卞媛媛[1]（2021）在《脂肪间充质干细胞联合窄谱中波紫外线对小鼠白癜风模型及内质网应激信号通路的作用研究》文中进行了进一步梳理目的:白癜风是临床上常见的色素脱失性疾病,主要累及功能性表皮色素细胞和毛囊黑色素细胞,以皮肤乳白色的斑点或斑片为主要临床表现特征,常常累及头、面、颈、躯干、四肢等多个部位。白癜风的病理发生机制尚不清楚,有多个相关假说,其中最为常见的包括自身免疫性调节学说、氧化应激学说、遗传变异学说以及细胞毒性作用学说。有研究表明内质网应激可导致黑色素细胞钙超载,异常或持久的氧化应激反应会导致大量的活性氧簇（ROS）及氧化产物蓄积,刺激内质网内环境发生紊乱,氧化-抗氧化失衡,并导致黑色素细胞的损伤。窄谱中波紫外线（NB-UVB）照射是目前治疗白癜风的首选。NB-UVB照射治疗可以抑制白癜风患者机体氧化应激反应,促进黑色素细胞功能恢复。但是针对强烈紫外线辐射下数十年可能会致癌的作用学术界已经达成共识。近年来研究通过共培养发现,黑色素细胞的增殖、分化及迁移都可以被脂肪来源干细胞诱导,优于黑色素细胞单独培养。Nrf2/HO-1信号通路是细胞对抗外源性物质及氧化损伤的重要作用途径,过量的ROS蓄积诱发氧化应激反应,Nrf2的活性被激活,与胞浆伴侣蛋白Keapl解偶联,通过多种蛋白激酶的磷酸化作用被转移至细胞核内,结合核内抗氧化元件ARE,启动下游HO-1、Trx-1等抗氧化分子表达使其发挥抗氧化作用。本研究旨在观察NB-UVB、脂肪间充质干细胞以及二者联合应用在小鼠白癜风模型中的疗效,检测氧化应激及内质网氧化应激相关指标的变化,探讨Nrf2/HO-1信号通路在黑色素细胞损伤及修复中的作用机制,为临床白癜风临床防治提供实验依据。研究方法:1、脂肪间充质干细胞联合NB-UVB对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠的疗效观察C57BL/6小鼠50只,随机分为5个组:空白对照组（control组）,白癜风模型组（VIT组）,中波窄谱紫外照射组+白癜风模型组（VIT+NB-UVB组）;干细胞移植+白癜风模型组（VIT+AMSCs组）,干细胞移植+中波窄谱紫外照射+白癜风模型组（VIT+AMSCs+NB-UVB组）,每组10只;C57BL/6小鼠用电动剃毛器将背部局部剃毛,大小约2cm×2cm2,空白对照组在备毛区涂甘油膏,每次25mg,每日2次;白癜风模型组、中波窄谱紫外照射组+白癜风模型组、干细胞移植+白癜风模型组及干细胞移植+中波窄谱紫外照射+白癜风模型组于备毛区外涂40%莫诺苯宗,每次25mg,每日2次,在涂抹40%莫诺苯宗前,局部先予以无菌水清洁擦拭,每日给药时间固定为9点、17点,连续用药50天（第0天17点,第1天9点、17点,第2天9点、17点,第50天9点）,造模期间每3天小鼠涂药区剃毛一次,至皮肤色素脱失完成造模;以每平方厘米浓度5×106/ml浓度脂肪来源干细胞注射至皮下,勿贯穿皮肤。紫外线照射:波峰311nm,0.5J/cm2为起始剂量;每次剂量增加0.05～0.1J/cm2,3次/周,于造模30天后干预至50天。肉眼观察各组小鼠白癜风的治疗反应;HE染色观察小鼠皮肤病理组织学改变。2、脂肪间充质干细胞联合NB-UVB对白癜风小鼠模型内质网应激的影响实验动物分组同方法1,ELISA检测各组小鼠血清中氧化应激因子含量;免疫荧光检测组织中ROS释放水平;Western blot和PCR检测小鼠组织中内质网应激相关蛋白GRP78、caspase-12、SERCA2a表达;免疫荧光观察钙离子超载分布。3、脂肪间充质干细胞联合NB-UVB激活Nrf2/HO-1信号通路改善白癜风内质网应激损伤选用人表皮黑色素细胞,在细胞中添加500μmmol/L的H2O2作用24h模拟类白癜风的黑色素细胞损伤,将细胞分为i)对照组（control）、ii)模型组（VIT）、iii)模型+脂肪间充质干细胞移植+紫外照射组（VIT+AMSCs+NB-UVB组）、iv)模型+脂肪间充质干细胞移植+紫外照射组+Nrf2抑制剂ML385组（VIT+AMSCs+NB-UVB+ML385）组。采用Western blot法来检测各组小鼠表皮中Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白的表达;采用H2O2诱导黑素细胞建立氧化应激损伤细胞模型,ELISA法检测各组细胞上清液中SOD、MDA、MPO、TYR、MIF、MAO含量;采用Western blot法检测各组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、caspase-12、SERCA2a表达;免疫荧光观察钙离子情况。流式细胞仪检测小鼠外周血淋巴细胞CD4、CD8T亚群的构成。结果:1、脂肪干细胞培养及疗效观察:分离培养的AMSCs细胞7天后,有大量细胞贴壁生长,形成大小不一的细胞集落,细胞呈长梭形,经免疫荧光鉴定结果显示干细胞表面标记物CD90和CD45均呈阳性,成脂诱导,油红O染色鉴定细胞内有大量脂肪滴形成。对各组小鼠病灶区进行效果评价,空白对照组小鼠病灶区未见明显变化,评价有效率为0;VIT组小鼠病灶区呈苍白及白斑样,总有效率为10%;与VIT组相比,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组小鼠部分得到改善,总有效率分别达50%、40%;联合治疗组总有效率为70%。2、HE染色结果:VIT组脱色处及周围皮肤组织淋巴细胞浸润最明显,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组浸润均减少,而VIT+AMSCs+NB-UVB组仅有少量淋巴细胞浸润。流式细胞检测结果分析也符合上述表现,以CD3T作为参照,VIT组CD4T比例较其他四组最低（26.776±4.783）,CD8T比例最高（18.106±4.562,P<0.05）;VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组,两组间CD4T、CD8T比例变化没有统计学差异;VIT+AMSCs+NB-UVB组较其他四组CD4T比例最高（34.183±0.635）,CD8T比例最低（14.383±1.557,P<0.05）。3、ELISA检测血浆中酪氨酸酶（TYR）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、单胺氧化酶（MAO）含量检测:与空白对照组相比,VIT组小鼠血浆中MAO（25.94±3.41）、MIF（28.41±4.47）表达均升高,TYP表达降低（157.18±19.64,P<0.05）;与VIT组相比,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组则相反,血浆中MAO、MIF表达显着降低,TYP表达显着升高（P<0.05）,但两组间没有统计学差异;VIT+AMSCs+NB-UVB组与其他三组比较（除对照组）血浆中MAO（12.49±2.51）、MIF（16.79±2.28）表达明显减低,TYP表达显着升高（302.84±44.01,P<0.05）。4、ELISA法检测小鼠血清超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）表达情况:空白对照组相比,VIT组大鼠MDA（14.91±0.86）、MPO（1120.65±131.11）表达明显增高,SOD表达明显减少（23.25±2.27,P<0.05）;与VIT组相比,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组,MDA、MPO表达明显降低,SOD表达明显升高（P<0.05）;两组间比较没有统计学差异;VIT+AMSCs+NB-UVB组与其他三组比较（除对照组）MDA（8.72±0.42）、MPO（669.52±76.95）表达最低,SOD表达最高（57.74±2.75,P<0.05）。5、免疫荧光检测皮肤组织ROS检测:VIT组大鼠ROS荧光强度较对照组增强;与VIT组相比,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组,ROS荧光强度有所减弱;但VIT+AMSCs+NB-UVB组ROS荧光强度最低,提示ROS释放受到明显抑制。6、通过Western blot和PCR检测内质网应激相关蛋白GRP78、caspase-12、SERCA2a表达及m RNA表达:VIT组与对照组相比,SERCA2a的表达降低,GRP78、caspase-12表达升高（P<0.05）;VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组与VIT组比较,则相反SERCA2a的表达升高,GRP78、caspase-12蛋白表达降低;而VIT+AMSCs+NB-UVB组与其两组比较,SERCA2a的表达升高,GRP78、caspase-12蛋白表达降低,组间比较具有统计学差异（P<0.05）。