唐韵子[1]（2019）在《供水系统中蠕虫的紫外协同氧化灭活效果和机理研究》文中认为水中蠕虫类底栖生物（以下简称“蠕虫”）因其耐污性强,在饮用水水源地,特别是湖库类水源地大量繁殖,随原水进入水厂,造成蠕虫污染,严重威胁城市供水水质安全。单独氧化剂灭活虽然灭活率高,但氧化剂投加量高,增加了消毒副产物风险。为此,本研究以典型蠕虫颤蚓为研究对象,采用紫外协同氧化剂策略进行灭活,考察紫外照射对氧化剂灭活效果的提升效果,结合协同灭活过程颤蚓表皮结构的损伤和抗氧化系统变化,探讨紫外照射对氧化灭活的强化机理。旨在为饮用水系统中蠕虫风险的控制提供技术和理论支持,保障供水水质的水生生物和微生物安全性。主要结论如下:（1）紫外照射可以加剧颤蚓氧化毒害症状,缩短灭活延滞期和灭活时间。紫外强度180 mW/cm2、照射10 min时,较单独次氯酸钙氧化相比,延滞期由15 min缩短至10 min,灭活时间由70 min缩短至50 min。考虑经济和效率,最佳紫外照射时间为5 min。（2）紫外协同氧化剂灭活过程符合伪一级延迟Chick-Watson模型。紫外协同次氯酸钙的灭活效果优于紫外协同二氧化氯,二者灭活反应速率常数分别为0.01925和0.01501。考虑到经济和效率,紫外协同次氯酸钙和紫外协同二氧化氯最佳氧化剂浓度各自为 2 mg/L 和 3 mg/L。（3）扫描电镜和透射电镜观测结果表明,紫外照射可破坏表皮结构、损伤细胞器和细胞核,削弱表皮屏障效应。傅里叶红外光谱图表明紫外照射可改变蠕虫表皮角蛋白结构。紫外对氧化剂氧化灭活效果的强化,主要是通过改变表皮层角蛋白和脂质结构、影响Na+-K+-ATP酶活性,提高细胞通透性,破坏表皮屏障系统实现。（4）蠕虫脂质过氧化作用和抗氧化酶活性影响的分析表明,紫外协同次氯酸钙与紫外协同二氧化氯都可诱导蠕虫产生自由基,导致蛋白含量降低并产生脂质过氧化作用。紫外协同次氯酸钙与紫外协同二氧化氯MDA峰值分别在CT值为40 mg min/L和60 mg min/L时到达。紫外协同次氯酸钙下可显着激发蠕虫体内的抗氧化酶系统（SOD、CAT、GSH-PX）,在一定程度上缓解氧化胁迫程度,但当到达阈值后,抗氧化酶活性逐渐下降。紫外协同二氧化氯对蠕虫SOD、CAT和GSH-PX活性无显着影响。
刘文秀[2]（2019）在《苯酚对多刺裸腹溞蜕皮机制的初步研究》文中指出苯酚作为石油加工业、杀虫剂工厂、化工等许多工业点源的优先污染物,在水环境中经常被发现。本文采用急性毒性实验方法,根据苯酚对多刺裸腹溞（Moina macrocopa）48 h的半致死浓度,设置了五个苯酚浓度组（0.25、0.75、1.25、1.75、2.25 mg/L）和一个对照组,分别在胁迫24、48 h后,采用光镜和电镜技术,从组织病理学水平观察了不同浓度苯酚胁迫多刺裸腹溞后,表皮显微和亚显微结构的变化情况;测定了多刺裸腹溞的蜕皮次数、几丁质酶和β-NAGase、蜕皮激素以及NO和NOS的活性;最后,采用实时定量PCR技术,筛选最适内参基因,检测了蜕皮相关基因EcR、HR3、βFTZ-F1和表皮蛋白基因CP的mRNA表达情况。实验结果如下:（1）显微结构观察到,在苯酚胁迫24 h后,随着苯酚浓度的升高,与对照相比,表皮厚度呈现先升后降的趋势。苯酚浓度在0.25 mg/L时表皮达到最厚（P<0.01）,在2.25 mg/L时,显着低于对照组（P<0.05）;胁迫48 h,表皮厚度显着或极显着低于对照组（P<0.05,P<0.01）。表皮亚显微结构显示,随着苯酚浓度的升高,幼溞表皮厚度与对照相比呈先升后降的趋势;细胞核呈现不规则状态,核仁分裂,染色体发生凝聚边缘化,核膜严重肿胀;线粒体变形,出现肿胀膨出、空泡化、嵴减少甚至消失;粗面内质网出现大量断裂。说明苯酚对多刺裸腹溞表皮结构具有明显的损伤,且随着浓度的增加,这种损伤更加明显。（2）随着苯酚浓度的升高和胁迫时间的延长,多刺裸腹溞的蜕皮次数减少,尤其在高浓度处理组,极显着低于对照组（P<0.01）。几丁质酶活性和蜕皮激素的变化相似,均随苯酚浓度的升高而降低,尤其在苯酚浓度0.752.25 mg/L处理组,显着或极显着低于对照组（P<0.05,P<0.01）。β-NAGase酶活性先升高后降低,在浓度1.25 mg/L处理24 h组,显着高于对照组（P<0.05）,其他处理组与对照组没有显着性差异。NO含量和NOS酶活性的变化相似,随着苯酚浓度的升高呈现下降趋势,在最高苯酚浓度降到最低（P<0.01）。（3）基于内参基因稳定性的筛选,确定了16S rRNA作为多刺裸腹溞实时定量PCR的最佳内参基因。随着苯酚浓度的升高,胁迫24 h、48 h,EcR mRNA表达量均呈现先升高后降低的趋势,在低浓度0.25 mg/L组,极显着高于对照组（P<0.01）,随后逐渐降低。核受体HR3的mRNA表达量随着苯酚浓度升高而逐渐降低（P<0.01,P<0.05）,呈现剂量—效应关系。βFTZ-F1的mRNA表达量与EcR变化趋势相似,在苯酚0.75 mg/L处理组,mRNA表达量极显着高于对照组（P<0.01,P<0.05）,之后逐渐降低。苯酚胁迫24 h时,表皮蛋白基因CP mRNA表达量随着苯酚浓度升高而降低,在最高浓度2.25 mg/L时,CP mRNA表达量最低;胁迫48 h时,处理组显着或极显着低于对照组（P<0.01,P<0.05）。综合实验结果得出以下结论:（1）苯酚胁迫使多刺裸腹溞表皮厚度和形状发生改变,说明苯酚对多刺裸腹溞表皮结构具有明显的损伤,且随着浓度的增加,这种损伤更加明显。（2）苯酚抑制了多刺裸腹溞蜕皮,对几丁质酶和β-NAGase、蜕皮激素以及NO、NOS也造成影响,而且随着苯酚浓度的升高和胁迫时间的延长,与对照组的差异更明显,表明苯酚对多刺裸腹溞蜕皮的发生产生毒性影响。（3）苯酚胁迫后,多刺裸腹溞的蜕皮相关基因EcR、HR3、βFTZ-F1和表皮蛋白基因CP的mRNA表达发生异常变化,说明苯酚能从转录水平影响多刺裸腹溞蜕皮相关基因的表达。
唐浩[3]（2017）在《汞胁迫对赤子爱胜蚓的毒性效应研究》文中认为汞污染不但会影响土壤正常功能,严重破坏生态环境,还会通过食物链威胁人体健康。蚯蚓作为主要的土壤动物类群,对土壤污染状况具有较好的指示作用。为了解不同浓度汞胁迫对蚯蚓生理生化的影响,探寻土壤汞污染早期诊断新型生物标志物,以及为汞的陆地生物配体模型构建提供基础毒理数据,本文在摸清赤子爱胜蚓对汞的富集与释放规律的基础上,探索了不同汞暴露浓度下赤子爱胜蚓的氧化应激反应、生殖毒性及行为毒性,以及汞胁迫下蚯蚓蛋白质组的差异表达。研究结果可为土壤汞污染诊断、生物监测、污染控制以及修复治理等提供理论依据。主要研究结论如下:（1）蚯蚓对汞的富集与释放赤子爱胜蚓对汞具有一定富集能力,在1-8mg/kg暴露水平下,富集系数为1.69-2.95,富集浓度最高为18.93mg/kg;在16-64mg/kg暴露条件下,富集系数为5.21-7.62,富集浓度高达476.33mg/kg。蚯蚓对汞的富集速度在前8d较快,然后速率减慢,90d后趋于稳定;蚯蚓体内汞主要分布于蚯蚓25节以后;随着在清洁土壤中释放时间延长,蚯蚓体内汞含量有不同程度下降,第64d基本趋于稳定。（2）蚯蚓机体对汞污染胁迫的氧化应激响应汞胁迫对蚯蚓SOD（超氧化物歧化酶）和GSH-PX（谷胱甘肽过氧化物酶）有抑制作用,并促使MDA（丙二醛）含量上升,但对蚯蚓CAT（过氧化氢酶）活性影响不明显。汞胁迫对SOD和GSH-PX的抑制作用可能是导致MDA含量上升的原因之一。蚯蚓抗氧化酶系对汞胁迫呈现出不同的阶段性应激反应,不同种类酶的应激反应达到高峰的时间也不同;蚯蚓体内MDA含量和汞暴露浓度及蚯蚓体汞富集量有着较好的剂量效应关系。（3）汞对蚯蚓的生殖毒性汞胁迫下赤子爱胜蚓精子会产生畸变。蚯蚓精子异常形态主要有:顶端呈环、头部勾状弯曲、局部膨大和精子整体蜷曲4种,精子形态畸变率与汞暴露浓度呈现明显的剂量-效应关系;正常赤子爱胜蚓生精细胞排列规则,细胞结构完整清晰,高尔基体、线粒体等细胞器正常。在64mg/L滤纸染毒24 h,少量细胞开始破裂,细胞器外流,高尔基体呈同心圆形式降解,线粒体形态异常;在128mg/kg下暴露28d后,多数细胞破裂,细胞器外流,同时发现大量异常晶体结构。随着暴露浓度增加,汞对蚯蚓精子DNA的损伤加重。汞暴露浓度越大蚯蚓精子DNA的损伤程度越重,128mg/kg汞胁迫下,30%精子为轻度损伤,25%精子为中度损伤,7%的精子为重度损伤,只有35%的精子未受损伤。（4）汞对蚯蚓的行为毒性64mg/kg以下浓度汞暴露没有观察到明显的回避行为,赤子爱胜蚓对汞污染的回避浓度为128mg/kg;汞能明显抑制蚯蚓产生CO2,2d后此抑制作用存在剂量依赖性,7d后影响加剧。128mg/kg汞暴露浓度组第7d对蚯蚓呼吸抑制率达51.3%。72h后,32、128 mg/kg暴露浓度下蚯蚓掘穴行为受到明显抑制;一周以后,8、32、128 mg/kg浓度组蚯蚓掘穴活动趋于停止。在128mg/kg浓度下蚯蚓的最大掘穴深度（24.8cm）比对照组（33.4 cm）显着降低（P<0.05）。（5）汞污染胁迫下蚯蚓蛋白质组的差异表达蛋白质组学研究发现,汞胁迫下赤子爱胜蚓有10种蛋白质表现为上调,有4种蛋白质表现为下调。在表达上调的蛋白中,6种蛋白功能尚不明确,3个为不同功能的肌动蛋白,1个为纤溶蛋白酶;表达下调的蛋白中,2个肌动蛋白,2个血红蛋白中的协调功能蛋白。Western Blot验证结果表明,PLEK在蚯蚓体内的表达呈下降趋势,OGFRL1呈上升趋势,与双向电泳结果一致。
