的β-catenin磷酸化水平表达量降低,而总的β-catenin蛋白表达量无明显变化,同时,c-myc表达也水平明显降低,而nanog及oct4表达水平未见明显变化,这表明夹竹桃提取物抑制鼻咽癌干细胞生长的作用可能是通过抑制β-catenin磷酸化以及抑制c-myc表达来实现的。结论：①夹竹桃、牛耳风、牡荆三种植物提取物对鼻咽癌细胞生长具有较强抑制效应,其中夹竹桃的抑制效应最强。②夹竹桃提取物能抑制鼻咽癌细胞生长,其分子机制可能是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。③夹竹桃提取物可通过抑制PI3K和Akt磷酸化,进而上调促凋亡因子Bad的表达,下调抑凋亡因子Bcl-2的表达,并通过线粒体凋亡途径（内源性凋亡途径）活化caspase-3,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。④夹竹桃提取物能抑制鼻咽癌肿瘤干细胞的自我更新,其分子机制可能是通过抑制β-catenin磷酸化以及抑制c-myc表达来实现的。
周延峰[5]（2005）在《消瘤方治疗非小细胞肺癌的临床与实验研究》文中提出消瘤方是导师焦中华教授治疗非小细胞肺癌常用的方剂,临床观察安全有效,本研究的目的是从临床和实验研究两方面入手,利用现代实验技术,从现代医学的角度探讨它的作用机制。 临床研究:从多个方面观察了消瘤方的作用特点及临床疗效。结果显示,消瘤方能增强患者的免疫功能,并能对抗化疗药对机体细胞免疫功能的损伤;降低患者的血液粘度;缓解稳定病灶;改善症状;提高生活质量;延长患者的生存期;减轻化疗所引起的毒副作用;本方无明显的毒副反应。疗效优于单纯化疗。 实验研究:动物实验以Lewis肺癌、H22肝癌（腹水型）为模型,观察消瘤方的抑瘤、抗转移等作用疗效。结果显示,消瘤方具有明显的抑瘤作用,且存在量效关系;显着减少自发性和实验性肺转移灶数,减少肿瘤组织微血管数量及肿瘤细胞VEGF表达;提高荷瘤鼠的NK细胞活性,保护荷瘤鼠的免疫器管。与化疗合用具有增效减毒作用。体外实验以PG细胞为观察对象,分别采用细胞毒试验（MTT）、流式细胞仪（FCM）和倒置相差显微镜检测,观察细胞毒作用、细胞凋亡、P53基因、nm23基因的变化与表达情况。结果显示,消瘤方含药血清可抑制PG细胞的生长;促进PG细胞凋亡,作用于肿瘤细胞G1/S节点;下调突变性P53基因;对nm23基因无影响。 本研究结果表明,消瘤方治疗非小细胞肺癌是安全、有效的。且在多层次、多环节、多靶点上发挥其抗肺癌作用。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 草苁蓉概述 |
| 1.1.1 草苁蓉的形态特征 |
| 1.1.2 草苁蓉原植物的分布 |
| 1.2 草苁蓉主要化学成分 |
| 1.2.1 萜类 |
| 1.2.2 苯丙烷糖苷类 |
| 1.2.3 生物碱类 |
| 1.2.4 甾醇 |
| 1.2.5 其他成分 |
| 1.3 草苁蓉的生物活性作用 |
| 1.3.1 抗衰老作用 |
| 1.3.2 抗肿瘤作用 |
| 1.3.3 抗炎作用 |
| 1.3.4 免疫系统调节作用 |
| 1.3.5 抗肝纤维化作用 |
| 1.3.6 保肝作用 |
| 1.3.7 提高记忆力 |
| 1.3.8 其他作用 |
| 1.4 肾阳虚证的研究进展 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 2 草苁蓉主要活性成分分离及鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 草苁蓉中主要成分的制备 |
| 2.2.3 成分分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 NMR分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B液相检测方法的建立 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验仪器与试剂 |
| 3.2.2 草苁蓉中活性成分的提取 |
| 3.2.3 草苁蓉主要活性成分HPLC方法的建立 |
| 3.2.4 方法学验证 |
| 3.2.5 结果与分析 |
| 3.3 本章小结 |
| 4 草苁蓉温补肾阳作用研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验仪器和试剂 |
| 4.2.2 草苁蓉活性成分提取 |
| 4.2.3 肾阳虚证造模 |
| 4.2.4 急性毒性实验 |
| 4.2.5 模型动物干预 |
| 4.2.6 血清指标检测 |
| 4.2.7 数据处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 急性毒性实验 |
| 4.3.2 草苁蓉对小鼠的影响 |
| 4.3.3 草苁蓉对小鼠血清指标的影响 |
| 4.3.4 草苁蓉治疗肾阳虚效果评价 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠糖脂代谢影响 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 桑瓜饮的制备 |
| 1.4 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 造模方法 |
| 2.2 分组与给药 |
| 2.3 标本制备 |
| 2.4 检测指标 |
| 2.5 数据统计方法 |
| 3.结果 |
| 3.1 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠体重的影响 |
| 3.2 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠FBG的影响 |
| 3.3 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠OGTT、FINS及HOMA-IR的影响 |
| 3.4 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠生化指标水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 2型糖尿病大鼠模型的建立 |
| 4.2 桑瓜饮防治2型糖尿病的理论依据 |
| 4.3 阳性对照药的选择 |
| 4.4 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠糖代谢的影响 |
| 4.5 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠胰岛素及胰岛素抵抗的影响 |
| 4.6 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠糖化血红蛋白的影响 |
| 4.7 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肝糖原的影响 |
| 4.8 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠组织病理形态学的影响 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药物及试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 检测指标 |