7、Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路的表达:结果发现四组中,对照组Nrf2、HO-1、Trx-1表达最低（P<0.05）,VIT+NB-UVB组及VIT+AMSCs组表达明显优于VIT组（P<0.05）,但两组间无统计学差别;VIT+AMSCs+NB-UVB组较其他三组表达最高,组间比较具有统计学差异（P<0.05）。8、增加Nrf2/HO-1拮抗剂（ML385）ELISA检测黑素细胞上清液中TYR、MIF、MAO、SOD、MDA、MPO含量,结果与对照组相比,VIT组细胞上清液中MAO、MIF、MDA、MPO含量均明显升高,TYP、SOD表达明显降低（P<0.05）;与VIT组相比,VIT+AMSCs+NB-UVB组细胞上清液中MAO（12.29±2.85）、MIF（14.76±5.58）MDA（8.59±0.44）、MPO（526.91±61.28）含量显着降低,TYP（250.67±35.99）、SOD（40.76±3.42）含量显着升高,组间比较具有统计学差异（P<0.05）;与VIT+AMSCs+NB-UVB组相比,VIT+AMSCs+NB-UVB+ML385组中MAO（18.55±6.13）、MIF（25.95±2.94）、MDA（13.21±1.22）、MPO（876.75±79.00）含量升高,TYP（132.46±37.40）、SOD（20.39±2.34）含量降低,组间比较具有统计学差异（P<0.05）,提示具有拮抗作用。9、增加Nrf2/HO-1拮抗剂（ML385）Western blot法检测各组细胞中内质网应激相关GRP78、caspase-12、SERCA2a蛋白表达:结果发现与VIT组相比,VIT+AMSCs+NB-UVB组细胞中SERCA2a表达升高,GRP78、caspase-12表达降低（P<0.05）;但是VIT+AMSCs+NB-UVB+ML385组中SERCA2a表达较VIT+AMSCs+NB-UVB明显降低,GRP78、caspase-12表达升高（P<0.05）,提示发生拮抗作用。10、免疫荧光检测细胞中钙离子,结果VIT组细胞中钙离子荧光强度增加,钙离子超载严重;与VIT组相比,VIT+AMSCs+NB-UVB组钙离子荧光强度降低明显,钙离子超载受到抑制;与VIT+AMSCs+NB-UVB组相比,VIT+AMSCs+NB-UVB+ML385组中钙离子荧光强度有所增强。结论:1、AMSCs联合NB-UVB对白癜风小鼠的作用优于单独使用效果,对白癜风治疗有一定疗效。2、AMSCs联合NB-UVB可以抑制白癜风小鼠内质网应激损伤。3、AMSCs联合NB-UVB通过激活Nrf2/HO1通路调控内质网应激改善白癜风损伤
雷文艺[2]（2021）在《CO2点阵激光联合rb-bFGF治疗萎缩性痤疮瘢痕的临床疗效观察》文中研究说明目的:评估CO2点阵激光联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rb-bFGF）凝胶治疗萎缩性痤疮瘢痕的临床疗效及不良反应。方法:入选29名面部患有不同程度的萎缩性痤疮瘢痕的患者。采取同一患者治疗前后自身对照研究。洁面、局麻后采用KL型CO2点阵激光治疗仪（吉林省科英激光技术有限责任公司）对患者面部萎缩性痤疮瘢痕进行治疗,治疗过程中观察并记录不良反应。治疗后立刻于治疗区域均匀、足量涂抹rb-bFGF凝胶,1个月治疗1次,共治疗3次。每次治疗结束后,嘱患者自行涂抹rb-bFGF凝胶1周,每天3次。使用VISIA皮肤检测仪（Canfield公司,美国）采集患者正面图像资料,检测纹理、毛孔、棕斑、红斑等指标,客观评估治疗效果。由2名未参与治疗的固定皮肤科医师在治疗前、第一次治疗后1个月、第二次治疗后1个月、疗程结束后1个月及疗程结束后3个月根据ECCA权重评分表及IGA量表评估患者ECCA值和IGA临床改善情况。患者术中疼痛、满意度通过患者问卷调查进行评分。结果:29例患者中27例患者完成治疗和随访,女性13名（48.1%）,男性14名（51.9%）。患者年龄20-35岁,平均25.8±4.6岁,痤疮瘢痕持续时间1.5-12年,平均6.7±5.6年。17名（63.0%）患者为Fitzpatrick Ⅲ型皮肤,10名（37.0%）为Fitzpatrick Ⅳ型皮肤。完成治疗和随访的27名痤疮瘢痕患者治疗前痤疮瘢痕严重程度ECCA平均值为62.4±18.3,疗程结束后3个月ECCA平均值下降到33.5±16.5,且差异学具有统计学意义（P<0.05）。痤疮瘢痕IGA疗效评价显示疗程结束后1个月有效率为44.4%,疗程结束3个月有效率为63.0%,有效率随着治疗次数的增加呈上升趋势。VISIA皮肤定量检测疗程结束后纹理、毛孔指标均较治疗前明显改善,且差异具有统计学意义（P<0.05）。27名患者中,16名患者（59.3%）有轻度疼痛,11名患者（40.7%）有中度疼痛,VAS平均分为3.65±0.58分。疗程结束后3个月,患者满意度为85.2%。CO2点阵激光治疗后,所有患者均出现不同程度的红斑、肿胀、灼热、结痂,灼热感在术后24小时内消退,红斑、肿胀在3-5天后逐渐消退,痂皮在5-7天内脱落,误工期5-7天。2名患者出现一过性炎症后色素沉着。在疗程结束后3个月的随访中,未出现感染,未观察到明显的增生性瘢痕、色素沉着或色素减退。结论:CO2点阵激光联合rb-bFGF治疗萎缩性痤疮瘢痕临床疗效确切。治疗后未发生严重不良反应,虽误工期相对较长,但患者满意度高,是一种安全有效的治疗萎缩性痤疮瘢痕的方法。
肖蕾[3]（2020）在《三角褐指藻和知母提取物对毛囊更新和毛发生长活性及其机制研究》文中研究说明脱发症是皮肤科常见疾病之一,虽不属于威胁人类生命的严重疾病,但却给患者带来巨大的精神痛苦。目前治疗脱发症多采用西药,虽然有一定的治疗效果,但副作用较大,停药后继续脱发。知母和三角褐指藻具有抗氧化和抗炎等多种生物活性,其对头皮护理具有一定的功效,但还缺乏知母和三角褐指藻对促进毛发生长和护理作用的机制研究,因而无法对相应产品开发提供有效的科学依据和理论指导。因此,本课题选取知母（Anemarrhena asphodeloides）和三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum）为研究对象,通过单细胞毛发生长评估体系、毛囊体外组织培养模型和动物实验模型,评价知母提取物和三角褐指藻提取物对毛囊单位相关细胞活力及群体生长活力的影响;研究影响毛囊周期及分化、细胞更新、毛发结构强度、黑色素转运等相关蛋白因子,以揭示三角褐指藻和知母促进毛发生长的分子机制;通过人体临床测试评估添加三角褐指藻和知母提取物的头皮护理制剂对人体毛囊、头发、头皮生理状况的综合影响。主要研究内容与结果如下:（1）三角褐指藻和知母中活性成分的提取及主要成分的分析在氮气保护下对三角褐指藻进行乙醇提取,三角褐指藻提取物（PTE）得率为0.985%,成分以十八碳不饱和脂肪酸为主。采用水/水-乙醇溶液对知母进行提取,知母提取物（AAE）中总多糖得率为22.642%;总皂苷得率为10.564%,其中知母皂苷BII和芒果苷含量分别为28.60%和2.75%;总黄酮得率6.378%,其中芒果苷和异芒果苷含量分别为21.60%和3.46%。（2）三角褐指藻及知母提取物对毛囊单位相关细胞生长的影响研究建立了稳定的人毛囊单位相关细胞（人毛乳头细胞（DPCs）、人生发基质细胞（HFGMCs）、人毛囊外根鞘细胞（HFORSCs）、人毛囊内根鞘细胞（HFIRSCs）和人表皮黑素细胞（HEM））的细胞生长体系,对PTE和AAE对人毛囊单位相关细胞生长的影响进行评估。PTE和AAE均在合适浓度下对群体生长的毛囊单位相关细胞具有不同程度的生长促进作用。但在高浓度情况下,部分提取物对毛囊单位相关细胞的生长活力具有抑制作用。PTE对HFGMCs和HFORSCs的细胞集落形成具有一定的促进作用;知母皂苷BII对HFGMCs的细胞集落形成具有一定的促进作用,但对HFORSCs的细胞集落形成具有抑制作用。体外培养毛囊组织的实验结果显示,100μg/ml的知母总皂苷、知母皂苷BII和芒果苷均引起体外培养的毛囊毛球区域细胞密度降低,并出现萎缩。在细胞培养实验中,这三种物质在100μg/ml的浓度下对DPCs的生长没有影响,对HFORSCs有一定的生长促进作用;在细胞集落形成实验中,6μg/ml的知母皂苷BII和21μg/ml的知母总皂苷显着降低了HFGMCs的生长。