陈立红[4]（2016）在《参环毛蚓对土壤中农药（毒死蜱）胁迫的响应及机理研究》文中研究指明目的:基于生态毒理学的理论及实验方法,研究参环毛蚓在土壤中有机磷类农药毒死蜱胁迫条件下的急性毒性损伤及行为变化,并进一步从组织、细胞及分子水平探讨其响应机理,从而获得毒死蜱对参环毛蚓毒性效应的基础研究资料,为今后参环毛蚓人工养殖的环境控制提供评价指标与管理依据,在一定程度上推动人工养殖工作的顺利开展,为早日建立广地龙GAP养殖基地奠定坚实的研究基础。方法:1.采用标准滤纸法（OECD）和自然土壤法进行急性毒性试验,探究毒死蜱对参环毛蚓的急性毒性效应及致死效应,通过改良寇氏法计算半数致死浓度（LC50）,并考察死亡率与农药浓度的相关性;2.采用土壤法（ISO）和滤纸法进行回避试验,考察毒死蜱对参环毛蚓行为活动的影响,分析回避率与农药浓度的相关性;3.亚致死量毒死蜱胁迫处理参环毛蚓28 d后,解剖取蚓体局部,进行病理切片,HE染色,从组织显微构造方面观察毒死蜱胁迫对参环毛蚓肠道及体壁的毒性损伤;4.亚致死量毒死蜱胁迫处理参环毛蚓12 h后,利用机械法分离获取参环毛蚓的肠道组织细胞,通过Annexin V-FITC/PI双染试剂盒于流式细胞仪上检测细胞的凋亡状况。5.亚致死量毒死蜱胁迫处理参环毛蚓12 h后,取头部和生殖环带分别制备含酶的组织匀浆液,采用生化试剂盒对蛋白质（Pro）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量进行检测,并分析其变化趋势。结果:1.毒死蜱对参环毛蚓的半数致死浓度（LC50）值:24h为78.34μg/cm2,48 h 为 35.76 μ g/cm2;7 d 为 291.0 mg/kg,14 d 为 185.6 mg/kg,根据毒性评价标准得到,毒死蜱对参环毛蚓的生态毒性属于中低级。2.滤纸回避试验的结果发现当毒死蜱浓度为7.16 μg/cm2时,回避率高达86.67%,即蚯蚓表现出了明显的回避现象,并通过概率回归法,得到参环毛蚓对毒死蜱行为反应的阈值（EC50）为2.33μ g/cm2,而土壤法结果不理想,表明其不适用于考察参环毛蚓对毒死蜱的趋避行为。3.亚致死量的毒死蜱胁迫下,参环毛蚓体壁及肠道均出现了明显的显微结构病变,且损伤程度随毒死蜱浓度的增加而加重。主要表现为肠上皮细胞凹陷、撕裂分散状、排列紊乱,甚至缺失脱落;体壁表皮层空泡化,局部变薄凹陷,空泡严重至局部溃疡、破损。4.用滤纸法以亚致死量毒死蜱胁迫处理12 h,可以使参环毛蚓肠组织细胞早期凋亡率呈上升趋势,体外存活率明显下降,且这些变化具有统计学意义。5.参环毛蚓经亚致死量的毒死蜱胁迫处理12 h后,头部抗氧化酶系主要表现为蛋白质含量增加,MDA含量降低,且毒死蜱浓度为6 μg/cm2时,变化最为显着（P<0.05）,而SOD酶活性基本稳定;生殖环带处蛋白质含量与SOD活性均表现为先降低后增高,且均在毒死蜱浓度为4 μ g/cm2时达到最值,而MDA含量则一直处于稳定状态。由此推断,生殖环带处的抗氧化酶系对毒死蜱胁迫比头部抗氧化酶系更为敏感,且两处的响应表现并不一致。结论:本研究从行为学、个体、组织、细胞及分子水平等多个层面,明确了参环毛蚓受到土壤中有机磷农药毒死蜱胁迫时的所表现的生理病理变化及响应机理。虽然急性毒性试验结果表明毒死蜱对参环毛蚓的毒性属中低等,但是行为学方面的试验表明,毒死蜱在亚致死量的条件下即可引起参环毛蚓出现明显的回避行为。进一步在组织、细胞和分子水平研究发现,毒死蜱对参环毛蚓的表皮和肠道均存在毒性效应,且同条件下,相对于表皮而言,肠道的损伤发生的更早、更为严重;与此同时,参环毛蚓则主要通过体内的抗氧化酶系进行自我保护,防御毒死蜱带来的损害。因此,本研究的结果提示,在人工养殖中,必须重视养殖环境中有关农药残余量的控制。此外,本文所采取的研究方法对今后考察其他影响参环毛蚓健康存活的环境因素具有一定的参考价值。
李菁[5]（2015）在《参环毛蚓肌细胞原代培养与鉴定研究》文中研究指明目的：鉴于参环毛蚓来源的广地龙药材的主要药用部位为除去内脏的体壁肌肉组织,本研究试图建立参环毛蚓肌细胞原代培养体系,以期获得数量多、一致性高、遗传物质稳定的无菌细胞群体。为参环毛蚓肌细胞系的建立奠定基础,进一步为实现在细胞和分子水平上进行的后续研究提供载体,同时为无脊椎动物中的类似动物细胞培养提供可借鉴的技术方法。方法：1.参环毛蚓样品的采集与鉴定在参环毛蚓的主要分布地,野外随机采集活体,进行物种来源鉴定。选取体型健壮,生殖环带明显,活力较强,平均湿重约5～8g/条的健康蚯蚓。2.参环毛蚓肌肉组织解离方法的筛选通过比较组织贴块法和酶消化法对参环毛蚓肌肉组织的解离情况,筛选一种能够获得数量多,活性好的肌细胞的解离方法。通过两因素完全随机设计实验方法,筛选最佳酶解条件,采用血细胞计数法及CCK-8法进行评价,所得数据均按照统计学方法处理。3.参环毛蚓肌细胞培养条件的筛选及优化根据预实验选择影响肌细胞培养的关键因素,通过考察参环毛蚓肌细胞培养的细胞接种密度、血清浓度、基础培养基种类、细胞生长因子等条件对其离体培养的影响,对其体外培养条件进行优化,筛选出最合适的细胞生长条件,并通过绘制生长曲线及CCK-8检测细胞活性进行比较和评价。所得数据均按照统计学方法处理。4.参环毛蚓肌细胞的鉴定利用透射电镜观察组织形态,依据类似组织细胞形态对参环毛蚓肌肉组织及培养的肌细胞进行超微结构比较鉴定,以证明该细胞来源的真实性。结果：1.经鉴定,本研究野外采集到的品种均为巨蚓科环毛蚓属参环毛蚓Pheretima aspergillum （E. Perrier）。2.经台盼蓝染色法及CCK-8活性测定,筛选出适合参环毛蚓肌肉组织最佳的解离方法—酶消化法。其中,酶种类为I型胶原酶,酶浓度为1mg/mL,酶解时间为24 h。该条件获得的细胞数量较多,细胞活性最好。3.经细胞计数、CCK-8细胞活性检测及细胞培养状态显示,参环毛蚓肌细胞最适宜的接种浓度为：2×105个/mL；培养时以Grace’s Insect Cell Culture Medium （简称Grace’s培养基）为基础培养基,添加的血清浓度为15%较为合适；添加细胞生长因子EGF浓度为0.1 ng/mL时对细胞生长有利,在铺有MG作为基质培养的肌细胞活性较好。4.经透射电镜鉴定,参环毛蚓的肌肉组织超微结构显示：肌细胞核显长梭形,分布在肌细胞的边缘或近末端,肌细胞的细胞质以线粒体和肌浆网小泡为主,较少出现其他细胞器,并且肌细胞类型有环肌细胞和纵肌细胞两类。细胞超微结构显示体外培养的参环毛蚓肌细胞与肌肉组织拥有相同的结构特点,据此证明该细胞来源于参环毛蚓肌肉组织。结论：本研究建立了一套参环毛蚓肌细胞原代培养方法,并对其来源进行了鉴定,获得了数量多、活性较好的无菌细胞群体。细胞增值缓慢,能存活30天以上。该成果对肌细胞系的建立具有重要意义,因细胞系的建立不仅为今后广地龙药效活性物质的基因功能组分分析、基因表达调控机制以及代谢活动规律等的相关研究提供必要的载体；也为实验室进行大规模和长时间的实验研究提供样本,一定程度上可避免实验材料来源的困难,缓解参环毛蚓野生资源锐减的现状。此外关于肌细胞增值及细胞系建立的研究还有待进一步的探索和实践。
宋羽葳[6]（2015）在《舒脉环毛蚓生殖系统和消化系统形态学研究》文中认为蚯蚓是对环节动物门（Annelida）寡毛纲（Oligochaeta）动物中陆生种类的统称。法国着名进化论先驱拉马克（Lumbric）是陆栖寡毛纲研究第一人,建立了环节动物门。Templeton （1844）建立了巨（钜）蚓属（Megascolex）, Kinberg （1867）依据Pheretima californica和Pheretima montana建立了环毛蚓属（Pheretima）。鉴于目前对陆生蚯蚓的分类具有不同的学术观点,本文中采用了陈义（1956）为代表的老一代学者的分类体系。巨（钜）蚓科（Megascolecidae）是蚯蚓中最大一科,环毛属（Pheretima）是巨蚓科（Megascolecidae）中最大一属。环毛属（Pheretima）在全球范围内均有分布,我国产有31种及亚种,分布于河北、甘肃、西藏、四川、云南、湖北、安徽、江苏、浙江、江西、湖南、海南岛、台湾、香港等地。环毛蚓属多种可入药是中药材地龙的药原动物,在农业生产、医药、生态、处理有机垃圾、改造土壤结构、食品方等面均得到广泛的应用。舒脉环毛蚓（Pheretima schmardae Horst,1883）属于环节动物门Annelida寡毛纲Oligonucleotides后孔寡毛目Oligochaeta Opisthopora巨蚓科Megascolecidae环毛属Pheretima.蚯蚓在世界范围内广泛分布,除沙漠、终年覆冰雪地区、无土壤及植物地区外,其他地区均有分布。古往今来,蚯蚓与人类的关系日益密切,其贡献亦得到世界公认。