| 3.结果 |
| 3.1 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠胰腺组织病理形态学的影响 |
| 3.2 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肝脏组织病理形态学的影响 |
| 3.3 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肾脏组织病理形态学的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠胰腺组织病理形态学的影响 |
| 4.2 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肝脏组织病理形态学的影响 |
| 4.3 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肾脏组织病理形态学的影响 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药物及试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 检测指标 |
| 2.4 数据统计方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肝脏InsR、IRS-2、PI3K、Akt与GLUT-4 mRNA表达的影响 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药物及试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 数据统计方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 4.1 治疗2型糖尿病的可能作用途径 |
| 4.2 InsR在2型糖尿病胰岛素抵抗中的作用 |
| 4.3 IRS-2在2型糖尿病胰岛素抵抗中的作用 |
| 4.4 PI3K与Akt在2型糖尿病胰岛素抵抗中的作用 |
| 4.5 GLUT-4在2型糖尿病胰岛素抵抗中的作用 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 桑瓜饮对2型糖尿病大鼠肝脏InsR、IRS-2、PI3K、Akt、p-Akt与GLUT-4蛋白表达的影响 |
| 1.材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 检测指标 |
| 2.4 数据统计方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1.研究结论 |
| 2.研究的创新点 |
| 3.不足与展望 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 实验性图片 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1. 前言 |
| 1.1. 肺癌 |
| 1.2. 芹菜素 |
| 1.3. NRF2-ARE信号通路 |
| 1.4. GSTS家族 |
| 1.5. 研究目的和意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1. 主要材料 |
| 2.2. 主要试剂配置 |
| 2.3. 贴壁细胞的培养 |
| 2.4. MTT法检测细胞增殖 |
| 2.5. 细胞计数法检测细胞增殖 |
| 2.6. 体外细胞克隆形成实验 |
| 2.7. HOECHST 33258 染色实验 |
| 2.8. 流式细胞术检测细胞凋亡率 |
| 2.9. 细胞周期分布检测 |
| 2.10. 蛋白免疫印迹 |
| 2.11. 荧光实时定量PCR |
| 2.12. 数据处理与统计分析方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1. MTT法检测芹菜素和顺铂对NSCLC细胞增殖的影响 |
| 3.2. 芹菜素抗NSCLC细胞作用的研究 |
| 3.3. 芹菜素协同增敏顺铂抗NSCLC细胞作用机制初步探究 |
| 4. 讨论 |
| 结论与创新性 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的主要论文 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 夹竹桃等31种广东植物对鼻咽癌生长的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二章 夹竹桃提取物对鼻咽癌生长的影响及其作用的分子机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文小结 |
| References |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 一、一般资料 |
| 二、治疗方法 |
| 三、观察指标 |
| (一) 生存率比较 |
| (二) 近期疗效观察 |
| (三) 不良反应观察 |
| 四、统计方法 |
| 五、结果 |
| (一) 生存率比较 |
| (二) 近期疗效观察 |
| (三) 不良反应观察 |
| 实验研究 |
| 第一部分 动物实验 |
| 一、一般材料 |
| 二、实验用动物模型的建立 |
| (一) Lewis肺癌移植瘤及自发性血道转移模型的建立 |
| (二) H_(22)肝癌实验性血道转移模型的建立 |
| 实验一 消瘤方对Lewis肺癌小鼠一般状况及局部肿瘤的影响 |
| 实验二 消瘤方对肿瘤血道转移的影响 |
| 实验三 消瘤方对Lewis肿癌小鼠免疫器官的影响 |
| 实验四 消瘤方对Lewis肺癌小鼠脾脏NK细胞活性的影响 |
| 实验五 消瘤方对Lewis肺癌小鼠移植瘤MVD、VEGF表达的影响 |
| 第二部分 体外实验消瘤方含药血清对体外PG细胞的影响 |
| 一、一般材料与含药血清的制备 |
| (一) 实验材料 |
| (二) 含药血清的制备 |
| 二、细胞培养 |
| (一) 细胞培养方法 |
| (二) 细胞悬液的制备 |
| 实验一 消瘤方含药血清对人肺巨细胞癌细胞系PG细胞细胞毒作用研究 |
| 实验二 消瘤方作用后PG细胞形态学及生长状态观察 |
| 实验三 消瘤方含药血清对人肺巨细胞癌细胞系PG细胞P53基因表达的影响 |
| 实验四 消瘤方含药血清对人肺巨细胞癌细胞系PG细胞nm23基因表达的影响 |
| 实验五 消瘤方含药血清诱导肺癌PG细胞凋亡的研究 |
| 讨论 |
| 一、现代医学对非小细胞肺癌的研究治疗进展 |
| 二、祖国医学对肺癌的认识 |
| (一) 古代文献关于肺癌的记载 |
| (二) 中医及中西医结合治疗肺癌的现代研究进展 |
| 三、消瘤方治疗肺癌的理论基础及导师治癌思想探讨 |
| (一) 对肺癌发病机理的认识 |
| (二) 临证用药特点 |
| (三) 治法方义探讨 |
| 四、消瘤方疗效及作用机理探讨 |
| (一) 调节机体的免疫功能 |
| (二) 降低血液粘度 |
| (三) 抑制肿瘤血管生成 |
| (四) 诱导肿瘤细胞凋亡 |
| (五) 下调P53基因的表达 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