在C57BL/6小鼠毛发生长实验结果表明,知母皂苷BII的生发作用与浓度相关,知母皂苷BII在0.5%浓度下对小鼠具有较好的毛囊生长期激活与毛发生长刺激作用,与阳性对照0.2%米诺地尔相当,但知母皂苷BII 2.5%组则无显着刺激毛发生长作用。免疫组化结果提示毛囊生长期转化与激活Wnt10b和β-catenin通路相关。毛囊细胞培养实验、体外毛囊培养实验与动物实验结果不完全一致,推测可能是体外毛囊培养时药物浓度过高,也可能是因为毛球区域的生发基质细胞受到知母提取物的影响较大。（3）PTE及AAE对影响毛囊细胞信号传导和头发强度主要相关蛋白因子的影响PTE可以不同程度促进毛囊外根鞘细胞中几种角蛋白的表达量增加,尤其以0.25μg/ml的PTE效果最为明显,PTE在0.125-0.5μg/ml浓度下可以显着提高人表皮黑色素细胞活力,0.5μg/ml浓度下对黑色素细胞ERK的上调幅度达到56%,与黑素细胞的活力提高相一致。知母皂苷BII和知母多糖对DPCs中的IGF-1和Cyclin D1信号具有抑制作用,可能导致毛囊生长周期进程的减缓。AAE对HFGMCs的作用通过Wnt-10b/β-Catenin和phospho-GSK-3β信号实现调节;对HFORSCs的作用通过β-Catenin、Akt和Wnt-10b得以发生;对HFIRSCs的作用通过β-Catenin、Akt和phospho-GSK-3β信号实现调节,但是其影响存在不确定性。（4）含PTE及AAE的制剂对人体毛发生长的影响30名受试者使用含PTE和AAE的头皮护理制剂,与使用产品前相比较,使用产品后第7天以后,头发脱落数量、头皮油脂水平、头皮泛红状态均有下降趋势,头皮不适感觉及头屑水平显着下降,头皮水分含量及头发发质显着提升,这些趋势持续整个实验过程,有的指标、有的时间点没有统计学显着性差异,可能源于测试时间较短或测试人员较少、以及受试者个体差异较为分散所致。毛囊氢化可的松水平呈现先升高后降低的趋势,提示该制剂可能通过氢化可的松水平的提升促毛囊和头发生长,而之后水平下降可能提示对减少头屑代谢有所帮助。综上,合适浓度的PTE与AAE可以通过调节毛囊细胞的信号通路,达到刺激毛囊生长和防脱发的功效。研究结论有助于进一步理解天然产物在毛发护理中的作用机制,为PTE和AAE在防脱发产品中的应用提供了理论基础。
杨春艳[4]（2020）在《UVB诱导的炎症因子对黑素合成的影响及机制研究》文中指出[目 的]明确UVB照射皮肤后早期升高的关键炎症因子,探讨其通过直接和间接作用影响黑素合成的机制。[方 法]1.UVB照射C57BL/6后皮肤炎症因子的改变。随机将24只小鼠分为2组,每组12只,分为对照组、UVB照光组。对照组:将小鼠背部毛发剃除,不进行其他处理;UVB照光组:将小鼠背部毛发剃除后,予UVB 120mJ/cm2的剂量照射。分别在UVB照射后10min、20min、30min、1h每个组处死3只小鼠,行RT-qPCR检测皮肤中炎症因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-αmRNA表达水平。随后,在HaCat细胞中检测上述实验中早期升高的炎症因子IL-1β和IL-6,将细胞分为对照组和实验组,对照组不进行任何处理,实验组予UVB 20mJ/cm2 的剂量照射,照射 30min、1h、2h、24h 后行 RT-qPCR 检测IL-1β和IL-6的mRNA表达水平,结果进行统计学分析。2.体外培养小鼠黑素瘤B16细胞中IL-1β直接影响黑素合成的机制。CCK-8法检测浓度为 0pg/ul、2pg/ul、3pg/ul、4pg/ul、5pg/ul 的 IL-1β 对 B16 细胞增殖活性的影响,并筛选出细胞增殖活性最强的IL-1β浓度。使用该浓度的IL-1β作用于B16细胞,NaOH裂解法及L-DOPA氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,RT-qPCR 法及 Western Blot 检测TYR、TRP-1、TRP-2和MITF的mRNA 及蛋白水平,结果进行统计学分析。3.体外培养HaCat细胞中IL-1β间接影响黑素合成的机制。通过siIL-1β转染HaCat细胞敲减IL-1β的表达,筛选出转染效率>70%的序列作为实验组,未转染的HaCat细胞为对照组,分别给予20mJ/cm2 UVB照射,24h后RT-qPCR法检测两组细胞中促黑素生成介质COX-2、SCF mRNA表达水平,ELISA检测组胺水平。随后在HaCat细胞培养基中添加人IL-1β（4pg/ul）为实验组,对照组加入正常培养基,24h后,分别检测对照组及实验组COX-2、SCF mRNA及组胺表达水平,结果进行统计学分析。[结 果]1.UVB照射C57BL/6小鼠皮肤后,30min检测到IL-1β和IL-6表达升高（P<0.05）,1h IL-10表达升高（P<0.05）,IL-1α、IL-17、TNF-α 在检测时间内无明显变化（P>0.05）。UVB照射HaCat细胞后检测IL-故及IL-6的表达时间,IL-1β在1h开始升高（P<0.05）,IL-6在2h表达升高（P<0.05）,晚于IL-1β。确定IL-1β为UVB照射皮肤后早期关键炎症因子。2.IL-1β在浓度为3,4pg/ul时促进小鼠黑素瘤B16细胞增殖（P<0.05）,其中4pg/ul时最明显。使用浓度为4pg/ul的IL-1β处理后,小鼠黑素瘤B16细胞黑素含量增加,酪氨酸酶活性升高,TYR、TRP1、TRP2、MITF的mRNA表达增加（P<0.05）,TYR、TRP1蛋白表达增加（P<0.05）。3.（1）敲减IL-1β后的HaCat细胞与对照组相比,UVB照射后COX-2及SCF mRNA表达降低（P<0.05）。（2）含有4pg/ul IL-1 β的实验组与对照组相比,HaCat 细胞中 SCF、COX-2 mRNA 表达升高（P<0.05）。[结 论]1.UVB照射皮肤后可引起IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA表达升高,其中IL-1β为早期升高的关键炎症因子。2.IL-1β可通过TYR/TRP1途径直接促进小鼠黑素瘤B16细胞的黑素合成。3.IL-1β可促进HaCat细胞中促黑素生成介质COX-2、SCF的表达,间接影响黑素的合成。
孔杰[5]（2019）在《血管紧张素Ⅱ对皮肤弹力纤维的调控作用及机制研究》文中研究表明【背景】皮肤真皮中弹力纤维网逐渐萎缩或出现异常蛋白的沉积是皮肤老化的重要特征,减少弹力纤维降解、促进其再生是延缓皮肤衰老的重要思路。弹性蛋白是弹力纤维的主要成分,含量达90%,其只在胚胎中晚期及新生儿时期合成,稳定地存在于组织中,但是随着各种内外因素的影响,会逐渐出现损伤、退化。目前关于心血管弹力纤维的研究较多,可以作为对皮肤弹力纤维调控研究的借鉴。心血管系统对一定的生理和病理刺激的反应可表现结构的重塑,出现细胞、基质及纤维成分的改变。肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）不仅改变血流动力学,亦可作为内分泌因素参与重塑过程,实验表明应用RAS阻断剂可以上调血管壁弹力纤维的含量。生物体内存在两种RAS,一种为系统性的,主要调控血压、体液容量和电解质稳态;另一种为局部RAS,存在于不同的器官和组织,对于组织的修复和重建有一定的作用。皮肤中存RAS的所有成分,主要效应物血管紧张素II（AngⅡ）可在局部形成,因此AngⅡ对皮肤弹性蛋白和弹力纤维的合成可能具有一定的调控作用。【目的】探索血管紧张素II及其不同受体拮抗剂对人皮肤成纤维细胞弹性蛋白合成的调控作用及可能存在的作用机制,发现可以促进弹性蛋白及弹力纤维合成的新方法,并在活体动物皮肤中进行验证,为临床上解决皮肤衰老问题提供新的思路。【方法】酶消化法培养原代人皮肤成纤维细胞,RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光检测细胞AngⅡ受体AT1R、AT2R。以不同浓度(10-8M10-5M)的AngⅡ、AT1R拮抗剂氯沙坦、AT2R拮抗剂PD123319分别干预成纤维细胞24和48h,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。以不同浓度的AngⅡ(10-8M10-6M)加或不加氯沙坦(10-5M)、PD123319(10-5M)作用于成纤维细胞提取细胞总RNA和细胞总蛋白。总RNA逆转录为cDNA,行荧光定量PCR检测弹性蛋白mRNA含量的变化;总蛋白定量后行Western Blot,检测可溶性弹性蛋白原含量。