人们早在十七世纪就已经展开对蚯蚓的研究。随着科学技术的发展以及对蚯蚓应用的需求,相关研究也受到关注,主要体现在蚯蚓的生物基础理论、养殖技术和开发利用等方面。蚯蚓的形态学和分类学等方面的研究工作在十七、八世纪就已取得很大成就,外形图谱大几乎都由外国学者完成,且主要对器官水平的描述较为全面,但基本为手绘图,组织水平的研究几乎为空白。中国陆栖蚯蚓分类的研究比世界晚一百年左右,第一个被描述的陆栖蚯蚓是参状环毛蚓（Pheretima aspergillum Perrier,1872）由Perrier采自福建厦门,从此开启了中国陆栖蚯蚓的分类研究。早在民国时期,以陈义和方炳文等为主的分类学家就中国蚯蚓展开了分类研究,为国内的蚯蚓研究奠定了基础。目前总体来讲,投身于蚯蚓分类学研究的学者较少；中国蚯蚓分类的研究还有很多工作需进一步开展。所采用的蚯蚓分类鉴定指标基本还沿用老一代学者的方法,虽然DNA条形码技术已经被应用于蚯蚓分类中,但是其可靠性仍需要时间考验。由于缺乏比较系统的蚯蚓形态学研究,所以在蚯蚓分类鉴定中面临不少问题,为此,开展蚯蚓形态学的研究极为必要。组织学研究是形态学研究的重要组成部分,目前对蚯蚓组织学的研究几乎处于空白,缺乏系统且完整的组织学图谱,更未见到彩色图谱。在蚯蚓的人工养殖中,饲养和繁殖是最直接相关的问题。同时,生殖系统的形态是重要的分类鉴定依据,消化系统的研究可为蚯蚓处理环境垃圾提供基础资料。为此,本研究开展蚯蚓生殖系统和消化系统的形态学研究,除了填补蚯蚓组织学研究的空白外,还可以为相关研究提供参考依据。本文以舒脉环毛蚓（Pheretima schmardae）为材料,通过大体解剖、组织切片H.E染色和扫描电子显微镜观察为手段,对舒脉环毛蚓的生殖系统和消化系统的形态学进行研究。实验结果主要包括：1)不同性成熟个体的受精囊孔处附属腺存在情况不同。附属腺为一突起,近表皮处腺体细胞与柱状上皮细胞逐渐出现融合。受精囊孔为一突起,并在顶端有一开口,为盲管的开口处。开口处角质层较周边后。盲管开口处肌肉发达且内壁为柱状上皮细胞。坛囊（受精囊主囊）表面凹凸不平,不同个体及同一个体中由于坛囊内液体量不同导致其大小,形态不同；坛囊表面存在许多血管；内壁细胞为分泌细胞,细胞核靠近基底膜,在性成熟期不断分泌营养物质,坛囊内只有大量的液体；不同个体盲管弯曲度不同,其内壁为褶皱结构,由柱状上皮细胞组成,细胞核靠近基底膜,在盲管中的精子杂乱聚集成一团,管内有少量营养细胞；纳精囊（受精囊副囊）内壁细胞核酸物质含量高,该细胞分泌蛋白类物质,其底端精子较为有序的分布,头部与尾部有序交叉,其顶端精子排列十分有序,头部向内壁,尾部向囊中心。2)精漏斗内壁含大量肌纤维,内表面覆有纤毛,精子头部沿纤毛有规律排列分布,其尾部向内。贮精囊有两部分构成,顶部小囊为精巢囊内精子数量较少；大囊为贮精囊内有大量精子,且呈小堆聚集于蛋白质类物质上。精巢囊经精漏斗与输精管相连,输精管内壁由立方上皮细胞组成,具有运输精子的作用。3)雄性生殖孔内部为褶皱,在特殊条件下孔处有“阴茎”伸出,其长短不同。前列腺管壁由强大的环肌构成,内部有2条并行等大的管道,疑为精子和前列腺分泌物的运输管道。4)雌性生殖孔在环带处形成,环带部位表皮细胞腺性化。输卵管在腹神经下体壁处汇合,内表面有纤毛分布,用以运输卵子。卵巢呈散射状分布,由卵巢基部向外从,能观察到逐步发育的卵细胞。5)精子分为头部和尾部,头部核酸含量极高,尾部细长；考马斯亮蓝染色法与H.E染色法和扫描电镜观察相比能对精子进行更好的观察。6)在消化系统中,砂囊以前的消化管内腔面具多层上皮细胞,无纤毛。砂囊具有强大的环肌,与物理消化紧密相关,内表面上皮细胞结构紧密,无纤毛。砂囊以后的消化管（包括肠盲囊）内表面均分布有微绒毛,与营养物质的吸收相关。肛门裂隙状,内腔面上皮组织加厚,在体壁中具有大量肌细胞。综上所述,本研究结果比较系统而详细地展示了舒脉环毛蚓消化系统和生殖系统的形态和结构,填补了蚯蚓形态学研究的一些空白,可以为相关研究提供参考资料。本研究中观察到1)生殖系统：雄性生殖孔的多态现象提示在蚯蚓的分类鉴定中,需要慎重对待受精囊和雄性生殖孔的形态差异；储精囊由两部分结构组成,精子成熟、储存部位分区,进化更为高等；纤维柱状上皮细胞在生殖细胞运输过程中起到重要作用。2)消化系统：砂囊是主要的物理消化器官;肠和盲道中均有柱状上皮细胞和血液分布提示肠、盲道是营养物质吸收的主要场所,并进入血液循环。
卢瑞珊[7]（2014）在《参环毛蚓肠上皮细胞生物学特征的研究》文中研究表明目的:系统研究参环毛蝴肠上皮细胞（IEC）的一般生物学特征和特殊生物学特征,建立IEC生物学相关的检测方法及参考标准;获得与IEC细胞形态、结构、代谢、增殖等方面有价值的实验数据,为今后与分子生物学技术进一步结合、深入研究细胞内的DNA的复制和转录、蛋白质的合成、能量代谢和细胞增殖动力学等内容夯实基础,也为其它以细胞为材料的相关研究提供必要的技术支持。方法:1.通过光学显微镜对传代至23代处于对数生长期的IEC进行细胞形态观察,采用Viewfinder图像采集软件捕获细胞图像。采用透射电镜来观察IEC细胞绒毛、细胞器、细胞核等超微结构,参考已报道的蚯蚓细胞超微结构,对IEC细胞器进行准确分类。2.借鉴哺乳类动物染色体核型分析的实验方法,对IEC进行染色体核型分析。在倒置显微镜下寻找染色体没有重叠,数目完整且分散开的、形态清晰的细胞,捕捉图像。利用Adobe Photoshop 8.0图像软件,以标准样式处理染色体形态数据,利用Excel制作核型模式示意图。根据Levan（1964年）提出的按着丝点的位置对染色体进行命名和分类。3.以其他类似动物的细胞周期检测方法作为参考依据,分别考察IEC的破膜剂条件和染色液组成成分。以细胞膜破碎程度、细胞周期直方图图形分布情况、变异系数（CV值）、细胞碎片含量（%Debris）、细胞总数（Cell No.）4种参数来共同评价4种染色方案的优劣,确定组成出检测IEC细胞周期的最佳实验条件,建立检测IEC细胞周期的最优方案。4.对23代处于指数生长期的IEC给予不同浓度梯度的Cd2+进行胁迫处理,在37℃、体积分数5%CO2环境下孵育0、12、24和48h。利用参环毛蚓IEC形态学以及细胞存活率和活力2个生理学指标评价IEC对重金属Cd2+的耐受能力,实验图像和数据分别采用Microsoft Excel和SPSS17.0软件进行处理分析。结果:1.研究发现IEC细胞直径约为8±2 μ m,细胞形态从圆柱形变成圆形或椭圆形,绒毛也因环境的改变出现了功能性衰退现象。而线粒体、蛋白颗粒、内质网和粗面内质网在空间呈现特异性分布。2.参环毛蚓IEC染色体核型结果表明,参环毛蚓具有22条染色体,共11组染色体,为二倍体生物。染色体核型表示为n(♂ =x=6m+3sm+2st。IEC在体外培养时,形态虽然出现应激性改变,但是其染色体组形态和数目并没有出现明显的变异,在表观上可认为IEC基因组相对稳定。3.综合细胞膜破碎情况,以及细胞厨期直方图图形分布情况、CV值、细胞碎片含量（%Debris）、细胞总数（Cell No.）4种参数来共同评价IEC细胞周期的最佳检测条件,获得了一套最佳染色方案:0.1%TritionX-100+10μg/mLPI+50μg/mLRNase。从细胞周期直方图中可知,处于G1期的细胞占了总细胞数量的93%以上,客观的证实了体外培养的IEC具有漫长的物质准备期。此外,细胞厨期中DNA含量检测结果与证实了参环毛蚓为二倍体生物（diploid）,该结果与染色体核型分析结果一致。4.IEC对Cd2+的耐受特性主要表现为以下几方面:①未经孵育时IEC可耐受的最高浓度Cd2+为8 μ mol/mL;②胁迫处理24h后IEC可耐受的最高浓度Cd2+为6.25X 10-2μ mol/mL;③胁迫处理48h时,IEC可耐受的最高浓度Cd2+为3.125X l0-2μ mol/mL。上述三个浓度分别是《中华人民共和国药典》（2010年版）中地龙项下镉限量指标的2997.33、23.33和11.66倍。④IEC对Cd2+的耐受性在一定的时间范围内与剂量呈负相关。结论:本项研究从最基础性的观察IEC细胞形态学特征到超微水平上细胞内部组成结构的辨认,获得了一整套与IEC相关的形态学信息和一般生物学特征。与此同时,本文经筛选优化,建立了适合于IEC染色体核型分析和细胞周期的检测条件和方法,掌握了详细的关于IEC细胞生长及繁殖的活动规律。此外,本文还采集到IEC细胞对重金属Cd2+具有高耐受能力这一特殊习性的重要证据,并清晰地了解到IEC对重金属Cd2+的最大耐受浓度及对Cd2+应激反应和耐受的规律,为在细胞和分子水平上阐明其重金属富集机制提供有价值的实验依据。
卢明明[8]（2012）在《可口革囊星虫消化道及肾管的形态结构特征》文中提出可口革囊星虫（Phascolosoma esculenta）是星虫门经济动物之一，具有很高的食用及药用价值。近年来，在浙江、福建等地沿海养殖产业化开发取得了成功。为了探究该物种的消化及排泄器官结构特点，为其消化生物学及排泄机制的深入研究积累基础资料并指导养殖生产。本研究采用组织学显微及亚显微技术，对可口革囊星虫消化道及肾管的组织学与细胞形态学进行了观察。主要结果及结论如下：1.可口革囊星虫消化道的组织学观察消化道始于口，经咽、食道、肠、直肠，止于肛门，未见直肠盲囊和消化腺。肠以纺锤肌为轴盘绕成肠螺旋、悬挂于体腔中。口位于翻吻顶端口盘上，无齿舌结构，背侧有触手；咽与口分界不明显；食道前段嵌入或附着于吻牵缩肌。消化道各段从外向内由外膜、肌层、粘膜下层及粘膜层组成。咽粘膜上皮为假复层纤毛柱状上皮，含少量杯状细胞，皱襞内有纤毛沟。食道前段粘膜上皮为假复层纤毛柱状上皮，但后段为单层柱状上皮，食道粘膜较发达。肠从前往后绒毛数量递增、皱襞高度由高到低再变高；肠上皮为单层柱状上皮，含杯状细胞。在游离肠段，上皮表面纤毛和微绒毛发达，粘膜层有粘膜肌。在下行肠的上段，其前段上皮杯状细胞和粘液细胞发达；其后段上皮游离面具发达的纤毛和微绒毛。在下行肠的下段，肠腔变大，前段粘膜皱襞高数量多；后段粘膜皱襞明显低矮，上皮杯状细胞较少，上皮游离面微绒毛非常发达。上行肠下段，肠腔更大，粘膜层皱襞不明显，粘膜下层薄。上行肠上段，环肌层和外膜增厚，且绒毛皱襞变发达，上皮杯状细胞和粘液细胞增多。上行肠及下行肠均有纤毛沟结构。直肠前段粘膜层皱襞较多，上皮有杯状细胞和粘液细胞，游离面具纤毛；直肠后段粘膜上皮由矮柱状单层纤毛上皮组成，有少量杯状细胞。肠各段均有颗粒细胞分布，在游离段和上行肠上段尤多。分析认为：肠道长而高度盘绕的特点延长了食物的储存、消化和吸收时间。消化道内的杯状细胞、颗粒细胞等分泌粘液对食物颗粒及残渣起粘合和润滑作用，粘膜层纤毛的摆动以及纤毛沟结构的存在有利于食物通过。下行肠中下段主要消化，上行肠中下段主要吸收营养。可口革囊星虫消化道结构特征与其食性是相适应的。2.可口革囊星虫肾管的组织学与细胞形态学观察肾管结构上可分为纤毛漏斗、排泄囊和排泄管三部分，肾管表面有瓶形皱褶突起。瓶形皱褶在排泄囊表面较少，在排泄管表面较多。肾管壁从内到外由柱状上皮或立方上皮、肌层、结缔组织以及外膜构成。柱状上皮细胞排列成发束状，游离面着生微绒毛及纤毛，基底面质膜内陷形成基底迷路；立方上皮沿着瓶形皱褶腔排列，游离面着生微绒毛及纤毛；柱状上皮及立方上皮细胞的细胞质中细胞器发达，并含有不同大小、不同形态、不同电子致密度的颗粒。肌层为环肌及纵肌交错而成的肌肉网格，嵌在结缔组织层中；结缔组织由胶原纤维相互交织形成网状结构，内含颗粒细胞。外膜由足突细胞及多纤毛细胞构成。根据肾管的形态结构特征推测其过滤排泄是通过以下两途径实现：①通过瓶形皱褶区进行（即依次经过足突细胞间隙、纤维网状的结缔组织层以及立方上皮细胞之间的微绒毛通道，进入瓶形内褶腔）；②通过瓶形内褶之间的区域和基底迷路进行（即依次通过足突细胞间隙、纤维网状结缔组织层和柱状上皮细胞的基底迷路，进入柱状上皮细胞）。可口革囊星虫肾管除排泄功能外兼具收集和释放配子及生殖管道的作用。
侯雪芹[9]（2012）在《参环毛蚓体外细胞培养的研究》文中提出[目的]建立一种快速、有效分离广地龙（参环毛蚓）体细胞的方法。通过筛选和优化广地龙细胞培养的条件,获得稳定的参环毛蚓体细胞模型,为广地龙重金属富集机制的研究提供一致性高、稳定性好的无菌细胞群体,从而在细胞和分子水平上解释其重金属富集机制的研究。[方法]1.提取参环毛蚓8个解剖部位的细胞进行体外存活对比,根据组织特征采用酶消化法和组织块培养法进行研究；应用酶消化法研究了参环毛蚓的体壁、肠道、嗉囊、前列腺等组织细胞；组织块法用于参环毛蚓的储精囊和受精囊组织培养；根据培养前后细胞形态变化和增殖能力的差异,筛选出适合进行细胞培养的解剖部位。2.在前人研究的基础上,根据参环毛蚓肠上皮细胞的生物学特征,对原代培养体系进行了系统的筛选和优化,包括培养基种类、血清浓度、消化酶种类等方面的研究,建立了稳定的参环毛蚓培养体系。3.利用MTT法测定参环毛蚓肠细胞生长曲线,确立了参环毛蚓肠上皮细胞稳定生长的指数期范围；采用培养法和PCR扩增法对细胞质量进行检测。4.采用种属、组织来源及专属检测酶鉴定法对细胞系进行系统鉴定。种属鉴定通过对1、5、7代细胞提取基因组,采用PCR技术和DNA测序技术获得线粒体COI基因序列；并与已获得的广地龙的COI标准基因序列比较分析,确定细胞样品是否来源于广地龙,以及细胞基因组是否在传代中发生变异；组织来源鉴定对传代细胞同工酶带表型与鲜品广地龙8个组织部位酶谱进行对比,确定细胞来源是否为肠组织；利用肠上皮细胞专属酶染色法,鉴定其是否为肠上皮细胞培养物及检测培养物的纯化程度。[结果]本研究建立了稳定的参环毛蚓肠上皮细胞的离体培养体系,通过对组织细胞的培养部位、培养基种类、血清浓度、消化酶种类等筛选的研究：最适合培养部位为肠道和储精囊的组织细胞,最佳培养基为添加了20ng/ml生长因子、2μg/ml胰岛素的5%胎牛血清（FBS）+200U/ml青霉素钠+400μg/ml硫酸链霉素+300U/ml硫酸庆大霉素+5μg/ml两性霉素B的培养液混合基础培养基(Schneider’s Drosophila Medium（Schneider’s+F12DMEM）。在该体系中,肠道和储精囊的组织细胞生长分裂旺盛,易贴壁。目前,肠上皮细胞现已传至第八代,储精囊细胞现已传至第九代。利用种属、组织来源及专属检测酶鉴定法对建立的细胞系进行鉴定,确定为参环毛蚓肠上皮细胞系（暂定名为：IEC-6-P.A.）.[结论]本研究筛选出一种快速、有效的分离参环毛蚓肠上皮细胞的方法,建立了稳定的参环毛蚓肠上皮细胞离体培养体系,为今后地龙重金属富集及相关生理机制的深入研究奠定基础。研究成果不仅为其它品系地龙的研究提供新的范例,而且亦为其它腔肠动物的相关研究提供一定的方法学参考；同时,作为独特的动物细胞模型,可望进一步应用到其它学科的研究中,对于促进学科的交叉发展及相互渗透具积极意义。
高燕[10]（2013）在《才女虫生物学特征及其寄生行为的基础研究》文中指出才女虫属复合体（polydora-complex）是环节动物门（Annelida）、多毛纲（Polychaeta）、游走目（Erranta）、海稚虫科（Spionidae）中具变形第5刚节种类的统称。才女虫中的某些种类在含有碳酸钙的基质中钻凿管道，因此是贝类底播养殖业的重要病害之一。本论文以我国重要经济贝类虾夷扇贝和魁蚶寄生的才女虫为研究对象，系统研究了凿贝才女虫的形态结构特征、配子形成过程、幼虫发育过程和寄生行为，揭示了影响凿贝才女虫在虾夷扇贝上寄生数量的关键因素，同时研究了寄生在底播魁蚶上的后刺才女虫的胚胎和幼虫发育过程。详述如下：1．凿贝才女虫身体结构相对简单，主要由表皮、肌肉层、消化系统组成。体表有大量的腺细胞分泌粘液，用来腐蚀贝壳和润滑管道，疣足和肌肉发达，方便其挖掘贝壳。2．凿贝才女虫精子发生过程中顶体由两个前顶体颗粒融合而成；染色质收缩的过程没有微管参与；染色质在收缩过程中排列整齐；精子核后窝深陷；精子中片线粒体数量少。3．凿贝才女虫既可以进行有性繁殖又可以进行无性繁殖。在有性繁殖中卵在卵袋的保护下发育成3刚节浮游幼虫，然后进人水中经15-20d的浮游生活后转为底栖生活，并逐渐筑管隐居营管栖生活。在无性繁殖中身体细胞可以通过分化再生形成新的头部和尾部。4．凿贝才女虫有两种寄生方式，一种是筑造泥管寄生（TypeⅠ）；另一种是以苔藓虫为媒介寄生（TypeⅡ）。其中TypeⅠ在所有的底质类型中都有分布，TypeⅡ只在沙石底的底质中分布。凿贝才女虫只在活体上寄生。5．虾夷扇贝上寄生的才女虫的附着数量随着底质中泥（直径<63μm）含量的增加而增加。凿贝才女虫寄生对2.5龄虾夷扇贝的壳高、干贝指数和干内脏指数没有显着影响。6．凿贝才女虫在扇贝贝壳的棱柱层筑造的管道内壁光滑，在扫描电镜下放大观察可以看到呈规则的沟壑状，与凿贝才女虫第五刚节变形的刚毛结构吻合，推测可能是由刚毛摩擦形成的。第五刚节变形刚毛由致密的钙质结构组成，非常坚硬，没有细胞结构，顶端非常尖锐。凿贝才女虫体表有大量的黏液腺，除了分泌粘液润滑身体外还分泌酸性黏液腐蚀贝壳，使贝壳变得相对松软。从以上分析可以推测凿贝才女虫凿贝筑管的过程为先分泌酸性黏液溶解腐蚀身体周围的贝壳，然后通过机械摩擦，用第五刚节变形的刚毛把松动的贝壳碎屑摩擦下来，从而形成光滑弯曲的管道。凿贝才女虫通过触须和口前叶收集沉积物颗粒，分泌粘液把这些颗粒粘附在一起筑造泥管。7．后刺才女虫与凿贝才女虫繁殖方式类似，都是把受精卵产在卵袋中，胚胎发育为三刚节幼虫后开始浮游生活，经过一段时间后开始下潜寻找合适的附着基进行附着变态。后刺才女虫幼虫可以捕捉并吞食贝类的D形幼虫。所以在贝类育苗中，才女虫不仅和贝类争夺饵料，还捕食贝类幼虫，给育苗业造成极大地危害。本研究开辟了我国贝类养殖业病害研究的新领域，在才女虫基础生物学、生态学、行为学、流行病学等方面取得的研究成果，为我国贝类才女虫病防控提供了重要的理论基础和应用知识。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 国内外研究现状及发展动态 |
| 1.2.1 供水系统中蠕虫灭活技术 |
| 1.2.2 供水系统中紫外消毒技术 |
| 1.2.3 紫外协同氧化剂灭活研究 |
| 1.2.4 蠕虫对逆境胁迫的应激机理研究 |
| 1.3 课题的提出 |
| 1.3.1 课题来源 |
| 1.3.2 研究目标及意义 |