确定AngⅡ对弹性蛋白的作用及作用受体后,予以相应的受体拮抗剂和AngⅡ干预成纤维细胞,Western Blot检测EGFR、ERK1/2的磷酸化水平,再以EGFR磷酸化抑制剂AG1478、MEK1/2抑制剂U0126干预成纤维细胞后Western Blot检测弹性蛋白原含量以验证EGFR/ERK1/2通路的作用。选8周龄雌性Balb/c小鼠,背部脱毛处理后行剥脱性二氧化碳点阵激光,作用后1天8周免疫组织化学检测局部皮肤AngⅡ、AT1R、AT2R的表达变化,以验证点阵激光后皮肤RAS是否被激活。小鼠经点阵激光作用后外用氯沙坦、卡托普利或凡士林,设立只加外用药不做点阵激光的对照组,用药后第2周、第4周、第8周分别处死各组小鼠后,取背部皮肤组织做间苯二酚碱性品红染色,测量真皮厚度、分析弹力纤维含量。【结果】成功培养原代人皮肤成纤维细胞,经转录及翻译水平、细胞水平的验证,其稳定表达AngⅡ受体AT1R、AT2R。AngⅡ作用于成纤维细胞后,弹性蛋白mRNA及可溶性弹性蛋白原表达减少,EGFR、ERK1/2磷酸化水平增加。AT1R拮抗剂氯沙坦、EGFR抑制剂AG1478、MEK1/2抑制剂U0126可拮抗AngⅡ对弹性蛋白表达的抑制作用。剥脱性二氧化碳点阵激光作用于Balb/c小鼠皮肤后,局部AngⅡ、AT1R、AT2R表达增强,RAS被激活,小鼠真皮厚度增加。点阵激光后外用氯沙坦或卡托普利可明显增加小鼠皮肤弹力纤维的含量。【结论】AngⅡ经受体AT1R通过EGFR/ERK1/2途径抑制人皮肤成纤维细胞表达弹性蛋白。剥脱性二氧化碳点阵激光可激活Balb/c小鼠皮肤RAS,点阵激光后外用RAS阻断剂可增加小鼠皮肤弹力纤维的含量。
田婷[6]（2017）在《人头皮真皮成纤维细胞来源Muse细胞的获取、鉴定和分化》文中进行了进一步梳理目的:1.免疫组化法、免疫荧光染色检测头皮中具有多能性基因的细胞分布。并且分离毛乳头,进行免疫荧光染色。2.通过流式细胞分选仪（Fluorescence-activated cell sorter,FACS）分选人头皮真皮成纤维细胞中抗SSEA3抗体阳性的细胞,获得应激耐受多系分化细胞（multilineage-differentiating stress-enduring cell）,即Muse细胞,进行多能性鉴定。3.检测Muse细胞分化为黑素细胞、成骨细胞、肝细胞的能力,检测Muse细胞培养液对成纤维细胞增殖的影响,探讨可能的原因。方法:1.获取正常成年人的头皮标本,常规石蜡切片,进行SSEA3、Oct4、Sox2、Nanog、nestin免疫组化染色;同时对头皮标本进行冰冻切片,采用SSEA3和CD34免疫荧光染色。对体外培养的人毛乳头细胞进行SSEA3、CD34、α-SMA免疫荧光染色。2.采用FACS,从培养的头皮来源的真皮成纤维细胞,分选出抗SSEA-3抗体阳性的细胞（Muse细胞）;进行碱性磷酸酶染色,用免疫荧光染色、逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）及Western-blot检测其多能性。用携带Oct4、Klf4、c-Myc、Sox2的慢病毒转染Muse细胞,获得诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSC）样克隆。3.通过添加不同的培养成份,诱导Muse细胞分别分化为:黑素细胞、成骨细胞、肝细胞。CCK8试剂盒检测Muse细胞的培养液对成纤维细胞的增殖影响。RT-PCR检测Muse细胞HGF、IGF基因的mRNA表达。结果:1.免疫组化染色结果显示:在正常人的头皮标本中,SSEA3阳性细胞分布于小汗腺、血管内皮、皮脂腺、毛乳头、外毛根鞘;少量Oct4阳性细胞分布于外毛根鞘、小汗腺、血管内皮;少数Sox2阳性细胞分布于小汗腺、毛乳头及外毛根鞘;少量nestin阳性细胞分布在小汗腺、血管内皮、生长期毛乳头中;Nanog染色显示阴性。免疫荧光染色结果显示:SSEA3分布在小汗腺、外毛根鞘、毛乳头,CD34主要分布在外毛根鞘、毛乳头。部分体外培养的人毛乳头细胞表达SSEA3、CD34。2.用FACS成功分选出SSEA-3阳性细胞（Muse细胞）。将分选出的细胞在2-羟乙基甲基丙烯酸脂（2-hydroxethyl methacrylate,Poly-HEMA）包被板中培养,采用甲基纤维素（Methylcellulose,MC）培养基,使之能悬浮生长,经过710天的生长,细胞成簇（Muse细胞簇）,且直径达到最大。为了进一步扩增细胞,将悬浮生长的Muse细胞簇进行贴壁培养,可见细胞簇周边细胞放射状生长,光学显微镜下,细胞呈纺锤形。扩增后的Muse细胞再次悬浮培养,获得新Muse细胞簇,如此循环几次,获得大量的Muse细胞,用于多能性检测和诱导分化的研究。Muse细胞/Muse细胞簇对碱性磷酸酶染色显示阳性,即细胞呈紫红色,在细胞簇中央,染色更深。SSEA-3、Nanog、Sox2、Oct4阳性表达。经携带Oct4、Klf4、c-Myc、Sox2的慢病毒转染Muse细胞,获得iPSC样克隆,该克隆在荧光显微镜下呈现为绿色团块,表明转染成功。Muse细胞转染为iPSC的效率约为0.03%,高于亲本成纤维细胞（fibroblast cell,FC）的转染效率。RT-PCR结果显示:在Muse细胞以及Muse细胞形成的iPSC中,Oct4、Sox2、Nanog、hKlf4的基因表达均显着高于亲本成纤维细胞。并且,iPSC的Sox2、Oct4、hKlf4基因表达也比Muse细胞的高。Western-blot结果显示:Muse细胞及i PSC的Sox2、Oct4、Nanog蛋白的表达量高于亲本FC。3.体外诱导Muse细胞可分化为黑素细胞,并经HMB45、TYR免疫荧光染色证实。同时,将Muse细胞诱导分化为成骨细胞、肝细胞,诱导后细胞均进行特异性标记的免疫荧光鉴定证实。培养Muse细胞3天的培养液,以1:1的比例添加到FC培养基中,促进FC的增殖。结论:1.正常人头皮组织的免疫组化及免疫荧光检测显示:表达多能性因子的细胞集中于毛乳头、外毛根鞘、血管内皮、小汗腺等部位。部分体外培养的毛乳头细胞表达CD34和SSEA3。2.原代培养的头皮来源的真皮成纤维细胞,经FACS可以获得SSEA-3阳性的Muse细胞,这些细胞具有多能性及自我更新能力,转染Muse细胞为iPSC的效率比亲本FC高。3.Muse细胞可以诱导分化为黑素细胞、成骨细胞、肝细胞。Muse细胞培养液可以促进体外培养的FC增殖。
靳旺洋[7]（2017）在《何首乌提取物对黑素合成的影响及可能机制的研究》文中认为目的通过体外细胞培养实验研究何首乌有效成分二苯乙烯苷（2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-O-β-D-glucoside,THSG）对体外培养的健康人表皮黑素细胞黑素合成、酪氨酸酶活性、细胞周期分布以及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响初步探究THSG作用下黑素细胞黑素生成情况的改变。用实验相关指标对既往专家学者的研究作补充,为何首乌或何首乌相关产品治疗色素性皮肤病提供实验依据,寻求色素性皮肤病治疗的新途径,为临床医生和患者提供更多选择。方法用体外细胞技术培养的健康人表皮黑素细胞,根据既往文献将培养所得对数生长期的黑素细胞随机分为5组:第一组（0.1μg/ml）、第二组（1μg/ml）、第三组（12.5μg/ml）、第四组（空白对照组）、第五组（α-MSH阳性对照组）。经过药物处理后采用氢氧化钠裂解法检测细胞黑素的含量;应用多巴氧化法测定酪氨酸酶的活性;用流式细胞术测定黑素细胞的细胞周分布、黑素细胞细胞内ROS水平。对最终所得数据进行单因素方差分析后得出结论。结果1氢氧化钠裂解法检测黑素细胞黑素含量所得结果:含药物培养液培养72小时后,THSG浓度在0.1μg/ml时,黑素含量是166.66±0.10;THSG浓度是1μg/ml时,所得黑素含量是148.14±0.07;而THSG浓度为12.5μg/ml时,所得黑素含量是67.90±0.07;阳性对照组黑素含量为157.27±0.35。各处理组黑素含量与空白对照组比较均有显着差异（P<0.05）,其中在浓度为0.1μg/ml和1μg/ml时与对照组比较黑素含量有所增加,在浓度为12.5μg/ml黑素含量降低。2酪氨酸酶活性所得结果:经相应组别处理并培养72小时后,当THSG的浓度为0.1μg/ml时,酪氨酸酶活性为121.78±0.11;当THSG浓度在1μg/ml时,酪氨酸酶活性为119.22±0.07;THSG浓度在12.5μg/ml时,得酪氨酸酶活性为102.06±0.05;阳性对照组酪氨酸酶活性为245.35±0.77。当二苯乙烯苷浓度为0.1和1μg/ml与空白对照组相比酪氨酸酶活性增高,结果均有显着差异（P<0.05）。