| 1.4 课题研究内容及研究方案 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 研究方案 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 第二章 试验材料与方法步骤 |
| 2.1 试验材料与装置仪器 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验装置及仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 紫外预处理试验 |
| 2.2.2 紫外协同氧化灭活试验 |
| 2.2.3 蠕虫样品测试分析预处理方法 |
| 2.3 分析测试方法 |
| 2.3.1 蠕虫的形态变化观测 |
| 2.3.2 蠕虫表皮组织结构观测分析 |
| 2.3.3 蠕虫抗氧化系统分析方法 |
| 第三章 紫外协同氧化剂灭活颤蚓效果研究 |
| 3.1 紫外协同氧化灭活过程中颤蚓的形态变化 |
| 3.1.1 单独紫外照射下颤蚓形态变化 |
| 3.1.2 紫外协同次氯酸钙灭活过程颤蚓形态变化 |
| 3.1.3 紫外协同二氧化氯灭活过程颤蚓形态变化 |
| 3.2 紫外照射剂量对紫外协同氧化灭活效果的影响 |
| 3.2.1 紫外照射对次氯酸钙灭活效果的影响 |
| 3.2.2 紫外照射对二氧化氯灭活效果的影响 |
| 3.3 氧化条件对紫外协同氧化灭活效果的影响及其灭活动力学 |
| 3.3.1 氧化操作条件对颤蚓存活率的影响 |
| 3.3.2 氧化剂类型对紫外协同氧化灭活效果的影响 |
| 3.3.3 紫外协同氧化灭活动力学 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 紫外协同氧化对颤蚓表皮组织的损伤效应研究 |
| 4.1 紫外协同氧化对颤蚓表皮层组织结构的破坏 |
| 4.1.1 扫描电镜观察 |
| 4.1.2 透射电镜观察 |
| 4.2 紫外协同氧化对颤蚓表皮基团的破坏 |
| 4.2.1 紫外照射对颤蚓表皮基团的破坏 |
| 4.2.2 紫外协同次氯酸钙对颤蚓表皮基团的破坏 |
| 4.2.3 紫外协同二氧化氯对颤蚓表皮基团的破坏 |
| 4.3 紫外协同氧化对颤蚓表皮渗透性的破坏 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 紫外协同氧化对颤蚓抗氧化系统的影响研究 |
| 5.1 紫外协同氧化剂对蛋白质的影响 |
| 5.2 紫外协同氧化剂对颤蚓的脂质过氧化作用 |
| 5.3 紫外协同氧化剂对抗氧化酶活性的影响 |
| 5.3.1 SOD |
| 5.3.2 CAT |
| 5.3.3 GSH-PX |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论与建议 |
| 6.1 主要研究成果及结论 |
| 6.2 存在的问题及建议 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A: 攻读学位期间发表论文目录 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 综述 |
| 1 甲壳动物蜕皮相关行为的研究 |
| 1.1 甲壳动物的蜕皮与生长发育 |
| 1.2 蜕皮行为的研究进展 |
| 2 蜕皮调控的研究进展 |
| 2.1 与蜕皮相关的激素和酶的研究 |
| 2.2 蜕皮相关分子机制的研究 |
| 3 苯酚污染及其毒性的研究 |
| 4 本论文的研究目的和意义 |
| 4.1 目的和意义 |
| 4.2 研究方案 |
| 第二章 苯酚对多刺裸腹溞表皮显微及亚显微结构的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 苯酚对多刺裸腹溞表皮显微结构的影响 |
| 2.2 苯酚对多刺裸腹溞表皮亚显微结构的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三章 苯酚对多刺裸腹溞蜕皮及蜕皮相关酶的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 苯酚对多刺裸腹溞蜕皮次数的影响 |
| 2.2 苯酚对多刺裸腹溞几丁质酶和β-NAGase的影响 |
| 2.3 苯酚对多刺裸腹溞蜕皮激素的影响 |
| 2.4 苯酚对多刺裸腹溞NO含量和NOS活性的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四章 苯酚对多刺裸腹溞蜕皮相关基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 内参基因的筛选 |
| 2.2 苯酚对多刺裸腹溞蜕皮相关基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 汞污染现状及来源 |
| 1.1.1 汞污染现状 |
| 1.1.2 土壤中汞污染来源 |
| 1.2 汞的毒性研究进展 |
| 1.2.1 汞对动物细胞DNA的损伤 |
| 1.2.2 汞的生殖毒性 |
| 1.2.3 汞的神经毒性 |
| 1.2.4 汞的免疫毒性 |
| 1.2.5 汞的毒性作用机理 |
| 1.3 蚯蚓与土壤重金属污染 |
| 1.3.1 蚯蚓生态毒理学研究概况 |
| 1.3.2 重金属对蚯蚓的急性毒性 |
| 1.3.3 蚯蚓对重金属的富集与释放 |
| 1.3.4 重金属对蚯蚓生理生化的影响 |
| 1.3.5 蚯蚓作为重金属污染的指示生物 |
| 1.3.6 土壤污染胁迫下蚯蚓的行为毒性 |
| 1.4 研究内容与目的意义 |
| 1.4.1 选题目的及意义 |
| 1.4.2 主要研究内容与方法 |
| 1.4.3 数据处理方法 |
| 1.4.4 技术路线 |
| 第2章 蚯蚓对汞的富集与释放 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 测试方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 标准曲线、精密度及回收率 |
| 2.2.2 赤子爱胜蚓对Hg的富集作用 |
| 2.2.3 赤子爱胜蚓对Hg的富集定位 |
| 2.2.4 赤子爱胜蚓对Hg的释放过程 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 蚯蚓对汞的耐受性及富集能力 |
| 2.3.2 蚯蚓对重金属的主要富集部位 |
| 2.3.3 清洁土壤中蚯蚓体内重金属的释放规律 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 汞胁迫对蚯蚓抗氧化酶活性的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 测试方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 标准曲线的绘制 |
| 3.2.2 蚯蚓体内几种抗氧化酶活性 |
| 3.2.3 蚯蚓体内丙二醛(MDA)含量 |
| 3.2.4 汞富集量与酶活性之间的关系 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 汞暴露对抗氧化酶活性及MDA含量的影响 |
| 3.3.2 抗氧化酶活性变化与MDA含量变化的关系 |
| 3.3.3 几种酶活性呈现显着性差异的浓度组统计 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 汞暴露影响下蚯蚓的生殖毒性 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 对精子形态的影响 |
| 4.2.2 对精细胞超微结构的影响 |
| 4.2.3 对精子DNA的损伤 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 汞暴露下蚯蚓精子的显微结构和超微结构 |
| 4.3.2 蚯蚓精子DNA损伤试验结果比较 |
| 4.3.3 本研究对单细胞凝胶电泳方法的改进 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 汞胁迫影响下蚯蚓的行为毒性 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 回避行为 |
| 5.2.2 对呼吸活动的影响 |
| 5.2.3 对蚯蚓掘穴的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 蚯蚓的代谢活动 |
| 5.3.2 行为毒性作为汞污染物生物标志物 |
| 5.3.3 土壤中汞的迁移和转化 |
| 5.3.4 汞污染对土壤生物的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 蚯蚓响应汞胁迫的差异蛋白质组学 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 试验材料 |