3细胞周期分布检测所得结果显示:相应组别处理并培养72小时后,G0/G1期细胞分别为:87.55±0.24%;85.20±0.18%;93.30±0.10%,空白对照组为92.52±0.52%。各处理组G0/G1期细胞的比例与空白对照组相比均有显着差异（P<0.05）。S期细胞各处理组分别为:1.67±0.12%;1.78±0.04%;1.13±0.11%,空白对照组为1.05±0.03%,其中1.67±0.12%;1.78±0.04%;与空白对照组S期细胞比例增高,差异有显着性（P<0.05）。4流式细胞仪检测黑素细胞活性氧（ROS）水平:流式细胞仪检测结果显示:正常人表皮黑素细胞经THSG作用72小时后,加载相应探针后检测。最终所得数据:0.1μg/ml二苯乙烯苷作用72小时后,ROS水平上升至对照水平的121.33±0.27%;1μg/ml二苯乙烯苷作用72小时后,ROS水平上升至对照水平的128.94±0.67%;12.5μg/ml的二苯乙烯苷作用72小时后ROS水平上升至对照组的112.95±0.45%。各组所得结果与空白对照组相比ROS含量差异均有显着性（P<0.05）。结论1当THSG浓度为0.1μg/m和1μg/ml时,可以提高黑素含量和酪氨酸酶活性,能提高S期细胞比例和细胞内ROS含量。2当THSG浓度为12.5μg/ml时,降低黑素含量,对酪氨酸酶活性及细胞周期S期细胞比例没有影响,提高细胞ROS含量。3低浓度THSG促进黑素合成,高浓度抑制黑素合成,THSG影响黑素合成不只是通过调节酪氨酸酶活性完成的。4何首乌提取物二苯乙烯苷可以提高酪氨酸酶活性,增加黑素含量,为何首乌治疗色素性疾病提供了新的证据。
靳旺洋,訾绍霞,刘爱英[8]（2016）在《黑素细胞培养研究进展》文中认为黑素细胞培养可对皮肤科及相关科室临床及基础研究提供一个良好的科研模型,同时对美容药物开发也提供了很好的基础。黑素细胞培养方法多种多样,实际应用中需要添加各种添加剂来满足黑素细胞的生长,而不同的添加剂可对黑素细胞产生不同的影响。在实际培养时需要根据目的来选择不同的添加剂。
安彩霞[9]（2013）在《氨甲环酸对人培养黑素细胞生物学影响和相关分子机制的研究》文中进行了进一步梳理目的：探讨氨甲环酸对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成和酪氨酸酶代谢的影响,并进一步从基因水平研究氨甲环酸作用于黑素细胞的分子机制,观察氨甲环酸对黑素细胞酪氨酸酶,酪氨酸酶相关蛋白-1、小眼畸形转录因子MITF的mRNA表达的影响,探讨氨甲环酸药物治疗黄褐斑的作用机理。方法：取正常人包皮组织,于体外培养纯的黑素细胞,选择对数生长期的细胞进行培养,设紫外线照射和非照射组,在黑素细胞培养液中加入不同浓度的氨甲环酸,并以空白做为对照,继续培养24-72小时后,用cck-8法观察氨甲环酸对黑素细胞增殖的影响；采用多巴氧化方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性,用NaOH法测定黑素细胞黑素的含量,并用RT-PCR的方法检测酪氨酸酶,酪氨酸酶相关蛋白-1、小眼畸形转录因子MITF的mRNA表达。结果：氨甲环酸对紫外线照射和非照射组的黑素细胞的增殖均无明显抑制作用；500mg/ml和1000mg/ml浓度的氨甲环酸对紫外线照射和非照射的黑素细胞的酪氨酸酶活性有明显抑制作用,而1000mg/ml浓度的氨甲环酸对黑素含量的抑制作用与空白对照组比较,具有统计学意义（P<0.05）,氨甲环酸的浓度对体外培养的黑素细胞的增殖无相关性（P>0.05）、而与黑素合成和酪氨酸酶的抑制效应有相关性（P<0.05）：与空白组比较,500mg/ml和1000mg/ml浓度的氨甲环酸使酪氨酸酶相关蛋白-1、酪氨酸酶的mRNA的表达均减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;而1000mg/ml浓度氨甲环酸使MITF的mRNA的表达减少,差异具有统计学意义（P<0.05）、氨甲环酸的浓度与作用之间有相关（P<0.05）。结论：氨甲环酸对于体外培养人黑素细胞具有直接作用,可以抑制酪氨酸酶活性及黑素合成,且与药物浓度呈剂量依赖,但对黑素细胞的增殖无明显作用;在基因水平可以降低黑素细胞酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1及转录因子MITF的mRNA表达,并与其药物浓度有剂量相关：氨甲环酸通过下调MITF的表达,抑制酪氨酸酶的合成,从而减少黑素合成量,减淡色斑。
崔志峰[10]（2013）在《山羊毛囊细胞分离培养与鉴定及毛囊体外重塑研究》文中进行了进一步梳理以济宁青山羊为动物模型，从毛囊细胞体外分离培养和体外毛囊重建研究角度阐明毛囊的生长发育规律、影响因素及毛囊真皮与表皮细胞的互作机制，不仅可为提高山羊毛绒产量和品质的育种改良奠定基础；还可为加速提高毛绒品质、数量和揭示毛发再生机理乃至医学领域的人类毛发研究等提供借鉴。毛囊细胞体外分离培养技术的完善，体外重塑毛囊模型的建立，可为研究毛囊生长与分化机制，相关细胞因子对皮肤毛囊细胞损伤修复的作用机理，尤其是哺乳动物毛纤维形成机制提供良好模型，也是研究相关细胞因子以及激素对毛囊发育、羊毛品质和黑色素形成与调控机理的基础。本研究在成功构建了多种山羊皮肤毛囊细胞体外分离培养鉴定技术平台的基础上，优化了适宜的培养方法和培养体系，成功构建了毛囊体外重塑模型与毛纤维体外生成体系，可为进一步深入研究毛囊分化与发育的影响因素及其所涉及到的一系列生理现象，如皮肤毛囊细胞分化、真皮和表皮细胞间的互作、皮肤毛囊损伤和被清理机制等研究奠定基础。主要研究内容、方法和结果如下：一、山羊毛囊外根鞘细胞体外培养体系的优化无菌分离活体青山羊羔羊的次级毛囊，采用机械分离与酶消化相结合的方法，分离纯一的毛囊外根鞘细胞（ORSC），培养于含有表皮生长因子（EGF）、类胰岛素生长因子-I（IGF-I）和氢化可的松（hydrocortisone）的无血清角质细胞培养液中，置5%CO2浓度的37℃培养箱中启动原代培养。待原代细胞长成良好的单层后即可进行传代培养，细胞经传代培养至810代时，更换含EGF、IGF-I、氢化可的松和2%FBS的DMEM/F12培养液进行长期培养，更换培养液后可见细胞生长状态逐渐趋于稳定。选取稳定传代的ORSC进行生物学特性研究与鉴定。结果表明：该细胞的群体倍增时间为51.9h；培养细胞的染色体数仍以2n=60为主，细胞免疫化学鉴定结果表明，外根鞘细胞角蛋白19表达呈阳性，证实本实验分离培养的细胞确为由毛囊干细胞分化来的外根鞘细胞。二、山羊毛乳头细胞的分离培养与鉴定将中性蛋白酶与胶原酶消化及预铺设促贴壁培养基质相结合，分离并纯化山羊DPC，培养于含有表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和10%FBS的DMEM/F12培养液中，放入37℃CO2培养箱中进行原代培养。待原代细胞长至完全汇合并进行传代培养后，更换含EGF、bFGF和2%FBS的MEM与DMEM/F12（1:1）复合培养液继续传代培养，更换培养液后可见细胞生长状态逐渐趋于稳定。选取稳定传至第7代的DPC进行生物学特性研究与鉴定。结果表明：该细胞的平均克隆形成率为60%，细胞增殖活力旺盛；培养细胞的染色体数仍以2n=60为主，细胞免疫荧光鉴定结果表明，体外培养的DPC α-SMA和Vimentin表达均呈阳性，充分证实本实验分离培养的细胞确为毛囊真皮源性的毛乳头细胞。三、山羊真皮成纤维细胞的体外培养及其细胞系的建立利用中性蛋白酶（dispase）4℃冷消化法分离皮肤的表皮层和真皮层，以利于纯化培养真皮成纤维细胞。然后，采用原代外植与酶消化相结合的方法，分离纯化的DFB：即先利用Dispase酶分离皮肤表、真皮层后，剪切真皮部分成组织小块，再对小组织块进行酶（胰蛋白酶）消化处理，随即将真皮外植块接种于6孔培养板底壁上。待贴牢后添加含有碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、青霉素、链霉素、泰乐菌素（tylosin）和10%FBS的DMEM/F12培养液中，置5%CO2浓度的37℃饱和湿度培养箱中启动原代培养。当培养板中的真皮外植块迁移出大量细胞时（约56天），换为含有bFGF、青霉素、链霉素、泰乐菌素（tylosin）和5%FBS的DMEM培养液继续进行培养，每3天更换1次培养液。待原代真皮成纤维细胞生长至汇合时，进行传代，并于第一次传代时更换为25cm2培养瓶中培养，以利于真皮成纤维细胞在体外长期传代培养与冻存。本研究所建立的DFB细胞系已经稳定传至56代以上，其生长分裂状态良好，细胞遗传性状稳定。