| 6.1.2 试验方法 |
| 6.1.3 检测方法 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 不同暴露浓度下蚯蚓蛋白质组双向电泳图谱 |
| 6.2.2 差异蛋白点的分布以及点显现的情况 |
| 6.2.3 不同暴露浓度下蚯蚓蛋白质组差异点的质谱分析鉴定结果 |
| 6.2.4 差异蛋白质的表达验证 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 参环毛蚓研究概况 |
| 一、参环毛蚓的生物学特征 |
| 二、药用历史考证 |
| 三、功效与应用 |
| 四、现代药理研究 |
| 五、品质评价与质量控制 |
| 六、发展前景及现存问题 |
| 第二节 农药毒死蜱概述 |
| 一、农药发展概况 |
| 二、毒死蜱的研究概况 |
| 第三节 土壤生态毒理学及蚯蚓生态毒理学试验 |
| 一、土壤生态毒理学 |
| 二、蚯蚓生态毒理学试验概述 |
| 第四节 文献研究小结 |
| 一、本项研究的立题依据 |
| 二、本项研究的目的和意义 |
| 三、本项研究的研究内容及技术路线 |
| 第二章 参环毛蚓对毒死蜱胁迫的生理响应 |
| 第一节 参环毛蚓的急性毒性损伤及半数致死浓度 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第二节 参环毛蚓对农药毒死蜱的趋避行为研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第三章 参环毛蚓对农药毒死蜱的胁迫响应机理研究 |
| 第一节 毒死蜱对参环毛蚓组织显微结构的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第二节 毒死蜱对参环毛蚓肠组织细胞成活率及细胞凋亡的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第三节 毒死蜱对参环毛蚓蛋白质含量及抗氧化酶系的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结与讨论 |
| 第四章 全文总结 |
| 一、实验总结 |
| 二、创新之处 |
| 三、研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 研究生在学期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 动物细胞培养方法的研究概况 |
| 1.1 脊椎动物细胞培养研究进展 |
| 1.2 无脊椎动物细胞培养研究进展 |
| 2 动物细胞应用研究的概况 |
| 2.1 在医药领域研究中的应用 |
| 2.2 在生物技术领域研究中的应用 |
| 2.3 在农牧业及水产养殖业中的应用 |
| 2.4 在生态环境保护中的应用 |
| 3 文献综述小结 |
| 3.1 本论文的研究目的及意义 |
| 3.2 本论文的研究思路与技术路线 |
| 第二章 参环毛蚓肌肉组织解离方法的筛选 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 样品的预处理 |
| 2.3 组织贴块法解离培养 |
| 2.4 酶消化法解离培养 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 组织贴块法对参环毛蚓肌细胞增殖的影响 |
| 3.2 酶消化法对参环毛蚓肌细胞活性的影响及其酶解条件的优化 |
| 4小结与讨论 |
| 第二章图版 |
| 第三章 参环毛蚓肌细胞培养条件的筛选及优化 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 样品的预处理 |
| 2.3 酶消化法解离细胞 |
| 2.4 不同细胞接种浓度的考察 |
| 2.5 不同血清浓度的考察 |
| 2.6 不同基础培养基的考察 |
| 2.7 添加不同浓度的EGF对细胞增殖的考察 |
| 2.8 添加MG对细胞生长的影响 |
| 2.9 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 不同的细胞接种浓度对细胞生长的影响 |
| 3.2 不同血清浓度对细胞增值的影响 |
| 3.3 不同基础培养基对细胞增值的影响 |
| 3.4 添加不同浓度的EGF对细胞增值的影响 |
| 3.5 添加MG作为基质对细胞生长的影响 |
| 4 小结与讨论 |
| 4.1 不同细胞接种浓度对细胞生长的影响 |
| 4.2 不同血清浓度对细胞生长的影响 |
| 4.3 基础培养基的选择对细胞生长的影响 |
| 4.4 EGF对细胞生长的影响 |
| 4.5 MG作为基质对细胞生长的影响 |
| 4.6 其他 |
| 第三章图版 |
| 第四章 参环毛蚓肌细胞的鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 参环毛蚓肌肉组织的固定 |
| 2.3 参环毛蚓肌细胞培养与固定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 参环毛蚓肌肉组织透射电镜观察 |
| 3.2 参环毛蚓肌细胞透射电镜观察 |
| 4 小结与讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 1 全文总结 |
| 1.1 参环毛蚓肌肉组织解离方法的筛选 |
| 1.2 参环毛蚓肌细胞培养条件的筛选及优化 |
| 1.3 参环毛蚓肌细胞的鉴定 |
| 2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1：实验图片摘录 |
| 附录2：缩略词说明 |
| 在校期间发表的学术论文及其他学术成果 |
| 致谢 |
| 统计学宙核证明 |
| 中英文缩略词表 |
| 附图 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1. 蚯蚓的形态学研究 |
| 2. 蚯蚓在进化史中的地位 |
| 3. 蚯蚓的分类学研究 |
| 3.1 蚯蚓的多样性 |
| 3.2 蚯蚓的分类学研究进展 |
| 3.3 蚯蚓的分类鉴定 |
| 4. 蚯蚓的应用 |
| 4.1 蚯蚓在医药方面的研究 |
| 4.2 蚯蚓在食品、化妆品及饲料方面的应用 |
| 4.3 蚯蚓在垃圾处理方面的应用 |
| 4.4 蚓粪应用 |
| 4.5 蚯蚓在环境保护方面的应用 |
| 4.6 蚯蚓养殖 |
| 4.7 仿生学研究 |
| 4.8 其他 |
| 第二章 绪论 |
| 1. 引言 |
| 2. 本研究的目的和意义 |
| 3. 研究范围和内容 |
| 第三章 实验材料与方法 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料的采集和鉴定 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 样品的处理 |
| 3.2 蚯蚓的麻醉 |
| 3.3 蚯蚓的解剖 |
| 3.4 体式镜观察及拍照 |
| 3.5 石蜡切片和H.E染色 |
| 3.6 涂片制作和染色 |
| 3.7 组织切片观察及拍照 |
| 3.8 扫描电子显微镜观察 |
| 第四章 生殖系统形态学研究 |
| 1.引言 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 受精囊与受精囊孔 |
| 2.2 储精囊、精巢囊、精漏斗和输精管 |
| 2.3 前列腺和前列腺管 |
| 2.4 雄性生殖孔和副性腺 |
| 2.5 雌性生殖孔 |
| 2.6 卵巢和输卵管 |
| 2.7 涂片观察 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第五章 消化系统的形态学研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 口、口前叶和口腔 |
| 2.2 咽,食道,嗉囊和砂囊 |
| 2.3 食道 |
| 2.4 嗉囊和砂囊 |
| 2.5 胃 |
| 2.6 肠道和盲道 |
| 2.7 盲肠 |
| 2.8 肛门 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 致谢 |
| 在学期间所发表的文章、参研项目、学术交流情况 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 地龙药材的研究概况 |
| 引言 |
| 1 地龙药材开发利用的概况 |
| 1.1 古代对地龙药材的开发利用 |
| 1.2 现代对地龙药材的开发利用 |
| 2 广地龙药材质量相关问题的研究概况 |