四、山羊体外重塑毛囊模型的建立和维持在无菌冰浴条件下，将鼠尾胶原、透明质酸、硫酸软骨素A按比例依次混合到MEM与DMEM/F12（1:1）复合培养液中，制成凝胶。调节pH后加入24孔板中。收获前期分离培养与鉴定的纯化毛乳头、真皮成纤维细胞，用含EGF、bFGF和5%FBS的MEM与DMEM/F12（1:1）混合培养液制成细胞混悬液，用无菌吸管将细胞混悬液加入24孔板中，待其在常温下形成真皮细胞胶原凝胶后，置于37℃、5%CO2的饱和湿度环境中进行培养。每天在显微镜下观察DPC与DFB的生长增殖情况。待毛囊真皮细胞达到完全汇合后，表面覆盖预先制备的ORSC细胞混悬液，继续培养35天，观察ORSC于毛囊真皮细胞胶原凝胶上形成完整单层后，去除旧的培养液，加入少量（恰好覆盖表面ORSC细胞即可）含IGF-I、EGF的无血清角质细胞培养液，在37℃、5%CO2的饱和湿度环境中进行气-液界面培养，每两天更换一次表层培养基。经显微观察拍摄、测微尺测量与实时荧光定量PCR检测，结果显示，在进行气液界面培养初期，毛乳头细胞即呈现凝集性生长趋势，而表面的毛囊外根鞘细胞亦呈集落样散在分布于真皮成纤维细胞层中。随着气液界面培养的进行，毛乳头细胞进一步凝集性生长，部分外根鞘细胞集落通过凝胶中的真皮成纤维细胞单层迁移聚集在毛乳头细胞团周围，并不断包绕，分化形成圆球样的类毛球结构贴附在真皮成纤维细胞层上。约经过10天的体外培养，由几种毛囊细胞形成的圆球状结构逐渐向外围拉伸扩张，内部的毛乳头细胞向一端迁移生长，最终由毛球样结构伸展延长成类毛囊结构，并有毛纤维从基部长出，部分生长出的毛纤维颜色为浓黑色，内含黑色素。各检测数据显示，体外重建的毛囊结构与体内正常毛囊比较无论在组织结构、毛纤维生长速度，还是毛囊发育关键基因的表达调控方面，均差异不显着。本研究优化并建立了山羊毛囊细胞体外培养条件和体系，研究了细胞因子对毛囊真皮表皮细胞的影响，成功建立了山羊毛囊体外诱导重建体系，为揭示山羊毛囊分化发育与羊毛生长的影响因素和调控机理奠定了基础和提供了模型；并为医学研究和发现毛发疾患病因、探讨药物治疗作用机理等提供了借鉴。本研究所涉及的细胞因子和培养条件等，多数反映了一般实验条件下这些常见因素的互作，期望能为人类毛发再生和脱发问题研究提供借鉴。
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:脂肪间充质干细胞联合NB-UVB对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠的疗效观察 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物与分组 |
| 2.2.2 白癜风小鼠模型的建立 |
| 2.2.3 脂肪间充质干细胞(AMSCs)提取与鉴定 |
| 2.2.4 AMSCs种植及紫外线照射 |
| 2.2.5 疗效评价 |
| 2.2.6 HE染色 |
| 2.2.7 流式细胞 |
| 2.2.8 ELISA检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 脂肪间充质干细胞的分离鉴定 |
| 3.2 各组疗效评价结果 |
| 3.3 HE染色 |
| 3.4 流式细胞检测各组小鼠外周血CD4/CD3和CD8/CD3T细胞的比例 |
| 3.5 ELISA检测血浆TYP、MIF、MAO含量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 干细胞移植联合NB-UVB照射在白癜风小鼠中的治疗作用 |
| 4.2 干细胞移植联合紫外照射治疗对白癜风小鼠免疫调节影响 |
| 4.3 干细胞移植联合紫外照射治疗对MAO、TYP、MIF的表达影响 |
| 4.5 干细胞移植联合紫外照射治疗对氧化应激因子的表达影响 |
| 5 结论 |
| 第二部分:脂肪间充质干细胞联合NB-UVB对白癜风小鼠内质网应激的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物模型建立与分组 |
| 2.2.2 ELISA |
| 2.2.3 免疫荧光检测 |
| 2.2.4 Western blot |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 ELISA检测血清MDA、MPO和SOD含量 |
| 3.2 免疫荧光检测ROS |
| 3.3 Western blot检测内质网应激相关蛋白 |
| 3.4 qPCR检测内质网应激相关蛋白的mRNA水平 |
| 3.5 免疫荧光检测皮肤内钙离子 |
| 4 讨论 |
| 4.1 干细胞移植联合紫外照射治疗对氧化应激因子表达的影响 |
| 4.2 脂肪间充质干细胞移植联合紫外照射治疗对白癜风小鼠内质网应激的影响 |
| 4.3 脂肪间充质干细胞联合NB-UVB抑制内质网应激减轻白癜风钙离子超载 |
| 5 结论 |
| 第三部分:脂肪间充质干细胞联合NB-UVB激活Nrf2/HO-1信号通路改善白癜风内质网应激损伤 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物模型建立与分组 |
| 2.2.2 人表皮黑色素细胞培养 |
| 2.2.3 氧化应激损伤黑素细胞模型的建立与分组 |
| 2.2.4 紫外照射细胞 |
| 2.2.5 ELISA检测 |
| 2.2.6 免疫荧光检测 |
| 2.2.7 Western blot |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Western blot检测小鼠组织中Nrf2/HO-1信号通路的表达 |
| 3.2 ELISA检测TYP、MIF、MAO含量 |
| 3.3 ELISA检测黑素细胞内氧化应激因子 |
| 3.4 Western blot法检测各组黑素细胞中GRP78、caspase-12、SERCA2a |
| 3.5 免疫荧光检测Ca~(2+)浓度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 自体脂肪来源干细胞与白癜风治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.研究对象 |
| 1.1 患者一般情况 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2.研究材料 |
| 3.研究方法 |
| 3.1 术前准备 |
| 3.2 治疗及随访 |
| 3.3 数据收集 |
| 4.疗效评价 |
| 4.1 医师主观评价 |
| 4.2 VISIA客观评价 |
| 4.3 术中疼痛评价 |
| 4.4 患者满意度评价 |
| 4.5 不良反应评价 |
| 5.统计学处理 |
| 结果 |
| 1.患者基本资料 |
| 2.疗效评价结果 |
| 2.1 医师主观评价结果 |
| 2.2 VISIA客观评价结果 |
| 2.3 术中疼痛主观评价结果 |
| 2.4 患者满意度评价结果 |
| 2.5 不良反应记录 |
| 3.临床效果对比照片 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 bFGF在皮肤创伤愈合中临床应用及研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 常见英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 脱发症 |
| 1.2 脱发症 |
| 1.2.1 头发及毛囊生理学 |
| 1.2.2 毛囊生长周期 |
| 1.2.3 毛发生长评估模型 |
| 1.2.4 毛囊更新周期和头发生长相关的蛋白质信号因子 |
| 1.2.5 防脱生发的主要治疗途径 |
| 1.3 天然产物在毛发健康领域优势 |
| 1.3.1 三角褐指藻的特点及其研究意义 |
| 1.3.2 知母的特点及其研究意义 |
| 1.4 本课题立题依据和研究内容 |
| 1.4.1 立题依据 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第二章 PTE及 AAE中活性成分的提取与分离及主要成分分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要设备 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.2.5 数据处理 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 三角褐指藻与知母提取物得率 |
| 2.3.2 三角褐指藻提取物含量分析 |
| 2.3.3 知母总皂苷含量分析 |
| 2.3.4 知母总黄酮含量分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 PTE及 AAE对毛囊单位相关细胞生长的影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 主要试剂和材料 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 |
| 3.2.3 实验动物准备 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 毛乳头细胞的培养和生长 |
| 3.3.2 人生发基质细胞的培养和生长 |
| 3.3.3 毛囊外根鞘细胞的培养和生长 |
| 3.3.4 毛囊内根鞘细胞的培养和生长 |
| 3.3.5 人体黑素细胞的培养和生长 |
| 3.3.6 PTE对毛囊单位相关细胞活力的影响 |
| 3.3.7 PTE对毛囊单位相关细胞生长曲线的影响 |
| 3.3.8 PTE对毛囊单位相关细胞的细胞集落形成能力的影响 |
| 3.3.9 AAE对毛囊单位相关细胞活力的影响 |
| 3.3.10 AAE对毛囊单位相关细胞的细胞集落形成能力的影响 |
| 3.3.11 AAE对体外毛囊生长状态的影响 |
| 3.3.12 AAE对 C57BL/6 小鼠毛囊和毛发生长的影响 |
| 3.3.13 C57BL/6 小鼠背部皮肤病理切片及AAE对关键信号分子表达的影响 |
| 3.4 分析和讨论 |
| 3.4.1 毛囊单位相关细胞培养体系的建立 |
| 3.4.2 PTE和 AAE对毛囊单位相关细胞生长活力、集落形成的影响 |
| 3.4.3 AAE对体外培养的毛囊组织及C57BL/6 小鼠毛发生长的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 PTE及 AAE对毛囊细胞信号传导和头发强度相关蛋白因子的影响研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验材料和主要试剂 |
| 4.2.2 主要设备 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 三角褐指藻提取物(PTE)的作用 |
| 4.3.2 知母体提取物(AAE)的作用 |
| 4.4 分析和讨论 |
| 4.4.1 PTE对毛发生长的作用机制 |
| 4.4.2 PTE对毛发黑素产生的作用机制 |
| 4.4.3 AAE对毛发生长的作用机制 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 含PTE及 AAE制剂对人体毛发生长的影响研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 受试者 |
| 5.2.2 测试样品 |
| 5.2.3 试剂和材料 |
| 5.2.4 仪器和设备 |
| 5.2.5 方法和流程 |
| 5.2.6 数据、定义和数据的统计学分析方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 含PTE及 AAE的制剂对毛囊、头发和头皮生理状态的影响 |
| 5.3.2 测试样品对毛囊、头发和头皮生物化学状况的影响 |
| 5.3.3 对测试样品对头皮和头发生理指标和生化指标影响的汇总 |
| 5.3.4 含PTE和 AAE的制剂对人体头皮和头发健康综合影响的分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 结论和展望 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 旁分泌作用影响黑素合成的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤弹性蛋白的调控 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 细胞株、原代细胞取材标本 |
| 1.1.2 试剂及液体配制 |
| 1.1.3 仪器及耗材 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 原代人皮肤成纤维细胞的鉴定 |
| 1.2.2 人皮肤成纤维细胞血管紧张素II受体的检测 |
| 1.2.3 血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤成纤维细胞增殖作用的检测 |
| 1.2.4 血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤成纤维细胞分泌弹性蛋白原的影响 |
| 1.2.5 EGFR及 ERK1/2 在血管紧张素II对弹性蛋白调控中的作用检测 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 双酶联合消化法培养原代人皮肤成纤维细胞 |
| 1.3.2 人皮肤成纤维细胞表达血管紧张素II受体 |
| 1.3.3 血管紧张素II及其受体拮抗剂调控弹性蛋白的表达 |
| 1.4 小结 |
| 二、肾素-血管紧张素系统抑制剂对小鼠皮肤弹力纤维的作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂及液体配制 |
| 2.1.3 仪器及耗材 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 点阵激光作用后小鼠皮肤血管紧张素II的合成变化 |
| 2.2.2 点阵激光作用后小鼠皮肤血管紧张素II受体的表达变化 |
| 2.2.3 各实验组小鼠真皮厚度的变化 |
| 2.2.4 各实验组小鼠皮肤弹力纤维含量的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 不同物种皮肤弹力纤维的异同 |
| 2.3.2 点阵激光对皮肤弹力纤维的促进作用 |
| 2.3.3 点阵激光激活皮肤肾素-血管紧张素系统(RAS) |
| 2.3.4 抑制皮肤RAS系统对弹力纤维表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 弹性蛋白表达的调控 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 研究背景 |
| 参考文献 |
| 第一章 检测头皮及毛乳头中多能性基因的分布 |
| 一、材料与仪器 |
| 二、方法 |
| 三、实验结果与分析 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 流式细胞仪分选抗SSEA-3 阳性的头皮真皮成纤维细胞，获得MUSE细胞，鉴定其多能性。 |
| 一、材料与仪器 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 MUSE细胞的三系分化潜能 |
| 一、材料与仪器 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 附录 第四章 对胎儿头皮来源细胞的OCT4单因子转染研究 |
| 一、材料、试剂与设备 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 总结和展望 |
| 总结 |
| 展望 |
| 第五章 综述 |
| 综述1 MUSE细胞与相关皮肤病研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2 毛囊免疫赦免与相关皮肤病研究进展 |
| 参考文献 |
| 第六章 病例报告 |
| Case Report 1 Acquired lymphangiectasisassociated with a surgery scar from a congenital hemangioma |
| REFERENCES |
| Case Report 2 Pretibial myxedema, white fibrous papulosis, eruptive syringomas:a hypothyroidism case report |
| REFERENCES |
| 参与科研项目 |
| 读博期间以第一作者发表的论文 |
| 缩写词表 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 实验设计原理及技术路线 |