| 2.1 广地龙药材质量的存在问题 |
| 2.2 广地龙对重金属富集特性的研究现状 |
| 第二章 动物细胞生物学特征研究概况 |
| 引言 |
| 1 动物细胞的分类方法 |
| 1.1 根据进化程度分类 |
| 1.2 根据具体来源部位分类 |
| 1.3 根据细胞的性质进行细胞分类 |
| 2 动物细胞的结构 |
| 2.1 细胞膜 |
| 2.2 细胞质 |
| 2.3 细胞核 |
| 3 动物细胞的一般生物学特性 |
| 4 动物细胞的特殊生物学特性 |
| 5 动物细胞生物学特征国内外研究的现状 |
| 第三章 文献分析总结及本课题研究设想 |
| 1 文献研究总结 |
| 2 本课题的立题依据 |
| 3 本课题的研究目的 |
| 4 本课题的研究内容 |
| 5 本课题的研究方案、技术路线及预期结果 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第四章 参环毛蚓肠上皮细胞形态学特征的研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要制剂和仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 IEC的培养和传代 |
| 2.3 细胞形态观察 |
| 2. 4IEC透射电镜观察 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 光学显微镜下IEC的形态特征 |
| 3.2 透射电镜下IEC的形态特征 |
| 4 讨论 |
| 第五章 参环毛蚓肠上皮细胞染色体核型分析的研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要制剂和仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 IEC的培养和传代 |
| 2.3 IEC核型处理 |
| 2.4 IEC染色体镜检与图像捕捉 |
| 2.5 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 第六章 参环毛蚓肠上皮细胞细胞周期的研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要制剂和仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 IEC的培养和传代 |
| 2.3 检测IEC细胞周期 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 破膜剂条件考察 |
| 3.2 染色液组成成分考察 |
| 4 讨论 |
| 第七章 参环毛蚓肠上皮细胞重金属镉离子耐受性的研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 主要制剂和仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 IEC的培养和传代 |
| 2.3 重金属胁迫处理 |
| 2.4 细胞形态观察与比较 |
| 2.5 细胞存活率测定 |
| 2.6 细胞活力测定 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 不同胁迫条件处理下细胞形态的比较 |
| 3.2 不同胁迫处理IEC存活率的比较 |
| 3.3 不同胁迫处理IEC活力的比较 |
| 4 讨论 |
| 第八章 全文总结 |
| 1 实验总结 |
| 1.1 在IEC形态学特征方面 |
| 1.2 在IEC染色体核型方面 |
| 1.3 在IEC细胞周期方面 |
| 1.4 在IEC重金属镉离子耐受能力方面 |
| 2 创新之处 |
| 3 展望 |
| 附录Ⅰ |
| 附录Ⅱ |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 星虫类动物组织学研究概况 |
| 1.1 星虫类动物组织学研究方法 |
| 1.1.1 解剖学方法 |
| 1.1.2 组织学研究方法 |
| 1.2 星虫类动物主要组织器官的组织学研究进展 |
| 1.2.1 体壁及吻牵缩肌的研究 |
| 1.2.2 消化系统的研究概况 |
| 1.2.3 肾管的研究概况 |
| 1.2.4 星虫类动物体液细胞的组织学研究进展 |
| 1.3 研究中存在的问题及展望 |
| 2 可口革囊星虫消化道的形态结构特征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 口（mouth）和咽（pharynx） |
| 2.3.2 食道（oesophagus） |
| 2.3.3 肠(intestine) |
| 2.3.4 直肠(rectum) |
| 2.3.5 肛门(anus) |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 消化道组成 |
| 2.4.2 消化道组织学结构特征 |
| 3 可口革囊星虫肾管的形态结构特征 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 肾管的外形特征 |
| 3.3.2 肾管的显微及亚显微结构特征 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 肾管结构与排泄功能的相关性 |
| 3.4.2 肾管结构与生殖功能的关系 |
| 3.4.3 肾管结构与净化免疫功能的关系 |
| 4 总结 |
| 4.1 主要结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 进一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 图版说明 |
| 图版 |
| 在学研究成果 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 目录 |
| 引言 |
| 1.研究内容 |
| 2.预期的研究成果 |
| 3.技术路线 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 广地龙的研究概况 |
| 1 广地龙药用资源的开发利用价值 |
| 1.1 古代对地龙资源开发利用的概况 |
| 1.2 近代对地龙资源开发利用的概况 |
| 2 广地龙药材质量研究概况及存在的问题 |
| 第二章 动物细胞培养研究概况 |
| 1 脊椎动物细胞培养研究概况 |
| 2 无脊椎动物细胞培养研究概况 |
| 2.1 无脊椎动物细胞培养基 |
| 2.2 无脊椎动物细胞培养温度 |
| 2.3 无脊椎动物细胞培养气相 |
| 2.4 无脊椎动物细胞传代培养 |
| 3 蚯蚓类细胞培养的研究慨况 |
| 4 肠上皮细胞培养研究概况 |
| 4.1 上皮细胞的基本特征 |
| 4.2 上皮细胞的分离培养 |
| 4.3 上皮细胞的形态观察 |
| 4.4 上皮细胞超微结构观察 |
| 4.5 上皮细胞的特征性鉴定 |
| 4.6 上皮细胞系的建立 |
| 4.7 展望 |
| 文献综述部分小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第三章 参环毛蚓不同解剖部位细胞体外存活的筛选实验 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要制剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 不同部位组织分离与处理 |
| 2.3 不同部位细胞形态观察 |
| 2.4 不同部位细胞原代培养 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 参环毛蚓不同解剖部位细胞形态特征的比较 |
| 3.2 参环毛蚓不同解剖部位细胞原代培养前后的形态比较 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三章 图版Ⅰ不同部位结构形态示图 |
| 第三章 图版Ⅱ不同部位细胞形态示图 |
| 第四章 参环毛蚓IEC培养条件筛选和优化的研究 |
| 第一节 参环毛蚓IEC酶解条件的考察 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要制剂与仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 三种消化酶酶解处理 |
| 2.3 活性测定的方法 |
| 2.4 数据处理的方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 离体后即时细胞活力的测定 |