| 1.1.1 实验设计原理 |
| 1.1.2 实验技术路线图 |
| 1.2 研究对象与方法 |
| 1.2.1 主要仪器 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.2.3 实验对象及分组设计 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 试剂配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 NaOH裂解法测黑素合成 |
| 1.3.4 多巴氧化法测酪氨酸酶活性 |
| 1.3.5 流式细胞仪测细胞周期 |
| 1.3.6 细胞内活性氧的测定 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 黑素含量的测定结果 |
| 1.4.2 酪氨酸酶活性测定结果 |
| 1.4.3 细胞周期分布检测结果 |
| 1.4.4 活性氧含量的检测结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.5.1 表皮黑素细胞概况 |
| 1.5.2 黑素代谢生理 |
| 1.5.3 色素障碍性疾病概况 |
| 1.5.4 结果讨论 |
| 1.7 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述黑素细胞培养及中药对黑素细胞影响研究进展 |
| 2.1 黑素细胞培养研究进展 |
| 2.1.1 细胞因子对黑素细胞的影响 |
| 2.1.2 霍乱毒素与十四烷酰佛波醇己酯 |
| 2.1.3 小结 |
| 2.2 治疗白癜风的中药对黑素细胞代谢影响的研究进展 |
| 2.2.1 中药与黑素合成的研究 |
| 2.2.2 中药与黑素小体的转运 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
| 1 细胞因子对黑素细胞的影响 |
| 1.1 碱性成纤维细胞生长因子(basic fi broblast growth factor,b FGF)对黑素细胞的影响 |
| 1.2 α-促黑素细胞刺激素对黑素细胞的影响 |
| 1.3 神经生长因子对黑素细胞的影响 |
| 1.4 内皮素-1对黑素细胞的影响 |
| 1.5 白细胞介素对黑素细胞的影响 |
| 1.6 肿瘤坏死因子对黑素细胞的影响 |
| 2 霍乱毒素与十四烷酰佛波醇己酯 |
| 2.1 霍乱毒素对黑素细胞的影响 |
| 2.2 十四烷酰佛波醇己酯对黑素细胞的影响 |
| 3 小结 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 氨甲环酸对黑素细胞增殖及黑素合成代谢的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 主要仪器和器皿 |
| 1.2 研究内容与方法 |
| 1.2.1 研究内容 |
| 1.2.2 研究方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 氨甲环酸对黑素细胞酪氨酸酶及相关蛋白和转录因子的mRNA表达的影响 |
| 1 研究内容和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 主要仪器和器皿 |
| 1.2 研究内容与方法 |
| 1.2.1 研究内容 |
| 1.2.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
| 符号说明 |
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 山羊的毛囊结构与济宁青山羊毛皮品质 |
| 1.1.1 山羊的毛囊结构 |
| 1.1.2 济宁青山羊的毛皮品质 |
| 1.2 动物毛囊的生理特性及功能 |
| 1.2.1 动物毛囊的生长周期 |
| 1.2.2 动物毛囊的细胞组成及功能 |
| 1.2.3 毛囊的组织分化与发育 |
| 1.2.4 山羊毛囊形态发生的过程 |
| 1.3 毛囊再生与重建及损伤修复的相关调控因子 |
| 1.3.1 胰岛素样生长因子 |
| 1.3.2 表皮生长因子 |
| 1.3.3 碱性成纤维细胞生长因子 |
| 1.3.4 β-连环蛋白（β-catenin）及 Wnt/β-catenin 信号通路 |
| 1.4 动物毛囊重建体外培养研究进展 |
| 1.4.1 毛囊体外诱导再生研究进展 |
| 1.4.2 毛囊真皮源性细胞对于体外毛囊诱导重塑的影响 |
| 1.4.3 动物毛囊体外培养与毛囊细胞分离培养的研究进展 |
| 1.4.4 建立动物毛囊体外重塑培养模型的研究前景 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物种群的维持与样品采集 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂及其来源 |
| 2.1.4 培养液和常用试剂的配置 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 外根鞘细胞原代培养用细胞培养板的处理 |
| 2.2.2 毛乳头细胞原代培养用细胞培养板的前期处理 |
| 2.2.3 济宁青山羊次级毛囊的分离 |
| 2.2.4 青山羊毛囊外根鞘细胞体外培养体系的完善 |
| 2.2.5 济宁青山羊毛乳头细胞的体外分离与培养 |
| 2.2.6 青山羊真皮成纤维细胞的分离培养及其细胞系的建立 |
| 2.2.7 青山羊毛囊体外重塑模型的建立 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 青山羊毛囊外根鞘细胞培养体系的优化 |
| 3.1.1 毛囊贴壁法培养外根鞘细胞的生长状态与形态学观察 |
| 3.1.2 山羊毛囊外根鞘细胞 Giemsa 染色的观察结果 |
| 3.1.3 传代培养的毛囊外根鞘细胞的生长特性 |
| 3.1.4 山羊毛囊外根鞘细胞的染色体分析 |
| 3.1.5 山羊毛囊外根鞘细胞免疫细胞化学鉴定 |
| 3.1.6 毛囊外根鞘细胞的形态回复试验 |
| 3.2 毛乳头细胞的分离培养与生物学特性检测 |
| 3.2.1 毛乳头细胞的形态学观察 |
| 3.2.2 毛乳头细胞克隆形成率 |
| 3.2.3 毛乳头细胞的种属来源及组织来源鉴定 |
| 3.3 济宁青山羊真皮成纤维细胞的分离培养与鉴定 |
| 3.3.1 原代外植法培养细胞的形态学及 Giemsa 染色的观察结果 |
| 3.3.2 传代培养的真皮成纤维细胞的生长特性 |
| 3.3.3 山羊真皮成纤维细胞的染色体分析 |
| 3.3.4 微生物污染检测结果 |
| 3.3.5 细胞活率与贴壁率的测定结果 |
| 3.3.6 四种荧光蛋白质粒转染 DFB 效果 |
| 3.4 体外重塑毛囊组织培养体系的建立 |
| 3.4.1 体外重塑毛囊的生长形态观察 |
| 3.4.2 体外重塑毛囊的组织学结构 |
| 3.4.3 体外重塑毛囊与体内分离毛囊毛纤维生长速度的测定与比较 |
| 3.4.4 体外重塑毛囊中关键基因表达量的测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 生长因子与激素对毛囊外根鞘细胞体外生长的调节作用 |
| 4.2 培养体系中非毛囊外根鞘细胞的生长抑制与去除 |
| 4.3 表面覆盖物（培养基质）对外根鞘细胞贴壁的促进作用 |
| 4.4 山羊毛乳头细胞分离培养及其生物学特性的保持 |
| 4.4.1 山羊毛乳头细胞分离培养体系的优化 |
| 4.4.2 α-SMA 在体外培养毛乳头细胞中的表达 |
| 4.5 毛乳头细胞与毛囊外根鞘细胞的相互作用 |
| 4.5.1 生长因子在 DPC 诱导 ORSC 中的作用 |
| 4.5.2 体外培养基质对 DPC 与 ORSC 相互作用的影响 |
| 4.6 毛囊的体外三维重塑 |
| 4.6.1 相关生长因子对体外重塑毛囊的影响 |
| 4.6.2 培养液成分与体外培养基质对毛囊重建的作用 |
| 4.7 山羊毛囊体外重塑模型成功建立的关键 |
| 5 结论 |
| 5.1 优化了毛囊外根鞘细胞体外培养的技术体系 |
| 5.2 建立了毛乳头细胞高效分离与纯化技术及其培养体系 |
| 5.3 建立了山羊真皮成纤维细胞系并完善建系方法 |
| 5.4 建立了体外毛囊重塑培养模型并探索出毛囊重建的有效诱导条件 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 |