| 3.2 培养后细胞活力的测定 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二节 参环毛蚓IEC血清浓度的考察 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 主要制剂与仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 血清浓度考察方法 |
| 2.3 数据处理的方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三节 参环毛蚓IEC培养基的考察 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要制剂与仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品的预处理 |
| 2.2 培养基添加剂的考察 |
| 2.3 培养基种类的考察 |
| 2.4 数据处理的方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第四章 图版 |
| 第五章 参环毛蚓IEC的纯化研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要制剂与仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 参环毛蚓IEC原代纯化方法 |
| 2.2 参环毛蚓IEC传代纯化方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第五章 图版 |
| 第六章 参环毛蚓IEC生物学特征 |
| 第一节 参环毛蚓IEC的增殖与分化 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 主要制剂与仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第六章 版图Ⅰ |
| 第二节 参环毛蚓IEC的污染与控制 |
| 1 实验材料与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细菌污染及判断 |
| 2.2 真菌污染及判断 |
| 2.3 支原体污染及判断 |
| 3 实验结果 |
| 第六章 版图Ⅱ |
| 第三节 参环毛蚓IEC的冷冻与复苏 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂与仪器 |
| 1.3 试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 冻存过程 |
| 2.2 复苏过程 |
| 2.3 数据处理的方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第六章 版图Ⅲ |
| 第七章 参环毛蚓IEC身份验证 |
| 第一节 细胞系种属鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品制备 |
| 2.2 PCR反应体系 |
| 2.3 PCR产物分析 |
| 2.4 测序 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CO1基因扩增分析 |
| 3.2 BLAST对比分析 |
| 3.3 蛋白质核对分析 |
| 3.4 物种聚类分析 |
| 第二节 细胞系组织来源鉴定 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 试剂的配制 |
| 1.6 连续电泳凝胶的配制 |
| 1.7 不连续电泳凝胶的配制 |
| 1.8 同工酶染色剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样本制备 |
| 2.2 凝胶的制备 |
| 2.3 电泳实验步骤 |
| 2.4 电泳结果与记录 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 总蛋白酶解析 |
| 3.2 同工酶谱解析 |
| 4 小结与讨论 |
| 第七章 版图Ⅰ |
| 第三节 细胞系专属性鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 形态学检查法 |
| 2.2 电镜观察法 |
| 2.3 AKP染色法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 形态学检查 |
| 3.2 扫描电镜超微结构观察 |
| 3.3 碱性磷酸酶显示鉴定 |
| 第七章 版图Ⅱ |
| 全文总结 |
| 1.实验总结 |
| 2.创新之处 |
| 3.研究展望 |
| 附录 |
| 在学校期间发表的学术论文及其它学术成果 |
| 附件 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 前言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 贝类才女虫病研究进展 |
| 1.1 才女虫分类特征及其分布范围 |
| 1.2 才女虫对贝类养殖业的危害 |
| 1.3 才女虫生活史及其生物学特性 |
| 1.4 才女虫病防治措施研究进展 |
| 1.5 计划研究的目的、意义、思路、预期成果和创新性 |
| 1.5.1 研究的目的与意义 |
| 1.5.2 研究的思路 |
| 1.5.3 预期成果 |
| 1.5.4 创新性 |
| 第二章 凿贝才女虫基础生物学研究 |
| 2.1 凿贝才女虫形态与结构观察 |
| 2.1.1 前言 |
| 2.1.2 材料与方法 |
| 2.1.3 结果 |
| 2.1.4 讨论 |
| 2.2 凿贝才女虫精子发生过程研究 |
| 2.2.1 前言 |
| 2.2.2 材料与方法 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 2.3 凿贝才女虫发育生物学研究 |
| 2.3.1 凿贝才女虫幼虫发育过程形态变化 |
| 2.3.2 盐度对凿贝才女幼虫存活的影响 |
| 2.3.3 凿贝才女虫繁殖时间调查 |
| 2.4 凿贝才女虫再生过程研究 |
| 2.4.1 前言 |
| 2.4.2 材料与方法 |
| 2.4.3 结果 |
| 2.4.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 凿贝才女虫生态学特性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 研究区域 |
| 3.2.2 才女虫在虾夷扇贝上寄生的方式 |
| 3.2.3 不同底质类型、不同扇贝年龄对凿贝才女虫侵染虾夷扇贝的影响 |
| 3.2.4 凿贝才女虫在虾夷扇贝贝壳不同位置分布情况 |
| 3.2.5 凿贝才女虫侵染现场试验 |
| 3.2.6 凿贝才女虫寄生对虾夷扇贝的影响 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 凿贝才女虫在虾夷扇贝上寄生的方式 |
| 3.3.2 凿贝才女虫寄生数量与扇贝年龄和底质类型的关系 |
| 3.3.3 凿贝才女虫在 2.5 龄贝贝壳上分布情况 |
| 3.3.4 凿贝才女虫侵染现场试验 |
| 3.3.5 凿贝才女虫寄生对虾夷扇贝的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 凿贝才女虫寄生方式与底质类型的关系 |
| 3.4.2 凿贝才女虫寄生数量与底质类型的关系 |
| 3.4.4 凿贝才女虫寄生对虾夷扇贝的影响 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 凿贝才女虫的凿贝和筑管行为 |
| 4.1 凿贝才女虫的凿贝行为 |
| 4.1.1 前言 |
| 4.1.2 材料和方法 |
| 4.1.3 结果与讨论 |
| 4.2 凿贝才女虫的筑管行为 |
| 4.2.1 前言 |
| 4.2.2 材料与方法 |
| 4.2.3 结果与讨论 |
| 4.3 小结 |
| 第五章 魁蚶底播养殖中才女虫病 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 才女虫成虫收集 |
| 5.2.2 才女虫幼虫收集与培养 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 被才女虫寄生的魁蚶 |
| 5.3.2 才女虫胚胎发育过程 |
| 5.3.3 才女虫幼虫发育过程 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 研究总结 |
| 6.2 存在的问题 |
| 6.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间文章撰写与发表情况 |
| 致谢 |
